二类临床试验方案

体外诊断试剂临床试验方案

产品名称D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）

型号规格：

实施者：

承担临床试验的医疗机构：

临床试验类别：

临床试验负责人：（签字）

年月日

说明

1、医疗器械产品在临床试验前，必须制定临床试验方案。

2、临床试验方案由医疗机构和实施者共同设计、制定。实施者与医疗机构签

署双方同意的临床试验方案，并签订临床试验合同。

3、市场上尚未出现的第三类植入体内或借用中医理论制成的医疗器械，临床

试验方案应当向医疗器械技术审评机构备案。

4、医疗机构和实施者应当共同制定每病种的临床试验例数及持续时间，以确

保达到试验预期目的。

5、临床试验类别分临床试用和临床验证。

一、临床试验的背景

D-二聚体是交联纤维蛋白降解中的一个特征性产物，在深静脉血栓、弥散性血管内凝血、心肌梗死、重症肝炎、肺栓塞等疾病中升高，也可作为溶栓治疗有效的观察指标，陈旧性血栓患者D-二聚体并不升高。随着检验学的快速发展，D-二聚体定性与定量的测定愈加受到医学界的重视。

D-二聚体测定方法主要有：胶乳凝集法、酶联免疫吸附试验(ELISA法)、胶体金免疫渗透试验法及免疫比浊法。胶乳凝集法，是一种半定量的试剂盒，敏感度较低，只能作为筛查。ELISA法的敏感性较好，是检测D-D的经典方法，但是，它存在操作费时、复杂的不足，每次均需同时做标准曲线，增加了操作成本，不适于单个标本检验。然而对进行溶栓治疗的患者来说，作D-D浓度的动态观察是十分必要的，所以需要尽快、逐个出结果，随时调整治疗方案。可见ELISA法在临床应用中还存在缺陷。胶体金免疫渗透试验法虽然速度较快，但重复性和准确性都不是很好，而且与ELISA法的结果相关性并不好。胶乳增强免疫比浊法检测D 一二聚体水平具有定量和快速、稳定的优点，适合自动化仪器使用，可满足门急诊检测等需要，目前把它作为排除肺栓塞诊断的首选试验，并逐步在临床推广应用。

本公司D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）研发工作已完成，为了验证该试剂盒在临床应用上的适用性和准确性，现开展临床验证工作。

二、产品的机理、特点与试验范围

1．机理

该试剂盒利用胶乳颗粒作为载体，吸附抗体后遇到待测血浆中相应抗原而发生凝聚，测定胶乳凝聚时的吸光度，根据校准曲线计算D-二聚体的含量。并能达到一定测试准确性和精密度的试剂组合。

2．特点

干粉试剂，便于运输与储存，开瓶需蒸馏水复溶，适用于胶乳增强免疫测定法测定D-二聚体。

3．试验范围

本产品试验范围：运用在医疗机构临床中进行人血浆中D-二聚体的体外定量分析。三、产品的适应症或功能

本试剂适用于人血浆中D-二聚体的体外定量分析。

D-二聚体测定是诊断活动性纤溶较好的指标，对血栓形成性疾病如弥漫性血管内凝血（DIC）、深静脉血栓形成、脑血管疾病、肺栓塞、肝脏疾病、外科手术后、急性心梗等疾病均有重要的诊断价值，同时D-二聚体检测还可用于溶栓药物的治疗监测指标。

四、临床试验的项目内容和目的

1．目的

通过对本公司试剂盒的产品性能指标进行测定以及和对照组产品针对同一临床样本的对比试验验证与对照产品是否等效从而验证产品在临床测定中的适用性和有效性。

2．项目内容

测试试剂盒的准确性、重复性（批内不精密度与批间不精密度）、线性范围的性能指标以及与对照组产品针对临床样本的对比试验的数据进行统计分析来验证本公司D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）与对照产品等效。

五、总体设计

1．产品性能测定

对D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）的准确性、重复性（批内不精密度与批间不精密度）、线性范围的性能指标进行测试。

2．临床样本的选择

（1）样本要求

空腹静脉采血，109mmol/L枸橼酸钠与全血按照1：9比例混合均匀（1份抗凝剂＋9份全血）。以2500×g离心15分钟，用塑料移液管取出血浆，在4小时内完成试验。

样本所含被测物的量应尽可能的分散，应包括被测物含量为正常值与异常值的临床样本。

（2）样本数量

根据《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》，第二类产品的临床研究的总样本数为200例，由于第二类产品的临床试验单位要求为两家或两家以上。所以本方案要求在此次临床试验中样本数量不少于100例，其中被测物为异常值的样本为30例，正常值样本为70例，符合统计学的要求。

