FC500 MCL 流式细胞分析仪参数验证

FC500 MCL 流式细胞分析仪仪器性能参数验证报告书

仪器序列号：AV24279

检测日期：2017年9月14日

目录

一、仪器硬件的配置 (3)

二、仪器性能的检测 (4)

1. 荧光灵敏度的检测 (4)

2. 荧光线性的检测 (5)

3. 前向角散射光检测灵敏度 (6)

4. 仪器分辨率 (7)

5. 前向角散射光和侧向角散射光分辨率 (8)

6. 倍体分析线性 (9)

7. 携带污染率 (11)

8. 仪器稳定性 (12)

一、仪器硬件的配置

本仪器具备如下配置：

1 具备Cyonics 氩离子空冷激光25mW,@488nm。

2 具有5个光电倍增管,前向及侧向散射光检测器，可以检测5色荧光。

3 进样器MCL。

4 提供1套CXP数据采集、分析软件。

5 提供1台流式细胞仪工作中心，1台HP彩色喷墨打印机，1台19"LCD 显示器。

具体详见装箱单。

二、仪器性能的检测

1. 荧光灵敏度的检测

试剂名称：Sperotech 公司Rainbow Calibration Particles (6 peaks)

方法：在装有1ml鞘液的试管中加入适量的标准微球，充分混匀后上机检测，可对电压设置值进行调节，确保所有的峰值都可以在直方图上识别和分布。对试验结果进行直方图分析，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微球说明书提供的各个峰的等量可溶性荧光分子（MESF）数，以及分析得到的各个峰的平均荧光强度，按照随试剂附带的标准软件进行统计计算。

判定标准：FITC< 200 MESF

检测结果：检测结果详见下表，计算所得FITC MESF=109, < 200 MESF,仪器荧光灵敏度良好，符合要求。

2. 荧光线性的检测

试剂名称：Sperotech 公司Rainbow Calibration Particles (6 peaks)

方法：在装有1ml鞘液的试管中加入适量的标准微球，充分混匀后上机检测，流式细胞仪运用直方图对检测结果进行分析，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微球说明书提供的各个峰的等量可溶性荧光分子（MESF）数，以及分析得到的各个峰的平均荧光强度，以MEFL 数（y）和平均荧光强度（x）的线性回归，计算相关系数（r）。

判定标准：r≥0.98

检测结果：检测结果详见下表，计算所得r=1.00, ≥0.98, 仪器荧光线性良好，符合要求。

3. 前向角散射光检测灵敏度

方法：在装有1ml鞘液的试管中加入适量直径为1.0um的标准微球，充分混匀后上机进行检测，检查直方图上显示的峰值信号，及显示峰值信号的标准微球直径。

判定标准：前向角散射光检测灵敏度应不大于1um直径

检测结果：FS能分辨出1.0标准微球，仪器前向角散射光检测灵敏度，符合要求。

4. 仪器分辨率

试剂名称：Flow check荧光微球

方法：在装有1ml鞘液的试管中加入flow check荧光微球，充分混匀后上机进行检测。重复测试10次，利用直方图分析试验结果。

判定标准：FS、FL1-FL4 HPCV≤2%;FL5≤3%

检测结果：各通道的HPCV值见下表，FS、FL1-FL4 HPCV≤2%;FL5≤3%，符合要求。

5.前向角散射光和侧向角散射光分辨率

方法1：取100ulEDTA抗凝全血，溶解红细胞后上机检测，检查前向角散射光和侧向角散射光点图是否可以将白细胞三群分开。

判定标准：应可以将外周血白细胞（淋巴细胞，单核细胞，粒细胞）三群分开。

检测结果：分析结果见下图，可将外周血白细胞（淋巴细胞，单核细胞，粒细胞）三群分开，仪器前向角散射光和侧向角散射光分辨率良好，符合要求。

方法2：在装有1ml鞘液的试管中加入5ul EDTA抗凝全血，混匀后，上机检测，检查前向角散射光和侧向角散射光点图是否可以将血小板和红细胞分开。

判定标准：应可以将外周血中红细胞和血小板分开。

检测结果：分析结果见下图，可将外周血中红细胞和血小板分开，仪器前向角散射光和侧向角散射光分辨率良好，符合要求。

6. 倍体分析线性

试剂名称：PI

方法：使用经过荧光染色的标准细胞株或标准细胞核，上机检测G0/G1期及G2/M期的平均荧光强度，计算两个平均荧光强度的比值。

判定标准：比值应在1.95-2.05范围内。

检测结果：分析数据如下图所示，两个荧光强度的比值等于1.99，在1.95-2.05范围内，仪器倍体分析线性符合要求。

7. 携带污染率

方法：先使用单细胞悬液上机进行测试，连续测试3次，计算标定区域的颗粒数，分别记为H1-1,H1-2,H1-3,进行一次样品管反冲循环后，再进行空白数量测试，连续测试3次，计算标定区域的颗粒数，分别记为L1-1,L1-2,L1-3,;按此程序循环3次，再按照以下公式计算携带污染率（Ci），取最大值。

Ci=（L i-1-L i-3）/ （H i-3-L i-3）*100%

判定标准：Ci≤1%

检测结果：3次检测的携带污染率结果分别为0.0%、0.0%和0.0%，仪器携带污染率取最大值0.0%≤1%，符合要求。

8.仪器稳定性

试剂名称：flow check荧光微球

方法：将周围环境温度控制在允许范围内，取一支试管加入1ml flow check荧光微球，充分混匀后上机进行检测，测试完成后，利用直方图分析实验结果，计算标准微球的平均荧光强度值（F1）,连续开机8h后，在相同的流式细胞仪设置和荧光道数的条件下重复前述实验步骤，得到标准微球的平均荧光强度值（F2）,按照以下公式计算F1,F2的偏差值（B）

B=(F1-F2)/F1*100%

判定标准：偏差<10%

检测结果：检测结果详见下表，仪器各通道平均荧光强度值偏差均<10%，仪器稳定性符合要求。