聚丙烯酰胺凝胶配制方法
5×TBE（组份浓度：5×TBE，pH 8.3；配制量：1 L）：称取53.9 g Tris，27.5 g硼酸，量取20 ml 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0），置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，充分搅拌溶解；加超纯水将溶液定容至1 L；室温保存。
10% 过硫酸铵（组份浓度：10% (W/V) 过硫酸铵；配制量：10 ml）：称取1 g过硫酸铵，置于10～50 ml烧杯中；加入约8 ml超纯水，搅拌溶解；加超纯水将溶液定容至10 ml；4 ℃保存（保存时间为2周左右，超过期限过硫酸铵将失去催化作用）。
30% 丙烯酰胺（组份浓度：30% (W/V)丙烯酰胺；配制量：1 L）：称取290 g丙烯酰胺，10 g N,N'-亚甲基双丙烯酰胺，置于1 L烧杯中；加入约600 ml超纯水，水浴加热至37 ℃，充分搅拌至溶解；加超纯水将溶液定容至1 L，用0.45 μm滤膜过滤除去杂质；并检测该溶液pH值应不大于7；棕色瓶4 ℃保存。
0.1% AgNO3（组份浓度：0.1% (W/V) AgNO3；配制量：1 L）：称取1 g AgNO3，置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，；加超纯水将溶液定容至1 L；棕色瓶室温保存。
显色液（组份浓度：2% (W/V) NaOH，0.04% (W/V) Na2CO3，0.4% (W/V) 37%甲醛；配制量：1 L）：称取20 g NaOH，0.4 g Na2CO3，置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，充分搅拌溶解；加4 ml 37%甲醛溶液，加超纯水将溶液定容至1 L；室温保存。
10% 冰乙酸（组份浓度：10% 冰乙酸；配制量：1 L）：量取100 ml冰乙酸，置于1 L烧杯中；加入约800 ml超纯水，搅拌混匀；加超纯水将溶液定容至1 L；室温保存。
2.2.6 电泳检测
2.2.6.1 玻璃板清洗
首先用去污粉将电泳用玻璃板、胶垫、梳子等反复清洗；然后用Ⅲ级蒸馏水漂洗2～3次，直至玻璃板表面出现均匀水膜，既不聚成水滴，也不成股流下；再用超纯水漂洗1次，晾干；最后用无水乙醇擦拭，晾干备用[74]。
2.2.6.2 缓冲液贮液和凝胶母液的制备
缓冲液贮液用5×TBE，具体配制方法见2.1.2.2，用时稀释5倍。凝胶母液用30%丙烯酰胺，具体配制方法见2.1.2.2。
2.2.6.3 聚丙烯酰胺凝胶的制备
10% 非变性聚丙烯酰胺凝胶（两块，约55 ml）各组分用量如下[58]：
30% 丙烯酰胺：18 ml
5×TBE：11 ml
超纯水：25 ml
TEMED：36 (l
10% 过硫酸铵：385 (l
具体操作步骤如下[75]：
首先，按要求组装好垂直电泳板，两块玻璃板的底部用1.5% 琼脂糖封边，防止封闭不严而导致聚丙烯酰胺胶液漏出。
然后，灌胶。分别量取配比用量的30% 丙烯酰胺、5×TBE和超纯水置于100 ml烧杯中，用玻璃棒搅拌混匀；然后用微量加样器加入配比用量的10% 过硫酸铵和TEMED，加入后聚合即开始，迅速摇匀；立即用玻璃棒引流，将混合液灌注于两块玻璃板之间，灌胶过程一次性完成，避免产生气泡；灌胶完成后，一次性平稳插入样梳以形成点样孔。
最后，待聚合完全后往电泳槽中加入1×TBE缓冲液直至没过点样孔，且正负极槽内缓冲液高度应一致。聚合时间一般在30～60 min左右，凝胶聚合完全的标志是点样孔附近形成清晰的界面，轻轻拔去样梳，避免破坏点样孔，并立即用电泳缓冲液冲洗点样孔，以清除点样
孔中的气泡和未凝固完全的胶液。
2.2.6.4 电泳
取PCR扩增产物5 (l与1 (l上样缓冲液混合均匀后点入点样孔，用10% 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，以20 bp DNA ladder（Takara）作为分子量标准，缓冲液为1×TBE。接通电源，恒压180～200 V，电泳8～10 h，直至溴酚蓝距离凝胶边缘约1 cm时，停止电泳。2.2.6.5 银染、显色
具体步骤如下[76-78]：
（1）卸下玻璃板，用塑料薄片撬去上面一块玻璃板，并小心除去下方的琼脂糖凝胶；然后将附有聚丙烯酰胺凝胶的玻璃板以凝胶面朝下浸入盛有约200 ml超纯水的玻璃器皿中，凝胶即脱落于水中，轻轻摇晃15 sec，倒掉液体；
（2）加入约200 ml 0.1% AgNO3，置于摇床之上，以轻摇20 min左右，倒掉液体；
（3）加入约200 ml超纯水，轻摇15 sec，倒掉液体；
（4）加入约200 ml显色液，轻摇5～10 min，直至出现清晰带型，倒掉液体；
（5）加入约200 ml超纯水，轻摇15 sec，倒掉液体；
（6）加入约200 ml 10% 冰乙酸，固定；
（7）用Bio-Rad紫外凝胶成像系统观察，照相以记录电泳结果。
1.4.3 聚丙烯酰胺凝胶改进的银染方法
(1) 电泳结束后切断电源, 从电泳槽中倒出缓冲液, 然后取下胶板, 将凝胶从玻板中取出放入装有蒸馏水的瓷盘中, 用蒸馏水漂洗2 次。
(2) 银染: 加入染色液(0.2%的AgNO3、1%的冰醋酸、10%的无水乙醇)进行银染, 然后用蒸馏水漂洗2 次。20min
(3) 显影: 加入显影液(3%的无水NaOH, 每200 mL 溶液加1 mL 甲醛)进行显色。8min
聚丙烯酰胺使用方法及注意事项
