各级菌种制作方法
1,母种:又叫一级种,用直径18-22cm的试管制备.常用配方:去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂10-20克,水1000毫升,先把土豆去皮称重,切成小块煮至熟而不烂,过滤加水至1000毫升,再把琼脂剪成小段,放入锅内,边搅边煮,待琼脂溶化后加入葡萄糖,由于琼脂质量各有不同加入份量要看情况而定，装管前取一小勺浮在凉水中冷却观察其硬度适合然后分袋试管,用棉花塞塞住试管口,放入小高压锅内灭菌,当压力表达到个压力时,再灭菌30分钟,取出试管放成斜面,放置2-3 天后,无杂菌感染再放入接种箱内接种,接了种的试管放入培养室内进行培养,温度要求25℃左右,相对湿度75%以下.
2,原种:二级种,一般采用原种瓶和罐头瓶.培养料不要装的太满,装至瓶肩.原种的制备多采用谷粒种,锯沫种和棉子壳种.
①谷料种:用玉米,小麦为原料,精选后煮沸,使种子变软即成,不要煮的太熟,开花.熟后离火泡5分钟（不开盖而能吸足水份）而后装瓶,用小型或中型高压锅灭菌,放至温度25℃左右接入母种,放培养室内培养.一般25-30天即成.
②木屑种:木屑78%,麦麸20%,石膏1%,糖1%,料:
水=1:,拌匀装瓶,灭菌,接种培养.一般25-30天即成.
③棉子皮:因棉子皮各种营养丰富,一般不需要加
其它物质,只加1%的糖和石膏,用料倍的水拌匀即可,
而后装瓶,灭菌,接种,培养即可.
推荐通用配方：木屑（或秸秆粉或棉籽壳）：80
斤糠夫：6斤糖：斤菇耳壮：两石膏：1斤3,生产种:三级种可用木屑,玉米,棉籽皮,菌草,麦秸等为原料,根据所栽培的品种,采用不同的配方,用
聚乙烯或聚丙烯,直径15-28cm塑料袋装料,然后用常压灭菌锅灭菌,达到100℃后,再维持100℃8-10小时.待袋稍凉后出锅,使栽培袋温度降至25℃左右再用原
种接种,而后放到培养室的培养架上培养.
推荐配方：
■地栽木耳配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤
糠夫：5斤
豆粉：2斤
菇耳壮：两
白灰：1斤
■平菇猴头香菇金针菇配方
锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤菇耳壮：两
糠夫：5斤
白灰：1斤
菌种活化保存法
附件： 新菌株（乳酸菌）斜面培养法 1.购买新菌株（安瓿瓶装冻干粉） 2.菌种管开启方法一：按购买菌种上的说明进行操作即可。 3.菌种管开启方法二（本次实验方法均在水平层流台进行）： 3.1水平层流台开启风机跟紫外灯，半个小时 3.2 用浸过75 ％酒精的脱脂棉擦净菌种管。 3.3将菌种管顶端在火焰上加热，注意避免直接加热菌体或加热过度。 3.4 将无菌水滴至加热过的菌种管顶端，使玻璃开裂。 3.5 用锉刀或镊子敲下已开裂的菌种管的顶端。 4.用玻璃三角瓶121.0℃灭菌约10-30ml的生理盐水20分钟 5.将开封后的冻干粉倒入生理盐水中，摇匀 6.用接种环沾取生理盐水，转接与MRS培养基平板上，在36.5℃中恒温培养48-72小时 后，得到二代菌。 7.此时可以使用二代菌进行菌株扩大培养，或对其进行保存菌种。 注意事项： 1 菌种活化前，请将冻干菌种管冷藏保存在5 ℃-10 ℃环境下。 3 菌种经过冷冻干燥后，生长延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。 4 菌种活化及使用过程应做好安全防护工作。 第二代第2 代)观察是否具有典型的菌落形态,然后挑取单一的纯菌落,进行革兰染色、镜检,观察其染色特征及菌体形态,并进一步做生化鉴定实验以确定菌种。第三代为工作用菌。 乳酸菌菌种保存法 方法一：斜面保存法（略） 方法二：20%甘油保存法 器材：冻存盒、冻存管(2ml装)、甘油（丙三醇）、MRS肉汤培养基、1ml移液器及枪头、酒精灯、水平层流台、高压灭菌锅 操作步骤： 1.在水平层流台中用接种环挑取所需保存的的菌株放于灭菌过的MRS肉汤培养液，进行 36.5℃恒温培养48小时 2.配制40%的甘油，用移液器移取0.5ml于冻存管中，放于冻存盒 3.用报纸将冻存盒包扎好，放于灭菌锅中灭菌（121.0℃、20Min） 4.在水平层流台中，用移液器移取0.5ml培养后的MRS肉汤培养液加入到冻存管中，拧 紧盖子，摇匀，标识。 5.在冻存盒外也做好操作人，日期，所保存的菌种等信息标记 6.将冻存盒放于保鲜袋中，放入冰箱的冷冻室层进行保存，一般可以保存至两三年。 7.若是需用，那一冻存管样进行培养即可。 实验室菌种激活方法
自制EM菌制作方法
自制EM菌制作方法 一：【操作方法】 将1公斤白糖（红糖更好,最高用量2.5公斤，用量越大，浓度越高）倒入洗干净的塑料容器中（容量大于12公斤，因为需要预留产储气空间），倒入8公斤30-40℃的冷开水，倒入本品一包（500克），简单搅拌使本品溶解，然后密封放在室温25-40℃的环境下进行培养，每天开盖放气与搅拌1-2次，3-10 天完成培养即可使用（低于25℃时间会延长，产气大的阶段正是培养作用的高峰期，产气连续2-3天感觉没有增加或下降时表示已经完成培养）。在2个月内使用效果最好，每次取出后一定要密封保存，发现塑料桶胀气特别严重时要放气，放气时切忌注意安全，防止桶盖冲开击伤人等情况发生。 【使用方法】 生产完成的EM活菌使用方法与市场上销售的基本无差异，与等量的红糖（白糖、葡萄糖也可）加适量的40℃温水激活1小时以上后使用效果最佳；自产1个月内的也可以不添加糖，直接加温水稀释后使用。 二：种制作菌液的方法：（以一瓶为例） 1、先烧开10公斤的水，加一公斤的红糖，把红糖融化开，把红糖里面的有害菌消除。 2、然后把上述融化后的红糖水冷却到30~40度情况下加1瓶菌种 3、然后把10公斤的菌水整体装进一个大塑料壶或者其他的容器中，要密封发酵，不能漏气。不要装的太满，要预留10-15%的缓冲空间，在发酵过程中会产生气体，装满容易涨破塑料壶。 4、发酵7-12天天左右，温度低要多发酵几天，打开瓶口，有气体产生。闻到酸甜闻到就证明发酵成功。（低于15度不能发酵；15-20度发酵20-15天；20-30度，发酵15-10天；30-40度发酵6-10天） 5、发酵成功后的菌液如果一次不能大量的使用完，就用小瓶子分装密封保存。使用一瓶打开一瓶。技术很简单， 三：EM菌液制作方法，em菌种发酵方法，EM使用方法 EM菌种制作EM菌液的方法以制作50公斤菌液为例子 原料准备：能够密封的塑料桶（容量50公斤）红糖（5公斤）菌种（5瓶）无菌干净的水（深井水，凉开水，或者放置2天的自来水）
