蛹虫草培养基配方
蛹虫草培养基配方
2.4.1斜面培养基
PDA培养基:去皮马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20g、琼脂18g、水1000mL，pH自然。
2.4.2液体种子培养基
去皮马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20 g、MgSO4;1.0 g、KH2PO4;1.0 g、定容至1000mL，pH自然。
2.5实验方法
2.5.1蛹虫草固体培养
2.5.1.1固体培养基配制
固体培养基为大米培养基，即每瓶分别加入40 g大米与50mL营养液，然后于压力0.12MPa、温度121℃下灭菌20min。原营养液成分如下:葡萄糖5g/L、黄豆8g/L、奶粉5g/L、柠檬酸三铵 1.0g/L、磷酸二氢钾 1.0g/L、硫酸镁 1.0g/L、维生素B110mg/L。
2.5.1.2菌种的活化
将保存的原始菌株接种到PDA培养基上，23℃暗培养7d，得到活化的菌种。
2.5.1.3制备液体菌种
将活化的菌种块(lcm-1cm)接入液体培养基中，静止培养24h后置于摇床上进行悬浮培养(转速为110r/min)，在23℃的条件下暗培养6d，得到液体菌种，将液体菌种用磁力搅拌器打碎后即可用于接种。
2.5.1.4接种
在无菌条件下，往每瓶大米培养基中接种15ml稀释了250倍的液体菌种。
2.5.1.5菌丝体培养
将接种好的培养瓶置于温度22℃、湿度55一60%条件下暗培养6d左右，直至菌丝体长满整个培养基表面和吃透整个培养基。
2.5.1.6子实体培养
将菌丝体已长好的培养瓶置于有光照的适宜环境下培养至形成原基及子实体成熟。
2.5.1.7子实体采收
待子实体成熟后，进行采收并称取每瓶子实体鲜重，然后于45℃条件下烘干至恒重，称每瓶子实体干重。
各种培养基配方
146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰 红水溶液） 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然 培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
蛹虫草的功效与作用
蛹虫草的功效与作用 北虫草如今已成为冬虫夏草的替代保健品。与虫草不同的是，北虫草能被人工培育，其所含虫草精华——虫草素，是野生冬虫夏草中所含虫草素的16倍左右，对淋巴癌和部分白血病有积极治疗作用。 野生冬虫夏草价格昂贵。而目前市场上以发酵菌丝代替虫草，其有效成分和效果根本无法与天然虫草相比。本研究通过大量培养比较，筛选出了一株优良的蛹虫草菌种。虫草的成份分析表明，蛹虫草的蛋白质＿糖＿脂肪＿腺嘌呤＿尿嘧啶＿甘露糖＿氨基酸＿生物碱＿麦角甾醇和多种微量元素与野生冬虫夏草相比无根本差异，最重要的为蛹虫草的活性成份虫草素含量是野生冬虫夏草的 5~10 倍。药理试验表明蛹虫草具有镇静、延长睡眠、抗肿瘤、提高性功能等生理功能，许多生理功能明显优于野生冬虫夏草。培育蛹虫草作为冬虫夏草的替代品或新保健食品、或进一步从中提取有效成分制备新药将有广阔的市场．相关文章推荐阅读：蛹虫草的吃法 功效： 北冬虫夏草，其主要化学成分和保健功能与天然冬虫夏草很相似，有平喘止咳、壮阳补肾功能，对肺气肿、气管炎有较好疗效，能明显降低血糖、尿糖、降低血压、颅压的作用；还有抗菌、抗癌、增强免疫功能和润肌美容及消除“蝴蝶”斑等作用，至今尚未发现明显的副作用，其保健功能越益被人们认识。北虫草可以及时对身体进行综合调理。 临床应用 冬虫夏草中医临床应用，多为煎服或配伍入丸、散。用量一般为5～10g，或用15～30g 与鸡、鸭、猪肉等炖服，但由于天然虫草资源紧缺、价格昂贵，同时对发酵菌丝体的化学、药理研究，都表明其天然虫草有相同和相似的药理活性，市场不断涌现出发酵虫草菌丝体为原料的新药品和保健品，如卫生部批准生产的“金水宝”胶囊和已投产的“至灵胶囊”、“百龄胶囊”、“心肝宝”胶囊、“宁心宝”等。 （一）心血管疾病 邵耕等用“金水宝”治疗高血脂症的273例临床研究表明，“金水宝”胶囊组病人血清总胆固醇平均比治疗前下降17.5%（对照组下降1.2%）；甘油三酯下降9.9%（对照组6.7%）；高密度脂蛋白胆固醇（HKLC）升高27.2%（对照组升高10.4%），与对照比较有显著差别，结果表明该药有较高可靠的降低胆固醇作用，且能升高HDL-C。李佩章等用“宁心宝”治疗
蛹虫草种植方法
