草莓组织培养与脱毒技术

浅谈植物组织培养中的污染问题与防治措施

浅谈植物组织培养中的污染问题与防治措施李建忠（广西职业技术学院农业技术工程系02应生班）摘要：植物组织培养过程中的每一个环节，都应该谨慎操作，否则随时都有可能造成污染从而影响到实验的成功与否和大规模生产的顺利进行。污染通常是由于培养容器，操作器械和培养基的不干净或消毒灭菌不彻底；接种环境和培养环境不清洁；操作人员操作不慎以及培养材料消毒不过关或携带内生菌等因素引起的。本文将针对以上几方面介绍相关的防治措施，来减少污染问题的发生。关键词：组织培养，污染，防治措施，消毒灭菌。植物组织培养过程中，污染问题是一个普遍存在的现象。能否很好地解决污染问题，关系到实验的成功与否和大规模生产的顺利进行。所谓污染是指在培养过程中由于外界真菌，细菌或培养材料的内生菌所侵染，而使培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。污染来源主要分为外界污染和内部污染两种。具体原因可分为：①培养容器、操作器械和培养基的不干净和消毒灭菌不彻底； ②接种环境和培养环境不清洁；③操作不谨慎；④外植体消毒不过关；⑤培养材料携带内生菌。针对以上污染源，现将各相关防治措施分别介绍如下： 1．培养容器、操作器械和培养基不干净与消毒灭菌不彻底 1．1培养容器的清洗植物组织培养过程中，用于培养的容器有试管、三角瓶、培养瓶和培养箱等。目前主要以培养瓶的使用为主。对于培养瓶的洗法，根据桂林莱茵应用生物科技有限公司和加好生物工程有限公司的经验，先将瓶内的培养基去掉，然后置于淡洗衣粉水中浸泡一定时间，再在浓洗衣粉水中涮洗。涮洗时要认真，瓶内瓶外都要涮洗到不能遗漏任何一处。最后在流动的自来水下将残留的洗衣粉泡沫冲洗掉。洗后的瓶子应明亮，内壁水膜均一，不挂水珠。将洗干净的瓶子倒放在盘中或筐内，滤干水后，置于干净、明亮、干燥的地方备用。需要注意的是，应将未污染的与污染的分开来洗。先洗未污染的，再洗污染的。并且分开放，以免造成

草莓无毒苗繁育技术

草莓无毒苗繁育技术 1草莓脱毒技术 1.1热处理与茎尖培养脱毒 1.1.1热处理将盆栽小苗2个月后或未经脱毒的试管苗置于恒温箱中,在35～40 ℃条件下变温处理4～5周。白天保持40 ℃处理5h,夜间在35 ℃下处理6h。处理过程中空气湿度不宜过高,一般维持在50%～70%,盆栽苗土壤水分保持在草莓苗生长不萎蔫为宜。 1.1.2茎尖培养(1)材料消毒:将热处理后的匍匐茎剥去外层大叶,用自来水冲洗3~6h后,对材料进行表面消毒。消毒的药品及其使用方法有多种,常用的有两种:①用70%酒精漂洗3~5s,再用0.10%~0.20%次升汞或6%~8%次氯酸钠浸泡2~3min,然后把材料移到超净工作台上;②用70%酒精漂洗3~5s,再用0.10%新洁尔灭浸泡5~10min,然后用1%过氯乙酸浸泡2~5min,然后把材料移到超净工作台上。 (2)接种:材料消毒后,在超净工作台上冲冼3~5次,然后置于双筒解剖镜下,一层层地剥去幼叶和鳞片后,切取0.40~0.50mm,带有2~4个叶原基。将这个生长点用细长的解剖针挑出,转接到培养基中。(3)培养基成分:草莓分化培养基为MS+BA 0.50mg/L+GA 30.10mg/L+IBA 0.50mg/L。(4)培养条件:温度25~30℃,光照强度1500~2000LX,每天光照10h左右。培养20~35d后,即开始分化新芽,新芽不断生长增殖,形成小的芽丛。 1.2花药培养脱毒苗花药培养的目的,是培育源于花药内部花粉粒的单倍体植株,并使单倍体加培,作为育种材料的来源。但经大量实验表明,草莓花药培养所得的植株有95%以上是能开花结果的多倍体,而且生长发育优于母株。同时,经愈伤组织培养出来的花药植株不带病毒。花药培养不仅可快速获得草莓无毒植株,而且可以省去病毒鉴定工作,对基层生产应用实为一举两得的事情。 1.2.1花药培养方法取花药发育期处在单核靠边期、未开放的小花蕾,用与茎尖消毒同样的方法消毒后,在超净工作台上用镊子取下所有花药(不带花丝),接种到装有培养基的三角瓶中。 1.2.2培养基成分花药培养的第一阶段是诱导愈伤组织,培养中加2.4-D或萘乙酸(NAA);第二阶段是愈伤组织形成后转入茎叶分化培养基中,诱导出再生植株。茎、叶分化培养基通常除去生长素,保留细胞分裂素。(1)诱导愈伤组织培养基:GD培养基+2.4-D 1 mg/L。 (2)诱导再生植株培养基:MS培养基+BA 0.50~1 mg/L。有些品种可以用一种