菌种活化_操作方法
低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化 A. 低温保存管之临时存放及解冻 1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。 3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。 4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。 B. 菌株活化: 在无菌操作下 1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。 2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。 C. 划线法 1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。 2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。 3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。 4. 灼烧接种环，将接种环归位。 D. 图示 （1）金属接种环
（2）平板划线法 冷冻干燥管之开管说明 下列步骤请在无菌环境下操作： 1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。 2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。 3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。 4、( a ) 适用于细菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。 ( b ) 适用于霉菌、酵母菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml 无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。 5、取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌L 型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之。 6、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期( lag period ) 较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养(Subculture) 后才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。 7、若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。 8．未开封之冷冻干燥管，请冷藏于4℃冰箱，切勿冷冻保存。
育出优质的平菇菌种方法
菌种分母种、原种和栽培种。通常也称一级种、二级种、三级种,其培育方法各异,现将其技术要点阐述如下: 1、母种培养:是指用组织分离或孢子分离得到的菌种。母种培养基的制备通常用土豆洋菜培养基。配制1000毫升培养基,用土豆200克,琼脂18-20克,葡萄糖20克。 做法:先将土豆洗净去皮,切成蚕豆粒小块,放1000毫升水中煮沸30分钟,用6-8层纱布过滤,补足损失水分。将琼脂加入溶化后,加进溶解的糖,补充水分至1000毫升。以后分装试管,每管装量1/5-1/4,并加棉塞、包纸。在1.2公斤压力下灭菌30分钟,趁热摆成斜面。冷却后置于25℃-27℃条件下观察无杂菌即可接种。一支母种可转管25-30支。 在无菌操作下接种的试管置于25℃左右恒温条件下培养,半个月左右菌丝可长满试管。培养过程中应注意除掉杂菌污染的试管。培养好的母种移入冰箱,在4℃条件下保存半年,或室温下保存三个月。 2、原种培养:原料可用木屑或棉籽皮。木屑培养基配方:木屑78%,麦麸或米糠20%,糖1%,石膏1%。棉籽皮培养基配方:用50公斤棉籽皮加土豆浸出汁水3%,(1.5公斤土豆切成泥煮沸30分钟的滤液),糖0.1%,硫酸镁0.1%。 做法:培养料加水拌均匀,湿度以用手紧握料,指缝内见水珠而滴不下来为宜,一般料水比1:1.2-1.3。然后装瓶,装瓶方法是边装边将瓶轻轻地抖动,使瓶上下部紧密适中,装至瓶肩部将料压平,洗净瓶口内外的培养料,加棉塞包纸捆好放进高压消毒锅内进行灭菌,在1.5公斤
压力下灭菌一小时。冷却后,在无菌操作条件下接种。将试管中母种接入瓶中,一支母种可接4-5瓶原种,接种后置于25℃恒温条件下培养一个月左右菌丝可长满瓶,即为原种。 3、栽培种培养:栽培种的制备实际上就是原种进行一次扩大培植。栽培种木屑培养基的配方同原种培养的配方。棉籽皮培养基的配方也同原种培养的配方。装瓶后灭菌,在无菌条件下,把原种菌种接入栽培种瓶内。一瓶750毫升原种可接80-100瓶栽培种。接种后置于25℃恒温条件下培育一个月左右,长满瓶后即可播种。在培养原种和栽培种时,接种后每隔2-3天要检查一次, 直至菌丝长满料面后每周检查一次。拣出有杂菌污染的菌种,并远离培养室处理掉。
菌种活化-操作方法
菌种活化-操作方法-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化 A. 低温保存管之临时存放及解冻 1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。 3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。 4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。 B. 菌株活化: 在无菌操作下 1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。 2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。 C. 划线法 1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。 2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。 3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。 4. 灼烧接种环，将接种环归位。 D. 图示 （1）金属接种环 （2）平板划线法
