细胞实验报告

西南大学《细胞生物学自主实验》

课程论文

论文题目：人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析

学院：生命科学学学院

专业：生物科学（师范）

班级：2012级3班

姓名：张萌

学号：222012317011060

人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析

【摘要】本文主要介绍通过对人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析，初步了解到对人体外周淋巴细胞培养方法与人类体细胞染色体核型分析的方法。采用人工离体培养的方法，采集人体外周血淋巴细胞，在加有植物血球凝集素（PHA ，刺激小淋巴细胞转化为淋巴母细胞而进行有丝分裂）的培养基中培养，经过恒温培养，秋水仙素处理、低渗和固定，获得大量有丝分裂中期细胞，最后经空气干燥法制片，对人体外周淋巴细胞进行染色体核型分析。

【关键词】人体外周血淋巴细胞染色体核型分析细胞培养

1 综述

细胞培养是在体外模拟体内的生理环境培养从机体中取出的细胞并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。要使细胞能在体外长期生长必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度、注意外环境酸碱度和渗透压的调节；二是严格控制无菌条件。

染色体是组成细胞核的基本物质,是基因的载体。人类细胞遗传学研究的主要对象是染色体。本实验采用了微量全血培养技术，既方便又节省人力物力。在正常情况下,人外周血中是没有分裂相的,只有在异常情况下才能发现。植物血细胞凝集素(PHA)是人类淋巴细胞有丝分裂的刺激剂,在PHA作用下,原处于G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞,进而进行有丝分裂。利用PHA这一特性, 淋巴细胞经过含有

PHA培养液培养,在体外便可获得丰富的含有丝分裂的生长活跃的细胞群体,终止分裂中期的淋巴细胞,经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定就可获得大量的中期有丝分裂细胞。最后经空气干燥法制片，便可得到质量较好的染色体标本，即可得到所需的人体染色体图形。

染色体组型又称核型,是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群亚种、种、属等的体细胞内的整套染色体按它们相对恒定的特征排列起来的图像。核型模式图是指将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征绘制下来，再按长短、形态等特征排列起来的图像。染色体组型分析就是通过对染色体标本和其照片进行测量、对比分析、

代分类学、生物进化和遗传育种学等研究中是重要的研究手段。对于任何一个染色体的基本形态特征来说重要的参数有以下3个:

(1)相对长度=单条染色体的长度/(单倍体常染色体+X或Y染色体)的总长度×100%

(2)臂指数=长臂/短臂

(3)着丝粒指数=短臂/整个染色体长度×100%

数。

1.0-1.7（50.0%-37.5%）：中部着丝粒染色体；

1.7-3.0（37.5%-25.0%）：亚中部着丝粒染色体；

3.0-7.0（25.0%-12.5%）：亚端部着丝粒；

>7.0（12.5%-0.0%）：端部着丝粒染色体

人类体细胞的正常核型是含有23对染色体，共46条。其中22对是男女共有的染色体，一对为男女所不同的性染色体，男XY,女XX。

2 实验仪器试剂及材料

2.1材料:人的静脉外周血。组内选取男女各一名取血样。

2.2试剂：RPMIl640培养基（完全培养基）、浓度为10mg/ml的PHA （植物血球凝集素）、0.1mg/ml秋水仙素溶液、Giemsa染液、低渗溶液（用KCl配制）、NaHCO3（配细胞培养完全培养基时用于调PH）、Carnoy固定液（9ml纯酒精+3ml冰乙酸）等。

2.3器材：恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、分析天平、显微镜、超净工作台、移液管、离心管、培养瓶、试管架及试管、镊子、量桶、烧杯、酒精灯、染缸、染色架、胶头滴管等。

3 实验方法与步骤

3.1 RPMI-1640基础培养基的配制

RPMI-1640粉末先用约800ml三蒸水溶解，再加入其他成分混匀，定容到1000ml，用5%NaHCO3调pH至7.2，然后用过滤方式灭菌，最后分装至离心管中。

3.2实验所用药品及器皿的无菌处理

(1)实验用的所有器皿,器具都必须按规定洗净,高压灭菌处理备用。器具清洗方法：

清洗→烘干→浸酸→流水冲洗（不少于8-10次）→蒸馏水冲洗（2—3次→烘干→包装→灭菌

(2)实验用全部药品都要经高压灭菌或过滤除菌处理，具有生物活性的药品要经G6型号细菌过滤漏斗抽滤除菌,其它药品可经过高压灭菌。

3.3采取血样

选一名女组员与一名男组员去校医院各采3ml肘静脉血，采集后加入肝素后立即拿回实验室进行实验（采血时加入肝素应适中，不宜太多，医院提供）。

3.4细胞培养

向培养瓶中加入0.3ml血液，再加入培养液5ml以及PHA 47微升。置于37℃培养箱中培养66到72小时，其间每隔24小时摇一次

瓶。

3.5加入秋水仙素

在结束培养前4小时向培养瓶内加入10微升秋水仙素。

3.6收集细胞

将培养瓶从温箱取出，用吸管将贴壁细胞冲散均匀，轻轻吹打使细胞混匀，移到离心管中以1000rpm/min离心8min，弃上清液，每瓶培养细胞各一管。

3.7低渗处理

向四管中均先加入1mlmol/LKCl溶液，轻轻吹打，使细胞重悬，然后补加6mlKCl溶液，37℃低渗20min。

3.8预固定

沿管壁慢慢加入1ml新配carnoy氏固定液，轻轻吹打混匀，1000rpm/min离心8min，去上清液。

3.9固定

沿管壁慢慢加入6ml固定液，用吸管轻轻地吹打，使细胞分散，固定20min，离心去上清液。取上清液，再重复进行此过程。

3.10滴片

沉淀物中加入6ml固定液，用吸管吹打使其成为细胞悬液。用镊子取预先冰冻的干净载玻片，甩干上面剩余酒精，迅速滴上2-3滴细胞悬液（滴片高度至少在2m以上），然后置酒精灯上微微加热干燥或空气干燥（滴片张数尽量多，保证每人至少四张装片——不同培养条件下的装片各一张）。

