大肠菌群检测方法(中文翻译)
大肠菌群检测方法(中文翻译)
3 定义和简介
3.1 定义
所有的大肠菌群均是发酵乳糖，革兰氏阴性，无牙孢的杆菌。官方的对大肠菌群的定义可能以培养温度（30、32、35、37）不同作评价；或以确定是否发酵乳糖产气作为定义的一个特征.大多数ISO和其他官方标准是利用发酵乳糖产气作为一个定义特征。而在ISO 4832 中则利用了在VRBL上的菌落大小作为其唯一的定义特征。
鉴于这些定义的不同，建议实验室根据相关定义用相应的适当方法。
●国际标准：样品分析是否符合国际交易规范
●官方主市场调整定义：样品分析是否符合地方标准
●一般定义：样品分析是否符合一般规范。
任何必要方法的调改必须通过市场实验室质量确认中心和雀巢研究中心食品安全微生物组的协助。
以下为一些官方定义例子：
*ISO 4831大肠菌群是通过其在选择性肉汤上的生长和发酵乳糖产气能力来定义*AOAC INTERNATIONAL, APHA/FDA定义大肠菌是指发酵乳糖产酸产气（T=32或35度）革兰氏阴性杆菌
*ISO 4832大肠菌群定义是根据其在VRBL-agar(30or35or37度)的菌落大小（最小5mm直径）和产酸情况。(T=30或35或37℃)
3．1．1 液体培养基中
ISO 4831 大肠菌群是根据其在选择性肉汤中生长能力和发酵乳糖产气情况来定义.(T=30或35或37℃)
AOAC INTERMATIONAL,APHA/FA中大肠菌群是指发酵乳糖产酸产气革兰氏阴性杆菌。（T=32或35℃）
由LI第一章概述，大肠菌群是指发酵乳糖气微生物群。
3．1．2 固体培养基中
IOS 4832大肠菌群定义是根据其在VRBL-agar(30or35or37度)的菌落大小（最小5mm直径）和产酸情况。(T=30或35或37℃)
AOAC INTERMATIONAL,APHA/FA中大肠菌群是指发酵乳糖产酸产气革兰氏阴性杆菌。基于以上定义可知大肠菌群在VRBL培养基上会形成5mm以上直径的红色菌落且在确认试验中发酵乳糖产气
由LI第二章概述，大肠菌群是指在VRBL琼脂培养基上会形成特征性菌落且在确认试验中发酵乳糖产气微生物群。
3．2 简注
BGLB：亮绿乳糖胆盐培养基肉汤
LST：月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤
MPN：最可能数
VRBL：紫红胆汁琼脂
4 安全防范
大肠菌群不表现为无害，注意实验室的良好操作。
5 参考资料
5．1 LIs中提到的及其它心要文件
LI-00．700
LI-00．702
LI-00．743-2
5．2 参考书目
*美国公共健康协会(1985).日用品检验标准，华盛顿。DC
*Bruchez N (1996).Research Note QS-TN960017: Detection of coliforms-lnprovement of LST
*Colwell N.D.and M.D. Microbiological techniques-Some statistical aspects.J.Sci.Fd.Agric_20(1969)573-579
*ISO 4831:1991:Microbiology-General guidance for the enumeration of coliforms-Most probable number technique.
* ISO 4831:1991:Microbiology-General guidance for the enumeration of coliforms -Colony count technique.
*Merck Microbiology Manual 2002 http://chemdat.merck.de/mda/ch/de/index.html
*U.S.FDA(1995).Bacteriological Analytical Manual,8th Ed AOAC international, Gaitheresburg,MD,pp 4.01-4.29
6 前面说法之修正
完整修订本额外细节在大肠菌群计数、定义和分离改编中提供。
审批人签名日期
编写者
组领导
部门领导
CT-QM
1安全说明
2
概述
大肠菌群的研究与举例
第一章
液体培养基中的生长研究
1方法原理
接种至原倍或稀释后的选择性培养基中，30℃培养24-48小时，再通过转接阳性管进确认。
摘要
根据大肠菌群相应用的不同定义选用不同的培养温度（30℃/32℃/35℃/37℃）(查阅定义)
2 培养基的准备
在使用化学药品前查阅Sigma/Aldrich化学药品安全指南或其它相应手册或地方权威提供的安全数据表。认真阅读附1中的安全说明。更多的安全信息可从NEC/QS中获得。
2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）
根据制造商说明配制培养基，如是非成品干粉则可按以下方法配备（g/L）
单倍料（g）双倍料(g)
胰蛋白胨 20.0 40.0
乳糖 5.0 10.0
磷酸二氢钾 2.75 5.5
磷酸氢二钾 2.75 5.5
氯化钠 5.0 10.0
月桂硫酸钠 0.1 0,2
蒸馏水 1000ml 1000ml
PH6.6-7.0(25℃)
将以上化合物水中溶解，必要时可以加热，调整PH
单倍料分装到16*160mm的试管中每管10ml
双倍料分装到18*180mm的试管每管10ml
121℃,15分钟灭菌
为了避免月桂硫酸钠沉淀，LST室温贮藏不应超过4星期。
注意
由于样品引起高百分比的假阳性，也就说气体的产生是由于其它微生物而非大肠菌群。
在LST肉汤灭菌后加入无菌梭链孢酸或万古霉素，最终浓度为10毫克每毫升。
2.2 亮绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
蛋白胨 10.0
乳糖 10.0
脱水牛胆苯 20.0
煌绿 0.0133
蒸馏水 1000ml
PH7.0-7.4(25℃)
将以上化合物水中溶解，必要时可以加热，调整PH, 分装到带有小试管的16*160mm的试管中每管10ml，灭菌后小试管中不应含有气泡。
3 化学药品与材料
商业参考仅供指导，列在页边提到的或是莫克化学药物和试剂目录或是2002莫克微生物手册或是雀巢实验室材料。
3．1化学药品
101310 微生物煌绿
104873 KH2PO4 p.a.
K2HPO4 anhydrous GR
梭链孢酸钠盐 Sigma F 0881
Mannanase solution, Novo Nordisk KHNO1051
a-淀粉酶，Termamyl 1201 Novozymes
106404 氯化钠，p.a.
