饲料蛋白水解氨基酸含量的测定-实验方案
氨基酸概况-主要供应商
氨基酸工业现状及趋势 世界上最大的氨基酸消费市场是饲料添加剂，氨基酸作为饲料添加剂主要有4 个方面的功效：①促进动物生长发育；②改善肉质，提高产量；③节省蛋白饲料，提高饲料转化率； ④降低成本，提高饲料利用率。目前国内用于饲料添加剂的氨基酸主要有赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸。其中赖氨酸和蛋氨酸占饲料工业的95% 以上，而苏氨酸的使用呈增长趋势，需求的增长促进了产量和产能的提高。表1 为近10 年来，世界三种氨基酸产量及主要生产商。 表1 近10年来世界三种氨基酸产量及主要生产商 品名1996年1999年2002年2006年主要生产商 DL-蛋氨酸35 50 55 65 德固萨、住友、诺伟司、安迪苏 L-赖氨酸30 60 65 80 味之素、ADM、巴斯夫、大成、德固萨、协和、希杰L-苏氨酸 2.5 3 4 12 味之素、ADM、德固萨、协和 1、蛋氨酸 近年来，国内外市场对蛋氨酸的需求逐年强劲增长，成为需求增长最快的氨基酸品种之一。1993年，全世界蛋氨酸产量为26万t，1999年达50万t，2002年为55万t。目前，全球的年产能约为100万t，年产量约为70万t。预计全球总产能会达到110万t/年左右，但产量不会超过70万t，市场仍将明显供过于求。蛋氨酸的生产主要集中在安迪苏、德固赛和诺伟司，约占世界产量的90%，其中诺伟司的产能最大。 1.1中国市场概况 在中国市场，每年都要从国外大量进口蛋氨酸，现已成为中国化学原料药进口的大宗产品，2003年进口量高达7万t，进口额过1亿美元。据专家预测，到2010年，全世界蛋氨酸需求将达到90万t，中国的需求量也将超过10万t。近年中国对蛋氨酸的需求量还将持续增长，但一定时期内依靠大量进口来满足。中国是世界第2大饲料生产国，市场需求的年增长率7%-8%，蛋氨酸基本依靠进口。在中国市场，日本公司占据了43%份额、德固赛为21%、诺伟司10%、安迪苏为21%，其他占5%。由于中国蛋氨酸市场快速扩张且竞争日趋激烈，国外蛋氨酸生产厂商均加大了在中国的销售力度。 目前，中国生产蛋氨酸在工艺技术、原料、设备、成本等方面还存在一些有待解决的问题，但火爆的市场已对企业产生了巨大的诱惑，已有企业着手蛋氨酸规模生产的研发、设计和规划。 据了解，德固赛并未忽视蛋氨酸医药保健用途的开发。2004年12月德固赛在广西南宁武鸣投资的安力泰美诗药业公司的L-(左旋)蛋氨酸新生产线正式建成投产。本次新建的这条
氨基酸纸上层析实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除氨基酸纸上层析实验报告 篇一：实验六氨基酸的纸层析法 氨基酸的纸层析法 一．目的 了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。 二、原理 以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。 在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、ph 值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）Rf=
原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。 本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。 三、实验仪器 1、新华滤纸 2、层析缸 3、细线 4、点样管 5、橡皮筋 6、电吹风 7、喷雾器 四、实验试剂 1、混合氨基酸（精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸） 2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v） 3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml 无水丙酮，贮于棕色瓶中
饲料中可利用氨基酸研究进展
第4期401～409 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 季刊 2饲料中可利用氨基酸研究进展 刘超，闵育娜，雷海宁，白存江，段建功 （西北农林科技大学畜牧兽医研究院，咸阳窖店 712039） 摘要：综述了可利用氨基酸在饲料中的研究进展，对部分研究成果进行了评述。认为氨基酸可利用率的测定方法应从生产现场进行选择，畜禽可利用氨基酸需要量研究应成为研究重点，并对可利用氨基酸在日粮中的应用前景进行了展望。 关键词：饲料；可利用氨基酸；研究进展 中图分类号：S 816.11 文献标识码：A文章编号：1003-4315(2002)04-0401-09 1 氨基酸营养研究的理论基础 以蛋白质配制日粮并评定营养价值，是由于蛋白质是次于能量的重要营养物质，构成动物体蛋白质必需的氮元素与植物体相差的百分率最大（70.0 %）[1]；部分饲料成本，蛋白质饲料约占四分之一。因此，蛋白质资源利用和低蛋白质日粮的研究，是以提高蛋白质的生物学价值为目的。对氨基酸营养的认识，使人们明白蛋白质营养价值变化的基本原因。蛋白质不是整体消化，而是被分解成小肽或氨基酸吸收利用。使用纯合日粮或低蛋白质平衡氨基酸日粮并不能使动物达到最佳生产性能[2~4]，肽在蛋白质营养中有着特殊的意义[5，6]。蛋白质生物学价值不具备可加性，在实践上难以依次配制日粮[7]。