3.11染色

滴有细胞悬液的载片扣在染色板上，使片、板之间有一缝隙，将稀释后的Giemsa染液滴在片隙中，染色20min（或放于染缸中），自来水冲洗，吹干。（应特别注意染色过程与染色方法，保证染色不出错）

3.12镜检

在低倍镜找到处于中期分裂相的细胞，然后在转至高倍镜下观察。观察时要使用推进器座标尺记录分散良好的细胞位置，便于重新查找，选择染色体分散好、长度适中、姐妹染色单体清楚的中期分裂相进行显微观察。

3.13染色体组型分析

①在显微镜下找出染色体分散良好、长度适中、姐妹染色单体清楚

的中期分裂相进行显微拍摄。

②将显微拍摄放大的照片上的一个细胞的全部染色体分别一条一条

剪下。

③根据染色体的长短和形态特征进行同源染色体的目测配对。

④测量出每条染色体短壁和长臂长度，计算出各条染色体的相对长

度、着丝粒指数、臂指数，记录原始数据。

⑤根据测量数据校正目测配对排列结果进行调整排列。

⑥把染色体按一定顺序一对一对的排列，排列时注意短臂向上，长

臂向下，性染色体单独排列，最后把染色体贴成一完整的染色体核型图。

⑦翻拍。

4 实验结果

4.1实验原图

在显微镜下找出的染色体分散良好、长度适中、姐妹染色单体清楚的中期分裂图：

男性染色体图女性染色体图（第二组原图）4.2数据处理

根据各染色体形态特征进行同源目测配对后，计算出各条染色体的相对长度、着丝粒指数、臂指数等数据进行分析，结果如下：

表1 男性染色体数据分析表

表2 女性染色体数据分析表

4.3染色体核型图

根据以上测量数据校正目测配对，并把各染色体贴成完整的染色体核型图，结果如下：

男性染色体核型图女性染色体核型图

5 实验结论与分析

5.1实验结论

根据以上实验数据可知：人体正常细胞核型含46条染色体，相互配对成23对。其中22对为男女共有的常染色体，另一对XY染色

体为男性特有，XX染色体为女性特有，两者是决定性别的性染色体。

5.2实验分析

本组实验得到了较好的实验结果，男性与女性染色体装片上均能够观察到有丝分裂中期染色体，男性染色体装片染色体分散效果较女性染色体装片好，根据实际经验，分析以下几个影响装片效果的重要因素。

（1）pH值：配制成的含20％小牛血清的RPMll640培养液的pH值应调节到7．2左右为宜，pH值低于6．8或高于7．4都不利于细胞的生长。（2）温度：适宜的温度对细胞的生长和分裂非常重要。如果温度低于37℃，细胞的生长速度减慢；如果温度高于40C，细胞受损，超过43℃，则导致细胞死亡。本实验培养温度为37℃，细胞生长良好。（3）培养中加入秋水仙素的作用机理是：干扰细胞中微管组装，抑制纺锤丝的形成，使细胞停留在有丝分裂的中期。加秋水仙素的时间是收集细胞制备染色体前2～3h，加入秋水仙素后，使秋水仙素的终浓度为0．04～0．08 ug／mI。培养液。秋水仙素的加入时间、剂量、浓度与有丝分裂中期分裂相的多少和染色体的长短有密切关系。加入量过多，染色体太短；加入量不够，染色体瘦长，都会影响对核型的分析。本实验在结束培养前4小时向培养瓶内加入10微升秋水仙素，加入时间、剂量都较为合适，实验效果理想。

（4）低渗处理是染色体制备中很重要的环节，其目的是使细胞吸收水分膨胀，细胞膜破裂。染色体散开。同时，低渗还可使红细胞膜破裂，经离心后，血影浮于上清液中被去除。观察本组制得装片可知，

男性染色体形态清晰，分散度好，女性染色体形态模糊，分散度较差，原因可能是女性血细胞低渗不充分。

（5）滴片是本实验的一个重要环节，本组实验男性细胞悬液滴片较为成功，细胞数量适中，染色体分散度好。女性细胞悬液滴片稍差，细胞数量较少，染色体没有完全分散开。滴片时导致失败的原因很多，例如由于细胞悬液太稀，导致滴片时细胞稀少；载玻片上水太多，导致细胞悬液顺着水流失；载玻片不洁净，染色体分散不佳等。

生理实验报告2红细胞计数

红细胞计数一、实验目的：学习、掌握应用稀释法计数红细胞的方法二、实验原理： 1．血液中血细胞数很多，直接计数有一定难度，需要将血液稀释到一定倍数，然后用血细胞计数板计数。 2．在显微镜下计数一定容积的稀释血液中的红细胞，之后需要将其换算成每升血液中所含的红细胞数。三、实验用品：器具：显微镜、血细胞计数板、小试管、采血管、1mL和5mL移液管、玻璃棒、刺血针、干棉球试剂：哺乳动物红细胞稀释液、蒸馏水、75%酒精四、实验方法与步骤： 1．采血 2．稀释：用移液管取10微升血液，加至2mL红细胞稀释液中3．充池：将盖玻片的一边与计数池的纵线末端接触，然后缓慢放下，使盖玻片平放在计数室两侧的隆起上，醮少许红细胞稀释液靠近盖玻片乾元，靠毛细管作用将稀释液冲入计数池，于高倍镜下观察红细胞分布情况 4．静置计数板2~3min 待经红细胞下沉后，大方格四角以及中央取5个4×4中方格红细胞数，用高倍镜或低倍镜计数

