DNA含量检测试剂盒( 细胞周期 )使用说明

DNA含量检测试剂盒（细胞周期）使用说明

DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)

货号：CA1510

规格：20T/50T

保存：-20℃避光保存，一年有效。

产品说明：

细胞周期是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。细胞周期又可以分为间期和有丝分裂期，细胞间期常划分为休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整个周期可表示为G1→S→G2→M。DNA周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。利用细胞内DNA能够和荧光染料（如碘化丙啶PI）结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样。

细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩，核裂解，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对90°角光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向角和90°角光散射的信号均降低。因此可以通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化来观察凋亡细胞。用PI对细胞进行染色，凋亡细胞由于总DNA 量降低，于正常G0/G1细胞群前出现DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1）,即细胞凋亡群。

本试剂盒可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的DNA含量（细胞周期）检

测。

试剂盒组成：

试剂名称CA1510-20T CA1510-50T保存条件

RNase A 2.0mL 5.0mL-20℃

PI染色液8.0mL20.0mL-20℃避光使用方法：（仅供参考）

1、用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组，并收集细胞。

2、用PBS洗涤细胞一次，1500rpm，5min离心收集，调整细胞浓度为1×106/ml,取1ml单细胞悬液。

3、制备的单细胞悬液离心后，去除上清，在细胞中加入70%预冷乙醇500ul固定2小时至过夜，4℃保存，染色前用PBS洗去固定液；如需要，细胞悬液可用200目细胞筛网过滤一次。

4、细胞沉淀中加100μl RNase A溶液，重悬细胞，37℃水浴30min。

5、再加入400μl PI染色液混匀，4℃避光孵育30min。

6，上机检测，记录激发波长488nm处红色荧光。

注意事项：

1、碘化丙啶（PI）染色液保存和使用过程中应注意避光。

2、PI有毒，操作时应戴手套，并避免污染。

3、荧光染料都存在淬灭问题，建议染色后尽量当天完成检测。

人体细胞分裂周期和代谢周期

人的寿命与细胞分裂周期和代谢周期这是美国学者海尔弗利在1961年提出来的。他根据实验研究发现动物胚胎细胞在成长过程中，其分裂的次数是有规律的，到一定阶段就出现衰老和死亡。这与细胞分裂的次数和周期有关。二者相乘即为其自然寿命。海尔弗利的具体实验情况是这样的：他将婴儿的细胞放在培养液中一次又一次地分裂，一代又一代地繁殖，但当细胞分裂到50代时，细胞就全部衰老死亡。他又在大量实验资料的基础上，提出根据细胞分裂的次数来推算人的寿命，而分裂的周期大约是2．4年，照此计算；人的寿命应为120岁。鸡的细胞分裂次数是25次，平均每次分裂的周期为一年零两个月，其寿命为30年。小鼠细胞的分裂次数是12次，分裂周期为3个月，其寿命为3年。人体的自然寿命约120岁，而组成人体组织的细胞寿命有显著差异，根据细胞的增殖能力，分化程度，生存时间，可将人体的组织细胞分为四类： ①更新组织细胞：执行某种功能的特化细胞，经过一定时间后衰老死亡，由新细胞分化成熟补充，如上皮细胞、血细胞，构成更新组织的细胞可分为3类：a干细胞，能进行增殖又能进入分化过程。b过渡细胞，来自干细胞，是能伴随细胞分裂趋向成熟的中间细胞，c 成熟细胞，不再分裂，经过一段时间后衰老和死亡。 ②稳定组织细胞：是分化程度较高的组织细胞，功能专一，正常情况下没有明显的衰老现象，细胞分裂少见，但在某些细胞受到破坏丧失时，其余细胞也能进行分裂，以补充失去的细胞，如肝、肾细胞。 ③恒久组织细胞：属高度分化的细胞，个体一生中没有细胞更替，破坏或丧失后不能由这类细胞分裂来补充。如神经细胞，骨骼细胞和心肌细胞。 ④可耗尽组织细胞：如人类的卵巢实质细胞，在一生中逐渐消耗，而不能得到补充，最后消耗殆尽。细胞的生命周期：连续分裂的细胞，从一次分裂完成时开始到下一次分裂完成时为止。细胞周期包括细胞分裂期和分裂间期（前、中、后、末）。人体的细胞众多，各自的生活周期都是不一样的。人体各种细胞的生命周期据英国《每日邮报》报道，很多人担心衰老，但很少有人意识到，不管你的寿命多长，你身体的某些部分其实只有几周甚至几天的寿命。这是因为它们在不断进行自我更新。以下就是身体各部位的寿命： 1.肠细胞的寿命：2-3天肠上分布着肠绒毛，这些肠绒毛是小的手指状的触角，可增大表面积帮助肠吸收营养。巴特与伦敦医院的免疫学教授汤姆·麦克唐纳德解释说，它们更新速度极快，每2到3天更新一次。这是因为它们经常暴露在化学物如分解食物的高腐蚀性胃酸中，因此它们通常饱受折磨。肠的其他部分通过一层粘液进行自我保护，虽然这种屏障无法长久抵御胃酸，所以，这些位置的细胞的自我更新频率为3到5天。 2.味蕾细胞的寿命：10天英国牙医协会的科学顾问达明·维穆斯莱教授解释说，舌头上有大约9000个味蕾，帮助我们感受甜、咸、苦或者酸味。味蕾本身是舌头表面细胞的集合，每个味蕾有大约50个味觉细胞。味蕾一般只需要10天到2周便会自我更新一次。但是，任何引起发炎的因素如感染或者吸烟都会损害味蕾，影响它们的更新，减弱它们的敏感性。 3.肺细胞的寿命：2-3周英国肺脏基金会副主席基思·普罗斯解释说，肺细胞不断自我更新。但是，肺有不

