血清钙Ca比色法测定
血清钙Ca比色法测定
1 检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理
在碱性条件下，加入8-羟基喹啉能防止镁和铁的干扰钙离子的测定情况下，Ca2+和邻甲酚酞络合酮形成紫色复合物钙 +O-CPC 碱性环境钙－O-CPC复合物
其钙离子与邻甲酚酞络合酮复合物的颜色与钙浓度成正比，可用利用其吸光度的变化来测定钙离子的含量。
3 标本采集
3.1 病人准备：无特殊要求。
3.2 类型：血清、肝素血浆或尿液。
3.3 标本存放：血清/血浆稳定性：20～25℃保存可稳定7天；4～8℃保存可稳定3周；-20℃保存可稳定8个月。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定4
天；-20℃保存可稳定3个月；对24h尿液标本加浓盐酸10ml，并加热标本，使草酸钙溶解。
3.4 标本运输：室温条件下运输
3.5 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
4. 实验材料：
4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司CA试剂盒,国械注进20142405056
YZB/GER 5724-2014）
4.1.1 试剂组成
R1 氨基乙醇缓冲液:1mol/L，pH10.6
R2 邻甲酚酞络合酮:0.3mmol/L;8－羟基喹啉:13.8mmol/L;盐酸:122mmol/L
4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：15－25°C下保存期限：见试剂标签上的有效期
机上稳定期：42天。
4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的Ca校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪。
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法
以Ca复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。
9 参考值范围
血清/血浆： 2.15-2.55 mmol/L
尿液： 2.5-8.0mmol/24h（注：各实验室应有自己的参考范围。）
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
我室参考值2.11-2.70mmol/L
10 临床意义
钙测量用于诊断和治疗副甲状腺病，某些骨病，慢性肾病和手足抽搐（间歇性肌肉收缩或痉挛）等。尽管体内超过99%的钙存在于骨骼和牙齿，临床上最关心血液里的钙。骨骼作为一个储存器，通过释放钙防止低血钙和吸收钙防止血清钙水平过高，保持血清钙的相对稳定。饮食中钙的含量增加，吸收钙的百分比就减少，因此，吸收钙的数量能够保持相对稳定。在高钙饮食中钙吸收的轻微增加被反映在增加的肾排泄中。钙在许多细胞功能中起着重要作用，细胞内如肌肉收缩和糖原代谢，细胞外如骨钙化、凝血以及神经冲动传递。血浆钙有三种不同的形式：游离离子、和蛋白结合以及与阴离子（如磷酸根、柠檬酸根和碳酸氢根等）形成复合物。总钙水平的降低与多种疾病有关，如骨病（尤其是骨质疏松症），肾病（特别是透析患者），肠道吸收不良以及甲状腺功能减退。总钙水平升高为甲状旁腺机能亢进，转移性恶性肿瘤及肉瘤样恶性病变。在预防骨质疏松进行钙的补充时，钙的检测有助于临床监控。
11 操作性能
11.1 线性范围：血清/血浆：0.05-5.00 mmol/L (0.2-20 mg/dL)；尿液：0.12-12 mmol/L (0.48-48 mg/dL)。
11.2按照内部协议使用人样本和质控品检测其可重复性。血清/血浆：重复性（n=21），中间精密度（每批3 管，每天1批，21天）；尿液：重复性（n=21），中间精密度（每批3 管，每天1批，21天）；下面为得到的结果：
血清/血浆
重复性批间精密度
均值mmol/L，mg/dL 变异系数均值
mmol/L，
mg/dL
变异系
数
Precinor
m U
2.28，9.17 0.7 2.27，9.12 1.6
Precipat h U 3.30，13.26 0.4 3.27，
13.13
0.8
牛奶中钙含量测定
牛奶中钙的测定 在人们的日常生活中，牛奶已经很普及了。牛奶中除不含纤维素外，几乎含有人体所需各种营养物质，其蛋白质含量为3.5％~4％，脂肪含量为3％~4％，碳水化合物为4％~6％，并且奶中钙、磷、钾等微量元素含量也极丰富。其中，钙对人体是很重要的。 一、钙的相关知识 钙是人体内最重要的、含量最多的矿物元素，约占体重的2%。广泛分布于全身各组织器官中，其中约99%分布于骨骼和牙齿中，构成骨盐并维持它们的正常生理功能；约1%分布在体液（即肌体的软组织和细胞的外液）中，其含钙量虽少，却对体内的生理和生化反应起着重要的调节作用。1.1 钙在人体内的基本作用： 钙是人体内的一种微量元素，它在体内的含量虽然微乎其微，但是它的作用是巨大的。直接的作用是钙能维持调节机体内许多生理生化过程，调节递质释放，增加内分泌腺的分泌，维持细胞膜的完整性和通透性，促进细胞的再生，增加机体抵抗力。间接的作用就比较具体繁多，例如钙可以使骨骼粗壮，使肌肉发达，使人精神饱满，维持体内酸碱适中、水和电解质平衡等。钙还可以消除炎症、净化血液、强力解毒、健美皮肤并能抑制有害病菌的入侵等。钙使人体保持上述状况，实际上是人体抵抗力强的一种综合表现。举例来说，钙能预防治疗感冒的原因有三方面：⑴钙能降低毛细血管的通透性；⑵钙能抑制病菌的生存；⑶钙能增强人体对环境冷暖变化的适应能力。具体来说，钙有以下功能： (1)维持血管的正常通透性 体液中钙含量降低，毛细血管通透性增强，血液中的成分可以渗出血管外，这就是某些过敏性疾病的发病机制。注射钙制剂，可以降低毛细血管通透性，过敏性疾病即可缓解。 (2) 抑制神经肌肉的兴奋性 钙离子有降低神经骨骼肌兴奋性的作用。血钙浓度低到每10 0毫升血7毫克以下时，神经骨骼肌兴奋性增强，可以出现手足搐搦症或惊厥。这时静脉推注钙制剂，提高血钙浓度，惊厥即可停止。 (3)参与肌肉的收缩 肌浆里的钙与骨骼肌收缩有直接关系，对维持心肌的正常收缩也起重要作用。如果钙浓度过高，可以减弱肌紧张，引起心跳减慢或心脏停跳。