由于不同氨基酸蛋白质配合后的互补作用，以及添加限制性氨基酸可使日粮其它氨基酸平衡性得到改变的事实，说明蛋白质生物学价值不具备理想的重现性，只能在特定的如基础日粮为无氮日粮时才能重现[8]。氨基酸可利用率的可加性、重现性，因能在日粮或非常规饲料评价中成功表达受到学者认同[9]，是蛋白质营养走向氨基酸营养的重要原因。 氨基酸从19世纪末Magendie发现到结构测定（Fischer）及willcock等人的添加试验，已认识到蛋白质营养价值受氨基酸组成的影响。Rose通过试验将氨基酸划分为必需和非必需。Block和Bolling注意到营养价值高的蛋白质在氨基酸组成上与采食该种蛋白质动物体蛋白氨基酸构成基本相似，由此提出了生长动物氨基酸需要量大体可由体蛋白氨基酸组成来确定的“理想蛋白质”新理论。Mettchell建议以体组织中赖氨酸与其它氨基酸的比例关系估测其需要量，由此赋予“理想蛋白质”以实质性内容，表示日粮中最佳氨基酸组成模 作者简介：刘超（1963–），男，陕西兴平人，副研究员，从事动物营养研究。 资助基金：陕西省重大产业科技示范资助项目（编号：96ST07） 收稿日期：2002–02–20 修改稿日期：2002–05–20
纸层析法分离氨基酸实验报告
纸层析法分离氨基酸 一、前言 纸层析法 纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。它是一种以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离(Rf值)与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量(如光度法、比色法等)。 纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。
在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。 做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液(石油醚)混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。 纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢;含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。 氨基酸 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行业。随着生物工程技术产业的发展逐渐成为2l世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求量越来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。目前全世界氨基酸每年的产量为100万吨，而需求总量是800万吨。我国自20世纪60年代起，氨基酸的应用在食品工业占61,，在饮料工业占30,，医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。 氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用: （1）在食品行业的应用 （2）在医药工业的应用
饲料中的氨基酸分析
饲料中的氨基酸分析 一. 仪器及试剂 仪器： 1). 天平一台（精度0.1mg）； 2). 恒温水浴锅一台； 3). 容量瓶； 4). 试管（1.5×15cm或1.5×10cm）； 5). 微量进样器（5μL或10μL）一支； 6). 微量可调移液枪（1000uμL，200μL）一支、吸头多个； 7). 旋涡混匀器一台； 8). HPLC系统及氨基酸分析专用柱（4.6×250mm 5μm）； 试剂： 1). 超纯水（≥18MΩ?cm）； 2). 乙腈（HPLC级）； 3). 三水合醋酸钠（分析纯）； 4). 冰醋酸（分析纯）； 5). 衍生试剂A和衍生试剂B溶液，至于冰箱保存（衍生试剂包对身体有害，用 时请做好防护措施）； 6). 正己烷（HPLC级）。 7). 0.1mol/L盐酸溶液：精密量取9.0mL浓盐酸，加去离子水稀释至1000mL。 8）6mol/L盐酸溶液:精密量取浓盐酸溶液，加到去离子纯化水以等比例混合，（再加入0.1%的苯酚试剂作为保护剂）。 二. 流动相的配制 流动相A：0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.5）：乙睛＝93.0：7.0 配制方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000mL水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50；准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液 930mL和乙腈70mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜；