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验李永吉 12101705 12青年农场主班第一部分：培养基母液的配制通过配制母液过程了解植物外植体立体培养所需各种营养成分及激素种类，掌握培养基母液配制的方法。之所以要配制培养基母液，是因为考虑到在配制培养基时使用更方便、操作更简化、用量更准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，所以我们在配制培养基之前将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别量取各种母液即可。实验所需用具器材有：电子天平（检测灵敏度0.0001g ）、pH 计、托盘电子秤（检测灵敏度0.01g ）、冰箱、烧杯（1000mL 、500mL 、250mL 、50mL ）、量筒（2000mL 、1000mL 、100mL 、50mL ）、试剂瓶（1000mL 、250mL 、150mL ）、药匙、玻璃棒实验所需药品试剂有：蒸馏水、1N HCl 、1N NaOH 、95%酒精、各种所需化学药品（分析纯）实验内容： 1、无机大量元素母液的配制（20倍）按培养基配方所需量，将各种化合物称量扩大20倍，用托盘电子秤称取，并用200mL 蒸馏水溶解于250mL 烧杯中，如溶解缓慢，可稍加热。CaCl2单独用100mL 纯水溶解。溶解后将以上溶液倒入容量瓶中定容至1000mL 。倒入试剂瓶中并贴好标签，保存于冰箱冷藏。 MS 无机大量元素母液配制 2、无机微量元素母液配制按培养基配方所需量，将各种化合物称量扩大200倍，用托盘电子秤称取，并用200mL 蒸馏水溶解于250mL 烧杯中，。溶解后将以上溶液倒入容量瓶中定容至500mL 。倒入试剂瓶贴好标签，保存于冰箱。母液名称化合物名称配方规定量（g/L ）贮备液的倍数配制母液称取量/g 母液体积/mL 配一升培养基时取母液量/mL 大量元素 NH 4NO 3 1.65 20 33 1000 50 KNO 3 1.9 38 CaCl 2 0.332 6.64 MgSO 4.7H 2O 0.37 7.4 KH 2PO 4 0.17 3.4

草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究

1 草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究项目总结报

告主持完成单位：商丘市农林科学研究所二0一0年十二月 2 目录一、项目来源……………………………………………………………………1 二、项目实施的意义和依据 (1) （一）品种来源 (1) 1、丰香—草莓 (1) 2、特征特性 (1) 3、脱毒丰香草莓 (2) （二）项目实施的目的..................................................................3 1、总体目标 (3) 2、研究组织培养脱毒快繁，加速示范推广，促进农村经济发展 (3)

（三）项目实施的意义 (3) 1、提高果品产量和质量，增强市场竞争能力 (4) 2、生产无公害果品，促农民致富................................................4 3、发挥增产增收效益潜力，促进产业结构调整 (4) （四）项目实施依据 (4) 1、研究与实施的理论依据.........................................................4 2、“丰香草莓”组织培养技术路线................................................5 3、草莓组织培养的优点............................................................5 三、丰香-草莓的组织培养技术研究 (6) （一）草莓-“丰香”脱毒技术研究…………………………………………… 6 1、研究目的…………………………………………………………………6 2、供试材料…………………………………………………………………6 3、组织培养环境条件……………………………………………………6 4、材料的选择与处理……………………………………………………6 5、生长点的剥取……………………………………………………………7 6、诱导方法…………………………………………………………………7 7、病毒的检测……………………………………………………………8 8、无病毒原种的保存和繁殖………………………………………………8 （二）“草莓-丰香”脱毒与快繁培养基筛选研究………………………………8 1、

植物组织培养脱毒方法综述

植物组织培养脱毒方法综述摘要：植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素，通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。通过查阅国内外研究文献和资料，综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。关键词：组织培养；脱毒；茎尖培养正文：植物病毒分布广、危害大，对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。近年来。随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术，病毒病开始流行，严重影响了中国花卉产业的发展。目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。因此，本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述，以期从中得到启示，进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等，其中由于茎尖培养脱毒效果好，是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径。研究表明，如果将不同的方法结合起来应用效果会更好，通常将茎尖结合热处理来脱毒。 1、茎尖培养脱毒茎尖培养脱毒原理：在染病毒植株体内，病毒分布并不均匀，在生长点病毒含量最低。病毒通过维管束和胞间连丝传播，在分生区内无维管束，病毒扩散慢，加之植物细胞不断分裂增生，所以病毒含量少，在茎尖生长点几乎检测不出病毒，因此切取茎尖愈小愈好，但实际操作中茎尖取太小不易培养成活，过大又不能去毒。 1．1 茎尖培养的方法及注意事项将消毒后的材料放置在20～40倍解剖显微镜下，用解剖刀剥取0．1～1 mm 的茎尖，迅速放入培养基中，如果在空气中暴露时间过长，就会因失水引起茎尖死亡。赵军良等人的研究表明，带有一个叶原基的茎尖，脱毒效果最好，成活率最高[3]。不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。在菊花的茎尖培养中，在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除，在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1～2片叶原基的生长点，生长点大小约在0.3～0.5 mm左右。大于以上尺寸脱毒率将会下降，反之成活率将会下降，迅速将摘出的生长点置于培养基中。就香石竹而言，切掉叶柄后，生长点是在几重叶原基的包围下，要从外到内逐一切掉外层叶原基，当生长点露出时把包括1—2片叶原基在内的生长点切下，迅速移入事先预备好的培养基内，注意生长点的方向及不要把生长点埋在培养基内。在康乃馨的茎尖培养中取带有1—2个叶原基、长0.2-0.3 mm的茎尖接种到培养基上，接种时只须沾取茎尖置于轻轻划破的培养基表面即可。洋葱可用0.5—0.7 mm茎尖培养，能有效地脱除洋葱中的O YDV和GI v病毒。在对白葱的茎尖脱毒研究表明，以带有1片叶原基大小为0.2-0.6 mm的茎尖外植体较为适宜。 1．2 茎尖培养可能出现的问题及防治方法茎尖培养可能出现褐化、玻璃化等现象，这会严重影响植物的成活率，所以

