细胞培养技术练习题

细胞培养技术练习题

细胞培养技术练习题

选择题1.接种工具灭菌常采用(A) A.灼烧 B.高压 C.过滤 D.熏蒸

2.具有促进愈伤组织生产的物质是(B ) A.维生素PP B.维生素B1 C.维生素B6 D.甘氨酸

3.微量元素母液的配制浓度( B )A.10倍 B.100倍 C.1mg/ml D.10mg/ml

4.配制10倍大量元素母液,所需硝酸铵(C )mg A.9000 B.3700 C.16500 D.4400

5.配制100倍有机物母液时,所需维生素B1( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.1

6.下列哪种不是组织培养常用的维生素(A)A.维生素B2 B.维生素B1 C.维生素B6 D.维生素C

7.下列哪种激素不属于生长素类( C )A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA

8.下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂(A)A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C.硫酸锌 D.硫酸铜填空:1、组织块的分离方法有机械分散法、剪切分离法、消化分离法。

2、目前,较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA消化液。

3、接种培养瓶的细胞数量一般为5×105-1×106/ml 。

4、培养细胞的污染一般包括微生物污染、细胞交叉污染、化学物质的污染。

5、细胞冻存时DMSO常用的浓度为10%的浓度。

1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种,分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。

2. 贴壁生长的体外培养动物细胞,按形态来分,大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型,最常见的为前两种。

3. 细胞在体外生长时具有一些特点,其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。

4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。

名词解释1、原代培养:原代培养也叫初代培养,是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。

2、组织块培养法:组织块培养是将组织剪切成小块后,接种于培养瓶进行培养。组织块培养法是常用的,简便易行的以及成功率较高的原代培养方法。

3、消化培养法:消化培养法是采用组织消化分散法将细胞间质包括基质、纤维等妨碍细胞生长的物质去除,使细胞分散,形成悬液,从而易于外界吸收养分和排出代谢产物.

4、细胞生长曲线:细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。以培养时间为横轴,细胞浓度为纵轴作图,即得生长曲线。

5、传代:细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代。

问答题:1、如何得到单细胞无性系?在细胞培养中,常由分散性较好的愈伤组织或悬浮培养物来制备单细胞,也可以用纤维素酶和果胶酸酶从植物不同组织直接制备单细胞。由分离的单细胞经看护培养法、微室培养法或平板培养法,即可得到单细胞无性系

2、单细胞培养有哪些方法?各有何含义及特点单细胞培养:看护培养;微室培养;平板培养

(1)看护培养法是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞,并使其生长和增殖的方法。

特点:①简便易行。②效果好,易于成功。③不能在显微镜下直接观察细胞生长过程。

(2)微室培养:即将细胞培养在很少量的培养基中。

特点:在培养过程中可连续进行显微观察,将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。

(3)平板培养法是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合,平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

特点:可以定点观察;分离单细胞系比液体浅层培养容易;培养细胞气体交换不畅。

3、说明每一种单细胞培养方法的要点?

(1)看护培养:①小三角瓶中加1cm厚的固体培养基,灭菌②将1cm大小的愈伤组织块放在培养基中央。③在愈伤组织块上放1cm2无菌滤纸片,培养室中过夜④将单个细胞接种在滤纸上面⑤培养室培养f1个月可见愈伤组织小块,2-3个月得到单细胞无性繁殖系。(2)微室培养:①载玻片和盖玻片火焰上消毒②在载玻片上涂一圈四环素眼膏,放一小段毛细管。滴一小滴细胞悬浮液于凹穴中③盖上盖玻片,使之与悬浮液接触(3)平板培养:①制备单细胞悬浮液:用酶法或机械震荡法将组织器官游离出单细胞。经过滤后的滤液即是。②悬浮液密度的调制:a通过显微镜,观察记数板凹槽中的悬浮液细胞数,并计算其密度。b一般平板培养要求细胞密度为1′103-1′105。③培养基的配制:1)1.4%琼脂培养基;

2)0.7%琼脂的条件培养基。④平板制作:按1:2或1:4混合,制成3mm厚的平板。⑤培养:26°C暗培养21d,计算细胞团数,计算植板率

4、什么是细胞悬浮培养?简述成批培养和连续培养的的特点?细胞悬浮培养:是使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。(1)成批培养的特点:①细胞生长在固定体积的培养基上,直至养分耗尽②用搅拌的方法使细胞团和细胞均匀分布③细胞数目呈现慢—快—慢—停止生长的变化d必须更换新鲜培养基才能进行下一批培养(2)连续培养的特点:①由于不断加入新鲜培养基,保证了养分的充分供应,不会出现悬浮培养物发生营养不足的现象②可在培养期间使细胞保持在对数生长期中。细胞增殖速度快③适于大规模工业化生产