EM菌液制作方法与配方
E M菌液制作方法与配方 Prepared on 24 November 2020
EM菌液制作方法与配方 信息来源：广宇生物加入日期：2009-2-13点出：384 一、【ＥＭ原液发酵方法】：制作ＥＭ菌种发酵液——EM原液 EM菌液（100公斤）=12支EM菌种+70公斤水+15公斤红糖+食盐2汤勺+100公斤能够密封的水桶+前6天不要打开 注意：不要用自来水。红糖食盐用温水化开，最后加菌种，搅拌均匀，夏天3-6天，冬天10-15天左右，密封即可。 二、【水产养殖水肥配方】 1、有机肥：（发酵动物粪便40%，桔杆或草粉10%，泥碳土20%、活性小肽%） 2、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）10% 3、活菌制剂：（EM原液）1% 4、复合氨基酸1%，复合维生素1%，多糖%，核酸%，腐植酸1%，蛋白酶%，淀
粉酶（共5%） 5、微量元素10%（N=%、P=4%、K=4%、Ca、Na、Mg、Cu、Fe、Zn、Mn、B、Si） 三、【高效种植微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）4% 2、活菌制剂：EM菌原液1% 3、动物粪便：80% 4、微量元素%、N=%、P=5%、K=5%（合计15%） 四、【种植叶面微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）12% 2、活菌制剂：（EM原液）80% 3、复合氨基酸1%，复合多维生素1%，多糖%，核酸%，腐植酸1%，蛋白酶%，淀粉酶%（合计4%） 4、微量元素%、N=%、P=1%、K=1%（合计4%）
五、【微生物饲料—全价料配方】玉米 小麦麸 大豆粕 棉籽粕 菜籽粕 微生物发酵秸秆粉 复合酶 复合微量元素 复合维生素 皮毛营养调控剂 无氟磷酸氢钙
2018-大肠杆菌菌种活化步骤-推荐word版 (6页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！ == 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ == 大肠杆菌菌种活化步骤 篇一：抑菌实验步骤 抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌 菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布， 划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸 取进行划线！ 涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂 布法 1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h) 2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养） 3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h） 培养基 MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋 白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5g MH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸 溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。 牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。 牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。 菌悬液的配制
将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养 箱中培养24 h，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL菌悬液）于 5 mL的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10- 10 、10-11）的浓度100μL做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL药品 溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度， 使其含菌体数为103 cfu/mL，即为供试菌悬液。 抑菌作用初步筛选 将灭菌固体培养基加热至熔化，待冷却至50℃时，每20ml培养基倒入无菌培 养皿中。待平板自然晾干后，分别移取0.1ml待测药品，0.1 mL供试菌悬液， 均匀涂布于加药平板上，每个处理3次重复。(涂布30min后再倒置)另设置对 照组，涂菌，以等量无菌水（溶解药品物质）代替药液。上述操作在超净工作 台内进行。将做好的细菌平板在37℃恒温培养24 h，统计菌落个数，按照下式计算抑菌率。 抑菌率=对照菌落数-处理菌落数?100% 对照菌落数 实验结果表示为：平均数±标准误差（Mean±SDE）。 菌种活化：37℃培养；约24H 挑取两环于50ml 液体培养基上活化：先恒温150r/min震荡12h,再静置培养 8-12h。达到稳定期后，4度保藏，备用。 生理盐水：8.5gNaCl加入到1000ml 蒸馏水中，121度高压蒸汽灭菌15-20min 即可。 篇二：大肠杆菌电击转化流程 大肠杆菌感受态制备及电转化流程 1. 细菌电转化感受态细胞的制备 准备：50mL离心管3个 10%甘油≥200mL 灭菌蒸馏水≥100mL 冰盒（50mL离心管预冷）2个 1）由-80℃冰箱保存的菌种划单菌落，过夜培养16-20h。晚上将新鲜的菌落接 种于装有20mLLB培养基的250mL三角瓶中，37℃振荡培养过夜（约12h），转 速控制在200rpm； 2）第二天，取过夜培养物以1%接种量（可适当加大）转接入2个含50mLLB培 养基的 250mL三角瓶中，37℃剧烈振荡（200rpm）培养至OD600约为0.5~0.6；