植物组织培养中污染的分析及防控对策

植物组织培养中污染的分析及防控对策生物工程系生物技术及应用1041班邓雨琼学号：200410777 指导老师赵军摘要：预防和控制污染是植物组织培养苗工厂化生产中重要的技术环节。本文从通常污染的防控、内源性污染的防控、继代培养中污染防控、改善培养基的成分等方面，分析了怎样减少组织培养中出现的污染问题。从而达到降低生产成本；减少对植株造成伤害；减少接种源及污染的机率等目的。关键词：植物组织培养；污染；预防控制；对策 The analysis and control of Contaminations in Tissue Culture of Plant Abstract: The technical to avoid and control contaminations was important in tissue culture of plants. In this article, the factor was analysis to reduce rates and damages of the contaminations in plant tissue culture. Different measures (i.e. pretreatment of plant materials, surface sterilization and change the composition of culture medium) were used to control contaminations of endogenesis and exogenous origination. As a result, the costs and damages to the plants were significantly reduced. Key words：Contamination; Elimination and Control; Measures; Plant tissue culture 污染是在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象[1]。它是影响植物组织培养的一个重要因素，它通常会导致培养失败造成很大的损失。植物组培苗的工厂化生产在我国发展速度很快，组织培养技术日趋完善，但在组织培养中通常会出现不同程度的污染，因此在市场竞争中，如何降低成本是提高经济效益的首要问题，组织培养中污染率的增加引起组培苗成本的提高，造成很大的经济损失，并对植株造成伤害，增加接种源及污染机率。因此,组织培养中降低污染率是工厂化生产中不可忽视的技术环节。 1 污染的类型及原因 1．1通常污染主要是外植体消毒不彻底，无菌操作和培养过程中，如：培养基、接种工具、接种室消毒不严格或操作不规范而导致的污染。 1.1.1症状与来源在培养过程中，培养材料附近经常出现黏液或混浊的水迹，并有发酵状泡沫。这大多是细菌性污染，主要是由于使用了未消毒好的工具及操作者呼吸时排出的细菌所引起的，或是操作人员的手接触了材料或器皿边缘所致；有时培养基上还会出现黄、白、黑等不同颜色的霉菌，这是真菌性污染，主要是由于接种室空气污染造成的。 1．2内源性污染内源菌包括真菌和细菌。在植物组织培养中，由于材料内部的内生菌不能被一般的表面消毒方法所清除，随着材料进入培养过程，引起的污染称为内生性污染或内源性污染。许多植物表面或大气中生存的微生物，可经由植物自然的开口或伤口进入植物内部，而有一些兼性腐生菌或绝对寄生菌，可藉由载体或是拥有一些侵入的机制侵入植物内部，使植物感染病原菌。 1.2.1内源性污染的种类从已有报道看，被鉴定的种类主要有：黄单胞菌属、芽孢杆菌属、假单胞菌属、土壤杆菌属、棒状杆菌属、欧文氏菌属等。真菌主要有霉菌。目前在各种农作物及果树等经济作物中发现的内生细菌已超过129种（隶属于54个属）对于一种植物而言，从中分离到的内生真菌和内生细菌通常为数种至十种，有的还到百种之多，其主要出现在热带植物组织中[2]。 1.2.2内源性污染的症状和危害性在初代培养中，表面细菌引起的污染通常在2~3d就能在外植体周围或培养基表面形成明显的如水污状、油污状、气泡或干缩的红、黄、乳白等颜色的菌落。而在外植体培养后3~5d内并未发现细菌污染，以后则相继出现明显的或不明显的细菌菌落，就可能是由内生细菌引起的污染。在某些植物初代培养或前几代的继代培养中存在的污染，并不形成明显的菌落而只在培养基内部形成“丝状物”，“晕状物”，不易被肉眼发现的，如不仔细观察很容易忽视，随着继代培养次数的增加，菌量不断的积累，就会在培养基上表现出来。对于这种情况，我们可以利用背光检查法去观察发现它。