———巩义市东方净化材料厂——— 聚丙烯酰胺使用方法及注意事项 溶解的方法 在容器如实验室的容器中加入一定量的清水,按清水量计算所需的聚丙烯酰胺量,称出聚丙烯酰胺;开启电动搅拌器,将清水搅出漩涡,搅拌器叶片末端的线速度最好在200-400转（以免造成聚丙烯酰胺聚合物降解;但又不能太慢,以免聚合物颗粒浮在水面上,或在水中下沉、结团）。将聚丙烯酰胺缓缓撒入水的漩涡中,直到撒完，便之均匀的在水中分散，溶解（注意不能将聚丙烯酰胺快速进入水里，否则会造成聚合物互相粘连、结团，失去药效）。然后再搅拌一段时间,使聚合物颗粒充分溶解,最后成为均匀、透明、粘稠的溶液,无肉眼可见的团块。 溶解比例 阴离子和非离子、阳离子聚丙烯酰胺通常溶解浓度为0.1%~0.3%。 搅拌速度 搅拌速度的理想转速为每分钟200至400转。 溶解时间 溶解聚丙烯酰胺所需的时间因为聚丙烯酰胺种类、溶解所用的水质、水温、搅拌效率不同而会有所不同。常规阴离子或者阳离子聚丙烯酰胺通常需要约40－60分钟的搅拌时间才能使粉末充分溶解。非离子聚丙烯酰胺通常需要80-120分钟。 注意事项 1.聚合氯化铝和聚丙烯酰胺不能放在一起使用，否则会影响效果。一定要分开使用，先投加聚合氯化铝间隔一小段时间后再投加聚丙烯酰胺。 2.粉状聚丙烯酰胺絮凝剂不能直接投加到污水中。使用前必须先将它溶解于水,用其水溶液去处理污水。 3.溶解粉状聚合物的水应是干净水(如自来水),不能是污水,常温的水即可,一般不需要加温。水温低于5度时溶解很慢。水温提高溶解速度加快,但40度以上会使聚合物加快降解,影响使用效果。一般自来水都适合于配制聚合物溶液,但强酸、强碱、高含盐的水不适于用来配制。 4.配好的聚丙烯酰胺投入污水污泥中的量需适量,过少没有效果,过多物料变粘适的其反。 5.固体的聚丙烯酰胺在干燥、阴凉的地方可存放二年以上,但配成溶液后,其存放时间就很有限。一般说,溶液浓度为0.1%时,非、阴离子型聚合物溶液不超过一周;阳离子型聚合物溶液不超过一天。溶液稳定性与浓度有关,配得越浓(如3%到5%)的溶液存放时间越长。但3%到5%的溶液不能直接去处理污水,使用前还要稀释。阳离子型聚丙烯酰胺溶液在pH<5.5时较稳定,pH>6时会因水解而迅速失效。它对铁离子和钙、镁离子比阴离子聚合物敏感。 ———巩义市东方净化材料厂———
核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳
PAGE胶的配制（DNA电泳用）50ml体系： 丙烯酰胺有效分离 （bp) 丙烯酰 胺30% （ml） 10×TBE （ml) ddH2O （ml） TEMED （μl） 过硫酸铵 10%（μl） 3.5% 100-1000 5.83 5 39.17 25.0 250 5.0% 100-500 8.33 5 36.67 25.0 250 8.0% 60-400 13.33 5 31.67 25.0 250 12.0% 40-200 20.0 5 25.00 25.0 250 15.0% 25-150 25.0 5 20.00 25.0 250 20.0% 5-100 33.33 5 11.67 25.0 250 5ml体系： 丙烯酰胺丙烯酰胺 30%（ml） 10×TBE （ml） ddH2O （μl） TEMED （μl） 过硫酸铵 10%（μl） 3.5% 0.583 0.5 3.917 2.5 25 5.0% 0.833 0.5 3.667 2.5 25 8.0% 1.333 0.5 3.167 2.5 25 12.0% 2.00 0.5 2.5 2.5 25 15.0% 2.50 0.5 2.0 2.5 25 20.0% 3.333 0.5 1.167 2.5 25 1、丙烯酰胺30%为29：1（质量比，丙烯酰胺：双甲叉丙烯酰胺） 2、TEMED 可以加到1ul/ml。 不同浓度丙烯酰胺和DNA的有效分离范围表
丙烯酰胺(%) 有效分离范围(bp) 溴酚兰* 二甲苯青* 3.5 100～2000 100 460 5.0 80～500 65 260 8.0 60～400 45 160 12.0 40～200 30 70 15.0 25～150 15 60 20.0 10～100 12 45 *表中给出的数字为与指示剂迁移率相等的双链DNA分子所含碱基对数目(bp). 凝胶的制备过程： 1、按要求装配好垂直电泳板，两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边，防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。 2、将装好的玻璃电泳板倾斜成45～60℃角。 3、按表3配制所需%浓度凝胶的毫升数。 4、加入TEMED后，立即混匀，缓缓倒入两玻璃板间的胶床中，直到液体接近溢出时为止。 5、立即插入适当的梳子，密切注意防止梳齿下产生气泡，用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上，然后将玻璃板斜靠在物体上，使成10°角，可减少液体泄漏的机会。 6、室温聚合一小时后，将玻璃板插入电泳槽中，上紧，倒入0.1XTBE缓冲液。 7、小心取出梳子，加样。 预电泳： 1.对于预电泳，有一种解释是为了除去没有聚合完全的丙烯酰胺分子和交联剂，其实最直接的理解就是预电泳会让胶跑的好看一点。 2.电压根据胶的长度来，是5~10V/cm，100V以下。 3.在预冷装置下电泳，防止局部温度高。
不同离子型聚丙烯酰胺的使用方法和用量用量计算(详细参考)