流动相B：水：乙腈＝20.0：80.0 配制方法：准确量取水200mL和乙腈800mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜； 三. 衍生化反应 1. 2. 供试品溶液制备 精密称取饲料粉末样品100mg，置于50ml的圆底烧瓶中，加入10ml的6mol/L盐酸溶液，溶解，并在110度条件下加热回流反应24小时，反应完成后，放置冷却；冷却完后转移至100ml的量瓶中，加水分别3次润洗反应瓶，收集到量瓶中定容至100ml；充分混匀，再量取50ml的溶液蒸干，并用2ml水润洗定容，待衍生用。 3. 衍生步骤 1）分别将A、B两种衍生试剂用稀释剂稀释至原来浓度的1/5倍； 2）精密量取上述对照品溶液200μL，置于试管中，加入稀释后的A溶液100μL和稀释后的B 溶液100μL，摇匀，室温反应60min；然后加入正己烷溶液400μL旋紧盖子后振摇5~10s，室温静置分层，取下层200μL溶液，加入800μL水混合均匀，再取200μL加入800μL 水混合均匀，用孔径为0.22μm有机膜过滤，待分析； 3）供试品的衍生：供试品溶液200μL，置于试管中，加入稀释后的A溶液100μL和稀释后的B溶液100μL，摇匀，室温反应60min；然后加入正己烷溶液400μL旋紧盖子后振摇5~10s，室温静置分层，取下层200μL溶液，加入800μL水混合均匀，再取200μL加入800μL水混合均匀，用孔径为0.22μm有机膜过滤，待分析；
饲料中氨基酸含量
中国饲料成分及营养价值表（第24版） TABLES OF FEED COMPOSITION AND NUTRITIVE VALUES IN CHINA 表3. 饲料中氨基酸含量 Amino Acids 序号 中国饲料号CFN 饲料名称 Feed Name 干物质DM% 粗蛋白质 CP% 精氨酸Arg% 组氨酸His% 异亮氨酸Ile% 亮氨酸 Leu% 赖氨酸Lys% 蛋氨酸Met% 胱氨酸Cys% 苯丙氨酸Phe% 酪氨酸Tyr% 苏氨酸Thr% 色氨酸 Trp% 缬氨酸 Val% 1 4-07-0278 玉米corn grain 86.09.40.380.230.26 1.03 0.260.190.220.430.340.310.08 0.40 2 4-07-0288 玉米corn grain 86.08.50.500.290.270.74 0.360.150.180.370.280.300.08 0.46 3 4-07-0279 玉米corn grain 86.08.70.390.210.250.93 0.240.180.200.410.330.300.07 0.38 4 4-07-0280 玉米corn grain 86.0 7.8 0.370.20 0.24 0.93 0.230.150.150.380.310.290.06 0.35 5 4-07-0272 高粱sorghum grain 86.0 9.0 0.33 0.18 0.35 1.08 0.180.170.120.450.320.260.08 0.44 6 4-07-0270 小麦wheat grain 88.0 13.4 0.62 0.300.46 0.89 0.35 0.21 0.30 0.61 0.370.38 0.15 0.56 7 4-07-0274 大麦（裸）naked barley grain 87.0 13.0 0.64 0.16 0.43 0.87 0.440.14 0.25 0.68 0.40 0.43 0.16 0.63 8 4-07-0277 大麦（皮）barley grain 87.0 11.0 0.65 0.24 0.52 0.91 0.42 0.18 0.18 0.59 0.350.41 0.12 0.64 9 4-07-0281 黑麦rye 88.0 9.500.48 0.22 0.30 0.58 0.350.150.21 0.42 0.26 0.31 0.10 0.43 10 4-07-0273 稻谷paddy 86.07.8 0.57 0.15 0.32 0.58 0.290.190.160.40 0.37 0.25 0.10 0.47 11 4-07-0276 糙米rough rice 87.0 8.8 0.65 0.170.30 0.61 0.320.20 0.14 0.35 0.31 0.28 0.12 0.49 12 4-07-0275 碎米broken rice 88.010.4 0.78 0.27 0.39 0.74 0.42 0.22 0.17 0.49 0.390.38 0.12 0.57 13 4-07-0479 粟（谷子）millet grain 86.5 9.7 0.30 0.20 0.36 1.15 0.15 0.25 0.20 0.49 0.26 0.35 0.17 0.42 14 4-04-0067 木薯干cassava tuber flake 87.0 2.5 0.40 0.05 0.11 0.15 0.13 0.05 0.04 0.10 0.04 0.10 0.03 0.13 15 4-04-0068 甘薯干sweet potato tuber flake 87.0 4.0 0.16 0.08 0.17 0.26 0.160.06 0.08 0.19 0.130.180.05 0.27 16 4-08-0104 次粉wheat middling and reddog 88.0 15.4 0.86 0.41 0.55 1.06 0.59 0.23 0.37 0.66 0.46 0.50 0.21 0.72 17 4-08-0105 次粉wheat middling and reddog 87.013.60.850.330.480.98 0.520.160.330.630.450.500.18 0.68 18 4-08-0069 小麦麸wheat bran 87.015.7 1.000.410.510.96 0.630.230.320.620.430.500.25 