反相高效液相色谱法测定地榆中金丝桃苷的含量

反相高效液相色谱法测定地榆中金丝桃

苷的含量

（作者：__________ 单位： ___________ 邮编： ___________ ）

【摘要】目的建立地榆中金丝桃苷的高效液相色谱含

量测定方法。方法采用RP-HPLC测定，C18 柱,流动相为甲醇-0.2% 磷酸溶液（46 54），用三乙胺调pH至3.0，流速1.0 ml min-1，检测波

长370 nm ;供试品溶液的制备采用甲醇超声提取。结果测定了不同产地不同批次的地榆药材，金丝桃苷质量分数在0.052% ~ 0.291%。结论该方法灵敏快速，准确可靠，可用于地榆的质量控制。

【关键词】地榆金丝桃苷反相高效液相色谱法

Abstract:ObjectiveTo establish a determ in ati on method of hyperoside in San guisorba offici nalis. MethodsRP-HPLC analytical method was established on a Polaris C18column with Methanol-0.2%H3PO4 solution(46:54) as the mobile phase, the flow rate was 1.0 ml mi n-1, and the detecti on wavele ngth was 370 nm. The method of

sample was ultrasonic wave withdraws by Methanol. ResultsThe content of hyperoside was from 0.052 ?0.291% in different groups of S. officinalis collected from the differe nt locati ons. Con clusi on The method is accurate and can be used for the quality of San guisorba offic in alis.

Key words:Sa nguisorba offici nalis; Hyperoside ; RP-HPLC

地榆为蔷薇科植物地榆Sanguisorba officinalis L.或长叶地榆Sanguisorba officinalis L.var.longifolia （Bert.）Yu et Li 的干燥根。

其味苦、酸、涩，微寒，具有凉血止血、解毒敛疮之功效] 1, 2 ]。现代药理研究表明其具有显著的镇痛作用[3],主要有效成分为黄酮

类化合物，但药典记载质量标准的定量检测方法仅为紫外-可见分光光度法测定其鞣质含量，该法操作繁琐。金丝桃苷为地榆药材中提取得到的黄酮类化合物。研究表明，地榆中的金丝桃苷是其止痛作用的有效成分之一。本实验采用RP-HPLC法对不同产地中药材市场商品地榆的金丝桃苷成分进行了定量分析，考察了流通商品地榆的质量状况，为进一步提高地榆药材的质量控制提供了科学依据。

1仪器与试药

Agile nt 1100高效液相色谱仪，含在线脱气机、四元梯度泵、自动进样器、智能柱温箱、紫外可见光检测器（VWD）、化学工作站。KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

地榆药材于2006〕07中下旬从青海省各地中药材市场抽取，由

青海省药品检验所主任药师刘海青鉴定为地榆S. officinalis L.的干燥

根或饮片。实验中将样品粉碎后过100目筛，置干燥器中备用。

金丝桃苷（111521-200303，国药品生物制品检定所，供含量测定用）。甲醇为色谱纯，实验用水为Milli-Q超纯水。其他试剂均为分

析纯。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备

精密称取金丝桃苷13.25 mg，置量瓶中，加甲醇定容至25 ml, 其金丝桃苷含量为0.53 mg ml-1。再精密吸取金丝桃苷对照品溶液 2.0 ml，加甲醇定容至50 ml量瓶中，其金丝桃苷含量为0.021 2 mg ml-1。

2.2供试品溶液的制备

取地榆干燥药材或饮片的粉末（过100 目） 1 g，分别精密称定，至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，称定重量，超声提取1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45呵微孔滤膜滤过，用续滤液作为供试品溶液。

2.3色谱条件

Hypersil ODS2 分析柱（4.6 mm X250 mm，5 呵）;流动相甲醇-0.2%磷酸溶液（46:54），用三乙胺调pH至3.0;流速1.0 ml min-1 ; 检测波长370 nm ;柱温25 C；进样量10 4;在选定的色谱条件下，理论塔板数以金丝桃苷峰计算不低于 3 000。分离度大于1.5，拖尾