动物细胞培养技术思考题

《动物细胞培养技术》复习思考题 动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高?你认为该如何保证器皿中无杂质?如果器皿中有杂质,会对细胞培养产生什么样的影响? 答:①离体细胞对各种毒物都很敏感,若所用器材清洗效果未达到要求,各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅,121.3℃,20~30分钟,在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿,避免造成污染。③ 叙述超净工作台的工作原理? 答:超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程,在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化,净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走,使工作区构成无菌环境。 正压过滤器为何会除菌? 答:正压式过滤器没有内置灭菌灯,正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜,这层膜可以将细菌阻挡在膜上,过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 各种细胞培养用液的配制需要很精确吗?如果不精确,会导致什么后果?请举例说明。你认为精确配制各种溶液? 答: 配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化? 答:配制后的液体应呈桃红色,PH值为7.4左右。苯酚红的变色域:1.2(橙)~3.0(黄),6.5(棕色)~8.0(紫色),若为黄色,则液体呈酸性,不利于细胞的生存。 用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制 答:Ca+2、Mg+2是细胞膜的重要组分,具有使细胞凝聚的作用。因此,用于分离细胞的消化液宜用无Ca+2、Mg+2离子的D-Hanks液或PBS液。 L-谷氨酰胺在营养液中有何作用? 答:L-谷氨酰胺是细胞的能量来源;是一种必须氨基酸,是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体,也是蛋白质合成分解的调节物;是细胞内氨的清除剂,氨对一些细胞有毒性。 HEPES溶液的作用机理? 答:它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动 平衡盐溶液的组成与基本作用?小牛血清在细胞培养中有哪些作用? 答:①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用:a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物,以及某些低分子营养物质; b提供结合蛋白,识别维生素、脂类、金属离子,并与有毒金属和热源物质结合,起解毒作用;c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源; d起酸碱度缓冲液作用; e提供蛋白酶抑制剂,细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受损伤。 营养液制备后为什么要小剂量分装? 答:避免营养液被污染后,全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后,下一次的实验就不能用,会引起污染,影响实验,若冷冻营养液,则营养液的营养成分会有所损失,影响细胞的生长 10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法? 答:用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素,弃去2ml,用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素,配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。

我国大规模细胞培养生物反应器综述

我国大规模细胞培养生物反应器综述 文章比较全面的介绍了我国目前生物反应器的现状,各种品种发酵的特点.提出了反应器的设计要以代 谢流分析为核心,要从系统生物学的角度出发. 1、发展大规模细胞培养及其生物反应器 借助于细胞培养进行各种产品生产已是我国生物技术产业化的重要组成部分,涉及医药、化工、轻工、食品、农业、海洋、环保等行业。培养的细胞不仅只是微生物,用于生物技术产品生产的动物细胞、植物细胞和藻类细胞大规模培养已引起了大家重视,显露出令人鼓舞的前景。而且随着生物技术的发展,在人类今后发现的一切具有生物活性的物质都可以借助于细胞培养方法得到。它们可以是细胞代谢产物、生物转化、酶或某基因表达产物。 此外,随着人类社会经济发展,如果没有基于科技进步的大力开发,能源和资源将难以支撑人类社会进一步发展的目标,人类社会的发展必须将基于碳氢化合物的经济转变为基于碳水化合物的经济。这种能源结构和资源结构的转变将直接关系到我国经济的可持续发展,社会的稳定、和国家安全。解决上述问题的最有效方法就是发展工业微生物,只有工业微生物才能将来源于太阳能的可再生资源碳水化合物转变为现代社会所需要的化工原料和能源。 显而易见,要进行这些产品的生产,无不涉及到细胞代谢与大规模培养研究。为了提高生产水平,除了获得高生产能力的细胞株外,生物反应器是重要的核心技术,必需提供有利于生物过程研究的装置技术和高效节能的生产装置。但是在生物技术产业化平台中,细胞大规模培养技术等中下游技术是我国最薄弱的技术环节之一,以我国生物医药等领域产业化来说,与先进国家的差距是全面的。滞后的一个重要原因之一就是缺乏相配套工艺的工业化放大技术研究和相应的装备技术支撑。例如以哺乳类细胞培养技术来看,西方国家基因工程抗体的开发已经进入大规模细胞反应阶段,细胞工程研究规模已经达到1000L以上,基因工程抗体的生产反应系统最大规模达到20000L以上。相形之下,我国多数药物开发单位的细胞反应规模仍停留在2-30L 规模,100L的培养技术还不稳定,长期以来都是照抄照搬国外的技术和进口国外设备。国内只能生产一些低档装置, 仅靠科研成果模仿和基础科学的跟随。 与其他各行业的装备制造业一样,生物反应器为生物技术产业再生产和扩大再生产提供共性技术和关键技术,它的发展水平也反映了国家在科学技术、工艺设计、材料、加工制造等方面的综合配套能力。装备制造业和商品化的迫切性可以归纳为如下几点: l 每年有大量的从摇瓶到不同大小的实验室生物反应器进行生物技术的实验室研究或中试放大的项目,这些项目有的已购买设备,但需要维修,有的则需新添有关装置。 l 每年有相当数量的生物技术工程项目投入,需要大量的用于生产的生物反应器,传统生物技术的生物反应器一般体积较大(几十M3到上百M3),而现代生物技术所需的反应器装置体积较小,但技术要求高。 l 随着不同产品过程优化与放大技术研究的进展,迫切需要新设计原理的生物反应器发挥作用。由此,必需有不断更新技术的生物反应装置推向市场,或者对现有生物反应器生产装置进行新技术改造,这也是包括制药、食品、轻工在内的传统产业现代生物技术改造的主要内容之一。 l 随着生物技术的发展,需要性能更高的生物反应器,例如哺乳类动物细胞大规模培养是当前高附加值的糖基化活性蛋白医药产品的发展趋势,如何开发适应动物细胞特殊需要的生物反应器并商品化就成为迫切需要

生物技术概论试题

生技28、查找阅读有关生物技术的英文文献并翻译成中文一、名词解释 Plasmid 目的基因 单克隆抗体技术 细胞融合 基因库 问答题:

1.疾病基因治疗有哪四大策略,肿瘤的基因治疗主要有哪两种策略? 2.从cDNA文库和基因文库中获得目的基因有什么不同? 3.如何从一片嫩叶经组织培养培育出众多的完整植株? 4.开展干细胞研究对人类有何积极的意义? 5.为什么说干细胞的应用将具有广泛的前景? 6.人类基因组计划任务是什么?将解决什么问题?它对医学的发展有什么影响? 7.生物法处理污水或废水有哪几种常见方法?污水治理的意义何在? 8.空气污染治理与水污染治理有什么关系,常见的方法有哪几种 9.什么事生物修复技术,方法,举例说明其应用价值 10. 生物技术对经济社会发展的影响,试举例说明。

