基因工程试题库
二、填空或选择填空题
1.给以下质粒载体pUC18/19划线处填上其中文含义。
2.在进行琼脂糖凝胶电泳时，DNA分子从电场的（正极；负极）向极泳动，超螺环型的质粒分子比其开环构
型泳动更（快；慢）。
3.观察琼脂糖凝胶中的DNA分子带，常常以染色后在光下观察其荧光。
4.碱性磷酸酶主要有和两种，作用于DNA分子将其5’磷酸基团水解除去。
5.反转录酶的酶学活性主要有；
和三种。
6.琼脂糖凝胶常用的浓度范围在%—%之间，相应可以分离Kb— Kb的DNA分子。
7.Southern吸印（Southern blot）是指针对分子的杂交；Northern吸印是针对????????????分子的杂交。
8.通常质粒载体可以克隆Kb的DNA片断；λ插入型载体可以克隆Kb的DNA片段；λ替换型载体可以克隆Kb的
DNA片段；Cosmid可以克隆Kb的DNA片断。
9.琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，要观察到DNA条带，应加入染色，它可以在??????????????光照射下发射荧光。
10.在采用超速密度梯度分离纯化质粒DNA时，在溶液中加入，使得质粒的浮力密度（大、小、等）于基因组DNA
的浮力密度。
11.DNA自动测序将Sanger的双脱氧末端终止法与技术结合起来，使DNA测序摆脱了对大量单链模版的依赖。
12.DNA化学自动合成反应进行的方向与DNA酶催化合成的反应方向（一致；不同），是从（5’3’；3’5’）。
13.与T-DNA bp的重复序列及位于Ti质粒上编码与T-DNA转移有关蛋白的基因，而
与T-DNA上携带的基因关系不大。
14.从细菌中经小量制备的质粒分子经电泳分离后，同一种分子由于构型不同而常产生两条带纹，其中一条为构型，另一条为
构型，电泳迁移率前者（大、小、等）于后者。
15.λ载体在完成重组连接后，通过包装蛋白的离体包装形成噬菌体颗粒。在包装蛋白进行有效的包装时，要求DNA大小在Kb
之间，而且两端有两个位点。
16.大肠杆菌质粒的复制起始于一复制的原点，用表示，其复制是（单向；双向）进行，大肠杆菌基因组DNA复制
是（单向；双向）进行的。
17.通常的电泳条件下，琼脂糖凝胶可以有效分离Kb——Kb的分子，如果采用????????????????电泳的方式，也可以分离更
大的DNA片断。
18.DNA的自动合成目前主要采用法，自端至端方向进行。
19.根据质粒在宿主中的拷贝数，细菌质粒可分为质粒和质粒。pUC质粒通过对复制原点进行突变，使其在
宿主中的拷贝数大大提高，因此它属
于质粒。
20.反转录酶可以以（RNA，ssDNA，dsDNA）和?????????????（RNA，ssDNA，dsDNA）为模板合成DNA互补链，
同样也需要引物。
21.植物基因工程常用的报告基因有：、、、?????????????等。
22.构建基因文库时，要使文库具有完整性，文库的大小有N=Ln(1-P)/Ln[1-L/G]，说明文库的大小取决于；
和从中分离某一克隆片断的期望概率。
23.大肠杆菌DNA聚合酶I具有：；和三种主要酶学活性。而Klenow酶则失去了
活性。
24.在进行分子克隆时，质粒载体构建的重组分子通过方法进入细胞中扩增；而λ噬菌体重组体通过
方法进入细胞；粘粒载体重组分子通过方式进入细胞中扩增。
25.与真核生物所有染色体一样，维持YAC（酵母人工染色体）在酵母细胞中的稳定性，Y AC必须具有三个基本结构要素：分别
是；和。
26.用冷的CaCl2处理对数生长期的大肠杆菌细胞，可诱导细胞进入称为态的生理状态进行遗传转化。
27.构建cDNA文库时，要使文库具有完整性，文库的大小有N=Ln(1-P)/Ln[1-1/n]，说明文库的大小取决于和从中分离
某一克隆片断的期望概率。
三、问答题：
1．在进行α-互补筛选重组转化菌时，为什么要采用?M15突变的大肠杆菌作为转化受体菌？
2．下图为pUC18质粒的结构简图，简述以pUC18为载体进行DNA片断克隆的全过程。
3．在细菌宿主中表达外源蛋白，为何强调对表达基因进行调控？利用乳糖操纵子是怎样对下游基因的表达进行控制的？
4．以λgt10构建的cDNA文库在扩增时，会出现混浊和清亮两种形式的噬斑，试解释这一现象的原理。
5．细菌对噬菌体的限制和修饰现象在分子水平是如何发生的？有何生物学意义？
6．简述PCR自动DNA测序的过程和原理。
7．要使一外源基因在大肠杆菌中表达出蛋白质产物，要经过哪些基因工程步骤？请逐步加以说明。
8．怎样检测转基因植物中外源基因的存在和表达情况？列举两种方法。
9．构建基因组文库时为什么要制备DNA随机片段？怎样制备DNA随机片段？
10．简述利用根癌农杆菌进行植物遗传转化时的主要步骤。
11．你了解的基因工程的主要工具酶有哪些，请一一阐述其作用。
12．什么是融合蛋白？为什么基因工程发酵生产外源蛋白时常以融合蛋白的形式生产出目标蛋白前体？
13．以λgt11构建cDNA文库，包装的噬菌体感染大肠杆菌后形成蓝色和无色的两种噬斑，试解释其原因。
14．进行DNA克隆时，外源DNA片段有哪些主要来源。如果你完成了一个特殊蛋白的氨基酸序列测定，怎样从其序列出发分离其相应的基因。
15．Lac UV 5 突变体启动子不依赖CAP的正调控，其在基因工程中运用有何优势？
16．简述PCR技术的原理和过程。
17．多种载体中都采用α-互补的方式筛选重组子，简述利用α-互补进行重组子筛选的过程和原理。
18．什么是表达型载体？为了方便进行克隆基因的表达以及表达产物的分离与纯化，在表达型载体上采用了那些设计？
19．获得转基因植物可以采用哪些方法？选择其中一种方法详细说明其操作的过程。
20．以下是pBR322的结构图，如果利用Pst I限制性酶克隆一外源DNA片断，怎样进行这一重组过程？怎样选择重组的转化菌？
21．说明Southern吸印（Southern blot）杂交的原理和方法。
22．如何从一个文库中筛选出携带目的基因的克隆？简述其过程。
23．如果DNA片断和载体间的粘性末端不能匹配，怎样实现这两种分子的重组连接？请提出至少两种方法。
24．经过PCR扩增获得了某一特定的DNA带，怎样利用T载体将其克隆下来？
25．什么是转基因动物？试简要阐述两种获得转基因动物的方法？
26．什么是cDNA文库？欲构建水稻花药cDNA文库，简述构建该cDNA文库的基本步骤。
27．根据基因工程法利用大肠杆菌表达外源蛋白药物的过程和特点，试设计基因工程生产胰岛素的过程？
28．进行植物遗传转化主要有哪些常用方法？你认为哪种方法最为合理？为什么？
29．什么是包涵体？当基因工程生产的蛋白质形成包涵体后应怎样进行下游的工作？
30．怎样对一段给定序列的DNA 分子运用PCR 方法进行定点突变？
31．大肠杆菌为什么能高效表达外源基因？
32．大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？
33．目的基因与启动子拼接后，重组分子若不表达，应如何分析？
34．在进行大肠杆菌表达外源蛋白质时，启动子为何需要具有可控性？
35．IPTG 诱导P lac 启动子的分子机制是什么？
36．在大肠杆菌中采用T7启动子表达外源基因产物时，为什么要选用大肠杆菌DE3作为表达菌株？
37．Ti 质粒的主要分子生物学特征是什么？
38．Ti 质粒诱导植物根部生瘤的机理是什么？
39．什么是动物反应器？将动物乳腺作为生物反应器的理由是什么？
四、综合思考题
1． 今通过显微注射的方法获得了转基因羊若干，怎样对转基因羊进行分子检测？试根据你所掌握的基因工程、分子生物学等知识，提出
实验方法对转入的外源基因在羊中的整合、基因的表达水平加以检测。
2． 你认为转基因生物会带来哪些潜在的危险性？对转基因生物进行安全性管理是否必要？
3． 运用你所学习的基因工程知识，描述进行某一生物基因组计划应采取的具体实施步骤。
4． 限制性内切酶对DNA 进行酶切时，哪些因素会影响酶切反应的效果？如果你分离的DNA 酶切效果不佳，应该采取什么措施进行处理？
5． 基因工程表达的蛋白易形成包涵体，而一些蛋白形成包涵体后的溶解与复性效率往往不高。运用你掌握的基因工程知识，提出一些基
因工程的措施，降低包涵体的形成。
6． 什么是密码子的偏好性？怎样纠正大肠杆菌对外源基因密码子的偏好性？
7． 试设计一个实验对下段约2Kb 的DNA 进行定点突变，将位于分子中部的A-T 转换成G-C 。
五、选择题（单项选择，请在括号内填上相应的一个英文字母）
1．根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【 】
Ａ： 基因诱变；
Ｂ： 分子克隆；
Ｃ： DNA 重组；
Ｄ： 遗传工程；
Ｅ： 基因无性繁殖。
2．生物工程的上游技术是【 】
Ａ： 基因工程及分离工程；
Ｂ： 基因工程及发酵工程；
Ｃ： 基因工程及酶工程；
Ｄ： 基因工程及细胞工程；
Ｅ： 基因工程及蛋白质工程。
3．基因工程作为一种技术诞生于【 】
Ａ： 上世纪 50 年代初；
Ｂ： 上世纪 60 年代初；
Ｃ： 上世纪 70 年代初；
Ｄ： 上世纪 80 年代初；
Ｅ： 上世纪 90 年代初。
4．利用基因工程实现分子克隆，是通过【 】
Ａ： 基因定向重排；
Ｂ： 强化启动基因；
Ｃ： 增强子重组； A T 5' 3' 5'
3'
Ｄ：SD 顺序的存在；
Ｅ：载体自主复制。
5．第一个由基因工程大肠杆菌生产的人类蛋白（多肽）药物是【】
Ａ：生长激素（Growth hormone）；
Ｂ：胰岛素（Insulin）；
Ｃ：干扰素（Interferon）；
Ｄ：白细胞间溶菌素（Interleukin）；
Ｅ：生长激素释放抑制素（Somatostatin）。
6．下列有关基因的叙述，错误的是【】
Ａ：蛋白质是基因表达的唯一产物；
Ｂ：基因是DNA 链上具有编码功能的片段；
Ｃ：基因也可以是RNA；
Ｄ：基因突变不一定导致其表达产物改变结构；