因子在0.95?1.05。色谱图见图1。

2.4检测波长的选择

取金丝桃苷对照品适量，用甲醇溶解后作紫外全波长扫描，入

286 , 370 nm,因286 nm下非黄酮物质也有吸收，为避免干扰，选择检测波长为370 nm。

2.5线性关系的考察

分别精密吸取0.021 2 mg ml-1的金丝桃苷对照品溶液2, 4, 6, 8, 10, 12 , 16山注入液相色谱仪，测定峰面积，以金丝桃苷含量

（X ）为横坐标，其峰面积吸收度积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y = 2 263.9X+2.963 5 , r = 0.999 8 （n =7）, 表明金丝桃苷在0.04 ~ 0.34血线性关系良好。

2.6精密度实验

精密吸取0.021 2 mg ml-1金丝桃苷对照品溶液10讥连续进样5次，测得峰面积积分值RSD为0.86%，表明精密度良好。

2.7重复性实验

精密称取同一样品粉末1 g （5份），按供试品溶液的制备方法制备，进样10讥测得金丝桃苷含量的RSD为0.99%，表明该方法的重复性好。

2.8稳定性实验同一供试品溶液，从制备完毕开始放置，分别

于0, 2, 4, 6, 8, 10 h进样检测，其峰面积积分值RSD为1.9%。

表明供试品溶液在10 h内比较稳定。

2.9加样回收率实验

取已知含量的药材（6号含量1.60 mg g-1）样品6份，每

份0.50 g ,精密称定，计算样品中金丝桃苷量，分别加入适量的金丝桃苷对照品，按样品制备方法和测试条件进行测定，计算加样回收率结果见表1。表1地榆中金丝桃苷的加样回收率（略）

2.10样品测定

分别精密吸取各样品10 gl进样测定，计算含量，结果见表2 表2不同产地地榆样品的金丝桃苷含量（略）

3讨论

3.1提取条件的选择

根据金丝桃苷的溶解性能，选择乙醇、甲醇、醋酸乙酯作为提取溶剂，比较了3种提取溶剂提取方法（超声、回流及索氏提取）和不同提取时间（0.5，1.0，1.5 h）对提取效果的影响。结果显示采用超声提取方法的提取率最高，甲醇提取效果最好，含量结果表明超声提取1.0 h 可使待测成分提取完全。实验证实，含量并未随着提取时间延长而有所增加，超过1h时含量甚至有下降的趋势。

3.2流动相的选择

由于金丝桃苷为黄酮类化合物，本实验采用甲醇和0.2%磷酸溶液的二元流动相体系，但实验中发现色谱峰有拖尾现象。经反复实验发现，在1 000 ml的0.2%磷酸溶液中加入1.8 ml三乙胺时的分离效果最佳，经多次，多批样品测试，系统具有良好的重复性和稳定性，三乙胺能与ODS柱中键合相的残余硅醇基相互作用，提高分离度，有助于改

善峰形。因此以甲醇-0.2%磷酸溶液（46 ：4）用三乙胺调pH至3.0为优，分离效果较好，保留时间适中，且无干扰］3［。本方法操作简便、快速、重复性好，适用于地榆中金丝桃苷含量的测定。

3.3样品分析

本文对不同产地地榆中的金丝桃苷含量进行了测定，结果表明，不同产地金丝桃苷的含量存在着一定的差异，有必要对其进行质量控制。

《中国药典》中地榆质量标准的定量检测方法操作较为繁琐，根据本实验的测定结果，RP-HPLC可以较好地对金丝桃苷进行有效分离，方法简便、准确、灵敏，可作为地榆质量控制的指标成分。

【参考文献】

:1］国家药典委员会冲国药典，1部S ］.北京：化学工业出版社，2005 : 83.

:2］江苏新医学院.中药大辞典，上册［M］.上海：上海

科学技术出版社，1981 : 806.

:3］沙明，曹爱民，孟宪生，等.高效液相色谱法在中药

规范化研究中的应用［M ］.沈阳：辽宁科学技术出版社，2000 : 24.