碱性磷酸酶动力学参数的测定
题目：碱性磷酸酶动力学参数的测定
（创新实践活动论文）
2015年4月24日·北京
不同缓冲液对碱性磷酸酶动力学参数的影
响
摘要酶促反应动力学主要研究酶催化的反应速率以及影响反应速率的各种因素，为了更好的发挥酶的高效性，就必须准确把握酶促反应的条件。本文重点研究不同缓冲液所配制的酶液对酶促反应的影响。实验利用碱性磷酸酶溶解在TRIS，碳酸钠，去离子水等缓冲液中为酶液，磷酸苯二钠为基质，进行实验，得到去离子水为最适缓冲液的结果，表明以去离子水为缓冲液所配制的酶液能使酶发挥最好的效果，具有研究意义。
关键词：碱性磷酸酶；缓冲液；动力学参数；
本试验以碱性磷酸酶为催化剂，磷酸苯二钠为底物，在一定温度、pH及酶量的条件下，碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠转化为苯酚；利用分光光度计测定在不同底物浓度下苯酚的生成量。通过实验可以加深对有关酶促反应动力学基本知识的理解和记忆；并熟记利用双倒数法测定酶Km值的原理，熟悉试验方法。
1 实验材料、试剂与仪器
1.1 材料与试剂
实验中使用的主要试剂有
磷酸苯二钠:国药集团化学试剂有限公司分析纯
醋酸镁：天津市永大化学试剂开发中心分析纯
醋酸：北京化工厂分析纯
碱性磷酸酶：北京化工厂分析纯
4-氨基安替比林：天津市永大化学试剂有限公司分析纯
铁氰化钾：北京化工厂分析纯
硼酸：北京化工厂分析纯
苯酚：天津市福晨化学试剂厂分析纯
三羟甲基氨基甲烷（Tris）：北京化学试剂公司分析纯
NaOH：北京化工厂分析纯
碳酸钠：天津光复科技发展有限公司分析纯
碳酸氢钠：天津市福晨化学试剂厂分析纯
实验中使用的主要溶液有
（1）0.1 mol/L碳酸盐缓冲溶液（pH=10）：碳酸钠1.5875 g，碳酸氢钠0.84 g，蒸馏
水溶解至250 mL。
（2）0.04 mol/L基质溶液：磷酸苯二钠0.436 g（无结晶水），用煮沸冷却的蒸馏水溶解至50 mL，盛于棕色瓶，冰箱内保存。
（3）0.1 mol/L醋酸镁溶液:醋酸镁1.0725 g，蒸馏水溶解至50 mL。
（4）pH 8.8Tris缓冲溶液：Tris 1.21 g，蒸馏水溶解至100 mL，取此溶液10 mL，加蒸馏水80 mL，再加0.1 mol/L醋酸镁10 mL，混匀后用1%的醋酸调节pH值至8.8，用蒸馏水稀释至100 mL即可。
（5）0.5 mol/L NaOH溶液：NaOH 5 g，蒸馏水溶解至250 mL。
（6）酶液：碱性磷酸酶1.25 mg，用pH 8.8的Tris 缓冲溶液配制50 mL，冰箱内保存。碱性磷酸酶1.25 mg，用pH=10的碳酸钠缓冲溶液配制50 mL，冰箱内保存。碱性磷酸酶1.25 mg，用去离子水为缓冲溶液配制50 mL，冰箱内保存。
（7）0.3%4-氨基安替比林液：4-氨基安替比林液0.3 g，碳酸氢钠4.2 g，蒸馏水溶解至100 mL。
（8）0.3%铁氰化钾溶液：铁氰化钾1.25 g，硼酸3.75 g，，各溶于100 mL蒸馏水中，溶解后混合至250 mL，盛于棕色瓶，冰箱内保存。
（9）酚标准溶液：苯酚1.5 g，溶于0.1 mol/L盐酸至1000 mL，为储备液。取此储备液25 mL，标定后用蒸馏水稀释至0.1 mg/mL 作为标准溶液。
1.2 仪器
烧杯（100 mL）6量筒，移液管，试管，试管架
分光光度计型号UV2300 上海天美科学仪器有限公司
电子天平型号 AL204-IC 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司
恒温水浴等型号 DF-101S 金坛市晶玻实验仪器厂
2 试验方法与步骤
2.1 标准曲线的制备
取酚标准液0.00、0.05、0,10、0.20、0.30、0.40 mL于6支试管中，分别加蒸馏水至2.00 mL后，37℃水浴中保温5 min，然后各加入0.5 mol/L NaOH溶液1.00 mL、0.3%4-氨基安替比林液1.00 mL、0.3%铁氰化钾溶液2.00 mL，混匀后室温放置17 min，510 nm
波长处比色，并绘制标注准曲线。各管酚含量分别为0、5、10、20、30、40μg。
2.2 动力学参数确定实验
取干净试管9支，编号，按表1,表2，表3正确操作。
表1 动力学参数测定试剂用量1
试管号水/mL 0.04mol/L基质液
/mL 碳酸盐缓
冲液/mL
pH8.8Tris
缓冲溶液配
制酶液/mL
最终基质浓
度/
（mmol/L）
1 0.9 0.1 0.9 0.1 2.0
2 0.85 0.15 0.9 0.1 3.0
3 0.8 0.2 0.9 0.1 4.0
4 0.7
5 0.25 0.9 0.1 5.0
5 0.7 0.3 0.9 0.1 6.0
6 0.6 0.4 0.9 0.1 8.0
7 0.2 0.8 0.9 0.1 16.0
8 - 1.0 0.9 0.1 20.0
9 1.0 - 0.9 0.1 -
表2 动力学参数测定试剂用量2
试管号水/mL 0.04mol/L基质液
/mL 碳酸盐缓
冲液/mL
pH=10碳酸
钠缓冲溶液
配制酶液/mL
最终基质浓
度/
（mmol/L）
1 0.9 0.1 0.9 0.1 2.0
2 0.85 0.15 0.9 0.1 3.0
3 0.8 0.2 0.9 0.1 4.0
4 0.7
5 0.25 0.9 0.1 5.0
5 0.7 0.3 0.9 0.1 6.0
6 0.6 0.4 0.9 0.1 8.0
7 0.2 0.8 0.9 0.1 16.0
8 - 1.0 0.9 0.1 20.0
9 1.0 - 0.9 0.1 -
表3 动力学参数测定试剂用量3
试管号水/mL 0.04mol/L基质液
/mL 碳酸盐缓
冲液/mL
去离子水为
缓冲溶液配
制酶液/mL
最终基质浓
度/
（mmol/L）
1 0.9 0.1 0.9 0.1 2.0
2 0.85 0.15 0.9 0.1 3.0
3 0.8 0.2 0.9 0.1 4.0
4 0.7
5 0.25 0.9 0.1 5.0
5 0.7 0.3 0.9 0.1 6.0
6 0.6 0.4 0.9 0.1 8.0
7 0.2 0.8 0.9 0.1 16.0
8 - 1.0 0.9 0.1 20.0
9 1.0 - 0.9 0.1 -
加入酶液后，立即计时37℃水浴中保温15 min。保温结束后，立即加入0.5 mol/L NaOH 溶液1.00 mL以终止反应。
各管分别加入0.3%4-氨基安替比林液1.0 mL及0.3%铁氰化钾溶液2.0 mL，充分混匀，放置10 min以9号管为对照，在510 nm处比色，并计算各管的酶活性。用双倒数作图法，在坐标纸上作图，求该酶的Km值。
3 结果与讨论
3.1 标准曲线的绘制
用分光光度计测量每个试管的透光率，再依据公式-logT计算吸光度的值，具体数值见表4
表4 标准曲线参数值
酚含量（μg）透光率T% 吸光度（ABS）
0 100 0
5 38.