第二部分综合练习 一、单项选择题 4. 下面哪个不是生物技术包括的基本内容? 细胞工程基因工程遗传工程酶工程 1、现代生物技术是一项高新技术,它具有高新技术的“六高”特征,下面哪个不属于“六高”? A、高效益 B、高风险 C、高势能 D、高效率 2、生物技术是以下面哪个为核心? A、基因工程 B、细胞工程 C、酶工程 D、发酵工程 3、分子克隆主要是指 A、DNA的大量复制 B、DNA的大量转录 C、DNA的大量剪切 D、RNA的大量反转录 4、多数限制性核酸内切酶切割后的DNA末端为 A、平头末端 B、3突出末端 C、5突出末端 D、粘性末端 5、设计聚合酶链反应的引物时,应考虑引物与模板的 A、5…端特定序列互补 B、5?端任章序列互补 C、3…端特定序列互补 D、3?端任意序列互补 6、用于鉴定转化于细胞是否含重组DNA的最常用方法是 A、抗药性选择 B、分于杂交选择 C、RNA反转录 D、免疫学方法 7、下列哪些是发酵技术独有的特点 A、多个反应不能在发酵设备中一次完成 B、条件温和、能耗少、设备简单 C、不容易产生高分子化合物 D、发酵过程中不需要防止杂菌污染 8、不是工业生产上常用的微生物为 A、担子菌 B、细菌 C、酵母菌 D、霉菌 9、机械搅拌发酵罐与通风搅拌发酵罐相比,下列不属于前者特点的是 A、发酵罐内没有搅拌装置,结构简单 B、发酵罐内有搅拌装置,混合速度快 C、耗能少,利于生产 D、发酵罐内没有搅拌装置,结构复杂 10、从微生物细胞制备酶的流程一般包括破碎细胞、溶剂抽提、离心、过滤、干燥这几 个步骤。

2019-2020学年高中生物人教版选修3练习:2.2.1动物细胞培养和核移植技术

2.2动物细胞工程 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 基础巩固 W i 下列不属于动物细胞培养必需条件的是() A. 无菌、无毒的环境 B. 适宜的温度和pH C. O 2等气体环境 D. 适宜的光照条件 答案 D 下列关于动物细胞培养的叙述,不正确的是() A. 动物细胞培养技术的原理是细胞的全能性 B. 传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞 C. 癌细胞在培养瓶中不会出现接触抑制现象 D. 动物细胞培养一般需要使用 CO 2培养箱 解析动物细胞培养的原理是细胞增殖。 答案A ? 3在动物细胞培养过程中 ,使用胰蛋白酶的目的是() A. 使动物组织分散为单个细胞 B. 去掉细胞壁,使其成为原生质体 C. 去掉细胞膜,暴露岀原生质体便于细胞融合 D. 促进蛋白质水解为多肽 解析在进行动物细胞培养前 ,先用胰蛋白酶使组织块中的细胞相互分散开 ,以增加细胞与培养液的接触面积 便于培养。 4下列有关核移植的说法,错误的是( ) A. 用核移植得到的动物称为克隆动物 B. 核移植的受体细胞最好是受精卵 C. 核移植可以充分发挥优良种畜的繁殖潜力 D. 核移植得到的克隆动物属于无性生殖 解析核移植的受体细胞应该是 M n 中期的卵母细胞,相对受精卵来说 ,M n 中期的卵母细胞细胞质所含的物 ? 5用于动物体细胞核移植的供体细胞一般选用() A. 受精卵

B. 传代10代以内的细胞 C. 传代10?50代以内的细胞 D. 处于减数第二次分裂中期的次级卵母细胞 解析培养的动物细胞一般当传代至10~50代时,部分细胞核型可能会发生变化,而传代10代以内的细胞一般 能保持正常的二倍体核型。因此,在体细胞核移植中,为了保证供体细胞正常的遗传基础,通常采用传代10代以内的细胞作为供体细胞。 W6在进行核移植时,通常将整个体细胞而不是细胞核注入去核卵母细胞中,下列有关叙述错误的是() A. 体细胞太小因而去除细胞核较困难 B. 细胞质中遗传物质少因而对遗传的影响很小 C. 直接将体细胞注入卵母细胞中简化了操作程序 D. 体细胞的核离开了原来的细胞质将不能存活 解析体细胞太小因而去除细胞核较困难,因此可将整个体细胞注入去核卵母细胞中,A项正确;DNA主要位于细胞核中,细胞质中遗传物质少,因而对遗传的影响很小,B项正确;将整个体细胞注入去核卵母细胞中,简化了操作程序,C项正确;体细胞的核离开了原来的细胞质,注入去核的卵母细胞依然能存活,D项错误。 ? 7下列关于动物细胞培养过程的叙述,错误的是() A. 制作细胞悬液时可以使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 B. 悬液中分散的细胞很快贴附在细胞壁上,细胞贴壁体现了细胞的适应性 C. 细胞进行有丝分裂,数量增加到相互接触时可以使用胃蛋白酶处理后分瓶培养 D. 传代10代以内的细胞一般保持细胞正常的二倍体核型 解析将相互接触的动物细胞分散开需使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。答案C j 8甲羊的去核卵细胞与乙羊体细胞的细胞核组装”成一个新的细胞,该细胞多次分裂后植入丙羊的子宫 内发育,产下羊羔的毛色和性别分别与哪只羊保持一致(决定毛色的基因位于细胞核中)?() A. 甲、丙 B.甲、甲 C.乙、乙 D.丙、甲 解析决定毛色和性别的基因都位于细胞核中,因而产下的羊羔的毛色和性别与提供细胞核的乙羊相同。答案C 1—9某研究小组进行药物试验时,以动物肝细胞为材料,测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有 甲、乙两种,甲细胞为肝肿瘤细胞、乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题。 (1) 将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养,培养液及其他培养条件均相同。一段时间后,会观察到甲细胞数量比乙细胞数量______________ 。 (2) 在动物细胞培养时,通常在合成培养基中加入适量血清,其原因 是______________________________________________ 。细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行,CO2的作用是___________________________ 。 (3) 在两种细胞生长过程中,当乙细胞铺满瓶壁时,其生长 ____________ 。药物试验需要大量细胞,两种细胞频 繁传代,甲细胞比乙细胞传代的次数更 ____________ 。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液,需用______ 处理。 (4) 为了防止细胞培养过程中细菌的污染,可向培养液中加入适量的_____________ 。 (5) 已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关,要试验

