水质粪大肠菌群检验纸片的详细资料
水质粪大肠菌群检验纸片的详细资料
BD105Ⅰ水质（粪）大肠菌群快速检验纸片1份/包适用于湖水、水源水中大肠菌群的快速检测。
BD105Ⅱ水质（粪）大肠菌群快速检验纸片1份/包适用于河水、生活用水、医疗机构处理后排污水、禽畜养殖业等排放废水中大肠菌群的快速检测。
分BD105Ⅰ和BD105Ⅱ两个型号，请注意选择型号。
1、适用范围水质（粪）大肠菌群的测定纸片快速法
本标准适用于地表水、生活污水、医疗机构及禽畜养殖业等其他行业排放的废水中（粪）大肠菌群的快速筛查。
本方法的检出限为20MPN/L。
2、规范性引用文件
本标准内容引用了下列文件或其中的条款。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。HJ/T91地表水和污水监测技术规范
3、术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1总大肠菌群（total coliforms）
在37℃培养，24h内能发酵乳糖酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
3.2 粪大肠菌群（fecal coliforms）
44.5℃培养，24h内能发酵乳糖产酸气的总大肠菌群，属粪行来源，称为粪大肠菌群。
4、方法原理
将一定量的乳糖、指示剂（溴甲酚紫和2，3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及营养成分等吸附于一定面积的无菌滤纸上，当细菌生长繁殖时，产酸使PH值降低，溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色。同时，产气过程相应的脱氢酶在适宜的PH范围内，催化底物脱氢还原TTC 形成红色的不溶性三苯甲臜（TTF），即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点（或红晕）。通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否有（粪）大肠菌群存在，再通过查MPN表就可得出相应（粪）大肠菌群的浓度值。
5、试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。
5.1市售水质总大肠菌群、粪大肠菌群测试片：10ml水样量纸片按附录A的方法进行质量鉴定，达到要求后方可使用。
5.2无菌水
用新制备的去离子水或蒸馏水，按无菌操作要求，121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。
5.3硫代硫酸钠溶液：ρ(Na2S2O3)=0.10g/ml
称取硫代硫酸钠10g，溶于适量蒸馏水（或去离子）中，稀释至100ml，现配。
5.4乙二胺四乙酸二钠（EDTA- Na2）溶液：ρ(C10H14N2O8Na2。2H2O)=0.15g/ml
称取EDTA-Na2 15g,溶于适量蒸馏水（或去离子水）中，稀释至100ml，此溶液保质期为30d。
6、仪器和设备
6.1 恒温培养箱：37℃±1℃。
6.2 恒温培养箱：44℃±0.5℃。
6.3 高压蒸汽灭菌器：121℃、101.3kpa。
6.4 冰箱：0-4℃
6.5 移液管：1±0.01ml、10±0.1ml。
6.6 试管：φ15mm×150mm.
6.7 采样瓶：500ml。
注1：移液器、试管、采样瓶等玻璃器皿实验前要按无菌操作要求包扎，121℃高压蒸汽灭菌20min，烘干，备用。
7、样品
用灭菌器具，按照HJ/T 91的规定及无菌操作的要求，采集水样400ml放入已灭菌的采样瓶中。如果是经加氯处理的废水，需在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠（EDTA- Na2）溶液（5.4）1.2ml，以消除干扰。酸性样品，需调节胖胖的PH值至7.0-8.0。
采样后2h内检测，否则，需10℃以下冷藏并6h内送检，实验室接样后，应将样品放入0-4℃冰箱并2h内测定。
注2:10mg硫代硫酸钠可保证去除水样中1.5mg余氯，硫代硫酸钠用量克根据水样实际余氯量调整。
8、分析步骤
8.1接种量
每个样品按三个不同的接种量接种，每个接种量分别接种5张纸片，共接种15张纸片。
根据水样的污染程度确定接种量，应尽可能使5个接种量最大的纸片为阳性、5个接种量最小的纸片为阴性。
清洁水样的参考接种量分别为10 ml、1 ml、0.1 ml，受污染水样参考接种量根据污染程度可接种1 ml、0.1ml、0.01 ml或0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml等。
接种量小于1ml时，水样应制成稀释样品后使用。接种量为0.1ml、0.01 ml时，分别制成1:10稀释样品、1:100稀释样品。其它接种量的稀释样品依次类推。
1:10稀释样品的制作方法为：吸取1ml水样，注入盛有9 ml无菌水的试管中，混匀，制成1:10稀释样品。其它稀释度的稀释样品同法制作。
8.2接种、培养
水样充分混匀，按无菌操作制作稀释水样及接种水样。
清洁水样，接种水样总量为55.5ml，10 ml水样量纸片5张，每张接种水样10ml，1 ml水样量纸片10张，其中5张各接种水样1ml，另5张各接种1:10的稀释水样1ml。受污染水样，接种3个不同稀释度的1ml稀释水样各5张。
接种水样应均匀涂布于纸片上，纸片充分侵润、吸收水样，用手轻轻压平，做好标记。
测总大肠菌群时，在37±1℃的条件下培养18-24h后观察结果；测粪大肠菌群时，在44.5±0.5℃的条件下培养18-24h后观察结果。
注3：
1、检测粪大肠菌群时，纸片接种后应立即放置于44.5±0.5℃的恒温培养箱中培养，在常温下放置过久将影响检测结果的准确性。
2、纸片加入水样后，短时间内变黄或退色，表明水样存在酸性物质活氧化剂干扰，需按“7样品”一节方法去除相应干扰。
9、结果判定
（1）纸片上出现红斑或红晕且周围变黄，为阳性。
（2）纸片全片变黄，无红斑或红晕，为阳性。
（3）纸片部分变黄，无红斑或红晕，为阴性。
（4）纸片的紫色背景上出现红斑或红晕，而周围不变黄，为阴性。
（5）纸片无变化，为阴性。
粪大肠菌群测定复习试题
粪大肠菌群测定复习试题 一、填空题 1.地表水环境质量标准(GHZB1—1999)中，对环境质量卫生指标粪大肠菌群项目作出明确规定：Ⅰ类水质标准值为；Ⅱ类水质标准值为；Ⅲ类水质标准值为；Ⅳ类水质标准值为，Ⅴ类水质标准值为。 答：≤200个/L；≤1000个/L；≤2000个/L；≤5000个/L；≤10000个/L。 2.粪大肠菌群是一部分，用粪大肠菌群作为卫生学指标比用 更有。目前，粪大肠菌群被认为是受粪便污染的最实用的。 答：总大肠菌群；总大肠菌群；代表性；指示菌。 3.检测粪大肠菌群时作发酵试验用的培养基，是由、、 、等配制而成的，调节pH为，应在 灭菌。 答：蛋白胨；牛肉浸膏；乳糖；氯化钠；7.2-7.4；115℃；20min。 4.农田灌溉水质标准(GB5084—92)中，根据农作物的需求状况，将灌溉水质按灌溉作物分为三类：水作、旱作和蔬菜。其生物指标粪大肠菌群标准值定为 。 答：≤10000个/L。 5.为了区别存在于中的大肠菌群和存在于的大肠菌群,可将培养_ __ _____，在此种条件下仍能_____ 并使____________ _，则称为粪大肠菌群。 答：自然环境；温血动物肠道内；温度提高到44℃；生长；发酵乳糖产酸产气。 6.进行复发酵试验时，用3mm 或灭菌棒将转接到 培养液中。在培养。培养后观察发酵管 表明确信。