6 0.413
10 30.2 0.52
20 18.9 0.724
30 11.2 0.951
40 7.9 1.102
依据表4的数据绘制标准曲线见图1
图1 标准曲线图
得到公式y=0.0312x。
相关系数较小的可能原因为：标准样受到污损，人为操作有误，一起不稳定等。
3.1.2 动力学参数确定实验
按照2.2进行动力学参数测定试验，实验结果见表5，并依据表5的结果进行数据处理，处理结果见表6,7,8。利用表6,7,8的数据，以底物浓度的倒数为横坐标，酶促反应速率的倒数为纵坐标作图，见图2,3,4。计算出动力学参数，得到动力学方程1/V=Km/（Vmax*Cs）+1/Vmax。
表5 不同酶液的T%
pH 8.8 Tris 缓冲溶液配制
的酶液的T% pH=10的碳酸钠缓冲溶液配
制的酶液的T%
去离子水为缓冲溶液配制的
酶液的T%
0.711 0.691 0.720
0.702 0.682 0.709
0.675 0.658 0.706
0.667 0.647 0.705
0.677 0.636 0.685
0.64 0.623 0.666
0.629 0.591 0.655
0.617 0.584 0.645
1 1 1
表6 pH 8.8 Tris 缓冲溶液配制的酶液的数据
T ABS D C 1/Cs 1/V 0.711 0.148 4.740 0.790 0.5 18.9 0.702 0.154 4.926 0.823 0.33 18.2 0.675 0.171 5.481 0.914 0.25 16.4 0.667 0.176 5.641 0.940 0.2 15.9 0.677 0.169 5.417 0.903 0.16 16.7 0.64 0.194 6.218 1.036 0.125 14.5 0.629 0.201 6.442 1.074 0.063 14
0.617 0.210 6.731 1.122 0.05 13.3
1 0 0 - - -
图2 pH 8.8 Tris 缓冲溶液配制的酶液的双倒数图
让y=0，则x=-1.085，Km=0.9217mmol/l。
表7 pH=10的碳酸钠缓冲溶液配制的酶液的数据
T ABS D C 1/Cs 1/V
0.691 0.161 5.160 0.860 0.5 17.5
0.682 0.166 5.321 0.887 0.33 16.9
0.658 0.182 5.833 0.972 0.25 15.4
0.647 0.189 6.058 1.010 0.2 14.9
0.636 0.197 6.314 1.052 0.16 14.3
0.623 0.206 6.603 1.101 0.125 13.7
0.591 0.229 7.340 1.223 0.063 12.2
0.584 0.234 7.500 1.250 0.05 12.0
1 0 0 - - -
图3 pH=10的碳酸钠缓冲溶液配制的酶液的双倒数图
让y=0，则x=-0.935，Km=1.0695mmol/l。
表8 去离子水为缓冲溶液配制的酶液的数据
T ABS D C 1/Cs 1/V
0.720 0.143 4.583 0.764 0.5 19.6
0.709 0.149 4.776 0.796 0.33 18.9
0.706 0.151 4.840 0.807 0.25 18.5
0.705 0.152 4.872 0.812 0.2 18.5
0.685 0.164 5.256 0.876 0.16 17.2
0.666 0.177 5.673 0.946 0.125 15.9
0.655 0.184 5.897 0.983 0.063 15.2
0.645 0.190 6.090 1.015 0.05 14.7
1 0 0 - - -
图4 去离子水为缓冲溶液配制的酶液的双倒数图
让y=0，则x=-1.3504，Km=0.7405mmol/l。
3.2 动力学参数测定实验结果与讨论
以上结果表明：用去离子水为缓冲溶液配制的酶液最合适，用pH 8.8的Tris 缓冲溶液配制的酶液次之，用pH=10的碳酸钠缓冲溶液配制的酶液最不合适。此次实验，受限于实验环境，设备条件，人为操作等因素的影响，对于这三种酶液的具体情况还有待研。
3.3 体会
通过这次试验，我更加深入的了解了不同缓冲液配置的酶液对于酶促反应速率的影响，且对于反应操作也更加得心应手，不足之处在于酶液的配置及保存都有很严格的要求，
受外界环境因素的影响较大，导致实验结果出现偏差，希望之后通过文献的查阅，实验条件的改善，人员操作的谨慎能更加准确的测定其效果。
参考文献
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[4] 王秋颖 .碱性磷酸酶特性及其应用的研究进展[J].中国畜牧兽医，2011,38（1）：157-160
[5] 陈银霞 .影响酶促反应速度的外因研究[J].现代农业科技,2008,18：238-239
碱性磷酸酶活性测定
碱性磷酸酶活性测定 磷酸酶 磷酸酶能酶促有机磷化合物的水解。试验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物的矿化起着主要的作用；某些高等植物的根系也有磷酸酶活性。土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况（特别是磷的状况）。 基本原理： 土壤磷酸酶活性的测定常用各种磷酸酯作为基质。应用得最多的是酚酞磷酸酯、苯磷酸酯、甘油磷酸酯、ɑ-或?-萘磷酸酯和p-硝基苯磷酸酯等的水溶性钠盐。当它们被酶促水解时，能析出无机磷和基质的有机基团。因此磷酸酶活性的测定时测定基质水解后的无机磷或酚的部分。这里介绍的方法是测定基质水解时生成的酚量。该法可用于测定各种磷酸酶的活性：碱性磷酸酶（用PH10的硼酸盐缓冲液），中性磷酸酶（用PH7.0的柠檬酸盐缓冲液），酸性磷酸酶（用PH5.0的乙酸盐缓冲液） 试剂配制： 1）甲苯 2）0.5% 磷酸苯二钠 3）硼酸盐缓冲液（PH9.6与PH10.0）：称取12.404g硼酸（H3BO3）溶于700ml 去离子水，用稀NaOH溶液调节至PH10.0，用去离子水稀释至1000ml 4) 氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%的乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 5）标准溶液：（a）母液：1g酚溶于蒸馏水中，并稀释至1000ml，溶液保存在暗色瓶中；（b）工作液：10ml溶液（a）稀释至1000ml（1ml含10ug酚）6）0.3%硫酸铝溶液 标准曲线绘制： 取0，1，3，5，7，9，11和13ml酚工作液（b），置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以光密度为纵坐标，浓度为横坐标绘成标准曲线。 操作步骤： 1）取5g风干土置于200ml三角瓶中，用2.5ml甲苯处理 2）处理15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠 3）将反应混合物置于37℃恒温箱中，培养24h后，在培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液用致密滤纸过滤。 4) 无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。以检验试剂纯度，整个实验设置一个对照 5)无基质对照：对每个土样，设置以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。