植物组织培养之草莓的脱毒与快速繁殖

一、草莓简介草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物。草莓的外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香。草莓具有极其丰富的营养价值。 1、（丰富的胡萝卜素）草莓中所含的胡萝卜素是合成维生素A的重要物质，具有明目养肝作用; 2、（滋补调理）草莓对胃肠道和贫血均有一定的滋补调理作用; 3、（治病）草莓除可以预防坏血病外，对防治动脉硬化，冠心病也有较好的疗效; 4、（防癌）草莓是鞣酸含量丰富的植物，在体内可吸附和阻止致癌化学物质的吸收，具有防癌作用; （回主页）草莓营养价值高，口味好，深受消费者喜爱，特别是近几年种植面积大幅提高。但由于病毒病的传播感染，导致草莓品种种性退化，产量、品质下降，商品率降低，严重影响了草莓的发展。下面就简单介绍几种草莓易得的病：二、草莓易得的病 1、叶斑病：又称蛇眼病，主要为害叶片、叶柄、果梗、嫩茎和种子。在叶片上形成暗紫色小斑点，扩大后形成近圆形或椭圆形病斑，边缘紫红褐色，中央灰白色，略有细轮，使整个病斑呈蛇眼状，病斑上不形成小黑粒。 2、白粉病：主要为害叶片，也侵害花、果、果梗和叶柄。叶片上卷呈汤匙状。花蕾、花瓣受害呈紫红色，不能开花或开完全花，果实不膨大，呈瘦长形；幼果失去光泽、硬化。近熟期草莓受到为害会失去商品价值。 3、灰霉病：是开花后的主要病害，在花朵、花瓣、果实、叶上均可发病。在膨大时期的果实上，生成褐色斑点，并逐渐扩大，密生灰霉使果实软化、腐败，严重影响产量。 4、根腐病：从下部叶开始，叶缘变成红褐色，逐渐向上凋萎，以至枯死。支柱在中间开始变成黑褐色而腐败，根的中心柱呈红色。 5、黄萎病：该病是土壤病害，主要症状是幼叶畸形，叶变黄、叶表面粗糙无比。随后叶缘变褐色向内凋萎，直到枯死。 6、除此之外，草莓还容易有一些病虫危害，例如：线虫危害：寄生在草莓组织中，危害叶柄、芽、根等，使被害器官变成红色，严重时植株枯死。蛴螬危害：在草莓收获期和八九月份咬食根、茎，使植株枯死。（回主页）根据报道，侵染草莓的病毒多达二十多种。长期大田分株繁殖容易使草莓植株中病毒积累，导致草莓品种退化,，严重影响经济收益。所以利用先进的技术使草莓脱毒，以及后期的快速繁殖已成为草莓业发展的必要环节。下面就来详细介绍草莓的脱毒与快繁。

(植物组织培养)

植物组织培养 1.简述植物组织培养的基本技术。（10分）答：植物的组织培养）技术是指利用细胞全能性和植物生长调节物质对于植物细胞组织的分化和决定具有关键性作用，分离一个或数个体细胞或植物体的一部分在无菌条件下培养的技术。通常我们所说的广义的组织培养，是指通过无菌操作分离植物体的一部分(即外植体)，接种到培养基上，在人工控制的条件进行培养，使其生成完整的植株。 2.简述植物组织培养的主要障碍、发生原因及防治措施。（10分）植物组织培养的主要障碍发生的原因防治措施褐变1)材料的基因型差异 2)材料的生理状态 3)培养基成分 4)其他因子的影响（培养时间的长短等）1.选择适当的外植体和培养条件 2.抗氧化剂和抑制剂的作用 3.其他防止褐变的措施（连续转移或预处理等）玻璃化 1.玻璃化苗的形态学，解剖学特征1.选择适当的外植体 2.改善培养基组成

2.玻璃花苗的生理生化特点 3.外植体 4.培养环境条件 5.培养成分 3.改善培养条件遗传的稳定性自身的遗传特性选择合适的外植体控制好培养条件污染污染的来源（材料的本身，由外界环境侵入）1)供体材料的选择（选择健康，无病毒的植株） 2)培养物的检验 3)合理的扩繁程序 4)严格的无菌操作规程 3.组培苗生长环境有何特点？如何提高其移栽成活率？（10分）组培苗生长环境特点:组培苗水分散失较快，易于萎蔫。吸水能力较弱。所以导致环境有了极大的改变：湿度降低、光照增强、温度升高、温差变大。具以上特点的组培苗，在此环境下，叶片失水较严重，根系吸水能力不足，即吸水量小于蒸腾水量，从而造成植物萎蔫，炼苗失败。另一种情况是，空气温度上升要比基质温度上升快，而根系的吸水能力在一定范围内与温度是成正比的，当气温升高时，加之湿

《植物组织培养》试题及答案教学教材

试卷编号NO：高等函授教育《植物组织培养》试题学号：姓名：一名词解释：（10*2分=20分） 1、植物细胞组织培养 2、细胞全能性 3、脱分化 4、外植体 5、试管苗驯化 6、间接不定芽发生 7、双极性 8、微体嫁接 9、人工种子 10、体细胞无性系变异二填空：（30*1分=30分） 1、目前植物组织培养应用最广泛的方面是和。 2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做，另一种叫做。 3、培养用具的常用灭菌方法有、、。 4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行，而要进行。 5、一般来说，黑暗条件下有利于的增殖，而往往需要一定的光照。 6、植物离体授粉技术通常包括、、三个方面。 7、一般液体培养的继代时间较短，继代一次；而固体培