5．计数，计算注意事项： 1.保证计数板和盖玻片清洁；以防影响计数结果的准确性。 2.一次完成充池，如充池过少、过多、有气泡或出现任何碎片，应拭净计数板及盖玻片后重新操作。 3.充池后平放计数板，不能移动盖玻片。 4.计数板中细胞如果严重分布不均，应重新充池计数。 5.凡压线的细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则，避免漏数或重复计数。五、实验结果观察与记录以及分析： 1．结果计算：（53+113+76+60+64）/5=73.2 每16格平均73.2个红细胞,红细胞数： 73.2×25×200×10×1000000=3.66×10的12次方个／升 2．显微镜下图片 ①空白计数板：低倍镜：

B细胞杂交实验报告

苏州大学实验报告院、系医学部年级专业姓名学号课程名称医学免疫学实验成绩指导老师葛彦同组实验者实验日期 2020/6/3

六、思考题 1.阐述脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合后的五种状态，以及在HAT选择性培养基里生存与否的原理。 1)五种状态：未融合的B细胞；未融合的骨髓瘤细胞；B细胞融合B细胞；骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞；B细胞融合骨髓瘤细胞。 2)生存与否的原因 B细胞无法在体外长期大量生存，故未融合的B细胞和B细胞相互融合都无法在HAT选择性培养基生存；骨髓瘤细胞和骨髓瘤同核融合细胞在HAT培养液中时，DNA合成的主要途径被A阻断，由于缺乏HGPRT或/及TK，不能利用培养基中的H及T，无法完成DNA的合成； B细胞和骨髓瘤细胞的异核融合体即杂交瘤细胞，既从B细胞获得了HGPRT和TK，从而利用培养液中的H和T合成DNA，又从骨髓瘤细胞获得了无限增殖的能力，因此，只有杂交瘤细胞能在HAT选择培养液中生存下来。 2.现需要利用杂交瘤技术制备鼠抗人CD3单克隆抗体，请设计一个实验计划，阐述各阶段的实验方案和过程，以及所需的实验材料 1)实验材料人CD3抗原、小鼠、小鼠骨髓瘤细胞、细胞融合剂、PBS、HAT培养液、120目钢丝筛网、玻璃平板、96孔细胞培养板、温控离心机。 2)实验方案和过程 a)将人CD3抗原注入小鼠体内，进行几周加强免疫； b)取小鼠脾脏处死小鼠，固定于解剖架上打开腹腔，取出脾脏。置于120目的钢丝网中，将网移入盛有生理盐水的平皿中，轻轻压磨，使其成为单个细胞悬液，吸取细胞悬液，与骨髓瘤细胞SP2/0按比例混合，离心后弃上清； c)用HAT培养基培养纯化，得到杂交瘤细胞，使其产生抗人CD3单克隆抗体。

细胞融合实验报告

姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合【实验题目】动物细胞融合【实验目的】 1.了解动物细胞融合的常用方法。 2.学习化学融合的基本操作过程。 3.观察动物细胞融合过程中细胞的行为与变化。【实验材料与用品】 1、材料鸡血红细胞 2、试剂 50%PEG、GKN溶液、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。 3、器材倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸、滴管等。【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括：病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。 1、病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。 2、化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG 是广泛使用的化学融合剂。 3、电激诱导融合

姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合包括电诱导、激光诱导等。其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。【实验步骤】在本次实验中采用的是化学诱导融合的方法，利用PEG使鸡血红细胞发生融合。具体实验步骤如下： 1、取鸡血2ml+2mlAlsever液，再加入6mlAlsever液，混匀后制悬液（4℃保存）【老师已做好，可直接使用】 2、取（1）中悬液1ml+4ml的0.85%的NaCl溶液，进行以下三次离心处理： ①在1200r/min下离心5min，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl溶液至5ml； ②1000-1200r/min下离心5min，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl溶液至5ml； ③1000-1200r/min下离心7min 【因时间关系此次实验只离心一次】 3、将离心后的沉降血球（去上清后约0.1-0.2ml）加入GKN至1-2ml，使之成为10%的细胞悬液； 4、取上述10%的血球悬液1ml,加入3mlGKN液，使每毫升含血球15000000个； 5、分别取（4）1ml+0.5ml50%PEG，（4）0.5ml+0.5ml50%PEG，（4）0.5ml+1.0ml50%PEG，混匀滴片，编号分别为①②③号溶液。在常温下2-3min后，显微镜下观察。【实验结果】 1、实验中可观察到两个和多个细胞发生质膜融合现象,可看到不同融合状态的细胞： ①两细胞的细胞膜相互接触、粘连； ②接触部分的细胞膜崩解，两细胞的细胞质相同，形成一个细胞质的通道，呈现哑铃状； ③通道扩大，两个细胞连成一体，呈现一个长椭圆形细胞； ④细胞融合完成形成含有双核或者多核的细胞，呈圆形。比较典型的细胞融合时的形态如下图：

生物实验报告《观察植物细胞的质壁分离与复原》(完整版)

报告编号：YT-FS-8701-57 生物实验报告《观察植物细胞的质壁分离与复原》 (完整版) After Completing The T ask According To The Original Plan, A Report Will Be Formed T o Reflect The Basic Situation Encountered, Reveal The Existing Problems And Put Forward Future Ideas. 互惠互利共同繁荣 Mutual Benefit And Common Prosperity

生物实验报告《观察植物细胞的质壁分离与复原》(完整版) 备注：该报告书文本主要按照原定计划完成任务后形成报告，并反映遇到的基本情况、实际取得的成功和过程中取得的经验教训、揭露存在的问题以及提出今后设想。文档可根据实际情况进行修改和使用。一、实验目的 1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。 2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。二、实验原理当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。由于原生质层比细胞壁的收缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开，也就是分升了质壁分离当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时，外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中，整个原生质层就会慢慢