107657 微生物一水乳糖
112533 生物化学月桂基硫酸钠
822187 万古霉素氢化物，sigma V 2002
3.2 药品和准备
1.03756干纯微生物牛胆苯
1.05454 BGLB或Oxoid CM31
1.07214 胰蛋白胨
1.10213 微生物胰蛋白
1.10266 LST或Oxoid CM 451 或Difco 0241
3.3 器材
101601 试管，直径15或16mm,长160mm
101603 平口试管Ф17/18mm长180mm
101605 平口试管，聚丙烯，Ф10mm长100mm
101901 发酵试管，圆底，纵切Ф7 mm长28 mm
252801 发酵试管，聚丙烯，Ф12mm 长55mm
902103 调整到30±1℃培养，如Heraeus B6120
4 样品
样品处理根据产品相关标准或说明
根据L1-00.700或L1S细节取适当用量选恰当方法处理样品。
5步骤
5．1 样品的准备
样品的准备与稀释在L1-00.700中有说明
注意
在从第一个稀释度（-1）的准备到最后的分析不超过15分钟
5．2样品准备-特别事项
5．2．1 谷物和面粉类制品
用100ml蒸馏水溶解5g淀粉酶，过滤灭菌并加10ml到80ml无菌的TS中。5.2.2稠化
1ml甘露聚糖酶加99mlTS溶解，过滤灭菌
注意
加入的甘露聚糖酶体积可以增加到3ml，以促进诸如藻酸盐、果阿胶、黄原胶特殊稠化剂的溶解。
5.2.3卵磷脂
灭菌前加1ml到80至90ml的TS中，第一个稀释度充分混匀。
5.2.4 含脂肪较多的食品（＞20%脂肪含量）
灭菌前加1ml到80至90ml的TS中，第一个稀释度充分混匀。
5.2.5酸性或类酸性产品
第一稀释度PH低于6.5的，用1N的氢氧化钠调至PH6.5-7.0
5.2.6婴儿食品
根据样品类型要求，如ML-44.006和CP-08.714中所述，称取10g产品到90mlTS 中，在宽颈瓶里稀释。将产品喷洒到该溶液上，放置10分钟，通过慢慢旋转瓶子将湿润、溶解。如有必要，40℃以下水浴5分钟同时轻轻震荡散热，然后室温放置。
如果其他类型样品要求，可适当调整TS用量。
5.2.7植物乳
用LST加万古霉素。加过滤灭菌后的万古霉素稀释至最终浓度10μg/ml
5.3 接种
转接10ml第一个稀释度或10ml原液体样品到10ml双倍LST料液
1ml（-1）稀释液和之后的稀释接到10ml单倍LST培养液中
小心混匀接种液与培养液
5.4 培养
所有的双倍和单倍LST试管30±1℃培养24和48小时
注意
如果是婴儿食品分析，LST肉汤必须在37±1℃培养24和48小时
5.5 观察
24和48小时后检查各试管，有产气或变浑浊的均认为是假定大肠菌群。大肠菌群的存在应该在这些管中确认。
5.6确认
每支产气或浑浊管转接一环到BGLB肉汤30℃培养。如果此阶段气体形成无法观测则再培养24小时。
24或48小时培养后对每个稀释的阳性管数第一时间统计。
注意
对于婴儿食品，LST假定阳性管要在VRBL上进行划线培养，用于如L1-00.743-2上所述进行后续鉴定
6结果描述
6.1 计算
仅计算大肠菌阳性管并将结果表述如下：
出现或不出现测试：基于阳性管确认数，根据所做稀释度计算，并表达为：每克或每毫升分析样出现或不出现大肠菌。（见L1-00.700）
最大可能数（MPN）：根据L1-00.700计算大肠菌确认数。
6.2方法的精确度
如果是MPN，其结果必须考虑到置信度的限制。
第二章
固体培养基中的举例应用
1方法原理
倾注法接种到VRBL琼脂培基上，并做适当的稀释度。30℃培养20至24小时。列举特征菌落。
注意
根据所提供的不同的大肠菌群的定义选择不同的培养温度。
2试剂与器材
2.1脂红胆汁乳糖胆盐VRBL
根据制造商说明准备培养基，如非干粉成品，按以下方法配置
蛋白胨 7.0
酵母汁 3.0
乳糖 10.0
氯化钠 5.0
胆汁盐 1.5
中性红 0.03
结晶紫 0.002
琼脂-琼脂 9.0-18.0
蒸馏水 1000ml
PH7.2-7.6（25℃）
*根据供应商推荐
各组分水中放置5分钟，混合，煮沸，同时搅拌。调整PH，煮沸2分钟，不须灭菌和再热。立即45-47℃水浴冷却。
2.2 BGLB
药品和试管的准备参考第一章
3 化学药品、培养基和器材
3.1化学药品
3.2培养基和微生物准备
3.3器材
请参考第一章和L1-00.700
4 样品
根据标准或产品相关说明处理
依据L1-00.700或L1s的具体规定选取适当量和恰当方法处理样品
5步骤
5.1 样品准备
样品准备和稀释如L1-00.700上所述
注意
在从第一个稀释度（-1）的准备到最后的分析不超过15分钟。
5．2样品准备-特别事项
参照第一章5.2.1至5.2.5.
