森林土壤氮的测定
森林土壤氮的测定
1 范围
本标准规定了森林土壤氮的测定方法，采用凯氏定氮法、连续流动分析仪法和元素分析仪法测定森林土壤全氮，碱解扩散法测定森林土壤水解性氮，比色法和连续流动分析仪法测定森林土壤硝态氮和铵态氮。
本标准适用于森林土壤全氮、水解性氮、硝态氮和铵态氮的测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 601 化学试剂标准滴定溶液的制备
GB/T 603 试验方法中所用制剂及制品的制备
GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法
LY/T 1210-1999 森林土壤样品的采集与制备
3 全氮的测定
3.1 凯氏定氮法
3.1.1 方法要点
土壤中的全氮在加速剂的参与下，用浓硫酸消煮，转化为铵态氮，用氢氧化钠碱化，加热蒸馏出来的氨用硼酸吸收，用酸标准溶液滴定，求出土壤全氮含量（未包括硝态氮和亚硝态氮）。包括硝态氮和亚硝态氮的土壤全氮的测定，在样品消煮前，需先用高锰酸钾将样品中的亚硝态氮氧化为硝态氮后，再用还原铁粉使硝态氮和亚硝态氮还原，转化成铵态氮。
3.1.2 试剂
所有试剂除注明外，均为分析纯。分析用水应符合GB/T 6682中二级水的规格要求。试验中所需标准滴定溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时均按GB/T 601、GB/T 603的规定制备。
3.1.2.1 消解加速剂：
硫酸钾（K2SO4）与五水硫酸铜（CuSO4·5H2O）以10:1混合，于研钵中研细，必须充分混合均匀。
3.1.2.2 硫酸
H2SO4，ρ=1.84 g/mL。
3.1.2.3 盐酸
HCl，ρ=1.19 g/mL。
3.1.2.4 10 mol/L 氢氧化钠溶液
称取400.0 g 氢氧化钠（NaOH ）溶于水中，并稀释至1 L 。 3.1.2.5 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液
称取0.40 g 氢氧化钠溶于水，定容到100 mL 。 3.1.2.6 甲基红—溴甲酚绿混合指示剂
称取0.50 g 溴钾酚绿（C 21H 14Br 4O 5S ）及0.10 g 甲基红（C 15H 15N 3O 2）于玛瑙研钵中研细，用少量95%乙醇（C 2H 5OH ）研磨至全部溶解，用95%乙醇定容到100 mL ，该指示剂储存期不超过2个月。 3.1.2.7 硼酸-指示剂溶液
称取10.0 g 硼酸（H 3BO 3），溶于1 L 水中。使用前，每升硼酸溶液中加5.0 mL 甲基红—溴甲酚绿混合指示剂（3.1.2.6），并用0.1 mol/L 氢氧化钠溶液（3.1.2.5）调节至红紫色（pH 值约4.5）。此液放置时间不宜超过1周，如在使用过程中pH 值有变化，需随时用稀酸或稀碱调节。 3.1.2.8 0.1 mol/L 硼砂溶液
称取9.534 g 硼砂（Na 2B 4O 7·10H 2O ）溶于水，移入500 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。 3.1.2.9 0.02 mol/L 硼砂标准溶液
将0.1 mol/L 硼砂溶液（3.1.2.8）准确稀释5倍。 3.1.2.10 0.1 mol/L 盐酸溶液或硫酸溶液
吸取8.4 mL 盐酸（3.1.2.3），用水定容到1 L 。或吸取5.4 mL 硫酸（3.1.2.2），缓缓加入200 mL 水中，定容到1 L 。
