绿茶中游离氨基酸的测定
绿茶中游离氨基酸的测定
绿茶是中国的传统饮料，在中国南方，这种茶已有上千年的历史了。统计数据表明，中国目前是全球绿茶最大的生产和消费国，每年中国绿茶产量达3200多万吨。在茶叶中，氨基酸是重要的活性成分，其含量决定了茶叶的质量。因此，测定绿茶中游离氨基酸含量是研究绿茶品质基础上的重要内容。
一般而言，绿茶中游离氨基酸的测定包括两个步骤：一是分离提取游离氨基酸，二是测定提取液的游离氨基酸含量。
首先，实验人员需要准备足量的绿茶样品，然后将样品放入容器中，加入分离剂，搅拌均匀。在此过程中，实验人员要控制搅拌的时间和温度，以便完全提取游离氨基酸。一般来说，搅拌温度可以在4°C-40°C之间，搅拌时间一般不超过2小时。接着，将搅拌完毕后的提取液过滤后，分离出绿茶中的游离氨基酸。
其次，实验人员可以使用多种方法测定提取液的游离氨基酸含量。例如，可以通过高效液相色谱法(HPLC)、聚类耦合技术（MCT）、核磁共振技术（NMR）等来测定绿茶中游离氨基酸的含量，并可以根据实
验需要选择合适的仪器和试剂。
综上所述，绿茶中游离氨基酸的测定是一个复杂的过程，要求实验人员不仅需要熟悉各种测定方法，还需要控制实验参数，以保证实验结果的准确性。
此外，游离氨基酸在绿茶中的浓度也受到季节变化的影响。实验人员应根据季节差异，选择合适的采样时间，以获得更准确的测定结
果。
最后，实验人员应特别注意实验室条件，避免试剂污染及其他不良因素对实验结果的影响。
总之，绿茶中游离氨基酸的测定是一个复杂的过程，实验人员在实验前应当认真研究实验原理，选择合适的实验方法，掌握实验参数，注意实验室条件，以便获得准确的实验结果。以上就是有关绿茶中游离氨基酸的测定的介绍。
实验一离氨基酸含量的测定(实验报告用)
实验一 食品中游离氨基酸含量的测定 实验原理： 电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量。氨基酸有氨基及羧基两性基团，它们相互作用形成中性内盐，利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出来酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，根据酸度计指示pH 值，控制终点。 实验试剂： 1、甲醛（36%）：应不含有聚合物。 2、氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L] 实验仪器： 1、酸度计； 2、20mL 移液管； 3、10mL 微量滴定管； 4、100mL 容量瓶； 5、250mL 烧杯； 6、磁力搅拌器； 实验步骤： 1、吸取5mL 试样，置于100mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，备用。 2、吸取上述稀释液20.00mL V 3置于200mL 烧杯中，加水60mL 水，插入电极，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数，（可计算总酸含量）。（使中性内盐分离成为氨基酸） 3、向上述溶液中准确加入10.0mL 甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]继续滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数V 1。重复做3组平行样。 4、取80mL 水，先用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至酸度计指示pH8.2，再加入10.0mL 甲醛溶液，混匀，再用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数V 2。重复做3组平行样。 数据记录与计算 （一）数据记录：见下表 项目 样品 空白 加入甲醛后滴定所消耗 氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数 标准氢氧化钠溶液浓度（mol/L ） （二）结果计算 试样中氨基酸态氮的含量为： ()100100 5014 .03 21⨯⨯⨯⨯-= V C V V X 式中：X —试样中氨基酸态氮的含量，g/100 mL ； V 1—测定用试样稀释液加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； V 2—测定空白试验加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； C —氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L ； V 3—试样稀释液取用量，mL ；
游离氨基酸测定(完整版)
总游离氨基酸测定（完整版） 实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚－二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm下测其含量。因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉. 仪器与用具：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计. 一、试剂 1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯，加入正丙醇15ml，使其溶 解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕色瓶冰箱保存，10天内有效。 2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠54.4g，加入无氨蒸馏水 100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸30 ml，加蒸馏水定容至100 ml。 3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异 丙醇并定容至50ml。取此液5ml蒸馏水稀释到50ml，即为5μg/ml氨基酸标液。 4.0.1%抗坏血酸：称取0.050g抗坏血酸，溶于50 ml蒸馏水中，即配即用。 5.10％乙酸 二、标准曲线制备 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。以吸光
