第四章 植物的脱毒与快繁培养
第四章植物的脱毒与快繁培养
第一节概念与意义
一、概念
利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的病毒，生产健康的繁殖材料。
二、植物病毒病简介及危害
（一）植物病毒病简介
定义：由植物病毒寄生引起的病害。
症状：
①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶病。
②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。
（二）病毒的侵染特性
①有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的植物，极易受病毒病的侵染。
②大多植物病毒不经种子传播（专化性强的病毒除外）。
③病毒在生长旺盛的部位繁殖速度慢.
（三）植物病毒的危害：已超过500种，随着生产栽培时间的推移，危害越来越严重，发现的病毒种类也越来越多。大多数植物病毒不经种子传播，对于有性生殖退化，仅能用无性繁殖方法繁殖的植物，一旦患病则毫无办法，从而使优良品种的生产力衰退。
目前受病毒危害严重影响生产的有：
大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草
蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄、萝卜
果树：柑橘、苹果、草莓、香蕉
花卉：香石竹、各种菊花、天竹葵、紫罗兰等
块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物，每年相当一部分产品要用留作种。如：大蒜：留种量占产量的五到八分之一
马铃薯：留种量占产量的十分之一
贝母：留种量占产量的三分之一。
表1 危害园艺植物的病毒数目
植物种类染病毒种类植物种类染病毒种类植物种类染病毒种类菊花19 矮牵牛 5 葡萄26
康乃馨11 马铃薯17 樱桃44
水仙 4 大蒜24 无花果 5
唐菖蒲 5 豌豆15 桃23
风信子 3 百合 6 梨11
月季10 柑橘23 草莓24
天竺葵 5 苹果36
病毒的危害给农业生产带来重大的损失，如草莓病毒的危害，曾使日本草莓产量严重降低，品质大大退化，使生产几乎受到灭顶之灾。柑橘的衰退病曾经毁灭了巴西的大部分柑橘，花卉病毒的危害，表现在球极、宿根等花卉的严重退化，致使花小而少，甚至畸形、变色，观赏价值大大下降。
三、植物脱毒培养的意义
能够有效地保持优良品种的特性；
生产无病毒种苗，防止品种退化；
快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用；
节约耕地，提高农产品的商品率；
四、传统的植物脱毒技术简介
物理方法：X射线、紫外线、超短波、高温热处理等
原理：钝化病毒，从而达到抑制病毒蔓延的目的。
化学方法：采用化学抑制剂，干扰病毒在植物体内的复制。
生物学方法：选用抗病毒品种或采用种子繁殖方法。
传统的防治病毒的方法如物理方法、化学方法及生物学方法防治病毒效果不显著。由于病毒在植物体内分布具有不均匀性，植物生长点附近的病毒浓度很低或无病毒，通过分生组织培养，采取适当的措施，就可以获得脱病毒植株。
第二节植物脱毒的原理和技术
一、基本原理
早在1934年，White发现烟草花叶病毒在烟草根中的分布是不均匀的，越靠根尖（root tip）区病毒含量越低，在根尖的顶端不含病毒。
理论假说：
(1) 能量竞争病毒核酸和植物细胞分裂时DNA合成均需要消耗大量的能
量，而分生组织细胞本身很活跃，其DNA合成是自我提供能量自我复制，而病毒核酸的合成要靠植物提供能量来自我复制，因而就得不到足够的能量，从而就抑制了病毒核酸的复制。
(2)传导抑制病毒在植物体内的传播主要是通过维管束实现的，但在分生组织中，维管组织还不健全，从而抑制了病毒向分生组织的传导。
(3)激素抑制在分生组织中，生长素和细胞分裂素水平均很高，因而阻滞了病毒的侵入或者抑制病毒的合成。
(4)酶缺乏1969年，Stace-Smith提出，可能病毒的合成需要的酶系统在分生组织中缺乏或还没建立，因而病毒无法在分生组织中复制。
(5)抑制因子1976年，Martin-Tanguy等提出了抑制因子假说，认为在分生组织中存在有某种抑制因子。
二、茎尖培养脱毒法的技术规程
1．被脱毒植物携带病毒的诊断：一般根据病毒病的病症特征和表现程度进行判断，必要时可借助指示植物、血清学、分子生物学方法帮助鉴别。
2．母体材料的选择和预处理
（1）母体材料的选择：
①材料应选预脱毒品种的典型性植株，以保证脱毒苗保持原品种的特征特性；
②选感病轻，带毒量少的植株；
（2）预处理：一般采用热处理。
①湿热处理：适用于木本植物的休眠芽。
②干热处理：最常用，处理温度一般在50℃以下，根据植物的耐热性和病毒的失活温度而设定。
香石竹在38～40℃条件下经两个月处理可除去全部病毒。
菊花在35～38℃条件下处理60天可使病毒失活。
3．茎尖分生组织培养再生植株
外植体消毒——茎尖剥离——茎尖培养——生根培养——植株
3.1取样与消毒
剪取顶芽梢段3～5cm，削去大叶片，用自来水冲干净，在75%酒精中浸泡30s，用1%-3%次氯酸钠溶液消毒10～20min，最后用无菌水材料冲洗4-5次。
3.2 剥取茎尖与接种
在切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大又不能保证完全除去病毒。剥离任何可能可能去掉的叶片，但不带叶原基的茎尖分生组织则成苗困难，而分离过大的茎尖分生组织，即分生组织带多个叶原基，则不利脱毒。脱毒时，最好
找出茎原基所带叶原基的数目与生长点（茎尖）大小的相关性，这样在取材时就方便多了，茎尖越小对培养基的要求越高，剥离技术要求越高，成功率越低。
3.3 培养
接种后材料臵25±2℃，光照度1500～5000lx,每日光照10～16h条件下培养.光照对茎尖培养的影响更大，由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。微茎尖需数月培养才能成功。一般以White、Morel和MS培养基作为基本培养基，尤其是提高钾盐和铵盐的含量会有利于茎尖的生长。在茎尖培养中，由于操作方便，一般都使用琼脂培养基。
3.4 生根诱导
一些植物茎尖培养形成绿芽后,基部很快发生不定根.而另一些植物茎尖不产生不定根,需经再诱导、生根才能成为完整植株。