蛹虫草种植方法 1.营养 碳源 蛹虫草使用方法 碳源是蛹虫草合成碳水化合物和氨基酸的基础，也是重要的能量来源。人工栽培时， 蛹虫草可利用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉、果胶等，其中尤以葡萄糖、蔗糖等 小分子糖类的利用效果最好。 氮源氮元素是蛹虫草自身合成的蛋白质、核酸等有机氮以及铵盐等无机氮。能利用 的有机氮很多，如氨基酸、蛋白胨、豆饼粉、蚕蛹粉等;无机氮主要有氯化铵、硝酸钠、 磷酸氢二铵等。有机氮的利用效果最好。 矿质元素以磷、钾、钙、镁等为主要元素。一般通过添加无机盐类来满足蛹虫草对 矿质元素的需求。 维生素虫草菌丝不能合成必要的维生素，适当加入VB1有利于菌丝的生长发育。 2.温度在虫草的不同生长发育阶段都有最适温度、最低温度和最高温度的界限。菌 丝生长温度6℃—30℃，低于6℃极少生长，高于30℃停止生长，甚至死亡。最适生长温 度为18℃—22℃;子实体生长温度为10℃—25℃，最适生产温度为20℃—23℃。原基分化时需较大温差刺激，一般应保持5℃—10℃温差。 3.水分和湿度水分是蛹虫草菌体细胞的重要组成部分。菌丝生长阶段，培养基含水 量保持在60%—65%，空气相对湿度保持在60%—70%;子实体生长阶段，培养基含水量要达 到65%—70%，空气相对湿度保持在80%—90%。要注意培养基适时补水和补充营养液。 4.空气蛹虫草需要少量空气。但在子实体发生期要适当通风，增加新鲜空气。否则，二氧化碳积累过多，子座不能正常分化，影响生长发育。 5.光照孢子萌发和菌丝生长阶段不需要光照，应保持黑暗环境。但转化到生殖生长 阶段需要明亮的散射光，光照度为100—240勒勒为光照度单位。光照强，菌丝色泽深， 质量好，产量高。 6.酸碱度蛹虫草为偏酸性真菌，其菌丝生长发育最适pH为5.2—6.8。但在灭菌和培养过程中pH值要下降。所以在配制培养基时，应调高pH值1—1.5，在配制培养基时可加0.1%—0.2%的磷酸二氢钾或磷酸氢二钾等缓冲物质。育种 长期采用无性繁殖及多次转管的蛹虫草菌种，其母本基因容易变异，表现为出草畸形，产质量下降。因此，在生产中应定期对蛹虫草菌种进行一次有性繁殖。具体做法是，
蛹虫草固体一级菌种培养基及液体菌种培养基的制作
蛹虫草固体一级菌种培养基及液体菌种培养基的制作 一．实验目的 学习并掌握蛹虫草固体一级菌种培养基、液体菌种培养基的制作方法 二．实验原理 蛹虫草（Cordyceps militaris），又名北冬虫夏虫，属于子囊菌门中的大型真菌，自然界中生长于昆虫的蛹体上，为虫生真菌。20世纪30年代，有学者用昆虫蛹接种获得了具有成熟子囊壳的蛹虫草，之后人们用米饭培养基培养除了蛹虫草，用家蚕和柞蚕接种蛹虫草菌种培养出了批量的蛹虫草子实体。 蛹虫草作为一种食药用真菌，其生长所需要的营养物质包括碳源、氮源、维生素、矿物质元素等。其各种培养基质的配置原则都要包含以上几种营养物质。试验表明：适宜蛹虫草的碳源有蔗糖、葡萄糖、麦芽糖等；氮源有牛肉膏、蛋白胨、酵母浸出物、各种蚕蛹粉以及硝酸盐、铵盐等无机氮；维生素有维生素B1；矿物质盐有磷酸二氢钾、硫酸镁、磷酸氢二钠等。 三．仪器设备与实验材料 1.主要仪器设备：电子台秤，高压蒸汽灭菌锅、电热炉等。 2.实验材料与试剂：玻璃棒，、脱脂棉、纱布、烧杯，漏斗，漏斗架，去皮刀，牛皮纸，量筒，马铃薯，葡萄糖，琼脂，水，蛋白胨，维生素B1，磷酸二氢钾等。 四．实验方法与步骤 1.固体一级培养基的制作 （1）配方一：改良PDA培养基：1000ml培养基包括200g马铃薯、20g葡萄糖、15-20g琼脂，2g蛋白胨、1g磷酸二氢钾，0.5g硫酸镁 操作流程： 马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加琼脂融化→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜面 （2）配方二：大米培养基 大米50g，磷酸二氢钾0.05g，葡萄糖10g，维生素B1 0.5g，水50ml 操作方法： 大米用清水浸泡5至6小时，沥水。 将0.05g磷酸二氢钾，10g葡萄糖，维生素B1 溶于50ml水中。 ●将配置好的水溶液和大米共同装入罐头瓶中，瓶口用聚丙烯薄膜扎封。 ?高压灭菌1h 2.液体菌种培养基制作 培养基配方：1000ml液体培养基磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，葡萄糖30g，蛋白胨3g，维生素B1 50mg，马铃薯20g 操作流程： 马铃薯去皮→切块（长宽高近1cm）→煮沸→过滤→加葡萄糖→加蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁、生素B1 50mg→分装→加棉塞→包扎→灭菌 注：250ml摇瓶中中加入液体培养基120ml 五．实验注意事项。 1.灭菌锅操作时务必先将高压锅内的冷空气排干净。 2.注意避免培养基黏附在试管塞上，造成污染。 六．思考题 1.如果高压锅内冷空气排放不彻底，会对灭菌效果有什么影响，为什么？ 2.为什么摆斜面时试管上面盖纱布可以避免试管里面产生冷凝水？
蛹虫草人工培育技术
蛹虫草人工培育技术 蛹虫草人工培育技术 https://www.360docs.net/doc/a117893727.html,/v_show/id_XMTYwODkyNTE2.html