钙和镁离子的测定
制盐工业通用试验方法钙和镁离子的测定 1.适用范围 本方法适用于制盐工业中工业盐、食用盐（海盐、湖盐、矿盐、精制盐）、氯化钾、工业氯化镁试样中钙、镁离子含量的测定。 2.容量法 2.1.镁离子含量的测定 2.1.1.原理概要 样品溶液调至碱性（pH≈10），用EDTA标准溶液滴定，测定钙离子和镁离子的总量，然后从总量中减去钙离子量即为镁离子量。 2.1.2.主要试剂和仪器 2.1.2.1.试剂 氨-氯化铵缓冲溶液（pH≈10） 称取20g氯化铵，以无二氧化碳水溶解，加入100mL25％氨水，用水稀释至1L。 铬黑T：0.2％溶液 称取0.2g铬黑T和2g盐酸羟胺，溶于无水乙醇中，用无水乙醇稀释至100mL，贮于棕色瓶内； 三乙醇胺：10％溶液； 氧化锌：标准溶液 称取0.8139g于800±2℃灼烧恒重的氧化锌，置于150mL烧杯中，用少量水润湿，滴加盐酸（1∶2）至全部溶解，移入500mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀； 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：0.02mol／L标准溶液 配制：称取40g二水合乙二胺四乙酸二钠，溶于不含二氧化碳水中，稀释至5L，混匀，贮于棕色瓶中备用； 标定：吸取20.00mL氧化锌标准溶液，置于150mL烧杯中，加入5mL氨性缓冲溶液，4滴铬黑T指示剂，然后用0.02mol／L EDTA标准溶液滴定至溶液由酒红色变为亮蓝色为止。 计算：EDTA标准溶液对镁离子的滴定度按式（1）计算。 T EDTA／Mg2＋＝ W×20／500 ×0.2987 (1) V 式中：T EDTA／Mg2＋——EDTA标准溶液对镁离子的滴定度，g／mL； V——EDTA标准溶液的用量，mL； W——称取氧化锌的质量，g； 0.2987——氧化锌换算为镁离子的系数。 2.1.2.2.仪器 一般实验室仪器。 2.1. 3.过程简述 吸取一定量样品溶液〔见附录A（补充件）〕，置于150mL烧杯中，试验程序同2.1.2.1.标定，EDTA标准溶液用量为测定钙离子及镁离子的总用量。 2.1.4.结果计算 镁离子含量按式（2）计算。
钙离子测定
用荧光测定法，通过测定荧光强度来反映细胞中的钙离子浓度是目前普遍采用的细胞内钙离子检测方法。根据激发光的波长不同，可以将检测细胞内钙离子用的荧光染料分为紫外光激发的钙离子荧光指示剂和可见光激发的钙离子荧光指示剂。其中，紫外光激发的钙离子荧光指示剂有Fura 2、lndo-1、Bis-fura、Ouin-2、Fura-4 F、Fura-5F、Fura-6F、Benzothiaza-1、Benzoth． Iaza-2、BTC等；可见光激发的钙离子荧光指示剂有FIno-3、Fluo-4、Fluo-5N、Rhod-5N、X-rhod-5N 、Calcium Green-1 、Calcium Green-2、Calcium Orange、Calcium Crimson、Fura Red等。Fluo-3具有Kd值较高、可见光激发、监测背景低等优点，被广泛用于荧光监测的指示剂[9]。Fluo-3/AM在与钙结合后表现为荧光强度的增加，细胞内钙离子浓度愈高，荧光愈强，细胞内钙离子浓度愈低，荧光愈弱[10]。以往测定细胞内钙离子浓度变化的方法通常是利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)来完成，但缺点是LSCM扫描采集速度慢，对培养器皿要求特殊，且价格高昂，检测成本高，对细胞伤害大。为降低长时间采集对样品造成的损伤，作者应用高灵敏度的流式细胞仪和流式细胞技术相结合，以纯化的T淋巴细胞为研究对象，选择Fluo-3/AM负载细胞，成功获得了实时监测并分析受到外界信号刺激时细胞内Ca2+ 浓度的动态变化。结果显示随着刺激信号的加入和时间的变化，Fluo-3/AM负载的T淋巴细胞内的钙离子浓度呈现动态变化。该方法能简单快速、可直接动态实时检测细胞内钙离子荧光信号，为研究细胞内的Ca2+浓度的动态变化提供了实用的解决方案和方法。 水母发光蛋白（ＡＥＱ）广泛应用于Ｃａ２＋信号监测领域己有近４０年。ＡＥＱ是由一个２２ＫＤａ大小的可结合Ｃａ２＋的脱辅基发光蛋白和辅基腔肠素（ＣＴＺ）组成的，在有
血钙测定的正常值和临床意义
参考值：血清总钙：2.25～2.75mmol／L 离子钙：0.94～1.26mmol／L 临床意义：（1）血清钙升高：高血钙症比较少见，引起血钙增加的原因有溶骨作用增强，小肠吸收作用增加以及肾对钙的吸收增加等。可见于下述情况。1）原发性甲状旁腺功能亢进，产生过多的甲状旁腺素，多见于甲状旁腺腺瘤，x线检查可见骨质疏松等情况。2）甲状旁腺素异位分泌：某些恶性肿瘤可以分泌甲状旁腺素，如肾癌、支气管癌等，但此种情况如未发现原发癌瘤，则很难诊断。3）恶性肿瘤骨转移是引起血钙升高最常见的原因。多发性骨髓瘤，乳腺癌、肺癌等伴有骨转移时有大量骨质破坏，而肾和肠又不能及时清除过多的钙，遂引起高血钙。4）维生素D中毒，多因治疗甲状旁腺功能低下或预防佝偻病，长期大量服用维生素D时而引起，但此种情况是可以避免的。5）其他：此外高血钙还可见于类肉瘤病、肾上腺功能不全、急性肾功能不全、酸中毒、脱水等情况。（2）血清钙减低；低血钙症临床上较多见，尤多见于婴幼儿。1）甲状旁腺功能低下：可见于原发性甲状旁腺功能低下、甲状腺切除手术后、放射性治疗甲状腺癌时伤及甲状旁腺等情况。血清钙可降到1.75 mmol ／L以下，血磷可增高。2）维生素缺D缺乏：常见原因有食物中维生素D缺乏，阳光照射少，消化系统疾患导致维生素D缺乏。维生素D缺乏时，钙、磷经肠道吸收少，导致血钙、血磷降低。而血钙降叉引起甲状旁腺功能继发性亢进，这样虽能使血钙维持在近于正常水平，但磷大量从肾排出，引起血磷下降，使得钙、磷乘积下降。婴幼儿缺乏维生素D可引起佝偻病，成人引起软骨病。3）新生儿低血钙症：是新生儿时期常见惊厥原因之一。多发生于生后一周内。4）长期低钙饮食或吸收不良：严重乳糜泻时，食物中的钙与未吸收的脂肪酸结合，生成钙皂，排出体外，造成低钙。5）严重肝病、慢性肾病、尿毒症、远曲小管性酸中毒等时血清钙可下降，血浆蛋白减低时可使非扩散性钙降低。6）血pH可影响血清游离钙浓度，碱中毒pH升高时血清游离钙和性成分结合加强，虽然总钙不变但离子钙下降是碱中毒时产生手足抽溺的主要原因。如有酸中毒，pH下降，游离钙浓度可相对增加。