Ｅ：基因具有方向性。
7．限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是【】
Ａ：修复自身的遗传缺陷；
Ｂ：促进自身的基因重组；
Ｃ：强化自身的核酸代谢；
Ｄ：提高自身的防御能力；
Ｅ：补充自身的核苷酸消耗。
8．天然PstI 限制性内切酶的来源是【】
Ａ：Bacillus amyloliquefaciens；
Ｂ：Escherichia coli；
Ｃ：Haemophilus influenzae；
Ｄ：Providencia stuartii；
Ｅ：Streptomyces lividans。
9．下列五个DNA 片段中含有回文结构的是【】
Ａ：GAAACTGCTTTGAC；
Ｂ：GAAACTGGAAACTG；
Ｃ：GAAACTGGTCAAAG；
Ｄ：GAAACTGCAGTTTC；
Ｅ：GAAACTGCAGAAAG。
10．下列五个DNA 片段，最可能含有II型限制性内切酶SstI 酶切位点的是【】
Ａ：GGAGAGCTCT；
Ｂ：GAGCACATCT；
Ｃ：CCCTGTGGGA；
Ｄ：A TCCTACATG；
Ｅ：AACCTTGGAA。
11．T 4 -DNA 连接酶催化相邻的两核苷酸通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是【】Ａ：2' -OH 和5' -P；
Ｂ：2' -OH 和3' –P；
Ｃ：3' -OH 和2' -P；
Ｄ：3' -OH 和5' -P；
Ｅ：5' -OH 和3' –P。
12．核酸酶S1工具酶是一种【】
Ａ：只切双链DNA 的水解酶；
Ｂ：只切单链DNA的水解酶；
Ｃ：只切单链RNA的水解酶；
Ｄ：双链、单链RNA 均切的外切酶；
Ｅ：优先切单链但也可以切双链DNA及RNA的核酸酶。
13．下列有关连接反应的叙述，错误的是【】
Ａ：连接反应的最佳温度为37 ℃；
Ｂ：连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%；
Ｃ：连接反应缓冲体系的A TP 浓度不能高于1mM；
Ｄ：连接酶通常应过量2-5 倍；
Ｅ：DTT 可以维持连接酶的结构。
14．提高重组率的方法包括【】
I：加大外源DNA 与载体的分子之比；II：载体分子除5'端磷酸基；III：连接酶过量；IV 延长连接反应时间Ａ：I + II；
Ｂ：I + II + III；
Ｃ：I + III + IV；
Ｄ：II + III + IV；
Ｅ：I + II + III + IV。
15．载体的功能是【】
I：运送外源基因高效进入受体细胞；II：为外源基因提供复制能力；III：为外源基因提供整合能力。
Ａ：I；
Ｂ：I + II；
Ｃ：I + III；
Ｄ：II + III；
Ｅ：I + II + III。
16．下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是【】
Ａ：质粒是共价环状的双链DNA 分子；
Ｂ：天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列；
Ｃ：质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA 自主复制；
Ｄ：松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增；
Ｅ：质粒并非其宿主细胞生长所必需。
17．带有多个不同种复制起始区的质粒是【】
Ａ：穿梭质粒；
Ｂ：表达质粒；
Ｃ：探针质粒；
Ｄ：整合质粒；
Ｅ：多拷贝质粒。
18．多聚接头（Polylinker ）指的是【】
Ａ：含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工DNA 片段；
Ｂ：含有多种复制起始区的人工DNA 片段；
Ｃ：含有多种SD 顺序的人工DNA 片段；
Ｄ：含有多种启动基因的人工DNA 片段；
Ｅ：含有多种特定密码子的人工DNA 片段。
19．λ-DNA 体外包装的上下限是天然λ -DNA 长度的【】
Ａ：25 - 50 % ；
Ｂ：50 - 100 %；
Ｃ：75 - 100 %；
Ｄ：75 - 105 %；
Ｅ：100 - 125 %。
20．考斯质粒（cosmid）是一种【】
Ａ：天然质粒载体；
Ｂ：由λ-DNA 的cos 区与一质粒重组而成的载体；
Ｃ：能裂解受体细胞的烈性载体；
Ｄ：具有溶原性质的载体；
Ｅ：能在受体细胞内复制并包装的载体。
21．下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是【】
Ａ：Cosmid >λ-DNA > Plasmid；
Ｂ：λ-DNA > Cosmid > Plasmid；
Ｃ：Plasmid >λ-DNA > Cosmid；
Ｄ：Cosmid > Plasmid >λ -DNA；
Ｅ：λ-DNA > Plasmid > Cosmid。
22．目前在植物基因工程中广泛使用的载体是【】
Ａ：质粒DNA；
Ｂ：噬菌体DNA；
Ｃ：病毒DNA；
Ｄ：线粒体DNA；
Ｅ：叶绿体DNA。
23．促红细胞生长素（EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为【】Ａ：人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用；
Ｂ：人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定；
Ｃ：大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活；
Ｄ：人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感；
Ｅ：大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化。
24．克隆菌扩增的目的是【】
I：增殖外源基因拷贝；II：表达标记基因；III：表达外源基因。
Ａ：I；
Ｂ：I + II；
Ｃ：I + III；
Ｄ：II + III；
Ｅ：I + II + III。
25．载体质粒pBR322 共有两个选择性标记：Ap r、Tc r。它们分别含有一个单一酶切位点：Pst I 、Sph I。若将一外源基因插入Ap r 中的Pst I位点，那么用于转化子和重组子筛选的抗生素使用方法应是【】
Ａ：只在Ap上筛选；
Ｂ：只在Tc上筛选；
Ｃ：先在Ap上筛选，阳性菌再接种到Tc上；
Ｄ：先在Tc上筛选，阳性菌再接种到Ap上；
Ｅ：Ap + Tc上一次性筛选。
26．若某质粒带有α互补的lacZ'标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入显色底物为【】
Ａ：半乳糖；
Ｂ：葡萄糖；
Ｃ：蔗糖；
Ｄ：5-溴-4-氯-3-吲哚基- β-D-半乳糖苷（X-gal ）；
Ｅ：异丙基巯基-β-半乳糖苷（IPTG ）。
27．下列载体常用选择性标记中属于营养缺陷型的是【】
Ａ：ts；
Ｂ：Ap r；
Ｃ：lac Z'；
Ｄ：Tc r；
Ｅ：Trp–。
28．下列各组专业术语中，含义最为接近的是【】
Ａ：终止子与终止密码子；
Ｂ：基因表达与基因重组；
Ｃ：DNA 退火与DNA 复性；
Ｄ：转化与转染；
Ｅ：重组子与转化子。
29．核酸分子杂交的化学原理是形成【】
Ａ：共价键；
Ｂ：离子键；
Ｃ：疏水键；
Ｄ：配位键；
Ｅ：氢键。
30．下列三种探针同位素标记法中，必须使用γ- 32 P-dNTP 的是【】
Ａ：缺口平移标记；
Ｂ：DNA 5'末端激酶标记；
Ｃ：反转录标记；
Ｄ：随机引物标记；
Ｅ：DNA 3'标记。
31．Subcloning（亚克隆）法一般用于【】
Ａ：基因杂交；
Ｂ：基因作图；
Ｃ：基因表达；
Ｄ：基因调控；
Ｅ：基因诱变。
32．双脱氧末端终止法测定DNA 序列是基于【】
Ａ：DNA 的聚合反应；
Ｂ：DNA 的连接反应；
Ｃ：DNA 的降解反应；
Ｄ：特殊的DNA 连接酶；
Ｅ：聚合单体2' 和5' 位的脱氧。
33．多项研究结果表明，苍蝇体内存在一种新型高效广谱抗菌蛋白。为克隆其基因，最快速有效的筛选方法是【】Ａ：噬菌斑模型；
Ｂ：透明圈模型；
Ｃ：颜色反应模型；
Ｄ：免疫杂交模型；
Ｅ：凝胶电泳模型。
34．下列三种方法中，能有效区分重组子与非重组子的是【】
I：限制性酶切；II：PCR 扩增；III：抗药性筛选。
Ａ：I；
Ｂ：I + II；
Ｃ：I + III；
Ｄ：II + III；
Ｅ：I + II + III。
35．下列能区分期望重组子的筛选方法是【】
Ａ：抗药性筛选法；
Ｂ：营养缺陷筛选法；
Ｃ：显色筛选法；
Ｄ：次级克隆法；
Ｅ：菌落原位杂交法。
36．鸟枪法克隆目的基因的战略适用于【】
Ａ：原核细菌；
Ｂ：酵母菌；
Ｃ：丝状真菌；
Ｄ：植物；
Ｅ：人类。
37．鸟枪法克隆目的基因的第一步是随机或非随机切割外源DNA ，其方法有【】
I：超声波处理；II：酶解；III：机械搅拌。
Ａ：III；
Ｂ：I + II；
Ｃ：I + III；
Ｄ：II + III；
Ｅ：I + II + III。
38．mRNA 分离纯化技术的关键是【】
Ａ：细胞的温和破碎；
Ｂ：分离系统中不得含有痕量的SDS；
Ｃ：高离子强度缓冲液的使用；
Ｄ：密度梯度超离心；
Ｅ：严防核酸酶的降解。
39．cDNA 第一链合成所需的引物是【】
Ａ：Poly A；
Ｂ：Poly C；
Ｃ：Poly G；
Ｄ：Poly T；
Ｅ：发夹结构。
40．离体cDNA 合成中所涉及的三种工具酶是【】
I：限制性内切酶；II：Klenow 聚合酶；III：RNase H；IV：Bal31 核酸酶；V：反转录酶。
Ａ：I + II + III；
Ｂ：I + III + IV；
