ELISA试剂盒问题解答手册
技
术
问
题
问
答
序言
为了更好的让广大客户了解ELISA试剂盒操作过程中出现问题及原因，特将大家普遍认为比较容易出现的问题进行归纳、
整理成册，并回馈给广大的客户。
本手册提到的问题均为分析手段，并未牵涉到具体实例，您可以根据相应的具体问题进行具体分析。在具体实验操作中，如本手册中未体现，希望大家及时与我们取得联系。
贵州勤邦食品安全科学技术有限公司
问题与解答
1.药物残留实验前处理过程中实验耗材（如离心管、玻璃管）重复使用最
理想的洗涤方法是什么？
实验完成后,先用流动自来水冲洗干净,再加入洗涤剂超声2h, 然后再用自来水冲洗干净，最后用去离子水清洗1到2次，60℃完全烘干后待用。
建议：超高阳性样本所使用的离心管或玻璃试管不再重复使用。
2.药物残留检测实验中对水质的要求：三蒸水、蒸馏水、纯净水还是去离
子水？
理论来说这几种水都可以满足分析要求,但对于某些项目来说还是有一定的区别,最好使用去离子水和三蒸水，蒸馏水和纯净水一般仅用于洗涤液的配置。
3.器具污染所造成的途径有那几种？
①检样过程中出现含量较高的阳性样品;
②实验器具没有清洗干净;
③高浓度标品贮备液保存不当造成污染。
建议：容易被污染或者使用周期较长的实验器具, 定期（3-5个月）更新一次。
4.ELISA方法可用于检测药粉样品吗？
针对不同成分的样品, 通过对应的样品前处理方法,消除干扰后, 可以用ELISA方法进行检测，但应防止与药残实验交叉污染。
5.同样一个样品，称取两个样检测两次，两次值差别较大，是取样原因还
是板间的变异？
正常情况下,板孔间的变异不会对样本的检测结果造成绝对的影响；样品的取样、前处理过程和分析过程中的操作误差是影响结果差别较大的主要原因。
6.药物残留实验前处理样品过程中所用的氮气是不是可换用压缩空气？
空气中的氧气是否会对药物产生氧化作用，进而影响试验结果？
一般情况下需要检测的目标物是非常稳定的药物，可以用压缩空气替换氮气, 药
物的氧化在此不会产生，如有特殊药物有氧化情况，说明书上会有明确标注。
7.将肉中药物残留成份转移到提取液中，最佳的离心力、离心时间是多少
（不同的试剂盒离心时间不一样）？
一般情况下，转速4500r/min, 离心时间5min到10 min ,离心力大于3000g即可。
8.呋喃四项检测是衍生化孵育时间和孵育温度多少为最佳？
37℃过夜孵育14到16h为最佳孵育环境,有实验证明过最低可以缩短至12小时,
但对于高阳性样本来说可能会出现差异,建议使用14-16h.
60℃孵育3h需严格遵守孵育时间。若时间允许的情况下，建议使用37℃过夜孵育，以便使药物冲分衍生化，能有效提高高阳性样本检测结果的准确性
9.添加回收率的测定方法是什么？添加回收实验时，添加浓度多少为好？
添加回收实验是验证整个实验过程检测结果的准确度。不同的试剂盒的不同种类
的样本, 按照说明书中对应的样本前处理方法进行实验。在添加的时候尽量避免在最低检测限以内或者超出试剂盒曲线外的添加，建议添加的最适浓度参照所需检测目标药物在相应组织中的判定限或定量限。同时，添加时根据具体的添加浓度对添加的高标进行适当的稀释,保证添加的准确性。
如硝基呋喃类药物组织的定量限为0.5ppb，添加回收时0.5ppb为最适添加浓度。
添加回收的体积公式:V=C*1000M/P,其中:V为添加的高标准体积（ul）,C为添加的浓度,P为高标准的浓度(ppb),M为样本的质量(g)。
10.脂肪存在为什么会造成试验的假阳性率比较高？
在提取过程中, 容易造成乳化, 对样本进行不正常的浓缩，易与杂质混合难以分离。乳化后一般利用60℃水浴加热半小时,最好是先把上层有机相去除后再利用水浴加热较好.第二种解乳化的方法是把整个乳化后的样本全部放入冰箱-20℃急冻室急冻30min或更长，回温后去除上层有机相再次离心后去上清液，取下层进行分析。
如氯霉素或其他在加入正已烷再加入复溶液进行操作时，可在加入正已烷后充分涡动1-2分钟，然后加入复溶液后涡动5-10s，即可在一定程度上防止乳化造成。又如硝基呋喃类代谢物的前处理中加入乙酸乙酯后形成乳化层，不易取到相应的量，可以在加入乙酸乙酯时，放大加入的量，然后取液相应增加，保证稀释倍数不变，也可在一定程度上防止乳化形成。
11.样品OD值落在药残标准曲线的那一区间值精确度最高？
一般在第三和第四标准之间精确度较高, 但是不同的试剂盒曲线的局部差异, 精确区间会稍有变化。一般在曲线上的近似直线段范围内较为准确．
12.OD值偏低由什么因素引起的?