4．脱毒效果检测
主要有指示植物鉴定和血清学鉴定。
（1）指示植物：具有能够辨别某种病毒的专化性症状的寄主植物。将待侧植物的汁液接种到指示植物上，如果被测植物带毒，则指示植物会出现特定症状。只能定性，不能定量，且受接种方式、发病条件的影响，使鉴定结果出现误差。
（2）血清学鉴定：用体外抗原和血清中的抗体所进行的结合反应。
血清学鉴定法基本原理
当动物被病毒感染或人工注射异体蛋白质时，在动物体内会产生一种特异性免疫球蛋白，及抗体。引起形成开题的物质（病毒或异种蛋白）称为“抗原”。抗原和抗体结合，表现为很强的特异性。即由一种病毒产生的抗体只能结合该种病毒，可以在特殊细胞内形成，进入血液存在于血清和体液中。这种含有特异性“抗体”的血清称为“抗血清”。抗原和抗体相结合的反应称为“血清反应”。
抗血清法的局限性：1、不是所有病毒都能制成抗血清。2、病毒在寄主体内含量太少。3、植物体内的单宁物质会与病毒结合，使病毒丧失抗原性质。
5、脱毒苗的保存与繁殖
一般由科研单位或有条件的种子生产部门进行，作为组织培养繁殖的最基础的材料。
无病毒植株并不是有额外的抗病性，它们有可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到无病毒苗，就应很好地隔离与保存。这些原原种或原种材料保管得好可以保存利用5~10年。通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用300目(网眼为0.4～0.5mm大小)的网纱，才可以防止蚜虫的进入。栽培用的土壤也应进行消毒，周围环境也要整洁，并及时喷施农药防治虫害，以保证植物材料在与病毒严密隔离的条件下栽培。有条件的地方可以到海岛或高岭山地种植保存，那里气候凉爽，虫害少，有利于无病毒材料的生长与繁殖。另一种更便宜的方法，是把由茎尖得
到的并已经过脱毒检验的植物通过离体培养进行繁殖和保存。
三、影响脱毒效果的因素
①母体材料病毒侵染的程度
只被单一病毒侵染的植株脱毒较容易，而复合侵染的植株脱毒较难。
②起始培养的茎尖大小
一般取不带叶原基的生长点培养脱毒效果最好，带1～2个叶原基的茎尖培养大约可获得40％左右的脱毒苗，而带3个以上的叶原基的茎尖培养一般获得脱毒苗的频率就大大降低。
表2 茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响
茎尖大小/mm 叶原基数成苗数脱毒株数脱毒率/％
0.12 1 50 24 48.0
0.27 2 42 18 42.9
0.60 4 64 0 0
③外植体的生理状态
一般来讲，顶芽的脱毒效果比侧芽好，生长旺盛季节的芽比休眠或快进入休眠的芽的脱毒效果好。另外还应防止脱毒苗再度感染病毒。
（4）培育脱毒苗应用举例：P41-42页。
四、其他组织培养脱毒方法
（一）愈伤组织培养脱毒
通过植物的器官和组织的培养去分化诱导产生愈伤组织，然后从愈伤组织再分化产生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗。感染烟草花叶病毒的愈伤组织经机械分离后，仅有40％的单个细胞含有病毒，即愈伤组织无病毒植株。愈伤组织的某些细胞之所以不带病毒，其理由是：①病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；②有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。对病毒侵袭具有抗性的细胞可能与敏感的细胞共同存在于母体组织之中。但是，愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗传性不稳定，可能会产生变异植株，并且一些作物的愈伤组织尚不能产生再生植株。
（二）珠心胚培养脱毒: 病毒通过维管组织传播，而珠心组织与维管组织没有直接联系。
珠心胚：胚珠内的一个或一群珠心细胞发育形成的胚。一般是由胚珠中某些靠近珠孔的核大而细胞质浓厚的珠心细胞形成。珠心胚的形状不整齐,大小不一,而且无胚柄。
（三）茎尖嫁接脱毒
把极小的茎尖（<0.2mm）作为接穗嫁接到实生苗砧木上（种子实生苗不带毒），然后连同砧木一起在培养基上培养，可提高接穗的成活率并脱除病毒。
基本原理：植物的分生组织（如根尖、茎尖）不带或很少带有病毒。
(四)花药培养脱毒
草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究
1 草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究 项 目 总 结 报
告 主持完成单位：商丘市农林科学研究所 二0一0年十二月 2 目录 一、项目来 源……………………………………………………………………1 二、项 目实施的意义和依据 (1) （一）品种来源 (1) 1、丰香—草 莓 (1) 2、特征特性 (1) 3、脱毒丰香草莓 (2) （二）项目实施的目 的..................................................................3 1、总体目标 (3) 2、研究组织培养脱毒快繁，加速示范推广，促进农村经济发展 (3)
（三）项目实施的意 义 (3) 1、提高果品产量和质量，增强市场竞争能力 (4) 2、生产无公害果品，促农民致富................................................4 3、发挥增产增收效益潜力，促进产业结构调整 (4) （四）项目实施依据 (4) 1、研究与实施的理论依据.........................................................4 2、“丰香草莓”组织培养技术路线................................................5 3、草莓组织培养的优点............................................................5 三、丰香-草莓的组织培养技术研究 (6) （一）草莓-“丰香”脱毒技术研究…………………………………………… 6 1、研究目的…………………………………………………………………6 2、供试材料…………………………………………………………………6 3、 组织培养环境条件……………………………………………………6 4、 材料的选择与处理……………………………………………………6 5、 生长点的剥取……………………………………………………………7 6、 诱导方法…………………………………………………………………7 7、 病毒的检测……………………………………………………………8 8、 无病毒原种的保存和繁殖………………………………………………8 （二）“草莓-丰香”脱毒与快繁培养基筛选研究………………………………8 1、