养继代时间可以长些，继代一次。 8、外植体器官发生的三种途径包括、、。 9、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生植株，胚培养通常产生植株，通常产生三倍体植株。 10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、、。 11、在生长素中，对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性作用，但是对却有抑制作用。 12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时，常用来衡量细胞培养效果。 13、用药剂处理是诱导染色体加倍的传统方法。三计算题（1*10分=10分）某培养基的配方是MS＋BA 2.0mg/L＋NAA 0.5mg/L＋2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素２０倍，微量元素500倍，铁盐100倍，有机物５０倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.1mg/ml。要配制400ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）四简答题（5*5分=25分） 1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？ 2、简述外植体消毒的一般步骤。

植物组织培养脱毒方法综述

植物组织培养脱毒方法综述符国芳,李青 (北京林业大学,北京100083) 摘要:植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素,通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。通过查阅国内外研究文献和资料,综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。关键词:组织培养;脱毒;茎尖培养中图分类号:S432 4+1 文献标识码:A 文章编号:1002-7351(2007)03-0255-04 Summarization on the methods of virus elimination by plant tissue culture FU Guo fang,LI Qing (Beijing Forestry U niversity ,Beij ing 100083,China) Abstract:Plant virus is the factor that inhibits flow er industr y development Plant v irus can be eliminated by shoot tip treatment,shoot t ip and heat treatment,cold treatment,chemical treatment and callus treatment,so o n By searching the research bibliog ra phies home and abr oad,this paper describes the methods to eliminate v irus by shoot t ip culture,heat treatment,chemical treat ment,callus treatment and cold treatment,so on Key words:tissue culture;vir us elimination;shoot tip culture 植物病毒分布广、危害大,对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。近年来,随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术,病毒病开始流行,严重影响了中国花卉产业的发展。目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。因此,本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述,以期从中得到启示,进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等,其中由于茎尖培养脱毒效果好,是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径 [1]。研究表明,如果将不同的方法结合起来应用效果会更好, 通常将茎尖结合热处理来脱毒。1 茎尖培养脱毒茎尖培养脱毒原理:在染病毒植株体内,病毒分布并不均匀,在生长点病毒含量最低。病毒通过维管束和胞间连丝传播,在分生区内无维管束,病毒扩散慢,加之植物细胞不断分裂增生,所以病毒含量少,在茎尖生长点几乎检测不出病毒,因此切取茎尖愈小愈好,但实际操作中茎尖取太小不易培养成活,过大又不能去毒[2]。 1 1 茎尖培养的方法及注意事项将消毒后的材料放置在20~40倍解剖显微镜下,用解剖刀剥取0 1~1mm 的茎尖,迅速放入培养基中,如果在空气中暴露时间过长,就会因失水引起茎尖死亡。赵军良等人的研究表明,带有一个叶原基的茎尖,脱毒效果最好,成活率最高[3]。不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。在菊花的茎尖培养中,在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除,在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1~2片叶原基的生长点,生长点大小约在0 3~0 5mm 左右,大于以上尺寸脱毒率将会下降,反之成活率将会下降,迅速将摘出的生长点置于培养基中 [4]。就香石竹而言,切掉叶柄后, 收稿日期:2007-01-08;修回日期:2007-03-15 作者简介:符国芳(1982-),女(土家族),湖南张家界人,北京林业大学硕士研究生,从事园林植物组织培养研究。第34卷第3期 2007年9月福建林业科技Jour of F ujian Forestry Sci and T ech V ol 34 N o 3Sep ,2007

草莓育苗技术详解.doc

草莓育苗技术详解通常来说，草莓种苗的繁殖方法有匍匐茎繁殖法、分株繁殖法、组织培养法和种子繁殖法等。一、种子繁殖法种子繁殖法是播种草莓的种子，通过一定的栽培管理获得草莓种苗的方法。主要特点：成苗率低，生长速度慢，形状容易产生变异和分离，因此在生产上一般不采用，若家庭盆栽式生长可尝试。

二、组织培养法通过培养草莓匍匐茎顶端的分生组织即茎尖，诱导出幼芽，然后通过幼芽的快速繁殖繁殖出幼苗的方法。主要特点：比常规育苗生长旺盛，成活率高，品质良好。组培育苗繁殖快，一年内，一个分生组织可获得几万至几十万株幼苗，且不占用土地，不受环境的影响，但成本较高，适宜工厂化生产。三、分株繁殖法分株繁殖法，又称根茎繁殖法，俗称分墩法。用于某些不易发生匍匐茎的草莓品种，或更新换地的草莓园。

主要特点：不需要设立专门的育苗圃，不需要进行摘除多余的匍匐茎和在匍匐茎节上压土等工作。分株繁殖的系数低，质量较差，多带有分离伤口，容易受土传病菌侵染而感病。目前生产上除了急需用苗时，一般不采用此法繁殖苗木。四、匍匐茎繁殖法匍匐茎是草莓的主要繁殖器官，利用匍匐茎繁殖种苗是草莓最重要的繁殖方法。

