培养基及其制备方法
培养基及其制备方法
1、营养肉汤培养基
胨10g
肉浸液1000ml
氯化钠5g
取胨与氯化钠，加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH 值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。
2、营养琼脂培养基
照上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入15～20g琼脂，调节pH值使灭菌后为
7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。
3、虎红琼脂培养基
胨5g
虎红（四氯四碘荧光素）0.0133g
葡萄糖10g （或0.133％虎红溶液10ml）
磷酸二氢钾(KH2PO4) 1g
琼脂15～20g
硫酸镁(MgSO4.7H2O) 0.5g
水1000ml
除葡萄糖、虎红外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、虎红，分装，115℃灭菌30分钟。
4 、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)
胨10g
琼脂15～20g
酵母浸出粉5g
水1000ml
葡萄糖20g
除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热融化后，滤过，加入葡萄糖，分装，115℃灭菌15分钟。
5 、胆盐乳糖培养基(BL)
胨20g
牛胆盐 1.3g
乳糖5g （或去氧胆酸钠0.25g）
氯化钠5g
水100ml
磷酸氢二钾(K2HPO4) 4.0g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.3g
除乳糖、牛胆盐外，取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，115℃灭菌30分钟。
6 、曙红美亚甲蓝琼脂培养基(EMB)
营养琼脂培养基100ml
2％曙红溶液2ml
20％乳糖溶液5ml
0.5％亚甲蓝溶液 1.3～1.6ml
取营养琼脂培养基，加热融化后，冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其它三种溶液,摇匀，倾注平皿。
7 、麦康凯琼脂培养基(MaCC)
胨20g
1％中性红溶液 2.5ml
乳糖10g
琼脂15～20g
牛胆盐5g
水1000ml
氯化钠5g
除乳糖、1％中性红溶液、牛胆盐及琼脂外、取上述成分,混合，加热使溶解，调节pH 值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热融化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，115℃灭菌30分钟，冷至约60℃，倾注平皿。
8 、三糖铁琼脂培养基(TSI)
胨20g 硫酸亚铁0.2g
牛肉浸出粉5g 硫代硫酸钠0.2g
乳糖10g 0.2％酚红溶液12.5ml
蔗糖10g 琼脂12～15g
葡萄糖1g 水1000ml
氯化钠5g
除三糖、0.2％酚红溶液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热融化后，滤过，再加入其余成分，摇匀，分装,115℃灭菌30分钟，制成高底层(2～3cm)短斜面。
9 、四硫磺酸钠亮绿增菌液(TTB)
胨5g 硫代硫酸钠30g
牛胆盐1g 水1000ml
碳酸钙10g
取上述成分，混合，微温使溶解，121℃灭菌20分钟。临用前，取上述培养基，每10ml 中加入碘溶液(取碘6g与碘化钾5g，溶于20ml水中)0.2ml和0.1％亮绿溶液0.1ml ，混匀。
10 、沙门氏、志贺氏菌属琼脂培养基(SS)
胨5g 硫代硫酸钠8.5g
牛肉浸出粉5g1％中性红溶液 2.5ml
乳糖10g0.1％亮绿溶液0.33ml
牛胆盐8.5g琼脂20g
枸橼酚钠8.5g 水1000ml
枸橼酸铁铵1g
除糖、指示剂、琼脂外，取上述成分混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2 ±0.1，滤过，加入琼脂，加热融化后，121℃灭菌20分钟，再加入其余成分，摇匀，冷至约60℃，倾注平皿。
11、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基
胨10g 牛肉浸出粉3g
氯化钠5g 琼脂15～20g
十六烷三甲基溴化铵0.3g 水1000ml
除琼脂外，取上述成分混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.5±0.1，加入琼脂，
加热熔化后，分装，121℃灭菌20分钟，冷至约60℃，倾注平皿。
12、亚碲酸盐肉汤培养基
临用前，取灭菌的营养肉汤培养基，每100ml中加入新配制的1％亚碲酸钠（钾）溶液0.2ml，混匀，即得。
13、卵黄高盐琼脂培养基
胨6g 10％氯化钠卵黄液100ml
牛肉浸出粉1.8g 琼脂23g
氯化钠30g 水650ml
除10％氯化钠卵黄液外，取上述成分混合，微温使溶解,调节pH值使灭菌后为7.6±0.1。121℃灭菌20分钟，待冷至约60℃，以无菌操作加入10％氯化钠卵黄液,充分摇匀,倾注平皿。
10％氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋一个，以无菌操作取出卵黄，放入10％灭菌氯化钠溶液100ml中，充分振摇，即得。
14、甘露醇高盐琼脂培养基
胨10g 1％酚红溶液 2.5ml
牛肉浸出粉1g 琼脂15～20g
甘露醇10g 水1000ml
氯化钠75g
除甘露醇、1％酚红溶液及琼脂外,取上述成分混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.4±0.2，加入琼脂，加热融化后，滤过，分装，115℃灭菌30分钟，冷至约60℃,倾注平皿。