植物组织培养脱毒方法综述
植物组织培养脱毒方法综述 摘要：植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素，通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。通过查阅国内外研究文献和资料，综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。 关键词：组织培养；脱毒；茎尖培养 正文： 植物病毒分布广、危害大，对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。近年来。随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术，病毒病开始流行，严重影响了中国花卉产业的发展。目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。因此，本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述，以期从中得到启示，进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。 植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等，其中由于茎尖培养脱毒效果好，是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径。研究表明，如果将不同的方法结合起来应用效果会更好，通常将茎尖结合热处理来脱毒。 1、茎尖培养脱毒 茎尖培养脱毒原理：在染病毒植株体内，病毒分布并不均匀，在生长点病毒含量最低。病毒通过维管束和胞间连丝传播，在分生区内无维管束，病毒扩散慢，加之植物细胞不断分裂增生，所以病毒含量少，在茎尖生长点几乎检测不出病毒，因此切取茎尖愈小愈好，但实际操作中茎尖取太小不易培养成活，过大又不能去毒。 1．1 茎尖培养的方法及注意事项 将消毒后的材料放置在20～40倍解剖显微镜下，用解剖刀剥取0．1～1 mm 的茎尖，迅速放入培养基中，如果在空气中暴露时间过长，就会因失水引起茎尖死亡。赵军良等人的研究表明，带有一个叶原基的茎尖，脱毒效果最好，成活率最高[3]。不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。在菊花的茎尖培养中，在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除，在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1～2片叶原基的生长点，生长点大小约在0.3～0.5 mm左右。大于以上尺寸脱毒率将会下降，反之成活率将会下降，迅速将摘出的生长点置于培养基中。就香石竹而言，切掉叶柄后，生长点是在几重叶原基的包围下，要从外到内逐一切掉外层叶原基，当生长点露出时把包括1—2片叶原基在内的生长点切下，迅速移入事先预备好的培养基内，注意生长点的方向及不要把生长点埋在培养基内。在康乃馨的茎尖培养中取带有1—2个叶原基、长0.2-0.3 mm的茎尖接种到培养基上，接种时只须沾取茎尖置于轻轻划破的培养基表面即可。洋葱可用0.5—0.7 mm茎尖培养，能有效地脱除洋葱中的O YDV和GI v病毒。在对白葱的茎尖脱毒研究表明，以带有1片叶原基大小为0.2-0.6 mm的茎尖外植体较为适宜。 1．2 茎尖培养可能出现的问题及防治方法 茎尖培养可能出现褐化、玻璃化等现象，这会严重影响植物的成活率，所以
植物组织培养脱毒方法综述
植物组织培养脱毒方法综述 符国芳,李 青 (北京林业大学,北京100083) 摘要:植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素,通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。通过查阅国内外研究文献和资料,综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。 关键词:组织培养;脱毒;茎尖培养 中图分类号:S432 4+1 文献标识码:A 文章编号:1002-7351(2007)03-0255-04 Summarization on the methods of virus elimination by plant tissue culture FU Guo fang,LI Qing (Beijing Forestry U niversity ,Beij ing 100083,China) Abstract:Plant virus is the factor that inhibits flow er industr y development Plant v irus can be eliminated by shoot tip treatment,shoot t ip and heat treatment,cold treatment,chemical treatment and callus treatment,so o n By searching the research bibliog ra phies home and abr oad,this paper describes the methods to eliminate v irus by shoot t ip culture,heat treatment,chemical treat ment,callus treatment and cold treatment,so on Key words:tissue culture;vir us elimination;shoot tip culture 植物病毒分布广、危害大,对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。