木质素成分

第八节其他类型成分分析

木脂素类成分分析

（一）概述

木脂素类（lignans）化合物多为无色结晶、此类成分在TLC鉴别时需喷显色试剂；对于结构中有芳香环的木质素类成分，可直接在紫外光灯下检视；少数具有升华性，可采用微量升华

法进行鉴别。游离木脂素具亲脂性，难溶于水易溶于苯、乙醚、氯仿、乙醇等有机溶剂，成苷后水溶性增加。结构中具有羟基的木脂素，由于羟基的存在，使其具有一定的酸性，可溶于

碱性水溶液，因此，该类木脂素的提取和纯化可采用碱溶酸沉法。

分析中药中木脂素类成分时，常用的提取方法是溶剂法，根据待测成分的溶解性选用适

当的溶剂提取，而后根据待测成分与杂质性质的差异，分析目的物是总木脂素还是单体木脂素，欲使用的分析方法是化学分析法还是仪器分析法等因素选择纯化方法。总之，提取和净化都要以尽量完全提取待测组分、最大限度去除尽杂质为原则，再根据测定方法的特点灵活选择提取和净化方法。

木脂素常有多个手性碳原子或手性中心，其生物活性与手性碳的构型有关，因此在提取、纯化过程中应注意避免酸、碱，以防止其构型改变。

木质素类成分的结构中常有一些官能团，如酚羟基、亚甲二氧基、内酯结构等，可利用这些官能团的性质和颜色反应进行木脂素类成分的检视和含量测定

常用中药连翘、五味子、厚朴、牛蒡子、细辛等含有木脂素类成分。该类成分具有多种生物活性，如五味子所含的木脂素具有补肾、强壮、安神、保肝降酶等作用。厚朴中的木脂素具有松弛肌肉、消炎、止痛之功效。因此，中药中含木脂素类成分时，常选择该中药所含的木脂素类成分作为鉴别、定量依据

《中国药典》（2015年版）中有10个中药材或饮片测定木脂素类成分含量，其中用hPC的10个，同时测定两种或两种以上木脂素成分的有2个；有8个中药材或饮片以木脂素为对照品进行定性鉴别。87个中药制剂测定木脂素含量，其中用HPLC的87个，同时测定两种或两种以上木脂素成分的有49个；有121个中药制剂以木脂素为对照品进行鉴别

（二）鉴别

木脂素类成分的母核没有特征性化学反应，只能利用分子结构中的一些特殊官能团如酚羟基、亚甲二氧基等进行鉴别反应。但对于一些非特征性的试剂如磷钼酸乙醇液、硫酸乙醇液等，不同的木脂素类化合物可显示不同的颜色，常用于木脂素类成分的薄层鉴别。

1.化学反应法利用木脂素结构中特殊官能团的颜色反应进行鉴别。含酚羟基的木脂素可与三氧化铁试剂、重氮化试剂发生颜色反应；含亚甲二氧基的木脂素可与没食子酸浓硫酸试、削（labat反应）、变色酸浓硫酸试剂（Ecgrine）发生颜色反应。

此类反应的专属性差，应慎用。一般多用于单味药制剂，对于复方中药制剂要进行阴性对照实验，验证其专属性。

C＋-0m

2.薄层色谱鉴别含木脂素类成分的中药材及其中药制剂的鉴别较多使用的方法是薄层色谱鉴别法。木脂素类成分大多具有较强的亲脂性，采用吸附色谱可获得较好的分离效果，常用

的吸附剂为硅胶GF，展开剂一般选用极性较小的亲脂性有机溶剂，如苯、三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（9:1）等。薄层色谱展开后，大多木脂素需喷显色试剂，最常用的是10％硫酸乙醇液、香草醛试剂，105℃加热显色，还可用5～10％磷钼酸乙醇液显色或碘蒸气熏蒸显色。（三）含量测定

木脂素类成分的含量测定方法较多，根据测定目的不同可分为总木脂素含量测定和单体木脂素成分的含量测定

1.总木脂素的含量测定总木脂素的含量测定多采用变色酸-浓硫酸比色法，该方法可测定中药材及其中药制剂中总木脂素含量。该方法的原理是利用木脂素结构中的亚甲二氧基与变色酸-浓硫酸试剂反应，产生颜色的变化，在570m处呈现最大吸收，进行比色测定。但应注意，本法干扰较多，当采用本法进行中药制剂的含量测定时，要进行阴性试验，以证明方法的专属性。当结构中不含亚甲二氧基时，也不能使用本法。

2.单体木脂素类成分的含量测定单体木脂索类成分的含量测定方法主要有色谱法，常用的有薄层色谱扫描法和高效液相色谱法。

（1）薄层色谱扫描法:一般可用吸附色谱，以硅胶为吸附剂，用低极性的有机溶剂展开在紫外光区有吸收的木脂素类成分，用薄层吸收扫描法测定含量；利用G荧光薄层板上暗斑的荧光淬灭，可用薄层荧光扫描法测定含量。

（2）高效液相法:日前高效液相色谱法是单体木脂素类成分含量测定的主要方法。一般以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙水或醇水系统为流动相，多采用紫外检测器（四）应用实例

（四）应用实例

【例1】复方鱼腥草片中连翘的鉴别（薄层色谱法）

（1）主要组成:鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花。

（2）鉴别:取本品25片，除去糖衣，研细，加乙醚20m，浸渍24小时，滤过，药渣用乙醚洗涤2次，每次10mL，滤过，药渣挥尽乙醚，加乙醇30mL，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣用适量水溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，柱高12cm），用水100mL洗脱，弃去洗脱液，再用30％乙醇50mL洗脱，弃去；继用70％乙醇60mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取连翘苷对照品，加甲醇制成每1ml.含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各510L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-甲酸（9:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（3）说明:复方鱼腥草片是以连翘苷为指标性成分进行连翘的鉴别。连翘苷极性较大，可溶于水及稀醇等溶剂，而制剂中含有较多其他水溶性成分，如黄酮苷类，因此，在制备供试品溶液时应注意除去水溶性干扰成分。该制剂采用大孔吸附树脂柱，用水及30％乙醇洗去干扰成分，再用70％乙醇将连翘苷等成分洗脱下来，洗脱液蒸干，制成甲醇溶液，以方便点样。

【例3】双黄连颗粒中连翘含量测定（HPLC法）

（1）主要组成:金银花、黄芩、连翘

（2）含量测定

①色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（25:75）为流动相检测波长为278nm。理论板数按连翘苷峰计算应不低于6000

②对照品溶液的制备:取连翘对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

③供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品，研细，取约1.5g或0.75g（无蔗糖），精密称

定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL密塞称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10mL蒸干，残渣用70％乙醇5mL使溶解（必要时超声处理），加在中性氧化铝柱（100～120目，6g，内径为1cm）上，用70％乙醇40mL洗脱，收集洗脱液，浓缩至约mL用甲醇适量溶解，转移至5mL量瓶中，加醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得

④测定:分别精密吸取对照品溶液10μL与供试品溶液各510L.注入液相色谱仪，测定，即得。本品每袋含连翘以连翘背（C2HOn）计，不得少于30mg，无蔗糖型不得少于6.0mg