蛹虫草，又称北冬虫夏草，北虫草，是子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科，虫草属的模式种，与冬虫夏草是同属不同种，也是一种久负盛名的药用真菌。可全草入药，具有特殊的药用价值和滋补功效。含有虫草酸、虫草素、虫草多糖、超氧化物歧化酶SOD和微量元素硒等多种生物活性物质，可促进机体新陈代谢，提高机体的免疫功能。古人就有宁要虫草一把，不要黄金满车之说。 蛹虫草生理独特，生态复杂，自然界是鳞翅目昆虫的蛹体感染虫草菌后形成的虫与真菌两部分组成复合体，主要生长在针、阔叶林或混交林地表土层中。在冬季幼虫蛰居土里，菌类寄生其中，吸取营养，幼虫体内充满菌丝而死。到了夏季，从幼虫尸体上面生出幼苗，形似草，夏至前后采集而得到。蛹虫草自然分布资源数量很少，价格昂贵。采用传统人工栽培，是把虫草菌注入到活的蚕蛹身上，模拟自然条件得到蛹虫草。但采用这种方法培育，注射技术难以控制，容易污染，
产量低，一般农户难以操作。 近年来，也有不少人参照常规药用真菌的生产方法，出现培养基营养配比不合理，菌种退化、污染严重等多种现象，导致产量下降、效益较低。为此，杭州市农科院科研人员通过多年的高产栽培研究和不同菌株比较试验，采用大米代替蛹体作为培养基，培育蛹虫草，获得了成功。经检测，人工培养虫草的主要营养与药用成分与野生虫草的含量相当。而且采用人工代料培育蛹虫草具有成功率高，生长周期短等优点，一般从接种到子座成熟只要40—45天。蛹虫草人工培育过 程与天然冬虫夏草不同，只是生产虫草上部子座，没有下部虫子。现将培育技术介绍如下： 人工培育蛹虫草的操作流程主要可分为以下几个阶段。 菌种准备→ 培养基的准备→ 接种→ 菌丝培养→ 出草管 理→ 采收 菌种准备： 蛹虫草的菌种不能长期保存，也不要多次转管扩繁，否则菌种容易退化、变异，使子实体生长不良，而且产量和质量都
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方 LB液体培养基： Bacto-蛋白胨10g 酵母抽提物5g 氯化钠10g 加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。LB固体培养基： 每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。 SOB液体培养基 Bacto-蛋白胨20g 酵母抽提物5g NaCl 0.5g 加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。 SOC液体培养基 SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。 麦康凯固体培养基 每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。 NA固体培养基 牛肉浸膏3g 酵母浸膏1g 蛋白胨蔗糖琼脂粉 5g 10g 15g 加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。 TB培养基： 将下列组分溶解在0.9L水中： Bacto-蛋白胨12g 酵母抽提物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。 溶液Ⅰ 葡萄糖2.25 g 50mmol/L 1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L 调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。 溶液Ⅱ 10 mol/L NaOH 2ml 10% SDS 10ml 用水定容至100 ml，现配现用。 溶液Ⅲ 5 mol/L 醋酸钾60ml
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方 （一）母液配制与保存 配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。 基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。 表1大量元素母液（配1L20倍的母液） 序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取 量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液 在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。 表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取 量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液 由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。 配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