鸡蛋壳中钙离子的含量测定
鸡蛋壳中钙离子含量的测定 一.实验目的 1 ?学习固体试样的酸溶方法； 2. 掌握络合滴定法测定蛋壳中钙方法原理； 3. 了解络合滴定中，指示剂的选用原则和应用范围。 二.实验原理 1鸡蛋的主要成分是碳酸钙，含钙量约90—98% 2.EDTA滴定原理：在pH>12.5时，Mg2+生成Mg（OH）2沉淀，在用沉淀掩蔽镁 离子后，用EDTA单独滴定钙离子。钙指示剂与钙离子显红色，灵敏度高，在 pH=12~13滴定钙离子，终点呈指示剂自身的蓝色。 其变色原理为： 滴定前Ca + In （蓝色）==Caln （红色） 滴定中Ca + 丫 == CaY 滴定时Caln （红色）+ 丫 == CaY + In （蓝色） 三.实验试剂及仪器 1. 1 HCI溶液1:1 HCl溶液5 ml 40g/L NaOH溶液钙指示剂三乙醇胺溶 液乙二胺四乙酸二钠CaCO3优级纯 2. 50 mL小烧杯100 ml容量瓶250ml锥形瓶*3 ; 500mL试剂瓶 钙指示剂 四.实验步骤 1、鸡蛋壳的溶解：称取0.22~0.23g左右鸡蛋壳洗净取出内膜，烘干，研碎称量其质量，然后将其放入50 mL小烧杯中，加入5ml 1 : 1 HCI溶液，微火加热将其溶解，冷却，然后将小烧杯中的溶液转移到100ml容量瓶中，定容摇匀。 2、（1）EDTA标准溶液的标定： a. 浓度为0.0200 mol/L的EDTA标准溶液的配置：称取EDTA二钠盐4.0000g 溶解于温水中，冷却后加入到试剂瓶中，稀释到500ml，摇匀。 b. 0.020 mol/L钙标准溶液的配置：准确称取0.2~0.22克的分析纯CaCO3固体试剂，置于50 ml烧杯中，先用少量水润湿，然后加1:1 HCl溶液2—3 ml，将溶液定量转移到100 ml容量瓶中，用去离子水稀释到刻线，摇匀。根据称取的CaCO3 质量计算出钙离子标准溶液的浓度。 c. EDTA标准溶液的标定：用移液管吸取25.00ml钙离子标准溶液，于250ml锥形瓶中，加入5 ml 40g/L NaOH溶液及少量钙指示剂，摇匀后，用EDTA溶液滴定至溶液由酒红色恰变为纯蓝色，即为终点，记下消耗的EDTA体积V1。按照以上方法重复滴定3次，要求其相对平均偏差不大于0.2 %，根据标定时消耗的EDTA溶液的体积计算它的准确浓度。 （2）Ca2+的滴定：用移液管移取25.00ml待测溶液于锥形瓶中，调节溶液pH 为12~13,充分摇匀，加入5滴钙指示剂，用EDTA标准溶液滴定至溶液由酒红色变为纯蓝色为终点，记下体积V2，重复滴定3次，记录消耗EDTA溶液的体积。
细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书中文版
细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂是一种旨在通过线粒体钙离子特异性荧光探针Rhod-2，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定细胞线粒体中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体细胞（动物、人体等）内线粒体钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。 技术背景 钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。在细胞内，钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。其中线粒体钙离子在调节线粒体代谢、保持线粒体的A TP产量达到细胞需求，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。线粒体钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求，以及需要线粒体纯化。Rhod-2，罗丹明123（rhodamine 123）的衍生产物，一种与钙离子结合产生荧光，同时其正电荷特性，特异性地聚集在线粒体里，由此用于测定线粒体内钙离子水平。在荧光分光光度仪下，激发波长550nm，散发波长590nm，来定量测定线粒体的钙浓度。 产品内容 清理液（Reagent A）40毫升 染色液（Reagent B）30微升 介导液（Reagent C）600微升 饱和液（Reagent D）2毫升 阴性液（Reagent E）2毫升 产品说明书1份 保存方式 保存染色液（Reagent B）和介导液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月 用户自备 1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器 细胞培养箱：用于染色孵育 黑色96孔板：用于样品操作的容器
两种不同检测方法测定血清钙离子的比较