地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。三、材料用具紫色洋葱鳞片叶、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、刀片、吸水纸、清水、0.3g/ml蔗糖溶液四、实验过程（见书Ｐ60）物理实验报告·化学实验报告·生物实验报告·实验报告格式·实验报告模板五、讨论 1．如果将洋葱表皮细胞浸润在与细胞液浓度相同的蔗糖溶液中，这些表皮细胞会出现什么现象？ 2．当红细胞细胞膜两侧的溶液具有浓度差时，红细胞会不会发生质壁分离现象？为什么？ 3．画一个细胞在正常状态下到经过0.3g/ml蔗糖溶液处理，再经过清水处理的细胞变化的一系列模式图。这里填写您企业或者单位的信息 Fill In The Information Of Your Enterprise Or Unit Here

鸡血细胞的体外融合

鸡血细胞的体外融合【实验目的】 1．掌握聚乙二醇（PEG ）诱导体外细胞融合的基本原理。 2．通过PEG 体外诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。【实验原理】细胞融合(cell fusion ）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞(hybrid cell ）。细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。显微镜下的细胞融合过程融合过程中两个细胞膜的变化过程

依据融合过程采用的助融剂的不同，细胞融合可分为：（1）病毒诱导的细胞融合，如：仙台病毒（hemagglutinating virus of Japan，HVJ）；（2）化学因子诱导的细胞融合，如：聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）；（3）电场诱导的细胞融合；（4）激光诱导的细胞融合。 PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子质量的多聚体。PEG可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。该方法应用分子质量为400—6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。融合的频率和活力与所用PEG的分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。【方法与步骤】 1. 鸡血细胞的获得：从家鸡的翼根静脉用注射器采血，注入试管后，迅速加入肝素（100U 肝素/ 5ml全血）混合，制成抗凝全血。 2. 鸡血细胞储备液的制备：在抗凝全血的试管中，加入4倍体积的0.85 %NaCl溶液，制成红细胞储备液，置于4℃冰箱内可供一周内使用。 3. 鸡血细胞悬液的制备：取鸡血细胞储备液1ml，加入4ml 0.85 %NaCl溶液，混匀后，1200rpm离心5min，弃去上清液，再加入5ml 0.85 %NaCl溶液按上述条件离心一次。最后，弃去上清液，加入10ml的GKN 溶液制成鸡血细胞悬液。 4. 计数：取0.5ml鸡血细胞悬液，加3.5ml的GKN溶液进行稀释，在血细胞计数板上计数。若细胞浓度过大，用GKN溶液稀释至1X107个/ml左右。 5. 鸡血细胞的收集：吸取1ml鸡血细胞悬液放入离心管中，加入4mlHanks液混匀，1000rpm离心5min。弃去上清液，用手指轻弹离心管底部，使沉淀的血细胞团块松散。 6. PEG诱导细胞融合：吸取0.5ml 37℃的50%PEG4000溶液，慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边轻摇离心管，使PEG与细胞混匀，然后在37℃水浴中静置2min。

微生物大小与数量的测定实验报告

山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。二、基本原理一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操

PEG促细胞融合实验报告

题目：PEG促细胞融合一．实验目的: 1.掌握细胞融合的方法 2.学习使用PEG促进细胞融合的方法和步骤二．实验原理 1.细胞融合：在自然条件下或用人工方法（生物的、物理的、化学的）使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。由于体外培养的细胞很少会发生自发融合融合频率大约在10?4-10?6之间，因此要采用生物、化学或物理的方法人为地促使细胞融合。 2.促进细胞融合的方法 a)生物方法：病毒（Sendai virus，Newcastle disease virus，Vaceine virus） b)化学方法：聚乙二醇、盐类融合剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油-醋酸酯、油酸盐、脂质、Ca2+配合物等。PEG相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。在众多的化学试剂中，PEG应用最为广泛，因PEG液比病毒更易制备和控制、活性稳定、使用方便、而且促进细胞融合的能力更强。 c)物理方法：电融合:电处理融合法是20世纪80年代发展起来的细胞融合技术，是融合率大为提高。电脉冲作用时引起膜结构局部扰乱，出现小孔洞。而相对的脂双层间分子在范德华力作用下，形成脂分子桥。由于连接处的细胞膜表面曲率大，处于高张力状态，在热力学上是不稳定的，所以最终导致两细胞逐渐融合成一个圆形的大球状细胞。与ⅣG法比较，电融合法融合率高：重复性强：诱导仅发生在质膜接触部位，对细胞或原生质体伤害小：融合是在同步状态下进行，活细胞数目多；装置精巧，方法简单，可在显微镜下观察或录象融合过程：免去PEG诱导后的洗涤过程，诱导过程可控制性强。三．实验材料及设备 1.实验材料： a)50%PEG混合液

红白细胞计数实验报告

《实验诊断学》实验报告实验一红细胞、白细胞计数实验原理一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数。用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数。根据稀释倍数和计数的容积，换算求得每升血液中的红细胞数量以及白细胞数量。实验内容与步骤实验材料：显微镜、微量吸管、毛细吸管、改良Neubauer计数板、盖玻片、小试管、RBC稀释液、WBC 稀释液、正常人的全血、纱布实验步骤： 1、红细胞计数准备：加稀释液，用微量吸管吸取RBC稀释液蒸馏水2.0 ml加到小试管内。取血，毛细吸管取血10 μl。用纱布擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2-3次，立即混匀。 2、白细胞计数准备： WBC稀释液: 冰醋酸3.0 mL（破坏红细胞）蒸馏水97.0 mL 亚甲蓝（染色）小试管加WBC稀释液0.38 mL。采血，微量吸管取血20 μL。擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2-3次，立即混匀。充池、观察：将计数板及盖玻片檫净，将盖玻片覆盖在计数板上。用滴管吸取混均的红细胞悬液充入上方计数室，静置3-5 min，高倍镜下计数；白细胞悬液充入下方计数室，静置2-3 min，低倍镜下计数。观察计数，红细胞，高倍镜下计数中央大方格内四角的4个中方格和正中的1个中方格的红细胞，压线细胞的计数按照数上不数下，数左不数右的原则。计数时按照弓形的计数方式，以免漏数或多数。用低倍镜计数出计数池内四角大方格中的白细胞总数。实验结果 1、红细胞计数实验结果： 5个中方格内RBC的计数／个=24+27+32+22+25 根据计算公式： RBC/L＝5个中方格内RBC数×5×10×200×106 ＝5个中方格内RBC数/100×1012 推算得出RBC：1.3×1012／L 正常人群的红细胞计数参考区间：人群红细胞计数（×1012／L）