3．对照产品的要求

选择已批准上市且为目前临床普遍认为质量较好的同方法或原理产品作为对照产品。同时应注明对照产品的生产厂家名称、产品规格型号、注册证号、生产批号、有效期、测试原理。

对比试验研究中重复测定结果仍不符的样本，应采用其他方法或原理试剂再次进一步验

证试验，以便对临床研究结果进行分析。

4．对比试验的统计处理

将本公司D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）与对照产品对同一临床样本进行测定，分别记录两种产品的测定值，当临床样本全部测定完成后将记录的两组数值进行配对t检验与相关性的计算，统计两种产品检测结果是否具有统计学差异且显著性相关。

5．成功或失败的可能性分析

（1）产品方面

由于液态试剂的本身状态限制，可能会对包装运输的要求较高。这就要求包装人员包装时加内塞，拧紧瓶盖，以保证试剂的密封性；运输人员需用加冰袋的泡沫箱密封包装，防止在运输过程中发生漏液、碎瓶的现象。出现失败的原因可能是运输中造成产品质量的破坏，导致产品失效。

由于干粉试剂本身状态的限制，要求开瓶后需用蒸馏水复溶，为了保证产品性能与质量，应避免产品在复溶过程中出现差错或受到污染而造成临床试验失败。

（2）试验设计方面

如果根据统计结果得出的结论是本公司D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）与对照产品有显著性差异，说明本公司D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）与对照产品不等效。

六、临床评价标准

1．产品性能

产品性能测定结果应达到下述要求：

根据本公司D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）说明书和仪器操作说明书设定参数。

（1）准确性

a）试剂准确性

用已批准上市的D-二聚体质控血浆进行三次平行测量测定，取均值。均值在质控血浆允许偏差范围之内。

b）校准品准确性

用已批准上市的D-二聚体试剂盒对校准品进行三次平行测量测定，取均值。均值与校准品标定值的不准确度小于10%。

（2）重复性

a）试剂批内不精密度

用本公司同一批号的试剂对高、中、低值三个样本分别进行重复测定20次，计算变异系数CV，高、中、低值CV不得大于10%（n=20）。变异系数CV计算公式：

CV批内（%）=

()()

X

1

n

/

X

Xi2

∑-

-

×100%

式中：

X i—样本中被测物浓度测定值；

X —测定结果的平均值；

i —1，2，3，……，n;

n —重复测定次数。

b）校准品瓶内不精密度

用本公司配套试剂对本公司一瓶校准品进行重复测定10次，计算变异系数CV，CV不得大于10%（n=10）。变异系数CV计算公式：

CV瓶内（%）=

()()

X

1

n

/

X

Xi2

∑-

-

×100%

c) 试剂批间不精密度

用本公司三批试剂分别对试剂盒中校准品重复进行10次测量，计算其批间变异系数CV，CV不得大于15%。变异系数CV计算公式：

计算按公式（2）

CV批间（%）= （s批间/ X总）×100% (1)

其中s批间按公式（3）

s批间2（%）= s总2 - s批内2 (2)

d) 校准品批内不精密度

用本公司配套试剂对本公司同一批中校准品进行重复测定10次，计算变异系数CV，CV 不得大于10%（n=10）。变异系数CV计算公式。

CV批内（%）=

()()

X

1

n

/

X

Xi2

∑-

-

×100%

（3）线性范围

本公司D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）的线性范围为50μg/L~5000

μg/L ，相关系数γ≥0.95。操作方法：将高值临床样本（或校准品）用生理盐水进行倍比稀释，取五个梯度浓度，每个浓度重复测定3次取平均值，计算稀释比例与相应测定浓度均值进行线性回归分析，计算相关系数γ。相关系数γ的计算公式：（通过Excel 软件中插入函数CORREL 也可求出相关系数）

r=

]

)([])([2

2

2

2

∑∑∑∑∑∑∑-?-?-i i i i i

i i i Y Y n X X n Y X Y X n

式中：

i X —— 测定管溶液的浓度均值；

i Y —— 与测定管溶液浓度相对应的稀释比例；

i —— 1,2，3，……，n ； n —— 测定样本数。

2．对比试验的统计分析

配对t 检验统计分析得出P ＞0.05；线性相关分析得出r ＞0.95 P ＜0.001 。统计出两种产品检测结果没有统计学差异且显著性相关。

七、临床试验持续时间及其确定理由

临床试验持续时间没有严格要求，可以根据样本情况确定，只要能够完成本方案规定的内容即可。但是由于本产品开瓶稳定性为2℃-8℃稳定30天，所以本试验需要在一个月内完成临床试验。