5.3接种
转接每个适当梯度1ml到无菌平皿，立刻倾注45-47℃的VRBL约15ml，马上将其混匀，水平放置冷却凝固，不堆叠。
完全凝固后再一层5-10ml的VRBL在上面，然后待凝固。
5.4 培养
倒扣放置30±1℃培养20-24小时，不要堆放超过6个皿。
5.5.1 ISO方法4832
在VRBL上培养，计数直径0.5mm或更大，略带紫色的菌落，有时其周边会有微红胆盐沉淀物
注意
不要求再确认
5.5.2 AOAC，BAM
在VRBL上培养，计数直径0.5mm或更大，略带紫色的菌落，有时其周边会有微红胆盐沉淀物。确认那些认为有气体产生（如5.6所述）的菌落为大肠菌群。注意1
在菌落周边出现的微红胆盐沉淀取决于大肠菌群的类型和培养基的质量。
注意2
某些大肠菌群菌落颜色可以变成粉红色或者甚至白色。
5.6确认
接种5个特征菌落到BGLB管中（2.2），30℃培养24小时.如果24小时后气体产生不易观察，可再培养24小时。产生有气体在发酵管中的被认为是大肠菌群。24或48小时后，记数每个稀释度的产气管数，将结果代入公式计算（第六节）注意
如果是婴儿食品，在VRBL琼脂上的菌落则须如L1-00.743-2上所述进行鉴定。
6 结果表达
保留特征菌落数在10-150之间的平皿，每克或每毫升样大肠菌数计算如下：number（per g or ml）=ΣC /（n1+0.1n2）d
ΣC ：所有保留下来的平皿的菌落总和
n1：保留下来的平皿中第一稀释度的平皿数
n2：保留下来的平皿中第二稀释度的平皿数
d ：
例
10-2稀释度： 128个菌落
10-3稀释度： 11个菌落
number/g=128+11/（1+0.1*1）*10-2=1.3*104coliforms/g 特殊情况参考L1-00.700.
附4
步骤 要点
参考L1-00.700或L1s
培养基：检查质量，根据L1-00.702或供应商推荐选择。将培养基和接种液混匀。盖层是要抑制竞争菌在表面的生长与繁殖（如：假单胞菌）
不要培养超过24小时 只记数菌落数在10-150间的平皿
只保留菌落数在10-150间的平皿
5.1和5.2样
品准备/稀释
5.3接种1ml 在
VRBL ，倾注覆盖。 5.4培养
30±1℃培养20-24小时
*也可参考第三段定义
5.5观测 计数略带粉5.6确认
接种一环4.4到BGLB 试
管中30℃培养24小时
（如需要）48小时 6结果表达
水质--溶解性总固体的测定-生活饮用水标准检验方法-(GBT-5750.4-2006-8.1)-称量法-方法确认
水质溶解性总固体的测定生活饮用水标准检验方法(GB/T 5750.4-2006 8.1) 称量法方法确认 1 目的 通过精密度测试来验证水样中的溶解性总固体GB/T 5750.4-2006 8.1，判断本实验室的检测方法是否合格。 2适用范围 本标准试用于饮用水及水源水中溶解性总固体。 3 方法原理 3.1水样经过过滤后，在一定温度下烘干，所得的固体残渣称为溶解性总固体，包括不易挥发的可溶性盐类、有机物及能通过滤器的不溶性微粒等。 3.2 烘干温度一般采用105℃+3℃。但105℃的烘干温度不能彻底除去高矿化水样中盐类所含的结晶水。采用180℃+3℃的烘干温度，可得到较为准确的结果。 3.3 当水样的溶解性总固体中含有多量氯化钙、硝酸钙、氯化镁、硝酸镁时，由于这些化合物具有强烈的吸湿性使称量不能恒定质量。此时可在水样中加入适量碳酸钠溶液而得到改进。 4分析方法 4.1 测量方法简述 溶解性总固体（在105℃+3℃烘干） 4.1.1将蒸发皿洗净，放在105℃+3℃烘箱内30min。取出，于干燥器内冷却30min。
4.1.2 在分析天平上称量，再次烘烤、称量，直至恒定质量（两次称量相差不超过0.0004 g ） 4.1.3 将水样上清液用滤器过滤。用无分度吸管吸取过滤水样100ml 于蒸发皿中，如水样的溶解性总固体过少时可增加水样体积。 4.1.4 将蒸发皿置于水浴上蒸干（水浴液面不要接触皿底）。将蒸发皿移入105℃+3℃烘箱内，1h 后取出。干燥器内冷却30min ，称量。 4.1.5将称过质量的蒸发皿再放入105℃+3℃烘箱内30min ，干燥器内冷却30min ，称量，直至恒定质量。 4.2 溶解性总固体（在180℃+3℃烘干） 4.2.1按（ 5.1）步骤将蒸发皿在180℃+3℃烘干并称重至恒定质量。 4.2.2吸取100mL 水样于蒸发皿中，精确加入2 5.0mL 碳酸钠溶液于蒸发皿内，混匀。同时做一个只加25.0mL 碳酸钠溶液的空白。计算水样结果时应减去碳酸钠空白的质量。 5. 计算 5.1 溶解性总固体的计算公式 V m m TDS 10001000)()(01??-=ρ 公式中： )(TDS ρ—水样中溶解性总固体的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L ） ； 0m —蒸发皿的质量，单位为克（g ）； 1m —蒸发皿和溶解性总固体的质量，单位为克（g ）； V —水样体积，单位为毫升（ml ） 。
大肠杆菌的检测(MPN计数法)
食品微生物检验技术课程综述 大肠杆菌的检测（MPN计数法） 院系：食品科学与药学学院 班级：食科114 姓名：张花 学号： 114031431 组长：张军玲 成员：张花 赵晶郁 朱娟娟 大肠杆菌Petrifilm测试片计数法 摘要 食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段，而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一。根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌。其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。 关键词大肠杆菌 Petrifilm测试法
1设备和材料 1.1恒温培养箱：36±1℃。 1.2冰箱2~5℃。 1.3恒温水浴箱:44.5±0.2℃。 1.4天平：感量0.1g。 1.5均质器 1.6振荡器。 1.7无菌吸管：lmL(具0.01 mL刻度)、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 1.8无菌锥形瓶：容量500mL。 1.9 玻璃珠:直径约5mm。 1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸 1.11试管架。 2. 培养基和试剂 2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。 2.2EC肉汤。 2.3蛋白胨水。 2.4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP-VP实验用）。 2.5磷酸盐缓冲液。 2.6无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高 压灭菌15min。 2.71mol/L氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏
生活饮用水总硬度检验法
