三种食源性致病菌的多重LAMP检测方法研究
ＤＯＩ：１０．７４９５／ｊ．
ｉｓｓｎ．１００９-３４８６．２０１８．０１．０１５三种食源性致病菌的多重ＬＡＭＰ检测方法研究
收稿日期：２０１６-０８-２８；修回日期：２０１６-１０-１７。
基金项目：国家部委基金资助项目（９１４０Ａ２６０３０２１４ＪＢ１１４１８）
。作者简介：李 森（１９８９－）
，男，博士生，主要研究方向为生化战剂检测。通信作者：王源升（１９６０－），男，教授，博士生导师，ｑｉａｎｘｕｎ８９６５＠１６３．ｃｏｍ。李 森１，王源升１，余红伟１，李 瑜１，夏革清２
（１．
海军工程大学基础部，武汉４３００３３；２．华中科技大学同济医学院附属协和医院，武汉４３００２２）摘 要：针对沙门氏菌的ｉｎｖＡ基因、金黄色葡萄球菌的ｎｕｃ基因和志贺氏菌的ｉｐａＨ基因分别设计ＬＡＭＰ引物，通过对实验条件和反应体系的优化，分析鉴定扩增产物，验证了ＬＡＭＰ方法的灵敏度及特异性，初步建立了针对三种致病菌的多重ＬＡＭＰ（ｍ-ＬＡＭＰ）
检测方法。分别对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的基因组ＤＮＡ提取物梯度浓度稀释后进行实时荧光检测，结果表明：多重ＬＡＭＰ反应体系检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的敏感度均为１０ｆｇ／反应。对目标菌和其他非目标菌的特异性检测均未出现假阳性和假阴性结果，并通过熔解温度曲线分析对目标菌的扩增产物进行初步鉴定。鉴定结果表明：该方法快速准确、简便高效、特异性强，可广泛应用于致病菌的筛选检测。
关键词：沙门氏菌；金黄色葡萄球菌；志贺氏菌；多重ＬＡＭＰ
中图分类号：Ｏ６５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００９－３４８６（２０１８）０１－００７５－０５
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ｌｏｏｐ-ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏ-ｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＬＡＭＰ）
是一种新型的核酸放大扩增技术，具有快速准确、简便高效、特异
性强以及扩增产物检测方便的特点，可广泛应用于致病菌的筛选检测［１－４］。但是，单重ＬＡＭＰ技术只能实现一种致病菌的检测，具有一定的局限
第３０卷 第１期 ２０１８年２月 海军工程大学学报 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＮＡＶＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ
Ｖｏｌ．３０ Ｎｏ．１ Ｆｅｂ．２０１８ 万方数据