如果干粉试剂在使用中出现吸潮变粘稠的现象，说明试剂已经失效或存在问题，请重新选择同批试剂进行试验。

八、每病种临床试验例数及其确定理由

医学统计学要求，正常值样本和病理值样本均不少于30例。本试验根据产品的功能特点及统计学原理的要求，被测物为异常值的样本计划入组30例，例数符合统计学要求与《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》、《医疗器械临床试验规定》的要求。

九、选择对象范围、选择对象数量及选择理由

1．选择对象范围

选择对象：在临床试验单位检验室进行D-二聚体含量测定的就医人。D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）为人血浆中D-二聚体的体外定量分析试剂，临床上只

用于辅助诊断，并不具有确切的诊断意义，故在临床上主要区分为含量测定正常值与异常值而非确定的病种，将临床研究对象分为D-二聚体含量测试为异常值组和D-二聚体含量测试为正常值组，符合统计学要求与《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》、《医疗器械临床试验规定》的要求。

（1）D-二聚体含量测试为异常值组入选标准

年龄18~80，男女不限，用对照产品测定超出其正常参考范围为异常值的患者，每家临床试验单位为30例。

（2）D-二聚体含量测试为正常值组入选标准

年龄18~80，男女不限，用对照产品测定在其正常参考范围内为正常值的就医人，其中包括正常人群与D-二聚体含量测试为正常值的患者。每家临床试验单位为70例。2．选择对象数量及选择理由

根据《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》，第二类产品的临床研究的总样本数为200例，由于第二类产品的临床试验单位要求为两家或两家以上。所以每家临床试验单位临床样本数不少于100例，其中被测物为异常值的样本为30例，正常值样本为70例，符合统计学的要求。

十、副作用预测及应当采取的措施

D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）试剂属于体外诊断试剂，不进入人体，测试结果只用于临床验证试验数据统计分析，不作为辅助诊断的依据，因此在使用过程中不会对在临床试验单位检验室进行D-二聚体含量检测的就医人增加任何直接的风险及副作用。

十一、临床性能的评价方法和统计处理方法

1．临床性能的评价方法

通过对产品准确性、重复性（批内不精密度与批间不精密度）、线性范围性能指标的测试，各项达到临床评价标准来验证产品在临床中的准确性、适用性。

2．统计处理方法

（1）配对t检验：将D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）与对照产品对正常值样本与异常值样本的测定数值分别计算平均值与标准差，根据公式计算t值应得出t ＜t0.05,f， P＞0.05,两种检测结果的量值应无显著性差异。

t 值计算公式：（n1与n2分别为两种产品测定样本数,f=n1-1+n2-1）

S R =

2

)1()1(212

22211-+?-+?-n n S n S n

t =

2

12

121n n n n S x x R

+?- （2）相关性计算：将D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）与对照产品的测定数值进行回归分析，计算相关系数r ，应得r ＞0.95，P ＜0.001，两组测试数值具有显著性正线性相关关系。r 值计算公式如下：

∑∑∑----=

2

2

22

112

21

1)

()())((x x x x x x x x r i

i

i

i

（3）通过以上两种统计学处理方法验证D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）与对照产品等效，从而验证产品的有效性。

十二、伦理委员会评审意见与受试者知情同意书

因为此次临床试验使用医院日常工作测定后的剩余样本（为日常在临床试验单位检验

室进行D-二聚体含量测定的就医人检测完成后剩余的样本量，并非为临床试验专门采集的样本），所以此次临床试验不涉及个人隐私可不经受试者同意。D-二聚体测定试剂盒（自动胶乳增强免疫测定法）属于体外诊断试剂，在临床试验中不需要与患者直接接触，不向病人提供检测报告，且试验结果只用于对比研究，不作为辅助诊断依据，不会给受试者带来任何风险，因此“知情同意书”这项内容可以省略。

十三、各方承担的职责

公司：

（1）负责为负责临床试验的医疗机构提供试验用试剂，及相关技术资料； （2）与实施者共同设计、制定临床试验方案，双方签署临床试验方案及协议。

临床试验机构：

（1）与实施方共同设计、制定临床试验方案，双方签署临床试验方案及协议； （2）如实记录受试产品试验数据；

（3）提交临床研究报告，并对报告的正确性及可靠性负责； 4）对实施方提供的资料负有保密义务。