两种不同检测方法测定血清钙离子的比较【摘要】为了比较在宁夏彭阳县人民医院检验科实验室两种血清钙离子检测方法的分析性能，分别采用恒星科技公司HX-7185K/NA/CL/GA/PH Analyzer分析仪的离子选择电极法(简称恒星)和上海爱诺电子有限公司MOL—300全自动生化分析仪及配套出品的甲基麝香草酚蓝比色法试剂盒(简称爱诺)进行测定，比较指标为不精密度、线性范围、抗干扰性、相关及偏倚。结果，血清钙离子浓度在0～3.95mmol/L时，两家分析仪在本实验室总的变异系数(CV)＜5%，检测线性范围为0～4.0mmol/L。血红蛋白＜10g/L、胆红素＜300mg/L、维生素C＜5 g/L，对两分析方法检测干扰＜10%，在可接受范围内。甘油三酯(TG)＜20 mmol/L时恒星不受影响(干扰＜10%)。爱诺TG＞15mmol/L时低值血清干扰＞10%，高值血清不受干扰。50份血样进行相关分析的结果显示恒星和爱诺测定血清钙离子的相关性良好(r=0.98，P＜0.01)。恒星较爱诺测定血清钙离子结果偏低，平均偏倚为0.19，线性回归分析Cusum检验显示两种方法间偏移无统计学意义(P＞0.05)。实验室温度变化±5℃恒星测定血清钙离子结果不受影响而爱诺受温度影响较大，对同一份样本用恒星与爱诺测定血清钙离子的最小至最大偏差范围为1.3%～20%，平均为4.1%。本实验室两种不同检测方法测定血清钙离子的精密度、线性范围、抗干扰性符合要求。 【关键词】血清钙离子；离子选择电极法；比色法 宁夏彭阳县人民医院检验科实验室原有一台恒星科技公司HX-7185K/NA/CL/GA/PH Analyzer分析仪，现又购买一台上海爱诺电
激光共聚焦扫描显微镜技术在大鼠皮层神经元细胞内钙离子浓度动态测定中的应用
?５３０? ?实验研究? 激光共聚焦扫描显微镜技术在大鼠皮层神经元细胞内钙离子浓度动态测定中的应用 武美娜李新毅白玮郭芬祁金顺 【摘要】目的探讨激光共聚焦扫描显微镜（ＬＣＳＭ）技术在动态测定神经元细胞内钙离子浓度中的应用。方法采用原代培养大鼠皮层神经元，用ＬＣＳＭ测定给ＫＣＩ前后细胞内钙离子浓度的动态变化。结果培养神经元状态良好。用ＬＣＳＭ准确、稳定、可靠地测出细胞内钙离子浓度的动态变化。结论ＬＣＳＭ在动态测定神经元细胞内钙离子浓度中具有明显优势。 【关键词】显微镜检查，共焦；细胞内钙离子浓度；皮层神经元 ＵｓｅｏｆＩａｓｅｒｅｏｎｆｏｃａｌｓｃａｎｎｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙｆｏｒｄｙｎａｍｉｃｓｔｕｄｙｏｆｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｒａｔｃｏｒ－ｔｉｃａｌｎｅｕｒｏｎｓＷＵＭｅｉ－ｎａ＇，ＬＩＸｉｎ一蚋，ＢＡｌＷｅｉ，ＧＵＯＦｅｎ，ＱＩＪｉｎ－ｓｈｕｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ）＇，Ｔａｉｙｕａｎ０３０００１．Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｄｏｃｕｍｅｎｔｔｈｅｐｒｏｍｉｓｅｓｏｆｌａｓｅｒｃｏｎｆｏｃａｌｓｃａｎｎｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（ＬＣＳＭ）ｉｎｄｙｎａｍｉｃｓｔｕｄｙｏｆ ｉｎｔｒａｅｅｌｌｕｌａｆｃａｌｃｉｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（『Ｃａ邳）ｊｎｎｅｕｒｏｎｓｓｕｂｊｅｅｔｅｄｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｒｕｇａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＬＣＳＭｗａｓｕｓｅ（１ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｏｆｆＣａ２ｑｉｉｎｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｄｃｏｒｔｉｃａｌｎｅｕｒｏｎｓｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒＫＣＩｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｃｕｌｔｕｒｅｄｎｅｕｒｏｎｓｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｇｒｏｗｔｈｓｔａｔｕｓ．Ａｃｃｕｒａｔｅ，ｓｔａｂｌｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓｏｆｄｙｎａｍｉｃ『Ｃａ２＋］ｉｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｕｓｉｎｇＩ￡ＳＭ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＬＣＳＭｔｅｃｈｎｉｑｕｅｍａｙｓｈｏｗｐｒｏｍｉｓｅｓｆｏｒｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｄｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｉｎｆＣａ２＋］ｉ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＣＯｌｌｆｏｃａｌ；ＩｎｔｒａｃｅＵｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ；Ｃｏｒｔｉｅａｌｎｅｕｒｏｎｓ Ｃａ２＋是细胞内最为重要的阳离子和第二信使之一。它对于神经递质释放、神经元之间信息传递和神经元存活等都具有重要意义。神经元细胞内游离Ｃａｚ＋浓度（［Ｃａ：＋３ｉ）异常升高是导致胞内钙稳态失调和细胞死亡的重要因素…，因而观察神经元［Ｃａ２＋］ｉ的变化是神经生理学研究中的一个重要内容。然而。目前采用的一些测定细胞内钙离子浓度的方法．如Ｃａ“活化的发光蛋白法、偶氮染料法、ｃａ：＋选择性微电极测定法、发射示踪法、核磁共振法、荧光标记法等各有优势，但同时也有不足之处【引。 激光共聚焦扫描显微镜（１ａｓｅｒｃｏｎｆｏｃａｌｓｃａｎｎｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ＬＣＳＭ）是２０世纪８０年代诞生的一种先进的细胞生物学分析仪器。