度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线 三、实验步骤： 1.烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸，研磨匀浆后用蒸馏水定容 100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。 2.1ml滤液加入到20ml 干燥试管中，加1 ml蒸馏水，水合茚三铜 3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用60％乙醇定容至20ml，摇匀于570nm波长下比色。 四. 计算： 求三重复的平均值，由标准曲线得知各样的氨基酸ug数，代入公式计算。 氨基酸含量（mg/g干样）=｛氨基酸ug数×（提取液总体积/测定体积）｝/（样品g数×1000）
游离氨基酸测定
①将对应封口袋中根茎放入研钵内加5ml10%乙酸研磨至匀浆，用10ml去离子水冲洗干净，一并将匀浆和冲洗水转入10ml对应编号离心管中，定容至9ml。根同样加5ml10%乙酸研磨至匀浆，用少量水洗研钵，一并转入10ml对应编号离心管去离子水定容至8ml。 ②将离心管充分震荡混匀，将根茎叶浆液10ml离心管放入高速离心机9000r/min 离心10min,取叶上清液0.2ml,放入对应编号10ml离心管中待测。取茎上清液0.2ml,放入对应编号10ml离心管中待测。取根上清液0.2ml,放入对应编号10ml 离心管中待测。 ③在取茎叶上清液中加入相应去离子水、3ml茚三酮、0.2ml抗坏血酸，置沸水中加热10min，观察颜色淡黄色变为蓝紫色，加入乙醇定容到9ml。在570nm处测定吸光度。 试剂：①水合茚三酮：称取0.6g再结晶的茚三酮与烧杯中，加入15ml正丙醇，搅拌使其溶解。再加入30ml正丁醇及60ml乙二醇，最后加入9ml PH=5.4乙酸钠缓冲液，混匀，于棕色瓶中，置于4℃下保存备用，10天有效。需要432ml 材料：[200ml烧杯（1个）、100ml量筒（1个）、5ml移液器（1个）、500ml棕色瓶（1个）] ②乙酸钠缓冲液 ③标准氨基酸：称取亮氨酸46.8mg，溶于少量10%异丙醇中，用10%异丙醇定容至100ml。取该溶液5ml，用蒸馏水稀释到50ml，即含氨基氮5μg/ml标液。 材料：[小烧杯（1个）、100ml容量瓶（1个）、50ml容量瓶（1个）] ④0.2%抗坏血酸：称取100mg抗坏血酸，溶于50ml蒸馏水中，随配随用。 材料：[50ml容量瓶（1个）] ⑤10%乙酸。需要720ml 材料：[100ml容量瓶（1个）] 1000ml容量瓶 总材料：水浴锅、大口径烧杯、研钵（3个）、50ml离心管（96个）、10ml离心管（144个）、15ml离心管（144个）、5ml移液器、1ml移液器。
游离氨基酸的测定实验报告
游离氨基酸的测定实验方案 （茚三酮比色法） 一、实验目的 茚三酮比色法测定发酵液中游离氨基酸含量，利用氨基酸含量这个参数，控制发酵过程。 二、实验原理 游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化台物二酮茚一二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm 下测其含量。因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉。 三、实验材料 发酵液样品； 实验试剂：水合茚三酮；氨基酸标准液；0.1%抗坏血酸 实验仪器：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶；研钵；移液器；枪头；沸水浴；具塞刻度试管20 ml×10；分光光度计 四、实验方法 1.溶液配制 （1）水合茚三酮称取0.6g重结晶的茚三酮放烧杯中，加入15ml 正丙醇、30ml正丁醇、60ml乙二醇及9 ml PH4.54的醋酸盐缓冲液混匀，棕色瓶中冰箱内保存，10天内有效。 （2）氨基酸标准液称取80℃烘干的亮氨酸23.4mg，以10%的异丙醇溶解定溶至50ml（含氮为50ug/ ml），取此液5ml，用水定容至50 ml，此为含氮量5ug/ ml工作液。 （3）0.1%抗坏血酸称取0.1g抗坏血酸定容100 ml，随用随配。
2.标准曲线绘制 取6支20ml 试管，按下表加剂： 试剂 管号 1 2 3 4 5 6 亮氨酸标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 无氨蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮(ml) 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 氨基氮量（ug/管 ） 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 将各管溶液混合均匀，封口，在沸水中加热15min ，取出后立即用冷水摇 动冷却，用60%乙醇定容至20 ml ，摇匀。 λ=570nm 处测定吸 光度 0 0.025 0.055 0.099 0.146 0.186 以吸光度为纵坐标，氨基氨ug 数为横坐标，绘标准曲线如图： 茚三酮比色法测定游离氨基氮标准曲线 y = 0.0382x - 0.0103 R 2 = 0.9882 -0.05 00.05 0.10.15 0.20123456 氨基氮（ug） 吸光度A 3.样品中游离氨基酸的测定 取20ml 试管，取待测液1ml ，加蒸馏水l ml ，水合茚三酮3.0 ml ，坏血酸0.1ml ，混匀，封口。沸水浴加热1 5分钟，冷水中摇动冷却，用 60%乙醇定溶至20ml ，摇匀，于570mn 测定吸光度。