答：接种环；培养物；EC；44±0.5℃水浴下，24±2h；产气；试验阳性。 7.在污水综合排放标准(GB8978—1996)中，把医院、兽医院及医疗机构含病原体污水的粪大肠菌群分为三级标准：一级标准值；二级标准值；三级标准值。而传染病、结核病医院污水的粪大肠菌群三级标准值分别为：、、。 答：500个/L；1000个/L；5000个/L；100个/L；500个/L；1000个/L。8.EC培养液的配比是：胰胨，乳糖，氯化钠，磷酸二氢钾，胆盐三号，磷酸氢二钾，溶解于蒸馏水中。在 15min，灭菌后应为。 答：20g；5g；5g；1.5g；1.5g；4g；1000mL；121℃灭菌；pH；6.9。 二、问答题 1.粪大肠菌群的涵义是什么？ 答：指一群需氧及兼性厌氧在44.5℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 2.控制粪大肠菌群指标值的意义是什么？ 答：为了人体健康卫生的要求。 3.粪大肠菌群测定有几种方法？通常用哪种方法？ 答：有三种：多管发酵法、滤膜法、延迟培养法。用多管发酵法。 4.简诉测定粪大肠菌群多管发酵法的操作步骤？ 答：测定分二个步骤进行：量取若干经稀释的水样，接种乳糖蛋白胨培养液，进行初发酵试验：在37±0.5℃下培养24±2h，产酸和产气的发酵管表明试验阳性，再将表明试验阳性的发酵管中的培养物转接到EC培养液中，进行复发酵试验，在44±0.5℃水浴下培养24±2h，发酵管产气表明确信试验阳性。 5.在何种情况下用多少三倍浓度的培养基接种？ 答：接种体积为10ml时，试管内应装入有3倍浓度乳糖蛋白胨培养液5ml。 6.什么叫兼性厌氧细菌？ 答：氧存在或不存在的条件下均能繁殖的细菌。
GBT 肥料中粪大肠菌群的测定
GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定 1 范围 本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。 2 定义 粪大肠菌群 fecal coliforms 系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。 3 设备和材料（内容略） 4 培养基和试剂 培养基：遵照附录A的规定。 革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。 5 检验步骤 样品稀释 在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200 r/min 充分振荡30min，即成10-1稀释液。 用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。 乳糖发酵试验 选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。 分离培养 从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。 证实试验 从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。 结果 证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。 附录 A （规范性附录） 培养基 乳糖胆盐发酵培养基 蛋白胨g 猪胆盐g 乳糖g %溴甲酚紫水溶液m L 蒸馏水1000m L
粪大肠菌群的测定
粪大肠菌群的测定 1 卫生学意义 粪大肠菌群测定的卫生学意义：一、与大肠菌群相比，粪大肠菌群在人和动物粪便中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。因此，粪大肠菌群的存在表明食品近期内可能直接或间接的受到了粪便的污染；二、作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性；三、常用做贝类和贝类养殖用水的卫生指标。 2 检验方法 2.1 术语与定义 一群在44.5℃培养24h-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 卫生学概念，又称为耐热大肠菌群，主要是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属等。 2.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： （1）恒温培养箱：36℃±1℃。 （2）冰箱：2℃～5℃。 （3）恒温水浴箱：46℃±1℃。 （4）天平：感量0.1g。 （5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 （6）无菌锥形瓶：容量500mL。 （7）无菌培养皿：直径90mm。 （8）pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 2.3 培养基和试剂 （1）月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：1）成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0g；氯化钠：5.0g；乳糖：5.0g；磷酸氢 二钾（K 2HPO 4 ）：2.75g；磷酸二氢钾（KH 2 PO 4 ）：2.75g；月桂基硫酸钠：0.1g； 蒸馏水：1000mL；pH：6.8±0.2 2）制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。 （2）EC肉汤（E.coli，BGLB）： 1）成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0 g；3号胆盐或混合胆盐：1.5 g；乳糖： 5.0g；磷酸氢二钾（K 2HPO 4 ）：4.0g；磷酸二氢钾（KH 2 PO 4 ）：1.5g；氯化钠：5.0g；
水质粪大肠菌群(一般水样)测定作业指导书