人类K-ras基因突变检测试剂盒说明书

人类K-ras基因突变检测试剂盒（PCR-熔解曲线法）说明书【产品名称】通用名：人类K-ras基因突变检测试剂盒（PCR-熔解曲线法）英文名：Diagnostic kit for Mutations of Human K-ras Gene (PCR-Melting Curve Analysis) 【包装规格】 20测试/盒【预期用途】 K-ras基因位于12号染色体短臂上，是重要的癌基因之一，编码一种21kD 的kras蛋白，参与细胞内的信号传递，主要包括PI3K/PTEN/AKT 和 RAF/MEK/ERK信号转导途径，这些转导途径是当前肿瘤靶向药物研究的热点，靶向药物通过抑制这些途径发生药理作用。K-ras基因第12和13密码子发生突变，将导致kras蛋白变异并处于持续激活状态，使药物失效。。据中国2010版《肿瘤学临床实践指南》，在一项包含101例肺腺癌亚型细支气管肺泡癌患者的回顾性研究中，所有患者均接受厄洛替尼单药一线治疗。K-ras突变者无一例缓解（0/18），而无K-ras突变者则有20例缓解（20/62，32%），差别有统计学意义（P <0.01）。因此，指南建议，非小细胞肺癌和结直肠癌患者使用靶向药物前应进行K-ras基因突变状态的检测。本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA为检测样本，用于检测肿瘤组织K-ras基因第12，13密码子的12种体细胞突变（表1），提供突变状态的定性结果。为临床肿瘤靶向药物的个体化用药提供辅助诊断依据，本品适用于进入个体化靶向治疗疗程前的患者使用。【检验原理】本试剂盒基于实时PCR平台，结合了特异引物、荧光探针和熔解曲线技术，定性检测DNA样品中K-ras基因12，13密码子是否存在突变。用一对K-ras基因特异引物，该引物可

细胞周期分析原理和分析结果解释

细胞周期分析原理和分析结果解释 1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。可分为四个阶段（见图）： ① G1期（gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间； ② S期（synthesis phase),指DNA复制的时期； ③ G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间; ④ M期又称D期(mitosis or division），细胞分裂开始到结束。 2、从增殖的角度来看，可将高等动物的细胞分为三类： ①连续分裂细胞,在细胞周期中连续运转因而又称为周期细胞，如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。 ②休眠细胞暂不分裂，但在适当的刺激下可重新进入细胞周期，称G0期细胞，如淋巴细胞、肝、肾细胞等。 ③不分裂细胞，指不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称终端细胞，如神经、肌肉、多形核细胞等等。细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关，如:小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10 小时,人类胃上皮细胞24小时，骨髓细胞18小时，培养的人了成纤维细胞18小时，CHO细胞14小时,HeLa细胞21小时.不同类型细胞的G1长短不同，是造成细胞周期差异的主要原因. 3、流式细胞结果图各参数的意义：前面讲过，常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量（横坐标)来分析的:

G1期:细胞DNA复制还没有开始,也是DNA含量最少的，即流式检测结果图的第一个峰； S 期：细胞开始复制，到完成复制，是一个一倍DNA到二倍DNA的过程,在流式结果图中显示期跨度特别大（第二个不高但很宽的峰）; G2期：DNA复制完成至分裂的一段时间，此时细胞内含二倍DNA，在流式结果图中的第二个峰； M期：细胞分裂过程，此时细胞内也是二倍DNA,用DNA含量的方法是无法与G2期分开，所以有第三峰明显升高时报告:G2/M期阻滞。上图是DOS系统下分析细胞周期的一个示意图。不同的机器分析结果参数表示略有不同，但主要看G1、G2、S三个期的数值即可。 1、纵坐标Cell Number：即计数到的有效细胞数; 2、横坐标DNA Content：即DNA量，为什么用DNA量来区别各周期我们等下再讲； 3、G1、G2、S三期在上图已经用箭头标示； 4、右侧数字含义：Mean G1=195.4即G1期DNA含量平均值为195。4；%G1=73.6即G1期细胞数占总数的73。6%；以此类推……

细胞分裂和细胞周期习题

第九章细胞分裂和细胞周期习题一、选择题 A-九-1. 有丝分裂前期的最主要特征是（）。 A. 核仁. 核膜. 核仁组织者都要消失 B. 染色质凝缩成染色体 C. 核糖体解体 D. 中心体消失 A-九-2. 细胞周期包括（）两个主要时期。 A. G1期和G2期 B. 间期和M期 C. 间期和S期 D. M期和G1期 B-九-3. 虽然不同的细胞有不同的细胞周期，但一般来说，都是（）。 A. G1期长，S期短 B. S期长，G2期短 C. S期长，M期短 D. M期长，G1期短 A-九-4. 在细胞周期中，核仁、核膜要消失，这一消失出现在（）。 A. G1期 B. S期 C. G2期 D. M期 A-九-5. 在有丝分裂过程中，姐妹染色单体着丝粒的分开发生于（）。 A. 前期 B. 中期 C. 后期 D. 末期 C-九-6. 同步生长于M期的HeLa细胞与另一同步生长的细胞融合，除看到中期染色体外还见到凝缩成粉末状的染色体，推测这种同步生长的细胞是处于（）。 A. G1期 B. S期 C. G2期 D. M期 C-九-7. P53基因抑制受损伤细胞进入G2期的机制是（）。 A. 通过P21基因作用于周期蛋白 B. 通过抑制P21基因的启动