【实验报告】生物实验报告【三篇】

生物实验报告【三篇】篇1 实验名称:用高倍显微镜观察叶绿体和细胞质流动一、实验目的 1.初步掌握高倍显微镜的使用方法。 2.观察高等植物的叶绿体在细胞质基质中的形态和分布二、实验原理高等植物的叶绿体呈椭球状,在不同的光照条件下,叶绿体可以运动,改变椭球体的向,这样既能接受较多的光照,又不至于被强光灼伤。在强光下,叶绿体以其椭球体的侧面朝向光源;在弱光下,叶绿体以其椭球体的正面朝向光源。因此,在不同光照条件下采集的葫芦藓,其小叶内叶绿体椭球体的形状不完全一样。活细胞中的细胞质处于不断的流动状态，观察细胞质的流动，可以用细胞质基质中的叶绿体的运动做为标志。三、材料用具藓类的叶，新鲜的黑藻，显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，镊子，刀片，培养皿，铅笔四、实验过程(见书p30) 1.制作藓类叶片的临时装片 2.用显微镜观察叶绿体

3.制作黑藻叶片临时装片 4.用显微镜观察细胞质流动五、讨论 1.细胞质基质中的叶绿体是否静止不动，为什么? 2.叶绿体的形态和分布与叶绿体的功能有什么关系? 3.植物细胞的细胞质处于不断的流动状态，这对于活细胞完成生命活动有什么意义? 4.用铅笔画一个叶片细胞，标出叶绿体的大致流动方向。篇2 实验生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、实验目的初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。二、实验原理 1.还原糖的鉴定原理生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团(游离醛基或游离酮基)，因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。斐林试剂由质量浓度为0.1g/ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/ml的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的cu(oh)2沉淀。cu(oh)2

红细胞计数、白细胞计数实验报告

一.实验原理用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液注入血红细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。二.实验内容与步骤 1、红细胞计数（1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板（2）试剂：RBC稀释液①Hayem 稀释液：NaCl, Na2SO4，HgCl2 ②枸橼酸钠甲醛盐水溶液:枸橼酸钠，甲醛，NaCl ③生理盐水或含1%甲醛的生理盐水：仅在急诊或无上述两种稀释液时临时使用（3）标本：外周血或抗凝血（EDTA抗凝) （4）操作步骤：①小试管加RBC稀释液2.0 ml。 ②采血，取血10 μl。 ③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立即混匀。 ④混匀后充入计数室，静置3~5 min，高倍镜下计数（用高倍镜依次计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细

胞数。） 2、白细胞计数（1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板（2）试剂：WBC稀释液：冰醋酸3.0 mL（破坏红细胞）；蒸馏水97.0 mL；亚甲蓝（染色）（3）标本：新鲜全血或末稍血（4）操作步骤：①小试管加WBC稀释液0.38 mL。 ②采血，微量吸管取血20 μL。 ③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立即混匀。 ④混匀后充入计数室，静置2~3 min，低倍镜下计数（用低倍镜计数出计数池内四角大方格中的白细胞总数。）三.实验结果表一红细胞计数表 RBC/L＝405/100×1012＝4.05×1012／L 表二白细胞计数表 WBC/L ＝112/20×109＝5.6×109／L 实验结果：RBC：4.05×1012／L WBC：5.6×109／L 四.讨论 1、从实验结果与正常范围比较，实验结果没有超出正常范围，提示被采血

实验报告：探究植物细胞的吸水和失水

实验报告6 探究植物细胞的吸水和失水提出问题：植物细胞是否会失水和吸水植物细胞在什么情况下失水和吸水假设：假设外界溶液浓度高于植物细胞液浓度时，植物细胞失水；反之，吸水。材料用具：紫色的养成鳞片叶。刀片、镊子、滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸、显微镜。质量分数为ml的蔗糖溶液，清水。方法步骤： 1、制作洋葱鳞片叶表皮临时装片 ↓①有一个的中央大液泡 2、低倍镜下观察②原生质层紧贴细胞壁 ↓ 3、从盖玻片的一侧滴入溶液，在盖玻片的另一侧用吸引。这样重复几次，盖玻片下面的洋葱鳞片叶表皮就浸润在蔗糖溶液中。 0.3g/ml蔗糖溶液吸水纸吸引临时装片 ↓①中央液泡逐渐变小（紫色） 4、低倍镜下观察②与细胞壁逐渐分离 ↓ 5、在盖玻片的一侧滴入清水，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。这样重复几次，洋葱鳞片叶表皮又浸润在清水中。吸水纸吸引清水临时装片

↓①中央液泡逐渐变（紫色变） 6、低倍镜下观察②逐渐贴近细胞壁 ↓ 结论：前面的假设正确。 ①当外界溶液浓度细胞液浓度时，细胞失水，发生现象 ②当外界溶液浓度细胞液浓度时，细胞吸水，发生现象说明…………………………………………………………………………………… (1)紫色洋葱鳞片叶表皮细胞的液泡中含有紫色的花青素，细胞失水后，液泡变小，颜色变深；细胞吸水后，液泡变大，颜色变浅。 (2)选用蔗糖溶液（如0.5g/ml）的浓度不宜过高，否则植物细胞会因失水过多而死亡，不能发生质壁分离的复原。 (3)若把成熟的植物细胞置于高于细胞液的浓度的植物可吸收的溶液中（如1M 的KNO3、一定浓度的乙二醇等溶液），植物细胞先发生质壁分离，然后会发生质壁分离的自动复原。…………………………………………………………………… 巩固练习： 1、观察在0.3 g／mL蔗糖溶液中的洋葱表皮细胞，发现中央液泡逐渐变小，说明( ) A．细胞壁相当于一层半透膜B．洋葱表皮细胞是活的 C．此时蔗糖溶液浓度小于细胞液浓度D．细胞壁收缩导致中央液泡失水2、在“观察植物细胞的质壁分离与复原”实验中，之所以用已经成熟的洋葱表皮细胞做实验材料，是因为这样的细胞具有( ) A．伸缩性很小的细胞壁B．功能完善的细胞膜