食用菌菌种母种1级种简法复制创新技术
食用菌母种1级种简法复制创新技术 摘要：食用菌菌种母种1级种简法复制创新技术，是利用优质的极品食用菌脱毒菌种母种试管在全敞开式无菌开放条件下进行菌丝体试管50倍扩管、分离移植、简法复制的生产创新技术。具有生产工艺简单、操作技术便捷、原料易得、成本低廉、经济适用等技术创新优势，食用菌从业者和创业者均可无门槛的复制应用和受益。该创新技术是湖北省宜都市湾市食用菌天麻繁育场技术总监胡文华研发成功的。 关键词：食用菌母种1级菌种培养基复制创新技术 概述：食用菌菌种1级母种的复制生产是食用菌从业者和创业者的入门技术。由于该入门技术除了高昂的生产设备投入之外，还需要繁杂的技术工艺和精湛的操作技能作为支撑，因而一直留存于科研院所和少数食用菌科研工作者手里，使众多食用菌从业者和终端生产者望而生畏，只有花重金购买。湖北省宜都市湾市食用菌天麻繁育场技术总监胡文华，经过30多年研发成功的食用菌菌种复制简法生产创新技术，其复制生产创新工艺和操作技能已经简化到了简单得不能再简单的程度，任何食用菌从业者和食用菌终端生产者均可无条件的简法复制创新生产，驱动了食用菌产业创亿万财富之梦想。现将其简法复制创新生产技术介绍如下： 1. 食用菌菌种母种试管培养基简法复制生产 1
食用菌菌种1级母种（18毫米×180毫米玻璃试管装，简称试管母种，下同）培养基使用的原料是马铃薯、葡萄糖、琼脂（简称PDA 培养基），以及在PDA培养基中再添加蛋白胨等价格昂贵的物质原料成为“加富培养基”，其工艺繁杂，生产操作费时费力。食用菌菌种母种试管培养基简法复制生产采用湖1北3省8宜72都市52湾市33食用58菌天麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷物为原料，谷粒、麦粒、玉米粒均可，简称颗粒培养基（下同），又称天然无公害培养基。这种颗粒培养基制作方法特别简单，取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀后，就可以分装试管了。1支试管（18毫米×180毫米玻璃试管，下同）装入颗粒培养基约10克，成本不足1角钱，棉花塞堵封试管口。一次可根据生产需要，制作分装试管500支～1000支。分装完后，分别放入家用压力锅内消毒灭菌40分钟，取出冷却至常温后即为食用菌菌种母种试管培养基（简称试管培养基，下同）。 2. 食用菌菌种母种试管培养基接种 以平菇为例：购买或自制食用菌脱毒母种试管10支～20支（自制方法参见《食用菌脱毒菌种简法生产技术》。接种用胡文华发明的1专3利0产8品5食1用6菌86无16菌开放接种器。这种食用菌无菌开放接种器专利产品是一种不用电、不用药物、不用酒精灯、不用熏蒸消毒灭菌，且可直接全敞开式运作的接种设备。由无菌净化装 2
EM菌液制作方法
一、EM菌液制作方法( 细菌生长繁殖的条件) 1、液体EM菌种的制作方法：按EM固体原菌种10克：红糖0.1公斤：水1公斤（100度白开水放凉到40度时的无菌水）的比例混合均匀，密闭保温（人体温度35-37度）发酵，每1-2天摇动一次，5-7天即成，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭、放置阴凉干燥处，通常可保存18个月。可以作为液体菌种使用。请参考( 细菌生长繁殖的条件) 2、液体菌种扩陪成EM原液：按液体菌种1公斤：红糖1公斤：水10公斤（100度白开水放凉到40度时的无菌水）的比例混合均匀，密闭保温（人体温度35-37度）发酵，每1-2天摇动一次，5-7天即成，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭、放置阴凉干燥处，通常可保存18个月。用时按照说明书稀释比例稀释。请参考( 细菌生长繁殖的条件) 3、用EM菌液制做植物防虫、杀菌液请参考( 细菌生长繁殖的条件) EM菌种、红糖、30℃以上白酒、清水按1：8：1：100的比例备料。 将等量的EM发酵液、红糖与酒及100倍的清水混合，搅匀盖紧，发酵5-10天左右，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭置阴凉干燥处通常可保存6－18个月。
EM防虫液能增强植物新陈代谢，强化叶片保护膜的角质层，防止病原菌进入，它的酯成分在草食害虫体内不分解，产生生理障碍致死，对线虫等多种害虫有显着效果，但应及早使用，虫害大面积发生时使用效果甚微。 使用时的标准稀释倍数为1000-500，雾状喷施，叶片的正反两面都喷到。 二、【生产水产养殖水肥配方】请参考( 细菌生长繁殖的条件) 1、有机肥：（发酵动物粪便40%，桔杆或草粉10%，泥碳土20%、活性小肽%） 2、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）10% 3、活菌制剂：（EM原液）1% 4、复合氨基酸1%，复合维生素1%，多糖%，核酸%，腐植酸1%，蛋白酶%，淀粉酶（共5%） 5、微量元素10%（N=%、P=4%、K=4%、Ca、Na、Mg、Cu、Fe、Zn、Mn、B、Si） 三、【生产高效种植微生物肥料配方】请参考( 细菌生长繁殖的条件) 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）4% 2、活菌制剂：EM菌原液1% 3、动物粪便：80% 4、微量元素%、N=%、P=5%、K=5%（合计15%）
平菇菌种的制作(精)