茶 游离氨基酸的测定
茶游离氨基酸总量测定 文件类别：作业指导书 文件编号： 撰写单位： 版本: 第 1 版 发行日期： 机密等级: □机密□一般 合计页数: 共 2 页 核准审核初审制订会审
名称茶游离氨基酸总量测定文件编号: 1 原理 氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。 2 仪器和用具 分析天平：感量0.0001g。分光光度仪。 3 试剂和溶液 3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液： 按《茶茶多酚测定》中3.2的规定，配制1/15M磷酸氢二钠（3.2.1）和1/15M磷酸二氢钾（3.2.2）溶液。然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95ml和1/15M磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。 3.2 2%茚三酮溶液： 称取水合茚三酮（纯度不低于95%） 2g，加50ml水和80mg氯化亚锡（GB 638-78，分析纯），搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。 3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液： 称取100mg茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水中，作为母液。准确吸取5ml母液，加水定容至50ml作为工作液（1ml含茶氨酸或谷氨酸0.1mg）。 4 操作方法 4.1取样方法 按“茶叶原料验收规范”（文件编号…………）要求进行取样。 4.2试液制备 按《茶茶多酚测定》中4.2.1试液制备之规定，制备试液。 4.3 测定 准确吸取试液（4.2）0.5ml，注入25ml容量瓶中，加0.5ml水，0.5mlpH 8.0缓冲液（3.1）和0.5ml 2%茚三酮溶液（3.2），在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25ml。放置10min后，用10mm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。 生效日期页次1/2 页序 A 表号:R-0110-002-1A 文件标准用纸
游离氨基酸总量的测定
植物体内游离氨基酸总量的测定 方法一： 一、原理 游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。 二、仪器设备 分光光度计；电子天平；容量瓶25ml 或50ml 3 个；漏斗（直径6 厘米）3 个、滤纸适量；20ml刻度试管7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球； 剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。 三、试剂 1.3% 茚三酮试剂 称3g 茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml 容量瓶里，贮于棕色瓶中。此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10 天。 2.氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）： (1) NaCN±备液0.01mol/L (490mg/L)。 （2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。 取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。 3. 标准氨基酸 精确称取在80°C下烘干的亮氨酸13.1mg （或a -丙氨酸8.9mg）溶于10%勺异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L 的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5卩mol，或氨基氮7卩g。 4. 95% 乙醇；异丙醇（分析纯）