整板ＯＤ值偏低:
?反应温度偏低;
?反应时间不够;
?洗板时间过长或次数过多;
?点板时环境温度过低；
?酶标仪故障波长错误；钨光灯寿命将近,导致光强变弱)；
?试剂盒有效期已过或将过；
?某些试剂盒标准品需要稀释才能使用或试剂稀释倍数错误（如四环素类）；
?试剂盒中的某些试剂变质或污染；
?不同试剂盒混用，
?试剂盒的回温时间较短；
?试剂盒保存未按规定的方法或环境保存；
?试剂盒处于极端条件下，比如放在贴着冰箱壁，试剂冻伤。
样本的ＯＤ值偏低:
?样本的阳性太高（可做空白样本及阳性样本对照试验），
?某些试剂盒的样本需要调节ＰＨ的没有调节到需要的ＰＨ范围；
?某些试剂盒的复溶液需要稀释后才能使用的没有经过稀释；
?样本前处理时没有去掉上层有机相，加样吸取到上层有机相；
?样本被污染；
?样本与标准品的温度相差太多（样本温度低）；
?样本前处理时使用的水质量不合格；
?样本前处理过程中所使用的试剂质量有问题（可做试剂空白对照）；
13.样本的吸光度值为什么会超出曲线上最大ＯＤ值？
?标准品回温时间不够；
?样本中含有非样本基质的物质，如有机溶剂；
?样本复溶液稀释错误或直接利用去离子水作为复溶液；
?标准１被污染；
?反应时间错误，导致标准品的ＯＤ值不上升而样本的ＯＤ值继续上升，注：此种情况下，样本的抑制率在100%--110%范围内，一般可以初步判断样本为阴性样本。若大部分样本的抑制率远超过110%，建议电话咨询或者重复实验。
14.氮吹仪为什么需要水浴或者铁浴？
氮气或空气主要吹主要增加了液体与气体的接触面积，水浴或者铁浴加热是为了使有机溶剂挥发的速度更快一些，以达到节约时间的目的。
15.样本检测结果在曲线之外如何判定?
把处理好的样本液用复溶液进行梯度稀释后，再进行检测.使之OD值在曲线近似直线段范围内为最佳。
16.氮吹仪吹干步骤为什么要50-60℃进行水浴或铁浴?
有机溶剂的沸点一般在60-90℃不等,而水浴的温度一般较溶剂的沸点略低为佳,故对于一般的有机溶剂,可以选用50-60℃的水浴进行加热.但对于某些沸点较高的试剂,比如乙腈等沸点在80℃以上的有机溶剂吹干的时候可选用65-70℃水浴进行加热.但是温度不宜过高.
