Agilent高效液相校验方案(二)

Agilent高效液相色谱仪校验方案（二）

目录

1.校验目的┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈3

2.本公司高效液相色谱仪类型及相关参数┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈3

3.校验结果处理及校验周期┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈3

4.校验依据及参考资料┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈4

5.仪器基本信息┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈4

6.校验项目及技术指标┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈4

7.校验条件、使用试剂及设备┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈5

8.校验内容及结果┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈5

9.评价与结论┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈14

1. 校验目的

本方案适用于本公司高效液相色谱仪有下列情况后的校验，以确定仪器性能完好，满足工作需要。

□投入使用前；

□维护修理后；（维护修理：）□使用中发现仪器异常时；（异常情况：）□正常校验周期时。

2. 本公司高效液相色谱仪的类型及相关参数

2.1高效液相色谱仪的定义：一般的高效液相色谱仪均由输液系统、进样器、色谱柱（柱温箱），检测

器和数据处理装置（通常为色谱工作站）组成。利用试样中组分在色谱柱中固定相和流动相间分配或吸附特性的差异，由流动相将试样带入色谱柱中进行分离，经检测器检测，依据组分的保留时间和响应值（峰面积或峰高）进行定性、定量分析。

2.2本公司高效液相色谱仪的类型及相关参数

3. 校验结果处理及校验周期

3.1校验结果处理

3.1.1按本报告校验合格的仪器方可使用；

3.1.2若校验不合格则禁止使用，申请维修后再按本报告校验。

3.2 校验周期

校验周期为一年。

3.3 日常校验

3.3.1在日常使用过程中，还须用样品测定的系统适用性来衡量仪器的当前状况；

3.3.2具体校验方法及合格标准以当天所检样品的标准操作过程中的系统适用性试验为准。

4. 校验依据及参考资料

4.1 USP附录：﹤621﹥色谱及仪器使用说明书；

4.2中华人民共和国国家计量检定规程：JJG 705-2002《液相色谱仪》；

4.3中华人民共和国药典2005年版二部附录V D液相色谱法。

5. 仪器基本信息

6. 校验项目及技术指标

7. 校验条件、使用试剂及设备

7.1校验条件

7.1.1安装仪器的房间应清洁无尘，无易燃和腐蚀性气体，室内排风良好。

7.1.2仪器应平稳地放在工作台上，便于操作，周围无强烈的机械振动和电磁干扰，仪器接地良好。

7.1.3室温在15℃～30℃，检定过程中温度变化不超过3℃，室内湿度在RH20%～85％范围内。7.1.4 电源电压：220±22V；电源频率：50±0.5Hz。

7.2 使用试剂

7.3 校验用设备

8. 校验内容及结果

8.1外观校验项目及结果

8.2输液系统的校验

8.2.1泵耐压校验（此项目属仪器首次校验时必检项目） ① 校验方法：

a. 将仪器各部分连接好(不接色谱柱)，以甲醇为流动相，流速为1ml/min ，启动仪器，压力平稳后保持10min,用滤纸检查各管路接口处应无湿迹；

b. 堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，立即停流速，在5min 内观察各接口处应无泄漏。 ② 校验结果：

a. b.

8.2.2泵流量设定值误差和流量稳定性误差的校验

①校验方法：将仪器连接好，以水为流动相，按下表设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用清洁、干燥、并已称重过的容量瓶收集流动相，按下表设定时间收集，称重，通过下列公式计算。

t

F m ?=

ρ1

2 式中：Fm ─设定流量下的实测值（ml/min ） W 2─容量瓶加水的质量（g ）

W 1─容量瓶的质量（g ） t ─收集水的时间（min ） ρ─实验室温度下水的密度（g/ml ，参见附表一）

流量设定值的误差%100?-=s

s

mean S F F F S 流量稳定性误差%100min

max ?-=

mean

R F F F S

式中：F mean ─同一组测量值的算术平均值（ml/min ） F s ─流量设定值（ml/min ）

F max ─同一组测量中流量最大值（ml/min ） F min ─同一组测量中流量最小值（ml/min ）

②泵流量设定值误差与流量稳定性误差校验结果

8.2.3梯度准确度的校验

①校验方法：通过梯度控制装置设置阶梯式的溶剂梯度程序。A （或C ）溶剂为水，B （或D ）溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，A （或C ）从100%变到0。开机后先以A （或C ）溶剂走基线（不经过色谱柱），基线平稳后,使用工作站调零点后记下读数。然后执行梯度程序，画出梯度变化曲线，并读出各种溶剂配比时工作站记录的读数。重复测量两次，求出平均值。从B （或D ）溶剂的含量及相对应的工作站记录的读数Lm i 和Lm 值计算梯度准确度To i ，To 为两次测定第i 段梯度准确度的平均值，取To 中最大的作为仪器梯度准确度误差。