3.1.2.11 0.02 mol/L 盐酸或硫酸标准溶液
将0.1 mol/L 的盐酸溶液或硫酸溶液（3.1.2.10）准确稀释5倍，获得0.02 mol/L 的盐酸或硫酸标准溶液，用硼砂标准溶液（3.1.2.9）标定。
标定：吸取20.0 mL 0.02 mol/L 硼砂标准溶液（3.1.2.9）于100 mL 锥形瓶中，加1滴甲基化溴甲酚绿混合指示剂（3.1.2.6），用盐酸或硫酸标准溶液（3.1.2.11）滴定至溶液由蓝色变为紫红色为终点。同时做空白试验。盐酸标准溶液的浓度按下式计算：
21
1V V V c c -?=
(1)
式中：
c —盐酸标准溶液浓度，mol/L ； c 1—硼砂标准溶液浓度，mol/L ； V 1─硼砂标准溶液体积，mL ； V 2─盐酸标准溶液体积，mL ；
V 0─空白试验消耗盐酸标准溶液体积，mL 。 3.1.2.12 高锰酸钾溶液
称取25.0 g 高锰酸钾（KMnO 4）溶于500 mL 水中，贮于棕色瓶中。
3.1.2.13 1:1硫酸
硫酸（3.1.2.2）与水体积比为1:1，均匀混合。
3.1.2.14 辛醇
C3(C2H5)C5H10OH。
3.1.2.15 还原铁粉
Fe，磨细通过孔径0.149 mm筛。
3.1.3 仪器
3.1.3.1 天平（感量0.01 g）
3.1.3.2 天平（感量0.0001 g）
3.1.3.3 半自动定氮仪或全自动定氮仪
3.1.3.4 控温消煮炉
3.1.4 测定步骤
3.1.
4.1 土壤样品的制备
按LY/T 1210-1999规定制备土壤样品。
3.1.
4.2 土壤水分含量的测定
按LY/T 1210-1999规定测定土样水分系数。
3.1.
4.3 土样消煮
3.1.
4.3.1 不包括硝态氮和亚硝态氮的消煮
称取过0.149 mm筛的风干土样1.0××× g（含氮约1 mg），将土样送入干燥的消化管底部（勿将样品粘附在瓶壁上），加入2 g加速剂（3.1.2.1），摇匀，加数滴水使样品湿润，然后加5.0 mL浓硫酸（3.1.2.2）。将消煮管接上回流装置或插上弯颈玻璃漏斗后置于控温消煮炉上，用小火200℃加热（温度升到200℃开始计时），20 min后，加强火力至375℃，并以H2SO4蒸汽在瓶颈上部1/3处冷凝回流为宜，待消煮液和土粒全部变成灰白稍带绿色后，再继续消煮1 h后关闭电源，冷却，待蒸馏。
3.1.
4.3.2 包括硝态氮和亚硝态氮的消煮
称取过0.149 mm筛的风干土样1.0×××g（含氮约1 mg），将土样送入干燥的消化管底部（勿将样品粘附在瓶壁上），加1.0 mL高锰酸钾溶液（3.1.2.12），摇动消化管，再缓缓加入2.0 mL 1:1硫酸（3.1.2.13），不断转动消化管，然后放置5 min，再加入1滴辛醇（3.1.2.14）。通过长颈漏斗将0.5 g（±0.01 g）还原铁粉（3.1.2.15）送入消化管底部，瓶口盖上小漏斗，转动消化管，使铁粉与酸接触，待剧烈反应停止时（约5 min），将消化管置于控温消煮炉上缓缓加热45 min（瓶内土液应保持微沸，以不引起大量水分丢失为宜）。待消化管冷却后，加2.0 g加速剂（3.1.2.1）和5.0 mL硫酸（3.1.2.2），摇匀。按3.1.4.3.1的步骤消煮至土液全部变为黄绿色，再继续消煮1 h。消煮完毕，冷却，待蒸馏。
3.1.
4.4 空白溶液的制备
空白溶液的制备除不加土样外，其他步骤同3.1.4.3.1或3.1.4.3.2。
3.1.
4.5 测定
3.1.
4.