常用的五种动物细胞培养方式

?一、半连续式培养 1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。采用机械搅拌式生物反应器系 统,悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中,每间隔一段时间,从中取出部分培养物,再用新的培养液补足到原有体积,使反应器内的总体积不变。这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基,让其生长至一定的密度,在细胞生长至最大密度之前,用新鲜的培养基稀释培养物,每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4,以维持细胞的指数生长状态,随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中,每隔一定时间,定期取出部分培养物,或是条件培养基,或是连同细胞、载体一起取出,然后补加细胞或载体,或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子,继续培养,从而可维持反复培养,而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量,经过几次的稀释、换液培养过程,细胞密度常常会提高。 2.半连续式特点: ·培养物的体积逐步增加; ·可进行多次收获; ·细胞可持续指数生长,并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平,培养过程可延续到很长时间。该操作方式的优点是操作简便,生产效率高,可长时期进行生产,反复收获产品,可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。 二、连续式培养 1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式,采用机械搅拌式生物反应器系统。该模 式是将细胞接种与一定体积的培养基后,为了防止衰退期的出现,在细胞达最大密度之前,以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基;同时,含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出,以保持培养体积的恒定。理论上讲,该过程可无限延续下去。

(完整word版)细胞工程 期末考试复习题目

细胞工程期末考试复习题目 细胞工程填空:20个ⅹ分=10分选择:10个ⅹ2分=20分名词:10个ⅹ6分=30分简答:5个ⅹ6分=30分论述: 1个ⅹ10分=10分第一章绪论1、细胞工程的定义及特点?细胞工程:是指主要以细胞为对象,应用生命科学的理论,借助工程学原理与技术,有目的地利用或改造生物遗传性状,以获得特定的细胞,组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。细胞工程的特点:前沿性:现代生物技术的热点争议性:新技术给伦理道德带来的冲击综合性:多学科交叉应用性:工程类课程,重在产品与技术第二章细胞培养的设施与基本条件:1、什么是细胞及组织培养?组织工程:习惯上繁殖所有的体外培养,即器官培养,组织培养和细胞培养的总称。其本

意是指从活的机体中去取出器官、组织或细胞,模拟机体内生理条件,在体外建立无菌、室温和一定营养条件等,使之生长和生存,并维持其结构和功能能的技术称为组织培养。细胞培养:将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞,做成细胞悬液,再培养于固体基质上,成单层细胞生长,活在培养液中呈悬浮转肽培养的技术称为细胞培养。2、了解细胞培养实验室的基本规划及相关注意事项?实验室规划:⑴准备室:培养用具清洗、消毒和做实验准备的场所,一般建在通风和光线充足的地方。⑵缓冲间:保护操作室的无菌环境,避免空气对流。 ⑶操作间:要求无菌。最好设在阴面,防止室温过高;天花板高度不超过2米,保证紫外线有效杀菌效应;门用拉门,避免空气流动。室内天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角,要镶瓷砖或涂油漆,便于清洗与消毒,不易在墙角推挤灰尘。3、细胞培养的设备有

哪些?有何基本作用⑴超净工作台①最好安装在无尘室内,最好在无菌间,避免过多灰尘使滤器阻塞,降低净化效果,缩短使用寿命。②新安装的或长期未使用的工作台,工作前必须对工作台和其周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作,在采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。③每次使用时,应先用75%酒精擦洗台面,并进行30~50min紫外线灭菌灯处理净化工作区内累积的微生物,在关闭紫外灯后,应启动送风机使之转运2min后在进行培养操作。④净化工作区内不应存放不必要的物品,以保持洁净气流不受干扰⑤高效过滤器3年更换一次。请专业人员操作,以保持密封良好。定期将粗过滤器中的过布拆下清洗。⑥每次使用净化台要即使清楚工作台面上的物品,并用酒精擦洗台面使之始终保持洁净。⑵CO2培养箱:①一定浓度的CO2生长,尤其是原代培养和单

人教版高中生物必修三 动物细胞培养和核移植技术练习题测试题

自我小测 1.下列关于动物细胞培养的叙述,不正确的是() A.动物细胞培养前要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散开来 B.通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养 C.细胞的癌变通常发生在原代培养向传代培养的过渡过程中 D.传代培养的细胞在传至10~50代左右时,部分细胞的核型可能发生变化 2.在动物体细胞克隆技术中,不一定涉及() A.卵母细胞的培养 B.细胞核移植 C.早期胚胎培养 D.导入外源基因 3.下列关于动物细胞培养液的叙述,不正确的是() A.为了防止培养过程中出现细菌污染,可以在培养液中添加抗生素 B.细胞培养液中必须有糖、氨基酸等化合物以及动物血清等天然成分 C.含95%空气中再混入5%的CO2主要作用是维持培养液的pH D.培养液应该定期更换,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害 4.下列关于动物细胞培养的过程的叙述,错误的是() A.制作细胞悬液时可以使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 B.悬液中分散的细胞很快贴附在细胞壁上,细胞贴壁体现了细胞的适应性 C.细胞进行有丝分裂,数量增加到相互接触时可以使用胃蛋白酶处理后分瓶培养 D.10代以内的细胞保持细胞正常的二倍体核型 5.在动物细胞体外培养时,通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。下图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果,从该图中不能获得的信息是() A.正常细胞与癌细胞的增殖速率相同 B.有无血清对正常细胞培养的影响不同 C.培养基中补充血清有助于正常细胞的培养 D.培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大