15、蛋白胨水培养基
胰蛋白胨10g 水1000ml
氯化钠5g
取上述成分混合，加热融化，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中,121℃灭菌20分钟。
16、磷酸盐葡萄糖胨水培养基
胨7g 葡萄糖5g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 3.8g 水1000ml
取上述成分混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
17、枸橼酸盐培养基
氯化钠5g 枸橼酸钠（无水）2g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g 溴麝香草酚蓝指示液20ml
磷酸氢二钾(K2HPO4) 0.8g 琼脂15～20g
磷酸二氢铵(NH4H2PO4) 1g 水1000ml
除溴麝香草酚蓝和琼脂外，取上述成分，混微温使溶解,调节pH值使灭菌后为6.9±0.1，加入琼脂，加热融化，加入指示剂混匀。分装于小试管中，121℃灭菌15分钟，置成斜面。
注：所用琼脂应不含游离糖，用前用水浸泡冲洗。
18、糖、醇发酵培养基
基础液
胨10g 0.5％酸性复红指示剂10ml
糖、醇0.5％（或溴麝香草酚蓝指示液6ml ）
氯化钠5g 水1000ml
取胨和氯化钠加入水中，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.4,加入指示剂混匀,分装每瓶100ml，121℃灭菌15分钟。
配制葡萄糖发酵管时，于100ml基础液中加入0.5g葡萄糖,分装于含杜氏管(Durham)的小试管中。121℃灭菌15分钟,配制其它糖醇发酵管时,将各种糖醇分别配成10％溶液,与基础液同时于121℃灭菌15分钟。以无菌操作将5ml糖醇溶液加入100ml基础液内,分装于灭菌小试管中。
注：糖醇溶液亦可采用薄膜过滤法除菌。
19、5％乳糖发酵管
胨0.2g 乳糖5g
氯化钠0.3g 溴麝香草酚蓝指示液0.6ml
磷酸氢二钠0.2g 水1000ml
除乳糖和指示剂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.4,加入乳糖及指示剂，混匀，分装于含杜氏管的灭菌小试管中，115℃灭菌15分钟。
20、尿素琼脂培养基
胨1g 葡萄糖1g
氯化钠5g 20％尿素溶液1000ml
磷酸二氢钾(KH2PO4) 2g 琼脂20g
0.2％酚红溶液6ml 水1000ml
除尿素和琼脂外，取上述成分，混合，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1，加入琼脂，加热溶化并分装于锥形瓶，121℃灭菌20分钟。冷至50～55℃,加入经薄膜过滤除菌的尿素溶液，混匀。尿素的最终浓度为2％，分装于灭菌试管中，置成斜面。
21、氰化钾培养基
胨3g 磷酸氢二钠(Na2HPO4) 5.64g
氯化钠5g 氰化钾试液
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.225g 水1000ml
除氰化钾试液外，取上述成分，混合,调节pH值使灭菌后为7.5±0.1，121℃灭菌20分钟，冷却后，每100ml培养基中加入氰化钾试液1.5ml,分装于12×100mm灭菌试管内，每管4ml，立即用灭菌橡皮塞塞紧，置4℃保存。同时，以不加氰化钾试液的培养基作为对照培养基，分装于灭菌试管中。
22、赖氨酸脱羧酶试验培养基
胨5g 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1ml
酵母浸出粉3g L-赖氨酸(DL-赖氨酸) 0.5(1g)/100ml
葡萄糖1g 水1000ml
除赖氨酸外，取上述成分，混合，加热溶解后分装，每瓶100ml。加入L-赖氨酸0.5g（DL-赖氨酸1g）调节pH值使灭菌后为6.8,同时以不加赖氨酸培养基作为对照。分装于灭菌的小试管内，每管1ml并滴加一层液体石蜡，121℃灭菌10分钟。
23、绿脓菌素(pyocyanin)测定用培养基（PDP琼脂）
胨20g 甘油10ml
氯化镁（无水）1.4g 琼脂18～20g
硫酸钾（无水）10g 水1000ml
取胨、氯化镁和硫酸钾加入水中，微温使深解。调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入甘油及琼脂，加热溶解，121℃灭菌20分钟，置成斜面。
24、明胶培养基
胨5g 明胶120g
牛肉浸出粉3g 水1000ml
取上述成分加入水中，浸泡约20分钟，随时搅拌，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为
7.3±0.1，分装于小试管中，115℃灭菌20分钟。
25、硝酸盐胨水培养基
胨10g 亚硝酸钠0.5g
酵母浸出粉3g 水1000ml
硝酸钾2g
取胨及酵母浸出粉加入水中，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解，混匀。分装于含杜氏管的小试管中，115℃灭菌20分钟。
26、胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)
胨20g 枸橼酸钠1g
牛肉浸出粉3g 枸橼酸铁铵1g
乳糖10g 1％中性红溶液3ml
蔗糖10g 琼脂18～20g
去氧胆酸钠1g 水1000ml
硫代硫酸钠 2.3g
除糖、1％中性红溶液及琼脂外,取上述成分混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1，加入琼脂,加热融化后,再加入其余成分，摇匀，冷至约60℃，倾注平皿。
植物组培培养基的成分