近年来,随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术,病毒病开始流行,严重影响了中国花卉产业的发展。目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。因此,本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述,以期从中得到启示,进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。 植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等,其中由于茎尖培养脱毒效果好,是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径 [1]。研究表明,如果将不同的方法结合起来应用效果会更好, 通常将茎尖结合热处理来脱毒。1 茎尖培养脱毒 茎尖培养脱毒原理:在染病毒植株体内,病毒分布并不均匀,在生长点病毒含量最低。病毒通过维管束和胞间连丝传播,在分生区内无维管束,病毒扩散慢,加之植物细胞不断分裂增生,所以病毒含量少,在茎尖生长点几乎检测不出病毒,因此切取茎尖愈小愈好,但实际操作中茎尖取太小不易培养成活,过大又不能去毒[2]。 1 1 茎尖培养的方法及注意事项 将消毒后的材料放置在20~40倍解剖显微镜下,用解剖刀剥取0 1~1mm 的茎尖,迅速放入培养基中,如果在空气中暴露时间过长,就会因失水引起茎尖死亡。赵军良等人的研究表明,带有一个叶原基的茎尖,脱毒效果最好,成活率最高[3]。不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。在菊花的茎尖培养中,在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除,在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1~2片叶原基的生长点,生长点大小约在0 3~0 5mm 左右,大于以上尺寸脱毒率将会下降,反之成活率将会下降,迅速将摘出的生长点置于培养基中 [4]。就香石竹而言,切掉叶柄后, 收稿日期:2007-01-08;修回日期:2007-03-15 作者简介:符国芳(1982-),女(土家族),湖南张家界人,北京林业大学硕士研究生,从事园林植物组织培养研究。第34卷第3期 2007年9月福建林业科技Jour of F ujian Forestry Sci and T ech V ol 34 N o 3Sep ,2007
浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方教学内容
浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方马铃薯：(Solanumtuberosum)为茄科茄属作物．是全球重要的粮菜兼用作物。马铃薯具有生长期短、产量高、适应性强、营养丰富、耐储运的特点，因此深受生产和消费者的喜爱。但在马铃薯生产中普遍存在种性退化的问题，而病毒侵染是马铃薯退化的根源。由于马铃薯是无性繁殖作物，所以病毒侵染后会世代相传，危害逐年加重。目前，世界上公认的解决马铃薯病毒危害，防止品种退化的有效途径是茎尖离体培养。通过茎尖离体培养培育脱毒基础苗，再通过建立合理的良种繁育体系生产优良种薯是马铃薯高产、稳产、优质的可靠保证。 一脱毒种薯繁育工艺流程 马铃薯脱毒种薯繁育工艺流程如图所示。 二脱毒技术
2.1 脱毒方法 2.1.1 外植体选择及处理 外植体的选择途径一般有3条：①在生长季节从田间挖取植株种植在无菌的盆土中，温室内栽培，取其新长成枝条的芽；②从田间切取枝条，插入营养液中生长，取新抽生枝条上的芽；③块茎在室内发芽，芽经热处理(38℃)2周后再取芽。另外，定期给植株喷施内吸杀菌剂，如0.1％多菌灵和0.1％链霉素的混合液，可以有效提高灭菌效果。经过上述处理之后，要比直接取自田间枝条污染少得多。再加上茎尖分生组织又被彼此重叠的叶原基保护．只要仔细剥取，无须再进行消毒，就能得到无菌的外植体。但为保险起见，在切取外植体之前，可以先进行简单的表面消毒，一般在5％次氯酸钠中处理8～10min即可。虽然顶芽和腋芽都能作为外植体，但顶芽的茎尖生长要比腋芽的快，成活率也高，所以一般取顶芽作为外植体。 2.1.2 剥离茎尖和接种 在超净台上的解剖镜(8～40倍)下进行茎尖剥离。解剖时必须注意使茎尖暴露的时间越短越好．以免超净台的气流风干茎尖。在材料下垫上一块湿润的无菌滤纸也可达到保持茎尖新鲜的目的。在解剖镜下用解剖针将叶片和叶原基剥掉，直到露出圆亮的茎尖生长点。将带有l～2个叶原基的茎尖切下．接种到培养基上。要注意防止交叉污染，尤其是当芽未曾进行过表面灭菌时更要谨慎。 2.1.3 培养 对马铃薯茎尖培养来说，MS和white基本培养基都是较好的培养基，而且附加少量(0.1～0.5 mg／L)的NAA或BA或二者都加，培养效果更好。只有生长点的
马铃薯脱毒快繁技术研究与应用
马铃薯脱毒快繁技术研究与应用 该项研究主要目的解决病毒性退化对洛阳市马铃薯生产所造成的严重产量损失及常年从外地调种所造成的人力、物力巨大浪费,建立豫西地区脱毒马铃薯种薯繁种体系,进行当地繁种,结合间作套种模式,在生产上大面积应用,实现马铃薯生产的高产高效益。该项研究的技术关键是:茎尖分生组织培养成苗、病毒检测、脱毒试管苗及微型种薯快速高效低成本生产等。 该项研究的技术创新点是:针对豫西的生态条件,在豫西洛阳马铃薯主要病毒类型调查的基础上,研究了马铃薯茎尖分生组织培养成苗及快繁技术,并对常规马铃薯脱毒技术进行了低成本生产技术研究和程序简化研究,在国内首次采用培养基中加入适量的氯溴异氰尿酸,可以取代高压灭菌过程。建立了“二年三季”豫西脱毒马铃薯良种繁育体系,进行当地快繁,供应生产应用。 通过三年的工作取得如下进展:1、明确了豫西马铃薯生产上主要病毒类型及各种病毒的发生频次。经过对样本进行病毒检测,结果表明植株带毒率为54.95%,五种马铃薯病毒发生频率为:PVX24.18%、PVY23.67%、PVS12.09%、PVM4.4%、PLRV9.9%。 在带病毒植株中,一种病毒单独侵染的为68%,两种以上病毒复合侵染的占32%。2、进行了马铃薯茎尖分生组织培养成苗及快速扩繁的技术研究,对马铃薯脱毒种苗、种薯生产中的低成本技术及简化程序进行了研究与应用。 茎尖取材最好用顶芽,切取茎尖大小0.2-0.3CM为宜。合适的培养基是 MS+0.1GA3+6-BA0.5+0.05NAA,温度25℃,光照16h/d,光强1000LX。 生长培养基采用基本MS培养基,温度25℃,光照16h/d,光强2000LX。在试管苗的生产中,采用罐头瓶、固体培养基、在配制培养基时用普通食用白糖替代