6.甲羊的去核卵细胞与乙羊体细胞的细胞核“组装”成一个新的细胞,该细胞多次分裂后植入丙羊的子宫内发育,产下羊羔的毛色和性别分别与哪只羊保持一致(决定毛色的基因位于细胞核中)?() A.甲、丙B.甲、甲C.乙、乙D.丙、甲 7.若在克隆牛的培育过程中,将牛M(基因型为Aa)的体细胞核移入牛N(基因型为aa)的去核卵母细胞中,然后在雌牛L(基因型为AA)体内发育成熟。产出的犊牛基因型为() A.AA B.Aa C.aa D.Aaa 8.以下细胞工程中所用技术与原理不相符的是() A.纤维素酶、果胶酶处理植物细胞——酶的专一性 B.动物细胞培养——细胞的全能性 C.植物体细胞杂交——细胞膜的流动性 D.植物组织培养——植物细胞的全能性 9.动物细胞培养的特点是() ①细胞贴壁②有丝分裂③分散生长④接触抑制⑤减数分裂 A.①②④B.②④⑤C.①③④D.③④⑤ 10.乙马的卵细胞核被甲马的体细胞核置换后,这个卵细胞经过多次分裂发育成重组胚胎,再植入丙马的子宫内发育,结果产下一只小马。下列叙述正确的是()A.直接在体外对甲马的体细胞进行诱导也能培养出胚胎来 B.小马的性状完全与甲马相同 C.此项技术可用于保护濒危物种 D.该过程可以很好地证明动物细胞的全能性 11.动物细胞培养过程的顺序是() ①原代培养②传代培养③用胰蛋白酶处理组织,形成分散的细胞悬液 A.①②③B.①③②C.②①③D.③①② 12.某研究小组进行药物实验时,以动物肝细胞为材料,测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种,甲细胞为肝肿瘤细胞,乙细胞为正常肝细胞。 请回答下列有关动物细胞培养的问题。 (1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养,培养液及其他培养条件均相同。一段时间后,观察到甲细胞数量比乙细胞数量________。 (2)在动物细胞培养时,通常在合成培养基中加入适量血清,其原因是______________。 细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行,CO2的作用是______________。 (3)在两种细胞生长过程中,当乙细胞铺满瓶壁时,其生长________。药物实验需要大量细胞,两种细胞频繁传代,甲细胞比乙细胞可以传代的次数更________。若用动物的肝

常用的五种动物细胞培养方式

一、半连续式培养 1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。采用机械搅拌式生物反应器系 统,悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中,每间隔一段时间,从中取出部分培养物,再用新的培养液补足到原有体积,使反应器内的总体积不变。这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基,让其生长至一定的密度,在细胞生长至最大密度之前,用新鲜的培养基稀释培养物,每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4,以维持细胞的指数生长状态,随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中,每隔一定时间,定期取出部分培养物,或是条件培养基,或是连同细胞、载体一起取出,然后补加细胞或载体,或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子,继续培养,从而可维持反复培养,而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量,经过几次的稀释、换液培养过程,细胞密度常常会提高。 2.半连续式特点: ·培养物的体积逐步增加; ·可进行多次收获; ·细胞可持续指数生长,并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平,培养过程可延续到很长时间。该操作方式的优点是操作简便,生产效率高,可长时期进行生产,反复收获产品,可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。 二、连续式培养 1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式,采用机械搅拌式生物反应器系统。该模 式是将细胞接种与一定体积的培养基后,为了防止衰退期的出现,在细胞达最大密度之前,以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基;同时,含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出,以保持培养体积的恒定。理论上讲,该过程可无限延续下去。

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细胞工程学名词解释及问答题 一、名词解释 1、细胞工程(cytotechnology或cell engineering):它是以生物细胞、组织或器官为研究对象,运用工程学原理,按照预定目标,改变生物性状,生产生物产品,为人类生产或生活服务的科学。 或应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法,按照人们的设计蓝图,在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株,并可以产生新的物种或品系。 2、看护培养(nursing culture):用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂增殖的方法。 3、细胞杂交(cell hybridization):指用人工方法把不同类型的两个或两个以上细胞合并成一个细胞的技术。 4、外植体〔explant〕:从植物体上分离下来的用于离体培养的植物组织、器官等材料。 5、人工种子:是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。 6、花药培养(anther culture):将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下,放在无菌的条件下,使其进一步生长、发育成单倍体细胞或植株的技术。(指离体培养花粉和花药,使小孢子改变原有的配子体发育途径,转向孢子体发育途径,形成花粉胚或花粉愈伤组织,最后形成花粉植株,并从中鉴定出单倍体植株,使之二倍化的细胞工程技术。 7、条件培养基(conditioned medium):培养过程中,有些细胞可能会分泌活性物质到培养液中,这种培养过某种细胞以后,含有细胞分泌物的培养液称为条件培养基。 8、植物脱毒:由人工用物理、化学和生物方法将植物体组织器官病原体消除,以使这些组织器官生成完整植株。 9、原代细胞系:指从机体中取出而直接培养的细胞,从一代到十代的细胞培养是原代培养,形成的整个系统叫原代细胞系。 10、体细胞杂交:指在人工控制条件下,不经过有性过程,两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。 11、胚胎培养:是指胚或具胚器官(如子房、胚珠等)在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。 12、互补选择:是指利用两个亲本具有不同的遗传和生理特征,在特定培养条件下,具有发生互补作用的杂种细胞才能生长的选择方法。 13、悬浮培养(suspension culture):是细胞培养的基本方法,是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 14、植板率:植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。 15、玻璃化冻存:是指液体转变为非晶态(玻璃态)的固化过程。 16、接触抑制(contact inhibition):当细胞在基质上分裂增殖,逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时,细胞就停止增殖,即细胞密度不再增加,这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。 17、非对称融合(aymmetric fusion):利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合。 18、对称融合(symmetric fusion):两个完整的细胞原生质体融合。 19、胞质体:不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 20、体细胞胚:离体培养下没有经过受精过程,但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物(不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞)。 21、永久细胞系:大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖,当超过有限世代后,在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系。