不同离子型聚丙烯酰胺的使用方法和用量 一、阴离子聚丙烯酰胺： 1、用于污水沉降中，建议配比浓度0.1%。 2、先将粉剂均匀地投撒在自来水中，加以40-60转/分的中速搅拌使高分子充分溶解于水，方可投加使用。 3、实验时，取100ml废水，加入10%聚合氯化铝溶液，并缓慢搅拌，用注射器缓慢滴加PAM 溶液，每次 0.5ml，根据生成的矾花大小及絮体紧密程度、上清液清澈度、沉降速度、投加量等来确定最合适的药剂。 4、适用于钢铁、化纤、印染、电镀、湿法冶金，也可用建筑胶水厂、涂料厂做增稠剂、造纸厂做分散剂等。吨废水添加干粉量为5-10g。 二、非离子聚丙烯酰胺 用于气浮工艺时，建议配比浓度0.1%，用法同阴离子，搅拌时间90分钟。 三、阳离子聚丙烯酰胺 1、用于污泥脱水时，建议配比浓度0.2%，搅拌时间50分钟投加使用。 2、实验时，取100ml废水，用注射器缓慢滴加PAM溶液，每次约0.5ml，根据生成的矾花大小及絮体紧密程度、上清液清澈度、沉降速度、投加量等来确定最合适的药剂。 3、适用于制药厂、皮革厂、印染污泥、化工污泥、造纸厂、污水处理厂等，吨废水添加干粉量为10-20g. 四、药剂用量计算 1.阴离子：配比浓度1/1000即：1吨水量加1kgPAM做小实验：如污水100ml里加1ml 药剂;1吨污水里加10g（L）药剂;1吨污水里加10gPAM. 2.阳离子：配比浓度2/1000即：1吨水里加2kgPAM;做小实验：如污泥100ml里 0.5mlL药剂;1吨污泥里加5kg药剂;1吨污泥里加10gpAM 五、影响气浮效果的因素 1、溶解情况如何？PAM 溶解时搅拌强度不宜过大，可以考虑延长搅拌时间来改善溶解情况 2、配制浓度问题。PAM配制浓度偏高时与待处理废水的混合可能会不够理想，可以考虑降低配制浓度，最低可调至0.05%，一般为0.05%-0.1%。由于低浓度时PAM 溶解较困难，可以先配制成一个较高浓度的溶液，然后由后稀释系统稀释至所需浓度。 3、PAC与PAM投加点间距，条件允许情况下间距尽可能远 4、PAM投加与混合。反应情况不理想时可以考虑两点投加，且两投加点之间要有一定的距离，第二个投加点离出水口不宜过远，以防止产生的絮团再次破碎。出水口前管道内应设置静态混合器，条件不足的话，弄个弯头也将就了 六、聚丙烯酰胺经验用量 中断废水回收、废浆污泥脱水阴离子、阳离子千分之三配每吨用3-5克；城市污水处理厂污泥脱水阳离子千分之五配每吨干污泥用4千克；钢厂循环水处理、污泥脱水阴离子1200万千分之五配每吨用5-7克；洗煤煤泥沉降、层渣沉降阴离子800-1200万千分之三配每吨用4克；盐水澄清去除钙、镁阴离子1800万千分之一配每吨用1-2克；电镀重金属、氢氧化物处理阴离子600-800万千分之一配每吨用1-2克；浮选助剂浮选前改进颗粒大小阴离子1000万千分之三配每吨用3-4克；肉
聚丙烯酰胺凝胶电泳 (1)
聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE) 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(acrylamide,Acr)单体相互聚合成多条长链，再与N,N-甲叉双丙烯酰胺(methylene-bisacrylamide,Bis)在引发剂和加速剂的作用下交联而成的凝聚胶多孔聚合物。凝胶孔径的大小可通过控制单体和交联剂的浓度来调节，从而满足不同分子量物质的分离要求。不同浓度的聚丙烯酰胺非变性凝胶的有效分离范围如表所示： 表1 DNA在聚丙烯酰胺凝胶中的有效分离范围 丙稀酰胺[%(w/v)]a有效分离范围（bp）二甲苯青FF b溴酚蓝b 3.51000－2000 460 100 5.080－500 260 65 8.060－400 160 45 12.040－200 70 20 15.025－150 60 15 20.0 6－100 45 12 a．N,N′-亚甲双丙稀酰胺占丙稀酰胺浓度的1/30 b．给出的数字是迁移率与染料相同的双链DNA片段的粗略大小（核苷酸对）。 聚丙烯酰胺凝胶的制备和电泳都比琼脂糖凝胶更为费事。聚丙烯酰胺凝胶几乎总是铺于两块玻璃板之间，两块玻璃板由间隔片隔开冰封以绝缘胶布。在这种配置形式下，大多数丙烯酰胺溶液不会与空气接触，所以氧对聚合的抑制仅限于凝胶顶部的一个窄层里。聚丙烯酰胺凝胶一律是进行垂直电泳，根据分离的需要，其长度可以在10-100cm之间。聚丙烯酰胺凝胶与琼脂糖凝胶相比有3个主要优点：（1）分辨力强，长度仅仅相差０.2%（即500bp中的1bp）的DNA分子即可分开;(2)所能装载的DNA分子量远远琼脂糖凝胶：多达10μg的DNA可以加样于聚丙烯酰胺凝胶的一个标准样品槽（1cm×1mm）而不致显著影响分辨力；(3)从聚丙烯酰胺凝胶中回收的DNA 纯度很高，可适用于要求最高的实验（如鼠胚胎微注射）。 常用的是两种聚丙烯酰胺凝胶： （1）用于分离和纯化双链DNA片段非变性聚丙烯酰胺凝胶 （2）用于分离、纯化单链DNA的变性聚丙烯酰胺凝胶
聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、目的要求 1．学习电泳原理和技术 2．学习和掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质技术 二、实验原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate，简称SDS），则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。因此可以利用SDS-PAGE测定蛋白质分子量。 三、试剂与器材 试剂：10%SDS、30%凝胶贮液（29%ACr-1%Bis）、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液、10%过硫酸铵、TEMED、pH8.3Tris-Gly电极缓冲液、上样缓冲液、蛋白质maker、0.25%考马斯亮兰R250染色液、甲醇：醋酸脱色液、异丙醇、tris-HCl（PH6.8）缓冲液、二硫苏糖醇、去离子水 器材：垂直板电泳槽、稳压稳流电泳仪、脱色摇床、50ml小烧杯、移液枪、枪头、玻璃棒、滤纸、表面皿、手套、 四、实验步骤 1 SDS聚丙烯酰胺的灌制 ⑴按说明安装玻璃板，橡胶条放在两玻璃板之间，确定不漏液，玻璃板放入电泳槽时，有凹槽的一侧向里，时刻保持玻璃片间的压力。 ⑵根据表1制备分离胶溶液，加入TEMED后迅速旋转混合物，用1ml移液枪将其注入两块玻璃板之间的间隙中（灌制红色板的上边缘）。用枪在聚丙烯酰胺溶液上小心的覆盖一层异丙醇。将凝胶垂直放于室温下。（丙烯酰胺有神经毒性，故操作时应注意不要吸入其粉末，实验时应戴手套，剩余的聚丙烯酰胺溶液不要乱扔，待聚合后再处理） ⑶待聚合后（40min），倒掉覆盖层，用去离子水清洗凝胶顶部，尽可能倒掉凝胶上的液体，用滤纸吸干水分。 ⑷按表1配置浓缩胶，加完TEMED后迅速旋转混合，注满玻璃板间隙，插入梳子（写有1.5mm 的一侧向里，先插入一侧，在从一侧向另一侧压着插入，以排除气泡）将胶垂直放置于室温下。约30min聚合完成，拔出梳子（平行拔出），用去离子水冲洗胶孔，再用滤纸吸干水。取出玻璃板，取下橡胶条。 表1分离胶与浓缩胶配制