骨源性碱性磷酸酶
骨源性碱性磷酸酶 骨源性碱性磷酸酶即为NBAP. 骨碱性磷酸酶(NBAP)是成骨细胞的表型标志物之一，它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况,是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标,也是目前用于评价人体骨矿化障碍的最佳指标。 骨源性碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来，当骨头中钙盐沉淀不足时，该酶分泌增多，骨中钙盐充足时就分泌减少，所以用来帮助检查有无钙吸收不足。 骨碱性磷酸酶参考值≤200单位/L 检测小儿血中骨源性碱性磷酸酶催化活性，籍以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其他原因引起的代谢性骨病。 骨碱性磷酸酶参考值如下： 正常水平≤200u/L 预防水平 250u/L 医疗水平 300u/L 你好！骨源性碱性磷酸酶是用于检测佝偻病的一个指标，当缺少维生素D和钙时，骨头钙化不好时，它会升高，但一般明显升高才有诊断意义。你孩子的结果只比参考值的上限（200）高10，可以是实验误差造成，也可以是佝偻病的早期造成，是不必过度担心，补充维生素D和钙剂，过些日子再复查一次，很可能就正常了。 追问 昨天医生给我宝宝开了龙牡浸在壮骨颗粒和复方三维右酸钙糖浆，可是我的宝宝复方三维右酸钙糖浆吃不下，有没有什么别的药让他可以吃的 回答 你好!如果我没有记错的话，龙牡壮骨颗粒中已含有维生素D和钙，你的孩子缺维生素D和钙并不重，已经够了，两种都吃恐怕不是很必要。 补维生素d 最天然的方法是，多晒太阳，晒太阳可帮助身体合成维生素d ，可以说是没副作用的补VD方法 另外，就是吃含补维生素d 多的食物做成的粥或汤， 而通过食物摄取维生素D是不会引起中毒的。含量较多的食物有大马哈鱼、红鳟鱼、鳕鱼肝油、比目鱼肝油、奶油、鸡蛋、鸡鸭肝等动物肝脏以及牛奶等，或是买回维生素d的保健品进行补VD
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP微板法)
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法) 产品简介： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。 Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法，其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构，呈较深的黄色，产物黄色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 产品组成： 自备材料： 1、 水浴锅或恒温箱 2、 96孔板 3、 酶标仪 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制显色工作液： 取出1支pNPP ，恢复至室温后溶解于ALP Assay buffer ，混匀， 冰上预冷备用。新配制的显色工作液应在6h 内用完。 2、 配制标准品工作液：取出p -nitrophenol(10mM)恢复至室温后，取10μl 溶解于190μ 编号 名称 TE0002 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支 -20℃ 避光 试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
碱性磷酸酶米氏常数的测定
碱性磷酸酶米氏常数的测定 [目的与要求] 通过碱性磷酸酶米氏常数的测定，了解其测定方法及意义。学会运用标准曲线测定酶的活性，加深对酶促反应动力学的理解。 [原理] 在环境的温度、pH和酶的浓度一定时。酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时。酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度，反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时，反应速度会达到一个极限值，即最大反应速度(V max)，如图37所示。 底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用Michaelis-Menten方程式表示。 V = V max[S]/(K m+[S]) 上式中V max为最大反应速度，[S]为底物浓度，K m为米氏常数(Michaelis constant)，而其中V则表示反应的起始速度。当V= V max/2时，K m =[S]。所以米氏常数是反应速度等于最大反应速度一半时底物的浓度。因此K m的单位以摩尔浓度(mol／L)表示。 K m是酶的最重要的特征性常数，测定K m值是研究酶动力学的一种重要方法，大多数酶的K m值在0.01-100(mmol/L)间。 酶促反应的最大速度V max实际上不易准确测定，K m值也就不易准确测出。林-贝(1ineweaver - Burk)根据Michaelis-Menten方程，推导出如下方程式，即： 1/V = （K m +[S]）/ V max[S]或1/V = K m/ V max·（1/[S]）+1/ V max 此式为直线方程，以不同的底物浓度1/[S]为横坐标，以1/V为纵坐标，并将各点连成 一直线，向纵轴方向延长，此线与横轴相交的负截距为-1/ K m，由此可以正确求得该酶的K m 值，如图38所示。 图37 底物浓度对反应速度的影响图38 Lineweaver-Burk作图法 本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同底物浓度的酶活性，再根据Lineweaver-Burk法作图，计算其K m值。 可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多，底物反应的酶对于不同的底物有不同的K m值。本实验以磷酸苯二钠为底物，由碱性磷酸酶催化水解，生成游离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化，生成红色的醌衍生物，颜色深浅和酚的含量成正比。根据吸光度的大小可以计算出酶的活性，也可以从标准曲线上查知酚的含量，进而算出酶活性的大小。反应式如下：