《植物组织培养技术》植物脱毒与快繁
《植物组织培养技术》植物脱毒与快繁 模块介绍 本模块针对组培研发岗位的工作职责与任职要求，编排了试验方案设计和数据调查与分析二个实训项目，主要内容包括组培的基本理论、提高组培苗遗传稳定性的措施、组培试验方案的制订等，重点阐述了组培快繁的程序与类型、组培研究的技术路线与试验设计方法、组培快繁的常见问题、组培数据调查与分析方法等。在理论学习的同时，开展项目实践活动，培养学生会设计组培试验、撰写试验方案、编制组培试验观察表和技术指标统计分析，具备组培研发工所要求的理论知识、技能水平和相应的职业素质。模块结构设计见表1。 表1 模块结构设计 项目1 蔬菜组培与快繁/马铃薯脱毒与快繁 一、学习目标
（一）终极目标 掌握植物脱毒与鉴定技术，培育马铃薯等蔬菜脱毒、快繁与脱毒苗的鉴定技术。（二）促成目标 1.熟悉植物脱毒的意义、原理与方法，能够运用脱毒技术培育马铃薯等蔬菜脱毒苗； 2.掌握脱毒苗鉴定技术，清楚马铃薯等蔬菜脱毒苗鉴定方法； 3.清楚马铃薯等蔬菜脱毒苗的保存与无病毒苗繁育体系、方法； 4.提高操作水平和分析解决问题能力，培养团队精神、敬业精神、责任意识。 二、学习内容 1．蔬菜组织培养概况； 2.马铃薯组培概况； 3.马铃薯脱毒种薯繁育流程； 4.脱毒苗的优势(含病毒的种类、传染途径、表现症状与危害)； 5.植物脱毒技术； 6.脱毒苗鉴定技术； 7.马铃薯脱毒苗培育与鉴定； 8.马铃薯脱毒苗快繁与微型薯诱导； 9.马铃薯等蔬菜脱毒苗的保存与繁殖； 10.甘薯脱毒与快繁技术要点（拓展）； 11.大蒜脱毒与快繁技术要点（拓展）； 12.紫背天葵组培与快繁技术（拓展）； 13.结球甘蓝组培与快繁技术（拓展）。 三、知识点 1.蔬菜组织培养概况； 2.马铃薯组培概况； 3.马铃薯脱毒种薯繁育流程； 4.脱毒苗的含义、实质与培育优势(含病毒的种类、传染途径、表现症状与危害)； 5.植物脱毒技术（热处理、微茎尖培养、其它脱毒方法）； 6.脱毒苗鉴定技术（指示植物法、嫁接法等）； 7.马铃薯脱毒苗培育与鉴定； 8.马铃薯脱毒苗快繁与微型薯诱导（实验室诱导、温室生产）。 四、技能点
植物组织培养之草莓的脱毒与快速繁殖
一、草莓简介 草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物。草莓的外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香。 草莓具有极其丰富的营养价值。 1、（丰富的胡萝卜素）草莓中所含的胡萝卜素是合成维生素A的重要物质，具有明目养肝作用; 2、（滋补调理）草莓对胃肠道和贫血均有一定的滋补调理作用; 3、（治病）草莓除可以预防坏血病外，对防治动脉硬化，冠心病也有较好的疗效; 4、（防癌）草莓是鞣酸含量丰富的植物，在体内可吸附和阻止致癌化学物质的吸收，具有防癌作用; （回主页） 草莓营养价值高，口味好，深受消费者喜爱，特别是近几年种植面积大幅提高。但由于病毒病的传播感染，导致草莓品种种性退化，产量、品质下降，商品率降低，严重影响了草莓的发展。 下面就简单介绍几种草莓易得的病： 二、草莓易得的病 1、叶斑病：又称蛇眼病，主要为害叶片、叶柄、果梗、嫩茎和种子。在叶片上形成暗紫色小斑点，扩大后形成近圆形或椭圆形病斑，边缘紫红褐色，中央灰白色，略有细轮，使整个病斑呈蛇眼状，病斑上不形成小黑粒。 2、白粉病：主要为害叶片，也侵害花、果、果梗和叶柄。叶片上卷呈汤匙状。花蕾、花瓣受害呈紫红色，不能开花或开完全花，果实不膨大，呈瘦长形；幼果失去光泽、硬化。近熟期草莓受到为害会失去商品价值。 3、灰霉病：是开花后的主要病害，在花朵、花瓣、果实、叶上均可发病。在膨大时期的果实上，生成褐色斑点，并逐渐扩大，密生灰霉使果实软化、腐败，严重影响产量。 4、根腐病：从下部叶开始，叶缘变成红褐色，逐渐向上凋萎，以至枯死。支柱在中间开始变成黑褐色而腐败，根的中心柱呈红色。 5、黄萎病：该病是土壤病害，主要症状是幼叶畸形，叶变黄、叶表面粗糙无比。随后叶缘变褐色向内凋萎，直到枯死。 6、除此之外，草莓还容易有一些病虫危害，例如： 线虫危害：寄生在草莓组织中，危害叶柄、芽、根等，使被害器官变成红色，严重时植株枯死。 蛴螬危害：在草莓收获期和八九月份咬食根、茎，使植株枯死。 （回主页） 根据报道，侵染草莓的病毒多达二十多种。长期大田分株繁殖容易使草莓植株中病毒积累，导致草莓品种退化,，严重影响经济收益。所以利用先进的技术使草莓脱毒，以及后期的快速繁殖已成为草莓业发展的必要环节。 下面就来详细介绍草莓的脱毒与快繁。
植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用
植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用 摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。本文简要介绍植物组织培养的基本原理和方法，综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理和技术方法，介绍了几种常用的病毒检测方法。本文以马铃薯为例，重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达100%。同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。 关键词：茎尖培养，脱毒快繁技术，病毒检测，应用前景. 1．脱毒技术及其原理 植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物，脱除病毒得到无毒苗株，继而在大田快速繁殖的技术。脱毒及离体快繁，是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。