注：对于混合有机溶剂一般来说沸点会有所降低.相应的水浴温度也应稍微降低。
17.勤邦公司ELISA试剂盒的洗板液是否可以通用？
勤邦ELISA试剂盒内20X洗涤液成份是相同的，不同试剂盒之间可以通用。但是，
建议不使用相隔时间较长的洗液，同时配置好的洗液在室温下放置一周后需重新配置。
建议:首先明确该试剂盒说明书上是否是20X洗涤液。
18.样本吹干后保存问题。
样本吹干后建议立即进行复溶后点板，尽量不进行保存，如果确实需要进行保存的，首先请电话咨询，若能保存，最好是选择吹干后放置于2-8℃冰箱进行保存，如果是已经复溶好的样本，需要用封口膜进行封口后方可放置于2-8℃冰箱保存。另外有些样本是不能放置在玻璃里面进行保存的，如喹诺酮类药物吹干后不能进行保存，如果需要保存，则要复溶后转移到塑料瓶中方可放置于2-8℃冰箱进行保存。
一般说来，样本保存时间不超过12小时。
19.试剂盒在保质期内OD值偏低，但标准品有梯度，可否继续使用？
试剂盒在保质期内OD值偏低可能是保存环境影响所致。若实验数据标准品有梯度、标准品1的OD值大于0.5，可以分析实验结果，但是实验结果只可做为相对判定依据，而不能做为定量检测结果。
20.回收率长期偏高或偏低，是否正常？
国家对试剂盒的回收率范围要求较宽（40%-130%），如果在稳定的前提下出现试
剂盒的回收率长期偏高或偏低是正常的，也可以做为判定依据。需要在检测结果的检测值除上回收率即是该样本的相对准确检测结果。如果有阳性样本的情况下，最好是使用确证后的阳性样本进行复核实验为佳。
21.ELISA方法在方法及操作均无问题的情况下，能否出现假阳性或假阴
性？
ELISA方法本身的特点是具有半定量的性质，一般允许有一定比例的假阳性（国
家要求在10%以下），但是不能出现假阴性检测结果。
22.样本处理过程中出现稀释倍数问题时，如何计算？
样本处理过程中出现的稀释均为：在无损失的情况下，每毫升样本液中溶解的样本质量或体积，如2g样本在无损失的情况下处理完成后溶解于1ml样本液中，则表示该
方法的稀释倍数为0.5倍，如0.5g样本在无损失的情况下处理完成后溶解于1ml样本液中，则表示该方法的稀释倍数为2倍，如2g样本在无损失的情况下处理完成后溶解于0.5ml样本液中，则表示该方法的稀释倍数为0.25倍。
23.没有结晶水的试剂在配置溶液时，该如何换算？
没有结晶水的试剂在配置溶液时，应该取该试剂需要的物质的量乘上分子量后才是需要的试剂的重量。如：说明书上需要n g分子量为M1的有结晶水的物质，如果在没有的情况下，需要用分子量为M2的没有结晶水的物质代替时，则需要的分子量为M2的物质重量为n*M2/M1。
24.配置好的试剂保存问题。
配置好的无机试剂一般可以保存2-3个月，保存环境可以选择在室温，避光，阴凉处进行密封保存;洗液、复溶液等与抗原抗体直接接触的试剂选择在2-8℃冰箱里进行保存；有机混合溶液或有机和无机混合溶液保存的时间原则上不能超过1个星期，室温保存，最好是现配现用。
25.标准曲线的线性要求达到多少为好？
标准曲线的线性直接反应该实验的优劣，理论上应该无限接近1。在实际操作中主要还是以标准曲线判定为主，相关系数判定为辅，在曲线较好的情况下，相关系数只要能达到0.98以上即可做为半定量检测结果判定依据。如果低于0.98，如果标准曲线没有问题的情况下也是可以作为相对定性进行判定。
26.点板时，加样量错误会导致结果如何？
由于该方法为生物法，其反应基理非常复杂，如果加样的量错误，可能会导致不可预料的结果，建议具体问题具体分析，可电话咨询。
27.怎样降低实验器材对实验带来的干扰？
严格按照国家规定对相应的实验器材进行实验操作。
28.如何根据颜色深浅进行延时或缩短时间？
对于有经验的实验员来说，颜色与OD值的关系很容易进行把握，如果颜色所示的OD值达到一定的程度即可进行终止。如果颜色过早达到一定的OD值范围，即可提前进行终止，反之则延长反应时间，但不得超过10分钟。
29.多残留与单残留试剂盒检测的特点。
一般来说，如果对方要求的是某类药物总残留检测结果不得超过某个值时，则可以使用多残留检测试剂盒，交叉反应率越接近100%越好。
如果对方要求的某种药物检测结果不得超过某个值时，则要使用单残留检测试剂盒，且交叉反应率越低越好。
对于不得检出的药物来说一般使用单残留检测试剂盒，避免出现过高的假阳性。
30.点板过程中，稀释好的抗体工作液或酶标二抗工作液能存放多长时间？
严格按照说明书进行操作，如呋喃妥因代谢物（CA036）试剂盒中抗体工作液和
酶标二抗浓缩液混合后需要室温平衡30min,又如链霉素（CA351）试剂盒中抗体工作
液和酶标二抗浓缩液混合后需要立即加样。
31.如何避免假阴性，如何提高回收率？
一般在试剂盒研发过程中，前处理方法研究的时候即会在假阳性与回收率之前取一个平衡点，只要在实验操作过程中严格按照试剂盒说明书所提供的方法进行操作时一般不出现假阴性现象。
32.回收率为什么有时会超过100%？
在前处理样本的过程中，添加浓度的准确度、系统操作误差等因素都对回收率高低有影响。同时，样本中的杂质也会对检测系统产生干扰，有时会出现回收率超过100%的现象。
33.酶标仪中自带有曲线分析系统，还有必要用试剂盒专用处理软件吗？
酶标仪一般应用于医院或医学上，其自带的曲线分析系统主要针对医学上的需要
配备，它的数学模型在兽药残留检测方面不太适用，所以建议使用试剂盒专用分析软件。
34.如果检测样本在说明书上未出现，可否采用其他样本的前处理方法代
替？
如果检测的样本在说明书上未出现，不可擅自用其它样本前处理方法代替，建议先与技术部进行联系确证。
35.回收率能否验证实验过程以及数据的准确性？
在没有确证样本对照的情况下，添加回收率是对操作准确性、操作环境及分析试剂的评价指标之一。因此，回收率也是实验成功与否的一个重要判定依据。
在ELISA检测方法实际应用过程中，回收率只是一个参考指标，其值只要稳定在一定范围内，检测结果即具有参考性。
36.呋喃类药物代谢物检测的前处理过程中，如果取上层2.5ml时上层不够
取，如何解决？
在正常操作情况下，如样本发生乳化会导致上述情况发生。一方面，可以提高离心机转速、延长离心时间，以达到明显分层的目的；另一方面，可以把加入乙酸乙酯的量扩大到10ml，离心后取5ml吹干。
37.酶标仪的检测校正只能由官方部门来进行检测吗？
所有仪器的检测校正均只能由官方部门来进行检测，并贴上检验合格标志后，方可用来做检测实验。
38.呋喃类药物代谢物在做添加回收实验时，可否利用已衍生化的标准曲线
的标准品进行添加？
呋喃类药物代谢物在做添加回收实验时，必须经过一个衍生化的过程，使呋喃类药物代谢物变成其衍生物。建立曲线的标准品均已是衍生物，如果直接用来添加，则衍生化过程无法监控，故不能使用已衍生化标准品做添加回收实验。
39.反应时间是否必须严格按照说明书所示？
由于试剂盒检测中的反应时间是经过大量实验后得到的，建议最好完全按照说明书所示的时间进行操作分析。
由于受实验室实际操作环境温度等的影响，试剂盒显色反应时间可以根据实际显色情况酌情调整。
40.如果在做呋喃类药物代谢物的实验时，离心管的体积不够的情况，怎么
办？
如果遇到离心管的体积不够的情况，可以在保持稀释倍数不变的前提下，把样本以及加入的试剂的量进行减半操作。减半操作后不会对样本的检测造成本质性的影响。
另一种方法，可以在比较大的试管中进行提取，在加入乙酸乙酯振荡后，先静置一段时间，然后转移足量的上层有机相到适合的离心管中进行离心。