四、操作步骤 1.标准曲线的制作取20ml刻度试管18支，按下表1加入各试剂。加完试剂后混匀， 在100C水浴中加热12min （加热时封口），取出在冷水中迅速冷却，立即于每管中加入5ml 95%乙醇，塞好塞子，猛摇试管，使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色，此时溶液呈蓝紫色。于570nm 波长下测其光密度（以空白管为参比），以氨基酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。 2. 样品提取选取有代表性的植物叶片（或其它组织），洗净擦干，剪碎混匀，迅速 称取0.10~0.20g （视氨基酸含量多少而定），共称3份，分别加入20ml 刻度试管中，再加蒸馏水10ml 盖塞（或系上塑料薄膜），置沸水浴中20min 以提取游离氨基酸，到时取出在自来水中冷却，把上清液滤入25ml 容量瓶中，之后再往试管中加5ml蒸馏水，置沸水浴上再加热10min，过滤并反复冲洗残渣，最后定容至刻度，摇匀。 3.样品测定另取4支洁净干燥的试管，其中3支分别加入0.5ml 提取液，另一支加 0.5ml蒸馏水，然后在上述4支试管中分别加入NaCh缓冲液、水合茚三酮各0.5ml， 加完试剂后盖塞，置沸水浴上加热12min，冷却后，再分别加5ml 95%乙醇，摇匀，以空白作参比，在波长570nm下测其光密度。 根据光密度查标准曲线（或用回归方程计算）即可求出提取液中氨基酸的浓度。 方法二： 一、原理 游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅 与游离氨基酸的含量成正比。 二、仪器设备 分光光度计；电子天平；容量瓶25ml 或50ml 3 个；漏斗（直径6 厘米）3 个、滤纸适量；20ml刻度试管7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝
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HPLC分析测定不同茶叶中的游离氨基酸
HPLC分析测定不同茶叶中的游离氨基酸 王富花 【摘要】The composition of free amino acids in different tea (green tea, black tea and oolong tea) is ana-lyzed. Each dried pretreated tea(0.25 g) was extracted by 10 mL pure water in a designed temperature(90℃), extraction time 20 min. then filtrated through 0.45μm cellulose membrane, pretreated by SPE column. Take 70μL samples and 10μL O-phthalaldehyde(OPA) derivatization liquid in water bath reaction at a temperature of 25 ℃, 2 minutes later were determined by high performance liquid chromatography (HPLC), chromato-graphic condition was performed on a C18 column, DAD detector, detection wavelength was 338 nm. The mobile phase A was the methanol acetonitrile water solution, and the mobile phase B was the phosphate buffer solution. The results showed that the solid phase extraction cartridges (SPE) column treatment could effectively remove the influence of chromatographic peaks of impurities, and the HPLC method could be effective for the separation and determination of 17 kinds of amino acids in different tea,the content of amino acid in green tea was higher than fermented tea, especially aspartic acid, glutamic acid, and the content of L-Theanine in three kinds of tea was significantly different.%分析检测不同茶叶(绿茶,红茶,乌龙茶)中游离氨基酸的组成.称取0.25 g的茶叶于10 mL 90℃纯净水中浸提20 min后过0.45μm纤维素膜,滤液通过固相萃取(solid phase extraction cartridges,SPE)柱预处理后得到茶汤样品.取70μL的样品与10μL的邻苯二甲醛(OPA)衍生液在25℃水浴中反应2
实验一游离氨基酸测定
实验一游离氨基酸测定 实验一：游离氨基酸测定 实验学时：3学时 实验类型：验证 实验要求：必修 一、实验目的 1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。 二、实验内容 使用甲醛滴定法测定游离氨基酸 三、实验原理 氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定，需使这些含氮化合物（包括有机含氮化合物）都转化为氨态氮，然后进行测定。但可以用甲醛法测量。在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的-氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚酞批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮 R-NH3+→H++R-NH2 R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)2 4 NH4+ + 6 HCHO == (CH2)6N4H+ + 3 H+ + 6 H2O 滴定的结果表示游离a—氨基的含量，其精确度可达理论量的90%。如果样品中只某一种已知的氨基酸，从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液)，则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。一般常用此法测定蛋白质水解程度，随着水解程度的增加滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保持恒定。甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L，即滴定后最终浓度为6 %-9 %。 四、实验组织运行要求 集中授课形式 五、实验条件