0.71 19 4-08-0070 小麦麸wheat bran 87.014.30.880.370.460.88 0.560.220.310.570.340.450.18 0.65 20 4-08-0041 米糠rice bran 87.012.8 1.060.390.63 1.00 0.740.250.190.630.500.480.14 0.81 21 4-10-0025 米糠饼rice bran meal(exp.) 88.014.7 1.190.430.72 1.06 0.660.260.300.760.510.530.15 0.99 22 4-10-0018 米糠粕rice bran meal(sol.) 87.015.1 1.280.460.78 1.30 0.720.280.320.820.550.570.17 1.07 23 5-09-0127 大豆soybeans 87.0 35.5 2.57 0.59 1.28 2.72 2.20 0.56 0.70 1.42 0.64 1.41 0.45 1.50 CFIC 2013 24 动物科学数据分中心 CFIC 2013 24 动物科学数据分中心
氨基酸饲料
鱼类氨基酸类营养物质的新进展：功能性和环境适应性水饲料 近来的一些证据表明一些氨基酸以及它们的代谢物是对鱼类的维护，生长，食物摄入量，营养物质的利用，免疫，行为，幼虫的变形，繁殖以及抵抗环境压力和各类鱼中出现的微生物病毒。因此，关于必须和非必须氨基酸的常规定义受到很多关于牛磺酸，谷氨酰胺，甘氨酸，脯氨酸以及羟脯氨酸可以促进生长发育和水产动物的健康的发现的挑战。考虑到以上物质在细胞新陈代谢和生理机能方面的重要性，我们预计饮食方面在氨基酸上明确的增补规定可能对鱼类以下几个方面有益： （1）以少量鱼粉来增加水饲料化疗亲和力的性能以及营养价值 （2）优化幼鱼和成鱼新陈代谢转化的效率 （3）抑制过激行为和自残现象 （4）提高幼鱼的品质和存活率 （5）调节鱼类产卵的时效性和效率 （6）改善鱼片的风味和肉质 （7）增强免疫能力以及对环境压力的适应性 功能性氨基酸给增加全球水产品的效率和利益率的平衡性水饲料的发展带来了新契机。 关键词：氨基酸，鱼类，健康，生长，水饲料，水产养殖业 缩略词 AA：氨基酸 GABA：β-氨基丁酸 BCAA：支链氨基酸 HMB：羟基—β-甲基丁酸 NAC：N-乙酰半胱氨酸 NO：含氮氧化物 NOS：含氮氧化物合酶 P5C： T3：三碘甲状腺原氨酸 T4：四碘甲状腺氨酸 介绍：氨基酸是蛋白质的基本单位。从鱼类生长所需饮食的必要性来说，氨基酸来说可以 传统地分为必须氨基酸（不可或缺的）和非必须氨基酸（不可或缺的）（表1）。条件性必需氨基酸在利用速率低于合成速率的条件下必需从饮食中得到供给。根据定义，所有非必须氨基酸都能由水产动物自身合成。 膳食蛋白质是标准水饲料中主要的和最昂贵的组分。鱼粉被公认为最理想的蛋白质添加
生物化学实验-氨基酸分析实验报告
【实验报告第一部分（预习报告内容） ：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：】 一、预习报告 实验原理：
根据固定相基质的形式，层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。薄层层析是在玻 璃或塑料等光滑表面铺一层很薄的基质进行层析。 薄层层析（ ，）：是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层（固定相），再把样品点在薄层板一端，再把板的这端浸入适当的溶剂（流动相）在薄层板上扩展。并在此过程中通过吸附——解吸附——再吸附——再解吸附的反复进行，而将样品各组份分离出来。 本次实验： ● 具体原理：当流动相在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不 一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。 ● 吸附剂（固定相）：硅胶（.）。为使制成的薄层板不易松散，加入5%羟甲基纤维 素钠（）作黏合剂。 ● 展开剂：正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液（80:10:10）。 ● 展层-显色剂：按照10:1比例（）混匀的展开剂和0.1%茚三酮溶液。 ● 活化（）：在一定温度下，对吸附剂硅胶加热去除水分。可使硅胶的活性提高， 吸附能力加强。 ● 氨基酸与茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原， 此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合，以及另一分子水合茚三酮缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。 ● 值： 点的距离 对应溶剂前沿到样品原距离 斑点中心到样品原点的 Rf 由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（值）也是恒定的，因
氨基酸概况主要供应商
氨基酸概况主要供应商文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]