04 动物细胞融合实验

山东大学实验报告2018年4月9日 ________________________________________ _________________________ 姓名：丁志康系年级：2016级组别：1-1 科目：细胞生物学实验题目：动物细胞融合实验学号：201600140055 实验序号：4 一、目的要求 1.了解动物细胞融合的常用方法。 2.学习化学融合的基本操作过程。 3.观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化。二、实验原理 1、细胞融合的概念细胞融合(cell fusion)，细胞遗传学名词，是在自发或人工诱导下，两个细胞或原生质体融合形成一个双核或多核的杂种细胞的过程，也被称为细胞杂交（cell hybridization）。基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合；异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，称诱导融合。 2、细胞融合的方法及发展简史 ①诱导细胞融合的方法： a.生物法（病毒诱导融合）：某些病毒因为其被膜中含有融合蛋白，可以介导病毒同宿主细胞融合，同时也可以介导细胞与细胞的融合，所以这些病毒经紫外线灭活后可作为细胞融合的生物诱导剂使用，例如仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等。 b.化学法（化学诱导融合）：很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG是广泛使用的化学融合剂。 c.物理法（电激诱导融合）：包括电诱导、激光诱导等。其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。 ②细胞融合的发展简史 Muller于1838年观察到脊椎动物肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核的肿瘤细胞。 Virchow于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞现象。 Luginbuhl于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。 Lange于1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过程。

实验报告-细胞复苏及细胞鉴别与计数

细胞生物学实验报告实验二细胞复苏及细胞鉴别与计数 1引言 1.1 实验目的 1. 掌握无菌操作技术。掌握细胞复苏技术。 2. 掌握用血球计数板进行细胞计数的方法。 3. 学习死活细胞鉴别的方法。 4. 了解细胞污染的判定方法。 5. 了解细胞形态的多样性。 1.2 实验原理 1.细胞复苏：以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程，复苏时要快速融化，必须将冻存在-196℃液氮中的细胞在1分钟内快速融化至37℃，使细胞迅速通过最易受损的温度区间-5-0℃，使冻存时细胞外的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。 2.细胞计数：采用血细胞计数板法，血细胞计数板由一块长约7.5cm，宽 3.5cm的厚玻璃制成，平台中部上下各有一个计数室，每个计数室分9大格，每格边长1mm，面积1mm2，盖上盖玻片后体积为0.1mm3。四角的大格划分为16个中方格，一般用作白细胞、血小板组织培养的细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，盖上盖玻片后体积为0.004mm3，每个中方格又分成16个小方格，用于红细胞、微生物细胞的计数。细胞计数原则：细胞压线则计上不计下，计左不计右，镜下计数，有时偶尔有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。对每个试样重复计数3次，取其算数平均值。 2实验仪器、试剂及操作步骤 2.1 实验仪器超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒（头）、吸管筒（头）、废液缸、移液器、枪头等 2.2 实验试剂 DMEM培养基、血清、抗生素等 2.3 实验步骤细胞复苏： 1.实验室和超净工作台消毒，紫外照射20Min左右。 2.穿好实验服，进无菌室前穿鞋套、洗手。 3.关闭紫外灯，开日光灯和开风机，超净工作台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，擦拭台面。 4.自液氮中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，立即投入40℃水浴锅中解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化。 5.正确摆放超净台内的实验用品，点燃酒精灯，准备一次性滴管和移液管。 6.将冻存管放入离心机中800转/分钟离心10分钟。 7.小心将冻存管移入超净台中，用75％的酒精棉球擦拭冻存管外部，打开冻存管用巴氏吸管弃上清，加1mL的DMEM培养基吹打细胞使之均匀，取90uL细胞悬液和10uL台盼蓝染液于小指管中进行活细胞染色计数。 8.剩余细胞悬液吸至一个细胞培养瓶中，在细胞培养瓶中补加4mL的DMEM培养基，将盖子拧好稍回转，

生物实验报告《观察植物细胞的质壁分离与复原》

生物实验报告《观察植物细胞的质壁分离与复原》一、实验目的 1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。 2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。二、实验原理当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。由于原生质层比细胞壁的收缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开，也就是分升了质壁分离当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时，外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。三、材料用具紫色洋葱鳞片叶、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、刀片、吸水纸、清水、0.3g/ml 蔗糖溶液四、实验过程（见书Ｐ60）五、讨论 1．如果将洋葱表皮细胞浸润在与细胞液浓度相同的蔗糖溶液中，这些表皮细胞会出现什么现象？ 2．当红细胞细胞膜两侧的溶液具有浓度差时，红细胞会不会发生质壁分离现象？为什么？3．画一个细胞在正常状态下到经过0.3g/ml蔗糖溶液处理，再经过清水处理的细胞变化的一系列模式图。第1 页共12 页