利用紫外光或可见光激 基金项目：国家自然科学基金科学部主任基金资助项目（３０７４００９５）；教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助项目（２００６０１１４００４）；山西省自然科学基金资助项目（２００６０１１０５）；山西省重点实验室开放基金资助项目（２００６０３０１２） 作者单位：０３０００１太原，山西医科大学生理教研室（武美娜、郭芬、祁金顺）；山西医科大学第一医院神经内科（李新毅）；山西省肿瘤医院病理科（白玮） 通讯作者：祁金顺：发荧光探针，计算机进行图像处理。可以对活细胞生理信号、离子含量如Ｃａ嗽度进行实时动态分析检测。ＬＣＳＭ具有高灵敏度、高分辨率、高放大倍数的特点。可进行定性、定量、定时、定位的分析测量，是近代生物医学技术最重要的发展之一。因此，它已成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学和遗传学等领域新一代强有力的研究工具［，，４｜。ＬＣＳＭ的一个显著优点是可以对同一样品平面随时间进行连续扫描。进而分析细胞结构或细胞内离子含量的动态变化。对细胞内Ｃ矿的动态测定，要求仪器具有实时、连续测定的能力。本文介绍使用ＬＣＳＭ在原代培养大鼠皮层神经元细胞内Ｃａ２＋浓度动态测定中的具体应用及其优势。 １材料和方法 １．１大鼠皮层神经元的原代培养：取新生１～３ｄＷｉｓｔａｒ大鼠，无菌条件下分离大脑皮层，剪碎（＜ｌｉｎｌｎ，）。以终浓度为０．０３２５％的胰蛋白酶消化（３７℃，５—１０ｍｉｎ），用含胎牛血清的培养基终止消化，火抛光的Ｐａｓｔｅｕｒ吸管轻轻吹打１０～２０次，静置沉淀３～５ｍｉｎ．取上液２００目筛网过滤后１０００ｒ／ｍｉｎ离心５
鸡蛋壳中钙离子的含量测定
鸡蛋壳中钙离子的含量 测定 文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]
鸡蛋壳中钙离子含量的测定 一．实验目的 1．学习固体试样的酸溶方法； 2．掌握络合滴定法测定蛋壳中钙方法原理； 3．了解络合滴定中，指示剂的选用原则和应用范围。 二．实验原理 1鸡蛋的主要成分是碳酸钙，含钙量约90—98% 滴定原理：在pH>时，Mg2+生成Mg(OH)2 沉淀，在用沉淀掩蔽镁离子后，用EDTA单独滴定钙离子。钙指示剂与钙离子显红色，灵敏度高，在pH=12~13滴定钙离子，终点呈指示剂自身的蓝色。 其变色原理为： 滴定前 Ca + In（蓝色）==CaIn（红色） 滴定中 Ca + Y == CaY 滴定时 CaIn（红色） + Y == CaY + In（蓝色） 三．实验试剂及仪器 1. 1 HCl溶液 1:1 HCl溶液 5 ml 40g/L NaOH溶液钙指示剂三乙醇胺溶液乙二胺四乙酸二钠 CaCO3优级纯 2. 50 mL小烧杯 100 ml容量瓶 250ml锥形瓶*3； 500mL试剂瓶 钙指示剂 四．实验步骤
1、鸡蛋壳的溶解: 称取~左右鸡蛋壳洗净取出内膜，烘干，研碎称量其质量，然后将其放入50 mL小烧杯中，加入5ml 1：1 HCl溶液，微火加热将其溶解，冷却，然后将小烧杯中的溶液转移到100ml容量瓶中，定容摇匀。 2、（1）EDTA标准溶液的标定： a. 浓度为 mol/L的EDTA标准溶液的配置：称取EDTA二钠盐4.0000g溶解于温水中，冷却后加入到试剂瓶中，稀释到500ml，摇匀。 b. mol/L钙标准溶液的配置：准确称取~0.22克的分析纯CaCO3固体试剂，置于50 ml 烧杯中，先用少量水润湿，然后加1:1 HCl溶液2—3 ml，将溶液定量转移到100 ml容量瓶中，用去离子水稀释到刻线，摇匀。根据称取的CaCO3质量计算出钙离子标准溶液的浓度。 c. EDTA标准溶液的标定：用移液管吸取钙离子标准溶液，于250ml锥形瓶中，加入5 ml 40g/L NaOH溶液及少量钙指示剂，摇匀后，用EDTA溶液滴定至溶液由酒红色恰变为纯蓝色，即为终点，记下消耗的EDTA体积V1。按照以上方法重复滴定3次，要求其相对平均偏差不大于 %，根据标定时消耗的EDTA溶液的体积计算它的准确浓度。（2）Ca2+ 的滴定：用移液管移取待测溶液于锥形瓶中，调节溶液pH为12~13，充分摇匀，加入5滴钙指示剂，用EDTA标准溶液滴定至溶液由酒红色变为纯蓝色为终点，记下体积V2 ，重复滴定3次，记录消耗EDTA溶液的体积。
钙片中钙含量的测定
原子吸收光谱分析钙片中钙含量的测定 高伟 环境工程0801 200829090119
钙离子在人体中的作用 钙离子是维持机体细胞正常功能的非常重要的离子，它对于维持细胞膜两侧的生物电位，维持正常的神经传导功能。维持正常的肌肉伸缩与舒张功能以及神经－肌肉传导功能，还有一些激素的作用机制均通过钙离子表现出来。 1、维持正常的肌细胞功能，保证肌肉的收缩与舒张功能正常。 2、对于心血管系统，钙离子通过细胞膜上的钙离子通道，进入胞内，通过一系列生化反应，主要是有加强心肌收缩力，加快心率，加快传导的作用。因而，细胞外钙离子浓度高则会升高血压，使心收缩力加强，每博输出量增大，因而血压也会相应增高。重要的抗高血压药物有一种便是钙离子拮抗剂，它使得钙离子通过细胞膜上的钙通道的数量减少，使得心肌收缩力减弱，心率降低，血压下降。其他心血管系统疾病还有充血性心力衰竭、心律失常等，病因均与钙离子关系密切。 4、钙离子对与骨骼的生长发育有着重要的作用，在年轻时，这主要受激素（降钙素、甲状旁腺素等）的调节。老年人骨骼钙易流失，因此骨骼变脆，变得容易骨折。 科学补钙： 据全国营养调查，我国31个省、市、自治区平均每人每天摄入钙为406mg。儿童、幼儿钙摄入量为平均每天322mg，低于全国人平均钙摄入量，仅为国家推荐量的40%。（我国钙日标准推荐量：6个月以下的婴儿为400mg，6个月～3岁为600mg，3～11岁为800mg，11～