现在植物的脱毒技术有多种，其中应用最广泛的有三种：热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法，将不同的方法相结合起来应用效果更好。 1.1 热处理法 1.1.1 概述 热处理法是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异，使植物的生长速度超过病毒的扩散速度，得到一小部分不含病毒的植物分生组织，然后进行无毒个体培育。 热处理可通过热水浸泡或湿热空气进行。热水浸泡对休眠芽效果较好，湿热空气对活跃生长的茎尖效果较好，既能消除病毒又能使寄主植物有较高的存活机会。热空气处理比较容易进行，把旺盛生长的植物移入到1个热疗室中，在35~40℃下处理一段时间即可，处理时间的长短，可由几分钟到数月不等[3] 。热处理的方法有恒温处理和变温处理，处理的材料可以是植株，也可以是接穗。 1.12原理 热处理脱毒是根据病毒与寄生细胞对高温的忍耐程度不同，选择适当的温度和处理时间，植物组织中的很多病毒被部分地或完全地钝化而可控制其的活动，但很少伤害甚至不伤害寄主组织，从而让植物细胞加快生长，使生长点附近不带病毒，从而达到脱毒的目的。 1.2 茎尖培养脱毒法 1.2.1 概述 茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗，其方法是在解剖镜下，用解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离，因为茎尖分生组织基本不带病毒，利用植物茎尖分生组织进行离体培养，再结合病毒检测，就可以获得无病毒的植株。 茎尖培养脱毒法脱毒率高，脱毒速度快，能在较短的时间内得到较多的原种繁殖材料，但这种方法存在的缺点是植物的存活率低。为了克服这一缺点，现在经常是将茎尖培养与热处理相结合来使用。茎尖培养与热处理相结合之所以能够提高脱毒效果，是由于热处理可使植物生长本身所具有的顶端免疫区得以扩大，有利于切取较大的茎尖（1mm左右），从而能够提高培养或嫁接的成活率。 1.2.2 原理 茎尖培养脱毒的原理是植物体内病毒靠维管束系统移动，分生组织中没有维管束存在，病毒只靠胞间连丝移动，速度很慢，难以追上生长活跃的分生组织，所以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。 据研究，植物体内某一部分组织器官不带病毒的原因是：分生组织的细胞生长速度快，病毒在植物体内繁殖的速度相对较慢，而且病毒的传播是靠筛管组织进行转移或通过细胞间连丝传递给其他细胞，因此病毒的传递扩散也受到一定限制，这样便造成植物体的部分组织细胞没
生姜脱毒和组培快繁及栽培技术的研究
生姜脱毒和组培快繁及栽培技术的研究生姜属姜科姜属多年生宿根植物，营养丰富是药、食、加工等多用途经济作物，是我国重要的外贸产品。生产上生姜只能靠少数品种长期无性繁殖，易感染多种病毒，使姜体内积累多种病毒，从而导致生姜产量下降、品质降低，种性退化，—般减30% ~ 50%，严重制约了生姜的生产发展。国内外目前尚无高抗病毒的生姜品种和高效杀病毒药剂，因此采用茎尖组织培养脱毒生姜苗，成为防治病毒，高生姜产量和品质的首选方法。 本研究旨在通过热处理和茎尖培养相结合的方法，以优质姜种为材料，通过热处理法催芽、表面消毒、茎尖分生组织剥取、无菌苗诱导培养、增殖诱导培养、生根诱导等一系列实验操作及培养基配方优化，并在每个不同的培养阶段进行检测，建立脱毒良种繁育体系的工艺流程，有效去除引起生姜种性退化的烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)两种主要病毒。该项研究为脱毒姜种的快速繁殖提供了技术保障，为生产应用提供了技术支撑。 1 生姜的脱毒处理 精选块大、肉厚、皮色黄亮和无病虫害的健壮姜块，在自来水下洗掉泥巴，再用少量洗衣粉浸泡10min，用毛笔轻轻刷洗种姜表面,用自来水冲洗2h，沥干水分。在38℃恒温培养箱进行热处理4周，使病毒饨化失活，同时可诱导出不定芽，待长出2 ~ 5cm左右的芽后再进行茎尖脱毒。将长出新芽切下，用流水冲洗干净，置超净工作台上，用75%酒精处理30秒，再用0.1%升汞消毒数分钟，无菌水冲洗
6 ~ 8次后，在40倍体式显微镜下剥取0.2 ~ 0.3毫米茎尖分生组织，接种于诱导培养基上。待成苗后应用血清学鉴定, 获得脱毒苗。 2 脱毒苗的培养 以MS为基础培养基，以MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L为茎尖诱导分化培养基；以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L为生姜最适继代培养基；以MS+NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L为生根培养基。所配制的培养基中，糖浓度为3%，脂为0.7%，pH值为5.8。 诱导培养时，，先进行7天暗培养，再进行光培养。温度与光照条件要求与生姜生长期的光温条件相符，可控制在（25±2）℃，光照强度为3000 ~ 4000Lux，光照时间为14 ~ 16个小时。 3 组培苗的驯化及移栽 待培养瓶里的生姜苗具有3 ~ 4片叶，5 ~ 6条根，根长至2 ~ 4cm 时即可移栽。第1 d 在培养室里打开瓶盖(即半开半盖)，第2d把瓶盖揭掉，并在培养瓶中放人少许水，以防止组培苗的失水及培养基的污染，第3d移出培养室，放在室温中，以逐渐适应室外温度。移栽前应洗净附着在组培苗根部的培养基, 以免招致细菌繁殖, 导致组培苗感染腐烂死亡, 冲洗时谨防伤根,以确保移植成活。以蛭石+泥炭为移栽基质, 移栽后每天喷雾保湿, 栽后3d棚内相对湿度保持在85% ~ 90%, 1个月后就可考查移栽成活率。田间肥水管理与普通生姜相同，11月可收获姜种。
植物组织培养脱毒快繁技术的综述