C. P53蛋白直接作用于周期蛋白 D. P53与P21共同作用于周期蛋白A-九-8. 成熟促进因子是在（）合成的。 A. G1期 B. S期 C. G2期 D. M期 B-九-9. 在有丝分裂的哪个时期染色体最分散（）。 A. 前期 B. 前中期 C. 中期 D. 后期 B-九-10. 下列减数分裂过程中，要发生染色体减数，此过程发生在（）。 A. 前期Ⅰ B. 中期Ⅰ C. 后期I D. 后期Ⅱ B-九-11. 染色体出现成倍状态发生于细胞周期中的（）。 A. G2期和早M期 B. G1期和S期 C. 晚M期和G1期 D. G0期和G1期 B-九-12. 在减数分裂的粗线期，（）。 A. 常发生姐妹染色体单体的交换从而导致重组配子的产生 B. 常发生姐妹染色体单体的交叉从而导致重组配子的产生 C. RNA聚合酶明显增多 D. 组蛋白成倍增加 B-九-13. 在有丝分裂中，（）。 A. 细胞周期长短主要由S期长短决定 B. 这个时期对不利条件敏感导致G1期阻滞 C. S期的长短与染色体的倍数有关

B-raf基因突变检测试剂盒(PCR-毛细管电泳法)标准化操作流程

B-raf基因突变检测试剂盒(荧光PCR-毛细管电泳法) 标准化操作流程 1、预期用途该产品用于定性检测确诊的结直肠癌患者石蜡包埋病理组织切片DNA的B-rafV600E 基因突变。B-raf 基因是一种癌基因，编码一种丝/ 苏氨酸特异性激酶，是RAS/RAF/MEK/ERK/MAPK 通路重要的转导因子，参与调控细胞内多种生物学事件，如细胞生长、分化和凋亡等。B-raf 基因位于7p34，长约190kb，转录mRNA 长2.5kb，编码783 氨基酸的蛋白，相对分子质量为94000-95000 Da。研究表明，在多种人类恶性肿瘤中，如恶性黑色素瘤、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、肝癌及胰腺癌等均存在不同比例的B-raf 突变，B-raf 突变主要发生在Exon15 上的激活区的第1799 氨基酸上(T 突变为A)，导致编码的氨基酸由谷氨酸变成缬氨酸(V600E)，该突变能使B-raf 激酶活性提高，V600E 突变能模拟T598 和S601 两个位点磷酸化作用，使BRAF 蛋白激活。近来研究表明，对于野生型Kras、但存在B-raf 基因V600E 突变患者，抗EGFR 单抗治疗无效。2010 年版《NCCN 结直肠癌临床实践指南》中已明确指出“如K-ras 基因无突变时，需检测B-raf 基因突变，如果后者存在V600E突变，则不应该给予抗EGFR 单抗治疗。” 2、仪器配置要求移液器，振荡器，微型离心机，生物安全柜，高速冷冻离心机，定性PCR仪，荧光定量PCR仪（ABI7500，LightCycler? 480，MX3000P，CFX-96等），微量紫外分光光度计，基因分析仪（ABI3130，ABI3500DX）。 3、耗材要求无菌带滤芯吸头、吸水纸，离心管（1.5ml，0.5ml，0.2ml）、PCR反应管（配套荧光定量PCR仪型号）及无粉一次性乳胶手套，基因分析板。 4、责任人基因扩增实验室室长负责技术指导和质量监督。 5、执行人操作人员应经过专业培训，具有合格的操作技能的检验专业技术人员。 6、检测原理本产品选取人类基因组B-raf 基因Exon 15 上设计特异性引物和探针，对扩增后的PCR 产物片段进行测序分析。使用尿苷酶(UNG)防污染体系，经加热可以选择性地降解U-DNA，以防止先前PCR 扩增产物的污染。 7、试剂来源北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司 8、样本要求 8.1用量：每例标本切5张(10μm)白片，连续切片，不漂洗脱蜡，直接封存于1.5ml EP管中； 8.2质量：为确保DNA提取成功率，必须选择2年以内的石蜡标本； 8.3标本收集方法：石蜡包埋病理切片样品应确定含有肿瘤病变细胞，为了保证切片组织中

细胞分裂与细胞周期教案-2020汇报

第十三章细胞分裂与细胞周期第一节细胞分裂教学目的：学习有丝分裂、减数分裂和无丝分裂三种不同的细胞分裂方式。教学要求： 1.掌握有丝分裂的定义、过程和结果。 2.掌握减数分裂过程和意义。 3.了解无丝分裂的过程及特点。重点：有丝分裂、减数分裂和无丝分裂的过程、特点及结果。难点：有丝分裂和减数分裂的异同点。教学内容：一、有丝分裂有丝分裂也称间接分裂，是高等真核生物细胞分裂的主要方式。有丝分裂是一个连续、动态的过程，按时间顺序分为：前、中、后、末期（一）分裂前期核内染色质开始凝聚前期细胞变化特征：染色质凝聚、分裂极确定、核仁缩小解体、纺锤体形成。染色质凝聚：已复制的染色质纤维开始螺旋化，逐渐凝集成具有棒状或杆状的染色体。分裂极确定：在前期，伴随着染色质的凝集，原分布于细胞同一侧的两个中心体开始沿核膜外围分别向细胞两极移动，它们最后到达的位置将决定细胞分裂极。核仁缩小解体：核纤层磷酸化降解－核膜消失纺锤体形成：在前期末出现的临时性细胞器，由两端星体(微管和中心体)形成纺锤样结构，主要包括星体微管、动粒微管、极微管。三类纺锤体微管负端皆朝向中心体，正端远离中心体。进入前期的标志：核内松散的染色质纤维螺旋化并发生折叠。动粒：着丝粒两侧附着的多种蛋白质组成在电镜下呈板状或杯状复合结构。间期就完成复制的两组中心体彼此分开，移向两极；中心体是微管的组织中心之一，能发出大量微管，这些微管与中心体一起被称为星体。马达蛋白以微管为轨