生活饮用水总硬度检验法 一、测定方法 乙二胺四乙酸二钠滴定法 二、方法依据 《生活饮用水标准检验法》GB5750-85 三、测定范围 3.1本规范规定了用乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）滴定法测定生活饮用水及其水源水的 总硬度。 3.2本规范适用于生活饮用水及其水源水总硬度的测定。 3.3本规范主要用于干扰元素铁、锰、铝、铜、镍、钴等金属离子，能使指示剂褪色，或 终点不明显。硫化钠及氰化钾可隐蔽重金属的干扰，盐酸羟胺可使高铁锰离子还原为低价离子而消除其干扰。 3.4由于钙离子与铬黑T指示剂在滴定到达终点时的反应不能呈现出明显的颜色转变，所 以当水样中镁含量很少时，需要加入已知量镁盐，以使滴定终点颜色转变清晰，在计算结果时，再减去加入的镁盐量，或者在缓冲溶液中加入少量MgEDTA，以保证明显的终点。 3.5若取50mL水样，本规范最低检测质量浓度为1.0mg/L。 四、测定原理 当水样中有铬黑T指示剂存在时，与钙、镁离子形成紫红色螯合物，这些螯合物的不稳定常数大于乙二胺四乙酸钙和镁螯合物不稳定常数。当pH=10时，乙二胺四乙酸二钠先与钙离子，再与镁离子形成螯合物，滴定至终点时，溶液呈现出铬黑T指示剂的天蓝色。 五、试剂 5.1缓冲溶液（pH=10）。 5.1.1称取1 6.9g氯化胺，溶于143mL氨水（ρ20=0.88g/mL）中。 0.780g硫酸镁（MgSO4·7H2O）及1.178g乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·2H2O）,溶于50mL 纯水中，加入2mL氯化胺－氢氧化胺溶液（1.1）和5滴铬黑T指示剂（此时溶液应呈紫红色。若为天蓝色，应再加极少量硫酸镁使呈紫红色），用Na2EDTA标准溶液（5）滴定至溶液由紫红色变为天蓝色。合并1.1及1.2溶液，并用纯水稀释至250mL。合并后如溶液又变为紫红色，在计算结果时应扣除试剂空白。 注：①此缓冲溶液应储存于聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中。防止使用中应反复开盖便氨水浓度降低而影响pH值。缓冲溶液放置时间较长，氨水浓度降低时，应重新配制。 ②配制缓冲溶液时加入MgEDTA是为了使某些含镁较低的水样滴定终点更为敏锐。如果备
大肠菌群测定方法
大肠菌群及检验 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工
作中。 二、大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。 （一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 具体操作参见GB4789.3-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》 （二）原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国FDA的标准方法，用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法：推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。证
生活饮用水标准检验方法18个方法
培训资料 生活饮用水卫生监测 部分水质指标补充检验方法手册 （试行） 国家卫生计生委疾控局 2014年7月
目录 1生活饮用水中55种挥发性有机物的检验方法—吹扫捕集气相色谱质谱法 (1) 2生活饮用水中27种卤代烃的检验方法—顶空毛细管气相色谱法 (9) 3生活饮用水中11种挥发性有机物的检验方法—顶空毛细管柱气相色谱法 (15) 4生活饮用水中丙烯酰胺的检验方法—液相色谱串联质谱联用法 (19) 5生活饮用水中微囊藻毒素的检验方法—液相色谱串联质谱联用法 (24) 6生活饮用水中环氧氯丙烷的检验方法—气相色谱质谱联用 (29) 7生活饮用水中15种半挥发性有机物的检验方法—固相萃取气相色谱质谱法 (32) 8生活饮用水中呋喃丹、草甘膦、灭草松和2,4-滴的检验方法—液相色谱质谱法 (39) 9生活饮用水中灭草松、呋喃丹、草甘膦、2,4-滴、莠去津、五氯酚和甲基对硫磷的测定方法—液相色谱串联质谱联用法 (41) 10生活饮用水中百菌清检验方法—毛细管柱气相色谱法 (48) 11生活饮用水中5种拟除虫菊酯的检验方法—高效液相色谱法 (51) 12生活饮用水中六种卤乙酸检验方法—离子色谱-电导检测法 (53) 13生活饮用水中游离余氯的检验方法—现场N，N-二乙基对苯二胺（DPD）法 (56) 14生活饮用水中总氯的检验方法—现场N，N-二乙基对苯二胺（DPD）法 (57) 15生活饮用水中挥发酚类化合物的检验方法—流动注射法1 (58) 16生活饮用水中挥发酚类化合物的检验方法—流动注射法2 (59) 17生活饮用水中氰化物的检验方法—流动注射法1 (61) 18生活饮用水中氰化物的检验方法—流动注射法2 (62)
环境监测原始记录表
环境监测原始记录表 环境保护监测中心站 2012年
目录 1. 地表水采样原始记录表19.离子选择电极原始记录表 2. 大气采样原始记录表20.分光光度法分析原始记录表 3. 降水采样原始记录表21.原子吸收分光光度法分析原始记录表 4. 降尘采样原始记录表22.气相色谱分析原始记录表 5. 土壤采样原始记录表23.离子色谱分析原始记录表 6. 底质（底泥、沉积物）采样原始记录表24.细菌总数测定原始记录表 7. 污染源废水采样原始记录表25.粪大肠菌群测定原始记录表 8. 固定污染源排气中气态污染物采样原始记录表26.区域环境噪声监测原始记录表 9. 固定污染源排气中颗粒物采样原始记录表27.城市交通噪声监测原始记录表 10.烟气烟色监测现场记录表28.污染源噪声监测原始记录表 11.pH值分析原始记录表29.机动车排气路检原始记录表 12.电导率分析原始记录表30.一般试剂配制原始记录表 13.色度分析原始记录表（铂钴比色法）31.校准曲线配制原始记录表 14.色度分析原始记录表（稀释倍数法）32.标准溶液配制与标定原始记录表 15.重量分析原始记录表33.样品交接记录表 16.容量法分析原始记录表34.样品分析任务表 17.五日生化需氧量分析原始记录表35.样品前处理原始记录表 18.一氧化碳分析原始记录表36.大气采样器流量校准原始记录表
xx 省环境监测原始记录表（ 1 ） 地表水采样原始记录表 采样目的： 方法依据：GB12998-91 采样日期： 年 月 日 枯 丰 平 pH 计型号及编号： DO 仪型号及编号： 电导仪型号及编号： 采样： 送样： 接样： .第 页 共 页
生活饮用水检测标准
生活饮用水检测标准 生活饮用水卫生标准是从保护人群身体健康和保证人类生活质量出发，对饮用水中与人群健康的各种因素（物理、化学和生物），以法律形式作的量值规定，以及为实现量值所作的有关行为规范的规定，经国家有关部门批准，以一定形式发布的法定卫生标准。 生活饮用水卫生标准可包括两大部分：法定的量的限值，指为保证生活饮用水中各种有害因素不影响人群健康和生活质量的法定的量的限值；法定的行为规范，指为保证生活饮用水各项指标达到法定量的限值，对集中式供水单位生产的各个环节的法定行为规范。 生活饮用水的水质标准： 1．为防止介水传染病的发生和传播，要求生活饮用水不含病原微生物。 2．水中所含化学物质及放射性物质不得对人体健康产生危害，要求水中的化学物质及放射性物质不引起急性和慢性中毒及潜在的远期危害（致癌、致畸、致突变作用）。 3．水的感官性状是人们对饮用水的直观感觉，是评价水质的重要依据。生活饮用水必须确保感官良好，为人民所乐于饮用。 生活饮用水水质标准共35项。其中感官性状和一般化学指标15项，主要为了保证饮用水的感官性状良好；毒理学指标15项、放射指标2项，是为了保证水质对人不产生毒性和潜在危害；细菌学指标3项是为了保证饮用水在流行病学上安全而制定的。 科标能源实验室科提供一些水质检测项目，如下： 色度浑浊度臭和味肉眼可见物PH总硬度（以CaCO3计）铁铝铜锰锌挥发酚类（以苯酚计）阴离子合成洗涤剂硫酸盐氯化物溶解性总固体耗氧量（以O2计）砷镉铬（六价）氰化物铅氟化物汞硝酸盐（以N计）硒四氯化碳三氯甲烷菌落总数总大肠菌群耐热大肠菌群游离余氯总α放射性总β放射性硫化物锑钠钡铍硼镍钼铊银二氯甲烷一氯二溴
水的大肠菌群检测方法