植物组培培养基的成分 培养基是人工配制的，满足不同材料生长，繁殖或积累代谢产物的营养物质。在离体培养条件下，不同种类植物对营养的要求不同，甚至同一种植物不同部位的组织以及不同培养阶段对营养要求也不相同。筛选合适的培养基是植物组织培养极其重要的内容，是决定成败的关键因素之一。 大多数植物组织培养基的主要成分是无机营养物质（大量营养元素和微量营养元素）、碳源、有机添加物、植物生长调节剂和凝胶剂。一些组织可以生长在简单的培养基上，这些培养基只含无机盐和可利用的碳源（蔗糖），但大多数组织必须在培养基中添加维生素、氨基酸和生长物质，而且经常还将一些复合的营养物质加入到培养基中，这种由“化学定义”的化合物组成的培养基称为“合成”培养基。 人们已设计了许多培养基用于特殊组织和器官的培养。 怀特培养基是最早的植物组织培养基之一，最初作为根培养的培养基。为了诱导培养组织器官发生和再生植株，广泛使用含有大量无机盐成分的MS（Murashige和Skoog，1962）和LS(Linsmaier 和Skoog，1965)培养基。原本为细胞悬液或愈伤组织培养而设计的B5培养基，经过改良后，被证实有利于原生质体培养。同时，B5培养基也被用于诱导原生质体再生植株。尽管Nitshch(1969)为花药培养设计的培养基仍然使用频繁，但另一个称为N6的培养基，专门用于禾谷类花药培养和其他组织培养。类似的，N6培养基越来越多地
用于大豆、红三叶草和其他豆科植物的培养。该培养基营养成分促进胚性细胞和原生质体再生细胞快速生长。使用这些培养基成功的原因很可能是营养元素的比例和浓度基本上满足不同培养体系中细胞或组织生长和分化的最适需要。 植物组织培养基中无机和有机成分的浓度用质量浓度（mg/L 或ppm，但现在习惯用mg/L）或物质的量浓度(mol/L)表示。按照国际植物生理学协会的推荐，应该用mol/L表示大量营养元素和有机营养成分浓度，用μmol/L表示微量营养元素、激素、维生素和有机成分浓度。用物质的量浓度的优点是，每一种化合物每一摩尔的分子数是常数，所以按照特定培养基配方配制培养基时，无论无机盐化合物的水分子数为多少，原物质的量浓度都可以使用。但是，用质量浓度来表示浓度的话，就不能不考虑无机盐化合物的水分子数目了。 1、水分 水分是植物体的主要组成部分，也是一切代谢过程的介质和溶媒，在植物生命活动过程中不可缺少。配制培养基母液时要用蒸馏水或纯水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程中发霉变质。研究培养基配方时尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。而在大规模工厂化生产时，为了降低生产成本，常用自来水代替蒸馏水。如自来水中含有大量的钙、镁、氯和其他离子，最好将自来水煮沸，经过冷却沉淀后再使用。
植物组织培养技术
植物组织培养技术 植物组织培养是指将植物体的一部分接种在合成培养基上，使其按照预定目标生 长发育成新植株。近年来，花卉组织培养及快繁脱毒技术越来越多地应用于花卉种苗 繁殖生产中。 一、组织培养在花卉产业中的应用 1.快速、大量繁殖优良品种组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一。经组织 培养，可增加繁殖系数，加快繁殖速度，可生产出种性纯、品质好、产花量高的生产 性用苗。在花卉育种过程中，不断的杂交、选种极大地扩展了花卉的花形与颜色，使 得花卉在各方面都越来越接近人们的需求。但在同时，也造成了花卉基因类型的高度 异质化———子代不易有均一表现。而组培苗是在母株器官、组织或细胞的基础上发展起来的，可以保持母株的全部特性（花形、花色、株形、开花习性、抗逆性等）， 因而可以根据需要来选择集多种优良性状于一体的植株加以分生，从而得到大量与母 株一模一样的植株。 2.培育脱毒苗木采用组织培养技术，利用植株的分生组织不易感染病毒的原理，可 以对花卉植株的分生组织进行组织培养来繁殖苗木，防止亲代植株的病害传递给子代，从而达到脱毒的目的。 病毒病对长期应用营养繁殖（分株、扦插等）的观赏植物及其生产的危害相当严重。由于观赏植物多采用营养繁殖，如嫁接、分株、压条等方法繁殖时，病毒（及类 病毒）则通过营养体及刀具、土壤传递给后代，大大加速了病毒病的传播与积累，导 致病毒病的危害越来越严重。据统计，观赏植物的病毒已多达100多种，并且逐年有 新增病毒的报道。观赏植物因病毒病大大影响其观赏价值，表现在康乃馨、菊花、百合、风信子等的鳞茎、球茎与宿根类花卉及兰科植物等严重退化，花少且小，花朵畸形、变色，大大影响观赏价值，严重者甚至导致某些品种的灭绝，严重制约观赏植物 生产的发展，这也是我国切花品种跨不出国门的原因之一。组培快繁技术已应用到蝴蝶兰的栽培中非洲菊也可以通过组培快繁技术进行繁殖 植物组织培养脱毒的原理主要是利用茎尖分生组织不带毒或少带毒。感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒 的浓度也越低。分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分 裂和活跃的生长速度，因此生长点含有病毒的数量极少，几乎检测不出病毒。因此， 茎尖培养时，切取茎尖的大小对脱毒效果有很大影响，茎尖越小效果越佳，但太小时 不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。不同种类的植物和不同种类的病毒在茎尖
常用培养基的制备及注意事项(1)
常用培养基的制备及注意事项 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢 产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培 养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 三、试剂与器材 1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。
