临床化学的控制品和校准品

临床化学的控制品和校准品

在自动分光系统上使用的罗氏诊断方法的标准化和对控制品定值

A. benozzi and H. Baier

德国Penzberg的Roche诊断公司的标准化和质量保证部，在临床化学标准化和对校准品与控制品的定值上有30多年的经验。以下我们介绍Roche诊断公司如何对相应产品进行定值（靶值设定）。

靶值设定：历史

在1970年的早期，仅有4个内部实验室进行靶值的设定。每个实验室在连续的4天内，用Eppendorf比色计对每个方法每天做双份测定。共收集了32个数据。取这些数据的算术均值设定为定值。

随着检验项目在临床化学实验室的增加，以及检验结果对患者疾病的诊断重要性的提高，对临床化学数据的质量即可靠性也越来越强调了。“结果的可靠性”即结果的精密度和准确度。

在70年代的末期和80年代的开始，在德国还没有对靶值设定的最佳模式达成一致。德国临床化学学会的中心参考学院（Central Reference Institution of the German Society for Clinical Chemistry）建议：由3个实验室对每个方法进行15次双份测定。同时，医学实验室的标准化和文件（Standardixation and Documentation in medical Laboratory, INSTAND）建议：每个方法由15个实验室进行5个单次测定。

这些引起了控制血清制备厂商的极大兴趣，德国诊断厂商协会（German Diagnostics Manufacturers Association, VDGH）提出一个高效而可靠的定值测定模式，吸取了各个模式的优点。“VDGH模式”要求每个方法至少由6个实验室做5个样品的测定。这个6×5=30结果模式还要求同时进行“未知控制品”的检测。只有负责靶值设定Roche诊断公司，知道“未知控制品”的定值。所有被评估的参加实验室必须能回收这个值。VDGH模式发表于1981年的J. Clin. Chem. Clin. Biochemistry, V ol. 19, pp. 1137-1179。它的基本原理仍然用于今天对每个靶值设定中。

欧洲的约30个实验室中，总的有7个（至少6个）近日参与靶值设定工作。

靶值设定：参加的实验室

为Roche诊断公司控制品和校准品确定定值的实验室，遵从法律上受委托的质量导则，所以完全符合专业实验室的规定。选择合适的实验室是定值质量的先决条件。

参加定值的实验室指标见表1。

为了确保实验室独立完成工作，Roche公司很少参与实验室为进行靶值设定的实施，并且确保所有数据的及时返回。

表1 外部实验室参与靶值设定的质量要求

靶值设定：程序

靶值设定的统计模式要求每个方法或项目至少有6个实验室参与。每个实验室对每个方法或项目进行3-5个独立系列的测定。所有校准品和控制品样品、以及其他检测的样品都是首次使用，仅在复溶或冻融时组合在一起的，这样的组合为独立系列。每次测定，都必须对检测系统做重校准。试剂不必新鲜配制。使用任何批号的自动系统校准品（C.f.a.s ）进行校准。对试剂批号没有规定。

每一个批号的C.f.a.s.的校准值都可以溯源至厂商的一级校准品（Masterlot calibrator ），而厂商的一级校准品可以溯源至参考品，这些参考品通常为国家的或国际标准（参见“标准化”）。

所有可接受的实验室结果的中位数被确定为靶值。中位数在所有结果中居中，即一半数据小于中位数，另一般数据大于中位数。所以中位数是按照数值大小的顺序确定的。离群点也不会影响中位数。因此，将中位数视为可靠值。

如果数据值是“同源、均相”的，进行中位数计算在生物统计学上是可行的。判断数据是否同源，应检查最大的实验室偏差，即最小实验室均值相对于最大实验室均值的百分偏差和不对称因子。

最大实验室偏差和不对称因子是实验值，取决于方法的天间和实验室间的精密度。不对称因子是所有结果分布曲线上较大部分和较小部分的比值，参见图2。

一般来说，最大实验室偏差小于10%，不对称因子小于2，属于可接受。

%1001???

? ??-=最大实验室均值最小实验室均值最大实验室偏差

未知控制品（Blind Control ）

未知控制品检测结果是否落在规定范围内，是确定检测结果可否用于统计评价的前提。（见定值范围）。如果未知控制品结果在可接受范围外，所有同时检测的系列结果均不可使用

质量控制

2个控制品保证了由Roche 诊断公司提供的定值是可靠的：

1．未知控制品（室间控制品）的结果

2．实验室内部质量控制结果（内部控制）。

定值的范围

至少有6个实验室、每个实验室进行3~5系列测定的统计模式对计算可靠中位数是足够

了。在获得可靠标准差时，结果数少一些在统计上没有显著性（见VDGH 模式的出版物）。

如果在相同的条件（实验室、设备、试剂、人员）下进行靶值设定，有可能计算出恒定的中位数，但是变异系数是不恒定的。后者因检测而异，？

如果使用每次实验的CV 来计算定值的范围，范围将随不同实验组合离散度不一。容易使用户迷惑。

Roche 诊断公司决定在各批间使用恒定的％范围，依据以往靶值实验结果来确定。用最后10次定值的CV ，选择排列中第2个最大的CV 确定为“实验％CV ”，由此计算出定值范围。该范围相当于定值±3 标准差（3 sd ）。对于未知控制品的可接受范围相当于定值±2 标准差（2 sd ）。