主要特点：方法简单，能保持品种的遗传特性，伤口较小，繁殖系数高，管理便捷，既可以利用生产田直接采苗，又可以建立专门的育苗圃，是目前草莓主要采用的育苗方式。值得注意的是，生产田育苗虽然省力省钱，但是技术要求比较高，育出的苗木常生长细弱，花芽分化不良，定植后产量和果品均会受到影响，所以通常育苗与生产分开。想详细了解生产田育苗的朋友可查看下面的视频。草莓育苗技术要点天气逐渐回暖，进入草莓育苗的适期，需提早确定地块备耕，选择优质种苗，起垄栽植，做好田间管理，为培育出优质的草莓种苗做好准备。 1、母株选择选择品种纯正、生长健壮、无病虫害、有4片叶以上、根系发达的草莓植株作为生产用母株。此外，繁殖用母株应取自繁殖圃内当年繁殖的健壮匍匐茎苗或假植苗，最好是脱毒苗。如果是脱毒苗最好用原种苗，或用1代苗。

植物组织培养及应用研究概况

学号：20095071124 学院生命科学学院专业生物科学年级2009级姓名张阿欠论文（设计）题目植物组织培养及其应用研究概况指导教师张伟职称讲师成绩 2012 年 6 月 9 日

目录摘要 (2) 关键字 (2) Abstract (2) Keywords (2) 前言 (3) 1.植物组织培养的基本概念、原理和试验步骤 (4) 1．1植物组织培养的基本概念 (4) 1．2植物组织培养的基本原理 (4) 1．3植物组织培养的试验步骤 (4) 1．3．1选择和配制培养基 (4) 1．3．2灭茵 (4) 1．3．3接种 (5) l. 3．4培养 (5) 2. 植物组织培养的应用 (5) 2．1植物快速繁殖和无病毒种苗生产 (5) 2．2植物花药培养和单倍体育种 (5) 2．3植物胚胎培养 (6) 2．4植物愈伤组织或细胞悬浮培养 (6) 2．5细胞融合与原生质体培养 (6) 2．6植物细胞突变体筛选 (6) 2．7植物体细胞胚胎和人工种子 (7) 2．8 植物组织细胞培养物的超低温保存与种质库建立 (7) 2．9 植物组织培养与转基因技术的应用 (7)

3 .发展前景展望 (7) 参考文献： (8) 植物组织培养及其应用研究概况学生姓名：张阿欠学号：20095071124 信阳师范学院生物科学专业指导教师：张伟职称：讲师摘要：主要讲了植物组织培养的基本概念，原理和实验步骤，在此基础上，讲了植物组织培养在植物快速繁殖和无病毒种苗生产、植物花药培养和单倍体育种、植物胚胎培养、植物愈伤组织或细胞悬浮培养、细胞融合与原生质体培养等方面的应用，最后展望了植物组织培养的发展方向。关键字：植物组织培养；概念；原理；实验步骤；应用；发展前景 Abstrac t：About the basic concepts, principles and experimental procedures of plant tissue culture, on this basis, said plant tissue culture in plant rapid propagation and virus-free seed production, plant anther culture and haploid breeding, plant embryo culture, plantscallus or cell suspension culture, cell fusion and protoplast culture in the application, Finally, the future direction of development of plant tissue culture. Keywords:Plant Tissue Culture; concept; principle; experimental steps; applications; development prospects 前言在世界各国科学家的不断努力下，近几十年来，植物组织培养技术迅速发展。利用组织培养，不仅可以大量生产优良无性系，获得人类需要的多种代谢物质，还可获得单倍体、三倍体、多倍体及非整倍体。通过细胞融合可以打破种属间的界限，克服远缘杂交不亲合性，在植物新品种的培育和种性的改良中发挥了巨大作用。组织培养的植物细胞是在细胞水平上分析研究的理想材料，从植物快繁、花药培养发展到细胞器培养、原生质融合以及DNA重组技术等，植物组织培养技术广泛应用于植物科学的各个领域及农业、林业、工业、医药等多种行业，已经成为当代生物科学中最有生命力的一门学科。

植物组织培养的一些注意事项

植物组织培养的一些注意事项一、常用培养基主要特性 1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。 2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。 , 4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。有以下几种: ①改良怀特培养基(White 1963 ) ②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966) ③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。 ④贝尔什劳特液(Berthelot 1934) ⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。其成分是大量元素比1/ 2 克诺普( Knop ) 液稍多, 微量元