41.试剂盒分析所用的液体pH值一般要求多少？
由于抗体、酶都是生物活性物质，强酸强碱都会导致失活现象，所以试剂盒分析用的液体一般要求为中性环境，pH值约在7.2-7.4之间。
42.加入终止液后多久进行读数比较合适？
由于ELISA实验中所用到的都是生物试剂，而终止液为硫酸溶液，故在加入终止液后最好是在5min之内进行读数，如果放置时间过长，则会导致OD值呈不规则降低。颜色深的孔内可能会出现黑色絮状物质，上述现象是由于生物聚合体在硫酸的作用下碳化造成的。
43.板孔在使用之前孔底部有小颗粒物质，正常吗？
一般在板孔底部包被有抗原物质，可能会存在板孔底部有小颗粒的情况，不影响正常检测。
44.47. 喹诺酮类药物、磺胺类药物多长时间能代谢完？
每种药物在不同动物体内都有一定的代谢周期，具体代谢周期可参阅相关文献。
45.如果没有二氯甲烷时可否能用三氯甲烷代替？
每个试剂盒的前处理方法都是经过大量实验后确定的，不能简单的用三氯甲烷代替二氯甲烷进行实验。
46.加完正己烷和复溶液涡动离心后出现乳化现象怎么办？
建议首选60℃水浴5-10min后再离心，同时提高离心力。此外，可选择-20度冷冻10min左右重复离心
47.一次检测的过程中，其中有一两个样品第一次检测时是高阳性样本，基
本不显色，第二次检测时是阴性，是什么原因造成的？
①点样的过程中出现跳孔
②板孔出现较大的变异系数
③样本在前处理的过程中被污染
④样本混合不均匀
建议：出现高阳性的样本后应保留该样本液，与重新处理好的样本液一起点样分析。
48.一次大批量的样本检测过程中发现所有的样本都为阳性，重复测定后发
现都是阴性，为什么？
①样品前处理过程中所用试剂被污染
②实验用水被污染
③标准曲线出现较大的异常
建议：做空白对照。同时建议大家在进行大批量样本检测时带上空白对照。当实验室系统中的所用试剂出现变更的时候，需要针对每个项目进行空白实验对照。
49.当标准曲线6个点中有一个点出现明显的异常时，影响结果判断时，结
果怎么处理？
建议参照之前的实验数据和试剂盒内的质控报告，有选择性的去掉有异常的点，或者适当的更改该异常点的数据，先把能确定阴阳性的样本挑出来。针对部分样本含量在与异常点的关系较大，不好判断阴阳性的样本，建议重新处理，重新分析。
50.在检测的过程中，出现完全不显色的样本，是否能直接判断样本为阳性
（样本的阳性判断限在曲线范围内）？
建议最好不要．部分企业用单孔单样进行检测，出现跳孔现象的可能性比较大。最好能复检该样本，且进行双孔对照，确定样本的最终含量。
51.洗板的过程中怎样减少气泡的产生?
①在多道孔加样器的吸头量程足够的情况下，用“吸二打一”的方式加洗涤液能有效的减少板孔内气泡的产生。
②在多道孔加样器的吸头量程较小的情况下（小于等于３００ul），用“吸一打一”的方式加洗涤液，在保证所加洗涤液的量均一的基础上，还能有效的减少气泡的产生。
52.甩板中的注意事项有哪些?
①尽量甩到板孔内无明显液体悬挂的时候再拍板。
②甩板的速度尽量快,避免板孔内的液体对流,产生交叉污染。
53.这两天做了一次实验，发现四种试剂盒的6个标准的OD值都低于0.6,
样品的OD值也低,我们都是按正常程序操作,试剂盒也是新的.为什么会这样?跟酶标仪有关系吗?
建议首先观察加入终止液之前显色的深浅,若显色深,读数小,请您检查酶标仪
①滤光片的排列顺序
②选择用来读数的波长
③酶标仪内置灯
54.ELISA实验中OD值和检测结果有什么关系？
ELISA实验中，OD值和检测结果成负相关关系。
55.试剂盒开封后的保存方法，标准品为什么在有效期内会失效，失效的原
因都有那些？
试剂盒每次用完后,应立即放入4℃度冰箱冷藏保存,注意在储存的过程中,避免试剂盒紧靠冰箱内壁,防止因局部温度过底"冻伤"试剂。
造成试剂盒中的标准品在有效期内失效的主要原因来自污染.污染途径有多种,有
试剂盒分装过程中的局部污染,使用过程中的污染等等。
人血管内皮细胞生长因子(VEGF)定量检测试剂盒(ELISA)
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【试剂盒名称】 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL 2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL 4 标准品稀释液6mL10 说明书1份 5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂6mL12 密封袋1个 备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、
elisa试剂盒
elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。
大鼠皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒说明书
大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。ELISA法 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成180 ng/ml，90 ng/ml，45 ng/ml，22.5 ng/ml，11.25 ng/ml， 5.63 ng/ml，2.82 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制90 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml。 4. 检测稀释液A：1×10ml。 5. 检测稀释液B：1×10ml。 6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算 好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶 液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 11. 覆膜：5张 12. 使用说明书：1份 自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸
人白细胞介素6(IL-6)定量检测试剂盒(ELISA)
仅供科研使用，不得用于临床检验。 人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA）说明书 【产品名称】 通用名称：人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA） 英文名称：Human Interleukin-6（IL-6）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人白细胞介素6（IL-6）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人白细胞介素6（IL-6）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【主要组成成分】 主要成分