聚丙烯酰胺使用方法
聚丙烯酰胺的使用方法 1.溶解方法使用前先将固体颗粒溶解成1‰---5‰浓度 的水溶液,以便迅速发挥效力.在加药时,应采取渐次性 家药方式,慢慢的投如水中,便之均匀的在水中分散,溶 解. 2.溶解液的添加通常是添加约0.5‰---1‰的水溶液,但在悬浊液的高浓度和高 粘度的场合,建议将水溶液进一步,稀释成为0.1‰,则将容易混合而发挥充分的效 果. 3.阳离子较阴离子分子量偏低因而粘度也较阴离子弱,故阳离子,非离子配比浓度标准要比 阴离子略高.(视情况而定,同样可以依据水浓度适当调整浓度浊度高,浓度低.浊度低可以以 适当增加浓度).建议浓度为5‰--1%. 注意事项: 1.配制聚丙烯酰胺水溶液时,应在搪瓷,镀锌,铝制或塑料桶内 进行,不可在铁容器内配制和贮存. 2.溶解时,应注意将产品均匀的慢慢地加入带搅拌和加 热措施的溶解器中,应避免结固,溶液在适宜温度下配 制,并应避免长时间过剧的机械剪切.建议搅拌器 60—200转/min,否则会导致聚合物降解,影响使用效果. 3.聚丙烯酰胺水溶液应做到现用现配,当溶解液长时间放置,其 性能将会视水质的情况而逐渐降低. 4.在对悬浊液添家絮凝剂水溶液之后,如果长时间激烈地进行搅拌的话,将会破 坏已经形成的絮凝物. 聚丙烯酰胺的应用领域配比浓度及用量资料来源：会议论文 应用领域用途聚合物类型.规格用量及配比浓度 熔炉炼铝.硫酸铝循环水，生产过程中去杂质阴离子1000万千分之五每吨用3－5克盐水澄清去除钙与镁阴离子800－1200万千分之一每吨用1－2克膨润土生产增加膨润的粘度阴离子1500－1800万千分之三每吨用2－3克混凝土减水剂阴离子500－800万 1.2%配每吨用1.2kg
聚丙烯酰胺凝胶电泳原理及方法
聚丙烯酰胺凝胶电泳原理及方法 发布时间：11-06-01 来源：点击量：10032 字段选择：大中小聚丙烯酰胺凝胶电泳原理及方法 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。 聚丙烯酰胺凝胶有以下优点： ①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。 ②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。一般说来，含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶，机械性能适用于分离分子量范围不1万至100 万物质，1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采用含丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶则难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增加时可以减少双含丙烯酰胺，以改进凝胶的机械性能。 ③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。 ④丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。合成聚丙
的总克数称凝胶浓度，常用T%表达；凝胶溶液中交联剂占单体和交联体总量的百分数称为交联度，常用C%表示，可用下式计算： 公式 a：丙烯酰胺克数；b：甲撑双丙烯酰胺克数；m：缓冲液体积（毫升）凝胶浓度过高时，凝胶硬而脆，容易破碎；凝胶浓度太低时，凝胶稀软，不易操作。 交联度过高，胶不透明并缺乏弹性；交联度过低，凝胶呈糊状。聚丙烯酰胺凝胶具有较高的粘度，它不防止对流减低扩散的能力，而且因为它具有三度空间网状结构，某分子通过这种网孔的能力将取决于凝胶孔隙和分离物质颗粒的大小和形状，这是凝胶的分子筛作用。由于这种分子筛作用，这里的凝胶并不仅是单纯的支持物，因此，在电泳过程中除了注意电泳的基本原理以外，还必须注意与凝胶本身有关的各种性质（网孔的大小和形状等）。可通过下式计算来选择适当的凝胶网孔。 公式 式中：P为网孔平均直径，C为多聚体浓度，d为该多聚体分子直径（若不是卷曲的分子应为5A），K为常数，K值取决于涨胶的几何构型，假如多聚体的链是以近似于直角交联的，则约为1.5根据此式，我们可以通过多聚体浓度C近似地计算出网孔直径，例如已知多聚体浓度为5%，其网孔平均直径应为： 公式
聚丙烯酰胺化学品使用说明书
聚丙烯酰胺化学品使用说明书 产品名称:聚丙烯酰胺 产品用途:废水处理用絮凝剂 一、化学品 化学品商品名:聚丙烯酰胺或PAM 英文名:Polyacrylamide (PAM) 二、成分、组成信息 化学品名称:聚丙烯酰胺 相对分子量: 900万 离子性:阳离子 化学类别: 螯合剂型聚合物 粘度:(1.0%SOL)950mPa·S 外观与性状: 白色粒状固体，稀释后呈无色液体,无臭，水分(0.1%SOL):10%以下。pH值:6.0--7.0 三、危险性概述 危险性类别:无 侵入途径:无 健康危害:无资料 急性中毒:无 慢性影响:未发现。 环境危害:无 燃爆危险:本品易燃。 四、急救措施 皮肤接触:脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。 眼睛接触:提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。 食入:通过动物实验证明此产品食入后不会中毒 五、消防措施 危部分险特性:用水灭火时，颗粒遇水后变滑，避免人员滑倒摔伤