氨基酸工业现状及趋势 世界上最大的氨基酸消费市场是饲料添加剂，氨基酸作为饲料添加剂主要有4 个方面的功效：①促进动物生长发育；②改善肉质，提高产量；③节省蛋白饲料，提高饲料转化率；④降低成本，提高饲料利用率。目前国内用于饲料添加剂的氨基酸主要有赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸。其中赖氨酸和蛋氨酸占饲料工业的95% 以上，而苏氨酸的使用呈增长趋势，需求的增长促进了产量和产能的提高。表1 为近10 年来，世界三种氨基酸产量及主要生产商。 表1 近10年来世界三种氨基酸产量及主要生产商 品名1996年1999年2002年2006年主要生产商DL-蛋氨酸35 50 55 65 德固萨、住友、诺伟司、安迪苏 L-赖氨酸30 60 65 80 味之素、ADM、巴斯夫、大成、德固萨、协和、希 杰 1、蛋氨酸 近年来，国内外市场对蛋氨酸的需求逐年强劲增长，成为需求增长最快的氨基酸品种之一。1993年，全世界蛋氨酸产量为26万t，1999年达50万t，2002年为55万t。目前，全球的年产能约为100万t，年产量约为70万t。预计全球总产能会达到110万t/年左右，但产量不会超过70万t，市场仍将明显供过于求。蛋氨酸的生产主要集中在安迪苏、德固赛和诺伟司，约占世界产量的90%，其中诺伟司的产能最大。 中国市场概况 在中国市场，每年都要从国外大量进口蛋氨酸，现已成为中国化学原料药进口的大宗产品，2003年进口量高达7万t，进口额过1亿美元。据专家预测，到2010年，全世界蛋氨酸需求将达到90万t，中国的需求量也将超过10万t。近年中国对蛋氨酸的需求量还将持续增长，但一定时期内依靠大量进口来满足。中国是世界第2大饲料生产国，市场需求的年增长率7%-8%，蛋氨酸基本依靠进口。在中国市场，日本公司占据了
氨基酸分析仪实验指导
氨基酸分析仪实验 测试中心吕雪娟 一、实验目的 了解氨基酸分析仪的主要结构及工作原理，掌握氨基酸分析的过程，前处理方法。 二、原理 氨基酸分析仪的分析原理是基于各种a一氨基酸的酸碱性、极性及分子大小的差异，用阳离子交换树脂在柱上进行层析分离，用几种不同pH值和离子强度的缓冲溶液依次将它们洗脱，从柱子上分离和洗脱下来的各种氨基酸在反应柱中与茚三酮进行加热反应，反应产物用可见光分光光度计进行检测，根据检测信号的大小计算出各种氨基酸的含量。 氨基酸和茚三酮反应
氨基酸分析仪结构示意图 二、操作步骤 1.准备工作 1.1缓冲液和茚三酮溶液的配制及正确放置 1.2氮气压力调整 1.2.1打开氮气钢瓶阀，调节其压力至50－100KPa（0．5－1.0Kgf／cm2）。 1.2.2顺时针轻轻旋转氮气调节器，使压力读数为34-40KPa（0.35－0.4Kgf ／cm2）。 1.2.3脱气瓶中液体的更换 1.3放置自动进样器清洗瓶，向清洗瓶（C-1，1L）中盛上蒸馏水，放置于指定的位置并拧上盖子。 2.开稳压器 3.启动L－8800ASM应用程序 3.1系统初始化，OK 3.2打开Module Operation界面
3.3泵1流速设定----缓冲液的清洗，打开泵1的排液阀；清洗完毕，关闭泵1； 3.4泵2流速设定—一缓冲液的清洗，打开泵2的排液阀；清洗完毕关闭泵2； 3.5自动进样器流路和针头清洗,除气泡，重复此过程三次。 3.6泵的压力归零 4.分析程序 4.1选择应用程序 4.2选择分析方法 4.3输入待测样品的信息，编辑样品表，保存； 4.4打开数据采集监控画面 4.5选择样品表 4.6打开泵1和泵2 4.7按样品表顺序放置样品。 4.8单击监控屏幕下方的Start Series按钮，开始样品测试。 4.9开始结束后，关闭采集监控画面 4.10关闭L－8800ASM应用程序 4.11关电源 三、实验报告要求 1.实验原理及分析条件； 2.实验结果。
蛋白质生理需求量的稳定性同位素标记氨基酸示踪测定法
蛋白质生理需求量的稳定性同位素标记氨基酸示踪测定法 齐孟文 中国农业大学 1.背景 蛋白质的生理需求是指维持机体正常代谢所需蛋白营养量的临界值，是制定合理饮食和蛋白质营养摄入推荐的基础数据，因此对其准确的测定在营养学上具有重要意义。传统的氮素平衡方法，由于难以准确测定各种途径的氮损失，所得到结果不够精确，而标记氨基酸代谢与蛋白质关系提供了一种量精确测定蛋白质理需求量的示踪方法。 2.原理 2.1示踪研究模型 氨基酸 蛋白质 I C S E 图.氨基酸代谢两库模型 注：I 是食物摄入率；C 是蛋白质分解率；E 是排泄率，通过转变为代谢产物( E) 而排泄, 如脱氨、氧化, 最后生成尿素、氨等物质；S 是合成而结合到蛋白质的结合率。 当机体内的代谢处于平衡状态时，单位时间内进入氨基酸库的量与离开的量相等: Q = I+C = S + E, 如果单位时间内进出游离氨基酸代谢库的量以(Q ) 表示, 同时再测定E 和I 的值, 便可以计算出蛋白质的合成速率( S ) 和分解速率(C ) 。该模型成立的基本假设为: 1 ) 在实验期间代谢库大小是恒定的；2 ) 实验期间示踪原子的再利用可忽略不计；3) 游离氨基酸代谢库的其它消除途径, 除C 和E 外可忽略或校正。 测定蛋白质的需求量是的基本假设是，当机体的蛋白质量未达到基本生理代谢需求时，氨基酸主要用来合成机体的蛋白质, 一旦蛋白质达到并且超过了生理需要量, 那么摄入的氨基酸将会被机体所氧化, 从而导致该氨基酸的氧化率迅速升高, 在氨基酸氧化率对应氨基酸摄入量水平的量效曲线的拐点处所对应的饮食蛋白质量即为基酸的生理需要量。根据检测过程不同，具体分为两种方法。 2.2氨基酸直接氧化法
氨基酸类饲料添加剂-甘氨酸