Ｃ：II + III + IV；
Ｄ：II + III + V；
Ｅ：III + IV + V。
41．cDNA 法获得目的基因的优点是【】
Ａ：成功率高；
Ｂ：不含内含子；
Ｃ：操作简便；
Ｄ：表达产物可以分泌；
Ｅ：能纠正密码子的偏爱性。
42．Taq DNA 聚合酶的发现使得PCR 技术的广泛运用成为可能，这是因为【】
Ａ：Taq DNA 聚合酶能有效地变性基因扩增产物；
Ｂ：Taq DNA 聚合酶催化的聚和反应不需要引物；
Ｃ：Taq DNA 聚合酶具有极强的聚和活性；
Ｄ：Taq DNA 聚合酶能耐受高温，使多轮扩增反应连续化；
Ｅ：Taq DNA 聚合酶能使扩增反应在DNA 变性条件下进行。
43．为了利用PCR 技术扩增下列染色体DNA 片段上的部分区段，从下列四种寡核苷酸中应选用的一对引物是【】
Ａ：I + II；
Ｂ：I + III；
Ｃ：I + IV；
Ｄ：II + III；
Ｅ：II + IV。
44．基因工程中采用人工合成目的基因战略的主要原因是【】
Ａ：便于目的基因的分离纯化；
Ｂ：便于目的基因的高效表达；
Ｃ：便于目的基因的重组克隆；
Ｄ：便于目的基因的顺序测定；
Ｅ：便于目的基因的大量扩增。
45．人工合成DNA 的是一个自动循环反应过程，除了每一步对固相柱进行洗涤外，主要包括下列顺序的反应步骤【】I：乙酰化盖帽反应；II：缩合反应；III：去DMT保护基团；IV：氧化反应。
Ａ：I → II→III→IV；
Ｂ：II →III→IV →I；
Ｃ：III→II→IV →I；
Ｄ：III→II→I →IV；
Ｅ：I →II→ IV→III。
46．要构建一生物的完整基因组文库可以对DNA采用【】
Ａ：DNA自动合成法；
Ｂ：随机片段法；
Ｃ：PCR 法；
Ｄ：Southern杂交法；
Ｅ：引物标记法。
47．建立人的基因文库所需的技术是【】
Ａ：分子克隆技术；
Ｂ：体外转录技术；
Ｃ：体外翻译技术；
Ｄ：产物分泌技术；
Ｅ：基因诱导表达技术。
47．构建基因组文库一般使用的载体是【】
Ａ：Ti质粒；
Ｂ：λ替换型载体；
Ｃ：λ插入型载体；
Ｄ：共整合型载体；
Ｅ：二元载体系统。
48．强化基因转录的元件是【】
Ａ：密码子；
Ｂ：复制子；
Ｃ：启动子；
Ｄ：内含子；
Ｅ：外显子。
49．原核生物启动子的特征之一是【】
Ａ：GC 富积区；
Ｂ：TA TA 区；
Ｃ：转录起始位点；
Ｄ：长度平均 1 kb；
Ｅ：含有某些稀有碱基。
50．下列基因调控元件中属于反式调控元件的是【】
Ａ：阻遏蛋白；
Ｂ：启动子；
Ｃ：操作子；
Ｄ：终止子；
Ｅ：增强子。
51．强化mRNA 翻译的元件是【】
Ａ：启动子；
Ｂ：复制起始区；
Ｃ：增强子；
Ｄ：回文结构；
Ｅ：SD 顺序。
52．下列mRNA 5' 端序列中，具有典型的原核生物Shine-Dalgarno 序列特征的是【】
Ａ：5'……UAUAAG……3'；
Ｂ：5'……AGGAGG……3'；
Ｃ：5'……AUAUCU……3'；
Ｄ：5'……CCUCCA……3'；
Ｅ：5'……GGCCCG……3'。
53．为了使人类有经济价值的基因在大肠杆菌中高效表达，有时可以采用同步克隆表达受体菌tRNA 基因的方法，其机理是【】
Ａ：增强基因的转录；
Ｂ：纠正受体菌密码子的偏爱性；
Ｃ：促进氨酰基tRNA 合成酶的表达；
Ｄ：稳定mRNA 在核糖体上的定位；
Ｅ：启动mRNA 的翻译。
54．高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，其产物往往失去水溶性，形成包涵体。原因是【】
Ａ：表达产物不溶解；
Ｂ：表达产物不能正确折叠；
Ｃ：表达产物不含糖基侧链；
Ｄ：表达产物难以形成二硫键；
Ｅ：表达产物中极性氨基酸残基比例下降。
55．包涵体是一种【】
Ａ：受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒；
Ｂ：大肠杆菌的亚细胞结构；
Ｃ：噬菌体或病毒DNA 的体外包装颗粒；
Ｄ：用于转化动物细胞的脂质体；
Ｅ：外源基因表达产物的混合物。
56．某一表达质粒上含有一个能在大肠杆菌中高效表达的基因 A ，若将外源基因B 插入基因A 的3' 末端，并维持基因B 的阅读框架不变，使两者在受体细胞中产生融合蛋白，则正确的重组策略是【】
Ａ A 基因用BamHI 切开， B 基因用BamHI 切开，连接
Ｂ A 基因用BglII 切开， B 基因用BamHI 切开，连接
Ｃ A 基因用EcoRV 切开，B 基因用SmaI 切开，连接
Ｄ A 基因用PvuII 切开，B 基因用SmaI 切开，连接
Ｅ A 基因用SmaI 切开， B 基因用SmaI 切开，连接
57．外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是【】
I：融合基因能稳定扩增；II：融合蛋白能抗蛋白酶的降解；III：表达产物易于亲和层析分离。
Ａ：III；
Ｂ：I + II；
Ｃ：I + III；
Ｄ：II + III；
Ｅ：I + II + III。
58．有利于基因表达的蛋白质产物分泌的元件是【】
Ａ：核糖体；
Ｂ：信号肽；
Ｃ：终止子；
Ｄ：亲水性氨基酸；
Ｅ：多聚腺苷酸。
59．蛋白质工程的战略是设计定做新型蛋白质，但其具体操作是在基因水平上进行的，这些操作技术包括基因定向突变及人工合成，其中M13 法和PCR 法定点突变的原理是【】
Ａ：在DNA 聚合反应所需的引物中直接引入突变；
Ｂ：在DNA 聚合反应过程中通过碱基对错配引入突变；
Ｃ：在DNA 模板单链中用化学试剂诱导突变；
Ｄ：在DNA 连接反应过程中引入突变；
Ｅ：化学修饰DNA 体外复制产物。
60．基因工程菌中重组质粒的丢失机制是【】
Ａ：重组质粒渗透至细胞外；
Ｂ：重组质粒被细胞内核酸酶降解；
Ｃ：重组质粒在细胞分裂时不均匀分配；
Ｄ：重组质粒杀死受体细胞；
Ｅ：重组质粒刺激受体细胞提高其通透性。
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基因工程 一名词解释 DNA，1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外 来 从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护 自身的 DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。 2、各种限制与修饰系统的比较 Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型 识别位点4~6bp，大多为回文序列二分非对称5~7bp 非对称 切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp 识别位点下游 24~26bp 简答 1. 何谓 Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法？ 答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。 pH 引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（ >100U/μl ）；③低离子强度（ <25mmol/L）；④高(> ；⑤有机溶剂如DMSO （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；⑥用其它二价阳离子 星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到100 ～ 150mM（在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应pH至；⑤使用Mg2+作为二价阳离子。 2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？（影响酶活性的因素？） 答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短 内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象 3、 DNA末端长度对酶切割的影响 答：限制酶切割 DNA 时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的 核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切 割扩增的 PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 3 ～4 个碱基对。 4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 答：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具 备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于 筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。 5 抗性基因（ Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 答：氨苄青霉素抗性基因（ ampr）、四环素抗性基因（tetr ）、氯霉素抗性基因（ Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（ kanr , neor ）以及琥珀突变抑制基因supF 。 ⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β - 内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。 ⑵四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜 结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。 6. 何为α - 互补？如何利用α - 互补来筛选插入了外源DNA 的重组质粒？ 答：α - 互补指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β - 半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α - 互补是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α- 互补主要有两部分组成：LacZ △ M15 ，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代；LacZ' ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ' 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α- 互补能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物IPTG 和底物 X-gal （同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。 7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态 Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程？ 答：裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂 解。溶原状态为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数
基因工程习题及答案
第二章习题 一、单选题 1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ） A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase 2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B ) A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。 C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。 D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。 3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ） A. 37℃ B.30℃ C.25℃ D.16℃ E.33℃ 4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B ) A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。 B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。 C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。 D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。 E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。 5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D ) A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 E. 1/106 6. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C ) A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 E. PH:4-10 7. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D ) A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。 B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。 C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。 D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。 E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。 8. II类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ）
基因工程选择题试题库,很全
2. 第一个作为重组DNA载体的质粒是() (a) pBR322 (b)ColEI (c)pSCI01 (d)pUCI8 3. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当 (a) 由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b) 这一系统中的核酸酶都是U类限制性内切核酸酶 (c) 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d) 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4. H型限制性内切核酸酶：() (a) 有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b) 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c) 限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5?下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?() (a) 限制酶是外切酶而不是内切酶 (b) 限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c) 同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d) 一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e) 一些限制酶在识别位点内相同的位臵切割双链DNA，产生平末端
6 .第一个被分离的U类酶是：() (a) EcoK (b)Hind 川(c)Hind U(d)EcoB 7?在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?() (a) 反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度 8. 在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?() (a) EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA 9. 在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?() (a) S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶 10 .限制性内切核酸酶可以特异性地识别：() (a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码(d)以上都正确 11.下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是()。 (a) Sau3A I (b)E . coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12 .限制性内切核酸酶的星号活性是指：() (a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同 13 .下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?() (a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂 (c)含有非Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低 14. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当
人教版高中生物选修三 专题一基因工程测试题(含答案)