2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 四、实验内容 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。 3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。
培养基制备的基本方法和注意事项
培养基制备的基本方法和注意事项 1.培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同着作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。 2 ．培养基的制备记录 每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3.培养基成分的称取 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。 4.培养基各成份的混合和溶化 培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。 待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 5.培养塞pH 的初步调整 培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低.而肠浸液pH 却会有显着的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。 pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法 一、实验目的 1.了解无菌操作 2.掌握培养基母液的配制方法 二、实验原理 配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。 三、实验器材和药品 器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。 四、实验步骤 1、大量元素母液的配制
各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。 表1 MS培养基大量元素母液制备 注意： (1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方 （一）母液配制与保存 配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。 基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。 表1大量元素母液（配1L20倍的母液） 序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取 量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液 在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。 表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取 量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液 由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。 配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
培养基的制备
培养基的制备 一、配制原则和种类 （一）培养基配制原则 １、培养基：培养基是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环境条件的基质，如蘑菇菌是有机营养型中的草腐生菌。制备培养基不仅要考虑它所需要的含碳化合物、含氮化合物、矿物盐类、生长因子，还要考虑水与pH环境，同时还应考虑它们培养方式是固体培养还是液体培养。因此，可以把按菌类生长发育需要比例配制的灭菌营养基质，称为培养基。换言之，培养基必须具备三个条件：含有菌株生长发育所需要的营养物质；具有菌类生长环境条件；经过灭菌，并保持无菌状态。 ２、培养基的选择：在整菌种制备过程中，从母种到原种、栽培种，各个阶段的目的要求有所不同，所选用的培养基的配比也应有所区别。一般母种初生菌丝较嫩弱，分解养分能力差，要求营养丰富、完全，氮源、维生素的比例应高。须选用易于被菌丝吸收利用的物质，如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、蛋白胨、无机盐类及生长素等为等而原种、栽培种所需数量较多，且菌丝分解能力强，可利用大量农作物秸秆、粪草、棉籽壳、麸皮、米糠等原料作为培养基。 （二）培养基的种类 １、根据营养物质的来源，可以把培养基分炎天然培养基、半合成培养基和合成培养基。 （１）天然培养基天然培养基是指用化学成分还不清楚或化学成分不恒定天然有机物配制而成的培养基，如各种农副产品及其下脚料──小麦、大豆、玉米粉、麸皮、米糠、作物秸秆、木屑、棉籽壳、甘蔗渣等，以及动植物组织的浸出液──牛肉膏、肉汤、马铃薯汁、麦芽汁、豆芽汁等都可以用来配制天然培养基，这种培养基来源广，成本低，营养丰富，适合于在生产上大规模培养菌类使用，但这些天然有机物质因产地、品种、生长期的不同，化学成分不能宣。每批成分也不稳定，不宜用来做精细的科学实验。以分离驯化食用菌培养基（２）半合成培养基为了促进食用菌菌丝的生长发育，常在天然培养基中添加适量的无机盐类，或在合成培养基中添加适量的某些天然有机物，就成为半合成培养基。这类培养基种类繁多，应用广泛，也是生长菌种和实际栽培最常用的培养基。 （３）合成培养基是指采用化学成分已知的有机物（碳水化合物、含氮化合物、有机酸类）或无机物配制而成的培养基。这类培养基组成和含量明确，价格较贵，一般用于在实验室范围内做有关营养、代谢、菌种鉴定等有关于食用菌的生理生化研究。 ２、根据培养基制成后的物理状态，可将培养基分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。 （１）液体培养基根据食用菌所需的营养物质，扫一定比例配成营养液，叫液体培养基。液体培养基可进行营养源的筛选实验，以及生理生化方面如酶活力等研究，应用液体培养基生产的菌种也可在生产中进行使用。 （２）固化培养基将各种营养成份按比例配制成营养液后，加入适量固化剂，如琼脂，即可配成固化培养基。利用这种斜面试管可保藏及扩大菌种，同时亦可制成各种平皿固化培养基分离菌种。 （３）固体培养基利用各种富含纤维素和木质素的农林废弃物如木屑、棉籽壳、秸秆、玉米蕊等作为主要原料，再加入适量的米糠或麸皮和无机盐类制成固体培养基。该培养基可作为二、三级菌种生产用的培养基，也可以用它制成发酵草粉保藏菌种用的培养基。 二、一级种培养基 一级种又称母种，其培养基一般用试管作为容器，所以又称试管斜面培养基，这类培养
各种培养基的制作方法
配方一萨氏（Sabouraud's）培养基 蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 1.营养肉汤培养基 牛肉膏 0.3克 蛋白胨 1.0克 NaCl 0.5克 水 100毫升 pH 7.0～7.2 在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。 2.营养琼脂培养基 在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。 3.肉汁蛋白胨液体培养基 牛肉 500克 蛋白胨 10克 NaCl 5克 pH 7.1～7.2 取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。 将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。 4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基） 可溶性淀粉 2克 K2HPO4 0.05克 MgSO4·7H2O 0.05克 KNO3 0.1克 NaCl 0.05克
FeSO4 0.001克 琼脂 2克 水 100毫升 pH 7.2～7.4 在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。 5.马铃薯蔗糖培养基 马铃薯 200克 蔗糖 10克 琼脂 20克 水 1000毫升 自然pH 称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 6.麦芽汁培养基 将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 7.察氏培养基 NaNO3 2克 K2HPO4 1克 KCl 0.5克 MgSO4 0.5克 FeSO4 0.01克 蔗糖 30克 琼脂 15～20克 水 1000毫升 自然pH
植物组织培养的培养基
植物组织培养的培养基中，需要添加糖类作为碳源物质，因此糖类是影响植物组织培养成功与否的关键之一。高中生物教材中明确指出，植物组织培养的培养基中添加的糖类是蔗糖。那么为什么不添加葡萄糖呢？很多资料上解释为蔗糖较葡萄糖便宜，易被植物细胞吸收。其实并非如此。之所以以蔗糖作为碳源，主要有三个方面的原因： （1）同样作为碳源为植物细胞提供能量来源，蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，因此若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而生长不良。同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以蔗糖形成的渗透压可相对长期的保持稳定。 （2）植物组织培养过程中，要时刻注意防止培养基受到微生物的污染。微生物生长所需的碳源最常用的是葡萄糖，一般很少利用蔗糖。因此，采用蔗糖作为培养基的碳源，可一定程度上减少微生物的污染。 （3）诱导作用。在培养基成分中，增加生长素的浓度，导致木质部形成，增加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。当生长素水平恒定时，2％蔗糖使分化出的全部是木质部，4％蔗糖使分化出的几乎全部是韧皮部，3％蔗糖则可以分化出两者。所以，生长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与数量。因此，在植物组培中要选用蔗糖而不选用葡萄糖。 通过细胞膜内外的液体的浓度差来调节 当细胞膜内的浓度小于细胞膜外的时候蔗糖救能进入细胞中了 植物细胞培养中最常用的培养基的碳源是蔗糖，已知葡萄糖和果糖也能使某些植物生长得很好。植物细胞可以分解蔗糖，蔗糖是由一分子果糖和一分子葡萄糖组成的，蔗糖是可以直接进入细胞的，蔗糖跨质膜从质外体进入细胞是由载体介导并需要消耗能量的质子-蔗糖共运输机制进行的，另外，植物能够利用的某些其他形式的碳源有麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。葡萄糖更不稳定，培养基需添加葡萄糖一般都在灭菌后再兑换。实在要添加葡萄糖那么灭菌温度一般控制在108~110左右，120度灭出来的就有一定程度的碳化了。所以用蔗糖更简单 动物细胞只能吸收葡萄糖，二糖蔗糖是无法吸收的。 以蔗糖为植物培养基碳源有两个原因: 1.抑制杂菌生长.细菌等不能直接以蔗糖为碳源,故可起抑制其生长的作用 2.蔗糖被植物细胞利用机理目还无定论.主要有以下两个学说(1)植物细胞先以次级主动运输的方式在细胞内外形成质子梯度,然后蔗糖就会利用这个梯度被吸收进细胞. (2).植物的细胞壁中含有能分解蔗糖的相关酶,蔗糖先在细胞膜外被分解为单糖,然后这些单糖再以主动运输的方式进入细胞,从而被细胞利用.