道利用ATP水解出的能量牵引两个中心体移向两极。染色体列队：前期末，染色体凝集程度增高，在动粒微管牵拉下，染色体逐渐移向赤道面。（二）分裂中期的细胞赤道面上排列着高度凝聚的染色体中期metaphase 的主要特点是染色体最大程度凝缩，两个动粒上结合的微管长度相等，染色体排列在赤道板上，小的在内侧，大的在外侧。（三）分裂后期完成姐妹染色单体分离后期主要特征：染色体两姐妹染色单体分离并移向细胞的两极姐妹染色单体的分离原因：染色体着丝粒分裂，动力微管影响不大染色单体向极运动跟马达蛋白有关，该蛋白协调微管运动将染色单体拉向两极。（四）分裂末期的细胞核重新组装并完成核分裂末期主要特征：子代细胞的核形成和胞质分裂。组蛋白去磷酸化，高度凝聚的染色体开始解旋，染色质纤维重新出现，RNA合成恢复，核仁重新形成，在每条染色体周围形成双层核膜，核孔重新组装；核纤层蛋白去磷酸化，重新形成核纤层，连接在核膜上。收缩环：中部质膜下方出现大量肌动蛋白和肌球蛋白聚集形成的环状结构。分裂沟：收缩环中的肌动蛋白和肌球蛋白组成的微丝束，通过互相滑动使收缩环不断缢缩，细胞膜内陷形成分裂沟。过程需要的能量由ATP提供。二减数分裂减数分裂：发生于有性生殖细胞的成熟过程中，主要特征：DNA 复制一次，细胞连续分裂两次；其细胞遗传物质减半，形成具有单倍体遗传物质的配子细胞。减数分裂也是构成生物变异和多样性的基础。第一次减数分裂(减数分裂I ) 同源染色体通过联会进行片段交换，随后分开，完成染色体数目减半、遗传物质的交换第二次减数分裂(减数分裂II ) 染色单体分开

Braf基因突变检测试剂盒说明书

人类B-raf基因V600E突变检测试剂盒（荧光PCR法）说明书【产品名称】通用名：人类B-raf基因V600E突变检测试剂盒（荧光PCR法）英文名：Diagnostic kit for V600E Mutation of Human B-raf Gene(Fluorescence PCR Analysis) 【包装规格】 20测试/盒【预期用途】 B-raf基因位于7号染色体长臂上，是一种癌基因，属RAF基因家族，有18个外显子，编码一种含783个氨基酸的B-raf蛋白，是EGFR通路RAS/RAF/MEK/MRK/MAPK中重要的转导因子，参与调控细胞生长、分化和凋亡等多种生理过程。针对EGFR的肿瘤靶向药物通过抑制该途径发生药理作用。研究表明在非小细胞肺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中存在B-raf基因突变，其中第15外显子上V600E点突变最常见，约占所有突变的90%以上，该突变导致B-raf蛋白被异常激活，从而使患者接受EGFR-TKI药物和EGFR单抗类药物治疗失效。据中国2010版《肿瘤学临床实践指南》建议，对K-raf基因检测正常的非小细胞肺癌和结直肠癌患者，应进一步检查B-raf基因的突变状态，以指导靶向药物治疗方案。本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA为检测样本，用于肿瘤组织B-raf 基因V600E点突变的定性检测，为临床肿瘤靶向药物的个体化用药提供依据。本公司尚无临床实例证实B-raf 基因突变与靶向药物的相关性，其相关性主要来自文献报道，因此本试剂盒检测结果仅用于辅助临床医生对肿瘤患者制定用药方案。【检验原理】本试剂盒基于实时荧光PCR平台，结合等位基因特异性扩增（ARMS）技术、野生型基因扩增抑制技术和多重PCR技术检测B-raf基因V600E突变。ARMS技术是指PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增，通过设计特异性ARMS引物，对存在V600E突变的B-raf基因靶序列进行PCR扩增放大，并利用FAM基团标记的Taqman 探针对扩增产物进行检测。因为采用了野生型基因扩增抑制剂，使ARMS体系能够耐受更高浓度的背景野生型B-raf基因，降低了试剂盒对基因组样本的DNA浓度要求，提高了检测灵敏度。为质控扩增体系的有效性，试剂盒设置了内质控和外质控，内质控基因是人类基因组的一个保守片段，长

细胞分裂各时期特点及图像描述

细胞分裂各时期特点及图像描述一、特点 ①分裂间期这一时期为细胞分裂进行物质上的准备，主要是完成组成染色体的DNA的复制和有关蛋白质的合成。因此，间期是整个细胞周期中极为关键的准备阶段。由于DNA的复制，导致细胞核内遗传物质的加倍。在DNA复制之前，细胞核中的每条染色体上(间期实际上呈染色质的状态)含有一个DNA分子，复制后，每条染色体上有两个相同的DNA分子，但仍然连在同一个着丝点上，形成两个完全一样的姐妹染色单体，也就是说，姐妹染色单体是在间期形成的。此时，细胞核中的DNA分子数增加一倍，但染色体数目由于着丝点没断开，而保持不变，只有到了分裂后期染色体数目才因着丝点分开，姐妹染色单体变成两条子染色体，染色体数目加倍。 ②分裂期分裂期是一个连续的过程，为了研究的方便，可以人为地分为前期、中期、后期、末期四个时期，这四个时期的主要特点如下表所示：注意：细胞中央的赤道板是假想平面，实际不存在，而细胞板是实际存在的，细胞板由细胞中央向四周扩展，逐渐形成新的细胞壁将植物细胞一分为二。仔细体会，在有丝分裂过程中，DNA和染色体数目都有一个加倍过程，但加倍的时期是不同的。DNA 在间期加倍，而染色体是在后期加倍，这样在形成的两个子细胞中，DNA和染色体数目都保持不变，从而保证了细胞的前后代遗传物质的稳定性。二、染色体、DNA在细胞有丝分裂各时期变化规律理解染色体、DNA在有丝分裂各时期数目变化规律关键有三点：一是间期，染色体进行复制，包括DNA分子复制和蛋白质的合成，复制结果DNA分子加倍，即由２ｎ~４ｎ，而染色体数目不变；二是后期，着丝点分裂为二，染色单体分开变成染色体，此时细胞内的