氨基酸类饲料添加剂-甘氨酸 一 26一中国饲料添加剂2010年第9期(总第99期) 全国饲料添加剂信息站 氨基酸类饲料添加剂一甘氨酸 【别名】甘氨酸;氨基乙酸;氨基醋酸 【化学名】氨基乙酸;氨基醋酸 【英文名】Glycine 【分子式】C2HNO: 【分子量】75.O7 【结构式】H:N—CH2一COOH 【CAS号】56—40—6 【性状】本品为白色单斜晶系或六方晶系 晶体或白色结晶粉末,无臭,有特殊甜味.溶于 水,不溶于乙醇和乙醚.熔点232～236~C(分 解).相对密度1.1607,能与盐酸作用而成盐酸 盐. 【制法】 化学合成甘氨酸的方法主要有氯乙酸氨解 法,施特雷克法(Strecker)和海因法(Hydantion) 三种.目前国内仍采用在国外已被淘汰的氯乙 酸氨解法技术,而国外则采用改进的施特雷克法 和海因法技术路线.由于原料和工艺的不同,氯 乙酸氨解法具有生产成本高,产品质量差的特 点,所生产的甘氨酸大多为工业级,纯度一般在 95%左右,严重制约了其下游的应用,而国外厂 商大多利用丙烯腈副产氢氰酸和羟基乙腈生产
甘氨酸,该法生产成本低,产品质量好,一般纯度可以达到99%以上. 1.氯乙酸氨解法 该法是以氯乙酸为原料,在催化剂乌洛托品 的存在下与氨水反应而得.反应温度5O～ 60~C,常压,反应后物料在乙醇溶液中进行醇析分离,反应时间14～l5小时.是传统的甘氨酸 的合成工艺,工艺简单,对设备要求不高,环境污染压力不大.但是也存在很多不足,一是氯化铵等副产品难以分离,导致产品质量差,不能满足医药和食品工业的需要,若精制则生产成本较高;二是作为催化剂的乌洛托品无法回收,造成很大的资源浪费;三是反应时间长,不易连续操作.目前该法是我国主要的工业化方法,为了克服缺点,提高甘氨酸的质量和收率,国内外化学工作者对此法合成技术进行了深入研究,研究的热点集中在新型催化剂的选择与使用上,另外在强化工艺过程控制,优化反应条件等方面也做了大量的工作. C1CH2COOH+2NH3—_H2NCH2COOH+ NH4C1 2.Strecke法 传统的Strecke法是以甲醛,氰化钠,氯化铵 一 起反应,再加入乙酸,析出得到亚甲基氨基乙腈,将亚甲基氨基乙腈在硫酸存在下加入乙醇分解,得到氨基乙腈硫酸盐,将此硫酸盐用氢氧化钡分解,得到甘氨酸钡盐,然后加入硫酸使钡沉淀,过滤,滤液浓缩,冷却得到甘氨酸结晶.该法
氨基酸饲料添加量及介绍
1.正常添加标准 缬氨酸能够促进泌乳期母猪泌乳，通过提高泌乳量间接地提高仔猪增重，同时改善母猪体质，增强其免疫力。[1~3]适量的异亮氨酸也能够在禽畜的增重和饲料转化率上起到明显的作用，[4]并弥补饲料中异亮氨酸的缺乏。 目前在试验阶段的产品，只把现有生产的样品在计算后以一定量添加到饲粮中进行饲喂，但我们可以根据实验对象（猪和鸡）理想氨基酸模式来了解具体氨基酸的添加量，从而有利的指导实验的顺利展开，为取得较好的实验结果提供科学依据。 以下是猪和鸡的理想氨基酸添加模式（来自行业标准）。 猪各生长阶段理想氨基酸模式（每日）： 体重/kg 赖氨酸色氨酸异亮氨酸亮氨酸缬氨酸苏氨酸赖氨酸需 求量3-5 100 18 55 100 69 65 1.50% （日粮）5-10 100 18 54 98 68 64 1.50% （日粮）10-20 100 18 55 97 69 64 1.50% （日粮）20-50 100 18 54 95 67 64 1.50% （日粮）50-80 100 18 56 95 69 68 1.50% （日粮）80-120 100 18 55 90 67 68 1.50% （日粮）上表以赖氨酸为基准，其它氨基酸添加量为与赖氨酸相比所占的份额 产蛋鸡氨基酸需要量(mg/d)： 氨基酸0-6周6-12周12-18周18周-开产异亮氨酸291 286 257 321 亮氨酸534 486 450 571 苏氨酸330 326 238 336 色氨酸83 80 71 86 缬氨酸301 297 264 329 产蛋鸡对于特定数量单体氨基酸的生理需求，主要是用于生产鸡蛋蛋白和体组织蛋白，氨基酸需要量的最好表达方式是以每天氨基酸的摄入量（mg/d)直接表示。 氨基酸的添加量标准并不固定，仅作参考，具体数值要视饲粮种类与禽畜品种而定。以
第十章 蛋白质和氨基酸的测定(答案)
第十章蛋白质和氨基酸的测定（答案） 一、判断题 1．√；2．×；3．×；4．×；5．×；6．√；7．×；8．√；9．×；10．√ 二、填空题 1．样品消化、蒸馏、吸收、滴定 2．硫酸铜、硫酸钾 3．幸醇或液体石蜡 4．蓝绿色澄清透明体 5．蓝褐色 6．绿色、灰色、红色 7．蓝色、微红色 8．豆类、油料、米谷等作物种子及肉类 9．酚酞、游离、活性炭等吸附剂、电位滴定法 10．催化剂 11．提高溶液的沸点 12．先将冷凝管下端提离液面清洗管口 13．H 3BO 3 液、标准HCl溶液 三、问答题 1．简述测定蛋白质的意义。 答：是食品的重要营养指标。 人体组织的构成成分。 构成体内各种重要物质，维持体内酸碱平衡 是评价食品质量高低的指标，还关系到人体健康。 不同食品中蛋白质的含量不同，可作为质量检验的一种重要手段。 2．说明凯氏定氮法测定蛋白质的依据和原理，为什么测定结果为粗蛋白？ 答：样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出。用H3BO3吸收后再以标准HCl溶液滴定。根据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量 3．凯氏定氮法中的“消化”，其作用和原理是什么？ 答：在消化反应中，为了加速蛋白质的分解，缩短消化时间， 原理: 硫酸钾：作为增温剂，提高溶液的沸点而加快有机物分解。也可以加人硫酸钠、氯化钾等盐类来提高沸点，但效果不如硫酸钾。 硫酸铜CuSO4：作为催化剂,还可指示消化终点的到达（做蒸馏时碱性指示剂）。 加氧化剂：如双氧水、次氯酸钾等加速有机物氧化速度。 4．凯氏定氮法进行蛋白质分析时，主要由三个步骤组成，按照操作顺序列出实验步骤，并简述每一步发生的实验现象，说明HCl的ml数能用来间接测定样品的蛋白质含量。 答：步骤：①样品消化→②蒸馏→③吸收与滴定 （1）当有机物全部被消化完后，不再有硫酸亚铜生成，溶液呈现清澈的蓝绿色 （2）加热蒸馏释放出氨气 （3）绿色变成微红色 5．请论述凯氏定氮法的原理和测定过程中的注意事项。 原理：样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化成二氧化碳和