实验一培养基的制备
农业微生物实验课指导 （修订版） 草地农业科技学院 草地保护研究所编写 2012.09.01
实验一培养基的制备 一．实验目的 明确培养基的配置原理。 通过对基础培养基的配置，掌握配置培养基的一般方法和步骤。 二．实验原理 马铃薯葡萄糖琼脂培养基是一种半合成培养基，适宜于培养各种类型微生物，尤其适合培养真菌。这种培养基是由天然材料马铃薯和葡萄糖组成的，营养丰富而且原料容易取得，是一种使用而价廉的培养基。马铃薯浸出粉有助于各种微生物的生长，葡萄糖提供能源；琼脂是培养基的凝固剂。 牛肉浸膏培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，有时又称普通培养基，由于这种培养基中含有一般细菌生长所需的最基本营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基中含有牛肉膏，蛋白胨和NaCl。其中，牛肉膏作为微生物碳源，能源，磷酸盐和维生素，蛋白胨提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在配置牛肉浸膏培养基时还需要加入一定量的琼脂作为凝固剂。 高氏一号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。如果加入适量的抗菌药物，则可用来分离各种放线菌。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将两种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。 三．实验准备 实验材料：牛肉浸膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、NaOH溶液、HCl(酸液)、葡萄糖、马铃薯(土豆)、酒精、可溶性淀粉2 g、KNO3 0.1 g、K2HPO4 0.05g，MgSO4· 7H2O 0.05 g、NaCl 0.05 g、FeSO4· 7H2O 0.001 g (母液)、琼脂2 g、自来水100mL等。 实验器材：高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、电炉、天平、三角瓶、纱布、线绳、记号笔、超净工作台、pH计、玻璃棒、量筒，烧杯和三角瓶等。 四．实验步骤 (1)PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar 。
实验一 植物组织培养基母液配制的若干关键环节
实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求： 熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法. 植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中. 为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。 以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1) 表1 MS培养基母液的配制 成分规定用量 /mg.L-1 扩大倍 数 称取量/ mg 母液定溶 体积/ml 配1LMS培 养基吸取量 /ml 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 微量元数 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 20 20 20 20 20 1000 1000 38000 33000 7400 3400 8800 22300 8600 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 50 50 50 50 50 1 1
细胞培养基的基本知识
培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。 一、基础培养基 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取 1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。 在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM 含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。 原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。
细胞培养基及其配制方法
细胞培养基及其配制方 法 Revised as of 23 November 2020
D M E M(A)细胞培养基（粉末型）成分
DMEM各种成分都有什么作用 一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。
（1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。 （4）碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 （5）葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造成细胞营养供应不足，细胞生长抑制。在目前常用的培养基中，葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源，其能量代谢通路与体内完全不同，表现为葡萄糖主要经糖酵解途径为细胞提供能量，谷胺酰胺大部分通过不完全氧化途径，另一小部分通过完全氧化为细胞供能。 ?