校准品浓度依次为：320、160、80、40、20、0 pg/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 8、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择） 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
人(Human)瘦素(LEP)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）瘦素（LEP）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被瘦素（LEP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素（LEP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。
ELISA操作步骤
Envirology ELISA试剂盒说明书 试剂盒内容物： ●Cry1Ab/Cry1Ac 抗体包被固相板 ●Cry1Ab/Cry1Ac 阳性对照组 ●Cry1Ab/Cry1Ac 酶结合物 ●底物 未提供的物品： ●TPBS清洗缓冲液（PBS/0.05% Tween-20 wash buffer），常温保存，最多一年，然后丢弃。 ●萃取缓冲液（PBS0.55% Tween-20）。可以将0.5 ml Tween-20加入到100 ml 上一步的TPBS 缓冲液内制得。不使用时放在冰箱内冷藏，ELISA分析时升至室温使用。 ●HCL(1 Mol/L) 终止液。将83 ml盐酸溶液（37%）到917ml蒸馏水或去离子水中制的。 配置过程在通风橱内操作。室温下保存可使用2年。 ●一次性吸管，可调节排气移液枪，记号笔，parafilm膜等。 实验步骤： ●此步在15min内完成。加50ul 到板孔内，随即在相应板孔内进行如下操作，加50ul 萃取缓冲液作为空白对照，加50ul Cry1Ab阳性对照，加50ul样品萃取物到板孔内。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。注意勿使内容物溅出！ ●盖上盖子勿使水分蒸发，并在室温下孵化1~2小时。如果有孔板摇床，可在200 rpm速 度下摇动孔板。注意：根据组织萃取方法，用户应该决定一个合适的孵化时间，以使得到最佳结果。 ●孵化结束后，小心移去盖子并将孔内液体甩到废水池内，要剧烈甩弃，尽量甩尽孔内液 体。用TPBS清洗缓冲液清洗板孔（300ul/孔），然后甩尽缓冲液，3次重复。 ●每孔加100ul底物。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。盖上盖子室温下孵化15~30分钟。 ●加100ul HCL(1 M)终止液，并且混匀。此步能使孔内物质变黄。注意：在加入终止液 后30分钟内读板。 读板： ●调节读板仪波长到450nm。如果读板仪有双波长功能，可依据文献选600、630或者 650nm作为备选波长。 ●设置读板仪空白项到空白对照孔。
人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA检测试剂盒说明书
人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）含量。 试验原理： CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
免疫学--ELISA原理
ELISA原理－－操作规则（新手适用）点击次数：3347 发布时间：2010-7-12 8:45:33 ELISA原理－－操作规则（新手适用） 酶联免疫吸附实验 ELISA 一．实验目的 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。 二．实验原理 用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。由于酶摧化的是氧化还
原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。 辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以 mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。 ELISA的基本原理有三条： （1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； （2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； （3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格：96T/48T。 供应商：上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备： 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势： 全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。
人B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA检测试剂盒,ELISA试剂盒说明书
人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）ELISA检测试剂 盒,ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 上海乔羽生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本B细胞淋巴瘤因子2 （Bcl-2）含量。 试验原理： Bcl-2试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Bcl-2浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行 检测。先将Bcl-2和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合 物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Bcl-2的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗Bcl-2抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
ELISA试剂盒