有害燃烧产物:无。 灭火方法:无火灾危险。 六、泄漏应急处理 应急处理:颗粒遇水后变滑，避免人员滑倒摔伤 七、操作处置与储存 操作注意事项:无特别要求 储存注意事项:储存于阴凉、通风的库房。 八、接触控制/个体防护 个人注意事项:无特别要求 工程控制:提供安全淋浴和洗眼设备。 眼睛防护:戴化学安全防护眼镜。 身体防护:无特别要求。 手防护:用大量水冲洗洗 其它防护: 九、理化特性 颜色:白色粒状 气味:无味 十、稳定性和反应活性 稳定性:稳定 禁配物:产生放热反应的氧化物。 避免接触的条件: 聚合危害:不聚合 分解产物:热的腐烂物可能产生，氢化合物气体，氮氧化物，碳氧化合物等。十一、毒理学资料 急性毒性:无毒性 刺激性: 十二、生态学资料 生态毒性:无 生物降解性: 非生物降解性:
高弹性聚丙烯酰胺水凝胶的制备及拉伸性能研究
第36卷第1期2017年3月 中南民族大学学报（自然科学版） Journal of South-Central University for Nationalities( Nat. Sci. Edition) Yol.36 No.1 Mar.2017 高弹性聚丙烯酰胺水凝胶的制备及拉伸性能研究 肖新才,张瑞连，熊小翠，胡蓉蓉，马文婷 (中南民族大学药学院，武汉430074) 摘要为了提高水凝胶的弹性性能，采用微凝胶法制备了高弹性的聚丙烯酰胺(PAAM)水凝胶.先采用沉降聚 合法制备了 PAAM微凝胶，再以此充当交联剂代替传统的化学交联剂和引发剂，制备了高机械性能的PAAM水凝 胶.同时探讨了丙烯酰胺浓度、凝胶成型温度、微凝胶与水的体积比对PAAM水凝胶弹性性能的影响.结果表明：随着丙烯酰胺的浓度的增大，凝胶柱的弹性模量变大;随微凝胶成型温度越高，形成的水凝胶的弹性模量越小;当 微凝胶与水的体积比为1:1时，水凝胶的弹性模量较大，增加或减少微凝胶的量均会使得水凝胶的弹性模量 变小. 关键词聚丙烯酰胺;微凝胶;高弹性;微凝胶法;弹性模量 中图分类号TQ460.1;R944.1 文献标识码A文章编号16724321(2017)014)047-05 Preparation and Tensile Property of Highly Elastic Polyacrylamide Hydrogel Xiao Xincai, Zhang Ruilian, Xiong Xiaocui, Hu Rongrong, Ma Wenting (School of pharmaceutial Sciences, South-Central University for Nationalities, Wuhan 430074, China) Abstract To improve the elasticity of the hydrogels, microgel method was applied to prepare highly elastic polyacrylamide (PAAM) hydrogel. PAAM microgels were prepared by sedimentation polymerization, then highly elastic PAAM hydrogel was prepared using the microgels as the crosslinker instead of the traditional chemical crosslinker and initiator. The effects of acrylamide concentration，polymerization temperature，volume ratio of the microgels and water on the elasticity of the hydrogels were investigated. The results indicated that the elasticity modulus of PAAM hydrogel increased with the increase of acrylamide concentration and decreased with the polymerization temperature. The modulus was largest when the volume ratio of the microgels and water was 1 : 1，which would decrease regardless of decreasing or increasing the microgels content. Keywords polyacrylamide；microgel；high elasticity；microgel method；elasticity modulus 聚丙烯酰胺（PAAM)具有典型的三维网络结构、无毒副作用、性能稳定，被广泛应用于生物水凝胶的制备[1]，如蛋白质分离[2’3]、药物释放[4’5]、土壤 改良剂[6]等.由于PAAM水凝胶的机械强度较低，使其在强度要求相对较高的领域，如人工肌肉骨髂、记忆开关元件、机械传动装置及生物传感器等的应用受到很大的限制.传统的提高水凝胶机械强度的方法有增加交联密度、降低凝胶溶胀度、引人纤维状增强剂、制备互穿网络（IPN)等[7]，但操作较繁琐，或对水凝胶的机械性能的改善能力有限，或改变了 PAAM其本身的性能，使PAAM水凝胶应用受限. 传统的凝胶以I，亚甲基双丙烯酰胺为化学交联剂来制备.近年来，诸多研究者按此模式，通过 构建聚合物的交联来改变水凝胶的机械强度，如构 建拓扑结构[8]、双网络结构[9_11]、复合结构[12]，及加 人纳米凝胶作为交联剂制备水凝胶[m5]等.利用活 收稿日期20164)9-14 作者简介肖新才（1971-)，男，教授，博士，研究方向:药用高分子材料，E-mail:xcxiao@mail,https://www.360docs.net/doc/9f11470802.html, 基金项目国家自然科学基金资助项目（21276287,20976202);中央高校基金科研业务费专项（CZW15017);中南民族大 学学术团队资助项目（XTZ 15013)