细胞工程—动物细胞培养细节复习题

动物细胞原代培养- 技术细节 1、原代培养:从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老,死亡等生命现象。 2、传代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。 3、无菌操作基本技术: 实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow)以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 %ethanol 擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。 每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。 实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。 实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面中央无菌区域,勿在边缘非无菌区域操作。 小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol 之产生,小心毒性药品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐针头之伤害等。 定期检测下列项目:①C02钢瓶的C02压力②C02培养箱的C02浓度、温度、 及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换)。③无菌操作台内之airflow 压力,定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜,预滤网(300小时/预滤网,3000小时/HEPA)。 4、培养基 液体培养基贮存于4C冰箱,避免光照,实验进行前放在37 C水槽中温热。液体培养基(加血清)存放期为六个月,期间谷氨酰胺可能会分解,若细胞生长不佳,可以再添加适量谷氨酰胺。 粉末培养基配制(注意):细胞培养基通常须添加10 % 血清、pH 为- 。粉末 培养基及NaHCO:粉末应分别溶解后才混合,然后用CO2气体调整pH,而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH),因为氯离子对细胞生长可能有影响,且贮存时培养基的pH 易发生改变。纯水配制。以或mm 无菌过滤膜过滤灭菌。标示培养基种类、日期、瓶号等,贮存于4C。须作生长试验与污染测试。 5、抗生素 . 细胞库之细胞培养基不加抗生素 培养自ATCC引进之细胞株,培养基中不加抗生素。培养自其它实验室引进之细胞株,须添加抗生素,待token freeze 通过污染测试后,大量培养时则不加抗生素。. 寄送活细胞时,须将培养液充满整个培养瓶时,则须添加抗生素(青霉素100 units/ml + 链霉素100 ug/ml)。 . 若要检测支原体,则培养基内不可添加庆大霉素,因庆大霉素会抑制支原体生长。

细胞培养技术和培养箱习题

第十章细胞培养技术和培养箱 首页习题习题参考答案 习题名词解释选择题简答题 一、名词解释 1. 细胞培养 2. 细胞培养传代 3. 原代细胞培养 4. 无限细胞系 5. 细胞融合 6. 细胞治疗 7. 培养箱 8. 缓冲室 9.手套操作箱 二、选择题 【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案(最佳答案)。 1.体外培养细胞的分类(贴附型或悬浮型)是根据() A.细胞为上皮样或成纤维细胞样 B.能否贴附在支持物上生长 C.呈密度抑止特性 D.肿瘤细胞 E.细胞可多次传代 2. 下述细胞传代的概念中,正确的是() A.当细胞增殖至一定密度后,分离出一部分细胞接种到其他容器的过程 B.从体内取出细胞接种到培养容器,细胞继续增殖的过程 C.培养细胞期间更新培养液的过程

D.当细胞增殖至一定密度后,分离出一部分细胞接种到其他容器并及时更新培养液使细胞增殖继续的过程 E.细胞倍增的过程 3. 细胞生长维持液,需添加的血清量的百分比为() A.1%~2% B.2%~5% C.5%~10% D.10%~20% E.20%~25% 4.培养细胞传代时,通常是() A.根据不同细胞采取不同的方法 B.常用二乙烯四乙酸二钠(EDTA) C.EDTA与胰蛋白酶按不同比例混合使用 D.悬浮生长的细胞直接添加胰蛋白酶” E.贴壁生长的细胞添加新鲜培养液 5. 二氧化碳培养箱结构的核心部分,主要是 A.湿度调节装置 B.湿润的含水托盘 C.温度调节器 D.CO2调节器、温度调节器和湿度调节装置 E.气体保护器装置 6. 二氧化碳培养箱调节CO2浓度范围为() A.0%~20% B.20%~40% C.10%~20% D.20%~30% E.30%~40% 7. 厌氧培养箱通过自动连续循环换气系统保持箱内的厌氧状态,其换气过程是() A.①气体排空→②净化→③气体排空→④N2净化→⑤气压平衡 B.①气体排空→②N2净化→③气压平衡

最新细胞工程练习题(附答案)