1．试剂 (1)40％中性甲醛溶液: 在50mL 36 % ~ 37 %甲醛中加入5滴5g/L酚酞乙醇溶液，然后 用0.2mol/L NaOH溶液滴定到微红(使用前需重新中和) (2)酚酞指示剂: 5g/L酚酞的50%乙醇溶液 (3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液 (4)10%(体积分数)乙酸溶液 2．玻璃仪器 ⑴50ml容量瓶 ⑵20ml移液管 ⑶碱式滴定管 ⑷50ml量杯 ⑸250ml三角瓶 六、实验步骤 (1)样品处理称取试样0.2g(准确至1mg)，置入研钵中，加5ml 10%乙酸溶液研磨至均匀，用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。 (2)样品滴定在三角瓶中加入2mL样品滤液，加水4mL，3滴酚酞指示剂，摇匀后用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定到微红色。然后加入2mL中性甲醛溶液，摇匀，放置片刻，再用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定回到微红色中点，记下甲醛加入后样品消耗NaOH标准溶液的体积。同样，取6mL水按以上操作做空白实验。 七、计算 -氨基氮含量(%)=(V-V0)×c×0.014×(1/2)×50×(1/m)×100 式中： V—加甲醛后样品消耗NaOH标准溶液体积(mL) V0—加甲醛后空白消耗NaOH标准溶液体积(mL) c—NaOH标准溶液的浓度(mol/L) 0.014—消耗1ml 1mol/L NaOH标准溶液相当于氮的质量(g) 2—吸取样品滤液的体积(mL)
茶叶中游离氨基酸的测定
学海无涯，书山有路 1 茶叶中游离氨基酸的测定 过程生化成分的变化 。 试验的初步结果看出 糖类物质中单糖是随氧化过程逐渐增加的分钟含量最高,。 , 淀粉和双糖却是不断儿茶素,、 减少 , 果胶指数是氧化 多酚类物质中,, , 茶多酚总量。 、 黄酮类物质 都是随氧化时间延长而递减的化产物来看茶黄素氧化步结果。 与此相反, 非水溶性茶多酚却是不断增加的 从茶多酚的氧 一 分钟已达高峰 茶红素却不断增加分钟比较合适, 根据上述多种成份的变化 以及从茶黄素与茶红素的比例来看 酶性氧化 这是结合感观审评得出的初 茶叶中游离氨基酸的测定中国农科院茶叶研究所生理生化研究室近廿年来,氨基酸的分析方法有了很大的进展, 不仅操作精、 , 而且以全程自动化出名 。 本文研究了茶叶中氨基酸的纸上层析分离法种氨基酸的关系, , 利用单向层析 双向层析法从茶叶中分离出 , 并且进行了定性及定量工作。 , 对研究茶叶中氨基酸的组成与含量及其和茶叶品质 是一件必不可少的工作
学海无涯，书山有路 2 方法如下取样品,, 一 , 用“ 的帕甲酸水 肠乙醇提取 , 然后将过滤液蒸干加水以正丁醇, 进行点样肠乙醇 。 以正丁醇,冰醋酸水, 为展谱剂进行单向层析。 帕氨水。 二 酸相和正丁醇 作展谱剂进行双向层析 用苟三酮作为显色 剂 以纯品作对照确定各种氨基酸的位置进行定量 茶咖啡碱柱层分离测定法中国农科院茶叶研究所生理生化室茶样与氧化镁共热进行予热处理游离出咖啡碱层分离,, 然后通过氧化镁一硅藻土混合床进行柱比色测定本方法的特点是设备简单。。、 分离出的咖啡碱用磷钥酸试剂在波长,。 快速 。 并且完全弃除了实验室氯仿的毒害, 本文附有咖啡碱标准品的制备 提纯和鉴定方法 茶叶儿茶素纸谱分离和定量方法研究浙江农学院茶叶系 五十年代后期茶叶中多酚类物质测定主要应用乐文太尔氧化法测定相对总含量从, 。 年六十 , 年探究纸谱分析法, , 拟订定量法 。 使用此法研究茶叶多酚类混合体的组成及定量。 。 年代以后
茚三酮鉴定氨基酸概述
茚三酮鉴定氨基酸概述 1.茚三酮简介 茚三酮(Ninhydrine),又称水合茚三酮,水合茚满三酮,为白色或浅黄色结晶性粉末。茚三酮是一种用于检测氨或者一级胺和二级胺的试剂。当与这些游离胺反应时，能够产生深蓝色或者紫色的物质，叫做 Ruhemann紫。茚三酮常用来检测指纹，这是由于指 纹表面所蜕落的蛋白质和肽中含有的赖氨酸残基，其 上的一级胺被茚三酮检测。在室温条件下，它是一种 白色的固体物质，溶于乙醇和丙酮。茚三酮可以看作 是是二氢茚-1，2，3-三酮的水合物。1901 年,茚三 酮被成功研制出来以后主要用于生物医学领域,1954 年,瑞典科学家Oden 和Hofsten 将其应用于潜在汗 液手印的显现。茚三酮与汗液中的氨基酸、多肽、蛋白质等发生反应, 生成蓝紫色的手印纹线。 茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多数氨基酸，水解之后可与茚三酮反应。水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。在分析化学反应的薄层色谱（TLC）中，它可以用于检测所有的胺类，氨基甲酸酯类，在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。 