平菇菌种的制作 一、目标要求: 1、要求学生掌握平菇菌种的制作技术及操作过程; 2、使学生掌握制作过程中的消毒处理; 3、使学生掌握种菇的选择、培养基的制作等操作技术。 二、使用工具: 灭菌高压锅、培养基料、消毒液、无菌箱、接种刀、平菇种菇、酒精灯、试管及试管架。 三、教学重点: 菌种的接种过程及消毒处理。 四、教学过程: 我们生活中都吃过平菇,但是你知道平菇的菌种是怎样制作的吗?今天我们就共同学习平菇菌种(所谓菌种指的是第一代一级种,也叫原种的制作过程及应注意的几个问题。 1、培养基的制作: 原料:马铃薯200克,树脂胶30克,葡萄糖粉20克,磷酸二氢钾10克。 制作方法:将马铃薯去皮切块,加200克水,在高压锅内灭菌2小时,然后过滤(80目滤网;分装试管,以每根试管容量的1/4为宜,放置试管架上(以45度倾斜角为宜,待冷却后,轻塞上无菌棉塞,培养基就算制成了。 2、接种场地的消毒处理:
在培养基放入接种箱之前,用高锰酸钾的2000倍液或福尔马林的2000倍液对接种室的各个地方进行喷洒,不留死角。对接种箱的消毒,可用高锰酸钾5克在容器内点燃,密闭10分钟即可。 3、种菇的选择: 平菇的种类很多,应选择个大、色泽光亮好并且市场销售快的平菇作为种菇,待菌盖展平时,说明平菇已经成熟,可以弹射孢子了。一般来说,一个成熟的菌盖可以弹射出1.04亿个孢子。选取一个个大、无病害的菌盖放置在接种箱内。 4、接种: 接种工作在接种箱内进行。具体操作步骤为:点燃酒精灯,打开培养基试管的棉塞,将接种刀在酒精灯上烧一下,冷却后在种菇的皱褶部位横竖各切两刀,挖下比黄豆粒稍大一点的种块,用刀面托着从酒精灯上边绕过去,放到试管中的培养基面上,并轻轻塞上棉塞。到此接种工作就基本完成了,关闭接种箱,温度保持在22度—24度。 5、接种后的观察: 在22度—24度的温度中,5天后会出现一对鞭毛状的菌丝,孢子是分裂生殖,很快就能生长出细白的菌丝体,菌丝长满试管后,又回头生长,丝体浓密,说明成熟。 菌丝成熟后,可进行第二代、第三代的菌种培养。 6、信息反馈: 同志们,今天关于平菇菌种的制作的学习,你从中学到了什么?学会了哪些?还存在哪些方面的问题,请提出来,我们可以共同探讨。 希望我们今天所学的内容对大家勤劳致富有所帮助,今天的课就上到这里。同志们,再见。 附:板书设计
em菌液制作发酵床的步骤
em菌液制作发酵床的方法： 材料准备：锯末、稻壳、盐、土、农盛乐em菌液（也可使用发酵床菌种，比较经济划算）。（没有锯末或者稻壳也可以用玉米芯和秸秆代替，最好用锯末（锯末耐腐烂性比较好，用的时间会比较长）） 材料比例：锯末60%左右，稻壳30%左右，土10%，盐0.3%，农盛乐EM菌液2L/m3。材料打碎：物料粗细大小标准是2mm以上5mm以下。垫料太粗没有截口，微生物难以侵入，发酵效果不理想或者根本不发酵。物料太细其碳化速度太快，没等到发酵，就已经白白浪费掉了。 水分调节：水分的控制要根据垫料的干湿程度来决定加水的多少，要求垫料混合后水分应在50%左右。（即手抓成团，不滴水，手上留有水印，放下一触能散即可） 发酵方法： ①将所有准备好的物料（物料可以因地制宜，自由搭配）按比例混合均匀。 ②将农盛乐EM菌液加水稀释（稀释倍数根据物料水分来定），均匀喷洒在物料上，边喷洒，边翻堆，直至拌均匀，水分调节在50%左右，水分不足时可另外加水单独喷洒（注，不要一次性把计算好的水全部加入，最好分次加，这样才能更好的控制水分，不至于水分过大而影响发酵质量）。农盛乐提供发酵床专用菌种，可以制作养猪养鸡养羊养牛养鸭养鹅发酵床，另外提供发酵床技术支持，保证成功。农盛乐发酵床菌种一瓶30元，可以制作10平米的发酵床。 农盛乐em菌液主要是由放线菌、乳酸菌、芽孢杆菌、枯草杆菌、光合细菌、酵母菌等七大类微生物中的10属80种有益微生物复合而成，有效活菌数≥200亿cfu/ml（%）。我们提供发酵床制作技术支持，量大的可以上门指导。 发酵床垫料发酵成功的标准： 刚发酵好的垫料手感松软，略带酸香或清香味，有时会见到白色的菌丝，温度在20～40℃左右（这个和发酵所处外界温度有关系）。（15-20度发酵15-10天；20-30度，发酵10-7天；30-40度发酵7-4天，发酵时间越长效果越好） 发酵床垫料的更换： 牲畜每批次转栏或出栏后，应对圈舍进行全面立体的消毒处理，然后补充部分新鲜木屑或秸秆粉及适量农盛乐EM原液，调节水分至50%左右，将垫料在圈栏中堆积起来进行发酵处理，温度上升到50℃以上高温24小时后，即可作为发酵床垫料重新使用。
菌种活化方法
低温保存管（cryo tube）中之一般菌种临时存放及活化 A. 低温保存管之临时存放及解冻 1. 低温保存管（cryo tube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。 3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。 4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。 B. 菌株活化: 在无菌操作下 1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。 2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。 C. 划线法 1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。 2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。 3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。 4. 灼烧接种环，将接种环归位。 D. 图示 （1）金属接种环
（2）平板划线法 冷冻干燥管之开管说明 下列步骤请在无菌环境下操作： 1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。 2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。 3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。 4、( a ) 适用于细菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。 ( b ) 适用于霉菌、酵母菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。 5、取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌L型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之。 6、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期 ( lag period ) 较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养 (Subculture) 后才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。 7、若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。