细胞工程练习题 一.选择题 1. 在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中,下列哪一项条件是不需 要的 A.消毒灭菌B.适宜的温度C.充足的光照D.适宜的养料和激素 2. 下列关于植物组织培养的叙述中,错误 ..的是 A.培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B.培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C.离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织 D.同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同 3.我国科学工作者曾成功地将分别属于两个科的植物----烟草和菠菜杂交成功,从而获得一种新型的烟草品种。在此过程中,下列操作不.是必需的是 A.杂交前要除去两种细胞的细胞壁 B.原生质体融合前要先脱分化 C.原生质体融合后,要选出烟草----菠菜融合细胞加以培养 D.要诱导愈伤组织进行再分化 4.下图是“白菜—甘蓝”杂种植株的培育过程。下列说法正确的是 A.所得到的“白菜—甘蓝”植株不能结籽 B.愈伤组织是已高度分化的细胞 C.上述过程中包含着有丝分裂、细胞分化和减数分裂等过程 D.诱导原生质体融合时可用聚乙二醇 5.下面是将四倍体兰花的叶片通过植物组织培养形成植株的示意图,相关叙述中正确的是 A.②阶段会发生减数分裂过程B.①阶段需生长素而③阶段需细胞分裂素C.此过程体现植物细胞具有全能性D.此兰花的花药离体培养所得植株为二倍体6.下图为将胡萝卜的离体组织在一定条件下培育形成试管苗的过程示意图。有关叙述正确的是 A. 利用此过程获得的试管苗可能为杂合子 B.①②过程中都会发生细胞的增殖和分化 C. 多倍体植株的培育需经过如图所示过程 D.此过程依据的生物学原理是细胞膜具有流动性 7. 各项培育植物新品种的过程中,不经过愈伤组织阶段的是 A.通过植物体细胞杂交培育白菜——甘蓝杂种植株 B.通过多倍体育种培育无子西瓜 C.通过单倍体育种培育优质小麦 D.通过基因工程培育转基因抗虫水稻 8. 作物新品种的过程中,常利用植物组织培养技术。下列叙述正确的是 A.培育转基因的外植体得到的新个体属于基因突变个体 ③ ② ① 四倍体兰花叶片愈伤组织胚状体植株

细胞培养用生物反应器

细胞培养用生物反应器 细胞培养用生物反应器 2010年12月22日 1、发展大规模细胞培养及其生物反应器 借助于细胞培养进行各种产品生产已是我国生物技术产业化的重要组成部分,涉及医药、化工、轻工、食品、农业、海洋、环保等行业。培养的细胞不仅只是微生物,用于生物技术产品生产的动物细胞、植物细胞和藻类细胞大规模培养已引起了大家重视,显露出令人鼓舞的前景。而且随着生物技术的发展,在人类今后发现的一切具有生物活性的物质都可以借助于细胞培养方法得到。它们可以是细胞代谢产物、生物转化、酶或某基因表达产物。 此外,随着人类社会经济发展,如果没有基于科技进步的大力开发,能源和资源将难以支撑人类社会进一步发展的目标,人类社会的发展必须将基于碳氢化合物的经济转变为基于碳水化合物的经济。这种能源结构和资源结构的转变将直接关系到我国经济的可持续发展,社会的稳定、和国家安全。解决上述问题的最有效方法就是发展工业微生物,只有工业微生物才能将来源于太阳能的可再生资源碳水化合物转变为现代社会所需要的化工原料和能源。 显而易见,要进行这些产品的生产,无不涉及到细胞代谢与大规模培养研究。为了提高生产水平,除了获得高生产能力的细胞株外,生物反应器是重要的核心技术,必需提供有利于生物过程研究的装置技术和高效节能的生产装置。但是在生物技术产业化平台中,细胞大规模培养技术等中下游技术是我国最薄弱的技术环节之一,以我国生物医药等领域产业化来说,与先进国家的差距是全面的。滞后的一个重要原因之一就是缺乏相配套工艺的工业化放大技术研究和相应的装备技术支撑。例如以哺乳类细胞培养技术来看,西方国家基因工程抗体的开发已经进入大规模细胞反应阶段,细胞工程研究规模已经达到1000L以上,基因工程抗体的生产反应系统最大规模达到20000L以上。相形之下,我国多数药物开发单位的细胞反应规模仍停留在2-30L规模,100L 的培养技术还不稳定,长期以来都是照抄照搬国外的技术和进口国外设备。国内只能生产一些低档装置, 仅靠科研成果模仿和基础科学的跟随。 与其他各行业的装备制造业一样,生物反应器为生物技术产业再生产和扩大再生产提供共性技术和关键技术,它的发展水平也反映了国家在科学

动物细胞培养生物反应器的操作模式

动物细胞培养生物反应器的操作模式 米力 第四军医大学细胞工程中心,国家863西安细胞工程基地 陕西西安,710032 动物细胞培养工艺的选择首先考虑的重要一点是该产品所涉及的生物反应器系统。选择反应器系统也就是选择产品的操作模式,操作模式选择将决定该产品工艺的产物浓度、杂质量和形式、底物转换度、添加形式、产量和成本,工艺可靠性等。与许多传统的化学工艺不同,动物细胞反应器设备占整个工艺资金总投入的主要部分(>50%),也就是说动物细胞培养工艺的选择主要部分是生物反应器系统的选择。选择反应器系统及培养工艺时,必须对工艺的整体性进行全面考虑,主要包括以下几个方面:细胞株及生长形式、产物表达量和稳定性,培养基质及代谢物,产物分离和纯化难度等。 动物细胞大规模培养的生物反应器操作模式,一般分为分批式操作(batch)、流加式操作(Fed-batch)、半连续式操作(semi-continuous)、连续式操作(continuous)和灌流式操作(perfusion)五种操作模式。 1. 批式操作(batch culture) 批式操作是动物细胞规模培养发展进程中较早期采用的方式,也是其它操作方式的基础。该方式采用机械搅拌式生物反应器,将细胞扩大培养后,一次性转入生物反应器内进行培养,在培养过程中其体积不变,不添加其它成分,待细胞增长和产物形成积累到适当的时间,一次性收获细胞、产物、培养基的操作方式。 该方式的特点:(1) 操作简单。培养周期短,染菌和细胞突变的风险小。反应器系统属于封闭式,培养过程中与外部环境没有物料交换,除了控制温度、pH值和通气外,不进行其他任何控制,因此操作简单,