芽孢杆菌常用培养基配方
芽孢杆菌常用培养基配方 （按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。。。摘自百度） 一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸 馏水1000ml ，琼脂18g 。调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。 2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸 氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节 PH7.3—7.5Mpa 30min灭菌。） 二、过氧化氢酶测定 1、试剂：3-10%过氧化氢 2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下 培养1-2天。 3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水， 挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出 现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧 化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。 三、需氧性测定
1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖 10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。 2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中 （穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的 特点） 1、培养基 （1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时， 速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。 2、接种与观察 将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。
常用培养基概念及配方复习课程
常用培养基概念及配 方
LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。 乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总
称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等 自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。 自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO4 17 mg／ L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／ L+FeC13·6H2O 0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L． 一、LB培养基配制
蛹虫草详细介绍
蛹虫草详细介绍 蛹虫草是用野生天然冬虫夏草菌株孢子接种到蚕蛹（或特制培养基）上人工培育而成的药食两用真菌。经国内权威分析检测机构化验证明：蚕蛹虫草所含虫草素、甘露醇、SOD及磷、钾、锌、硒等矿物元素均达到或超过天然冬虫夏草。菌种纯正、无退化、有效成分含量稳定。经多年药化、药理、“ 三致”( 致畸、致癌、致突变 ) 试验，具有抗疲劳|抗衰老|抗肿瘤|抗病毒|增强免疫功能，治疗心律失常|调脂类代谢|镇咳平喘|祛痰解痉作用，保肝护抗乙肝|治疗慢性肾炎|肾功能衰竭及提高性功能等十大功能，急性、亚急性毒性试验无毒，服用安全。“ 三致” 试验呈阴性，是制药|保健|食品|饮料|制酒|日化等多方面的理想原料。 冬虫夏草宿主蝙蝠蛾幼虫对环境要求非常高，世代周期长，很难规模饲养，资源紧缺，野生冬虫夏草价格昂贵。而目前市场上以发酵菌丝代替虫草，其有效成分和效果根本无法与天然虫草相比。本研究通过大量培养比较，筛选出了一株优良的蛹虫草菌种。利用新的接种分生孢子和环境控制方法，使接种成功率和子座长出率达 95% 以上，从接种到子座成熟由自然状态的一年缩短到 35-45 天。