微量加样器的质控-检验科免疫室作业指导书

微量加样器的质控

微量加样器是微量酶免疫测定中加样时必用的设备，其使用和校准对酶免疫测定结果有直接的影响，以下对如何正确地使用微量加样器及其校准等进行介绍：

1.加样器的使用

1.1吸液标准吸液步骤如下：

1.1.1把按钮压至第一停点；

1.1.2垂直握持加样器，使吸头浸入液样中，浸入液体深度视型号而定（见附表）

不同加样器允许浸入液体深度

加样器型号浸入液体深度

P2和P10 ≤1mm

P20和P100 2-3mm

P200和P1000 2-4mm

P5000 3-6mm

P10ML 5-7mm

1.1.3缓慢、平稳地松开按钮，吸液样。等一秒钟，然后将吸头提离液面。用药用吸纸抹去吸嘴外面可能附着的液滴，小心勿触及吸头口。

1.2.放液

1.2.1将吸头口贴到容器内壁并保持10°-40°倾斜

1.2.2平稳地把按钮压到第一停点。第一秒钟后再把按钮压至第二停点以排除剩余液体。

1.2.3压住按钮，同时提起加样器，使吸头贴容器壁察过。

1.2.4松开按钮。

1.2.5按吸头弹射器除去吸头（只有改用不同液体时才需要更换吸头）。

1.3.预洗当装上一个新吸头（或改变吸取的容量值）时应预洗吸头，先吸入一次液样并将之排回原容器中。预洗新吸头能有效提高移液的精确度和重现性。这是因为第一次吸取的液体会在吸头内壁形成液膜，导致计量误差。而同一吸头在连续操作时液膜相对保持不变，故第二次吸液时误差即可消除。

1.4.致密及粘稠液体的吸取对于密度高于水的液体，可将容量计的读数调到低于所需值来进行补偿。例如：用P20移液器转移10μl血清。先将读数调到10μl，吸取后以重量法测定。如实测体积为9.5μl，即偏差0.5μl并重复一次。如第二次测定仍不够准确，根据偏差再作调整。排放致密或粘稠液体时，宜在第一停点多等一二秒钟再压到第二停点。

1.5.加样器吸头加样器吸头是整个移液系统的有机组成部分，对其基本要求是，必须有高机械、热力学和化学稳定性，且纯度高，生产过程纯净，无有机或化学物质（如染料）和重金属污染。选择密封良好的环口、薄壁和嘴口尖细的吸头，将使得在加样时，吸头的安装或卸脱更加容易。吸头管壁有弹性，加样吸液时不会产生旋涡，如此加样的精度就更高。吸头嘴口无毛刺，表面光洁平滑，使得其沾湿性极

小，可避免液体留外壁引起的误差。吸头应与加样器上吸头套筒密封完好，可防止由于空气泄漏而造成加样精度或准确度的误差。此外，吸头还应有液体容积刻度线。D200吸头在20μl和100μl处有标记；D1000吸头在300μl处有标记，D10吸头在2μl处有标记。最后，吸头应可在121℃1Pa压力下消毒20min。如果在使用加样中，想绝对避免样品与样品、样品与加样器或样品与操作人员之间的污染，建议使用Diamond带滤芯吸头。Diamond带滤芯吸头可以经高温消毒，其内置滤芯不会损坏。

2.加样器的校准

加样器容量性能的鉴定，可依据国际标准化组织（ISO）文件ISO/DIS8655和国家技术监督局颁发的有关定量、可调移液器的中华人民共和国国家计量检定规程《定量、可调移液器试行检定规程》（JJG646-90）规定的重量测试方法。这是目前用于此类仪器有效的校准方法。

加样器校准标准操作程序

2.1.适用加样器范围各种品牌、型号的固定、可调和多通道加样器。

2.2.校准环境和用具要求

2.2.1室温20-25℃，测定中波动范围不大于±0.5℃。

2.2.2电子天平：放置于无尘和震动影响的台面上，房间尽可能有空调。称量时，为保证天平的湿度（相对湿度60%-90%），天平内应放置一装有10ml蒸馏水的小烧杯。

2.2.3小烧杯：5-10ml体积。

2.2.4测定液体：温度为20-25℃的去气双蒸水。

2.3.选定校准体积①拟校准体积；②加样器标定体积的中间体积；

③最小可调体积（不小于拟校准体积的10%）。如为固定体积加样器，则只有一种校准体积。

2.4.校准步骤

2.4.1将加样器调至拟校准体积，选择合适的吸头。

2.4.2调节好天平。

2.4.3来回吸吹蒸馏水3次，以使吸头湿润，用纱布拭干吸头。2.4.4垂直握住加样器，将吸头浸入液面2-3mm处，缓慢（1-3s）一致地吸取蒸馏水。

2.4.5将吸头离开液面，靠在管壁，去掉吸头外部的液体。

2.4.6将加样器以30°角放入称量烧杯中，缓慢一致地将加样器压至第一档，等待1-3s，再压至第二档，使吸头里的液体完全排出。

2.4.7记录称量值。

2.4.8擦干吸头外面。

2.4.9按上述步骤称量10次。

2.4.10取10次测定值的均值作为最后加样器吸取的蒸馏水重量，按蒸馏水在不同温度及气压下的重量与体积的换算因子计算体积。然后，按校准结果调节加样器。

2.5加样器的维护保养程序

加样器应根据使用频率进行维护，但至少应每3个月进行一次，具体方法如下：

2.5.1.一般维护可用中性洗涤剂清洁，或者用60﹪的异丙醇，然后用蒸馏水反复洗涤，去除洗涤剂或异丙醇，晾干。清洁后活塞处可使

用一定量的润滑剂。

2.5.2.如果有液体进入加样器内的严重污染，可将加样器拆开后进行清洁，具体拆开步骤参照加样器说明书。

2.5.

3.高压消毒，有的加样器的吸管部分可高压消毒，但需注意的是消毒时不可超温超时，也不能挤压放置，以免造成变形。

2.5.4.可调式移液器在不使用时应妥善地竖立放于支架上，远离潮湿及腐蚀性物质。

2.5.5.在移液操作过程中为防止液体进入加样器套筒内，必须注意：压放按钮时保持平稳；加样器不得倒转；吸头中有液体时不可将加样器平放。

2.5.6.每天开始工作之前应检查移液器的外表面是否有灰尘或污物，若有则小心抹去。