水质 粪大肠菌群（一般水样）测定作业指导书 1 含义及执行标准 含义 粪大肠菌群基本性状与总大肠菌群相似， 属于总大肠菌群的一部分。在培养温度为37 C 时可检出总大肠菌群的存在， 为区别存在于自然环境和温血动物肠道内的粪源性大肠菌群细 菌，将培养温度提高倒 44.5C,仍能使乳糖发酵产酸产气的总大肠菌群为粪大肠菌群。 水样特指除医院污水外的各种水样。本实验通过定性区别实验产酸产气，检索 出定量的粪大肠菌群结果。 多管发酵技术是以最可能数（ most probable number ,简称MPN ）来表示试验结果的。 它是根据统计学理论，通过水样不同稀释浓度多组重复生物培养阳性结果估计水体中被测生 加工、烹调及去皮蔬菜 b 生食类蔬菜、瓜类及草本水果 方法名称：多管发酵法 方法来源：水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行） （HJ/T 347 — 2007） 方法适用范围：此法适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定。 仪器 高压蒸汽灭菌器 表1-3粪大肠菌群畜禽养殖污染物排放标准 (GB 18596-2001 ) 方法名称、方法来源及适用范围 2.1 MPN 表，导 1.2 方法原理 2.2
电热干燥箱 恒温培养箱 冰箱 采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121 C（20min）高压 蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。 2.3 标准菌株制备 将标准菌株的母种或稳定工作种接种到单倍乳糖蛋白胨培养液中培养对照控制。必须包括大肠埃希氏菌、产气场杆菌和山夫登堡沙门氏菌三种对照。接种完后需记录: 母种的来源, 母种和工作种的保存方法、保存温度、传代间隔时间、生长培养基及孵育条件, 确认试验（存活度、纯度、关键诊断指标等），母种到工作种的传代代数。 2.4 培养基 2.4.1单倍乳糖蛋白胨培养液：市售乳糖蛋白胨培养基，按铭牌配制，用定量加液器分 装每个试管10ml，加塞，在115C灭菌20min，贮存于暗处备用。 242三倍乳糖蛋白胨培养液：市售乳糖蛋白胨培养基, 按铭牌比例，三倍配制（蒸馏 水除外），用定量加液器分装每个试管5ml或每个大试管50mL,加塞，在115C灭菌20min , 贮存于暗处备用。 243 EC培养液：市售EC培养基，按铭牌配制，在115C灭菌20min，用定量加液器 分装每个试管10ml，加塞，贮存于暗处备用。 2.4.4培养基存放于带紫外灯的灭菌物品专用贮藏柜中, 显变化 当培养基颜色变化，或体积明 时废弃不用。 2.5 分析步骤 2.5.1水样接种量 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水 样量接种。同一接种水样量要有五管。相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、O.ImL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。 使用的水样量可参考下表2。 表2接种用水量参考表
肥料中粪大肠菌群的测定
肥料中粪大肠菌群的测定 一：前期准备 一次性帽子、口罩、脚套 1， 移液管10ml 量筒100ml ｝ 玻璃珠 三角瓶 培养皿 2， 乳糖胆盐发酵培养基（用于乳糖发酵） 乳糖发酵培养基（用于复发酵） 伊红美蓝培养基（用于分离培养） } 121℃，15min 无菌水 } 121℃，15min 二：实验过程 无菌条件下进行： 10.0g 固体样品/10ml 液体样品 ↓ 三角瓶（带玻璃珠，90ml 无菌水）1:10=10-1 ↓ 200r/min 振荡30min ↓ 吸取10-1—5ml ，加入45ml 无菌水（提前准备）1:100=10-2 ↓ 吸取吸取10-2—5ml ，加入45ml 无菌水（提前准备）1:1000=10-3 ↓ ……依次稀释得到10-4，10-5等浓度稀释液（每个稀释度必须更换无菌移液管） ↓ 选取三个连续适宜稀释液，分别吸取1.0ml 加入到乳糖胆盐发酵管内（装有乳糖胆盐发酵培 养基）（每一稀释度接种3支发酵管） ↓ 培养箱45℃，24h ↓ 结果：产酸，颜色变；产气，导管有气泡 不产酸，不产气，为粪大肠菌群阴性 ↓ 分离培养：从产酸产气或只产酸的发酵管中挑取发酵液在伊红美蓝培养基平板上划线 ↓ 培养箱36℃，18-24h ↓ 证实实验：从平板上挑取可以菌落，进行革兰氏染色。 结果：染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性 ↓ 革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中（装有乳糖发酵培养基） ↓ 培养箱44.5℃，24h ↓ 结果，不产气为粪大肠菌群阴性，产气为粪大肠菌群阳性 ↓ 证实为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN 检索表，得出每克（毫 升）肥料样品中的粪大肠菌群数 ｝160℃，4h ｝115℃，15min
《粪大肠菌群的测定》练习题(精)
职业教育环境监测与治理技术专业教学资源库 《环境监测》练习题 1 《粪大肠菌群的测定》练习题 备注：每题后面的简单、一般、困难是指题目的难易程度。 一、选择题 1.EC 培养液的配比是：胰胨20g ，乳糖5g ，氯化钠5g ，磷酸二氢钾1.5g ，胆盐三号1.5g ，磷酸氢二钾4g ，溶解于1000mL 蒸馏水中。在( C )℃灭菌15min ，灭菌后pH 为6.9。（一般） A 、37 B 、115 C 、121 D 、165 2.检测粪大肠菌群时作发酵试验用的培养基，是由蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠等配制而成的，调节pH 为( B )，应在115℃灭菌20min 。（一般） A 、5.2-5.4 B 、7.2-7.4 C 、9.2-9.4 D 、12.2-12.4 二、判断题 1.粪大肠菌群是总大肠菌群一部分，用粪大肠菌群作为卫生学指标比用总大肠菌群更有代表性。目前，粪大肠菌群被认为是受粪便污染的最实用的指示菌。（√）（一般） 2.为了区别存在于自然环境中的大肠菌群和存在于温血动物肠道内的大肠菌群,可将培养温度提高到44℃，在此种条件下仍能生长并使发酵乳糖产酸产气，则称为粪大肠菌群。（√）（一般） 3.进行复发酵试验时，用3mm 接种环或灭菌棒将培养物转接到EC 培养液中。在44±0.5℃水浴下培养24±2h 。培养后观察发酵管产气表明确信试验阴性。（×）（困难） 三、问答题 1.简述粪大肠菌群指标的含义及常用测定方法。（一般） 答案：（1）粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便，在44.5℃温度下能生长并发酵乳酸产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。（2）粪大肠菌群指标常用的测定方法为多管发酵法，它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