生物技术实习报告4篇生物学是一门实践性很强的学科，我们在经过了将近一年对动物学和植物学的理论学习后，野外实习也至关重要，它可以使我们更加有效地掌握和巩固课堂教学的基本理论知识和基本实验技能，而且还可以学到许多在课堂上学不到的知识，开阔视野，认识人与自然的关系，增强环境保护意识和社会责任感。实习目的;(1)复习、巩固和验证所学的生物学基本理论和基本知识，同时进一步丰富所学的生物学知识;(2)用辩证唯物主义观点观察丰富多彩的生物世界，了解植物和动物的形态、习性、种类、用途的多样性以及它们与环境的关系，激发学习的积极性;(3)理论联系实际，通过自主学习和研究性学习培养独立工作能力和创新意识;(4)培养不怕困难，吃苦耐劳的好作风热爱祖国的山山水水，珍惜大自然一草一木的良好素质与情感;(5)增强集体主义观念弘扬团队精神，促进同学，师生之间的了解与沟通。实习意义;(1)通过野外实习，我们不仅巩固了书本上学到的知识，而且还学到许多在书本上学不到得知识;(2)通过野外综合学习，我们更加热爱自然，热爱专业，团结合作，吃苦耐劳，同时也提高了独立观察、思考、分析、解决问题的能力和探索创新的新能力;(3)通过野外实习，增强了我们对植物界生物的认识，认识了人与自然的关系，增强环境保护意识和社会责任感。主要内容：5月29日，早晨五点集合，出发赶往青岛，下午一点左右到达参观青岛市中山公园的动、植物园，下午2点10分集合，晚上进入北九水风景区。 5月30日，上午在山里采集标本，下山后按小组制作标本，下午去樱桃园采摘樱桃。 5月31日，挑战崂顶，6点40出发，中午12点左右到达崂顶，围山顶走了一圈后开始下山，下山时由于方向性错误我们在深山里迷路了，还遇上了大雨，幸亏遇上了几名野外登山队员，才得以走出这座鬼斧神工的大山，到达营地时已经晚上7点多了。 6月1日，早上8点多，在青岛栈桥看风景，9点到下午2点在海底世界参观标本及各种海洋生物(标本馆、海底世界、海兽馆、梦幻水母宫)下午两点多向日照出发，来到李家湾赶海园，住在海边，心情无比激动。 6月2日，上午来到灯塔风景区和万平口风景区看大海，下午回到营地赶海，采集和制作标本。 6月3日，上午来到国家森林公园观赏各类植物，下午回到营地采集和制作标本。 6月4日，上午自由活动，下午1点去刘家湾赶海园赶海，采集和制作标本，这里的海滩好大呀。 6月5日，上午7点出发赶往济南大明湖公园参观游览，下午出发返回，晚8点抵达沧州，野外实习顺利结束。总结体会：首先，我觉得这次去山东，可以说是不负此行吧，我们不仅开阔了眼界，领略

细胞工程实验报告

细胞工程实验报告专业：生物技术班级：0801 姓名：励丹学号：30804305 一、实验目的 1、了解动物细胞培养的相关实验器材以及实验前器材的清洗与消毒、无菌室灭菌与消毒等基本方法，以建立起无菌操作的概念。 2、了解和掌握动物细胞原代培养的基本方法，熟悉组织块法和消化法培养的基本操作过程。初步掌握无菌操作技术。 3、学习与了解细胞超低温冻存于复苏的基本原理，初步掌握培养细胞常规超低温冻存于复苏以及玻璃化超低温冻存于复苏的方法。 4、掌握ELISA测定抗体效价的方法，细胞的超低温冻存和复苏，及MTT法测定细胞活性的方法。 5、学习和掌握制备饲养层细胞的方法，为杂交瘤细胞的制备做准备。 6、学习从脾脏组织制备免疫细胞的方法，从免疫脾脏中制备免疫细胞悬液，用于杂交瘤细胞的融合。 7、学习和掌握动物细胞融合的基本方法，通过免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，并进行选择。 8、学会细胞形态的观察和分析，细胞技术等细胞培养中常见的问题。二、实验原理 1、原代培养原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后直到第一次传代为止。原代培养首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织或器官，切成一定大小的组织块，直接或经消化分散成单个游离的细胞，在人工培养条件下，使其不断地生长、繁殖。 2、细胞活性测定——MTT法 MTT法是利用细胞线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶四氮唑蓝还原成难溶的蓝紫色结晶——甲瓒，经二甲基亚砜（DMSO）溶解后，在490nm处测吸收值，其吸收值可间接反映细胞的活性状态及活细胞数量。 3、培养细胞的超低温冻存于复苏为了保持细胞株（系）遗传的稳定性以及非连续使用细胞的长期保存，建立了细胞

血液检查实验报告doc

血液检查实验报告篇一：血型测定实验报告血型测定实验报告一、实验目的：学习ABO型血的鉴定原理和方法。观察红细胞凝集现象，了解抗原抗体反应。二、实验原理：血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A 和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A 型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A 或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1）三消毒采血针；载玻片；消毒棉签；抗A、抗B血型定型试剂；75%乙醇；受检者血液四、实验步骤（1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。（2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml 生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血

时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。（3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。（4）竹签两头分别混合，搅匀。（5） 10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。（6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。五、实验结果：我们组本次实验中，载玻片1左边为抗B型定型试剂，呈淡红色，未发生凝聚；右边为抗A型定型试剂，血液在试剂中凝结，试剂较清亮。该受试者1血型为A。载玻片2左右边的试剂内的血液皆不出现凝结现象，受试者2为O型血。六、实验讨论： 1.实验中要分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌，以免造成抗体试剂不纯。 2.实验中我们组发现15分钟后没有出现血凝现象，可用牙签轻轻搅拌一会儿，有些载玻片上就不现了血块，但有些经搅拌后仍不出现血凝现象，表示确实不含相应的抗原。篇二：血糖的测定实验报告