人教版高中生物选修三专题一基因工程测试题 一．选择题（共20小题，每题2分，共20分） 1．基因型为AaBbDd的二倍体生物，其体内某精原细胞减数分裂时同源染色体变化示意图如图．叙述正确的是（） A．三对等位基因的分离均发生在次级精母细胞中 B．该细胞能产生AbD、ABD、abd、aBd四种精子 C．B（b）与D（d）间发生重组，遵循基因自由组合定律 D．非姐妹染色单体发生交换导致了染色体结构变异 2．为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中． 下列操作与实验目的不符的是（） A．用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和连接酶构建重组质粒 B．用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞 C．在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞 D．用分子杂交方法检测C基因是否整合到菊花染色体上 3．一对夫妇所生子女中，性状上的差异较多，这种变异主要来源于（） A．基因重组B．基因突变C．染色体丢失D．环境变化 4．不属于基因操作工具的是（） A．DNA连接酶B．限制酶C．目的基因D．基因运载体 5．下列哪一项不是基因工程工具（） A．限制性核酸内切酶B．DNA连接酶 C．运载体D．目的基因 6．下列关于基因重组和染色体畸变的叙述，正确的是（） A．不同配子的随机组合体现了基因重组 B．染色体倒位和易位不改变基因数量，对个体性状不会产生影响 C．通过诱导多倍体的方法可克服远缘杂交不育，培育出作物新类型
D．孟德尔一对相对性状杂交实验中，F1紫花植株自交后代发生性状分离的现象体现了基因重组 7．通常情况下，下列变异仅发生在减数分裂过程中的是（） A．非同源染色体之间发生自由组合，导致基因重组 B．非同源染色体之间交换一部分片段，导致染色体结构变异 C．DNA复制时发生碱基对的增添、缺失或改变，导致基因突变 D．着丝粒分开后形成的两条染色体不能移向两极，导致染色体数目变异 8．下列关于基因突变和基因重组的说法中，正确的是（） A．mRNA分子中碱基对的替换、增添、缺失现象都可称为基因突变 B．基因重组只发生有丝分裂过程中 C．非同源染色体上的非等位基因发生自由组合属于基因重组 D．基因型为DdEE的个体自交，子代中一定会出现基因突变的个体 9．基因工程的正确操作步骤是（） ①目的基因与运载体相结合②将目的基因导入受体细胞③检测目的基因的表达④提取目的基因． A．③④②①B．②④①③C．④①②③D．③④①② 10．如图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是（） A．DNA连接酶、限制性核酸内切酶、解旋酶 B．限制性核酸内切酶、解旋酶、DNA连接酶 C．解旋酶、限制性核酸内切酶、DNA连接酶 D．限制性核酸内切酶、DNA连接酶、解旋酶 11．科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，在医学研究及相关疾病治疗方面都具有重要意义．下列有关叙述错误的是（） A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞具有全能性 B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达 C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用 D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代 12．用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ和二者的混合物分别降解一个1 000bp（1bp即1个碱基对）的DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，凝胶电泳结果如下图所示．该DNA分子的酶切图谱（单位：bp）正确的是（）
基因工程测试题
基因工程测试题 一、选择题： 1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A.大肠杆菌 B.酵母菌 C.肺炎双球菌 D.乳酸菌 2.下列有关基因工程的叙述，正确的是( ) A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来 B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变 C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大 D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 3.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是( ) A.抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体 B.重组DNA分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染 D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的 4.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kan r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养
基上生长。下列叙述正确的是( ) A.构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株 C.卡那霉素抗性基因(kan r)中有该过程所利用的限制性核酸内切酶 的识别位点 D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传 5.上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，以下与此有关的叙述中正确的是( ) A.“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物 B.“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 C.只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有 D.转基因牛的肌肉细胞中也有人白蛋白基因，但不发生转录、翻译，不能合成人白蛋白 6.下列关于蛋白质工程和基因工程的比较，不合理的是( )
【精品】2021年高中高三生物二轮复习专题练习含答案解析4：基因工程
2021年高三生物二轮复习专题练习4含答案解 析：基因工程 一、选择题 1.下列关于基因工程应用的叙述，正确的是( ) A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因 B．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交 C．一种基因探针能检测水体中的各种病毒 D．利用基因工程生产乙肝疫苗时，目的基因存在于人体B淋巴细胞的DNA中 2.1970年，特明和巴尔德摩证实了RNA病毒能依赖RNA 合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA 的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解分析，下列说法不．正确的是( ) A．催化①过程的酶是逆转录酶 B．从图示可以看出要将碱基对之间的氢键断开可以用核酸酶H和高温处理 C．从图中信息分析可知，②⑤过程为DNA复制，催化⑤过程的酶能耐高温 D．如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶30
个 3.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( ) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 4.如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是( ) A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法 B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌 D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 5.在基因工程操作中限制性核酸内切酶是不可缺少的工具酶。下列有关限制性核酸内切酶的叙述错误的是( )
基因工程测试题经典