虫草的成份分析表明，蛹虫草的蛋白质＿糖＿脂肪＿腺嘌呤＿尿嘧啶＿甘露糖＿氨基酸＿生物碱＿麦角甾醇和多种微量元素与野生冬虫夏草相比无根本差异，最重要的为蛹虫草的活性成份虫草素含量是野生冬虫夏草的 5~10 倍。药理试验表明蛹虫草具镇静、延长睡眠、抗肿瘤、提高性功能等生理功能，许多生理功能明显优于野生冬虫夏草。培育蛹虫草作为冬虫夏草的替代品或新保健食品、或进一步从中提取有效成分制备新药将有广阔的市场． 临床应用 冬虫夏草中医临床应用，多为煎服或配伍入丸、散。用量一般为5～10g，或用15～30g与鸡、鸭、猪肉等炖服，但由于天然虫草资源紧缺、价格昂贵，同时对发酵菌丝体的化学、药理研究，都表明其天然虫草有相同和相似的药理活性，市场不断涌现出发酵虫草菌丝体为原料的新药品和保健品，如卫生部批准生产的“金水宝”胶囊和已投产的“至灵胶囊”、“百龄胶囊”、“心肝宝”胶囊、“宁心宝”等。 （一）心血管疾病 邵耕等用“金水宝”治疗高血脂症的273例临床研究表明，“金水宝”胶囊组病人血清总胆固醇平均比治疗前下降17.5%（对照组下降1.2%）；甘油三酯下降9.9%（对照组6.7%）；高密度脂蛋白胆固醇（HKLC）升高27.2%（对照组升高10.4%），与对照比较有显著差别，结果表明该药有较高可靠的降低胆固醇作用，且能升高HDL-C。李佩章等用“宁心宝”治疗心律失常200例，总有效74.5%；广州医学院附属医院用“心肝宝”治疗心律失常188例，总有效74.4%～79.6%。 （二）呼吸系统疾病 江西国药厂以生产的“金水宝”，供5家医院治疗117例慢性支气管炎，进行临床验证，结果显效率49.6%，好转33.3%，总有效82.9%。 （三）性功能障碍 杨文质等报告对金水宝治疗性功能低下症进行临床研究。结果以每日3次，每次1g，20d一疗程，天然虫草显效率25%，“金水宝”显效率56.2%。苏州医学院一附院用“金水宝”治疗阳萎患者50例，总有效为64%，17-羟、17-酮均见升高，认为“金水宝”有提高肾上腺皮质机能、补肾壮阳、治疗阳萎的功能。 （四）肾脏疾病 陈以平等报告用金水宝治疗慢性肾功能衰竭30例。结果，经一个月治疗后，病人肾功能明显改善，治疗后血中肌酐、尿素、比治疗前明显减少，肌酐清除率提高，血色素增加。天然虫草及灵胶囊也有一定疗效。 据任青等报告，用心肝宝治疗肾小球肾炎100例，对照50例的临床研究结果表明，心肝宝组有效为68%，比对照组（54%）高，尤其系膜增值性肾炎疗效显著。经心肝宝治疗后，病人尿FDP明显下降（P<0.01），细胞免疫测定CKT3%明显增加，循环免疫复合物（CIC）明显下降（P<0.01），总补体（CH50）增加（P<0.01）。 （五）肝脏疾病 1、慢性肝炎。据郑芙蓉报告，上海等地用心肝宝治疗慢性病毒性肝炎256例，有效在80%以上，多数患者症状、体征、肝功能均有不同程度好转，而以血清白蛋白、SGPT变化较明显。人工虫草头孢菌丝、至灵胶囊、心肝宝等对慢性肝炎也有明显的治疗作用。至灵胶囊治疗慢性乙型肝炎的总有效为84.61%。何建军等用心肝宝治疗乙型慢性病毒性肝炎125例，其中慢性迁延性肝炎100例，14例显效，19例好转，有效达33%；慢性活动性肝炎25例，4例显效，9例好转，有效达52%。总有效达36.8%。 2、肝硬化，肝炎后肝硬化患者用人工虫草菌丝制剂治疗层，大部分患者腹水消失，对提供高血浆白蛋白和改善精神食欲有一定的作用，能延长病人生长期。
蛹虫草人工栽培技术要点
蛹虫草人工栽培技术要点 蛹虫草，又称北冬虫夏草。它同冬虫夏草一样同归于虫草属。蛹虫草的药用价值与保健价值和冬虫夏草相似，为我国特有的一类珍贵药用真菌。 由于人工栽培冬虫夏草需要养殖蝙蝠蛾幼虫和特定的生态环境，因此，人工栽培冬虫夏草难度较大，目前只有一些科研机构在此方面取得了一些进展。 为了解决冬虫夏草供不应求的矛盾，大量栽培蛹虫草是一个很好的办法。同时也能给种植者带来可观的经济效益。 栽培蛹虫草技术易学，全国有许多单位和个人均栽培成功。现把江西省进贤县特种养殖有限公司的栽培技术要点介绍如下。 一、配制培养料 配方：大米70％、蚕蛹粉23％、蔗糖5％、蛋白胨1．5％、酵母粉0．5％、维生素B1微量。 将上述物质按配方称量，混匀，分装入500毫升罐头瓶中，每瓶约装30克培养料，另加入30毫升左右的营养水，瓶口包扎聚丙烯薄膜。 二、灭菌、接入蛹虫草菌种 高压0．13兆帕保持1小时或常压100℃保持10小时。灭菌后，罐头瓶内的饭粒不生也不成糊状，饭粒之间有空隙。在接种室接种，每瓶约接入液体菌种5—10毫升。 三、菌丝培养管理 保持培养室温度15—20℃，湿度65％左右，避光，菌丝阶段在黑暗的环境下发育较快，光线强不易产生子座。因此，本阶段应避光培养。由于蛹虫草是在瓶内生长，空气湿度的高低对其影响不大。 四、子实体生长培养管理 待菌丝布满整个瓶面并扎到瓶底，开始见光，但避免太阳光直射。若培养室光线太暗，可补充日光灯照。菌丝见光后，在培养料表面或四周见有桔黄色色素形成，并出现米粒状的桔黄色菌蕾，菌蕾伸长后即成为子实体。子实体形成应有温差刺激，子实体培育阶段，温度应为20℃—25℃，超过28℃不能长草，湿度应提高到85％左右，以减少瓶内水分的蒸发，在整个生长阶段，不须去掉封口薄膜，在子实体培养后期，可在封口薄膜上扎几个小孔。 当子实体长高至5—8厘米时，即可采收。采收后每瓶加入清水或营养液3—5毫升，盖好薄膜，继续培养，约半个月可再发生子座，待子座长至5厘米以上高时，即可采收。 五、采收、出售 当蛹虫草成熟后，从子座根部剪断，将子座晒干，水分应低于5％，防止发霉变质，避免折断，用薄膜密封放在阴凉干燥处保存。 目前，全国有很多厂家收购蛹虫草，种植者可自行联系。------中国食品产业网
