高中生物选修1基础填空清单(含答案)专题二

选修１《生物技术实践》知识清单

微生物的实验室培养

1、培养基

（1）培养基按照物理性质主要分为（主要用于工业生产）和

（主要用于菌种的分离、计数、鉴别）。只有培养基表面可以形成“菌落”。菌落的概念是，不同菌落的不同，因此，菌落是的重要依据。（2）按照培养基的功能，可将培养基分为培养基和培养基。

（3）培养基的化学成分一般包括等，除此之外，还需要满足微生物对、和的需求。例如，培养乳酸杆菌时需要添加的特殊营养物质是。牛肉膏能为微生物提供的主要营养是

，蛋白胨能为微生物提供的主要营养

是。

2、无菌技术

（1）获得纯净培养物的关键是，要注意以下几个方面：

?

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和（消毒/灭菌）。

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行（消毒/灭菌）。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在进行。

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品。

（2）消毒与灭菌的区别

①消毒指使用方法杀死（全部/部分）微生物。消毒方法常用、、、。对于牛奶的消毒，应使用法，该方法的优点是

；对于接种室或工作台，可以用消毒，在此之前，可适量喷洒来加强消毒效果。

②灭菌指使用因素杀死（全部/部分）微生物，包括和。灭菌方法

有、、。

（3）常用器具的灭菌消毒方法：

|

①接种环、接种针和其他金属用具使用灭菌法；

②玻璃器皿、金属用具等可使用灭菌法，所用器械是；

③培养基使用法，所用器械是。

④杀死物体表面和空气中的微生物可使用消毒法。

3．制作牛肉膏蛋白胨固体培养基

（1）方法步骤：。

（2）思考讨论：

①“溶化”步骤中，加热熔化琼脂时需要不断用玻璃棒搅拌，搅拌目的是什么

答：。

②平板冷凝后，为什么要将平板倒置

·

答：。

③拓展：培养细菌时，需要将平板倒置于恒温培养箱中培养，为什么

答：。

4、纯化大肠杆菌（纯化的目的：获得单菌落）

（1）能获得单菌落的接种方法是。（2）“稀释涂布平板法”包括操作和板操作两步。（3）平板划线法和稀释涂布平板法接种的共性：

。（4）平板划线操作灼烧的目的:

①首次划线前灼烧接种环的目的是：。

@

②第二次及以后划线前灼烧接种环的目的是：

。

③划线结束后灼烧接种环的目的是：。

④第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的原因是：

。

（5）平板划线法获得的菌落分布，（能/不能）计数；稀释涂布平板法获得的菌落分布，（能/不能）计数。

5、菌种的保存

（1）临时保存：将菌种接种到上，待后放在℃冰箱中保藏。这种保存方法的缺点

是。该方法用于

的菌种的保存。

。

（2）长期保存：可采用法，在℃冷冻箱中保存。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、菌种的分离

1、寻找目的菌株

~

①方法：寻找目的菌株时，要根据目的菌株对的要求，到去寻找。

②实例：若要寻找“尿素分解菌”，应在的土壤中去寻找；若要寻找“纤维素分解菌”，应在的环境中去寻找；若要寻找“石油分解菌”，应在的环境中去寻找。

2、筛选出“尿素分解菌”

①选择性培养基：是指培养基。

②筛选“尿素分解菌”的选择培养基的特点是。

二、细菌的计数

（一）统计菌落的数目（间接计数法）

1、方法：。

2、原理：当样品的稀释度时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的1

个活菌，通过统计平板上的数，就能推测出样品中大约有多少活菌。（为保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。）

3、【问题探讨】

【

请根据所学知识回答以下问题

有2位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数．在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下2种统计结果：甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；乙同学在该浓度下涂布了3个平板统计的菌落数分别为21、212、256，并且取平均值163作为统计结果；请评价这两位同学的实验结果的有效性

①甲同学操作（合理/不合理），原因是；

②乙同学的结果（合理/不合理），原因是；

③正确做法是：在设计实验时，一定要涂布个平板作为重复组，才能减小实验误差并增强实验的说服力与准确性．在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否相当，结果差距太大，意味着，需要。

4、稀释涂布平板法的计数公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）× M

其中，C代表某一稀释度下平板上生长的，V代表

，M代表。

【例题】（14全国卷节选）某研究小组为测定某河流水样中的细菌含量，将1ml水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接种稀释液，培养后在3个平板上的菌落数分别是39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为个。

5、方法评价：

稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目，这是因为：

。

（二）统计细菌的数目（直接计数法）

1、方法：。

2、计数工具：。

】

3、计算公式：1ml培养液中酵母菌数= 大方格总菌数÷大方格总体积×稀释倍数

4、方法评价：显微镜计数法统计的细菌数往往比活菌的实际数目，这是因为：

。

三、设置对照

1、设置对照的目的：主要是排除对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

2、微生物培养的常用对照设置方法：

①判断培养基是否被污染的对照设置方法：将接种后的培养基与1个放在相同且适宜条件下培养，观察对照组的培养基上是否有菌落生长。

②判断选择培养基是否具有选择作用的对照设置方法：将同一土壤样品分别接种在

培养基和选择培养基上，然后在相同且适宜条件下培养，观察比较二者的菌落数目。

四、实验流程

|

1、土壤取样→富含有机质的土壤

↓

2、样品的稀释→常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在之间、

↓计数的平板

3、接种→采用法接种

↓①细菌：℃培养天；

4、培养→②放线菌：℃培养天；

↓③霉菌：℃培养天；

5、观察→根据菌落特征区分微生物，这些特征包括菌落的。

↓

6、】

7、统计→每隔小时统计一次菌落数，选取的记录作为结果，

↓这样可以防止而导致。

7、计算→稀释涂布平板法的计数公式：每克样品中的菌株数= 。

五、菌种鉴定

1、尿素分解菌的鉴定：

为鉴定分离的细菌是否具有分解尿素的能力，可以在培养基中加入，若该细菌具有分解尿素的能力，则将导致培养基PH值，菌落周围出现，这是因为细菌合成的将尿素分解成，使培养液性增强；菌落周围的环带越大，说明。