xxxXXXXX 学校XXXX 年学年度第二学期第二次月考 XXX 年级xx 班级 姓名：_______________班级：_______________考号：_______________ 一、选择题 （每空？ 分，共？ 分） 1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是 A ．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 B ．基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质 C ．基因工程是分子水平操作，蛋白质工程是细胞水平（或性状水平）操作 D ．基因工程完全不同于蛋白质工程 2、PCR 是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术，下列有关PCR 过程的叙述，不正确的是 A ．变性过程中破坏的是DNA 分子内碱基对之间的氢键 B ．复性过程中引物与DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 C ．延伸过程中需要DNA 聚合酶、ATP 、四种核糖核苷酸 D ．PCR 与细胞内 DNA 复制相比所需要酶的最适温度较高 3、35．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述，正确的是（ ） A ．人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目，小于凝血因子氨基酸数目的3倍 B ．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA 分子导入羊的受精卵 C ．在该转基因羊中，人凝血因子基因只存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D ．人凝血因子基因开始转录后，DNA 连接酶以DNA 分子的一条链为模板合成mRNA
4、ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因．为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞．技术路线如图所示，对此描述错误的是（） 5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是： A、同种生物的基因组文库大于cDNA文库 B、③表示PCR技术，用来扩增目的基因 C、从基因文库中要得到所需目的基因，可根据目的基因的有关信息来获取 D、只要基因的核苷酸序列已知，就只能通过人工合成的方法获取 6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序 列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是：
基因工程题库版--名词解释
各种题型 确定题目 重要题目 候补题目 不确定答案的题目 试卷与题库重复题目 名词解释 同裂酶（同切点酶）：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为同裂酶。 同尾酶：与同裂酶对应的一类限制性内切酶,它们来源各异，识别的靶序列也各不相同,但切割后都能产生相同的黏性末端,特称为同尾酶。测序酶：是经修饰过的T7噬菌体DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸，这样使得T7DNA聚合酶完全失去了3~-5~外切酶活性，只有5~-3~聚合酶活性，而且聚合能力很强，测序时常用此酶。与klenow相比优点是：是双脱氧链终止法对长片段进行测序的理想用酶。 限制性核酸内切酶：是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。 限制-修饰系统中的限制和修饰作用：限制-修饰系统中的限制作用是指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源DNA(如噬菌体DNA等)，使得外源DNA对生物细胞的入侵受到限制；而生物细胞(如宿主)自身的DNA分子合成后，通过修饰酶的作用，在碱基中特定的位置上发生了甲基化而得到了修饰，可免遭自身限制性酶的破坏，这就是限制-修饰系统中的修饰作用。 5. 限制性片段长度多态性（RFLP）：当DNA序列的差异发生在限制性内切酶的识别位点时，或当DNA片段的插入、缺失或重复导致基因组DNA经限制性内切酶酶解后，其片段长度的改变可以经过凝胶电泳区分，出现的这种DNA多态性称为限制性片段长度多态性。 6. 星号活性：限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测定的。当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，这种现象称为星号活性。（“非最适的”反应条件例如高浓度的核酸内切限制酶、高浓度的甘油、低离子强度、用Mn2+取代Mg2+以及高pH值等。)克服星号活性的方法：维持反应体系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时间或DNA 样品的重新处理等。 7. 载体(vector): 在基因操作中携带外源基因进入受体细胞的工具。 克隆载体：主要用于扩增或保存DNA片段，是最简单的载体。主要有：质粒载体、噬菌体载体、黏粒载体、人工染色体（YAC和BAC）。YAC（酵母人工染色体）：是利用酿酒酵母的染色体的复制元件构建的载体，其工作环境也是在酿酒酵母中。 BAC（细菌人工染色体）：是基于大肠杆菌（E.coli）的F质粒构建的高通量低拷贝的质粒载体。 表达载体是可携带外源基因进入宿主细胞进行复制并进行转录、翻译的载体。 病毒表达载体：是以病毒基因组序列为基础，插入必要的表达元件所构建成的真核基因转移工具。 T-载体：Taq酶的末端转移酶活性可在PCR产物的3’端加上一个不依赖于模板的A，根据这一特性，为方便进行PCR产物的直接克隆而开发出T-载体。 Ti质粒（tumor inducing plasmid）：是在根癌农杆菌中发现的可决定冠瘿病（即可诱发寄主植物产生冠瘿瘤）的质粒。大小在200kb左右。 12. 粘粒载体：由人工构建的、大小一般在5~7kb左右、含有λDNA的cos序列和质粒复制子的一类特殊的质粒载体。 17.一元载体：含目的DNA的中间表达载体与改造后的受体（Ti质粒）通过同源重组所产生的一种复合型载体。 18.双元载体：是指由两个分别含有T-DNA和vir区的相容性突变Ti质粒构成的系统。 16. 卸甲载体：将Ti质粒上的T-DNA的致瘤基因全部去掉，仅保留其两边界及与T-DNA转移所必需的25bp序列而构建成的载体。 8.质粒的相容性：是指两种质粒是否可以共存于同一个细胞，如果能够共存则叫相容又叫亲和。 质粒的不相容性：两个质粒在同一宿主中不能共存的现象，出现这种现象的原因主要是它们常常共用同一复制系统。 9. 转移性：质粒具转移性是指在自然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内。不含tra基因的质粒则不具备转移性。 T-DNA ：能导入宿主细胞并插入其DNA中发挥作用的Ti质粒部分DNA片段。 T-DNA区：即转移DNA，能转移并整合在植物细胞核基因组上的、决定植物形成冠瘿瘤的一段DNA。LTS和RTS对于T-DNA的转移和整合是不可缺少的。 α-互补：指lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，由 1024个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。 11. cos序列（cohesive endsite）：λDNA分子两端各有12碱基(5′-GGGCGGCGACCT-3′)的单链互补粘性末端，当λ噬菌体进入细菌细胞后，其DNA可迅速按碱基互补配对结合形成双链环状DNA分子。 COS位点：当λDNA进入细菌细胞后，便迅速粘性末端配对形成双链环状DNA分子，这种粘性末端结合形成的双链区域叫做COS位点. 13. 端粒重复序列（telomeric repeat，TEL）：定位于染色体末端一段序列，用于保护线状的DNA不被胞内的核酸酶降解，以形成稳定的结构。 14. 自主复制序列：一段特殊的序列，含有酵母菌中DNA进行双向复制所必须的信号。 22. 多克隆位点：含有紧密排列的多个限制性内切酶识别位点的一段DNA片段。 23、分子杂交：是指在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法，用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在及其分子量大小。 24、菌落原位杂交：是将菌落或噬菌斑转到固相膜上，原位裂解细胞后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。 26、真核细胞原位杂交：是一项组织化学与分子杂交相结合的技术，使探针与固定在载玻片上的细胞组织切片内的变性染色体杂交。 27、荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）：对寡核苷酸探针做特殊的修饰和标记，后用原位杂交方法与靶染色体或DNA 上特定的序列结合，再通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体（单个细胞增殖形成的细胞群所产生的抗体）来确定该DNA序列在染色体上的位置。 28、凝胶阻滞试验：（gel retardation assay）：又叫DNA迁移率变动试验（electrophoretic mobility shift assay，EMSA），是用于体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。 26. 盒式诱变：就是用一段人工合成具有突变序列的DNA片段，取代野生型基因中的相应序列。这就好象用各种不同的盒式磁带插入收
基因工程和细胞工程测试题(附答案,可用于考试)