菌种筛选方法
常用的菌种的筛选方法如下： （1）施加选择性压力分离法 主要是利用不同种类的微生物其生长繁殖对环境和营养的要求不同，如温度、pH、渗透压、氧气、碳源、氮源等，人为控制这些条件，使之利于某类或某种微生物生长，而不利于其他种类微生物的生存，以达到使目的菌种占优势。而得以快速分离纯化的目的。如可以控制培养时的氧，可将好氧微生物和厌氧微生物分开；通过控制温度，可将嗜热微生物和非嗜热微生物分开；控制pH，可将嗜酸、嗜碱微生物分离等。在分离培养基中也可以加入不同的抗生素或试剂来增加选择性。如在分离放线菌和细菌时，可加入抗真菌抗生素；分离真菌时，可加入抗细菌药物。 （2）随机分离方法 有些微生物的产物对筛选没有直接的选择性指示作用，因此常采用随机分离方法分离。 A、抗生素产生菌的分离抗生素产生菌的分离常用抑菌圈法。实验必须用工具菌：采用抗生素的敏感菌，传统上常用金黄色葡萄球菌和枯草杆菌。 B、抗肿瘤药物产生菌的分离抗肿瘤药物产生菌的分离常用方法：生化诱导法、SOS生色检测法、DNA修复能力突变株。原理是利用DNA的损伤，微生物发生突变。B1、生化诱导法：将大肠杆菌的lacZ基因连接在λ噬菌体的PL启动子下，当DNA损伤时，诱发λ阻遏物CI分解，PL启动子启动lacZ基因转录，测定表达的?-半乳糖苷酶活性，来检测药物的存在。B2、SOS生色检测法：利用当DNA损伤时，可活化yecA蛋白，进而分解噬菌体的阻遏蛋白，再引起sifA基因启动lacZ基因转录，测定表达的?-半乳糖苷酶活性，来检测药物的存在。 C、生长因子产生菌的分离以氨基酸产生菌为例，介绍筛选方法。首先将待试菌接入加了抗真菌的化合物（如亚胺环己酮）的分离培养基中生长，然后采用影印法，将菌落复印到能支持氨基酸产生菌生长的培养基中，培养2-3天后，用紫外线杀司长好的菌落，再往此平板上面铺一层相应营养缺陷型菌株菌悬液，培养16小时后，被杀死的氨基酸产生菌的菌落周围应有一检测菌的生长圈。 （3）目的微生物分离 A、根据形态筛选突变株 B、根据平板菌落生化反应筛选变株透明圈法、呈色圈法、抑菌圈法、浑浊圈法等。①透明圈法：在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使培养基混浊。能分解底物的微生物便会在菌落周围产生透明圈，圈的大小初步反应该菌株利用底物的能力。该法在分离水解酶产生菌时采用较多，如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核酸酶产生菌都会在含有底物的选择性培养基平板上形成肉眼可见的透明圈。在分离某种产生有机酸的菌株时，也通常采用透明圈法进行初筛。在选择性培养
自制培育EM菌原液的方法
如何自制EM菌液 EM菌广泛应用在水产、种植、养殖等领域，越来越多的人在使用EM菌，那么我们怎样通过自制EM菌节省成本呢？ EM菌是有益微生物复合菌群，包括光和菌、乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌、醋酸菌、双歧杆菌、放线菌七大类80多种菌，所以自己要配置的话，不容易搜集这么多菌、但是却可以根据自己用途单独搜集某单类菌。 比如说，我们把米饭用盒子装好，然后放入密林中埋起来，过一周时间，取出盒子，就能看看到盒子里的米饭长了一层白色的绒毛，这就是土著菌，当然还会有其他的腐败细菌。 新疆畜科院饲料所王文奇说，EM菌原露都是购买的，因为要制作EM菌原露需要各种微生物，原料很复杂，一般自制是不可能的，所以建议需要时最好到正规厂家购买。 但是，EM菌原液在用量大的时候也是一笔不小的开支，那么我们怎样降低EM菌的应用成本又可以自制培育正规的EM菌原液呢？ 河南农富康生物科技有限公司为大家解决了这一问题，农富康公司推出EM菌原种，既休眠状态下存储的粉末状的EM菌，使用时候加入培养液激活便可大量繁殖培育出EM菌原液，除了包含上述菌群外，农富康EM菌种还加入了硝化细菌、土著菌等两大类20多种有益细菌、扩展了EM菌的应用功能提高了使用效果。 使用农富康EM菌种培育EM菌原液时，一瓶农富康EM菌种可培育10公斤原液，使用时候按1：200的比例稀释，也就是说一瓶农富康EM菌种可配置200公斤稀释液，而一瓶农富康EM菌种的售价仅为35元，这也是农富康公司对7年来新老客户对农富康公司一如既往支持的回馈。 所以呢，在降低成本的同时，为了保证EM菌使用质量我们可选择农富康EM菌种自行配置EM菌原液。 农富康EM菌种配置菌液的方法如下： 以制作50公斤菌液为例子 原料准备：能够密封的塑料桶（容量50公斤）红糖（5公斤）农富康菌种（5瓶）无菌干净的水（深井水，凉开水，或者放置２天的自来水） 步骤1、先把塑料桶装入40公斤无菌干净的水。
平菇菌种的生产技术