4．1 在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100mL。 4．2 在10支装有5mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样10mL。 4．3 轻摇试管，使液体充分混匀，置36±1℃培养箱中，培养24h。 4．4 观察每管是否产气，如不产气则报告为大肠菌群阴性；若有气体产生则为推测性试验阳性，需做进一步的证实试验。 5 证实试验 5．1 平板分离 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱培养18～24h，观察菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。 5．2 复发酵试验 挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，于36±1℃培养箱中，培养24h。5．3 凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，为大肠菌群阳性。记下证实实验的阳性管数，查最大可能数（MPN）检索表得出1000mL水样中总大肠菌群的MPN值。 总大肠菌群（MPN）检索表 二、大肠菌群膜法测定 1 定义 大肠菌群（coliform bacteria）为需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，将带菌滤膜贴在含乳糖的选择性培养基上，经37℃培养24小时后，呈现深暗红色带金属光泽的菌落。 2 仪器 2．1 滤器 2．2 滤膜，孔径0．45μm。直径根据滤器规格，目前常用的有35mm和27mm两种。 2．3 抽滤设备 2．4 无齿镊子 2．5 其它仪器见《GB/T ××××－××公共场所茶具微生物检验方法，大肠菌群测定》中第3章。 3 培养基 3．1 品红亚硫酸钠培养基 3．1．1 成分：蛋白胨10g 酵母浸膏5g 牛肉膏5g 乳糖10g 琼脂10～20g 磷酸氢二钾3．5g
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法 进入无菌室步骤 1．进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。5—1小时。 2．关灯后0?5小时后放可进入。 3．进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套 实验步骤 1，进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成） 2，准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。 3，直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml） 4，再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml） 5，再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 6，再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液 7，更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml） 8，再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 9，再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。） 10，把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中） 11，梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成 －2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成 －3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样 12，如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面） 13，取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。 14，再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准） 15，只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。16，清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。5小时同时不能放气。
饮用水中大肠杆菌的检测方法
饮用水中大肠杆菌的检测方法 (一)水样的采集 供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。水样从采集到检验不应超过4h，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。 1、自来水取样：应在水龙头打开放水5min，再用无菌容器接取水样，待分析。如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3%Na2S2O3.5H2O溶液1mL。 2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。采样后，瓶内应留有空隙。如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。 (二)初发酵试验 1.水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的细菌尽量呈单个存在，即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液。以此类推，稀释到所需倍数。 2.接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基(接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡)中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL，小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。此即5管法。 3.结果观察：37℃中培养24h后取出观察，观察有无气体(杜汉氏小管内有无气体)和酸产生(培养基有无变色)。在48h之间，培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累，或培养基颜色从紫色变为黄色，便可初步断定为阳性反应。 若所测定的15支管中均为阳性反应，说明浓水样污染严重，可将样品进一步稀释后，再按上述方法接种、培养和观察。
生活饮用水标准检验方法