To i ＝

Lm

Lm -Lm i ×100% To=

2

To To i(2)

i(1)+

式中：To i---------第i 段梯度准确度(%)；

Lm i---------第i 段梯度工作站记录的读数；

Lm -------5段梯度工作站记录读数的平均值，即Lm ＝

5

L 5

1

∑=i i

m

。

To ---------第i 段梯度准确度两次测定准确度的平均值(%)； To

i(1) ---------第i 段梯度准确度第1次测定值； To i(2) ---------第i 段梯度准确度第2次测定值。

②梯度准确度校验结果（色谱图见图 ～图 ）

8.3柱温箱温度设定值误差与控温稳定性误差的校验

8.3.1校验方法：分别选择25℃、40℃、55℃作为可控温度，把校验铂电阻温度计探头置于柱温箱中部，

通电升温，待温度稳定后，每隔10分钟记录一次，共计7次，求出算术平均值；算术平均值与设定值之差为柱温箱温度设定值误差ΔT S，其最大值与最小值之差T C为控温稳定性误差，ΔT S应≤±2℃，T C应≤1℃。

8.3.2柱温箱温度控制系统校验记录（图表见图～图）

8.4检测器性能的校验

8.4.1 基线噪音与基线漂移的校验

①校验方法：将仪器连接好，接色谱柱，以甲醇为流动相，流速为1.0ml/min，波长选254nm，灵敏度

设为最灵敏档，仪器稳定后，记录基线40分钟～60分钟，计算基线噪音与漂移。

②基线噪音与基线漂移的校验结果（色谱图见图）

8.4.2 最小检测浓度的校验

①校验方法：同“基线噪音与基线漂移”校验条件，仪器稳定后，注入1.0×10-7g/ml萘-甲醇溶液20μl，

平行进两针，取其平均值，样品峰高应大于或等于两倍噪音。

计算公式：

H C

H CI N ?

?

=

2

式中: CI——最小检测浓度（g/ml） H N——噪音（AU）

C——样品浓度（g/ml） H——样品峰高（AU）②最小检测浓度的校验结果（色谱图见图与图）

8.4.3 检测器线性范围的校验

①供试液：精密移取5.0ml丙酮至100ml量瓶中，以水稀释至刻度，作为丙酮贮备液；分别精密移取丙酮贮备液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml、4.5，5.0ml至25ml量瓶中，以水稀释至刻度，得到浓度分别为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%，

1.0%的十个不同供试液。

②校验过程：将检测器连接好，预热稳定后，以甲醇为流动相，波长为254nm，空载（不接色谱柱）

稳定后依次注入系列供试液，同时记录峰面积，重复测定3次，取算术平均值，作出峰面积与丙酮浓度线性图，求线性回归方程与相关系数r（r≥0.9990）。

③检测器线性校验结果（图表见图～图）

8.4.4 检测器波长准确度（示值误差与重复性误差）的校验

①校验方法：检测器连接好，以水为流动相，流速为1.0ml/min，不接色谱柱，打开检测器，预热稳定

后，待基线稳定后，注入咖啡因标准溶液校验波长为205nm处的示值误差，另注入紫外分光光度计标准溶液（即重铬酸钾的高氯酸溶液）校验波长分别为235nm、257nm、313nm、350nm处的示值误差；在每个校验波长处将检测器波长调到较规定波长低5nm，将检测器基线调零，注入标准溶液20 l，记录峰面积，然后增加波长1nm，依法操作，直至比校验波长高5nm，分别找出最小或最大峰面积所对应的波长，即为对应波长；重复测定3次，取算术平均值与标准波长之差即为波长示值误差（标准规定：应≤±2nm）；3次测定中最大示值波长与最小示值波长之差即为波长重复性误差（标准规定：应≤1nm）。

②示值误差与重复性误差校验结果（色谱图见图～图）

8.5定性、定量测量重复性的校验

8.5.1 校验方法：将仪器连接好处于工作状态（接色谱柱），以甲醇为流动相，流速为1.0ml/min，波长

设为254nm，测试样品为1.0×10-4g/ml萘-甲醇溶液，待稳定后，将进样值设定为1μl、5μl、10μl、20μl、50μl、80μl，每一进样量连续测定6次，记录保留时间和峰面积，计算相对标准偏差（RSD）。

定性测量重复性：保留时间的RSD应不大于1.0%；定量测量重复性：峰面积的RSD应不大于2.0%。

%100X

1-n X X n

1

i 2

i

?-=

∑

=）

（定性（定量）RSD

式中：X i ——第i 次测得的保留时间或峰面积 i ——测量序号

X ——n 次测量结果的算术平均值 n ——测量次数

8.5.2定性、定量测量重复性校验结果（色谱图见图 ～图 ）

9. 评价与结论

9.1本年度仪器校验结果及评价 评价与结论：

审核人/日期： 审批人/日期：

9.2历年校验主要性能指标统计对比

9.3总结论

□校验结果符合校验方案标准要求，可以投入使用；

□根据校验结果与历年校验结果对比分析，仪器性能

故仪器校验周期定为。

审核人/日期：审批人/日期：

附表一：不同温度下纯化水在空气中的密度