1、elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2 优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。 3 回收率 elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL 被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。 4 发展 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 5 使用方法 （1）血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 （2）血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 （3）细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 （4）组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)-ELISA试剂盒说明书
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：E-EL-M0314 （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!） 声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，Col I浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。 标本收集: 1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集 血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可 检测。避免使用溶血，高血脂标本。 3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。 4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 （具体处理方法可参考：https://www.360docs.net/doc/a33183374.html,/news2.asp?tid=477 ） 6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融， 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做 预实验，以确定稀释倍数)。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸
ELISA原理及步骤
ELISA原理－－操作规则（新手适用） 点击次数：3347 发布时间：2010-7-12 8:45:33 ELISA原理－－操作规则（新手适用） 酶联免疫吸附实验 ELISA ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面：1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。2、研究抗酶抗体的合成。3、显现微量的免疫沉淀反应。4、定量检测体液中抗原或抗体成份。一．实验目的 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。 二．实验原理
用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。 辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP 的A（1cm 403nm mg/ml=）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在左右，最高可达。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在以上。 ELISA的基本原理有三条： （1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； （2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； （3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。 三、实验方法 基本方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
人表皮生长因子elisa试剂盒使用方法
人表皮生长因子elisa试剂盒使用方法 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 25pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本表皮生长因子(EGF)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人表皮生长因子(EGF)水平。用纯化的人表皮生长因子(EGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF)，再与HRP标记的表皮生长因子(EGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人表皮生长因子(EGF)浓度。 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
人白细胞介素ELISA检测试剂盒
人白细胞介素ELISA 检测试剂盒 人IL-17 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-17 。本试剂盒可以检测天然和重组的IL-17 。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。 试验原理： 人IL-17 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-17 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-17 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-17 的浓度呈比例关系。 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。 2．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 3．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 4．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血 液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 （8-OHdG）含量。 试验原理： 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
(完整版)Elisa常见类型及实验标准操作方法与常见问题