细胞培养考试题目

细胞培养特性:分为贴壁性(上皮细胞型、成纤维细胞型)和悬浮型(白细胞、癌肿细胞)体外培养细胞生长特点:贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。 原代培养(原代细胞):取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前称为原代培养或原代细胞。 传代培养:细胞持续生长繁殖一段时间,到达一定浓度之后,就应当将细胞分离成两部分(或更多)至新的培养器皿,并补充更新培养液。 细胞系:原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。 有限细胞系:一般正常细胞系的寿命只能维持一段时间期限。 无限细胞系:传代中极少的后代发生转化,通过“危机期”,获得不死性而具有持久或无限增值能力,这种永生化细胞即为无限细胞系。 细胞株:通过选择法或克隆形成法,从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株。 克隆:在动物细胞培养中从细胞群体中分离出一个细胞开始,其在体外无性繁殖成新的基因型相同的细胞群体,这种纯化的细胞群称为细胞株,他们中的每个细胞的遗传特征及生物特性极为相似,常用的细胞克隆技术有有限稀释法和平皿克隆分离法。 杂交瘤技术:主要由免疫动物、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养、单克隆抗体的制备与鉴定等一系列实验组成的实验系统,核心是细胞融合。 杂交瘤:由产生抗体的肿瘤细胞与抗原-刺激的正常浆细胞融合而形成的细胞,这种细胞产生的抗体称为单克隆抗体。基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤细胞的特性,可长期传代培养,又可在液氮中保存的细胞。把这些细胞单克隆化,用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。 细胞杂交:通过人工培养和诱导将不同种生物或同种生物不同类型的两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。 杂交技术过程:①免疫动物及细胞培养:用特定抗原免疫纯系动物获得预定抗体B淋巴细胞,利用细胞融合技术可使短寿命抗体形成细胞与能永久生长的同种骨髓瘤细胞系融合,获得既有分泌抗体能力,又有无限繁殖能力的细胞②筛选杂交瘤细胞(在具有筛选作用的培养基上培养)③克隆化培养④单克隆抗体的大量制备与鉴定(动物体内诱生法和体外培养法)⑤进一步分离和纯化单克隆抗体,鉴定单克隆抗体类型及亚类,测定抗体亲和力以及相应抗原的分子量等. 显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距,其计算公式是σ=λ/NA 式中σ为最小分辨距离;λ为光线的波长;NA为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大,照明光线波长越短,则σ值越小,分辨率就越高。要提高分辨率,即减小σ值,提高分辨率可采取以下措施: (1)降低波长λ值,使用短波长光源。(2)增大介质n值以提高NA值(NA=nsin(u)/2)。(3)增大孔径角u值以提高NA值。(4)增加明暗反差。 体外培养过程:原代培养或初代培养、传代期、衰老期。 每代细胞生长过程:滞留期(潜伏期)、指数生长期、平台期 培养细胞生长条件:①营养需要:基本营养物质(氨基酸、维生素、碳水化合物及无机离子)和促生长因子等物质。②生存环境:温度(35—37)、气相(CO2和O2)、pH值()及渗透压③无污染及无毒:防止交叉污染、有害物质污染。 细胞冻存及复苏: 基本原则:慢冻快融,以最大限度的保存细胞活力。 原理:细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,

专题2-细胞工程练习题(含答案解析)

第I卷(选择题) 1.利用植物组织培养技术将胡萝卜韧皮部细胞培养成完整植株,培育的过程中不需要 A. 导入外源基因 B.离体状态 C. 具有完整细胞核的细胞 D.一定的营养物质和激素 2.通过植物体细胞杂交可以获得“烟草—菠菜”——一种新型的烟草品种。下图为培育杂种植株过程的示意图,下列操作不是必需的是( ) A.在融合之前除去两种细胞的细胞壁 B.原生质体先进行脱分化处理再融合 C.原生质体融合后筛选杂种细胞继续培养 D.诱导杂种细胞形成愈伤组织再分化成植株 3.能克服远缘杂交不亲和技术的是( ) A.组织培养 B.细胞融合 C.动物胚胎移植 D.单倍体育种 4.下列有关现代生物科技的叙述中,错误的是() A.植物体细胞杂交技术克服了不同生物远缘杂交不亲和的障碍 B.动物细胞融合技术开辟了制备单克隆抗体的新途径 C.利用基因工程技术可以使哺乳动物生产人类所需的药品 D.胚胎移植技术的优势是可以充分发挥雄性优良个体的繁殖潜力 5.关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述,错误的是 A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同 B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶 C.给予适宜的条件,有的植物可在愈伤组织的基础上直接发育出花器官 D.细胞培养产生出变异的新植株,为选择有益性状的新作物创造了条件 6.利用生物工程技术能够实现对良种种畜的快速大量繁殖,以下哪项技术不具备此优点? A.基因工程技术 B.细胞核移植技术 C.胚胎分割技术 D.试管动物技术 7.在细胞工程——植物体细胞杂交中,需要将营养细胞的细胞壁除去,通常是采用纤维素酶和果胶酶的酶解破壁法处理。如将去掉了细胞壁的成熟植物细胞置于清水中,细胞将() A.皱缩 B.胀破 C.呈球形 D.保持原状 8.在生物体内,细胞没有表现出全能性而是分化为不同的器官,其原因是 A. 细胞丧失了全能性 B. 不同细胞中遗传信息的执行情况不同 C. 不同的细胞中遗传信息不完全相同 D. 在个体发育的不同时期,细胞内的遗传物质发生了变化 9.下列有关植物组织培养的叙述,正确的是() A.植物组织培养没有体现植物细胞的全能性 B.二倍体植株的花药经植物组织培养后得到稳定遗传的植株 C.用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子 D.植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得

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