人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒说明书

人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒说明书【产品名称】通用名称：人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒英文名称：Shuwen? Human EGFR Gene Mutation Detection Kit for Real-Time PCR 【包装规格】 7测试/盒【预期用途】 EGFR是一种细胞膜表面的糖蛋白受体，具有酪氨酸激酶（Tyrosine Kinase，TK）活性，是原癌基因c-erbB-1（HER-1）的表达产物。EGFR 的主要信号转导途径有：PI3K-PDK 通路，RAS-RAF-MEK-ERK-MAPK 通路，PLC-γ 通路，JAK-STAT 通路。通过这些途径，将胞外信号转化为胞内信号，从而有效应对外界的信号刺激，调节细胞的生长、增殖、分化，抑制细胞的凋亡。EGFR异常调节通过多种机制促进细胞恶性转化，包括受体的过度表达、突变、生长因子-受体自分泌环的活化以及特定的磷酸酶失活，其中涉及肿瘤发生和进展的机制中最常见的是EGFR的基因突变和过度表达。 EGFR基因位于7号染色体短臂7pl2-14区，由28个外显子组成。其突变主要发生在EGFR酪氨酸激酶的ATP结合位点的编码区（第18-20外显子），研究表明，EGFR酪氨酸激酶抑制剂（例如吉非替尼、厄洛替尼和埃可替尼等）疗效与EGFR基因的突变有密切的相关性。目前已经报道大约有30种突变与吉非替尼的药物反应相关，主要是19外显子上的缺失突变和21外显子上的L858R的点突变。外显子19上747-750位氨基酸的大约20种缺失约占所有突变的45%，其中以两种delE746-A750(2235_2249del15和 2236_2250del15)最为常见，占到外显子19缺失总数的75%；外显子21上L858R的点突变占所有突变的45%左右；外显子18的3种点突变（G719X）约占5%；外显子20的突变占1%左右。另外研究发现外显子20上的T790M突变与酪氨酸激酶抑制剂药物的耐药性相关。本试剂盒以肿瘤DNA为检测样本，提供EGFR基因突变的定性检测。本试剂盒仅为临床医生肿瘤靶向治疗药物的选择提供参考，具体临床应用时须结合实际情况进行判断，不能以本试剂盒检测结果作为临床诊断的唯一依据。【检测原理】本试剂盒结合特异性引物和TaqMan探针技术，用实时荧光PCR方法检测DNA样品中的EGFR突变基因。利用特异性引物对突变靶序列进行扩增，同时阻滞野生型的扩增，通过TaqMan探针对扩增产物进行检测，使得突变基因得到扩增而野生型基本不扩增，从而达到高检测特异性和高灵敏度。【主要组成成分】本试剂盒具体包含组分如表1 表1

新乡医学院医学细胞生物学习题第十二章细胞增殖与细胞周期

第十二章细胞增殖与细胞周期一、单项选择题1．细胞周期中，决定一个细胞是分化还是增殖的控制点（R 点）位于 A. G1期末 B. G2期末 C. M期末 D.高尔基复合体期术 E. S期 2．细胞分裂后期开始的标志是 A. 核仁消失 B.核膜消失 C.染色体排列成赤道板 D.染色体复制E着丝粒区分裂，姐妹染色单体开始分离 3 .细胞周期中，DNA合成是在 A. G1 期 B. S期 C. G2 期 D. M 期E GO 期 4．有丝分裂中，染色质浓缩，核仁、核膜消失等事件发生在 A.前期 B.中期 C.后期 D.末期 E.以上都不是 5．细胞周期中，对各种刺激最为敏感的时期是 A. GO 期 B. G1 期 C. G2 期 D. S期 E. M 期 6．组蛋白的合成是在细胞周期的 A. S期 B. G1 期 C. G2 期 D. M 期E GO 期 7 下列哪种关于有丝分裂的叙述不正确 A.在前期染色体开始形成 B.前期比中期或后期都长 C. 染色体完全到达两极便进入后期 D.中期染色体最粗短 E 当染色体移向两极时，着丝点首先到达 8 着丝粒分离至染色单体到达两极是有丝分裂的 A .前期B.中期 C.后期D.末期E.胞质分裂期 9 细胞增殖周期是指下列哪一阶段 A.细胞从前一次分裂开始到下一次分裂开始为止 B 细胞从这一次分裂开始到分裂结束为止 C 绌胞从这一次分裂结束到下一次分裂开始为止 D. 细胞从前一次分裂开始到下一次分裂结束为止 E 细胞从前一次分裂结束到下一次分裂结束为止 10. 细胞周期中，遗传物质的复制规律是 A.异染色质先复制 B.常染色质先复制 C 异染色质大量复制，常染色质较少复制 D. 常染色质大量复制，异染色质较少复制 E 常染色质和异染色质同时复制 11. 真核生物体细胞增殖的主要方式是 A.有丝分裂 B.减数分裂 C.无丝分裂 D.有丝分裂和减数分裂 E.无丝分裂和减数分裂 12. 从细胞增殖角度看，不再增殖细胞称为 A. G1A态细胞 B. G1B态细胞 C. G1期细胞 D. G2期细胞 E. G0期细胞 13. 在细胞周期中，哪一时期最适合研究染色体的形态结构 A.间期 B.前期 C.中期D后期E.末期 14. 细胞周期的顺序是 A. M期、G1期、S期、G2期B . M期、G1期、G2期、S期 C. G1期、G2期、S期、M期 D. G1期、S期、M期、G2期