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
几种培养基的配方
一. 土壤样品的采集 第一种: 选择植被群落具有代表性的固定样方,除去地面植被和地表覆盖物,每样方采用土壤剖面法和多点混合取样法采样,将土样混匀,用四分法弃去多余样品,取500g装入灭菌信封, 带回实验室后立即进行土壤微生物分离（4℃保存）、计数。 第二种: 在小区内机械抽取 6 株样木，距树干基部0.5 m 呈梅花形分布挖取根系周围0～20 cm、20～40 cm 和40～60 cm 土样，分层充分混合后作为非根际土壤样品。同时采集各层直径小于0.2～0.5 cm 细根上粘附的土壤，分层充分混合作为根际土壤。供微生物分析的鲜土样装入已消毒过的密封塑料袋，带入实验室。 二. 三大类土壤微生物分离与数量测定 1. 细菌的分离与数量测定 (1)以平板表面涂抹法计数。称取土壤鲜样10g在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液，取稀释度为10-3，10-4，10-5，10-6，10-7土壤悬浮液各50μL，接种于盛有灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度3个重复，恒温(28 ℃) 培养3d，选取每皿菌落数为15-150的1个稀释度统计菌落数，按下列公式计算细菌数量： 菌数(cfu/ g) = （菌落平均数×稀释倍数）÷干土% （Ⅰ） 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，配方如下： 牛肉膏3.0 g 琼脂18 g 蛋白胨5.0 g 蒸馏水1000mL pH7.0 —7.2 2. 真菌的分离与数量测定 以平板表面涂抹法计数。即称取土壤鲜样10 g ,在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液,取稀释度为10-2，10-3，10-4的土壤悬浮液各50μL，接种于盛有灭菌的马丁- 孟加拉红培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度3个重复,恒温(25 ℃) 培养5～7 d，选取每皿菌落数为15～150 的1个稀释度统计菌落数计算真菌数量公式同公式（Ⅰ）。 马丁- 孟加拉红培养基，配方如下： 葡萄糖10.0 g MgSO4.7H2O 1.0 g KH2PO41.0 g 琼脂15 g 蛋白胨 5.0 g 孟加拉红(Rose Bangal) 每升加1%溶液0.33mL 1% 链霉素3 mL 蒸馏水1000 mL pH自然 临用前再加入1% 链霉素3 mL
蛹虫草的功效与作用
蛹虫草的功效和作用 北虫草如今已成为冬虫夏草的替代保健品。和虫草不同的是，北虫草能被人工培育，其所含虫草精华——虫草素，是野生冬虫夏草中所含虫草素的16倍左右，对淋巴癌和部分白血病有积极治疗作用。 野生冬虫夏草价格昂贵。而目前市场上以发酵菌丝代替虫草，其有效成分和效果根本无法和天然虫草相比。本研究通过大量培养比较，筛选出了一株优良的蛹虫草菌种。虫草的成份分析表明，蛹虫草的蛋白质＿糖＿脂肪＿腺嘌呤＿尿嘧啶＿甘露糖＿氨基酸＿生物碱＿麦角甾醇和多种微量元素和野生冬虫夏草相比无根本差异，最重要的为蛹虫草的活性成份虫草素含量是野生冬虫夏草的 5~10 倍。药理试验表明蛹虫草具有镇静、延长睡眠、抗肿瘤、提高性功能等生理功能，许多生理功能明显优于野生冬虫夏草。培育蛹虫草作为冬虫夏草的替代品或新保健食品、或进一步从中提取有效成分制备新药将有广阔的市场．相关文章推荐阅读：蛹虫草的吃法 功效： 北冬虫夏草，其主要化学成分和保健功能和天然冬虫夏草很相似，有平喘止咳、壮阳补肾功能，对肺气肿、气管炎有较好疗效，能明显降低血糖、尿糖、降低血压、颅压的作用；还有抗菌、抗癌、增强免疫功能和润肌美容及消除“蝴蝶”斑等作用，至今尚未发现明显的副作用，其保健功能越益被人们认识。北虫草可以及时对身体进行综合调理。 临床使用 冬虫夏草中医临床使用，多为煎服或配伍入丸、散。用量一般为5～10g，或用15～30g 和鸡、鸭、猪肉等炖服，但由于天然虫草资源紧缺、价格昂贵，同时对发酵菌丝体的化学、药理研究，都表明其天然虫草有相同和相似的药理活性，市场不断涌现出发酵虫草菌丝体为原料的新药品和保健品，如卫生部批准生产的“金水宝”胶囊和已投产的“至灵胶囊”、“百龄胶囊”、“心肝宝”胶囊、“宁心宝”等。 （一）心血管疾病 邵耕等用“金水宝”治疗高血脂症的273例临床研究表明，“金水宝”胶囊组病人血清总胆固醇平均比治疗前下降17.5%（对照组下降1.2%）；甘油三酯下降9.9%（对照组6.7%）；高密度脂蛋白胆固醇（HKLC）升高27.2%（对照组升高10.4%），和对照比较有显著差别，结果表明该药有较高可靠的降低胆固醇作用，且能升高HDL-C。李佩章等用“宁心宝”治疗