在定值后给实验室的反馈

为了确保获得定值结果的最佳质量，参加实验室将收到他们的结果和其他参加实验室结果的比较图，和未知控制品定值结果的比较。这样使实验室在质量保证的条件下进行工作。

校准品的标准化

标准化的目标是显示，在Roche 诊断公司分析仪上对患者血清进行检测，得到的结果可以和参考方法或比较方法得到的结果具有可比性，或者和认可的参考品校准后方法结果具有可比性（参见图3）。

每个标准化的先决条件是在分析物浓度和光电比色吸光度间有直接关系：即分析物比色吸光度必须和浓度呈比例。应用下列公式：

）

校准品浓度（）＝样品中的浓度（校准品校准品样品样品C A A C 样品浓度和校准品浓度的比值等于样品吸光度和校准品吸光度的比值。这只适用于样品和校准品具有相同的分析表现，没有基体效应。所以校准材料应具有“正常”人血清的性质。但是，校准品不必具有和人血清相同的基体。

参考标准化

目的是为校准品设定校准值，用于校准某检测系统，使该系统检测对人血清检测的结果，能按比例地校正至参考方法或比较方法检测的结果。（参见图4）。

图4说明依据人血清检测的参考标准化。进行参考标准化有2个方法：

* 校准品比较

* 方法的比较

校准品可比性

若可以用人血清为基础的参考材料，即依据基体和C.f.a.s.具可比性（如血清蛋白的参考品CRM 470），参考品可以直接和校准品C.f.a.s.比较（如C.f.a.s.蛋白）。对大量各个人血清（具有的分析物浓度或活力分布于整个范围）在分析仪上进行平行配对检测，一个通道用参考品校准，另一通道用C.f.a.s.蛋白一级校准品校准。2个分析仪通道分别进行这些检测。

每个人血清得到1对结果。对所有配对结果作直线回归处理，呈b aX Y

+=?关系：X 为用参考品校准检测的结果，Y 为用C.f.a.s.蛋白校准品校准检测的结果，a 为斜率，b 为截距。

依据回归关系，首先初步调整C.f.a.s.蛋白校准品校准值，设法获得Y = X 关系，假设截距很小，可以忽略不计（设为0）。参加图5。

使用人血清的方法比较

如果分析物有参考方法，即为不具有基体效应的检测方法，可以对人血清确定参考值。 当然，不可能用参考方法，如ID-MS 方法和Roche 分析仪方法平行分析人血清；因为没有实验室能同时进行这2个方法作检测。另一个原因是仅靠单一供体难以提供进行参考方法检测要求的材料量。所以使用人混合血清。参见图6。

我们收集人血清，形成具有各种浓度/活力的混合血清。需要5到10个混合血清，经过滤、混匀，使均匀。然后各分装成1ml 小包装，每个混合血清取1支1 ml ，组成一组。储存于－70℃保存。

对每组血清进行下列检测：

a) 按照德国临床化学学会（DGKC ）设定的方法，使血清获得参考方法值。

b) 在Roche 分析仪上，用一级校准品C.f.a.s.校准后，按照上述“靶值设定”内容使血清获得Roche 分析仪值。

将每个血清的配对结果作直线回归处理。如上述，调整C.f.a.s.校准品值，使血清Roche 分析仪值和参考方法值的回归关系为Y = X 。

参考品和比较方法见图7。

最后，应指出的是：校准品、试剂和分析仪形成标准化的协同系统。改变或改换任何一个组份，必须确定是否必要重做校准。如果要重校准，整个系统需要重新调整。参见图8。

常规标准化

商品的各批C.f.a.s.校准品以储存于-70℃的一级C.f.a.s.校准品为准标准化的。这样可以确保公司的一级C.f.a.s.校准品长期使用，至少在2年内活力不变。

标准化的同时使用“趋势控制品”，可以证实一级校准品的校准值以及整个检测系统（校准品、试剂、分析仪）在这段时间里保持不变。标准化中，“标记1”是储存在-70℃的人混合血清，“标记2”是储存在-70℃的冻干控制血清。参见图9。

在每次常规的标准化中，对标记1和2血清的检测都必须达到原定值规定的最大允许偏差内的回收要求。依据控制材料和检测方法不同，我们规定的允许偏差为：2％～4％。如果变化趋势明显；或显著超过最大允许偏差，则有问题方法的参考标准化必须重复。

Roche诊断公司邀请7个（至少6个）外部实验室进行常规校准品标准化工作。每个实验室进行3组独立系列的检测。这个过程和靶值设定是完全相同的。

每批c.f.a.s.校准品产品储存于4℃。在产品即将和超过有效期时，也被进行常规标准化的检测。这是确保校准品具有“实时”稳定期。

汇总

# 校准和定值由外部实验室确定，不取决于Roche诊断公司。

# 统计靶值设定和标准化的模式，每个项目或检测方法需要7个（至少6个）实验室参与。每个实验室在自动系统上进行3系列的检测和5个系列的手工操作。

# 对未知控制品的测定是主要判断检测结果可否接受的重要手段。

# 完全依据实验数据确定设定靶值的范围。

# 为控制品设定靶值时，对于使用的校准品和试剂的批号都没有任何规定。但是，对C.f.a.s. 校准品标准化的校准时必须使用一级C.f.a.s.校准品。

# 依据欧洲标准化委员会（European Committee for Standardization，CEN）文件，每个方法的校准可以溯源至参考方法、参考品或合适的标准品。对新鲜人血清或深低温保存的人混合血清进行方法学比较，说明可溯源性。

# “趋势控制品”或“标记控制品”用于连续监视检测系统的校准稳定性，说明在常规标准化中，每批C.f.a.s.校准品具有“实时”稳定性（标示稳定性是可靠的）。