PAM与PAC用量与说明书
PAM与PAC使用说明书 一、混凝剂的作用及常用药剂 1.混凝剂的作用 废水中常常含有自然沉降法不能去除的细微悬浮物和胶体污染物，对于这类废水必须首先投加化学药剂来破坏胶体和细微悬浮物在水中形成的稳定分散系，使其聚集为具有明显沉淀性能的絮凝体，然后用重力法予以分离，这一过程包括凝聚和絮凝两步骤，二者总称为混凝。其中，凝聚是指使胶体、超胶体脱稳，凝聚为微絮体的过程，它包括胶体的脱稳，又包括颗粒的迁移和聚集；而絮凝则是微絮颗粒通过吸附、卷带和桥连而更大的絮凝体的过程，它只包括颗粒的迁移和聚集。 2.混凝剂的混凝机理 投加的药剂有无机多价金属盐类和有机高分子聚合物两大类。前者主要由铝盐和鉄盐，后者主要有聚丙烯酰胺及其变形物。我们常用的无机盐有聚合氯化铝和硫酸亚铁，有机类的是聚丙烯酰胺（PAM）。 铝、铁盐混凝剂的混凝机理十分复杂，简单地说，是它们一系列离解和水解产物对水中胶体及细微悬浮物所具有的压缩双电层、电性中和以及吸附桥连和卷带网捕作用的综合结果。 铝、铁盐混凝剂在水解过程中发挥以下三种作用：Al3+或Fe3+和低聚合度高电荷的多核络离子的脱稳凝聚作用；高聚合度络离子的桥连絮凝作用以及以氢氧化物沉淀形态存在时的网捕絮凝作用，以上三种作用有时可能同时存在，但在不同条件下可能以某一种为主。通常在PH偏低、胶体及细微悬浮物浓度高、投加量尚不足的反应初期，脱稳凝聚是主要形式；在PH
较高、污染物浓度低、投加量充分时，网捕作用是主要形式；而在pH和投加量适中时，桥连和絮凝成为主要形式。 聚合氯化铝（简称PAC），又称为碱式氯化铝或羟基氯化铝。通过它或它的水解产物使污水或污泥中的胶体快速形成沉淀，便于分离的大颗粒沉淀物。PAC的分子式为[AL2(OH)nCl6-n]m，其中，n为1-5的任何整数，m为聚合度，即链节的的数目，m的值不大于10。PAC的混凝效果与其中的OH 和AL的比值（n值大小）有密切关系，通常用碱化度表示，碱化度 B=[OH]/(3[AL])X100% 。B要求在40-60%，适宜的PH范围5-9 。 鉄盐混凝剂的水解过程及机理与铝盐类似。 聚丙烯酰胺（简称 PAM），俗称絮凝剂或凝聚剂，属于混凝剂。PAM的平均分子量从数千到数千万以上，沿键状分子有若干官能基团，在水中可大部分电离，属于高分子电解质。根据它可离解基团的特性分为阴离子型聚丙烯酰胺、阳离子型聚丙烯酰胺、和非离子型聚丙烯酰胺。PAM外观为白色粉末，易溶于水，几乎不溶于苯，乙醚、酯类、丙酮等一般有机溶剂，聚丙烯酰胺水溶液几近是透明的粘稠液体，属非危险品，无毒、无腐蚀性，固体PAM有吸湿性，吸湿性随离子度的增加而增加，PAM热稳定性好；加热到100℃稳定性良好，但在150℃以上时易分解产中氮气，在分子间发生亚胺化作用而不溶于水，密度：1.302mg/l（23℃）。玻璃化温度153℃，PAM 在应力作用下表现出非牛顿流动性。 阳离子、阴离子的PAM分别适用于带阴、阳电荷的污水或污泥。生化法产生的活性污泥带有阴电荷，应该使用阳离子型的。阴离子PAM用于带有阳电荷污水或污泥，如处理钢铁厂、电镀厂、冶金、洗煤及除尘等污水
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 该技术首先在1967年由Shapiro建立，1969年由Weber和Osborn进一步完善。 一、原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用垂直板状不连续系统。所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。 1．样品的浓缩效应 在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，pH8.3)、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，pH6.8)、分离胶缓冲液(Tris—HCl，pH8.8)，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝6.0，pK a=9.7)只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子。这些离子在电泳时都向正极移动。C1—速度最快(先导离子)，其次为蛋白质，Gly 负离子最慢(尾随离子)。由于C1—很快超过蛋白离子，因此在其后面形成一个电导较低、电位梯度较陡的区域，该区电位梯度最高，这是在电泳过程中形成的电位梯度的不连续性，导致蛋白质和Gly 离子加快移动，结
化学与物理交联协同增韧聚丙烯酰胺水凝胶的制备和性质表征