培养基制备的基本方法和注意事项31301
培养基制备的基本方法和注意事项
1.培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。 2 ．培养基的制备记录 每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3.培养基成分的称取 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。 4.培养基各成份的混合和溶化 培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 5.培养塞pH 的初步调整 培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低pH0.2.而肠浸液pH 却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。 6．培养基的过滤澄清
植物组织培养的一些注意事项
植物组织培养的一些注意事项 一、常用培养基主要特性 1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。 2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。 ①B5 培养基B5 培养基除含有较高的钾盐外, 还含有较低的铵态氮和较高的盐 酸硫胺素, 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。 ②N6 培养基N6 培养基( 朱至清等1975 ) 系我国学者创造, 获国家发明二等奖, 适用于单子叶植物花药培养, 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。 ③SH 培养基是矿盐浓度较高的一种培养基, 其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵 ( NH4 H2 PO4 ) 提供的, 这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。 3 、中等无机盐含量的培养基 ①H 培养基本培养基大量元素约为MS 培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低, 微量元素种类减少, 而含量较MS 为高, 维生素种类比MS 多。适于花药培养。 ②尼奇培养基(Niotsch 1969 ) 此培养基与H 培养基成分基本相同, 仅生物素比 H 培养基高10 倍。也适合于花药培养。 ③米勒培养基(Miller 1963 ) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基二者成分完全相同。适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。 4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。有以下几种: ①改良怀特培养基(White 1963 ) ②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966) ③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。 ④贝尔什劳特液(Berthelot 1934) ⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。其成分是大量元素比1/ 2 克诺普( Knop ) 液稍多, 微量元
植物组织培养技术的应用以及
植物组织培养技术的应用以及在培养过程中存在的问题 摘要:介绍了植物组织培养技术的应用以及在培养过程中遇到的问题并提出解决的方法。植物组织培养技术的应用范围很广,目前主要用在离体无性系快速繁殖与无毒化、植物育种、遗传物质的保存、植物次生代谢物的生产和植物基因转化等方面。 关键词:植物组织培养;次生代谢物;基因转化;褐化 植物组织培养技术是指在无菌条件下,将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体,在人工配制的环境里培养成完整的植株。植物组织培养的依据是植物细胞“全能性”及植物的“再生作用”。1902年,德国著名植物学家G。Haberlanclt根据细胞学理论,大胆地提出了高等植物的器官和组织可以不断分割,直到单个细胞,即植物体细胞在适当的条件下,具有不断分裂和繁殖,发育成完整植株的潜力的观点。1943年,美国人White在烟草愈伤组织培养中,偶然发现形成一个芽,证实了G。Haberlanclt的论点。自G。Haberlandt提出的细胞全能性理论以来,在许多科学家的努力下,植物组织培养技术得到了迅速发展,其理论和方法逐渐趋于完善和成熟,并广泛应用于农业、林业、园艺、医药等行业,产生了巨大的经济效益和社会效益。 1 植物组织培养技术的应用前景 植物组织培养技术的应用前景很广泛,目前主要用在以下几个方面。 1.1 在植物脱毒和快速繁殖上的应用 植物脱毒和离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个方面。很多农作物都带有病毒,特别是无性繁殖植物,如马铃薯、甘薯、草莓、大蒜等。但是,感病植株并非每个部位都带有病毒,White早在1943年就发现植物生长点附近的病毒浓度很低甚至无病毒。如果利用组织培养方法,取一定大小的茎尖进行培养,再生的植株有可能不带病毒,从而获得脱病毒苗,再用脱毒苗进行繁殖,则种植的作物就不会或极少发生病毒。此法已在马铃薯、大蒜、草莓、葡萄、康乃馨等多种作物上获得成功,并产生了明显的经济效益。国外40%~80%草莓是通过试管脱毒后繁殖的,意大利每个州都有年产百万草莓无毒种苗的工厂。由于运用组织培养法繁殖植物的明显特点是快速,每年可以数以百万倍的速度繁殖,因此,对一些繁殖系数低、不能用种子繁殖的名、优、特植物品种的繁殖,意义尤为重大。同时组织培养可不受地区、气候的影响,比常规方法快数万倍到数百万倍的速度扩大繁殖,及时提供大量优质种苗。目前,观赏植物、园艺作物、经济林木、无性繁殖作物等部分或大部分都用离体快繁提供苗木,试管苗已出现在国际市场上并形成产业化。 1.2 在植物育种上的应用 植物组织培养技术对培育优良作物品种开辟了新途径。目前,国内外把植物组织培养已普遍应用于作物育种,并在以下几个方面取得了较大进展: 1.2.1 单倍体育种 单倍体植株往往不能结实,在培养中用秋水仙素处理,可使染色体加倍,成为纯合二倍体植株,这种培养技术在育种上的应用称为单倍体育种。单倍体育种具有高速、高效率、基因型一次纯合等优点,因此,通过花药或花粉培养的单倍体育种,已经作为一种崭新的育种手段问世,自从1964年Guha和Maheshwari报道利用花药培养技术由蔓陀罗花药诱导单倍体植株以来,各国科学家致力于花药培养。1974年,我国科学家用单倍体育种法育成世界上第一个作物新品种---单育1号烟草品种,现已有300种植物花药培养成功。其中我国首先培育出来的就有40余种,它们主要是粮食、油料、蔬菜、林木、果树等重要经济作物。据报道,水稻品种