生活饮用水标准检验方法 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。 一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。 《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。 1、国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。 对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。 对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。 按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。 2、国家标准中，利用总大肠菌群作为粪便污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。 国家标准物质提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群的方法。 3、多管发酵法检测总大肠菌群，分为三步：初发酵试验，平板分离，复发酵证实试验。 初发酵试验，采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况。对阳性管培养物，接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基，观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，并根据标准所附检数表报告结果。 其中，对生活饮用水，初发酵试验接种水样总量300ml，即100ml接种2管，10ml接种10管，采用两个稀释度，12支发酵管。对水源水，初发酵试验接种水样总量55.5ml，即10ml接种5管，1ml接种5管，0.1ml接种10管，共采用三个稀释度，15支发酵管。两种接种方法，所用的检数表是不同的。 4、滤膜法检测总大肠菌群，就是利用微孔滤膜，过滤一定量水样，将水样中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜帖放在选择性培养基上(如品红亚硫酸钠培养基)，经培养和证实试验后，直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落，并计算出每升水样中含有的总大肠菌群数 注意;菌落总数测定中，应选择合适的稀释度进行。生活饮用水，国家标准规定每毫升不得超过100个，因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养。 培养时间。与食品中菌落计数不同，测定水中细菌总数，培养时间采用24h。
大肠菌群检测方法
大肠菌检测方法 1.进入无菌室前应打开紫外线灯消毒时间为0.5-1小时。 2.关灯后0.5小时后方可进入。 3.进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套 实验步骤 1.进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是 用75%的酒精加入脱脂棉中制成） 2.准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。 3.直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml） 4.再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml） 5.再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 6.再吸取原液1ml放入盐水管中制成-1梯度的样液 7.更换一根吸管，从-1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml） 8.再吸取-1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 9.再把每个培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀（注：另作3个培养皿：空气 空白，把培养皿打开10分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。） 10.把全部做好的放入培养箱中，温度36±1℃，大肠24小时±1小时，菌落48 小时±2小时（待培养皿中的琼脂凝固后翻转过来放入培养箱中） 11.梯度：-1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成 -2梯度为1ml-1梯度样液加入9ml生理盐水配成 -3梯度-4梯度配制方法和-1、-2的配制方法一样 12.如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36℃，24±2小时。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之行不能划破伊红美兰琼脂表面） 13.取出后再用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36±1℃，24±2小时。 14.再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准） 15.只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。 16.清洗消毒这根管前必须进行消毒霉菌，121℃，0.5小时同时不能放气。
大肠杆菌的检测方法
大肠杆菌的检测方法 一、大肠杆菌的生物学特性 大肠杆菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。 二、培养特性： 大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。 在普通营养琼脂上有3中菌落形态： 1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、 光滑、呈灰色，在生理盐水中易分散； 2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易 在生理盐水中自凝； 3）黏液型：常为含有荚膜的菌株 三、大肠菌群及大肠杆菌测定——MPN法检验流程（FDA BAM）检样50g+450ml稀释液，适当十倍稀释样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液， 每个稀释度接种三管LST肉汤（每管9mlLST肉汤并加有导管），每管接种1mL，如没有产气，则报告为阴性；如有产气，
则分别接种BGLB肉汤管（35 ±℃，48 ± 2h）和EC肉汤（44.5±0.5 ℃（水浴培养）24 ± 2h ~48 ± 2h ），对于接种BGLB肉汤管的查MPN表报告结果，验证是否为大肠菌群；对于接种EC肉汤的产气管接种EMB平板（35℃、18~24h）从EMB平板上挑取5个可疑菌转接到PCA斜面，进行革兰氏染色、IMVC生化鉴定、接种LST复检产气查MPN表报告结果验证是否为大肠杆菌。
食品中大肠菌群检测方法的比较