Elisa常见类型及实验标准操作方法与常见问题 酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种实验室常用的检测方法，广泛应用于测量溶液中的分析物（抗体或抗原）的浓度。与其他基于抗体的检测方法不同的是，酶联免疫吸附试验或酶免疫测定（EIA）通过与固相支持物的结合和系列洗涤步骤，实现特异性和非特异性相互作用的分离，并可通过最终有色产物的形成，定量分析原始样品中分析物的含量。 ELISA 实验通常以细胞培养上清液、血清、血浆以及组织裂解物等为样品。该实验必备三种试剂：固相的抗原或抗体；酶标记的抗原或抗体；酶作用的底物。根据样品的性质、检测的实验条件、试剂的来源，可设计出不同类型的ELISA 检测方法。 该实验可迅速分析大量平行样品，在基础研究和临床诊断实践中广泛使用。 一、直接ELISA 原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。 优点：操作流程简短，实验步骤少；无需使用二抗，避免了交叉反应；实验步骤少，操作不易出错。 缺点：实验中的一抗需要直接用酶标记，成本相对较高。 二、间接法ELISA
原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。 优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度；灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗；不直标一抗，可保留更多的免疫反应性；成本更低，使用标记抗体更少。 缺点：交叉反应几率升高。 三、双抗夹心法ELISA 原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕获抗体）与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品，保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体（检测抗体）保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。 双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。
人白介素18(IL-18)ELISA分析检测试剂盒使用说明书
人白介素18（IL-18）ELISA分析检测试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（IL-18）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素18（IL-18）水平。用纯化的转化生长因子（IL-18）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（IL-18），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子（IL-18）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白介素18（IL-18）浓度。 试剂盒内容及其配制： 试剂盒成份96孔配置48孔配置 96/48人份酶标板1块板 （96T） 半块板 （48T） 塑料膜板盖1块半块 标准品：100ng/ml 1瓶 （1.0ml） 1瓶 （0.5ml） 空白对照1瓶 （1.0ml） 1瓶 （0.5ml） 标准品稀释缓冲液1瓶 （8.0ml） 1瓶 （4.0ml） 生物素标记的抗OT抗体1瓶 （8.0ml） 1瓶 （4.0ml） 亲和链酶素-HRP 1瓶 （12ml） 1瓶（5ml） 洗涤缓冲液1瓶 （20ml） 1瓶（10ml） 底物A 1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml） 底物B 1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml） 终止液1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml）
试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：45μ mol/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存 浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1 瓶 （20ml×30倍） ×1瓶 2-8℃保存 自备材料： 1. 蒸馏水。 2. 加样器：5ul、10ul 、50ul 、100ul 、200ul 、500ul、1000ul。 3. 振荡器及磁力搅拌器等。 样品收集、处理及保存方法： 1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 ×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液……1000 ×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000 ×g离心10分钟，取上清液。 5、保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 人白介素18ELISA试剂盒操作注意事项： ●试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 ●实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 ●不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
人胰高血糖素(GC)ELISA试剂盒说明书
人胰高血糖素(GC)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：20 pg/ml -400 pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人GC，且与其他相关物质无交叉反应。 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中GC含量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗体的微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的另一株单抗，经过彻底洗涤后用底物显色。颜色的深浅和样品中的GC呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。 2.标准品（Standard）：4瓶（冻干品）。 3.酶结合物（HRP-conjugate）：1×6ml/瓶。 4.底物溶液A（Substrate A）：1×7ml/瓶。 5.底物溶液B（Substrate B）：1×7ml/瓶。 6.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。 7.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。