粪大肠菌群的测定步骤
粪大肠菌群的测定 1、半个月前配好初、复发酵所需培养液 2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口 3、操作 （1） 培养液 初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 10 g 牛肉浸膏 3 g 乳糖 5 g 氯化钠 5 g 蒸馏水 1000ml 调节PH 为7.2—7.4（NaOH ） 6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。 单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。 双月10个地表水，2个创业。共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。 创业的水一个月采两次水样 复发酵 EC 培养液 胰胨 20 g 乳糖 5 g 胆盐三号 1.5 g 磷酸氢二钾 4 g 磷酸二氢钾 1.5 g 氯化钠 5 g 蒸馏水 1000ml 充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。 三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml
（2）做样 初发酵： 地表水15根管为一个水样。5根为一组。第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。 （10、1、0.1的取样量） 创业，每个水样15根单倍。同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、 0.001ml。 将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。 观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。 复发酵： 呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。将阳性的试管中溶液接种（接种环）到EC培养液中，放在45℃±0.5℃的水浴锅中培养24h±2h。水浴锅液面应高于管中液面。 观察：产气（有气泡）则证实为阳性。记录阳性试管数，查表可得MPN值。 结果表示单位为：个/L
水质 粪大肠菌群(一般水样)测定作业指导书
水质粪大肠菌群（一般水样）测定作业指导书 1含义及执行标准 1.1含义 粪大肠菌群基本性状与总大肠菌群相似，属于总大肠菌群的一部分。在培养温度为37℃时可检出总大肠菌群的存在，为区别存在于自然环境和温血动物肠道内的粪源性大肠菌群细菌，将培养温度提高倒44.5℃，仍能使乳糖发酵产酸产气的总大肠菌群为粪大肠菌群。一般水样特指除医院污水外的各种水样。本实验通过定性区别实验产酸产气，检索MPN表，导出定量的粪大肠菌群结果。 1.2方法原理 多管发酵技术是以最可能数（most probable number，简称MPN）来表示试验结果的。它是根据统计学理论，通过水样不同稀释浓度多组重复生物培养阳性结果估计水体中被测生物密度的一种方法，具体是通过查MPN表获得结果的。 1.3水环境质量标准 表1-1 粪大肠菌群地表水环境质量标准（GB 3838-2002） 表1-2 粪大肠菌群农田灌溉水质标准（GB 5084-2005） a 加工、烹调及去皮蔬菜 b 生食类蔬菜、瓜类及草本水果 表1-3 粪大肠菌群畜禽养殖污染物排放标准（GB 18596-2001） 2分析方法 2.1方法名称、方法来源及适用范围 方法名称：多管发酵法 方法来源：水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）(HJ/T 347─ 2007) 方法适用范围：此法适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定。 2.2仪器 高压蒸汽灭菌器
电热干燥箱 恒温培养箱 冰箱 采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121℃（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。 2.3 标准菌株制备 将标准菌株的母种或稳定工作种接种到单倍乳糖蛋白胨培养液中培养对照控制。必须包括大肠埃希氏菌、产气场杆菌和山夫登堡沙门氏菌三种对照。接种完后需记录：母种的来源，母种和工作种的保存方法、保存温度、传代间隔时间、生长培养基及孵育条件，确认试验（存活度、纯度、关键诊断指标等），母种到工作种的传代代数。 2.4培养基 2.4.1 单倍乳糖蛋白胨培养液：市售乳糖蛋白胨培养基，按铭牌配制，用定量加液器分装每个试管10ml，加塞，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。 2.4.2 三倍乳糖蛋白胨培养液：市售乳糖蛋白胨培养基，按铭牌比例，三倍配制（蒸馏水除外），用定量加液器分装每个试管5ml或每个大试管50mL，加塞，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。 2.4.3 EC培养液：市售EC培养基，按铭牌配制，在115℃灭菌20min，用定量加液器分装每个试管10ml，加塞，贮存于暗处备用。 2.4.4 培养基存放于带紫外灯的灭菌物品专用贮藏柜中，当培养基颜色变化，或体积明显变化时废弃不用。 2.5分析步骤 2.5.1 水样接种量 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL 或0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。使用的水样量可参考下表2。 表2 接种用水量参考表
SN出口食品中大肠菌群粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法
SN0169-92代替ZBX09002一88 Methodforexaminationofcoliform，fecalcoliformandescherichiacoliinfoodforexport 1、主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。 本标准适用于出口食品的检验。 2、设备和材料 2.1 吸管：1mL，具0.1mL刻度；5mL和10mL，具1mL刻度。 2.2 水浴箱：44.5±0.5℃。 2.3 培养箱：36±1℃，44.5±0.5℃。 2.4 冰箱：0～5℃和-15～-20℃。 2.5 均质器。 2.6 乳钵和研棒。 2.7 平皿：直径90mm。 2.8 天平：感量0.1g。 2.9 显微镜。 2.10稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。 2.11玻璃珠：直径约5mm。 2.12菌落计数器。 3、培养基及试剂 3.1 月桂基硫酸盐胰蛋白(胨)(LST)肉汤。 3.2 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。 3.3EC肉汤。 3.4 伊红美蓝琼脂(EMB)。 3.5 营养琼脂斜面。