素用贝尔什劳特液, 每升培养基中加0 . 5ml。二、与培养基有关的一些细节问题 1、培养基所用药品应采用等级较高的化学纯CP(三级) 及分极纯AR(二级) , 以免杂质对培养物造成不利影响。 2、调节PH也可用精密pH试纸(应在干燥器中保存, 以免吸湿而失效)。培养基过酸的可用1mol/ L 氢氧化钠( NaOH) 来调节; 培养基过碱的可用1mol/ L 盐酸( HCl ) 来调节( 1mol/ L NaOH 的配制方法是称40gNaOH, 溶解后加入蒸馏水, 加 ) 因 , 1、取材季节的影响：大多数植物应在其生长开始的季节采样, 生长末期或已进入休眠期, 则外植体对诱导反应迟钝或无反应。 2、器官的生理状态和发育年龄：沿植物的主轴, 越向上的部分所形成的器官其生长的时间越短, 其生理年龄也越老, 越接近发育上的成熟, 越易形成花器官。反之, 越向下, 其生理年龄越小。木本植物的组织培养中, 以幼龄树的春梢嫩枝段或基部的萌条较好, 下胚轴与具有3 对～4 对真叶的嫩茎段, 生长效果也较

草莓脱毒方法

草莓脱毒方法以药剂处理加茎尖培养可增加脱毒效果,如盐酸四环素对草莓的四种病毒都有一定的抑制作用。覃兰英等(1988)将草莓在35℃下热处理7 d后,逐步升温至38℃,在湿度40%～68%、光照度4 000～5 000 Lx条件下热处理35 d后,将长出的新茎茎尖再行组培,可获得100%的脱毒苗。大泽胜次(1982)在进行单倍体育种时发现花培植株的脱毒率达100%。此法不仅可快速繁殖出大量无毒植株,还可省去病毒鉴定工作,在育种与生产应用上可谓一举两得。利用花药培养脱毒苗,其成功与否与花蕾大小的选择有关,应选取处于密封状态的小花蕾,此时的花粉发育期为单核靠边期。花蕾的大小与不同的品种有一定的差异。高庄玉等(1993)用草莓花药组培,其脱毒率达100%，用幼叶和茎尖产生的愈伤组织其再生植株脱毒率只有20%。艾勇、赵佐敏等(2000)用1/2MS+0.1 mg/L IBA+琼脂4.5～7 g/L+白糖20 g/L诱导丰香草莓试管苗生根,生根率可达100%。移栽时不用任何基质处理,采取试管苗一次性入土移栽(适温20～25℃,1周内保持空气湿度在95%以上),幼苗成活率可达85%, 花药培养草莓花药培养是获得无毒苗的途径之一，其优点是操作简单，并能大量繁殖。薜光荣等经花药愈伤组织直接分化出花药植株的途径培育出沙尔普斯等5个品种的脱毒苗，脱毒苗在生长、结果、可溶性固形物含量等方面均超过对照株，果实总产和平均果重均大幅度提高。这表明，实现草莓的无病毒栽培，将会给草莓生产带来很大的经济效益。花药愈伤组织的诱导和再分化培养过程，以添加2 mg/L的6-BA和0.2~1.0 mg/L的NAA 为宜；茎尖分化培养过程中添加6-BA的浓度为0.5~1.0 mg/L；继代分化快繁过程中,6-BA 浓度一定要掌控好，要求6-BA的浓度在0.5~1.0 mg/L范围内不断变换调节，3周左右继代快繁一次,这样苗子在整个继代快繁过程中才能保持生长健壮、分化系数高(达到8~10倍)、无褐化现象发生等。反之，如果6-BA浓度过高(>2 mg/L)时,苗子会出现脆化、黄化、过密、矮化等现象；过低(<0·25 mg/L)时，苗子会出现细弱、弯曲、过高、生根过多等现象，均不利于苗子的分化快繁。生根培养中添加6-BA浓度以0·25 mg/L为最好，苗子生长粗壮、根系发达,发根率为100%。将花药接种到1号培养基（MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.1 mg/L+3%蔗糖）上，1周后花药陆续形成愈伤组织，达78.6%；1个月左右转接愈伤组织到2号培养基（MS+6BA 1 mg/L+NAA 0.l mg/L+3%蔗糖）上。注意观察，当芽长到lmm左右时转接到3号培养基（MS十6-BA 1mg/L+3%蔗塘）上，逐渐形成芽丛，1个月后，把芽丛分开成单芽再分别转接到新的3号培养荃上，让花继续分化生长;以后根据情况每隔10~30天转接一次.这样，年内每个分化组