平菇菌种的生产技术 一、母种的培养： 母种的培育是制种工作中的关键，它的优劣直接影响到原种、栽培种的质量好坏。母种可以由孢子萌发而成，也可以从子实体组织分离或用平菇斜面的菌丝体移接扩大转管制作。 1、培养基：平菇母种分离和菌种保存宜用普通培养基（PDA）。平菇菌丝在此培养基上生长速度较慢。PDA配方和制作方法是：将马铃薯200克去皮切成蚕豆大小的块加1000毫升蒸馏水，用文火煮沸20-30分钟过滤取汁，加葡萄糖20克，琼脂15克，置于铝锅中加热，待琼脂充分溶化后搅匀，定容至1000毫升，趁热分装于试管中，每管装约12毫升，1000毫升可分装80---100支试管。分装时要用长管漏斗，不要使培养基沾到试管口上，以免沾湿棉塞污染杂菌。塞棉塞要用普通棉花，塞入试管要松紧合适。然后，每10支试管用皮套捆成一小捆，每5小捆再捆成一大捆，棉塞用牛皮纸包好灭菌。取出试管倾斜排放在桌面上，试管斜面长度应为管长的2/3，冷却凝固后，取一些试管放入恒温箱中27--30度空白培养10天，经无菌观察，确认无杂菌，才能大量用于分离制种或转接生产母种。 2、接种：用无菌操作从平菇子实体组织中分离黄豆粒大小的一块，接入PDA培养基的试管斜面上，置恒温箱或培养室（25℃±2℃）培育，3天后菌丝生长洁白、健壮，7天后菌丝长满斜面。接种要在严格的无菌条件下进行。如果没有出现杂菌，分离培养就算成功。但该菌株是否优良，生产价值如何，还需出菇栽培试验。 二、原种的制备： 由试管母种初步扩大繁殖到固体种（原种）。由原种再扩大繁殖应用于生产，叫生产种或栽培种。母种菌丝数量太少，在实际生产中必须把一级种扩大繁殖成二级种（即原种）才能满足生产种的需要。好的原种菌丝密集、洁白、长势均匀、粗壮、呈棉毛状，有爬壁现象。原种长满瓶之后，应立即扩大为栽培种，否则一旦营养耗尽，菌丝就会衰老甚至死亡。 原种的制作过程是：拌料（含水量60%左右）、装瓶、压实、打洞、洗瓶、用塑料膜包扎瓶口、灭菌、冷却、接种、培养。 1、培养基配方：棉籽壳97克，石膏粉1千克，石灰2千克，水约60千克。 2、拌料：含水量约60%。将棉籽壳、石膏粉、充分拌匀，将石灰溶解在水中，然后边拌边加石灰水，石灰水加完后再充分拌匀。 3、装瓶：将配制好的培养料装入培养瓶中，装料时尽量做到四周紧实，中间松，并在中心打一小洞，以利接种。 4、洗瓶，加塑料膜包扎：将装好料的瓶子，用清洁湿巾把瓶子的四周及瓶口擦洗干净，以免杂菌污染，用塑料膜将瓶口扎好。 5、灭菌：装瓶后应立即灭菌，不能隔日。 6、接种：将斜面母种划成5-8块，用无菌接种钩钩下一块放入原种培养基上（注意将长有菌丝的一面朝向原种培养料），使其直接与培养基接触，以利生长，置恒温箱或培养室（25℃±2℃）黑暗培育。 三、栽培种的生产 原种扩大繁殖就成栽培种。栽培种也就是直接用于大生产的生产种，又称三级种。平菇栽培在培养料配方、制作、灭菌、接种和培养等方面与原种生产相同，其培养容器用玻璃瓶子，也有用塑料薄膜袋的。 制作栽培种时，由于数量多，往往比较粗放，培养场所不讲究。因此，播种之前也必须检查菌种有否带螨类或其它病虫害。如果发现菌种有螨或病虫害应及时杀灭及弃去不用。菌丝生活力强弱与菌龄有密切关系，它直接影响到栽培的成败。菌丝生活力减弱，播种后不容易成活或菌丝生长缓慢，时间长了菌丝没布满培养料则易感染杂菌，往往造成栽培失败。所
EM菌技术
em菌液制作技术 来源：河南中广农业信息开发有限公司发布时间：2009-05-19 16:00:43 查看次数：1631 1、EM菌液制作方法：按EM菌种10克：红糖1KG：水10KG（100度白开水放凉到40度的无菌水）的比例混合均匀，密闭保温（人体温度35-37度）发酵，每1-2天摇动一次，5-7天即成，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭置阴凉干燥处通常可保存18个月。用时加水1：500倍稀释后使用。 2、用EM菌种发酵液制做植物防虫、杀菌液 EM菌种、红糖、30℃以上白酒、清水按1：8：1：100的比例备料。 将等量的EM发酵液、红糖与酒及100倍的清水混合，搅匀盖紧，发酵5-10天左右，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭置阴凉干燥处通常可保存6－18个月。
EM防虫液能增强植物新陈代谢，强化叶片保护膜的角质层，防止病原菌进入，它的酯成分在草食害虫体内不分解，产生生理障碍致死，对线虫等多种害虫有显著效果，但应及早使用，虫害大面积发生时使用效果甚微。 使用时的标准稀释倍数为1000-500，雾状喷施，叶片的正反两面都喷到。 EM的主要成分 来源：河南中广农业信息开发有限公司发布时间：2009-05-19 15:53:29 查看次数：153 ＥＭ由整个生态系统都存在的气大类微生物中的多种有益微生物组成。EM的生产方法是采用适当的比例和独特的发酵工艺，把经过仔细筛选出来的好气性和嫌气性有益微生物混合培养，形成多种多样的微生物群落，这些菌群在生长中产生的有益物质及其分泌物质成为各自或相互生长的基质（食物），正是通过这样一种共生增殖关系，组成了复杂而稳定的微生态系统，形成功能多样的强大而又独特的优势，其最初发现人为日本国琉球大学教授比嘉照夫。 １．光合菌群（好气性和嫌气性）
EM固体菌种制作方法
EM固体菌种 本品由双岐菌、乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌、酵母菌、放线菌、醋酸菌等单一菌种复合发酵提纯而成，每克含有益总菌数≥1000亿个。本品促进畜禽增重率提高10～30%。使用本品所产的肉、蛋、奶能延长保鲜和储存。长期应用本品，综合效益极为显著。 【主要成分】双岐菌、乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌、醋酸菌、光合细菌、解磷钾菌等 【产品名称】EM菌种 【产品性状】粉剂【批准文号】豫饲添字（2015）09003 【产品规格】10克/瓶；10瓶/盒【生产许可】豫饲添（2014）H07009 【有效日期】3年【贮藏方法】密封避光阴凉处 【制作方法】 第一步：材料准备如下：菌种1瓶；水36斤；红糖4斤；发酵桶1个；食盐20克（选加）；尿素20克（选加）； 第二步：把4斤红糖加入36斤水中后加热烧开去除杂菌；待冷却到40度以下后再装入发酵桶内。并加入1瓶菌种。 第三步：密封好发酵3到7天时间即可制作成功；成功后原液检测标准：PH在3到5之间；镜捡活菌100亿每毫升。 【注意事项】 第一：原液制作时可以加入20克食盐和20克尿素；加入的话会好些。这个是选加的；没有不加也可以。 第二：干净的水源和红糖也可以不烧开加热；但加热可以清除绝大部分杂菌；这样效果好些。 第三：制作过程中会有很强气压产生；可以每天打开放气后接着马上盖起来继续发酵；或安装自动排气阀。 第四：发酵温度最好控制在30到35度最好；低于10度不发酵；高于45度会烫死部分菌。 第五：冬天温度低需要延长发酵时间；但最好用电热毯或电灯；棉被等等包起来加温；或放太阳下晒。 第六：EM菌属于厌氧发酵；也就是说容器必须密封好发酵；密封好坏是发酵成败的关键因素。 第七：EM原液发酵饱和了PH值应在3到5之间；如高于5的话可以再延长发酵几天即可。 