2.实际运用 2.1指纹鉴别 汗液手印中的汗液成分绝大多数是水(约99%以上),其余是少量的无机物和有机物,有机物中包括了人体所含有的各种氨基酸。茚三酮与手印汗液中的氨基酸发生显色反应而现出手印。 。二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO 2 的羧基碳。在考古研究中，这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析，以帮助重现古代生物的食物结构。用一种标记底物处理的土壤，随后利用茚三酮与氨基酸的反应释放羧基胺，可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌（也叫做硝化细菌）利用土壤中的尿素作为碳源。法医常用茚三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面，也即含有氨基酸的指纹，经过茚三酮处理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色。
保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定
保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定 Determination of theanine in health food by high-performance liquid chromatography 1.适用范围 本方法规定了红茶、绿茶及以茶氨酸为主要原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。 本方法适用于红茶、绿茶及以茶氨酸为主要原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。 本方法的最低检出量1ng。 本方法的最佳线性范围：0.1mg/mL～4.2mg/mL。 2．方法原理 . 将试样中的茶氨酸用水提取，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保
留时间定性，外标法定量，适用于红茶、绿茶及以茶为原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。 3. 试剂 实验用水为去离子水。 3.1 三氟乙酸：分析纯。 3.2 高效液相色谱流动相：等度淋洗。 3.3茶氨酸标准品：含量大于98％（HPLC）。 3.4茶氨酸标准溶液的配制： 准确称取3.5 mg茶氨酸对照品，溶于水中，用10 mL 容量瓶定容，摇匀, 此标准溶液浓度为0.35 mg/mL。 4.仪器设备 4.1 高效液相色谱仪：双高压输液泵，附紫外检测器。 4.2 水浴锅。 5. 分析步骤
5.1固体试样的处理：准确称取1.0克粉碎试样，加入30 mL H2O，在80℃的水浴锅上加热40 min，冷却，离心，过滤后，滤液加水定容至50 ml，试样溶液过0.45 μm水膜，滤液进行色谱分析。 5.2液体试样的处理：取一定量的试样在水浴锅上蒸干，残渣以10ml 水溶解，溶液过0.45 μm水膜，滤液进行色谱分析。 5.3 液相色谱参考条件 5.3.1 色谱柱：反相C18柱，5µm, 100Å, 4.6 × 250 mm 5.3.2 紫外检测器：检测波长203nm 5.3.3 等度淋洗条件：pH=3.0的三氟乙酸水溶液；流速：1 mL/min 5.3.4 柱温：35°C 5.4 色谱分析 5.4.1 标准曲线的制备 分别取标准溶液2，4，6，10，12 µL进行HPLC分析，用峰面积对进样体积绘制茶氨酸的标准回归曲线。
食物中氨基酸的测定方法
食物中氨基酸的测定方法（1） 一、氨基酸自动分析仪法 1. 原理 食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。 2. 适用范围 GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。其最低检出限为10pmol。本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定 3. 仪器和设备 3.1 真空泵 3.2 恒温干燥箱 3.3 水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。用去离子水冲洗干净并烘干。 3.4 真空干燥器（温度可调节） 3.5 氨基酸自动分析仪。 4. 试剂 全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。 4.1 浓盐酸：优级纯 4.2 6mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。 4.3 苯酚：需重蒸馏。 4.4 混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L 4.5 缓冲液： 4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1 000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2 4.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。 4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。 4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。 