植物组织培养脱毒快繁技术的综述 李西雁 (广西职业技术学院农业技术工程系20０２级应用生物技术专业) 摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。本文结合在桂林莱茵生物科技股份有限公司的实践情况,简要介绍植物组织培养的基本原理和方法,综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理、发展史和技术方法,并介绍了几种常用的病毒检测方法。本文以马铃薯为例,重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达1０0％。同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。 关键词：茎尖培养，组织培养，快繁脱毒技术，病毒检测，应用前景 1植物组织培养研究概况 1．1研究简史 自从1943年怀特(White）提出植物细胞“全能性”(Tｏtipoｔｅncy）学说及诸多后学者(Steward，1958，Guｈａ和Marteshwａｒｉ，196４）相继证实后，引发植物组织和细胞培养快繁技术的勃然兴起。我国的专家学者在20世纪７０年代后也在此领域做了大量的研究和开发工作,创造了很多新方法、新技术，提出不少新成果，开拓了植 物组织培养快繁技术的新局面[１] 。目前采用组织培养脱病毒快繁及离体快繁生产株 苗的技术已发展相当成熟[2] 。脱毒株苗具有无杂菌、适应能力较强、繁育较快、 质量优、抗性好、分蘖性强、繁殖系数高、大批量生产、周年供应、便于运输等优点，已得到有关专家的鉴定及高度评价和种植试验区、种植产区果农的认可。例如脱毒马铃薯、脱毒红薯、脱毒生姜、脱毒大蒜、脱毒草莓、脱毒苗木、脱毒花卉等等, 已成为现代农民致富的新宠[2] 。 １．2植物组织培养和脱毒快繁的定义 植物组织培养（Ｐlant tｉssue culture)是指在无菌的条件下，将离体的植物(根、茎、叶、花、果实、种子等)、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞)以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。由于培养物是脱离植物母体,在玻璃瓶中进行培养，所以也叫做离
第四章 植物的脱毒与快繁培养
第四章植物的脱毒与快繁培养 第一节概念与意义 一、概念 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的病毒，生产健康的繁殖材料。 二、植物病毒病简介及危害 （一）植物病毒病简介 定义：由植物病毒寄生引起的病害。 症状： ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶病。 ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。 ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。 （二）病毒的侵染特性 ①有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的植物，极易受病毒病的侵染。 ②大多植物病毒不经种子传播（专化性强的病毒除外）。 ③病毒在生长旺盛的部位繁殖速度慢. （三）植物病毒的危害：已超过500种，随着生产栽培时间的推移，危害越来越严重，发现的病毒种类也越来越多。大多数植物病毒不经种子传播，对于有性生殖退化，仅能用无性繁殖方法繁殖的植物，一旦患病则毫无办法，从而使优良品种的生产力衰退。 目前受病毒危害严重影响生产的有： 大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草 蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄、萝卜 果树：柑橘、苹果、草莓、香蕉 花卉：香石竹、各种菊花、天竹葵、紫罗兰等 块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物，每年相当一部分产品要用留作种。如：大蒜：留种量占产量的五到八分之一 马铃薯：留种量占产量的十分之一 贝母：留种量占产量的三分之一。
表1 危害园艺植物的病毒数目 植物种类染病毒种类植物种类染病毒种类植物种类染病毒种类菊花19 矮牵牛 5 葡萄26 康乃馨11 马铃薯17 樱桃44 水仙 4 大蒜24 无花果 5 唐菖蒲 5 豌豆15 桃23 风信子 3 百合 6 梨11 月季10 柑橘23 草莓24 天竺葵 5 苹果36 病毒的危害给农业生产带来重大的损失，如草莓病毒的危害，曾使日本草莓产量严重降低，品质大大退化，使生产几乎受到灭顶之灾。柑橘的衰退病曾经毁灭了巴西的大部分柑橘，花卉病毒的危害，表现在球极、宿根等花卉的严重退化，致使花小而少，甚至畸形、变色，观赏价值大大下降。 三、植物脱毒培养的意义 能够有效地保持优良品种的特性； 生产无病毒种苗，防止品种退化； 快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用； 节约耕地，提高农产品的商品率； 四、传统的植物脱毒技术简介 物理方法：X射线、紫外线、超短波、高温热处理等 原理：钝化病毒，从而达到抑制病毒蔓延的目的。 化学方法：采用化学抑制剂，干扰病毒在植物体内的复制。 生物学方法：选用抗病毒品种或采用种子繁殖方法。 传统的防治病毒的方法如物理方法、化学方法及生物学方法防治病毒效果不显著。由于病毒在植物体内分布具有不均匀性，植物生长点附近的病毒浓度很低或无病毒，通过分生组织培养，采取适当的措施，就可以获得脱病毒植株。 第二节植物脱毒的原理和技术 一、基本原理 早在1934年，White发现烟草花叶病毒在烟草根中的分布是不均匀的，越靠根尖（root tip）区病毒含量越低，在根尖的顶端不含病毒。 理论假说： (1) 能量竞争病毒核酸和植物细胞分裂时DNA合成均需要消耗大量的能
7.植物组织的脱毒培养(植物组织培养)