5 高二生物《基因工程和细胞工程》测试题姓名班级 （时间：90分钟分数：100分） 一．选择题（本大题包括25题，每题2分，共50分。每题只有一个选项符合题意。） 1．以下说法正确的是（） A.所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B．质粒是基因工程中惟一的运载体 C．运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 2．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不．相符的是（） A．纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性 B．植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性 C．植物体细胞杂交和动物细胞融合——生物膜的流动性 D．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂 3．有关基因工程的叙述正确的是（） A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成在细胞内完成 C.质粒都可作运载体 D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 4．能克服远缘杂交障碍培育农作物新品种的技术是（） A.基因工程 B.组织培养 C.诱变育种 D.杂交育种 5．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是( ) A．培养人的效应T细胞能产生单克隆抗体 B．培养人的B细胞能够无限地增殖 C．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞 6．PCR技术扩增DNA,需要的条件是( ) ①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体 A、①②③④ B、②③④⑤ C、①③④⑤ D、①②③⑥ 7．以下对DNA的描述，错误的是（） A.人的正常T淋巴细胞中含有人体全部遗传信息 B.同种生物个体间DNA完全相同 C.DNA的基本功能是遗传信息的复制与表达 D.一个DNA分子可以控制多个性状 8. 蛋白质工程中直接需要进行操作的对象是（） A.氨基酸结构 B.蛋白质空间结构 C.肽链结构 D.基因结构 9．细胞工程的发展所依赖的理论基础是（） A.DNA双螺旋结构模型的建立 B.遗传密码的确立及其通用性的发现 C.生物体细胞全能性的证明 D.遗传信息传递的“中心法则”的发现 10．下列不是基因工程中的目的基因的检测手段的是：（） A.分子杂交技术 B.抗原—抗体杂交 C.抗虫或抗病的接种 D.基因枪法 11．在以下4种细胞工程技术中，培育出的新个体中，体内遗传物质均来自一个亲本的是（） A.植物组织培养 B. 单克隆抗体 C. 植物体细胞杂交 D.细胞核移植 12．动物细胞融合与植物细胞融合相比特有的是（） A.基本原理相同 B.诱导融合的方法类 C.原生质体融合 D.可用灭活的病毒作诱导剂 13．下列哪一项属于克隆（） A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内 C．将鼠骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞
基因工程练习题(附答案)
基因工程练习题 1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是( ) A、将目的基因从染色体上切割出来 B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列 C、将目的基因与运载体结合 D、将目的基因导入受体细胞 2、基因工程中常用细菌等原核生物作受体细胞的原因不包括( ) A、繁殖速度快 B、遗传物质相对较少 C、多为单细胞，操作简便 D、DNA为单链，变异少 3、基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、限制酶只用于切割获取目的基因 B、载体与目的基因可以用同一种限制酶处理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA连接酶 D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测 4、运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有( ) A、抗虫基因 B、抗虫基因产物 C、新的细胞核 D、相应性状 5、转基因动物转基因时的受体细胞是( ) A、受精卵 B、精细胞 C、卵细胞 D、体细胞 6、基因工程中常见的载体是( ) A、质体 B、染色体 C、质粒 D、线粒体 7、水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是( ) A、促使目的基因导入宿主细胞中B、促使目的基因在宿主细胞中复制 C、使目的基因容易被检测出来 D、使目的基因容易成功表达 8、运用现代生物技术的育种方法，将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种，这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质，对菜青虫有显著抗性，能大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，减少农药使用，据以上信息，下列叙述正确的是( ) A、Bt基因的化学成分是蛋白质 B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质 C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因 D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物 9、人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A、大肠杆菌 B、酵母菌 C、T 噬菌体 D、质粒DNA 4 10、不属于质粒被选为基因运载体的理由是（） A．能复制 B.有多个限制酶切点C．具有标记基因D．它是环状DNA
基因工程试题及答案
基因工程试题及答案 【篇一：基因工程题库以及答案】 因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是： (1)____________， (2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和 __________。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。 5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。 8．限制性内切核酸酶bsuri和haeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．dna聚合酶i的klenow大片段是用_____________切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 10．为了防止dna的自身环化，可用_____________去双链 dna__________________。 11．egta是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记dna的基本原理在于利用 _________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化dna的合成外，还具有____________的作用，可以将dna- rna杂种双链中的___________水解掉。
基因工程实验考试试题(答案)
1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？ 答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。 2.如何正确使用微量移液器？ 答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。 3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？ 答：loading Buffer。主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。 溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。 4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。 答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线； ④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。 5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75） 答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否； 6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31） 答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。 7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？ 答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。 8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？ 答：冷的无水乙醇、冷的异丙醇、终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl 9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。 答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。 10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq DNA聚合酶）。 答:(1)利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，通过一系列酶在体外引物介导下，