植物细胞实验报告_1

植物细胞实验报告篇一：观察植物细胞的实验报告七年级生物实验报告篇二：观察植物细胞生物实验报告单生物实验报告单篇三：制作并观察植物细胞临时装片实验报告制作并观察植物细胞临时装片实验报告目的要求： 1. 制作植物细胞临时装片，学习制作临时装片的基本方法。 2. 认识植物细胞的基本结构。 3. 练习画细胞结构简图材料用具：洋葱鳞片叶，镊子，刀片，载玻片，盖玻片，清水，稀碘液，滴管，纱布，吸水纸，显微镜方法步骤：制作洋葱表皮细胞的临时装片并观察： 1、准备：（1）用洁净的卫生纸把载玻片和盖玻片擦拭干净，把载玻片平放在实验台上，用滴管在载玻片的中央滴一滴清水。（2）用刀片在洋葱鳞片内表皮上，轻轻划出边长为2㎜～5㎜的小方格；然后用镊子从小方格内的内侧撕取一小块透明表皮，并将其浸入载玻片的水滴，用镊子将表皮展平。（3）用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上

的水滴中，然后轻轻地盖在表皮上，避免盖玻片下面有气泡。 2、染色：（1）用滴管在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液。（2）用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润到整个标本。 3、观察洋葱的表皮细胞：（1）取显微镜（右手握住镜臂，左手托住镜座，将显微镜放在实验台距边缘7厘米左右，略偏左）并安装好目镜和物镜。（2）转动转换器使低倍镜对准通光孔（物镜前端与载物台保持2厘米距离）。（3）调节光圈和反光镜，通过目镜能够看到白亮的圆形视野。（4）将装片放到载物台上，用压片夹压住，标本正对通光孔中心。（5）转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片为止（注意：眼睛一定看着物镜）。（6）两眼同时睁开，用一只眼看目镜，另一只眼随时准备画图，同时逆时针方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升直到看清物像为止，再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

实验四 PEG介导的细胞融合

实验四 PEG介导的细胞融合一、实验目的：（1）通过PEG介导的鸡血细胞融合实验，对体细胞融合有一个清楚的概念。（2）初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。二、实验原理：利用PEG介导动物细胞融合的原理到目前为止还没有完全定论。学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散，进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲和以及彼此间表面张力的作用，引起相邻的重排质膜在修复时相互合并在一起，使两细胞的胞质沟通，从而造成相互接触的细胞之间发生融合。利用PEG介导细胞融合，其融合效果受以下几种因素的影响。 1、PEG的分子量与浓度细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG得分子量越大、浓度越高，对细胞的毒性也就越大。为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000-4000，浓度一般为40%-60%。 2、PEG的pH值经验证，PEG的pH值在8.0-8.2之间融合效果最好。 3、PEG的处理时间处理时间越长，融合效果越好，但对细胞的毒害作用也就越大。故一般将处理时间限制在1分钟之内。本实验中那个细胞融合后无需继续培养，故处理时间可适当放宽至数分钟。 4、融合时的温度由于生物膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。因此，为了获得更好的融合效果，在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。对于哺乳动物的细胞，一般采用的温度为38℃-40℃。本实验所用材料为鸡的血细胞，这是因为：①鸡血细胞具有细胞核，便于对融合细胞进行鉴别；②实验材料便宜、易得。细胞融合与否，可通过观察细胞内核的数目来进行鉴别。细胞内只有1个核，定为未融合细胞；有2至多个核，定为融合细胞。三、实验用品： 1、材料：新鲜鸡血； 2、试剂：（1）Alsever液：葡萄糖（2.05g）枸椽酸钠（0.8g）氯化钠（0.42g）重蒸水（至100mL）（2）生理盐水（0.85%）（3）GKN液：氯化钠（8g）氯化钾（0.4g） Na2HPO4?2H2O（1.77g） Na2HPO4?H2O（0.69g）葡萄糖（2g）酚红（0.01g）溶于1000mL重蒸水中

白细胞计数实验报告(仅供参照)

白细胞计数和分类目的：掌握血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点、原理：各种白细胞必须经过染色，才易于区分其类别。常用者为瑞氏（Wright’s）染色法和姬姆萨(Giemsa)染色法。测定外周血液中各种白细胞的相对比值，以观察其数量、形态和质量变化，通过显微镜观察染色血涂片，计算血液中各类白细胞的百分率，称为白细胞分类计数。利用白细胞总数和各类白细胞的百分率，即可计算每mm3血液中各类白细胞的绝对值。实验器材：香柏油、盖玻片、推片、采血针或注射器、小滴管、消毒棉球、瑞氏染液、pH6.4~6.8磷酸盐缓冲液、蒸馏水、计数板及专用盖片、针1ml 刻度移液管、1ml EP管、光学显微镜。20ul刻度移液管、推片实验步骤白细胞分类 1．血片制作：取一滴血，滴于洁净无油脂的玻片一端。左手持玻片，右手再取边缘光滑的另一玻片作为推片。将推片边缘置于血滴前方，然后向后拉，当与血滴接触后，血即均匀附在二玻片之间。此后以二玻片约呈30—45度的角度平稳地向前推至玻片另一端。推时角度要一致，用力应均匀，即推出均匀的血膜（血膜不可过厚、过薄）。将制好的血涂片晾干，不可加热。注：（1）良好涂片标准：１) 呈头、体、尾舌形２) 血膜厚薄适宜３) 两边留有空隙（2）涂片好坏与下列因素有关：1）血滴大小 2）推片与玻片之间角度 3）推片速度 2、血涂片的染色步骤：（1）用蜡笔在血膜两端各划一道线，以免染料外溢，置涂片于染色架上。（2）滴加瑞氏染液，共计七八滴数，以盖满血膜为度，静置1分钟。（3）再滴加等量的磷酸缓冲盐溶液，轻轻摇动，并轻吹液体使染色液与缓冲液混合均匀，静置15分钟。（4）用清水冲洗。切勿先倾去染液再冲洗，否则沉淀物附于血膜上不宜出去。冲洗后斜置血涂片于空气中干燥。或先用滤纸吸取水分迅速干燥，即可镜检。 3、白细胞分类计数：先用低倍镜检查涂片及染色是否均匀。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均匀处（一般在体尾交界处），在油镜下由此处开始按其形态特征进行分类计数，计数移动时避免重复。根据所见到的100个白细胞，记录各种白细胞所占的百分数。