第七章植物组织的脱毒培养 一、植物病毒的危害 病毒:一类结构简单生物，由核酸和蛋白质分子组成。病毒结构简单，没有完整的酶系统来独立地进行物质代谢和能量代谢，只能依靠寄主生物的酶系统实现生理代谢过程，因此，具有寄生性。 病毒侵入寄主后，在寄主细胞中进行自我复制而迅速增殖，并扩展到植物全株发病。 病毒病不同于真菌和细菌病害，不能用杀菌剂和抗菌素进行防治，与细胞共生，一旦染病，只能采用拨除病株的措施。 病毒危害：1）导致植物产量和品质的大幅度降低。2）通过无性繁殖或者种子传给下一代。 通过植物组织培养方法，可脱除植物病毒，恢复种性，使品种复壮，提高产量品质。 二、植物组织中病毒的分布 病毒在植物组织中分布不均匀：在顶端分生组织中含毒少，在老组织中病毒增加。（茎尖培养脱毒的理论依据） 植物茎尖分生组织无病毒原理（原因）： (1) 能量竞争：病毒核酸和植物细胞分裂时DNA合成均需要消耗大量的能量，而分生组织细胞本身很活跃，其DNA 合成是自我提供能量自我复制，而病毒核酸的合成要靠植物提供能量来自我复制，因而就得不到足够的能量，从而就抑制了病毒核酸的复制。 (2) 传导抑制：病毒在植物体内的传播主要是通过维管束实现的，但在茎尖分生组织中，维管组织还不健全或不存在，从而抑制了病毒向分生组织的传导。 (3) 激素抑制：在分生组织中，生长素和细胞分裂素水平均很高，因而阻滞了病毒的侵入或者抑制病毒的合成。 (4) 酶缺乏：1969年，Stace-Smith提出，可能病毒的合成需要的酶系统在分生组织中缺乏或还没建立，因而病毒无法在分生组织中复制。 (5)抑制因子：1976年，Martin-Tanguy等提出了抑制因子假说，认为在分生组织中存在有某种抑制因子，如“酶钝化系统” 。 三、脱除植物病毒的方法 (一)茎尖培养脱毒 1、根据培养目的和取材大小可将茎尖培养分为: 1）普通茎尖（Shoot tip）培养 较大茎尖（几毫米至几十毫米的茎尖）培养技术。技术简单，操作方便，茎尖易成活，成苗所需时间短，能加速繁殖速度。 2）茎尖分生组织( apical meristem )培养 仅限于幼龄叶原基顶端圆锥区，其直径和长度大约100～250μm，即小于0.3mm的茎尖为茎尖分生组织。 2、在茎尖培养中影响脱毒的因素 1）培养基： 营养成分：MS培养基，K+ NH4+含量 生长调节剂：少量的生长素（NAA,IAA)、细胞分裂素（6-BA）、GA3 2）外植体的大小：决定存活率的大小 三个因素：根除病毒、可以发育为完整植株的能力、带有叶原基。 3）培养条件：光照4000lx（照光比暗培养效果好，但对于易褐化的材料需一段暗培养） 温度：25±2℃（低温会使茎尖休眠，不利于萌发）。 4）外植体的生理状态： 顶芽茎尖比腋芽茎尖效果好；生长期的材料比休眠期好。 （二）热处理脱毒 热处理与茎尖培养结合，即可取较大的茎尖培养，大大提高茎尖成活率和增殖率，又达到消除病毒的目的。 1、方法： 热水:休眠芽（50 ℃热水浸渍数分钟～数小时） 热气:活跃的茎尖。温度35-50℃，处理时间长度各异。（处理时间长短可根据病毒浓度、寄主蛋白含量、温度高低来确定） 长时间高温处理不能提高脱毒效率，反而降低茎尖再生能力，可以采用逐渐升温、变温处理。 2、热处理脱毒的原理： 热处理法是利用病毒和寄主植物对高温的耐热性的差异。 ⑴某些病毒受热后不稳定，高温使这些病毒失去活性，可以部分地或完全地被钝化。 ⑵病毒进入植物细胞后，随植物细胞的DNA一起复制。热处理钝化病毒的活性后，病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去侵染的能力。 ⑶高温下，一方面不能生成或生成病毒很少，另一方面对病毒的破坏作用加重，病毒颗粒生成和破坏的平衡程度受到
植物种苗脱毒技术
第二节植物种苗脱毒技术 科目：生物备案人：学生：时间： 一．背景知识 1．农作物在种植过程中经常会受到、和等病原体感染，导致产量降低，品种退化。 2．分生区一般不会受到病毒侵染。 在植物生长过程中，侵入植物体的病毒可以通过和扩散到所有的组织器官，但是植物的茎尖等分生组织处于阶段，其组织内还未形成。此时植物体内的病毒只能通过移动到分生区，而这一移动过程远不及速度。所以分生区一般不会受到病毒侵染。 3．种苗脱毒：把从感染病毒的植株上剥离，在条件下进行组织培养，从而获得不含的，这一过程称为种苗脱毒。 二．实践案例——马铃薯脱毒苗的培养 1．材料用具：略。（注意：这里所提到的MS培养基是灭完菌的） 2．活动程序 （1）取材和消毒 剪下后用冲洗10min，在无菌室内用消毒后，再用冲洗2—3次。 （2）剥离和接种 在40倍下操作，用解剖针细心剥取所需的茎尖（约0.1~0.5cm），将茎尖接种于MS培养基上，接触培养基。 （3）培养 将接种的茎尖置于25oC．1500~3000Lx光照条件下培养。 （4）移栽 茎尖长成3~4片叶的小植株，即可移栽。 3．结果分析 （1）．检测马铃薯脱毒是否成功 （2）．计算脱毒成功率 三．探究活动 1．草莓脱毒苗的培养 2．探究切取茎尖的最佳长度（设计对照实验，自变量是）
[复习指导] 植物种苗脱毒技术复习以植物快速繁殖技术为基础，运用对比的方法，进一步强化基本操作过程。复习该技术操作时，体会步骤和无菌操作。 [典例精析] 农业上许多作物体内都有病毒寄生。病毒繁殖速度极快，新产生的细胞一段时间后都会被病毒感染，且可通过生殖细胞传递给子代，影响下一代的品质。用农药杀死病毒已无明显效果，请设法用最快的方法培育大量没有病毒的后代植株。 [解析] 快速培育无病毒植株要选择刚分裂的细胞进行组织培养。 [答案] 植物茎尖生长点刚分裂的细胞不含病毒。所以在茎尖生长点处取大量的刚分裂不久没有感染病毒的细胞进行组织培养，诱导成植株，就能得到大量的无病毒植株。如脱毒马铃薯就是用此方法培育的。 [聚焦高考] （03全国）甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程不涉及细胞的（ C ） A．有丝分裂B．分化 C．减数分裂D．全能性 [自我测评] 1．马铃薯可以进行的生殖方式是……………（） A．出芽生殖和有性生殖B．分裂生殖和营养生殖 C．营养生殖和有性生殖D．出芽生殖和营养生殖 2．马铃薯利用它的块茎进行无性繁殖，种植的世代多了以后往往会感染病毒而减产，为此农户都希望得到无病毒的幼苗进行种植。获得无病毒幼苗的最佳办法是……………（）A．选择优良品种进行杂交 B．进行远缘植物体细胞杂交 C．利用茎尖进行组织培养 D．人工诱导基因突变 3．植物组织培养过程的顺序是……………（） ①外植体②根、芽③愈伤组织④脱分化⑤再分化⑥植物体 A．①④③⑤②⑥B．①④③②⑤⑥ C．①⑤④③②⑥D．⑥①④③⑤② 4．科学工作者把胡萝卜的韧皮部细胞分离出来，将单个细胞放入培养基中培养，获得了许多完整的植株，这些植株的共同特点是……………（） A．彼此性状相似B．变异频率较高 C．单倍体D．都是纯合子 5．在下列选项中，没有采用组织培养技术的一项是……………（） A．花药离体培养得到单倍体植株 B．秋水仙素处理萌发的种子或幼苗得到多倍体植株 C．基因工程培育的抗棉铃虫的棉花植株 D．快速繁殖月季 6．在植物组织培养过程中，愈伤组织的形成和形态发生是十分关键的一步。而这除需要必备的营养和一些刺激因素外，还需要有起诱导作用的物质，它是……………（）A．铜、锌等微量元素 B．细胞分裂素和生长素