3.6 色氨酸肉汤。 3.7MR-VP培养基。 3.8Korser氏枸椽酸盐肉汤。 3.9 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。 3.10 Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液。 3.11生理盐水。 3.12革兰氏染色液。 3.13Kovacs氏靛基质试剂。 3.14甲基红指示剂。 3.15Voges-proskauer(V-P)试剂。 4、样品制备 4.1 以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验，应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的食品，应置于4℃冰箱保存。检验前冷冻样品可于2～5℃18h内解冻，或在45℃以下15min内解冻。 4.2 不同食品样品匀液的制备 4.2.1 液体食品以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL稀释剂的灭菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，以30cm幅度、于7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇)，制成1：10的样品匀液。 4.2.2 固体和半固体食品 以无菌操作取25g样品，放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1～2min，制成1：10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。 4.3 稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计，用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液，如10-2、10-3、10-4……。从制备样品匀液至稀释完毕，全过程不得超过15min。 5、大肠菌群的测定 5.1 大肠菌群MPN值的测定 5.1.1 对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤，每管接种1mL。 5.1.2 将接种管置于36±1℃培养48±2h。
ISO4832大肠菌群和粪大肠菌群测定
BS ISO 4832:2006食品和动物饲料的微生物学大肠菌群计数水 平法--菌落计数技术 序 ISO是国际标准的全球性组织。准备国际标准这项工作通常由ISO技术联盟来完成。每一个团体成员负责各自的学科。与ISO有合作的国际性机构、政府与非政府机构，也有参与这项工作。ISO与国际电子组织（IEC）在电子标准化方面有着密切的合作关系。 国际性标准的起草原则在《ISO/IEC 细则》第三部分中有给出。 起草的国际性标准被技术委员会采用是通过全体成员投票决定的。发布一个国际性标准需要至少75％成员投赞成票。国际性标准ISO 4831 由ISO/IEC 34技术委员会（农产品，小组委员会SC9，微生物）起草的。 这个第三版的ISO 4832取代了ISO 4832:1991和ISO 5541-1:1986。主要的修改内容如下： ——在35℃下培养这个可选择的程序已被删除（见4.2）； ——引入使用亮绿乳糖胆汁培养基做确证实验（见5.4和9.4）。 考虑到本标准的上一个版本已被修改，已确认ISO 4832:1991的选择性方法不受影响。 绪论 由于食品与饲料的种类繁多，这个标准不一定适合某一类产品。在这种情况下，可使用不同的方法，但必须有绝对的技术上的理由。否则，要尽可能地完全遵循本标准。 当这个标准下一次回顾时，将会对这个标准的使用做数据统计，特殊产品偏离本标准使用也会做相关统计。 同一类产品的检测方法也有可能不统一，国际性标准和/或国家标准也不一定完全与本标准相符合。希望相关标准做回顾时，会遵循本标准做出相关的修改，以使只有已被证明的技术上的理由才能与本标准偏离。 本标准在技术上的描述没有ISO 4831那样精确，但大部分的微生物检测能根据本标准开展，每克或每毫升样品中含大数量的大肠菌群可使用本标准。此外，
肥料中粪大肠菌群的测定----流程
肥料中粪大肠菌群的测定 一：前期准备一次性帽子、口罩、脚套 1，移液管{10ml 量筒100ml｝160℃，4h 玻璃珠160℃，4h 三角瓶160℃，4h 培养皿160℃，4h 2，乳糖胆盐发酵培养基（用于乳糖发酵）115℃，15min 乳糖发酵培养基（用于复发酵）115℃，15min 伊红美蓝培养基（用于分离培养）121℃，15min 无菌水121℃，15min 二：实验过程无菌条件下进行： 10.0g固体样品/10ml液体样品 ↓ 三角瓶（带玻璃珠，90ml无菌水）1:10=10-1 ↓ 200r/min振荡30min ↓ 吸取10-1—5ml，加入45ml无菌水（提前准备）1:100=10-2 ↓ 吸取吸取10-2—5ml，加入45ml无菌水（提前准备）1:1000=10-3 ↓ ……依次稀释得到10-4，10-5等浓度稀释液（每个稀释度必须更换无菌移液管） ↓ 选取三个连续适宜稀释液，分别吸取1.0ml加入到乳糖胆盐发酵管内（装有乳糖胆盐发酵培养基）（每一稀释度接种3支发酵管） ↓ 培养箱45℃，24h ↓ 不产酸，不产气，为粪大肠菌群阴性→实验终止→<3 结果：产酸，颜色变；产气，导管有气泡 ↓ 分离培养：从产酸产气或只产酸的发酵管中挑取发酵液在伊红美蓝培养基平板上划线 ↓ 培养箱36℃，18-24h ↓ 证实实验：无菌落→实验终止→<3 有菌落，进行革兰氏染色。 染色反应阳性者（紫色）→实验终止→<3 染色反应阴性者（红色）为粪大肠菌群阴性 ↓ 革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中（装有乳糖发酵培养基） ↓ 培养箱44.5℃，24h ↓ 结果，不产气为粪大肠菌群阴性→实验终止→<3 产气为粪大肠菌群阳性 ↓ 根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数
水质粪大肠菌群的测定
精心整理 检测报告 B&C（2017）字054号 标准名称水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法 标准号HJ/T 347-2007 编制日期2017年9月5日 编制人：校核人： 审核人：签发人：