人类Kras基因突变检测试剂盒说明书

使用靶向药物前应进行K-ras基因突变状态的检测。本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA为检测样本，用于检测肿瘤组织K-ras基因第12，13密码子的12种体细胞突变（表1），提供突变状态的定性结果。为临床肿瘤靶向药物的个体化用药提供辅助诊断依据，本品适用于进入个体化靶向治疗疗程前的患者使用。【检验原理】本试剂盒基于实时PCR平台，结合了特异引物、荧光探针和熔解曲线技术，定性检测DNA样品中K-ras基因12，13密码子是否存在突变。用一对K-ras基因特异引物，该引物可扩增12种突变型和野生型的K-ras目标序列，利用标记了FAM荧光基团和淬灭基团的双标记探针一方面抑制野生型基因的扩增，提高突变基因的检测灵敏度，另一方面在扩增后用熔解曲线法实现对扩增产

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患者的回顾性研究中，所有患者均接受厄洛替尼单药一线治疗。K-ras突变者无一例缓解（0/18），而无K-ras突变者则有20例缓解（20/62，32%），差别有统计学意义（P <0.01）。因此，指南建议，非小细胞肺癌和结直肠癌患者使用靶向药物前应进行K-ras基因突变状态的检测。本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA为检测样本，用于检测肿瘤组织K-ras基因第12，13密码子的12种体细胞突变（表1），提供突变状态的定性结果。为临床肿瘤靶向药物的个体化用药提供辅助诊断依据，本品适用于进入个体化靶向治疗疗程前的患者使用。

《细胞周期》——细胞生物学知识点总结

《细胞周期》 ★细胞的最终命运：细胞分裂及生长（相关物质准备）→细胞增殖（受到严密的调控机制所监控）→细胞死亡 ★标准的细胞周期：（从G1期开始，历经S、G2，到M期结束）一．细胞周期的基本概念： 1.细胞周期：细胞周期是细胞增殖周期的简称，指细胞从分裂结束后开始生长，到再次分裂终了所经历的全过程。 2.细胞周期时间(Tc)：细胞周期时间因细胞类型、状态和环境而异，变异范围大，从0h~数年都可能。 3.细胞的增殖特性（机体细胞的状态）： 1）增殖细胞（周期性细胞）：能够增殖，不断进入周期完成分裂。 2）暂不增殖细胞（休眠细胞，G0细胞）：长期停留在G1晚期（G0期）而不越过限制点，未丧失分裂能力，在适当条件下可恢复到增殖状态。 3）永不增殖细胞（终末分化细胞）：始终停留在 G1期，失去增殖能力直到衰老死亡。二．细胞周期的研究方法： ★细胞周期模型细胞周期研究中经常使用一些典型的物种和细胞系统，最常用的模型包括酵母、爪蟾胚胎细胞和哺乳动物体外培养细胞。 ★细胞周期同步化 ——由于实验常常需要设法获得时相均一的细胞群，使样品中的细胞都处于大致相同的细胞周期阶段，所以常需要使细胞周期同步化。同步化的策略：①诱导同步化；②选择同步化同步化常用方法：①细胞分裂收获法②代谢抑制法（加入过量胸苷后清洗）③低温培养法 ★3H-TdR（氚标记胸苷）有丝分裂标记法（测定细胞周期的时间） ——应用3H-TdR短期饲养细胞，数分钟至半小时后，将3H-TdR洗脱，置换新鲜培养液并继续培养。随后，每隔半小时或1小时定期取样，作放射自显影观察分析，从而确定细胞周期各个时相的长短。

(完整版)细胞生物学细胞周期及其调控思考题

一、最佳选择题(每题2分) 1．真核生物体细胞增殖的主要方式是。 A．有丝分裂B．减数分裂C．无丝分裂D．有丝分裂与减数分裂 E．无丝分裂和减数分裂 2．从细胞增殖角度看，不再增殖细胞称为。 A．G1A态细胞B．G1B态细胞C．G1期细胞D．G2期细胞E．G0期细胞3．在细胞周期中，哪一时期最适合研究染色体的形态结构。 A．间期B．前期C．中期D．后期E．末期 4．HeLa细胞周期中，G l和分裂期的时间分别为。 A．4小时和12小时B．6小时和8小时C．12小时和4小时 D．8小时和1．5小时E．1小时和1小时 5．细胞周期的顺序是。 A．M期、G l期、S期、G2期B．M期、G1期、G2期、S期 C．G l期、G2期、S期、M期D．G l期、S期、M期、G2期 E．G l期、S期、G2期、M期 6．一般讲，细胞周期各时相中持续时间最短的是。 A．G1期B．S期C．G2期D．G0期E．M期 7．有丝分裂与无丝分裂的主要区别在于后者。 A．不经过染色体的变化，无纺锤丝出现B．经过染色体的变化，有纺锤丝出现 C．遗传物质不能平均分配D．细胞核先分裂，核仁后分裂 E．细胞核和核仁同时分裂 8．关于有丝分裂后期染色体的行为，下列哪项叙述错误。 A．解螺旋成染色质B．着丝粒纵裂C．有染色单体形成 D．染色体向两极移动E．所含DNA数减半 9．细胞有丝分裂中期开始。 A．核膜消失B．染色体排列成赤道板C．核仁消失D．染色体形成 E．染色体复制 10．细胞增殖周期可分为。 A．G l期十S期B．G2期十M期C．S期十G2期D．G1十G2期E．以上都不是 11．细胞周期中，决定一个细胞是分化还是增殖的控制点（R点）位于。 A．G l期末B．G2期末 C ．M期末D．高尔基复合体期末E．S期 12．细胞分裂后期开始的标志是。 A．核仁消失B．核膜消失C．染色体排列成赤道板D．染色体复制 E．着丝粒区分裂，姐妹染色单体开始分离 13．细胞周期中，DNA合成是在。 A．G1期B．S期C．G2期D．M期E．G0期 14．有丝分裂中，染色质浓缩，核仁、核膜消失等事件发生在。 A．前期B．中期C．后期D．末期E．以上都不是 15．细胞周期中，对各种刺激最为敏感的时期是。 A．G0期B．G l期 C ．G2期D．S期E．M期 16．组蛋白的合成是在细胞周期的。 A．S期B．G l期 C ．G2期D．M期E．G0期