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骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比 目的对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果。方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。结果80例佝偻病患儿经不同方法检测后，骨源性碱性磷酸酶检测结果准确率高达97.50%，显著高于血钙检测准确率73.75%，对比结果具有统计学意义（P＜0.05）。结论骨源性碱性磷酸酶与血钙检测结果均可作为佝偻病诊断依据，但血钙误诊率较高，而骨源性碱性磷酸酶检测准确率较高，临床医生应根据患儿实际情况进行综合判断，从而提高患儿诊断正确率及治疗效果，保障其预后及生活质量。 标签：骨源性碱性磷酸酶；血钙；对比 佝偻病是威胁儿童身心健康的严重疾病，发病原因主要为机体中钙营养严重丢失，目前主要通过临床实验室及影像学检查诊断此类疾病。本文将对我院自2013年1月1日～12月31日前来就诊的80例佝偻病患儿给予临床研究，从而对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果，为提高佝偻病患儿检出率提供可靠依据，现总结如下。 1资料与方法 1.1一般资料80例佝偻病患儿中男童49例、女童31例，年龄1～6岁，平均年龄（ 2.98±1.02）岁。 1.2方法 1.2.1纳入与排除标准①经临床检查符合世界卫生组织（WHO）制定的佝偻病诊断标准；②无肝脏、肾脏、心脏等机体重要器官严重器质性疾病；③无胃肠道疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤疾病、精神类疾病、免疫系统疾病、内分泌系统疾病；④体温正常，无骨折、强直性骨关节炎等疾病；⑤对本次研究具有知情权。 1.2.2研究方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。抽取患儿静脉末梢血液2ml作为检测样本，骨源性碱性磷酸酶检测方法为碘硝基四氮唑紫法，由北京中生金域诊断技术有限公司提供ZS0iso APNB试剂盒，以检测结果不大于200U/L为阴性，反之为阳性；血钙采用偶氮砷法检测，由深圳迈瑞公司提供BS-800生化分析仪及其配套试剂，以检测结果不小于1.55mmol/L为阴性，反之为阳性。 1.3统计学方法使用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析，计量资料采用t检验（由x±s表示），计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
骨型碱性磷酸酶
骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用 文章来源：医学网发表时间：2007-07-04 09:51:00 关键字：磷酸酶 碱性磷酸酶(ALP，EC3. 1.3.1)是在碱性条件下水解多种磷酸酯并具有转磷酸基作用的一组酶，包括由不同结构基因编码的小肠、胎盘、生殖细胞和非特异型4种同工酶。前三者基因定位于染色体重2q34-37的相邻位点，后者基因定位于染色体的1q36-34之间，其中非特异性型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶。对这些同工酶的理化性质、分子生物等特性、作用机制的深入研究以及准确的定量测定将有助于其在临床上的应用。本文拟就年来国际上常用的骨型碱性磷酸酶(BAP)研究方法及其在临床上的应用研究进展作一综述。 1骨型碱性磷酸酶的特性 骨型碱性磷酸酶是成骨细胞的一种细胞外酶，为糖蛋白，分子量约为12000道尔顿。该酶在细胞内合成时新生的酶蛋白先在内质网糖基化，再通过高尔基体转运到细胞膜表面，通过多糖链与磷酯酰肌醇相连嵌合到细胞膜的外浆膜。在多糖-肌醇磷酸特异水解酶的作用下，骨型碱性磷酸酶能被释放到血循环中。骨型碱性磷酸酶在机体的生理功用主要是在成骨过程中水解磷酸酯，为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸；同时，水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨过程。骨型碱性磷酸酶在体内的其他生化功用有待进一步的阐明。 2骨型碱性磷酸酶的检测
人血清中含有的碱性磷酸酶同工酶分别来自骨骼、肝脏、小肠和胎盘组织(在妊娠时)。胎盘型和小肠型碱性磷酸酶同工酶的活性能相对容易被区分，而区别骨型和肝型这两种同工酶活性就相当困难，因为这两种同工酶来源于同一基因，其动力学性质、电泳迁移率和其他理化性质均十分相似，且相互间有交叉免疫反应，目前鉴别和定量测定骨型碱性磷酸酶的方法可以分为两大类：电泳法和非电泳法。 电泳法主要利不同的同工酶之间物理性状、分子大小及荷电量的不同而进行。根据所用的支持特和操作的方法可分为：醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和亲和电泳等。其中以等电聚焦电泳和亲和电泳的分辨效果较好。等电聚焦电泳分辨率高特别适合次级同工酶的分离。Sinaha等报告的一种固相pH梯度等电聚焦电泳以聚丙烯酰胺为载体，用两性电解质制成固定的pH梯度凝胶，避免了由于不稳定的pH梯度而引起的所谓“阴极漂移”现象。该法可将等电点准确到小数点后两位并把正常血清的10条酶带压缩在pH3.90～4.79范围。Rosalki等建立的亲和电泳法是利用麦胚植物血凝素(WGA)能特异地和骨型碱性磷酸酶结合形成WGA-骨型碱性磷酸酶复合物，该复合物在电场中不泳动或泳动很慢，从而将骨、肝型碱性磷酸酶清楚地分开。该方法简便，重复性好，骨型碱性磷酸酶的批内与批间CV分别为3.2％和5.2％。亲和电泳的分离效果与WGA的浓度有关，其最适浓度随电泳条件而异。因此，采用不同的电泳载体和不同的缓冲液时均应重新评价WGA的最适用量。
土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒
货号: QS2902 规格：50管/48样 土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒 分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。 测定原理： 碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加50mL蒸馏水充分溶解。 试剂三：液体×1瓶，4℃保存。 试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1152μL无水乙醇（自备），48 μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用） 标准品：液体1.5mL×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。 催化反应： 称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。 显色反应： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。 2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL蒸馏水，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 空白管。 3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL标准液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 标准管。 4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL上清液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 测定管。 注意：空白管和标准管只需测定一次。 第1页，共2页
血清骨型碱性磷酸酶质量的测定
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 血清骨型碱性磷酸酶质量的测定 导语：当大人们带着自己的小孩子去体检的时候总有一项检测是血清骨型碱性磷酸酶质量的测定，很多家长们啊看到一长串读不通顺的字肯定是不懂得这个 当大人们带着自己的小孩子去体检的时候总有一项检测是血清骨型碱性磷酸酶质量的测定，很多家长们啊看到一长串读不通顺的字肯定是不懂得这个到底是测量什么的，事实上呢，这个血清骨型碱性磷酸酶质量啊是看看小孩子有没有佝偻病的，下面来具体的讲一讲吧。 你好，碱性磷酸酶是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。单独升高一点并没有关系，要结合其他的检察才能确诊。 碱性磷酸酶升高主要见于： 1.肝胆疾病：阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等。 2.由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松等血清碱性磷酸酶会升高。 3.白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高。 如果有条件可以做一下碱性磷酸酶同功酶，或者要求医院用热稳定试验鉴别是来自肝脏还是来自骨骼. 维生素D缺乏病(vitamin D deficiency)是由于日晒少(皮肤经紫外线照射后，可使维生素D前体转变为有效的维生素D)、摄入不足(奶、蛋、肝、鱼等食物)、吸收障碍(小肠疾病)及需要量增加(小儿、孕妇、乳母)等因素，使体内维生素D不足而引起的全身性钙、磷代谢失常和骨骼改变。同时影响神经、肌肉、造血、免疫等组织器官的功能，严重影响儿童的生长发育。 现在的食物什么的都有那么多的毒素农药什么的，小孩子们因为缺少了应该的要得到的营养元素很容易就会得上佝偻病的，很多家长们 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
碱性磷酸酶测定
碱性磷酸酶测定 一、试剂配制 1、甲苯 2、pH9.8氯化铵-氢氧化铵缓冲液：称取20g纯氯化铵，溶于 少量水（我配200ml，用一百多毫升水溶40g氯化铵）， 然后加入浓氨水润洗烧杯和定容至100ml，用pH试纸测 pH，pH为10即可，不用刻意调pH。（氨水很臭，需要带 口罩在通风橱配） 3、8%铁氰化钾溶液（只能用一周，放冰箱保存）：取8g铁氰 化钾，用水定容至100ml。 4、2%4-氨基安替比林（只能用一周，放冰箱保存）：取2g4- 氨基安替比林，用水定容至100ml。 5、0.5%磷酸苯二钠溶液（用pH9.4硼酸缓冲液配） （1）先配制pH9.4硼酸盐缓冲液：称取4.768g硼砂（十 水合四硼酸钠）和0.44g纯氢氧化钠，用蒸馏水定容至 1000ml。（硼砂需要用电炉加热配制，硼砂用称量纸称量， 氢氧化钠需要用烧杯称量,基本不用配pH，pH试纸测为9） （2）称取5.05g磷酸苯二钠，用pH9.4硼酸缓冲液定容 至1000ml。 6、酚标准溶液： 酚溶液：称取1g苯酚用水溶至1L，保存于暗色瓶中。（苯酚还是需要水浴加热，详细配法看脲酶测定，但由于1g很难准确称量，
并在我配完发现天平托盘上结了一层苯酚，但测量后不影响标线的准确程度，R值为三个9） 酚工作液：取10ml原液用水稀释至1L(1ml中含0.01mg/mL) 二、测定过程 1、称取5g过1mm筛的土样于绿色塑料瓶（每个样需要3个 重复，前两个重复和第三个重复分开放，第三个重复为 无基质重复，每天做两个无土样重复，此重复加甲苯、 磷酸苯二钠溶液），加5滴甲苯（用滴管加5滴），盖盖 盖子后用震荡机低速震荡15min（我选择160的速度）， 然后给第三个重复加入20ml蒸馏水，给前两个重复加入 20ml磷酸苯二钠，盖上盖子后充分摇匀后在37摄氏度恒 温箱培养2小时。 2、培养结束后过滤，过滤后取5ml滤液加入50ml容量瓶（用 5ml枪加，由于过滤液体没那么多，每加一个样用两遍蒸 馏水润洗枪），加水至大概20ml，再加0.25ml氯化铵-氢 氧化铵缓冲液，0.5ml4-氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾 溶液（用1ml枪加），每加一种都要充分摇匀。立即显色， 立即定容。 3、标准液是吸取1,3,5,7,9,11,13ml氮的工作液，移至50ml容 量瓶，加水加水至大概20ml，再加0.25ml氯化铵-氢氧 化铵缓冲液，0.5ml4-氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾溶 液。（和第二条同步）
骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用
检验科开展骨型碱性磷酸酶（BALP）测定骨型碱性磷酸酶(BALP)是成骨细胞分泌的一种糖蛋白，在成骨过程中水解磷酸酯，为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸；同时，水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨过程。 临床应用: 1.用于亚临床佝偻病、骨代谢障碍及高转化骨质疏松的诊断。 2.指导补钙或维生素D治疗：易患低钙人群或疾病主要包括儿童、孕产妇、老年人、佝偻病、骨质疏松、肝肾甲状腺疾病等，当人体缺钙或维生素D时，血钙下降，甲状旁腺激素分泌，促进肾脏合成大量1,25(OH)2维生素D3生成，后者可使静止的成骨细胞转化成活跃的成骨细胞，合成大量的BALP释放入血，BALP活性与活性成骨细胞的数量成正比，是反映成骨细胞活性和数量的专一标志物。补钙或维生素D治疗后4周后复查BALP，发现BALP活性无变化应更换钙剂和避免长期服用导致的维生素D中毒。 3．BALP活性的检测以及动态观察可为骨代谢异常疾病早诊、疗效监测、病情预后等提供有效依据：骨密度的改变太慢不能作为临床监测骨代谢异常疾病（骨质疏松、骨软化症、佝偻病、Paget病、早期甲亢、慢性肾衰、肾移植病人等）治疗效果的早期反应。BALP参与成骨过程并且其活性在血清中稳定没有昼夜变化，因此可作为观察骨形成变化率，为临床提供有效治疗的监测手段。 4.生长激素缺乏的儿童，使用生长激素后生长速率加速，BALP活性增加，并且与生长激素治疗所诱导的高SD分数正相关，能有效地监测对生长激素治疗的反应性。 5.慢性肾功能衰竭病人在接受肾移植后，常发生持续性的甲状旁腺机能亢进，BALP活力与甲状旁腺激素呈明显正相关，与骨皮质的密度呈负相关。 标本采集：抽静脉血2ml置红色盖非抗凝管送检，或安排患者来检验科取手指血。 项目信息：血清骨型碱性磷酸酶（BALP）编码250305013-1，参考值<200U/L，收费50元/次。 检验科2008.4.10