精心整理
一、检测依据及设备 表1 检测方法标准及设备一览表 检测类别检测项目方法名称及编号仪器设备名称及型号仪器设备编号 水质粪大肠菌群水质粪大肠菌群的测定多 管发酵法和滤膜法 HJ/T 347-2007 超净台（） 恒温培养箱（） 水浴锅（） / 二、试剂和材料 （1）检测试剂：同HJ/T 347-2007中多管发酵法“试剂和材料”配制。 （2）检测样品：2009年9月1日取自遗爱湖1L水样。 三、检测步骤 同HJ/T 347-2007中多管发酵法“检测步骤”测定。 四、实验结果 4.1 样品测定 根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果数目，从表3中查得每升水样中的粪大肠菌群。 4.2 实验结果 表2 多管发酵法测定粪大肠菌群的结果 初发酵实验2017年9月1日 至 2017年9月2日 将0.1mL、0.01mL和0.001mL水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的5个10mL 发酵管中。在恒温培养箱中 37℃±0.5℃下培养 24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。 接种量0.1mL 0.01mL 0.001mL 阳性试管数量 4 3 3 复发酵实验2017年9月2日 轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用 3mm 接种环或灭菌棒将培养物转接到 EC 培养液中。在 44.5℃±0.5℃温度下培养 24h±2h（水浴锅的水面应高于试管中培养基液面）。接种后所有发酵管必须在 30min 内放进水浴中。培养后立即观察，发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。
实验四 大肠菌群和粪大肠菌的检验
实验四大肠菌群和粪大肠菌的检验 一、实验目的要求 1、了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义。 2、学习并掌握大肠菌群检验的原理和方法。 二、原理 大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。一般认为该菌群细菌可包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。 食品中大肠菌群数系以每100g（或ml）检样内大肠菌群最近似数（the most probable number-简称MPN）表示。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材 规格名称数量用途 1、500ml广口瓶 1个稀释样品 2、500ml三角瓶 2个制生理盐水 3、250ml三角瓶 1个制EMB琼脂 4、18×180mm试管 8支稀释及制双料乳糖胆盐发酵管 5、18×150mm试管20～25支单料乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管 6、13×130mm试管20支制蛋白胨水、EC肉汤 7、1ml移液管 5 支 8、10ml移液管 3 支 9、直径为90mm平皿12套制EMB平板 10、250ml量筒1支 （二）应灭菌消毒的器材 剪刀1把开瓶器不锈钢药匙1把滴管胶头4只称量纸适量 （三）应制备的培养基 培养基总量所用容器 1、0.85%NaCl生理盐水300ml 500ml三角瓶 2、乳糖胆盐发酵管 双料：10ml/支 5支 60ml 18×180mm试管(装有导管) 单料：10ml/ 8支 90ml 18×150mm试管(装有导管) 3、EMB琼脂： 1瓶 120ml 250ml三角瓶 4、乳糖发酵管： 3ml/支 5支20ml 13×130mm试管(装有导管) 5、EC肉汤： 3ml/支 6支20ml 13×130mm试管(装有导管)
过滤膜法测粪大肠菌群数-国标方法
滤膜法-粪大肠菌群的测定 1、适用范围 本标准适用于地表水、地下水、及水中粪大肠菌群的测定。用于检验加氯消毒的水样时，在滤膜法之前，先做试验，证实它所得的数据资料与多管发酵试验所得的数据资料具有可比性。 2、原理 滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45微米）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。 3仪器： 滤膜（孔径0.45微米）、滤器、接液瓶、垫圈、无菌镊子夹 3、培养基和试剂 本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂，实验室用水为新制备的去离子水。 M-FC培养基： 胰胨 10g 蛋白胨 5g 酵母浸膏 3.0g 氯化钠 5.0g 乳糖 12.5g 胆盐三号 1.5g 1%苯胺蓝水溶10ml 1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氢氧化钠液中）10ml 蒸馏水 1000ml 制法：将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节PH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶100ml，于115℃灭菌20min。储存于冰箱中备用，临用前，按上述配比，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝溶液1ml及新配制的1%玫瑰色酸溶液（溶于氢氧化钠溶液）1ml，混合均匀。加热溶解前，加入 1.2%～1.5%琼脂制成固体培养基。如培养物中杂菌不多，则培养基中不加玫瑰色酸亦可。 4、步骤 水样的选择：水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。理想的水样体积是一片滤膜上生长20～60个粪大肠群菌落，总菌落数不超过200个。 滤膜及滤膜灭菌：将滤膜放入高压蒸汽灭菌锅里在121℃灭菌10min，滤器、接液瓶、垫圈分别用纸包好，在使用前经121℃灭菌20min，滤器也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。 过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥的固定好滤器。将适量的水样注入滤器中，加盖，开动真空泵即可抽滤除菌。
水中大肠杆菌的检测方法