第八：黑糖；黄糖；葡萄糖；蜂蜜；都可以代替红糖使用；但白糖不行。 第久：制作好的液体请在12个月内用完；固体原种保存期是36个月。 第十：制作过程会有很大气压，建议使用塑料和不锈钢容器，严禁使用玻璃瓶和陶瓷瓶制作，以免意外。 第十一：瓶底有沉淀物为菌种载体，属正常情况；若瓶内有气体，请缓慢开启，以免菌液外溢。 【养殖专用菌种】 【作用机理】 1、EM有益菌可改善动物肠道内的微生物环境，帮助消化系统对食物的充分消化和吸收。 2、EM有益菌可激活动物体内上万种酶的活性；促进畜禽生长，提高动物繁殖能力。 3、EM菌可提高畜禽特异性免疫和非特异性免疫功能；达到动物抗病防病和减少发病的作用，代替抗生素。 4、EM有益菌可分解动物粪便中的有害微生物，明显消除圈舍粪便恶臭，改善饲养环境。 【作用用途】 1、EM菌种可以发酵微生物饲料、制作EM菌液（EM原露、EM原液）等微生物产品； 2、EM菌种能防治雏鸡白痢，中鸡球虫、脱肛和仔猪黄白痢、腹泻等消化道疾病； 3、EM菌种促进畜禽生长，提高动物繁殖能力，提高饲料报酬率、产蛋率和产肉率； 4、EM菌种可以用于发酵猪床，发酵猪床材料（锯末、秸秆粉、干草粉、黄土）； 【用法用量】 1、用发酵好的EM原液按1：300～500倍稀释后供动物饮用、混入饲料、喷洒到动物粪便上、发酵秸秆等； 2、治疗动物疾病时可加倍使用（1：100倍稀释）。
优质平菇菌种制作注意事项
优质平菇菌种制作注意事项 李峰，赵建选 （河南省新乡市农科院食用菌所，河南新乡453002） 摘要提出了平菇菌种生产中“三选择”、“十严格”、“三检查”等16条注意事项。 关键词平菇；优质；菌种；制作；保障；措施中图分类号S646．1文献标识码B 文章编号1004－8421（2012）06－694－02 基金项目河南现代农业产业技术体系食用菌创新团队。 作者简介李峰（1965－），男，河南新乡人，副研究员，从事食用菌研究。 收稿日期2012- 05-19平菇［Pleurotus ostreatus （Fr．）Kummer ］，中文商品名：平菇， 地方名：北风菌、蚝菌等，在生物分类学中隶属于真菌门担子菌纲伞菌目侧耳科侧耳属，是栽培广泛的食用菌。平菇含丰富的营养物质，每100g 干品含蛋白质20 23g ，而且氨基酸成分种类齐全， 矿物质含量十分丰富。平菇性味甘、温。具有追风散寒、舒筋活络的功效。用干治腰腿疼痛、手足麻木、筋络不通等病症。平菇中的蛋白多糖体对癌细胞有很强的抑制作用， 能增强机体免疫功能。常食平菇不仅能起到改善人体的新陈代谢，调节植物神经的作用，而且对减少人体血清胆固醇、 降低血压和防治肝炎、胃溃疡。十二指肠溃疡、高血压等有明显的效果。另外，对预防癌症、调节妇女更年期综合征、改善人体新陈代谢、增强体质都有一定的好处。近年来，平菇种植已成为河南省新乡市当地一个食用菌主要种植品种， 单辉县市每年秋季种植平菇规模就在1．5万个塑料大棚（320 360m 2 /棚）以上， 投料约在3．6亿kg ，2010年被命名为国家食用菌生产基地县，是河南省主要城市平菇产品集中供应地，平菇产品远销河北、北京、山西、山东等地。但是作为平菇种植最关键的一环———菌种生产，还存在许多不科学的地方，不能完全保证菌种质量，从而影响种植成功率， 影响部分菇农种植积极性。为此，提出平菇菌种生产“三选择”、“十严格”、“三检查”16条注意事项。1 选择菌种生产场所 选择附近无畜禽圈舍和畜禽养殖，场地通风良好、排水通畅、水电齐备、交通便利的区域作为菌种培育场所。2选择菌种培养基配方2．1原种培养基 2．1．1麦粒培养基。煮熟的麦粒95%+4%发酵好的棉籽壳+1%石膏。 2．2．2棉籽壳培养基。98%棉籽壳+1%石膏+1%石灰。2．2栽培种培养基 2．2．1棉籽壳主料培养基。棉籽壳98%、石膏1%、石灰1%、水分60 65%。 2．2．2玉米芯主料培养基。玉米芯40%、棉籽壳50%、麸皮 8%、石灰2%、水分60% 65%。 3选择菌种生产袋 生产者可根据生产季节、生产需要合理选用适宜栽培袋。3．1 高压灭菌 选用（15 17）cm ?（35 37）cm ，厚0．04 0．05cm 的聚丙烯袋。 3．2常压灭菌选用（15 17）cm ?（35 37）cm ，厚0．04 0．045cm 的低压聚乙烯袋。4严格控制培养室和培养基湿度4．1培养室空气相对湿度 应控制在70%以下。培养室湿 度超过70%，容易滋生杂菌，菌种生产培养期间污染率高； 4．2 培养基湿度应控制在60% 65%。培养基湿度的高低直接影响平菇菌种生产的成败和质量，水分过大（﹥65%），培养基透气性差，会直接影响菌丝生长，水分过小（﹤60%），菌种萌发缓慢，菌丝生长稀疏，活力下降。简易测量方法是：手握一把培养料，手缝间有水但不下滴为准。5 严格菌种灭菌程序 培养料灭菌是否彻底是决定菌种生产成败的关键，无论是采用高压灭菌还是采用常压灭菌都可以起到同样的灭菌效果，关键是必须按照操作程序进行。5．1 高压灭菌 灭菌时保证锅盖密封紧密不漏气，当锅内 压力达到0．05Mpa 时履行2 3次排气，彻底排除锅内冷空气；当锅内压力达到0．15Mpa （锅内温度127?）时保持1．5 2h （视培养基，灭菌量决定时间），灭菌结束后待锅内压力自然降至零时可打开锅盖。5．2 常压灭菌 当天装袋当天灭菌，灭菌时要保证汽包鼓 起时间不超过5h ，袋温达到100?（注意将遥感温度计的温度探头放在离地面3 4层栽培种中间部位，不可放在较高部位， 以免测温不准。）保持时间在12 14h ，锅内菌袋摆放时菌袋间一定要留有适当间隙，以利于灭菌时蒸汽循环通畅，蒸汽包内菌袋温度一致、灭菌彻底。6 严格无菌接种技术 接种操作一定要按无菌操作技术规程进行操作，对于农村生产种植户，最好在接种箱内接种，也可自制接种帐或在改造过的接种室内进行，接种时一定要严格空间灭菌，使用质好、量足的有效熏蒸式灭菌剂。7 严格控制菌种培养室温度 平菇菌丝生长适宜温度为25?，培养室温度可控制在20 22?，三级种袋温可控制在22 23?；三级种培养袋温度过低，培养好的菌种菌龄偏长；三级种培养袋温度过高，培养好的菌种菌丝稀疏、不健壮；严格控制袋温不得超过30?，坚决淘汰受过高温影响的菌种。8 严格避光培养菌种 平菇菌丝生长期间不需要光线，尤其强光直射；光线越弱，越有利于菌丝生长，相反，菌丝生长缓慢，不健壮。9 严格控制培养室通风 培养室适当通风，可以保证菌丝生长时有足够的氧气供 责任编辑胡先祥责任校对胡先祥 农技服务，2012，29（6）：694－695