常用细菌培养基配方
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
细胞培养基种类与基本成分
细胞培养基种类与基本成分 是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。其具体的特征及应用如下： 1、BME细胞培养基 基础Eagle 培养基 (Basal Medium Eagle)，1955 年Eagle 设计，BSS+ 12 种氨基酸+谷氨酰胺+ 8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。 2、MEM细胞培养基 又称低限量Eagle 培养基 (Minimal Essential Medium) ，1959 年在Eagle's基础培养基 (BME )上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基，但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。 3、DMEM细胞培养基 DMEM 是由Dulbecco 改良的Eagle 培养基, 起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L, 这就是大家常说的低糖和高糖了。 低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 4、IMDM细胞培养基 Guilber 和Iscove 将Dulbecco' Medium 改良为Iscove's Medium,用于培养红细胞 和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES o并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM 还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS 刺激的
各种培养基的制作方法
配方一萨氏（Sabouraud's）培养基 蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 1.营养肉汤培养基 牛肉膏 0.3克 蛋白胨 1.0克 NaCl 0.5克 水 100毫升 pH 7.0～7.2 在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。 2.营养琼脂培养基 在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。 3.肉汁蛋白胨液体培养基 牛肉 500克 蛋白胨 10克 NaCl 5克 pH 7.1～7.2 取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。 将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。 4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基） 可溶性淀粉 2克 K2HPO4 0.05克 MgSO4·7H2O 0.05克 KNO3 0.1克 NaCl 0.05克
FeSO4 0.001克 琼脂 2克 水 100毫升 pH 7.2～7.4 在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。 5.马铃薯蔗糖培养基 马铃薯 200克 蔗糖 10克 琼脂 20克 水 1000毫升 自然pH 称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 6.麦芽汁培养基 将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 7.察氏培养基 NaNO3 2克 K2HPO4 1克 KCl 0.5克 MgSO4 0.5克 FeSO4 0.01克 蔗糖 30克 琼脂 15～20克 水 1000毫升 自然pH
蛹虫草培养基配方