细胞生物学笔记-细胞周期

细胞增殖和细胞周期细胞增殖(cell proliferation) 增殖：细胞通过分裂的方式在空间上不断增加群体数量，在时间上通过遗传延续后代，使细胞在自然界中得以进化和发展，即：增加数量，延续后代。第一节、细胞分裂(cell division) 一、有丝分裂（M期）概念：细胞通过有丝分裂器（纺锤体）将遗传物质精确地等分到两个子细胞中去，以保证细胞在增殖过程中保持遗传稳定。 1、期进入分裂期，中心体一分为二，向两极移动，纺锤体形成。核膨大、核膜、核仁消失，染色体开始形成。 1）染色质凝集成染色体：即染色体变短、变粗，中间有着丝粒相连，外侧有动粒。 2）核膜破裂核仁消失：核内膜下的核纤层纤维Pr磷酸化，降低为可溶性核纤层PrA、B、C（A与C为同一编码基因的不同加工产物，故为一个类型即A，A型只存在于细胞分化中，对细胞向特异性分化起作用，B型则存在于所有体细胞）。核膜失去支撑，裂解成小泡的核膜与核纤层PrB相连，分散到细胞质中。同时由于染色体凝集，核仁中的DNA分别参加到染色体的组装，核仁RNA、Pr分散到细胞质中，核消失。 3）、纺锤体的形成：在分裂前期末出现一种纺锤样的细胞器，由星体微管、极间微管、动粒微管纵向排列组成。星体微管：在前期开始，细胞中的一对中心粒已复制为两对（中心粒具有微管组织中心的作用，即MTOC），每对中心粒周围出现放射状星体微管，由此构成两个星体，并位于核膜附近。极间微管：两对中心粒之间也有微管形成，这些微管由纺锤体的一极通向另一极，故称“极间微管”（也称重叠微管）。极间微管的特点：极间微管不连续，而是由来自两极的微管在纺锤体赤道面彼此重叠，侧面相连构成。粒微管：前期末，核膜破裂，纺锤体发出的微管进入核中，其A端附着在动粒上，即“动粒微管”。微管的作用与原理：星体微管，极间微管是通过远离中心粒的一端（A端）加入微管Pr聚体，使微管延长，从而推动中心粒移向细胞两极，而动粒微管则是靠近中心粒一端（D端）加入微管Pr二聚体来使微客延长。染色体在纺锤体微管的牵引下，剧烈旋转运动，逐渐移向细胞中央赤道面上。前期小结：染色质凝集成染色体；核膜破裂和核仁消失；纺缍体的形成 2、中期：染色体纵裂为二，即两条姐妹染色单体，并在着丝点处相连，此时染色体排列在细胞赤道面上。 3、后期：着丝粒一分为二，两条姐妹染色单体分开，并向细胞两极迁移。 4、末期：染色全解螺旋，变为染色质。分散在胞质中的核膜小泡在核纤层PrB的聚合作用下，开始向染色体表面集聚，每条染色体周围的小泡重新聚合在一起形成新的核膜。由于染色体解聚核仁组织者（DNA）开始形成新的核仁。胞质分裂：在细胞赤道面形成环形胞质分裂沟，并不断加深，最后完全断开，分裂成两个子细胞。有丝分裂的机制： 1、纺锤体是染色体分离和移动的主要动因，染色体移动取决纺锤体产生的四种作用力。 1）极间微管区域在动力Pr（微管Pr）的作用下，互相滑动对两极星体产生推动。 2）动粒微管（+）末端方向的组装和去组装，对染色体动粒产生拉力。 3）星体微管与细胞膜之间互相作用，使星体稳定在细胞的两极的作用力。 4）两条姐妹染色单体在着丝粒处和臂间的染色体粘着Pr形成的粘着力。极间微管的拉力与着丝粒处染色体粘着Pr 的粘着力处于平衡状态使染色体稳定在赤道面上。 2、姐妹染色体分离染色体粘着Pr在染色体凝集和分离中起重要作：粘着Pr的两端与DNA相连， Pr分子变构可使DNA 螺旋化，如果S期不能合成粘着蛋白，M期染色体的凝集就不能完成，染色体就不能分开。 3、动粒与微管的连接处是染色体向两极移动的作用点：主要是驱动蛋白、动力Pr以及动力微管，动力微管的（+）末端组装和去组装，可牵动单体向细胞赤道面或两极运动。染色体在分裂后期向两极的运动主要是动粒微管的动粒端部（+）去组装的结果。动粒微管在染色体运动中，本身不能提供动力，但可作为转道，动力微管上的驱动蛋、动力Pr起作用。驱动Pr→“+”末端动力Pr →“-”末端 4、微管动力Pr是染色体运动的动力细胞内的微管依功能分为间期微管和动力微管。纺锤体微管主要是动力微管，这种微管的组装、去组装有一定的极性和方向，组装快的为（+）末端，慢的为（-）末端。

细胞分裂增殖过程各时期的特点及示意图

细胞增殖 Ⅰ 有丝分裂一、细胞周期及各时期特征细胞周期是指连续分裂的细胞，从一次分裂完成时开始，到下一次分裂完成时为止。一个细胞周期分为细胞分裂间期和细胞分裂期两个时期，分裂期又人为地分为前期、中期、后期和末期。细胞分裂各时期的主要特征见下表。二、动植物细胞有丝分裂的比较动物细胞的有丝分裂与植物细胞的有丝分裂相比较有相同的地方，也有不同的地方。相同的地方表现在动植物细胞有丝分裂的实质是一样的，但由于动物细胞与植物细胞在结构上的差异，所以动植物细胞在有丝分裂的形式上有所不同。具体见表：三、细胞分裂与生物体生长、发育、繁殖、遗传和变异的关系 1、通过细胞分裂能使单细胞生物直接繁殖新个体，使多细胞生物由受精卵发育成新个体，也能使多细胞生物衰老、死亡的细胞及时得到补充。通过细胞分裂，可以将亲代细胞复制的遗传物质，平均分配到两个子细胞中去。因此，细胞分裂是生物体生长、发育和繁殖的基础。 2、有丝分裂是真核生物进行细胞分裂的主要方式，多细胞生物体以有丝分裂方式增加体细胞数目。有丝分裂过程中，在分裂间期，亲代细胞染色体经过复制，经过分裂期一系列变化，精确地平均分配到两个子细胞中去。由于染色体上有遗传物质（DNA 、基因），因而在生物的亲代和子代之间保持了遗传性状的稳定性，对于生物的遗传有重要意义。 3、细胞分裂间期，DNA 复制时，由于生物内部因素或外界环境条件的作用，使染色体