植物组织培养

远缘杂交育种：远缘杂交指不同种、属或亲缘关系更远的物种间杂交，产生的后代为远缘杂种人工种子：是一种人工制造的代替天然种子的颗粒体，可以直接播种于田间。植物的组织培养：广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。外植体：植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段胚胎培养：植物胚胎培养是指对植物的胚（种胚）及胚器官（如子房，胚珠）进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。器官培养：是将活体的一部分进行分离培养，是广义的组织培养形式之一。将部分或整体器官在不损伤正常组织结构的条件下进行的培养，即仍保持组织的三维结构，并模仿在各种状态下的器官功能。细胞培养：对离体植物的单细胞或细胞团进行培养，形成完整植株的培养技术原生质体培养：对离体植物的脱去全部细胞壁的细胞进行培养，形成完整植株的培养技术愈伤组织（callus）：原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。初代培养：是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养继代培养：对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养，就称为继代培养固体培养：在液体培养液中加入0.5%～1%的琼脂使液体培养液半固化，再接种培养物的一种培养技术液体培养：把细胞或生物体的一部分，置于液体培养基中使其发育，并不断振荡，使之均匀地在悬浊液中进行培养的一种方法。器官发生途径：是指在组织培养的过程中，再生植株不是通过胚胎，而是通过分生中心直接分化器官，最终形成完整植株的过程。器官间接发生途径：外植体在培养基中的植物生长物质等因素的诱导下，其细胞呈没有分化的状态，重新恢复了细胞的分裂能力，脱分化的过程。器官直接发生途径：直接从在培养基中的外植体上进行植物生长物质等因素的诱导下再分化的过程植物细胞全能性：指植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的遗传能力脱分化：已分化的细胞在一定因素作用下恢复细胞分裂能力,失去原有分化状态的过程叫做脱分化。再分化：已经脱分化的愈伤组织在一定条件下，再分化出胚状体，形成完整植株，这一过程叫作再分化病毒（Virus)：由一种核酸分子（DNA或RNA）与蛋白质（Protein）构成或仅由蛋白质构成（如朊病毒）。结构简单，没有细胞结构，自身不能复制，但具有遗传、复制等生命特征的微生物原生质体：去除原有细胞壁或抑制新生细胞壁后所得到的仅有一层细胞膜包裹着的圆球状对渗透敏感的细胞细胞融合技术：在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞的技术

植物组织培养的展望

植物组织培养的展望摘要：植物组合培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术，现已渗透到各个研究领域。植物组织培养技术是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、胚胎、原生质体等，在人工配制的培养基上给予适宜的培养条件，进行繁殖的方法。为了加快组培苗的生长速度，提高其质量，改善其本质，并降低生产成本，国内外的学者将环境控制技术和组培技术有极大的结合起来做了大量研究，改善组培苗的生长环境。本文对植物组织培养过程中所面临的问题和所采用的新技术进行了综述，并提出了植物组织培养技术发展的新方向。关键词：意义问题应用现状发展方向工业化生产 1.植物组织培养的意义目前，生物技术正在世界突飞猛进地发展，尤其在医学、农业、食品工业、能源工业、环境保护各个领域显示出极大的生产潜力。组织培养是最基础的生物技术，它的全面应用正在使农业的生产走向集约化、工厂化。植物组织培养也就是所谓的植物克隆。简单地说就是提取植物的根、茎、叶、芽或一个细胞，通过生物高科技手段，在很短的时间内诱导分化出与母体完全相同的植物。 2.目前植物组织培养所存在问题及其对策 2.1褐变问题褐变是植物组培育苗中常见的现象，以木本植物较为严重。褐变是指外植体在诱导脱分化或再分化过程中，自身组织从表面养基释放褐色物质，以至培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进变褐而死亡的现象。褐化包括酶促褐化和非酶促褐化。酶促褐变是主要因素，一般认为培养材料变褐是由于伤口处分泌的多酚氧化酶(PPO)被氧化成醌类物质，呈红褐色，并抑制许多酶的活性，影响培养物的正常生长．严重时导致其死亡。从理论上讲，酶促褐变可以通过以下三种方法加以抑制：一是除去引起氧化的物质-氧；二是捕捉或减少聚合反应的中间产物：三是抑制有关的酶。抑制外植体褐变的措施如下：选择适当的外填体，培养材料进行预处理。选择适当的培养基和培养条件，加入抗氧化剂和其他抑制剂．适当缩短转瓶周期。适当改变培养基的硬度等。 2.2、污染问题污染是植物组培过程中的技术难题之一。培养物受到污染在组织培养中经常遇到，并且难以控制。若不能把污染率降低到可接受的范围，将会造成重大的经济损失。因此，分析污染的产生和来源，控制污染的发生，成了植物组织培养中的重要工作。外植体材料、培养基、接种工具、接种室消毒不严格或无菌操作不规范等因素均会导致污染的发生。针对植物组织培养中污染产生的原因。应从以下两个方面着手来控制污染。一是控制外植体自身带菌，外植体的表面带菌可以经过一系列的杀菌处理来减少。而外植体的内部带菌可以通过对外植体的预培养来加以控制；一是降低环境污染和操作污染．这类污染可通过规范操作程序加以控制。 2.3、玻璃化问题玻璃化是指在培养过程中材料呈半透明状，组织结构发育畸形的现象。又称“过度水化”。玻璃化的苗由于组织畸形，分化能力降低，不易成活。因此，不宜用作继代和移栽的材料。培养过程中，光照、温度、湿度和pH值等的影响；另外培养材料的植物种类、外植体类型也影响着玻璃苗的发生；除此外，培养基的成分变化对玻璃化现象也起了重要作用。由于培养基中Ca、N、Mn、Fe、B、Zn等含量的不同，导致玻璃化现象发生率也不同。有研究表明糖与玻璃化现象的发生率有着负相关关系。玻璃化防治对策：选不易玻璃化的植物品种及部位作外植体材料；利用固体培养基，增加琼脂浓度，选择适当的碳源，提高培养基中蔗糖含量；采用通气性好《》试卷，共10 页，第1页《》试卷，共10页，第2页