13岁为1000mg，13～16岁为1200mg） 新生儿 新生儿的体重和身高增长速度较快，需要补钙。3.0-2岁的宝宝户外活动时间少，饮食还不够丰富，对钙的吸收就会缺乏，此阶段因缺钙而发生佝偻病或佝偻病症状的可能性特别高，因此也需要服用补钙产品。 女性 女性缺钙从30岁开始，到了40岁以后，每年丧失骨质约1%，在更年期后，骨质丧失进一步加重，导致骨质疏松。目前我国孕妇和哺乳妇女平均每日钙摄入量仅为国家钙日推荐量的50%（我国钙日推荐量孕妇早期为1000mg、晚期及乳母为1500mg）。女性在妊娠期，摄取的钙除满足自身代谢所需还要通过胎盘供给胎儿生长发育。哺乳期则满足自身需要外还要通过母乳供给婴儿。 中老年人 缺钙是造成老年人变矮、或者掉牙的直接原因之一。缺钙则引起骨质疏松、老年人椎骨及椎间盘组织逐步退化，椎骨出现骨质疏松，而椎间盘则失去弹性、受压而变薄，体重的压力使椎骨上下受压而变扁，身高变矮，出现驼背。同时，牙龈萎缩，牙根暴露，牙骨质减少，小颌骨及下颌骨骨质疏松，使牙槽窝变浅变大，导致牙齿松动，以至脱落。老年人由于骨中的钙质疏松，因此很容易骨折。 补钙须知 1.补钙必须要加维生素D
血清钙检测
血清钙检测 发表时间：2011-04-18T16:43:01.737Z 来源：《中外健康文摘》2011年第1期作者：阚秀梅1 马艳2 程爱华2 [导读] 血清中的钙离子在碱性溶液中与甲基百里香酚蓝结合，生成一种蓝色的络合物。 阚秀梅1 马艳2 程爱华2 （1黑龙江哈尔滨市儿童医院 150010) (2黑龙江哈尔滨市传染病医院 150030） 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)01-0237-02 【关键词】血清钙钙含量测定 (一)甲基百里香酚蓝比色法(MTB) 1.原理血清中的钙离子在碱性溶液中与甲基百里香酚蓝(MTB)结合，生成一种蓝色的络合物。加入适量8-羟基喹啉，可消除镁离子对测定的干扰，与同样处理的钙标准液进行比较，求得血清总钙含量。 2.试剂 (1)甲基百里香酚蓝贮存液：称取8-羟基喹啉4.0 g溶于50 ml去离子水中，再加浓硫酸5 ml，搅拌促使其溶解，移入1 L容量瓶中，加甲基麝香草酚蓝0.2 g，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)6.0 g，最后用蒸馏水稀释至刻度，贮存于棕色瓶中，置冰箱保存。 (2)碱性溶液：取二乙胺溶液35 ml于l L容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，在室温保存。 (3)显色应用液：临用前，根据标本量取l液1份与2液3份混合即可。 (4)钙标准液(2.5 mmol／L)：精确称取经110％干燥12小时的碳酸钙250 mg，置于1 L容量瓶内，加稀盐酸(1份浓盐酸加9份去离子水)7 ml溶解后，加去离子水约900 ml，然后用500g/L醋酸铵溶液调节至pH 7.0，最后加去离子水至刻度混匀。 (二)邻-甲酚酞络合铜直接比色法 1.原理邻-甲酚酞络合铜(OCPC)是金属络合染料，也是酸碱指示剂，在pH 11.0溶液中与钙及镁螯合，生成紫红色螯合物。做钙测定时，在试剂中加入8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰。与同样处理的钙标准液比色，可求得血清钙含量。 2.试剂 (1)邻-甲酚酞络合铜显色剂：称取8-羟基喹啉0.5 g，置烧杯中，加浓盐酸5 ml，使其溶解并转入500 ml容量瓶中，再加入邻甲酚酞络合铜25 mg，待完全溶解后，加Triton X-100 1 ml，混匀，然后加去离子水至刻度，置聚乙烯瓶内保存。 (2)1 mol／L AMP碱性缓冲液：称取2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)89.14 g，加500 ml去离子水溶解后移入l L容量瓶中，再用去离子水稀释至刻度，置聚乙烯瓶中室温保存。 (3)显色应用液：应用时根据标本的多少将上述两液等量混合。 (4)钙标准液(2.5 mmol／L)：见MTB法。 (5)5g／L EGTA溶液：称取乙二醇二乙醚二胺四乙酸盐(EGTA)0.5 g于100 ml去离子水中，此试剂用于测定浑浊标本。 (三)乙二胺四乙酸二钠滴定法 1.原理标本中钙离子在碱性溶液中与钙红指示剂结合成为可溶性复合物，使溶液成淡红色。乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-2Na)对钙离子的亲和力很大，能与该复合物中的钙离子络合，指示剂重新游离而使溶液呈现蓝色。所以在滴定钙时，加入钙红为淡红色，用EDTA-Na2滴定转变为蓝色时，为滴定终点。与同样处理的钙标准液滴定，计算出标本中钙的含量。 2.试剂 (1)0.2 mol／L的氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠8 g，用去离子水溶解并稀释至l L。 (2)钙红指示剂：称取钙羧酸钠[化学名2-羟基.1.(2-羟基4-磺基-1-萘基偶氮)-3-萘甲酸钠]0.1 g，溶于甲醇20 ml中，置棕色瓶中保存。 (3)乙二胺四乙酸二钠溶液：称取EDTA-Na2 0.1 g，加去离子水50 ml，加1 mol／L氢氧化钠2 ml，待完全溶解，加去离子水至100 ml。 (4)钙标准液(2.5 mmol／L)：配法同MTB法。 (四)离子钙测定 1.原理离子选择电极是一种化学传感器，它能将溶液中某种特定离子的活度转变成电位信号，然后通过仪器来测量。电极电位随溶液中离子活度变化的关系服从Nemst方程。 选择电极的电位(E)与溶液中被测离子活度的对数成线性美系。 2.试剂各厂家生产的仪器所需试剂都是配套供应的，其配方未完全公开。 3.操作商品的离子钙分析仪所用的钙电极都采用中性载体做钙电极的活性材料制成聚氯乙烯(PVC)电极。 参考文献 [1]徐国宾，蒋琳.临床生物化学常规定量方法的分析性能评价［J］.中华检验医学杂志，2007，30：141-143. [2]于嘉屏.全自动生化分析仪及试剂间化学污染对测定结果的影响［J］.中华检验医学杂志，2007，30：1301-1302. [3]蒋文英，李泽孟，樊雪英.日立7170A全自动生化分析仪防交叉污染程学序的设计［J］.现代检验医学杂志，2003，18：36-37. [4]于雷.全自动生化分析仪项目间试剂的交叉污染及其避免方法［J］.临床检验杂志，2003，21：168. [5]李浩，缪应业，郭昭静.生化全自动分析仪分析顺序对检测结果的影响［J］.临床检验杂志，2001，19：212.