2、大肠杆菌的鉴定：

鉴定大肠杆菌可在培养基中加入，如果培养基上菌落呈现

色，则说明该菌落为大肠杆菌的菌落。

分解纤维素的微生物的分离

一、纤维素与纤维素酶

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1、纤维素：一种由首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。

2、纤维素酶：

①是一种复合酶，包括。

②作用：“C1酶和C X酶”能将分解成，“葡萄糖苷酶”将分解成。

二、纤维素分解菌的筛选

1、筛选方法：。能够通过反应直接对微生物进行筛选。

2、筛选原理：染料可以与纤维素、淀粉等多糖形成，但该染料并不和发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后，培养基中会出现的现象。

三、分离“分解纤维素的微生物”的实验流程

1、步骤：土壤取样→选择培养→→将样品涂布到

的培养基上→挑选的菌落。

~

2、土壤取样：选择的环境采取土样。

3、选择培养的目的

是，此步是否需要，应根据来确定。

4、刚果红染色法种类：

●方法一：先，再加入刚果红进行颜色反应。缺点是操作，加入刚果红溶液会；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是的作用。NaCl溶液的作用：培养基不含CR，用NaCl 溶液可以，这样就会留下大大小小的透明圈。

●方法二：在。优点是操作，不存在

现象。缺点：①淀粉类物质，可以使能够产生酶的微生物出现反应；

②有些微生物具有能力，长时间培养会而形成透明圈，与纤维素分解菌不容易区分。

四、课题延伸

为确定初步筛选得到的是“纤维素分解菌”，还需要进行的实验。纤维素酶发酵的方法有发酵和发酵两种；纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的进行定量测定。

￥

微生物的实验室培养

1、（1）液体培养基固体培养基固体培养基形状、大小、颜色和隆起程度

菌种鉴定（2）选择鉴别（3）水、无机盐、碳源、氮源PH 特殊营养物质O2 维生素碳源、氮源、磷酸盐和维生素碳源、氮源、维生素

2、（1）防止外来杂菌入侵消毒灭菌酒精灯火沿附近相接触

（2）较为温和的物理或化学部分煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒、紫外线消毒巴氏消毒法既可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶中的营养成分不被破坏紫外线石碳酸或煤酚皂溶液强烈的物理因素全部芽孢孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌（3）灼烧干热干热灭菌箱高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌锅紫外线

3、（1）计算、称量、溶化、调PH、分装、灭菌、倒平板（2）防止琼脂糊底而导致烧杯破裂防止皿盖上水珠落入培养基造成污染、也可避免培养基中水分过快挥发防止水分过快挥发、防止皿盖上水珠落入培养基影响微生物生长而难以形成单菌落、防止杂菌污染

4、（1）平板划线法和稀释涂布平板法（2）系列稀释涂布平板（3）使聚集在一起的细菌分布成单个

细胞，以便于纯化菌种（4）杀死菌种环上可能存在的杂菌杀死上次划线结束后，接种环上存在的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，通过划线次数的增加，使每次划线时菌种数目逐渐减少，以便获得单个细胞避免细菌污染环境和感染操作者④线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从末端开始划线，能逐步稀释细菌，最终能得到由单个细胞形成的单菌落

（5）不均匀不能均匀能

5、（1）试管的固体斜面培养基菌落形成 4 保存时间不长，菌种容易污染或产生变异频繁使用（2）甘油管藏-20

？

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

一、菌种的分离

1、生存环境相对应环境中富含尿素富含纤维素被石油污染

2、允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的以尿素为唯一碳源

二、细菌的计数

(一)统计菌落的数目（间接计数法法）

1、稀释涂布平板法

2、足够高菌落数30-300

3、不合理没有设置重复实验，结果不具有

不合理一个计数结果与另外两个相差较大

至少3 操作有误重新实验

[

4、平均菌落数涂布平板时所用的稀释液的体积稀释倍数×107

5、低当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

（二）统计细菌的数目（直接计数法）

1、显微镜计数法

2、血细胞计数板

3、多显微镜下无法区分细菌的死活。

三、设置对照

1、实验组中非测试因素

2、未接种的培养基牛肉膏蛋白胨固体

四、试验流程

1、表层

2、30-300

3、稀释涂布平板法

4、30-37 1-2 25-28 5-7 25-28 3-4

5、性状、大小、颜色、隆起程度

6、24 菌落数目稳定时因培养时间不足遗漏菌落数目

7、C/V×M

$

五、菌种鉴定

1、酚红指示剂升高红色环带脲酶氨碱细菌分解尿素的能力越强

2、伊红美蓝黑

分解纤维素的微生物的分离

一、纤维素与纤维素酶

1、葡萄糖

2、C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶纤维素纤维二糖纤维二糖葡萄糖

二、纤维素分解菌的筛选

1、刚果红染色法颜色

2、刚果红（CR）红色复合物纤维二糖和葡萄糖以纤维素分解菌为中心的透明圈

三、分离“分解纤维素的微生物”的实验流程

1、梯度稀释鉴别纤维素分解菌产生透明圈

2、纤维素丰富

3、增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物

样品中所需微生物的数量多少

4、培养微生物繁琐是菌落之间发生混杂纤维素分解菌将结合不牢固的CR洗去

倒平板简便菌落混杂淀粉假阳性降解色素降解刚果红

四、发酵产纤维素酶液体固体葡萄糖