食品中大肠菌群检测方法的比较 【摘要】随着近年来食品安全问题的突出，作为食品检测的重要检测对象，食品中大肠杆菌群检测也变得越来越重要。目前检测大肠杆菌群的方法随着技术进步也越来越多。本文比较了三中检测大肠杆菌群的方法，即发酵法、平板计数法、测试片法三种大肠杆菌群的检测方法，分析其优缺点，以便对大肠杆菌群的不同检测方法形成比较全面系统的认识，对以后的食品检测中检测大肠杆菌群有所帮助。 【关键词】大肠杆菌群；检测方法；比较 食品安全与人们的健康紧密相关，食品检测已经成为反映食品加工、运输、贮存等各个环节卫生和侵权状况的重要手段。大肠杆菌群作为食品、饮用水以及其他公共卫生的重点检验对象，其检测方法的有效性将大大提高食品检测的效率。随着近年来科学技术的进步，大肠杆菌群的检测方法也不断发展，各国建立了大肠杆菌群的标准检测方法和快速检测方法。但是不同方法其检测原理和检测手段的不同，都会影响检测的灵敏度、准确性和快速性。为此在本文中，我们比较了发酵法、平板计数法、测试片法三种大肠杆菌群的检测方法，分析其优缺点，以便对大肠杆菌群的不同检测方法形成比较全面系统的认识，对以后的食品检测中检测大肠杆菌群有所帮助。 1.发酵法 发酵法是检测食品中大肠杆菌群的一种比较传统的方法，这种技术已经得到世界各国的普遍认可。最具有代表性的是美国环保局（EPA）和法国标准化联合会（FSA）分别早在20世纪90年代就已批准在本国实施该技术，并为此制定了相应的判别标准[1]。 目前发酵法检测食品中大肠杆菌群主要采用的是国标GB4789.3-2010大肠菌群测定，是用月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）配置的肉汤管放在温度为（36±1）摄氏度的恒温培养箱中培养（24±2）小时，先观察倒管内是否有气泡产生，然后（24±2）小时后进行产气复发酵试验，如果未产气则需要继续培养（48±2）小时，产气者进行复发酵试验。在复发酵试验中，用接种环从产气的LST肉汤管中各取取培养物1环，移到含有煌绿乳糖胆盐（BGLB）的肉汤管中，放在（36±1）℃恒温培养箱中培养（48±2）h，观察产气的情况。产气的就计为大肠菌群阳性管。由于该方法操作繁锁，耗费较大的物力财力人力，所以不太适应大量检测工作的需求[2]。 2.平板计数法 大肠杆菌平板计数法检测分为两个阶段。在初培养中，选取2～3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿接种1mL。同时取1mL生理盐水加入另外的无菌平皿作阴性对照。迅速将15mL～20mL冷却至46℃的结晶
生活饮用水中碘化物的检测方法
生活饮用水中碘化物的检测方法 本方法规定了用砷铈催化分光光度法测定生活饮用水及其水源水中碘化物的含量。 本方法适用于生活饮用水及其水源水中碘化物的测定。 本方法检测范围：0—100ug/L(I－)，检测限为2ug/L(取样量1.0mL)。 1. 原理 利用碘对砷铈氧化还原反应的催化作用： H3AsO3 + 2Ce4+ + H2O →H3AsO4 + 2Ce3+ + 2H+ 反应中黄色的Ce4+被还原成无色的Ce3+，碘含量越高，反应速度越快，剩余的Ce4+则越少。控制反应温度和时间，在一定波长下测定体系中剩余的Ce4+的吸光度，求出碘含量。 2. 仪器 超级恒温水浴箱：30℃0.2℃ 数显分光光度计：1cm比色杯 玻璃试管：15 mm120 mm或15 mm150 mm 秒表 3. 试剂（本方法所使用的试剂纯度除特别指明外均为分析纯）浓硫酸（H2SO4，优级纯） 氢氧化钠（NaOH，优级纯） 三氧化二砷（As2O3） 氯化钠（NaCl，优级纯） 硫酸铈铵（Ce(NH4)4(SO4)4·4H2O）
碘化钾（KI，优级纯） 去离子水（H2O，应符合GB/T 6682二级水规格，电导率s/cm）4. 溶液配制 硫酸溶液[c(H2SO4)= mol/L]：取140 mL浓硫酸缓慢加入到700 mL去离子水中，冷却后用水稀释至1L。 亚砷酸溶液[c(H3AsO3)= mol/L]：称取10.0 g三氧化二砷（As2O3）、25.0 g氯化钠和2.0 g氢氧化钠置于1L的烧杯中，加水约500 mL，加热至完全溶解后冷至室温，再缓慢加入200 mL mol/L硫酸溶液（），冷至室温后用水稀释至1L，贮于棕色瓶中室温放置，可保存数月。 硫酸铈铵溶液[c(Ce4+)= mol/L]：称取35.43g硫酸铈铵溶于490 mL mol/L硫酸溶液（），用水稀释至1L，贮于棕色瓶中避光室温放置, 可保存数月。 碘标准溶液： （1）贮备液：准确称取经硅胶干燥器干燥24 h以上的碘化钾0.1308 g于烧杯中，用%NaOH溶液溶解后定量移入1L容量瓶中，用%NaOH溶液稀释至刻度，此溶液1 mL含碘100 ?g。置冰箱（4℃）内可保存半年。 （2）中间溶液Ⅰ：临用时吸取mL贮备液置于100 mL容量瓶中，用%NaOH水溶液稀释至刻度，此溶液1mL含碘10ug/L，%NaOH。（3）中间溶液Ⅱ：临用时吸取中间溶液Ⅰ置于100 mL容量瓶中，用%NaOH水溶液稀释至刻度，此溶液1mL含碘1ug/L，%NaOH。（4）0-100ug/L水碘标准应用系列溶液：临用时吸取碘标准中间溶液Ⅱ0，，, , ，mL分别置于100 mL容量瓶中, 用%NaOH
几种大肠菌群检测方法的比较
几种大肠菌群检测方法的比较 大肠菌群的定义：大肠菌群（coliform group）是指一大群需氧或兼性厌氧、在37℃培养24h能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠菌群的检验基于它能分解乳糖能产酸产气、革兰氏染色阴性的重要特点。 标签：大肠菌群；发酵法；平板法；产酸产气 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。 1 大肠菌群检验方法 由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 目前国内采用的食品大肠菌群检测方法主要有国家标准《食品卫生微生物学检验大肠菌群的检验》GB/T4789.3-2003，《食品微生物学检验大肠菌群计数》GB4789.3-2010，《饮用天然矿泉水检验方法》GB/T8538-2008，《生活饮用水检验方法》GB5750-2006。 加拿大的Sharp AN博士等（1974）首次报道。其基本原理是：以疏水物质在5cm2、孔径为0.45？滋m的滤膜上，横竖各刻印40条线，将滤膜分为1600个小格，以疏水线作为栅栏，防止菌落扩散。样品稀释液首先通过5？滋m的前滤器过滤，再通过0.45？滋m的HGMF滤膜过滤，然后根据所需检验菌的特性，
大肠菌群及大肠杆菌检测方法
出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法 Method for examination of coliform，fecal coliform and escherichia coli in food for export SN 0169—92 代替ZB X09 002—86 1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。 本标准适用于出口食品的检验。 2 设备和材料 2.1 吸管：1mL，具0.1mL刻度；5mL和10mL，具1mL刻度。 2 2 水浴箱：44.5±0.5℃。 2.3 培养箱：36±1℃，44.5±0.5℃。 2.4 冰箱：0～5℃和-15～-20℃。 2.5 均质器。 2.6乳钵和研棒。 2.7 平皿：直径90mm。 2.8天平：感量0.1g。 2.9 显微镜。 2.10 稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。 2.11 玻璃珠：直径约5mm。 2.12菌落计数器。 3 培养基及试剂 3.1 月桂基硫酸盐胰蛋白(LST)肉汤。 3.2 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。 3.3 EC肉汤。 3.4 伊红美蓝琼脂(EMB)。 3.5营养琼脂斜面。 3.6 色氨酸肉汤。 3.7 MR-VP培养基。 3.8 Korser氏枸椽酸盐肉汤。 3.9 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。 3.10 Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液。 3.11 生理盐水。 3.12 革兰氏染色液。 3.13 Kovacs氏靛基质试剂。 3.14 甲基红指示剂。 3.15 V oges—pros kauer(V—P)试剂。 4 样品制备 4.1 以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验，应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的食品，应置于4℃冰箱保存。检验前冷冻样品可于2—5℃18h内解冻，或在45℃以下15min内解冻。 4.2 不同食品样品匀液的制备 4.2.1 液体食品 以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL稀释剂的灭菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，以30cm幅度、于7s 内振摇25次(或以机械振荡器振摇)，制成1：10的样品匀液。