化学与物理交联协同增韧聚丙烯酰胺水凝胶的制备和性质表征水凝胶作为一种亲水的凝胶具有相当高的含水量,其含水量与生物组织相似(70%)甚至可达到更高。水凝胶具有良好的生物相容性,且表现出良好的柔韧性,刺激响应能力,以上性能为水凝胶在生物领域,组织工程方向的应用奠定了基础。然而,由于水凝胶含水量较高,其机械性能相对较差,严重的限制了水凝胶的应用。传统的化学交联水凝胶通过永久,不可逆的共价键相互连接的聚合物链组成,这 通常使水凝胶较脆,透明性差,网络结构断裂后不能自愈。 但是,化学交联网络结构易于调整,可以改变最终材料的机械性能。因此,传统的化学交联网络结构不可以被忽略,要巧妙加以改善就可以得到强韧水凝胶。在本文中,我们将物理交联与化学交联两种交联方式都引入到水凝胶网络体系中,制备强韧的,具有抗疲劳性能和快速自回复性能的水凝胶。在第一部分实验中, 我们将疏水缔合这种交联方式引入到水凝胶网络中作为物理交联中心,同时以 N,N′-亚甲基双丙烯酰胺作为化学交联剂,通过自由基聚合方式与亲水主链聚丙烯酰胺相链接,作为化学交联中心。 在杂化水凝胶网络体系中,化学交联为水凝胶网络提供了一个刚性骨架,来 支撑着整个水凝胶网络基质,疏水缔合作为物理交联中心能够通过胶束变形和甲基丙烯酸月桂酯(LMA)链的可逆解缠来有效的耗散能量,使得这种杂化水凝胶在 压缩应变为95%时,压缩强度可以达到8 MPa。此外,在连续压缩循环测试中,杂化水凝胶展现出了时间依赖性,快速自恢复性,抗疲劳性质。在第二部分实验中,我们期望得到强韧,具有拉伸性能的水凝胶,因此,我们改进了物理交联中心,并调 节了化学交联点的密度,从而得到了具有高拉伸强度,高断裂伸长率的具有快速 自恢复性和抗疲劳性质的由甲基丙烯酸月桂酯-聚丙烯酸丁酯微球(LMA-PBA)混 合胶束诱导的强韧杂化水凝胶(LMA-PBA+MBA gel)。在这个杂化水凝胶网络体系中,化学交联仍然作为一个刚性骨架支撑着整个水凝胶网络基质,LMA-PBA混合 胶束作为物理交联点,可通过胶束形变,LMA链的可逆解缠,PBA软粒子变形以及LMA-PBA间的可逆交联来耗散大量的能量,从而将有效的能量耗散机制引入到水 凝胶网络体系中,使得这种杂化水凝胶具有相当好的拉伸性能,最大拉伸应力可 达到1.4 MPa,断裂伸长率可达到2500%,同时具有快速自恢复性,抗疲劳性。 这两种通过物理交联与化学交联协同作用的,具有快速自恢复性,抗疲劳性
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 实验报告
一、实验目的 1.学习SDS-PAGE分离蛋白质的原理； 2.掌握垂直板电泳的操作方法。 二、实验原理 1、电泳： (1)定义：是指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。 (2)影响电泳效果的因素： ①带电颗粒的大小和形状：颗粒越大，电泳速度越慢，反之越快； ②颗粒的电荷数：电荷越少，电泳速度越慢，反之越快； ③溶液的粘度：粘度越大，电泳速度越慢，反之越快； ④溶液的pH值：影响被分离物质的解离度，离等电点越近，电泳速度越慢，反之越快； ⑤电场强度：电场强度越小，电泳速度越慢，反之越快； ⑥离子强度：离子强度越大，电泳速度越慢，反之越快； ⑦电渗现象：电场中，液体相对于固体支持物的相对移动； ⑧支持物筛孔大小：孔径小，电泳速度慢，反之则快。 2、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） (1)定义 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：是以聚丙烯胺凝胶作为载体的一种区带电泳。 SDS-PAGE:是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠） (2)SDS的作用 SDS是一种阴离子去垢剂，可与蛋白质结合，形成SDS-蛋白质复合物。 由于SDS带有大量负电荷，好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖,即消除了蛋白质分子之间电荷差异。 因此在电泳时，蛋白质分子的迁移速度则主要取决于蛋白质分子大小 (3) SDS-PAGE分类： ?SDS-PAGE按照缓冲液pH值和凝胶孔径差异分为连续系统和不连续系统两大类： 连续系统：电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。 不连续系统：缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度均不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳 (4)聚丙烯胺凝胶的生成： 聚丙烯胺凝胶由丙烯酰胺单体（Acr）和N，N’-甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂作用下聚合而成。在具有自由基时，Acr和Bis就会聚合。 引发产生自由基的方法有两种：
聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析
聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析 聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。 PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。当向蛋白质溶液中加入足够量SDS 和巯基乙醇，SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为18A，这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小由于蛋白质－SDS复合物在单位长度上带有相等的电荷，所以它们以相等的迁移速度从浓缩胶进入分离胶，进入分离胶后，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，小分子的蛋白质可以容易的通过凝胶孔径，阻力小，迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离。因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋
非离子聚丙烯酰胺的使用方法