鸡饲料中氨基酸作用
氨基酸是蛋白质的基本组成单位。构成鸡体和饲料蛋白质的氨基酸有20多种，其通式为R-CH（NH2）COOH，含有氨基（-NH2）和羧基（-COOH）。正常存在于鸡体组织中所有的氨基酸都是鸡体所必需的。介就饲料供给的必要性来讲，可分为需氨基酸和非必需氨基酸2种。能在鸡体内合成，且合成数量能够满足鸡的营养需要，不必再由饲料中供给的氨基酸中非必需氨基酸；而那些不能由鸡体本身合成，或合成数量不能满足鸡的营养需要，必须由饲料中供给的氨基酸叫必需氨基酸。鸡生长发育过程中的必需氨基酸有11种，即甘氨酸、精氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸。还有丝氨酸、酪氨酸和胱氨酸等半必需氨基酸，它们分别由甘氨酸、苯丙氨酸和蛋氨酸转化生成。鸡对饲料提供的氨基酸有数量和比例的要求，只有当饲料中的必需氨基酸符合鸡体需要时，才能最大限度地发挥鸡的生长和生产潜力。产生更大的经济效益。任何一种氨基酸的缺乏，都会影响其他氨基酸的有效利用，这就是营养学界的“板桶”学说。通常将饲料或饲粮中不能满足鸡营养需要的氨基酸称为限制性氨基酸，并依据其缺乏程序依次分为第一限制性氨基酸、第二限制性氨基酸、第三……限制性氨基酸。在谷物——饼粕型日粮中，蛋氨酸、赖氨酸、精氨酸、苏氨酸和异亮氨酸为限制性氨基酸。赖氨酸是一般谷实和饼粕类饲料的第一限制性氨基酸；而大豆饼（粕）的第一限制性氨基酸是蛋氨酸；糠麸类饲料最易缺乏的也是蛋氨酸。动物性饲料的第一限制性氨基酸为色氨酸。 氨基酸是蛋白质的基本单位，蛋白质的营养实质上就是氨基酸的营养。必需氨基酸在体内有着极其重要的作用，但在合成体蛋白质时也必需有非必需氨基酸参加。氨基酸的种类必需齐全，数量充足，比例恰当，否则就会导致机体代谢失调，甚至影响鸡体健康和生产。换句话说，非必需氨基酸并不是鸡体不需要，而是本身能合成而不再由饲料中供给，在鸡体生长中同样有很重要的营养作用。某些必需氨基酸在鸡体内还可以转化成非必需氨基酸。苯丙氨酸和酪氨酸：苯丙氨酸和酪氨酸在鸡体内的转化反应是可逆的。日粮中酪氨酸充足，苯丙氨酸需要量就减少。虽然酪氨酸可以转化为苯丙氨酸，但其转化速率远不能满足鸡对苯丙氨酸的需要。所以，鸡对苯丙氨酸的需要只能用苯丙氨酸来满足，而对酪氨酸的需要既可以用酪氨酸满足，也可以用苯丙氨酸满足。在鸡的饲养标准中规定“苯丙氨酸”和“苯丙氨酸+酪氨酸”两项指标。蛋氨酸和胱氨酸：蛋氨酸是必需氨基酸，同时又是玉米—豆饼型日粮的第一限制性氨基酸。蛋氨酸在有甲基（—CH3）、叶酸、维生素B12存在的情况下，可以转化为半胱氨酸和胱氨酸，但胱氨酸不能转化为蛋氨酸。因此，鸡对蛋氨酸的需要只能用蛋氨酸来满足，而对胱氨酸的需要既能用胱氨酸来满足，也可用蛋氨酸来满足。这样在鸡的饲养标准中有“蛋氨酸”和“蛋氨酸+胱氨酸”两项指标。鸡体内合成蛋氨酸所需要的甲基由甲基供体（如胆碱、甜菜碱）提供，蛋氨酸的甲基也可用于合成胆碱。所以，鸡对胆碱的需要量和日粮中蛋氨酸的含量有关，日粮中添加甜菜碱可以降低蛋氨酸的需要量。甘氨酸和丝氨酸：甘氨酸和丝氨酸在鸡体内可以相互转化。雏鸡可以合成其快速生长所需甘氨酸的60%-70%，但其合成受日粮中氨基酸数量和比例的制约。由于两者的转化是相互的，鸡的饲养标准中有“甘氨酸+丝氨酸”指标而未单列甘氨酸指标。
游离氨基酸的测定实验报告
游离氨基酸的测定实验方案 （茚三酮比色法） 一、实验目的 茚三酮比色法测定发酵液中游离氨基酸含量，利用氨基酸含量这个参数，控制发酵过程。 二、实验原理 游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化台物二酮茚一二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm 下测其含量。因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉。 三、实验材料 发酵液样品； 实验试剂：水合茚三酮；氨基酸标准液；0.1%抗坏血酸 实验仪器：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶；研钵；移液器；枪头；沸水浴；具塞刻度试管20 ml×10；分光光度计 四、实验方法 1.溶液配制 （1）水合茚三酮称取0.6g重结晶的茚三酮放烧杯中，加入15ml 正丙醇、30ml正丁醇、60ml乙二醇及9 ml PH4.54的醋酸盐缓冲液混匀，棕色瓶中冰箱内保存，10天内有效。 （2）氨基酸标准液称取80℃烘干的亮氨酸23.4mg，以10%的异丙醇溶解定溶至50ml（含氮为50ug/ ml），取此液5ml，用水定容至50 ml，此为含氮量5ug/ ml工作液。 （3）0.1%抗坏血酸称取0.1g抗坏血酸定容100 ml，随用随配。