附件 水中大肠杆菌群检测方法－多管发酵法 NIEA E201.54B 一、方法概要 本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生内生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 ± 1 ℃、 48 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释度之水样所 产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。二、适用范围 本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样中大肠杆菌群之检验。 三、干扰 (一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。 (二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。 四、设备 (一) 量筒：100至1000 mL之量筒。 (二) 吸管：有0.1刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。 (三) 试管：大小约150 × 15 mm之试管或有盖螺旋试管。 (四) 发酵管（fermentation tube）：大小约22 × 9 mm之玻璃管。 (五) 稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。 (六) 锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。 (七) 采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。 (八) 冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者。 (九) 天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至0.01 g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至0.001 g。 (十) 培养箱：温度能保持在35 ± 1℃者。 (十一) 高压灭菌釜：温度能维持在121℃（压力约15 lb/in2或 1.1 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。
粪大肠菌群检测
粪大肠菌群检测 一、室所用设备、器皿 1、无菌区工作台 2、恒温培养箱 3、高压蒸汽灭菌器 4、冰箱 5、酒精灯 6、天平 7、电炉 8、采样广口瓶 9、烧杯、玻璃棒 10 、玻璃发酵管 11、试管架 12、移液管 13、锥形瓶 二、药品：乳糖胆盐培养基 三、前期准备 1、玻璃器皿灭菌（高压蒸汽灭菌） 所用采集水样的广口瓶、玻璃试管、移液管、玻璃棒、锥形瓶等玻璃器皿均需放入高压锅灭菌。 广口瓶：将清洗干净的采样瓶盖好瓶盖，用牛皮纸、报纸等防潮纸将瓶盖、瓶顶和瓶颈处包裹好，用绳子绑好，置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。 玻璃试管、移液管、玻璃棒：用牛皮纸、报纸等防潮纸将其包裹好，置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。 2、采样 采取水样时，可握住瓶子下部直接将已灭菌的带盖采样瓶插入水中，约距水面10~15cm处，拔瓶盖，瓶口朝水流方向，使水样灌入瓶内然后盖上瓶盖，将采样瓶从水中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平前推，直到充满水样为止。采好水样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。 采好的水样，应迅速运往实验室，进行检验，一般从取样到检验不宜超过2h，否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6h。 四、实验步骤（多管发酵法） 1、配制乳糖胆盐培养基试制 （注：做15管的话，10ml的要配双料的，如：30g配1000ml，就应称取60g配1000ml，其他1ml、0.1ml的配制成单料的）,配制试剂时不用定容，只需大概体积即可。 2、称取12g乳糖胆盐培养基溶于200ml蒸馏水中，置于电炉上加热至溶解完全为止，冷却至室温后，分装于玻璃发酵管里。（5管10ml） 3、称取6g乳糖胆盐培养基溶于100ml蒸馏水中，置于电炉上加热至溶解完全为止，冷却至室温后，分装于玻璃发酵管里。（10管10ml） 5、所有发酵管盖好盖子，包裹好置于高压锅灭菌15 分钟（第一次曝气开始计时） 6、分别加入5管10ml、5管1ml、5管0.1ml的水样于已冷却至室温的发酵管中，并置于恒温培养箱里培养24小时（温度为44.5℃） 五、结果 根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从MPN表中查得相应的MPN指数，按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠菌群细菌的MPN值。
水质总大肠菌群和粪大肠菌群(纸片快速法)检测方法确认表
水质总大肠菌群和粪大肠菌群(纸片快速法)检测方法确认表 案场各岗位服务流程 销售大厅服务岗： 1、销售大厅服务岗岗位职责： 1)为来访客户提供全程的休息区域及饮品; 2)保持销售区域台面整洁; 3)及时补足销售大厅物资,如糖果或杂志等; 4)收集客户意见、建议及现场问题点； 2、销售大厅服务岗工作及服务流程 阶段工作及服务流程 班前阶段1）自检仪容仪表以饱满的精神面貌进入工作区域 2）检查使用工具及销售大厅物资情况，异常情况及时登记并报告上级。 班中工作程序服务 流程 行为 规范 迎接 指引 递阅 资料 上饮品 （糕点） 添加茶水 工作 要求 1）眼神关注客人，当客人距3米距离 时，应主动跨出自己的位置迎宾，然后 侯客迎询问客户送客户
注意事项 15度鞠躬微笑问候：“您好！欢迎光临！”2）在客人前方1-2米距离领位，指引请客人向休息区，在客人入座后问客人对座位是否满意：“您好！请问坐这儿可以吗？”得到同意后为客人拉椅入座“好的，请入座！” 3）若客人无置业顾问陪同，可询问：请问您有专属的置业顾问吗？，为客人取阅项目资料，并礼貌的告知请客人稍等，置业顾问会很快过来介绍，同时请置业顾问关注该客人； 4）问候的起始语应为“先生-小姐-女士早上好，这里是XX销售中心，这边请”5）问候时间段为8:30-11:30 早上好11:30-14:30 中午好 14:30-18:00下午好 6）关注客人物品，如物品较多，则主动询问是否需要帮助（如拾到物品须两名人员在场方能打开，提示客人注意贵重物品）； 7）在满座位的情况下，须先向客人致歉，在请其到沙盘区进行观摩稍作等