培养基及其制备方法
培养基及其制备方法 1、营养肉汤培养基 胨10g 肉浸液1000ml 氯化钠5g 取胨与氯化钠，加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH 值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。 2、营养琼脂培养基 照上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入15～20g琼脂，调节pH值使灭菌后为 7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。 3、虎红琼脂培养基 胨5g 虎红（四氯四碘荧光素）0.0133g 葡萄糖10g （或0.133％虎红溶液10ml） 磷酸二氢钾(KH2PO4) 1g 琼脂15～20g 硫酸镁(MgSO4.7H2O) 0.5g 水1000ml 除葡萄糖、虎红外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、虎红，分装，115℃灭菌30分钟。 4 、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD) 胨10g 琼脂15～20g 酵母浸出粉5g 水1000ml 葡萄糖20g 除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热融化后，滤过，加入葡萄糖，分装，115℃灭菌15分钟。 5 、胆盐乳糖培养基(BL) 胨20g 牛胆盐 1.3g 乳糖5g （或去氧胆酸钠0.25g） 氯化钠5g 水100ml 磷酸氢二钾(K2HPO4) 4.0g 磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.3g 除乳糖、牛胆盐外，取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，115℃灭菌30分钟。 6 、曙红美亚甲蓝琼脂培养基(EMB) 营养琼脂培养基100ml 2％曙红溶液2ml 20％乳糖溶液5ml 0.5％亚甲蓝溶液 1.3～1.6ml
植物组织培养的培养基配制
植物组织培养的培养基配制、分装与灭菌 一、实验目的 1.配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。掌握植物组织培养基母液的配制方法和分装原则与方法。 2.掌握大量元素母液、微量元素母液、铁盐、有机物质、植物激素的配制和灭菌方法。 二、仪器设备及试剂 电磁炉天平(0.0001 g) 高压灭菌锅、量筒: 10ml、20ml、100ml、500 ml烧杯: 1000ml、500 ml、250 ml 、移液管: 1ml、2ml、5 ml 吸管若干、记号笔、三角瓶或试管、试管架锡铂纸、玻璃棒配制好的各种母液，如大量元素母液、微量元素母液、铁盐、有机物、生长调节剂等，个别生长调节剂要随配随用。蒸馏水、pH试纸蔗糖、琼脂等 1 molL NaOH溶液、1 mol/L HC1溶液。 三、方法和步骤 1.量取所配培养基总体积的2/3体积的蒸馏水，如要配1升培养基,先量取约700 m1体积的水。 2.根据培养基配方，用量筒量取所需要的各种元素的母液。 物质加入体积或重量大量元素母液(10x)100ml 、微量元素母液( 100)1 ml有机物质母液(200x)5ml 、铁盐母液(200x)5 ml、肌醇(200x)5 ml、蔗糖30g、琼脂7g
吸取母液时,注意应先将几种母液按顺序排好,不要弄错以免使培养基中药品成分发生改变。在培养不同的外植体时，应加入不同的激素，如培养康乃馨侧芽或茎段时加入1ml的1mg/ml 的6 BA;而胡萝卜愈伤组织培养中应加入2ml的1mg/ml 的24-D。加入一种母液后应先搅拌均匀,避免因不均而使局部浓度过高而引起沉淀,琼脂可在加入蔗糖调节完pH值后再加入，此时应注意搅拌,以免琼脂或蔗糖沉淀于烧杯底而炭化。 3.调节培养基的pH值，用pH计或pH试纸测定 培养基的pH按照培养材料的要求分别用1moILNaOH溶液、1molL HC1溶液来调节所配制培养基的pH值，- -般培养基的pH值约为5.8,培养的材料不同，对培养基的pH值要求也不同 4.分装 加热至沸腾片刻,以使琼脂充分溶解,检查时可注意烧杯内溶液是否透明。将配制并加热好的培养基分别装在事先洗净的三角瓶,用封口膜封口，注明标签,然后和用牛皮纸或报纸包好的培养皿及用三角瓶装好的蒸馏水一道进行高压灭菌。 5.培养基的灭菌 一般用医用高压锅来灭菌(方法略)，本实验采用全自动高压灭菌锅。 5.培养基的保存 毒过的培养基通常放在接种室或培养室中保存，一般应在消毒后的两周内用完,最好不要超过一个月。 四、注意事项
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识 培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。 一、基础培养基 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。 在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。 原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。 二、血清 细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些 痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5~20%。特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。然而，很多人也将胎牛血清