上的基因的分子结构发生差错，而导致基因突变，从而导致子代（或子代细胞）发生变异。减数分裂中，同源染色体的交叉和交换、非同源染色体的自由组合、在细胞水平上导致遗传物质的重组，使亲代产生多种类型的配子，从而使后代具有更大的变异性和更强的生活力及适应性。有丝分裂过程中，正常情况下，复制后的染色体平均分配到子细胞中去，但一些外界条件或因素（如秋水仙素），能抑制纺锤体的形成，使细胞有丝分裂过程受阻，结果细胞核中染色体数目加倍，形成多倍体生物，导致生物变异。因此，细胞分裂与生物变异密切相关。 4、细胞有丝分裂中期，细胞中染色体的形态固定、数目清晰，是观察和辨认细胞中染色体形态和数目的最佳时期。而染色体的形态、数目对于鉴别生物种类、了解生物之间的进化关系，以及研究生物的遗传、变异都是不可缺少的基础。 Ⅱ无丝分裂无丝分裂：分裂过程是先细胞核延长，从核的中部向内凹进，缢裂成为2个细胞核，整个细胞从中部缢裂成两部分，形成2个子细胞。在整个分裂过程中没有出现纺锤体和染色体的变化。这种分裂方式常出现于高度分化成熟的组织中，如蛙的红细胞的分裂，在某些植物的胚乳中胚乳细胞的分裂等。无丝分裂在高等生物中主要是高度分化的细胞，如人的肝细胞、肾小管上皮细胞、肾上腺皮质细胞等，蚕的睾丸上皮细胞，植物的表皮、生长点和胚乳等细胞中都曾见到过无丝分裂现象。蛙（两栖类）的红细胞是进行无丝分裂，但不能依次类推，人的红细胞也是无丝分裂。哺乳动物成熟的红细胞已永久失去分裂的能力，哺乳动物的红细胞是通过骨髓中造血干细胞分裂产生的细胞，再分化发育而来的（由造血干细胞依次分化为原始红细胞、幼红细胞、网织红细胞，最后形成为成熟红细胞）。 Ⅲ减数分裂一、有性生殖细胞的形成过程第一次分裂第二次分裂

细胞生物学第十三至十七章作业答案

第十三章细胞增殖及其调控 1 什么是细胞周期？简述细胞周期各时相及其主要事件。答：细胞周期: 是指连续分裂的细胞从一次有丝分裂结束后开始生长到下次有丝分裂终止所经历的全过程。细胞周期各时相的生化事件： ①G1期：DNA合成启动相关，开始合成细胞生长所需要的多种蛋白质、RNA、碳水化合物、脂等，但不合成DNA； ②S期: 开始合成DNA和组蛋白；在真核细胞中新和成的DNA立即与组蛋白结合，组成核小体串珠结构； ③G2期:主要大量合成ATP、RNA和蛋白质，包括微管蛋白和成熟促进因子等； ④M期: 为细胞分裂期，一般包括前期，中期，后期，末期4个时期。 2 细胞通过什么机制将染色体排列到赤道板上？有何生物学意义？答：细胞将染色体排列到赤道板上的机制可以归纳为牵拉假说和外推假说。 ①牵拉假说：染色体向赤道面方向运动，是由于动粒微管牵拉的结果。动力微管越长，拉力越大，当来自两级的动粒微管拉力相等时，即着丝粒微管形成的张力处于动态平衡时，染色体即被稳定在赤道面上； ②外推假说：染色体向赤道方向移动，是由于星体的排斥力将染色体外推的结果。染色体距离中心体越近，星体对染色体的外推力越强，当来自两极的推力达到平衡时，推力驱动染色体移到并稳定在赤道板上。染色体排列到赤道板上具有重要的生物学意义，染色体排列到赤道板后，Mad2和Bub1消失，才能启动细胞分裂后期，并为染色体成功分开并且平均分配向两极移动做准备。 3 细胞周期有哪些主要检验点？各起何作用？答：细胞周期有以下主要检验点： ①G1/S期检验点：检验DNA是否损伤、能否启动DNA的复制，作用是仿制DNA损伤或是突变的细胞进入S期； ②S期检验点：检验DNA复制是否完毕，DNA复制完毕才能进入G2期； ③G2/M期检验点：DNA是否损伤、能否开始分裂、细胞是否长到合适大小、环境是否利于细胞分裂，作用是使得细胞有充足的时间将损伤的DNA得以修复； ④中-后期检验点：纺锤体组装的检验，作用是抑制着丝点没有正确连接到纺锤体上的染色体，确保纺锤体正确组装。 4、细胞周期时间是如何测定的? 答：测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，其中标记有丝分裂百分率法是常用的一种测定方法。标记有丝分裂百分率法的原理是对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂百分数的办法来测定细胞周期。实验中常用的方法是BrdU渗入测定细胞周期的方法。BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU 的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计算分裂相中各期比例，可算出细胞周期的值。 5、细胞周期同步化有哪些方法? 比较其优缺点? 答：①自然同步化：自然界存在的细胞周期同步化过程。 ②人工同步化包括人工选择同步化和人工诱导同步化两种方法，比较如下：