待； 阶段工作及服务流程 班中工作程序工作 要求 注意 事项 饮料（糕点服务） 1）在所有饮料（糕点）服务中必须使用 托盘； 2）所有饮料服务均已“对不起，打扰一 下，请问您需要什么饮品”为起始； 3）服务方向：从客人的右面服务； 4）当客人的饮料杯中只剩三分之一时， 必须询问客人是否需要再添一杯，在二 次服务中特别注意瓶口绝对不可以与 客人使用的杯子接触； 5）在客人再次需要饮料时必须更换杯 子； 下班程 序1）检查使用的工具及销售案场物资情况，异常情况及时记录并报告上级领导； 2）填写物资领用申请表并整理客户意见；3）参加班后总结会； 4）积极配合销售人员的接待工作，如果下班时间已经到，必须待客人离开后下班；
大肠杆菌检测实验报告
国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数 实验目的 实验原理：国标法操作的原理 实验器材： 培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml 大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台 实验药品： 磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤： 一： 10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。 用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min 二： 1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。 2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。 3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。 4：灭完菌后放入超净台中备用。 三： 1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。 3：取4只试管，编号1—4 4：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS 5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。 6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀 7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。 9：取4只平皿，编号1—4 10：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。 11：将培养基在３6摄氏度条件下培养12小时。 12：取出培养皿，选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。 四：实验结果（记得在操作过程和得到结果时拍照） 1号，2号菌落个数多不可计，舍弃 4号平皿中菌落数目小于10 cfu ，舍弃 3号平皿中菌落分布较均匀，数3号中的菌落数，一共有210个cfu 。 计算样品中细菌浓度为：1.05× 105 Cfu/ml
粪大肠菌群检测方法20110520
粪大肠菌群的测定（多管发酵法） 一、检测限 二、试剂(均为分析纯) 1、配制单倍乳糖蛋白胨培养液（1份量）(因有固体培养基，以下配置方法仅做参考) 单倍乳糖蛋白胨培养液成分：蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL、碳酸钠10.6g。 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液（1mL）：称取溴甲酚紫1.6g倒入小烧杯，用少量95%乙醇溶解，移至100mL容量瓶，用95%乙醇多次洗小烧杯，洗液移入容量瓶，最后用95%乙醇定容至100mL，摇匀备用。（滤纸、100mL小烧杯2只、100mL容量瓶1只、95%乙醇、玻璃棒、药匙、天平、滴管、溴甲酚紫） 碳酸钠（10.6g）：称取10.6g碳酸钠溶于蒸馏水，并定容到100mL。（100mL容量瓶1个、100mL小烧杯2只、碳酸钠） 将单倍乳糖蛋白胨培养液成分蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2~7.4（用10%碳酸钠调节），再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管(10mL左右)中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用（冰箱中可存放3个月）。(>1L锥形瓶1只、1mL移液管1根、pH计、电炉、倒置的小玻璃管的试管60套（小试管(12x150mm ）+小套管（杜氏小管）（约6mm × 36mm )）、高压蒸汽灭菌器、试管架（10只入）、纱布和棉花) 2、三倍配制单倍乳糖蛋白胨培养液：制法同上，除蒸馏水外，其余配方比例三倍。 3、EC培养液（1份量） 将EC培养液所需成分胰胨20g、乳糖5g、胆盐三号1.5g、磷酸氢二钾（K2HPO4）4g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1.5g、氯化钠5g，加热溶解于1L烧杯中，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。用10%Na2CO3调节pH以防止培养基灭菌后pH上升0.2左右（确定值需要前期在实验室寻找规律）。再将分装试管置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min。灭菌后pH应为6.9。（>1L烧杯1只） 在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养基颜色变化，或体积明显变化时废弃不用。 三、耗材和仪器 1、仪器：高压蒸汽灭菌器、生化培养箱（恒温箱）（25-44℃）、无菌操作台、天平 2耗材：倒置的小玻璃管的试管70套（小试管(12x150mm）+小套管（杜氏小管）（约6mm × 36mm )）；与小试管配套的棉塞或纱布和棉花；药匙、电炉、3mm接种环3根、吸耳球、牛皮纸、酒精灯1个、火柴、镊子2个、笔、试管架、滤纸（1盒）、、1mL及10mL移液管各2支 三、实验步骤 1、水样接种量 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管（平行）。 （如接种体积为10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL；如接种量为1ml或少于1mL，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL中） 2、初发酵试验 将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管（含有玻璃倒管的试管）中（取原水样1mL，加如到9mL无菌生理盐水中混匀。这时候得到的稀释液1mL就相当与0.1mL，