结核分枝杆菌抗体检测 (胶体金法) 规程操作

结核分枝杆菌抗体检测(胶体金法) 规程操作

1、检验目的

本试剂盒可定性检测人血清中结构分枝杆菌抗体，用于临床结构病的辅助诊断。

2、检验原理

本试剂盒利用斑点免疫胶体金渗滤技术（DIGFA），将结核分枝杆菌特异性膜蛋白抗原分离纯化，点样并固化在硝酸纤维素膜上，膜上TB抗原捕获人血清样品中结核分枝杆菌抗体，被捕获的结核IgG 抗体可用葡萄球菌A蛋白（SPA）胶体金缀合物标呈色（SPA能与IgG 特异性结合），形成红色斑点，根据是否出现红色斑点即可判断阴、阳结果从而判断是否存在结核分枝杆菌抗体。

3、样本要求

必须使用新鲜血清标本，血浆标本必须用玻璃棒剥离纤维蛋白，保证血清无混浊沉淀。

4、试剂

4.1试剂名称：结核分枝杆菌抗体诊断试剂盒（胶体金法）

4.2生产厂家：上海奥普生物医药有限公司

4.3包装规格：20人份/盒

4.4贮存条件及有效期：2-8℃干燥处保存，有效期12个月。

5、检验方法：

5.1在反应板的反应孔中间，加入2滴封闭液，等待薄膜吸入；5.2 取40μl新鲜的血清标本，加入反应孔中间，等待薄膜吸入；

5.3 在反应孔中间加入6滴洗活液，等待薄膜吸入；

5.4 在反应孔中间加入2滴金标液，等待薄膜吸入；

5.4 在反应孔中间加入6滴洗涤液，等待薄膜吸收，目测结果；

6、结果判断

6.1 阳性——质控点显示红色，反应孔中间有红色斑点出现。

6.2 阴性——质控点显示红色，反应孔中间无红色斑点出现或仅为痕迹。

检验方法的局限性

少数标本（急性感染、高血脂、溶血等）可出现背景偏红，一般不影响结果判断，可通过将标本用封闭液1:3稀释，加样80μl背景将获得改善。严重乳糜血标本可能会阻塞硝酸纤维素膜孔，使背景很红，影响中间红色斑点有无的判别，不宜用本法测定。

7、注意事项

7.1 必须以单人份操作，严禁多标本同时检测，每个标本的操作步骤需要连续进行，不宜停顿过长。

7.2 质控点显示红色表明试剂盒有效；阴、阳性对照也是确保定性结果可靠的一个环节，但临床阳性标本显色深浅可以与阳性对照不同。

7.3 血清、包括健康人血清属潜在生物危害物质，操作者应戴手套，测试后凡接触血清的物品应消毒后再丢弃。

快速革兰氏染色液操作规程

1、检验目的

主要作于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。

2、检验原理

改良后的革兰氏染液不含对人体有害的石炭酸，碘液稳定无升华现象，保存时间长，且染色无沉淀，背景清晰，阴阳结果明显，染色结果将细菌分为革兰氏阳性（紫色）或革兰氏阴性（红色）两类。3、试剂