蛹虫草培养基配方 2.4.1斜面培养基 PDA培养基:去皮马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20g、琼脂18g、水1000mL，pH自然。 2.4.2液体种子培养基 去皮马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20 g、MgSO4;1.0 g、KH2PO4;1.0 g、定容至1000mL，pH自然。 2.5实验方法 2.5.1蛹虫草固体培养 2.5.1.1固体培养基配制 固体培养基为大米培养基，即每瓶分别加入40 g大米与50mL营养液，然后于压力0.12MPa、温度121℃下灭菌20min。原营养液成分如下:葡萄糖5g/L、黄豆8g/L、奶粉5g/L、柠檬酸三铵 1.0g/L、磷酸二氢钾 1.0g/L、硫酸镁 1.0g/L、维生素B110mg/L。 2.5.1.2菌种的活化 将保存的原始菌株接种到PDA培养基上，23℃暗培养7d，得到活化的菌种。 2.5.1.3制备液体菌种 将活化的菌种块(lcm-1cm)接入液体培养基中，静止培养24h后置于摇床上进行悬浮培养(转速为110r/min)，在23℃的条件下暗培养6d，得到液体菌种，将液体菌种用磁力搅拌器打碎后即可用于接种。 2.5.1.4接种 在无菌条件下，往每瓶大米培养基中接种15ml稀释了250倍的液体菌种。 2.5.1.5菌丝体培养 将接种好的培养瓶置于温度22℃、湿度55一60%条件下暗培养6d左右，直至菌丝体长满整个培养基表面和吃透整个培养基。 2.5.1.6子实体培养 将菌丝体已长好的培养瓶置于有光照的适宜环境下培养至形成原基及子实体成熟。 2.5.1.7子实体采收 待子实体成熟后，进行采收并称取每瓶子实体鲜重，然后于45℃条件下烘干至恒重，称每瓶子实体干重。
常用培养基的配方
伊红美蓝培养基 原理 一般用来鉴定大肠杆菌。 伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。 在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。 常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。 用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌 步骤如下： ①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。 ②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。 ③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。 ④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。 ⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。 配置方法 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 20~30g 蒸馏水 1000ml 2%伊红水溶液 20ml 0.5 %美蓝水溶液 13ml 储备培养基的制备 先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。 麦康凯培养基 原理 1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯培养基 2.一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色。 配置方法 蛋白胨 17g 脙胨3g 猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 氯化钠 5g 琼脂 17g 蒸馏水1000mL 乳糖10g 0.01%结晶紫水溶液 10mL 0.5%中性红水溶液 5mL 麦康凯-制法 1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL 加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。 2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。 注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。 吲哚试验 吲哚（indol）试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试验阳性。 LB培养基 配方 胰化蛋白胨 1g 酵母提取物 0.5g NaCl 1g 琼脂 1.5-2g 水100ml LB培养基-LB培养基条件 LB培养基-固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