钙离子测定
第一章钻井液原材料及处理剂 第一节钻井液原材料及处理剂简介 第二节钻井液原材料及处理剂质量检验相关参数 四、钙离子测试 （一）测定意义 钻井液原材料及处理剂中钙盐主要作为无机絮凝剂及页岩抑制剂。首先利用钙盐可以制备抑制型钻井液，在水敏地层，抑制泥页岩的水化膨胀。其次可以配制化学处理剂，同聚合物配合使用，提高其抗盐、抗钙能力。此外在钻井液中大量引入钙离子时，可以堵塞岩石细小裂缝，减少漏失。[王平全, 周世良编著. 北京: 石油工业出版社.2003. 9. 第39页] 但是当钙离子过多时，钻井液则会遭受到钙侵，导致分散钻井液立即失去良好的流动性，滤失量剧增，泥饼厚度增加，且结构松散。[鄢捷年主编.钻井液工艺学.东营:中国石油大学.2001.5.第160页]当污染严重时，会严重影响钻井液的流变和滤失性能，还会加剧对钻具的损坏和腐蚀。[鄢捷年主编. 钻井液工艺学. 东营: 中国石油大学. 2001.5. 第153页]因此钻井液及钻井液原材料中钙离子的含量的测定具有重要的意义。 （二）测试方法 首先钙离子易与钠蒙脱石中钠离子发生离子交换，使其转化为钙蒙脱石，而钙离子的水化能力比钠离子要弱的多，因此钙离子的引入会使蒙脱石絮凝程度增加，致使钻井液的黏度、切力和滤失量增大。其次钙离子本身是一种无机絮凝剂，会压缩粘土颗粒表面的扩散双电层，使水化膜变薄，电位下降，从而引起粘土晶片面-面和端-面聚结，造成粘土颗粒分散度下降。[鄢捷年主编. 钻井液工艺学. 东营: 中国石油大学. 2001.5. 第159页] 钙离子可通过以下途径进入钻井液即钻遇石膏层，钻遇盐水层，因地层盐水
中一般含有钙离子，钻水泥塞，因水泥凝固后产生氢氧化钙，使用的配浆水是硬 水，石灰用做钻井液添加剂。[鄢捷年主编. 钻井液工艺学. 东营:中国石油大学. 2001. 5. 第153页] 在钻井液及其材料中对钙离子检测时通常采用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)配位滴定法，即在强碱性溶液中用EDTA滴定Ca2+，反应方程式为 -2 -4 + 2CaY Y + Ca 。乙二胺四乙酸简称EDTA，或EDTA酸，常用H 4 Y表示。其配位原子分别为N原子和-COOH中的羧基O原子。在水溶液中，乙二胺四乙酸 两个羧基上的质子转移到氮原子上，形成双偶极离子。H 4 Y在水中的溶解度太低（295K时每100mL水溶解0.02g），难以满足常量分析要求。所以滴定剂常采用 二钠盐Na 2H 2 Y.2H 2 O，也称EDTA。它在水溶液中的溶解度较大，295K时每100mL 水可溶解11.2g，此时溶液的浓度约为0.3mol/L，pH约为4.4。 其发生配位反应时，水溶性好，反应速率较快并且其产物稳定。[赵国虎.许辉主编.分析化学.北京:中国农业出版社.2008.1.第98-101页] 1.试剂和仪器 本文主要涉及的试剂仪器有EDTA标准溶液，氧化锌基准物质，氢氧化钠溶液，硬度指示剂溶液，冰醋酸，掩蔽剂即按一定体积比混合的三乙醇胺、四乙烯基戊胺和蒸馏水，铬黑T，氨-氯化铵缓冲溶液，四乙烯基戊胺和蒸馏水的混合液，pH试纸，次氯酸钠溶液，移液管（按计量检定规程要求定期检定），电炉。 2.主要试验步骤 (1).乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准滴定溶液的配制与标定 1).配制 根据下表1-1，按下述规定量称取乙二胺四乙酸二钠，溶于1000mL水中，摇匀。 表1-1 配制成拟定浓度的乙二胺四乙酸二钠与其质量对照表
Fluo-3 AM_钙离子荧光探针_
Fluo-3 AM (钙离子荧光探针) 产品简介： Fluo-3 AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。分子式为C51H50Cl2N2O23，分子量为1129.85。 Fluo-3和Fura-2相比，其优点是：一方面可以被氩离子激光(argon-ion laser)的488nm激发光激发，便于检测；另一方面，Fluo-3和钙离子结合后荧光变化更强，即对钙离子浓度变化的检测更加灵敏；同时，Fluo-3和钙离子的结合能力较弱，这样可以比Fura-2检测到细胞内更高浓度的钙离子水平；此外，对于细胞内的钙离子的即时变化反应得更加准确，减小了因为和钙离子解离速度慢而导致的荧光变化滞后。 本Fluo-3 AM (钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存液，浓度为5mM。 Fluo-3 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。 Fluo-3 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506nm，最大发射波长为526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为525-530nm。Fluo-3的激发光谱和发射光谱参考下图。 用于细胞内钙离子检测时，Fluo-3 AM的常用浓度为0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM的适当溶液和细胞一起在20-37℃孵育15-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-3 AM在细胞内完全转变成Fluo-3。 保存条件： -20℃避光保存，6个月有效。 注意事项： 本Fluo-3 AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用本产品的文献： 1. Li H, Wang L, Ye L, Mao Y, Xie X, Xia C, Chen J, Lu Z, Song J. Influence of Pseudomonas aeruginosa quorum sensing signal molecule N-(3-oxododecanoyl) homoserine lactone on mast cells.