非离子聚丙烯酰胺使用方法： 1、使用时，配成0.1%浓度的水溶液，以使用中性不含盐类杂物的水为宜。 2、溶解时，将非离子聚丙烯酰胺均匀撒入搅拌的水中，搅速控制在100~300rpm。适当加温（< 60°C），可加速溶解。 3、调整被处理液的PH值，使非离子聚丙烯酰胺充分发挥作用（通过试验选择最佳PH值和非离子聚丙烯酰胺的用量。） 4、加入非离子聚丙烯酰胺溶液时，应加速与被处理液的混合，出现絮凝物后，减慢搅速，以利絮凝物增长和加速沉降。 非离子聚丙烯酰胺应用领域： 1、作为絮凝剂，主要应用于工业上的固液分离过程，包括沉降、澄清、浓缩及污泥脱水等工艺，应用的主要行业有：城市污水处理、造纸工业、食品加工业、石化工业、冶金工业、选矿工业、染色工业和制糖工业及各种工业的废水处理。 2、在造纸工业中可用作纸张干强剂、助留剂、助滤剂，能极大的提高成纸质量，节约成本，提高造纸厂的生产能力。可直接与无机盐离子、纤维以及其它有机高分子发生静电桥梁作用以达到增强纸张的物理强度，减少纤维或填料的流失，加快滤水，起增强、助留、助滤作用，还可以用于白水的处理，同时，在脱墨过程中能起明显的絮凝效果。
3、纤维泥浆(石棉-水泥制品)中可使成型的石棉-水泥制品排水性得到改善，使石棉板坯料的强度提高；在绝缘板中, 可提高添加剂和纤维的结合能力。 4、在采矿、选煤行业中可作矿山废水、洗煤废水的澄清剂。 5、可用于染色废水、皮革废水、含油废水的处理, 使之除浊、脱色, 以达到排放标准。 6、在磷酸提纯中, 有助于湿法磷酸工艺中石膏的分离。 7、用于以江河水源的自来水厂的水处理絮凝剂。 有关非离子聚丙烯酰胺的分子量复配情况 1．使用前要通过实验确定其最佳用量，用量过低，不起作用，用量过高，反而起反作用。这是因为超过一定浓度，PAM不但不起絮凝作用，反而起分散稳定作用。 2．非离子型PAM作为高选择性的絮凝剂，用于使用膨润土的低固
聚丙烯酰胺用法与用量
聚丙烯酰胺的使用方法: 1、聚丙烯酰胺干粉或聚丙烯酰胺乳液通常不能直接使用，需要按一定的比例用水进行稀释溶解，待其彻底溶解之后再使用。 2、溶解聚丙烯酰胺的水用干净的自来水，不能是污水。常温的水即可，一般不需要加温。 3、称量好需要溶解的聚丙烯酰胺干粉或乳液,溶解比例通常为0.1-0.3% ,也就是1吨水加1-3公斤聚丙烯酰胺干粉或乳液。 4、使用现场需要有溶解罐或溶解池，且需要有搅拌装置，搅拌速度为60- 200转/min, 溶解罐、搅拌装置不能为铁质，铁离子会造成产品降解。 5、搅拌时间为40-60分钟，溶解好的水溶液为透明无色的粘稠液体。 6、先将溶解罐或池加入一定量的水,待水淹没底端的搅拌叶时,开启搅拌,在继续注水的同时,将称量好的药剂缓慢均匀添加到水中。注意:加药速度过快，会造成药剂结块结团。
聚丙烯酰胺用量和污水中杂质浓度、出产工艺、污水性质、PH值等情况决定用量的，没有固定的用量，不异行业也只是可以参考利用何种型号的产物。下面我推荐聚丙烯酰胺用量的示例仅供供参考： 一、阳离子聚丙烯酰胺用量 1、用于污泥脱水时，配比浓度建议为0.2%，溶解搅拌时间建议为50分钟。 2、上机前，需进行小试确定比例。建议取100ml污水样，将其溶液用注射器每次打入0.5ml。不断搅拌观察，查看污水絮凝效果、絮凝速度、上清液状况、沉淀效果等，确定投加量。 3、在造纸厂、化工污水、污水处理厂家、洗煤厂应用时，固体干粉用量为10-20g/每吨污水。 二、阴离子聚丙烯酰胺用量 1、用于污水处理絮凝沉淀时，建议浓度配比为0.1%。 2、建议搅拌时间为40分钟，转速控制在40-60转/分钟。
DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
Aptamer的稳定性考察—聚丙烯酰胺凝胶电泳 Aptamer识别肿瘤细胞 若选择4℃识别，则需要提前控温离心机，且样品在上样检测前宜放置于冰中；37℃就不用控温了。Aptamer浓度：荧光标记的是50μM，没有标记的是100μM DNA提取-----注意实验中戴好橡胶手套，穿好实验服，以防苯酚粘到皮肤上。 1. 取7.3μl aptamer（100μM）于1460μl小鼠血清（无需过滤）中，在37℃细胞培养箱中孵育； 2. 于不同时间点（6h, 5h, 4h, 3h, 2h, 1h, 1min）取200μl该小鼠血清到新的EP管中，加入200μl（等体积）的苯酚-氯仿（取苯酚-氯仿之前先将苯酚-氯仿混匀），混匀，管中溶液变浑浊； 3. 用15000转/分离心10分钟，管中出现3层：上清、白色变性蛋白层、苯酚层； 4. 取上清到新的EP管中。在原EP管（变性蛋白层和苯酚层）中加入200μlTE溶液，混匀（该步进一步提取残留的DNA）； 5. 用15000转/分离心10分钟，收集上清； 6. 重复4、5步直到上清澄清； 7. 在上清中加入等体积的氯仿（用于去除苯酚），混匀，用15000转/分离心10分钟，取上清到新的EP管中； 8. 加入等体积乙醚（用于去除氯仿），混匀后静置10分钟，弃上层乙醚（乙醚比水轻，在上层）； 9. 重复步骤8，敞开管盖15分钟，待乙醚挥发； 10. 加入1/10体积的3M NaAc、2倍体积的无水乙醇，放置于-20℃冰箱中30分钟（DNA沉淀）； 11. 用16500转/分（转速不宜再高，EP管容易破裂！）离心30分钟； 12. 将管中溶液吸出，转移至新的EP管中。原管中保留约30μl溶液，打开管盖，待管中溶液蒸发；（我通常将EP管敞开，封上封口膜，再扎7、8个孔，放在通风橱中过夜。）（管底看不到沉淀，因为DNA含量太低。） 13. 在管中加入16μL 1*TE溶液； 14. 进行电泳分析前，将样品在95℃水浴中加热10分钟（小心管盖冲开或进水），在冰上骤冷（使DNA成单链），上样或保存在-20℃冰箱中。 聚丙烯酰胺凝胶电泳------注意实验中戴好手套！！！ 1.准备：清洗干净玻璃板、凉干！装好电泳的玻璃板（用1.5mm的厚玻璃板）；有凹槽的一面向内！！压紧，避 免漏液！