骨源性碱性磷酸酶的测定及注意事项
骨源性碱性磷酸酶的测定及注意事项 血浆中骨源性碱性磷酸酶(BAP)活性测定，首先是血球和血浆的分离，这一过程是基于全血样品经血浆分离器将血球截留在分离器的血球容纳膜上，而血浆渗滤穿过转运膜到达反应膜的特定区域，血浆分离完成后，将血浆分离器从反应装置上取下。 第二步是BAP与血浆中其它组分，包括其它来源的碱性磷酸酶(ALP)分离达到特异测定BAP的目的。这一目的实现是根据小儿型BAP(NBAP)和成人BAP(ABAP)分子结构中糖基类型的不同，分别选择相应的亲和素，我们可称之为NBAP-结合蛋白和ABAP-结合蛋白，预先固相在反应膜的特定区域—反应区上。当血浆经过此区域渗滤时，BAP即被结合，而其它组成滤过或被滴加的洗涤液清洗掉，从而完成特异性亲和反应。 第三步方可进行BAP的活性测定显色反应。反应膜固定在反应滑板上，待亲和反应完成后，将反应滑板推动，使反应膜到达反应孔正中，将显色液滴加到反应孔内的反应膜上，在37℃反应一定时间，酶促反应显色的深浅与BAP活性成正比，对照说明书上的标准色板目测判读BAP活性。作为干化学分析技术，结果判断是对照标准板目测做出的半定量分析。其中，标准色板的色阶印刷在说明书上，不同批次的产品使用同一标准色板，如何使每批次的产品使用同一标准色板，如何使每批产品酶促显色的深浅都能与标准色板一致呢?这是通过每批产品出厂前的校正实现的。校正是用已知NBAP(活性为200U／L，250U／L，300U／L)和ABAP(活性为150U／L，200U／L，250U／L)的血清(17μl)进行的，在37℃进行反应，使显色强度与标准色板上相应色强相一致，确定所需的反应时间为每批产品说明书上填写的反应时间(多少分钟)。可见，在影响酶促反应的诸多因素(底物种类和浓度、缓冲液种类和浓度、PH值、反应温度、激活剂等辅助因子)一定的前提下，样品中BAP催化反应产物的多少(显色强度)只决定于反应时间的长短。 从上述校正过程可见，欲使测定结果可靠而且重复性好，需要严格掌握的操作环节，一是反应温度应控制在37℃±0．1℃范围内；二是反应时间严格按照说明书上给定的时间；三是如果不用全血分析，直接用血清作为样品分析时，应定量加人17μl 。 另外，对照说明书上的每步操作，BAP活性测定的质量控制还应包括： 第1步：在反应装置的加样孔中，均匀滴加两滴洗涤液。待其渗入，目的在于加随后的全血样品滴加后渗滤顺利，血球和血浆分离较快，其渗入一般较快，如渗入缓慢，可用手轻压一下血浆分离器，即可迅速渗入。如漏加洗涤液，则有可能使样品血浆分离缓慢且不均匀，将影响下一步亲和反应及显色反应，最后人为地使显色斑点均一性差。 第2步：试剂盒要求使用新鲜全血，不能使用抗凝血。因某些抗凝剂会抑制BAP的活性。采血时试剂盒是配套的30μl定量采血管，手持有黄线的一端，用另一端吸取血液标本恰好至黑色刻度线，然后用吸球迅速将其均匀加入加样孔中，注意勿产生气泡。如用血清分析，则需加17／J 1。加样后，血液一般在30秒内可全部渗入。如渗透较慢，可用手轻压一下分离器。 第3步：待血液全部渗入后，再逐滴加入两滴洗涤液。由于此时膜表面已截留了血球。所以此时洗涤液渗滤较慢，一般约需1—2分钟。如个别又出现渗入较慢的，也可用手轻压分离器，即可加快渗入速度。 第4步：待洗涤液渗入后，此时样品中血浆已完全转运到亲和膜上，将血浆分离器从反应装置上取下，即可见反应滑板上的圆形反应膜。注意膜上不能附着有其它膜片，如有可能为分离器上的过渡膜松动脱落而成，此时应用镊子或分离器一角将其挑去。 第5步：为了除去血浆中其它物质的干扰，在反应膜上只保留BAP结合蛋白复合物，在反应膜上再滴加两滴洗涤液(小儿型)或中止液(成人型)，此时液体渗入较快。 第6步；推动反应滑板，使反应膜定位在反应孔的正中，此步骤使亲和反应和酶促显色反应在两个不同的区域进行，以避免亲和反应对显色反应的干扰，提高检测灵敏度和特异性。
碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法) 简介： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。 碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。通过分光光度比色法测定510nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制标准品工作液：。按照下表稀释系列标准品溶液。 2、 准备样品： ① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离 心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。 ② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的 测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 ③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或 编号 名称 TE0007 50T TE0007 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 25ml 50ml 4℃ 避光 试剂(C): 显色基液 75ml 150ml -20℃ 避光 试剂(D): Phenol 标准(1mg/ml) 1ml 2ml RT 试剂(E): ddH 2O 5ml 10ml RT 使用说明书 1份 0 1 2 3 4 5 Phenol(0.05mg/ml)(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 ddH 2O(ml) 0.55 0.45 0.35 0.25 0.15 0.05 相当于金氏单位(U/L) 10 20 30 40 50
骨碱性磷酸酶参考值