血钙浓度检测试剂盒使用说明
血钙浓度检测试剂盒使用说明 分光光度法货号：BC0720 规格：50管/48样 产品内容： 试剂一液体×1瓶，4℃保存。 试剂二液体×1瓶，4℃保存。 试剂三液体×1瓶（空瓶，试剂自备）。取30mL试剂瓶，依次加入27mL无水甲醇和3mL丙酮，盖紧混匀即可。 标准液液体×1瓶3μmol/L,4℃保存。 产品说明： 血钙几乎全部存在于血浆中，所以血钙指血浆钙。血浆钙有离子钙和结合钙两种形式，其中只有离子钙直接起生理作用，它与结合钙处于动态平衡，并受血液PH的影响。血钙水平与多种重要的生理功能相关，过高或过低都会影响正常生理功能。本试剂盒用于检测血液中游离钙浓度。 在强碱溶液中游离钙与GBHA反应生成红色钙-GBHA复合物在520nm有吸收峰；通过测定520nm吸光度计算游离钙浓度。 自备仪器和用品： 可见分光光度计、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、无水甲醇、丙酮和蒸馏水。 血钙浓度测定操作 1.分光光度计预热30min以上调节波长到520nm蒸馏水调零。 2.空白管：1mL玻璃比色皿依次加入蒸馏水50μL试剂一200μL混匀后再加入试剂二
200μL，混匀；最后加入试剂三400μL，混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A空白管。做一个空白管即可。 3.标准管：1mL玻璃比色皿依次加入标准液50μL试剂一200μL混匀后再加入试剂二 200μL，混匀；最后加入试剂三400μL，混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A标准管。做一个标准管即可。 4.测定管：1mL玻璃比色皿依次加入血液样品50μL试剂一200μL混匀后再加入试剂 二200μL，混匀；最后加入试剂三400μL，混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A测定管。 注意：加试剂三后应该在30min内完成该管的测定。 血钙浓度计算： 血钙含量(μmol/dL血液)=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V样品总=300×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) C标准液：3μmol/mL；V样总样品总体积，1dL=100mL。 注意事项： 1、宜早晨空腹采血并且采血后应该尽快完成测定。 2、静止5分钟后立即测定。 3、加入试剂三后，应该在30min内完成该管的测定。 4、最低检出限为1mmol/L。
血清钙测定标准操作规程
总钙测定标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：血清总钙测定(缩写CA)；组合项目申请：血电解质全套测定组合。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1标本采集 2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3急诊标本应记录采集时间、送检时间、接收时间。 2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5下列标本为不合格标本 2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2标本保存 2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。 2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下至少稳定24h，普通冰箱中（2～8℃）稳定一周，-20℃冰冻条件下可稳定一年。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 2.3标本采集的注意事项 2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。 2.3.2不建议采集抗凝血标本，尤其不能使用EDTA，柠檬酸钠，氟化钠或草酸盐抗凝剂。3方法原理 本法基于金属色原偶氮胂Ⅲ的比色测定，在碱性条件下，游离的偶氮胂Ⅲ在溶液中呈玫瑰红色，与钙络合后形成紫蓝色偶氮胂Ⅲ-Ca2+复合物，在650nm波长比色测定。复合物显色强弱与标本中钙浓度成正比。 4 试剂及其他用品 4.1试剂：偶氮胂Ⅲ法测定钙试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。 4.2试剂盒保存：保存于2～25℃，不开盖情况下至标签的失效期。开盖后放于仪器的试
分析化学实验钙离子测定
实验目的 1、了解钙片中钙含量的测定方法 2、对比高锰酸钾法与EDTA法测定钙含量的优劣 二、实验原理 1、高锰酸钾法测定钙含量： 利用某些金属离子（如碱土金属、Pb2+、Cd2+等）与草酸根能形成难溶的草酸盐沉淀的反应，可以用高锰酸钾法间接测定它们的含 量。反应如下：Ca2+ + C2O42-二CaC2O U C2O42+ H2SO4 二CaSO4 H2C2O45H2C2O4 2MnO 42- + 6H+=2 MnH 1OCO0 + 8H2O 用该法可测定钙片中的钙的含量。 2、EDTA测定钙含量： 碳酸钙与盐酸反应后将溶液转移至容量瓶中并稀释，制成钙标准溶液。吸取一定量钙标准溶液，调节酸度至pH> 12,用钙指示剂， 以EDTA溶液滴定至溶液由酒红色变纯蓝色，即为终点。 三、实验步骤： 1、高锰酸钾法测定钙含量： （1）高锰酸钾浓度的标定 准确称取一定量的干燥过的草酸钠基准物与250mL隹形瓶中，加水10mL使之溶解，再加30mL 1mol - mL硫酸溶液，并加热至有蒸气冒出（约75~85C）,立即用代标定的高锰酸钾溶液滴定。开始滴定时反应速度慢，没加入一滴高锰酸钾溶液，都摇动锥形瓶，使高锰酸钾盐酸退去，在继
续滴定。待溶液产生锰离子后，滴定速度可加快，但临近终点时，滴定速度要减慢，同时充分摇匀，直到溶液呈现微红色，并持续半分钟不褪色，即为终点，记录滴定所耗用的高锰酸钾体积。根据草酸钠基准物的质量和消耗的高锰酸钾溶液的体积计算高锰酸钾溶液的浓度。 （2）钙离子含量的测定 准确称取钙片三份（每份含钙约0.05 g ），分别置于250 mL烧杯中，加入适量蒸馏水及HCI溶液，加热促使其溶解。于溶液中加入2?3滴甲基橙，以NH3水中和溶液由红转变为黄色，趁热逐滴加约50 mL （NH4）2C2O4在低温电热板（或水浴）上陈化30 min。冷却后过滤（先将上层清液倾入漏斗中），将烧杯中的沉淀洗涤数次后转入漏斗中，继续洗涤沉淀至无CI-（承接洗液在HN03介质中以AgNO3检查）,将带有沉淀的滤纸铺在原烧杯的内壁上，用50 mL 1 mol ? L-1 H2SO4把沉淀同滤纸上洗入烧杯中，再用洗瓶洗2次加入蒸馏水使总体积约100 mL,加热至70?80 C,用KMnO4标准溶液滴定至溶液呈淡红色，再将滤纸搅入溶液中，若溶液褪色，则 继续滴定，直至出现的淡红色30 s内不消失即为终点。 2、EDTA法测定钙含量： （1）EDTA容液的标定： 准确称取在800?1000C灼烧过得基准物ZnO 0.5?0 .6g于100mL 烧杯中，用少量水润湿，然后逐低加入1+1HCI，边加边搅拌至完全 溶解为止。然后，将溶液定量转移入250mL容量瓶中，稀释至刻度并摇