3.1试剂名称：快速革兰氏染色液

4.2生产厂家：温州市康泰生物科技有限公司

4.3试剂组成：

R1：结晶紫染液50ml 20ml 250ml 100ml 20ml

R2：革兰氏碘液50ml 20ml 250ml 100ml 20ml

R3：脱色液100ml 40ml 250ml 100ml 20ml

R4：复染液50ml 20ml 250ml 100ml 20ml

4.3包装规格：4×100ml 4×250ml 4×20ml

4.4储存条件及有效期：10℃-30℃储存有效期三年。

5、操作步骤：

5.1 做一薄涂片，干燥后火焰固定

5.2 滴加1液，夏天染1分钟、冬天染2分钟、清水冲去染液5.3 滴加2液，作用1-2分钟，水洗，并倒掉多余的水分。

5.4 加3液脱色，不时摇动（约左右摇动10—15次），至无紫色脱落为止，水洗。

5.5 加4液复染，10秒内水冲洗

5.6 吸干或在空气中干后，置油镜下观察。

6、结果判定

革兰氏阳性菌呈紫色

革兰氏阴性菌呈红色

7、注意事项

7.1 结晶紫染液色时间不能太短，否则易出现假阴性或阴阳性

7.2 脱色液脱色时间不能太长，否则易出现假阴性或阴阳性

7.3 复染液复染时间不能长，否则易出假阴性或阴阳性

肥达氏反应操作规程

1、检验目的

供肥达氏（Widal）或外斐氏(Weil-Felix)反应用。

2、检验原理

本品系用甲醛溶液灭活的伤寒、副伤寒及变形菌分别制成，通过凝集试验原理供肥达氏（Widal）或外斐氏(Weil-Felix)反应用。

3、试剂

3.1试剂名称：伤寒、副伤寒及变形菌OX19、OX2、OXK诊断菌液

3.2生产厂家：宁波天润生物药业有限公司

3.3试剂组成：伤寒、副伤寒及变形菌OX19、OX2、OXK诊断菌液8种（10ml/瓶×8瓶，7.0×109/ml）。

伤寒O901、伤寒H901、甲型副伤寒、乙型副伤寒、丙型副伤寒、变形菌OX19、变形菌OX2、变形菌OXK诊断菌液。各1瓶。

3.4包装规格：10ml×5瓶

3.5储存条件及有效期：2℃-8℃避光保存，储存有效期18个月。

4、标本要求

疑似伤寒、副伤寒、斑疹伤寒病人的血清。

5、操作方法：

以生理氯化钠溶液10倍稀释后成含菌7.0×108/ml的悬液。将待检血清稀释成1：10，1：20，…，1：1280（每管0.5ml），然后逐管分

别加入稀释菌液各0.5ml，最后血清血清稀释度为1：20，1：40，…，1：2560，充分振荡使其混匀，于35-37℃放置16-20小时判定结果。

6、结果判定

阴性对照管应无凝集（试验管底部分一沉淀点或呈均匀浑浊液）以能清晰见到凝集反应（+）的最高稀释度为凝集效价

根据凝集反应的强弱或有无，分别以＋＋＋＋、＋＋＋、＋＋、＋、±、－记录。

7、该试验方法的局限性

需结合临床症状作出诊断。

抗酸染色（萋纳法）操作规程

1、检验目的

本试剂盒用于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。

2、检验原理

抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本的厚度，以提高检出率。染厚涂片时须掌握复染色时间。如果背景过深，影响镜检。奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌阳性，有些菌阴性，有时间一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予以注意。

3、试剂

3.1试剂名称：抗酸染色液

3.2生产厂家：温州市康泰生物科技有限公司

3.3试剂组成：

R1：石炭酸复红染液20ml 250ml 100ml 20ml

R2：脱色液40ml 250ml 100ml 20ml

R3：复染液20ml 250ml 100ml 20ml

3.4包装规格：3×250ml、3×100ml、3×20ml

3.5储存条件及有效期：10℃-30℃储存有效期三年。

4、操作方法：

4.1 做一适当厚度的涂片，干燥后火焰固定

4.2 取一小于玻片的滤纸覆于其上。

4.3 加满石炭酸复红染液于玻片上，在酒精灯上加热至冒蒸气，但切勿热至沸腾或烧干。

4.4 移开火，静置5分钟，拿掉滤纸，以自来水冲洗

4.5 一边摇动一边用脱色液脱色（大约1分钟），且不再有染色液浮出为止，完全脱色可避免产生假阳性结果

4.6 自来水冲洗后，滴加复杂注复染20-30秒，水洗。

4.7 干后油镜观察

6、结果判定

分枝菌呈红色，背景为蓝色

支原体（Uu/Mh）分离培养药敏试剂盒操作规程

1、检验目的

适用于临床解脲支原体和人型支原体的分离培养及药物敏感性试验。

2、检验原理

本试剂盒适用于解脲以原体和人型支原原体的分离培养及药物敏感性试验。试剂盒主要由支原体培养基和检测卡组成，培养基中含有支原体基础肉汤、马血清、酵母提取液、酚红指示剂、混合抗生素、生长因子、尿素和精氨酸等物质，当Uu和Mh生长时，尿素和精氨酸分解生成的碱性物质引起p上值上升，培养基由黄色变成红色。培养基内加有抑菌剂，可抑制生殖道中的细菌和真菌的生长。

3、试剂

3.1试剂名称：支原体（Uu/Mh）分离培养药敏试剂盒

3.2生产厂家：珠海迪尔生物工程有限公司

3.3试剂组成：

支原体培养基本功20瓶

检测卡20条

无菌矿物油12ml*4瓶

每各式培养基的主要成份：基础粉25.5g、马血清200ml、酵母粉4g、4g/L酚红4ml、混合抗生素1.5ml、尿素5g和精氨酸5g 4、标本要求：

必需在用药前采集标本，支原体对细胞表面有很强的亲和力，应尽可能多收集细胞，标本采集后应尽快接种，不可在室温或普通冰箱久存，以免拭子干燥而使支原体活力降低甚至死亡。

男性：用男性无菌拭子由前尿道1~2cm处取尿液分泌物，根据病情需要，也可取前列腺按摩液、精液。

女性：采集宫颈分泌物，村本采集时应先擦去宫颈口多余粘液，再用另一支拭子在宫颈管内1~2cm处取宫颈分泌物。取材时要在宫颈内旋转并至少停留20秒，以便获得较多的细胞。

如果必须用尿液做支原体培养，可留取清晨中段尿10~20ml，高速离心后，取沉淀物接种，但尿液支原体培养的阳笥率明显低于尿道（或宫颈）分泌物。

5、操作方法：

本试验应注意无菌操作，避免污染。

1、用无菌吸头吸取培养基100μl加入检测卡C-空白孔。

2、将采集的标本拭子插入培养瓶，在靠近液面上方的瓶壁挤压旋转拭子数次，使拭子中样本渗入；若为精液、前列腺液标本，取200μl 加入培养基中；若为中段尿，经2000转/分离心10分钟，取沉渣100μl 加入培养基中。

3、充分混匀接种标本中的培养基，取100μl加入检测卡的各孔中（除C-孔）。

4、各孔滴加2滴无菌矿物油，盖上检测卡盖，置35℃~37℃孵箱培养，在24h和48h分别观察结果。

6、结果判定

1、阴阳性结果判定标准：黄色或橙黄色→阴性（-）；清晰透明红色→阳性（+）；混浊红色→污染。

2、 C-孔（空白孔）应为阴性，若为阳性表示有污染，本次试验无效。

3、 C+孔（对照孔）阴性（48h），可报告无Uu和Mh生长。

4、 C+孔（对照孔）阳性，应观察和记录其余各孔的结果，按下判读：