2.标准曲线绘制 取6支20ml 试管，按下表加剂： 试剂 管号 1 2 3 4 5 6 亮氨酸标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 无氨蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮(ml) 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 氨基氮量（ug/管 ） 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 将各管溶液混合均匀，封口，在沸水中加热15min ，取出后立即用冷水摇 动冷却，用60%乙醇定容至20 ml ，摇匀。 λ=570nm 处测定吸 光度 0 0.025 0.055 0.099 0.146 0.186 以吸光度为纵坐标，氨基氨ug 数为横坐标，绘标准曲线如图： 茚三酮比色法测定游离氨基氮标准曲线 y = 0.0382x - 0.0103 R 2 = 0.9882 -0.05 00.05 0.10.15 0.20123456 氨基氮（ug） 吸光度A 3.样品中游离氨基酸的测定 取20ml 试管，取待测液1ml ，加蒸馏水l ml ，水合茚三酮3.0 ml ，坏血酸0.1ml ，混匀，封口。沸水浴加热1 5分钟，冷水中摇动冷却，用 60%乙醇定溶至20ml ，摇匀，于570mn 测定吸光度。
动物饲料中氨基酸分析
应用方法开发报告：2013-RLC-SH-040 动物饲料中氨基酸分析 一、引言 蛋白质是生命过程的重要物质，是组成机体结构物质(细胞的组成)、体内代谢活性物质(激素、酶、免疫抗体)的主要成分，是组织更新、修补的原料。蛋白质占动物机体因形物总量的50％左右，肌肉、肝、脾、肾等实质器官的蛋白质含量可高达80％以上。由此可见。饲料中蛋白质的供应对畜禽生活和生产具有重要的作用，而蛋白质必须转化为氨基酸后才能为家畜和家禽等吸收利用。但目前少有对饲料中营养成分的研究报道。本研究采用酸性条件下水解饲料中蛋白质，柱前在线衍生与液相色谱紫外联用分析饲料中水解氨基酸。 二、实验部分 2.1 仪器与试剂 U3000液相色谱仪，恒温水浴锅，水解管（20ml） 甲醇、乙腈、水、三乙胺、四氢呋喃、乙酸钠、硼酸、氢氧化钠、邻苯二甲醛、氯甲酸芴甲酯、3-巯基丙酸、硫代乙醇酸、苯酚、三氟乙酸、盐酸 17种氨基酸混标溶液（除胱氨酸浓度为1.25μmol/ml，其它氨基酸浓度为2.5μmol/ml） 表1 U3000液相色谱仪器配置信息 仪器型号UltiMate3000: LPG-3400，SN:8014896 WPS-3000TSL, SN:8014671 TCC-3000, SN:801179 DAD，SN:8037084 变色龙?色谱管理软件（Chromeloeon?6.8 SR11） 色谱柱类型Hypersil GOLD C18色谱柱, 4.6×150mm, 5μm, PN:25005-154630，SN:11109020Q4 检测器工作参 数 检测波长：380nm，262nm, 3D扫描：190-400nm，采集频率：5Hz 流动相组成A: 20mM 乙酸钠（加0.018%三乙胺，调节pH值至7.2，再加入0.3%四氢呋喃），B：100mM乙酸钠（pH=7.2）-乙腈-甲醇（20:40:40） 进样参数自动进样器，1μl，温度：30o C 柱温设置35o C 表2 梯度洗脱程序
蛋白质和氨基酸的测定复习题
蛋白质和氨基酸的测定复习题 一、填空 1.构成蛋白质的基本物质是氨基酸；所有的蛋白质都含氮素；测定蛋白质的含量主要是测定其中的含氮量。 2.凯氏定氮法测定N元素含量时，样品与浓硫酸，催化剂一同加热消化，其中碳和氢氧化成二氧化碳和水，N最终转化为硫酸铵。 3.测定蛋白质的主要消化剂是硫酸；消化时，凯氏烧瓶应倾斜45度角；温度控制时应先低温消化，待泡末停止产生后再加高温消化；消化结束时，凯氏烧瓶内的液体应呈透明蓝绿色；蒸馏过程中，接收瓶内的液体是硼酸；蛋白质测定所用的氢氧化钠的浓度是45%左右；所用的指示剂是甲基红—溴甲酚绿混合指示剂。。将甲基红—溴甲酚绿混合指示剂加入硼酸溶液中，溶液应显暗红色。 4.测氨基酸态氮时，加入甲醛的目的是使氨基的碱性消失；氨基酸态氮含量测定的公式是X= c V×0.014×100/m 。 二、判断： 1.（√）凯氏定蛋法测蛋白质含量时，酸吸收液的温度不应超过40°C 2.（×）凯氏定氮法测氮含量时，消化中采用K2SO4作为催化剂。 3.（√）牛磺酸是一种氨基酸。 4.（√）氨基酸分析仪检测牛磺酸时，因为牛磺酸与强酸性树脂结合力不强，首先被洗脱下来。 三、单项选择题 1、凯氏定氮法只能测粗蛋白的含量是因为样品中常含有 A 、 D 、 E 、以及 F 等非蛋白质的含氮物质，故结果为粗蛋白质含量。 A 核酸、B无机氮、C 尿素、D生物碱、E含氮类脂、F含氮色素 2. （D ）凯氏定氮法测定蛋白质，蒸馏前，若加碱后消化液呈蓝色，此时应。 A. 不必在意，马上进行蒸馏 B. 增加消化液用量 C. 加入适量的水 D. 增加氢氧化钠的用量 四、简答题 1.粗蛋白 答：粗蛋白是食品中含氮化合物的总称，既包括真蛋白又包括非蛋白含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸盐和氨等。 2.凯氏定氮法测定蛋白质，结果计算为什么要乘以蛋白质的折算数？消化中K2SO4和CuSO4分别起什么作用？ 答：凯氏定氮法测得的是样品中N元素的含量，而样品中蛋白质的含量一般为15~17％，只要乘以相应的折算系数就可以计算粗蛋白的含量，样品不同，折算系数有所差异，要视具体原料不同，选用不同的折算系数。 K2SO4可提高浓H2SO4的沸点，加快反应速度。CuSO4起到催化作用，也可加快反应速度 五、综合题 1、试述蛋白质测定的原理及样品消化过程所必须注意的事项。 答：⑴原理利用硫酸及催化剂与食品试样一同加热消化，使蛋白质分解，其中C、H形成CO2及H2O