2015-2017基因工程高考题附答案
选修3——基因工程高考题 1．（2017?新课标Ⅰ卷.38）（15分） 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A（有内含子）可以表达出某种特定蛋白（简称蛋白A）。回答下列问题： （1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是_____________________________________________。 （2）若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用______________作为载体，其原因是_______________________________________________________________。（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有_____________________________________________________（答出两点即可）等优点。 （4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是___________________（填“蛋白A 的基因”或“蛋白A的抗体”）。 （5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_______________________________________________________________________________。2．（2017?新课标Ⅱ卷.38）（15分） 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题： （1）在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是________________________________。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是______________________________________。 （2）以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是________________________________。 （3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是________________________________________________________（答出两点即可）。（4）当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是__________________________。 （5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____________________________________________。 3.（2017?新课标Ⅲ卷.38）（15分）编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。 回答下列问题： （1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是_____________________________________________________________。（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为________________，加入了________________作为合成DNA的原料。 （3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。 ①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是________________________。 ②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。 4．（2017·天津理综卷9）（20分）玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤I、II试验。 Ⅰ．获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。 （1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是______（单选）。 ①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点 ②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
基因工程作业题及答案
第二章 1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶 答： 核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。 核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。 同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。 同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。 核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。 末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA 3’-OH端随机 添加dNTPs的酶 2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？ 答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号； 首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写； 第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写； 第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写； (2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。 第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。 顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。 3．部分酶切可采取的措施有哪些？ 答：1）缩短保温时间 2）降低反应温度 3）减少酶的用量 4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么? 答：回文序列是：5'-CATA TG-3， 5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响? 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松 动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因 条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星 活性。 概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性 内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如 Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。 第三章 1．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体? 答：①删除λ噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点 ②引进某些突变表型，作为选择标记 ③突变某些基因，使它成为安全载体 ④删除λDNA必须区段上常用的限制酶切点