4.6 茚三酮溶液 4.6.1 pH 5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g，加入冰乙酸（优级纯）279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5.2。 4.6.2茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H6OS）和乙酸锂溶液（2.6.1）50ml加入4g水合茚三酮（C9 H4O3.H2O）和0.12g还原茚三酮（C18H10O6.2H2O）搅拌至完全溶解。 4.7 高纯氮气：纯度99.99%。 4.8 冷冻剂：市售食盐与冰按1：3混合 5. 操作步骤 5.1 样品处理：样品采集后用匀浆机打成匀浆（或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。 5.2 称样：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质含量在10～2 0mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定前再稀释。将称好的样品防于水解管中。 5.3 水解：在水解管内加6mol/L盐酸10～15ml（视样品蛋白质含量而定），含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。 打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50ml容量瓶内，用去离子水定容。吸取滤液1ml于5ml容量瓶内，用真空干燥器在40～50℃干燥，残留物用1～2ml水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mlpH2.2的缓冲液溶解，供仪器测定用。 5.4 测定：准确吸取0.200ml混合氨基酸标准，用pH2.2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释浓度为5.00nm ol/50μL，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标法测定样品测定液的氨基酸含量。 6. 计算 上机样品液（50mL）中氨基酸量（nmol）= 上机标准液（50mL）中氨基酸量（nmol）×样品峰面积
4类茶叶及其茶渣主要成分的测定与分析
4类茶叶及其茶渣主要成分的测定与分析 郑清梅;陈昆平;钟艳梅;韩春艳;张子容;郑佳玲 【摘要】以绿茶、铁观音、红茶、普洱等4类茶及其相应的茶渣为试验材料,采用国标法分别测定茶多酚、游离氨基酸及常规营养成分的含量.结果表明:4类茶渣的茶多酚含量为4.2％～10.1％,显著低于其相应的茶叶(6.5％～17.8％),但仍相应保留其茶叶的60％以上;游离氨基酸含量为1.1％～1.4％,亦显著低于相应茶叶(1.2％～2.2％),但仍为相应茶叶的60％以上;相反,粗纤维含量(13.0～19.0％)显著高于其相应茶叶的含量(10.0％～16.0％).常规营养成分测定结果显示,该4类茶渣粗蛋白含量(26.0％～35.0％)稍高于相应的茶叶(25.0％～35.0％),水分含量(7.81％～8.82％)显著高于其相应茶叶的含量(4.5％～7.2％);相反,粗脂肪含量为1.5％～4.5％,显著低于相应茶叶的含量(4％～11％);总灰分(3.3％～4.7％)亦显著低于其相应茶叶的含量(5.0％～7.0％).可见,茶渣仍含有茶叶较高的活性成分包括茶多酚、游离氨基酸和主要营养成分,为茶渣的开发利用提供理论依据. 【期刊名称】《广东农业科学》 【年(卷),期】2015(042)006 【总页数】7页(P14-20) 【关键词】茶叶;茶渣;茶多酚;游离氨基酸总量;营养成分 【作者】郑清梅;陈昆平;钟艳梅;韩春艳;张子容;郑佳玲 【作者单位】嘉应学院生命科学学院,广东梅州514015;上海海洋大学水产与生命学院,上海201306;嘉应学院生命科学学院,广东梅州514015;嘉应学院生命科学学
院,广东梅州514015;嘉应学院生命科学学院,广东梅州514015;嘉应学院生命科学 学院,广东梅州514015 【正文语种】中文 【中图分类】TS272 我国是茶的故乡，也是世界上最大的茶叶生产国。2012年，我国茶园面积达235.3万hm2，茶叶总产量达175万t，分别占全球茶园总面积和茶叶总产量的53%和38%左右，均居世界第1位，且产量仍将持续快速增长[1]。然而，我国茶产业的发展仍处于初级阶段，茶资源有待进一步综合开发利用[2]。茶叶在生产与 深加工过程中产生大量茶叶“废弃物”，即所谓的茶渣。据统计，每年茶加工企业产生的茶渣、茶园大量修剪的粗老叶以及废茶叶等约有数十万吨[3]。这些废弃的 茶渣残留较多的营养成分，主要有粗蛋白、粗纤维、氨基酸、维生素、茶多酚和咖啡碱等，仍有较高的利用价值[4]。然而，一方面茶产业产生的大量茶渣常常被当 作废料抛弃，造成了资源的极大浪费及生态环境破坏[3，5]；另一方面，常规饲料原料的价格价格不断上涨，饲料产业竞争激烈，降低饲料成本是必然的发展趋势。因此，寻找廉价的非常规饲料原料或绿色保健饲料添加剂备受瞩目。茶渣资源丰富，而且价格低廉、无毒无害、功效明显，若将茶渣应用于饲料中，将可有效降低成本，提高饲料质量及动物的生产性能。 研究表明，茶叶蛋白质含量约占其干物质总量的15%～30%[6]。在未经提取的废茶或茶粉中有6%以上的茶多酚，废弃的茶渣中仍有1%～2%的茶多酚和0.1%～0.3%的咖啡碱[7]。茶多酚、氨基酸不仅是决定茶叶滋味、汤色、香气等品质的重要成分，茶叶的多项药理保健作用也与其密切相关[8]。因此，茶叶深加工过程中 产生的废料即茶渣可引入动物保健之中，变废为宝，开发成纯天然、绿色的饲料原料或饲料添加剂。尤其在人们对动物产品质量要求日益提高的今天，茶叶中独特的