生活饮用水标准检验方法水样的采集与保存
生活饮用水标准检验方法水样的采集与保存GB/T 5750.2-2006 1范围 本标准规定了生活饮用水及其水源水样的采集、样品保存和采样质量控制的基本原则、措施和要求。 本标准适用于生活饮用水及其水源水样的采集和样品保存。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本规范的条款.，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准.然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件.其最新版本适用于本标准。 GB 5749生活饮用水卫生标准 GB/T 12998水质采样技术指导 GB/T 12999水质采样样品的保存和管理技术规定 GB 17051 二次供水设施卫生规范 3采样计划 采样前应根据水质检验目的和任务制定采样计划，内容包括：采样目的、检验指标、采样时间、采样地点、采样方法、采样频率、采样数量、采样容器与清洗、采样体积、样品保存方法、样品标签、现场测定项目、采样质量控制、运输工具和条件等。 4采样容器 4.1应根据待测组分的特性选择合适的采样容器。 4.2容器的材质应化学稳定性强.且不应与水样中组分发生反应，容器壁不应吸收或吸附待测组分。 4.3采样容器应可适应环境温度的变化，抗震性能强。 4.4采样容器的大小、形状和重量应适宜，能严密封口，并容易打开，且易清洗。 4.5应尽量选用细口容器，容器的盖和塞的材料应与容器材料统一。在特殊情况下需用软木塞或橡胶塞时应用稳定的金属箔或聚乙烯薄膜包裹，最好有蜡封。有机物和某呰微生物检测用的样品容器不能用橡胶塞，碱性的液体样品不能用玻璃塞。
大肠杆菌检测实验报告
国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数 实验目的 实验原理：国标法操作的原理 实验器材： 培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml 大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台 实验药品： 磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤： 一： 10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。 用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min 二： 1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。 2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。 3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。 4：灭完菌后放入超净台中备用。 三： 1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。 3：取4只试管，编号1—4 4：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS 5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。 6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀 7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。 9：取4只平皿，编号1—4 10：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。 11：将培养基在３6摄氏度条件下培养12小时。 12：取出培养皿，选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。 四：实验结果（记得在操作过程和得到结果时拍照） 1号，2号菌落个数多不可计，舍弃 4号平皿中菌落数目小于10 cfu ，舍弃 3号平皿中菌落分布较均匀，数3号中的菌落数，一共有210个cfu 。 计算样品中细菌浓度为：1.05× 105 Cfu/ml
FDA大肠菌群和大肠杆菌检测方法
大肠菌群的定义 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠杆菌的定义 大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。 大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为++--或-+--的细菌。 与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。 卫生学意义 大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。 食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。 大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。 大肠杆菌的生物学特性 基本形态：
此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。 培养特性： 大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。 大肠菌群及大肠杆菌测定 ——MPN法检验流程（FDA BAM） 1、检样50g+450ml稀释液 2、适当十倍稀释样品 3、选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种三管LST肉汤（每管9mlLST肉汤并加有导管），每管接种1mL。在35℃下，培养24 ± 2h ~48 ± 2h。 4、（1）没有产气管→报告阴性 （2）有产气管：①接种BGLB肉汤管→查MPN表报告结果（大肠菌群） ②接种EC肉汤→在44.5±0.5 ℃ （水浴培养）24 ± 2h ~48 ± 2h。 →产气管接种EMB平板（35℃、18~24h），从EMB平板上挑取5个可疑菌 转接到PCA斜面，进行革兰氏染色、IMVC生化鉴定、接种LST复检产气 →查MPN表报告结果（大肠菌群）。 大肠菌群测定——MPN法检验几点说明 MPN检索表： MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。 初发酵和证实试验： 1）两步法进行了两次乳糖发酵试验。初发酵和证实实验所用培养基不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在37℃分解乳糖产酸产气”。 2）初发酵阳性管，不能肯定就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能成为阴性。有数据表明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证实试验相差较大。因此，在实际检测工作中，证实试验是必需的。