骨碱性磷酸酶参考值 骨碱性磷酸酶全称叫：骨源性碱性磷酸酶即为NBAP.骨碱性磷酸酶(NBAP)是成骨细胞的表型标志物之一，它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况，是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标，也是目前用于评价人体骨矿化障碍的最佳指标。 骨源性碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来，当骨头中钙盐沉淀不足时，该酶分泌增多，骨中钙盐充足时就分泌减少，所以用来帮助检查有无钙吸收不足。 骨碱性磷酸酶参考值≤200单位/L 检测小儿血中骨源性碱性磷酸酶催化活性，籍以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其他病因引起的代谢性骨病。 骨碱性磷酸酶参考值如下： 正常水平≤200u/L 预防水平250u/L 医疗水平300u/L 骨碱性磷酸酶检测意义
佝偻病的发病过程是一个慢性过程，初期症状表现没有特异性，直至出现明显的骨骼改变时在进行治疗。将错过治疗的最佳时期．对儿童生长发育造成不利影响，因此．在临床工作中，需要有一个指标来衡量治疗水平。防止治疗不足或过量。单纯依靠症状和体征容易造成误诊和漏诊。以往的血钙、磷、全血碱性磷酸酶及X线检测灵敏度低，特异性差。不应用于早期诊断。 25(OH)D3是国际公认的反映体内vitD营养状况可靠的指标．是作为早期诊断的指标。只有血清25-(OH)D水平可反映人体维生素D营养状况。但该实验操作步骤繁琐，不适合在基层医疗保健机构中开展。而小儿骨源性碱性磷酸酶的检测，具有简便、快速、特异、敏感等优点对早期发现佝偻病提供了参考依据。 需要注意的是，任何检查项目都不是孤立来看待的。需要与症状表现、其他检查化验综合分析才有意义。婴幼儿体内骨碱性磷酸酶水平都有些偏高，此指标反映新生组织增长状况。婴幼儿本身就处于生长旺盛阶段，偏高的骨碱性磷酸酶不能作为佝偻病的诊断依据，而应化验血中1,25-羟维生素D3的水平，并以此考虑补充维生素D3。母乳喂养期间婴儿需摄入每天400IU的维生素D，不需额外补钙。 更多精彩内容请上妈淘网查看：https://www.360docs.net/doc/9a11614227.html,
血清骨型碱性磷酸酶的参考标准物
《国外医学.临床生物化学与检验学分册》1994年06期 加入收藏投稿 血清骨型碱性磷酸酶的参考标准物 龚丽洁 【摘要】：正骨型碱性磷酸酶(Alp)是成骨细胞的胞外酶,对骨的形成和矿化起重要作用,血清中骨型Alp活性是骨形成速率的指标。人血清中含小肠型,胎盘型(妊娠时),骨型,肝型四种Alp同工酶,后两种由一对基因产生,仅在翻译后的糖基化过程有差别,较难 【关键词】：血清骨型碱性磷酸酶参考标准沉淀法标准物成骨细胞热灭活法同工酶人血清ConA结合形成速率 【分类号】：R446.1 【正文快照】： 骨型碱性磷酸酶(Alp)是成骨细胞的胞外酶,对骨的形成和矿化起重要作用,血清中骨型Alp活性是骨形成速率的指标。人血清中含小肠型,胎盘型(妊娠时),骨型,肝型四种Alp同工酶,后两种由一对基因产生,仅在翻译后的糖基化过程有差别,较难分离。常用的分离方法有电泳法,热灭活性,液相 下载全文更多同类文献团体订阅中心 PDF全文下载 CAJ全文下载 (如何获取全文？欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询) CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式，AdobeReader仅支持PDF格式 《国外医学.临床生物化学与检验学分册》1996年03期 加入收藏投稿 血清骨型碱性磷酸酶的放免法与电泳法比较 乔文涛 【摘要】：正碱性磷酸酶(ALP,EC3.1.3.1)是一种膜结合金属酶,为一组至少由四个基因位点编码的同工酶。人血清中两种主要的与临床密切相关的同工酶是骨和肝碱性磷酸酶。骨AL P较总ALP更好地反映成骨细胞活性,在生理或病理状态下都能更准确地反映骨代谢状况。定量骨ALP有区带电泳、等电聚焦电泳、高效液相色谱(HPLC)及热处理、植物血凝素沉淀等法;其中电泳、HPLC和等电聚焦电泳 【关键词】：血清骨型碱性磷酸酶电泳法等电聚焦电泳放免法同工酶相关性成骨细胞植物血凝素区带电泳HPLC 【分类号】：R817.4 【正文快照】：
碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法)产品技术要求beihua
碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法) 适用范围：本试剂盒用于体外定量检测人血清中碱性磷酸酶的活性。 1.1包装规格： 试剂1：80ml×1；试剂2：20ml×1。试剂1：80ml×2；试剂2：20ml×2。 试剂1：80ml×3；试剂2：20ml×3。试剂1：80ml×4；试剂2：20ml×4。 试剂1：60ml×1；试剂2：15ml×1。试剂1：60ml×2；试剂2：15ml×2。 试剂1：60ml×3；试剂2：15ml×3。试剂1：60ml×4；试剂2：15ml×4。 试剂1：40ml×1；试剂2：10ml×1。试剂1：40ml×2；试剂2：10ml×2。 试剂1：40ml×3；试剂2：10ml×3。试剂1：40ml×4；试剂2：10ml×4。1.2组成成份： 试剂1：AMP缓冲液0.8mmol/L，pH 8.9±0.1，氯化镁10.5mmol/L； 试剂2：4-NPP 100mmol/L。 2.1 外观：均为澄清溶液，外包装完整。 2.2 净含量：不少于标示值。 2.3 试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度：A≤0.6（波长405nm，光径10mm）。 2.3.2试剂空白吸光度变化率：△A/min≤0.005（波长405nm，光径10mm）。 2.4 分析灵敏度：浓度为120U/L时,吸光度变化率△A/min≥0.03。 2.5 线性区间 2.5.1线性相关系数：[25，750]U/L范围内，线性相关系数r≥ 0.990。 2.5.2线性偏差：[25，100] U/L时，绝对偏差不超过±10U/L；（100,750] U/L 时，相对偏差不超过±10%。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法) 使用说明
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)使用说明 货号：BC1672 有效期：6个月有效。 产品内容： 产品名称50T100T保存 试剂(A):ALP Assay buffer25mL50mL4℃避光 试剂(B):ALP显色液25mL50mL-20℃避光 试剂(C):显色基液75mL150mL-20℃避光 试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1mL2mL RT 试剂(E):ddH2O5mL10mL RT 产品说明： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。 碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸
酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 自备材料： 1.离心管或小试管 2.水浴锅或恒温箱 3.比色杯 4.分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。按照下表稀释系列标准品溶液。 012345 Phenol(0.05mg/ml)(μl)00.10.20.30.40.5 ddH2O(μl)0.550.450.350.250.150.05 相当于金氏单位(U/L)010******** 2、准备样品： ①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。 ②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 ③高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。
碱性磷酸酶动力学参数的测定
题目：碱性磷酸酶动力学参数的测定 （创新实践活动论文） 2015年4月24日·北京
不同缓冲液对碱性磷酸酶动力学参数的影 响 摘要酶促反应动力学主要研究酶催化的反应速率以及影响反应速率的各种因素，为了更好的发挥酶的高效性，就必须准确把握酶促反应的条件。本文重点研究不同缓冲液所配制的酶液对酶促反应的影响。实验利用碱性磷酸酶溶解在TRIS，碳酸钠，去离子水等缓冲液中为酶液，磷酸苯二钠为基质，进行实验，得到去离子水为最适缓冲液的结果，表明以去离子水为缓冲液所配制的酶液能使酶发挥最好的效果，具有研究意义。 关键词：碱性磷酸酶；缓冲液；动力学参数； 本试验以碱性磷酸酶为催化剂，磷酸苯二钠为底物，在一定温度、pH及酶量的条件下，碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠转化为苯酚；利用分光光度计测定在不同底物浓度下苯酚的生成量。通过实验可以加深对有关酶促反应动力学基本知识的理解和记忆；并熟记利用双倒数法测定酶Km值的原理，熟悉试验方法。 1 实验材料、试剂与仪器 1.1 材料与试剂 实验中使用的主要试剂有 磷酸苯二钠:国药集团化学试剂有限公司分析纯 醋酸镁：天津市永大化学试剂开发中心分析纯 醋酸：北京化工厂分析纯 碱性磷酸酶：北京化工厂分析纯 4-氨基安替比林：天津市永大化学试剂有限公司分析纯 铁氰化钾：北京化工厂分析纯 硼酸：北京化工厂分析纯 苯酚：天津市福晨化学试剂厂分析纯 三羟甲基氨基甲烷（Tris）：北京化学试剂公司分析纯 NaOH：北京化工厂分析纯 碳酸钠：天津光复科技发展有限公司分析纯 碳酸氢钠：天津市福晨化学试剂厂分析纯 实验中使用的主要溶液有 （1）0.1 mol/L碳酸盐缓冲溶液（pH=10）：碳酸钠1.5875 g，碳酸氢钠0.84 g，蒸馏
碱性磷酸酶检测试剂盒
碱性磷酸酶检测试剂盒 产品简介： 碧云天生产的碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。 碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)，也称碱性磷酸酯酶，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。 干细胞，如iPS中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS成功诱导的标志。另外，分化的结肠癌细胞中碱性磷酸酶的活性也会显著升高，被当作结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标。此外，血清中碱性磷酸酯酶的升高，被称作高碱性磷酸酶血症(hyperalkalinephosphatasemia)，被认为和恶性胆管阻塞(malignant biliary obstruction)、原发性胆管硬化(primary biliary cirrhosis)、原发性硬化胆管炎(primary sclerosing cholangitis)、肝淋巴瘤(hepatic lymphoma)和肝肉瘤(hepatic sarcoidosis)等肝胆疾病密切相关。血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨头生成密切相关，因为碱性磷酸酶是成骨细胞的副产物。血清中碱性磷酸酶活性过低也和一些疾病相关。儿童和孕妇血清中的碱性磷酸酶活性较普通人高一些。血清中碱性磷酸酶活性范围在20-140U/L。 除胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase placental isoform)以外，其它的内源性碱性磷酸酶加热后易失活。 本试剂盒可以检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液或纯化的酶样品等中的碱性磷酸酶活性。 Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物，在碱性条件下，可在碱性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。para-nitrophenol (p-nitrophenol)在碱性条件下，呈黄色产物，可以在400-415nm检测吸光度。产物黄色越深，说明碱性磷酸酶检活性越高，反之则酶活性越低。据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。 包括标准品和空白对照，本试剂盒共可进行100个样品的检测。 保存条件： -20℃保存，一年有效。其中显色底物和p-nitrophenol溶液需避光保存。 注意事项： 如果希望进行酶活性的绝对定量，进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐采用孵育30分钟等较长的时间，以减小操作过程中的时间误差。同时如果样品中酶活性较高，则可以预先适当稀释样品。 样品溶液中须避免出现EDTA、氟离子、柠檬酸盐等碱性磷酸酶的抑制剂。 检测缓冲液和p-nitrophenol溶液对人体有害，请注意适当防护。反应终止液有腐蚀性，请小心操作。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1.试剂准备：将所有试剂取出，恢复至室温使用。 a.显色底物溶液：取一管显色底物，溶解于2.5ml的检测缓冲液中，充分溶解和混匀，冰上放置。新鲜配制的显色底物 溶液需在6小时内使用。 b.标准品工作液：取10μl p-nitrophenol溶液(10mM)，用检测缓冲液稀释至0.2ml，最终浓度为0.5mM。 2. 样品准备： a. 细胞或组织裂解液的准备：采用适当细胞或组织裂解液裂解细胞和细胞，如果有必要需进行适当匀浆，随后离心取上 清，用于碱性磷酸酶的检测。注意：裂解液中不能含有磷酸酶抑制剂。样品可以-80℃冻存，但需避免反复冻融。 b. 血浆、血清和尿液的准备：血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，但为了消除样品本身颜色