5.1 半自动定氮仪 3.1.4.5.1.1 蒸馏和滴定
蒸馏前先按仪器使用说明书检查定氮仪，并用去离子水空蒸至盐酸消耗量小于0.4 mL 以下，将管道清洗干净。往150 mL 锥形瓶中加10.0 mL 硼酸-指示剂溶液（3.1.2.7），置于定氮仪冷凝管下端，管口插入硼酸溶液中，以免吸收不完全。将消化管接到定氮仪上，加入20 mL 氢氧化钠溶液（3.1.2.4）进行蒸馏，待馏出液体积约50 mL 时，即蒸馏完毕。用0.02 mol/L 盐酸或硫酸标准溶液（3.1.2.11）滴定馏出液，由蓝绿色刚变为紫红色且半分钟不退色时为终点。记录所用酸标准溶液的体积（mL ）。空白测定所用酸标准溶液的体积，一般不得超过0.4 mL 。 3.1.4.5.1.2 结果计算
31
010014
.0)(????-=
k m c V V W N (2)
k 1=
)
()
g (g 风干土重烘干土重 (3)
式中：
W N —全氮含量，g/kg ；
V ─滴定样品溶液所用盐酸标准溶液的体积，mL ； V 0─滴定空白溶液所用盐酸标准溶液的体积，mL ； c ─盐酸标准溶液的浓度，mol/L ；
0.014─氮原子的毫摩尔质量，g/mmol ； m ─风干土样质量，g ；
k 1—由风干土样换算成烘干土样的水分换算系数。 3.1.4.5.2 全自动定氮仪
参照仪器说明，在仪器设定中设定加入50 mL 水、40 mL 氢氧化钠溶液（3.1.2.5）和25 mL 硼酸硼酸-指示剂溶液（3.1.2.7），输入土样质量、标准酸浓度（3.1.2.11），将消化管置于自动定氮仪上进行蒸馏、滴定，同时先做空白溶液试验测定，空白所用标准溶液的体积，仪器自动扣除空白值，自动计算和记录样品含氮量，测定完毕可直接打印测定结果。 3.1.5 允许偏差
按表1规定。
表1允许偏差
测定值（g/kg ）
允许偏差（g/kg ）
>5 5～1 1～0.5 <0.5
0.30～0.15 0.15～0.05 0.05～0.03 <0.03
3.2 连续流动分析仪法
3.2.1 方法要点
土壤消解液中的铵态氮与次氯酸钠反应生成氯化铵，氯化铵与水杨酸反应,形成5—氨基水杨酸，再经氧化和络合后形成蓝色络合物，在波长660 nm处测定其吸收值。
3.2.2 试剂
3.2.2.1 Brij-35
30%溶液（Bran+Luebbe No. T21-0110-06）。
3.2.2.2 缓冲溶液
分别称取35.8 g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），50.0 g酒石酸钾钠（C4H4KNaO6·4H2O）及29.3 g 的氢氧化钠（NaOH）溶于600 mL水中，定容至1000 mL，再加2.0 mL Brij-35混匀。
3.2.2.3 水杨酸钠
称取40.0 g水杨酸钠（C7H5NaO3）溶于600 mL水，加1.0 g硝普钠（Na2Fe(CN)5NO·2H2O），定容至1 L。
3.2.2.4 次氯酸钠
吸取3.0 mL含有效氯52.5 g/L的次氯酸钠（NaClO）溶液于60 mL蒸馏水中，定容至100 mL。
3.2.2.5 铵态氮标准溶液
称取105℃烘干2 h的硫酸铵[(NH4)2SO4，优级纯]0.4717 g溶于水，并定容至1 L，制备成含铵态氮的贮存溶液[ρ(NH4+-N)=100 mg/L]；使用前用水稀释4倍，即配制成含铵态氮的标准溶液[ρ(NH4+-N)=25 mg/L]备用。
3.2.3 仪器
3.2.3.1 天平（感量0.01 g）
3.2.3.2 天平（感量0.0001 g）
3.2.3.3 控温消煮炉
3.2.3.4 流动分析仪
3.2.4 测定步骤
3.2.
4.1 土壤消煮
同3.1.4.3，消解液定容到100 mL，此溶液含硫酸的体积分数为5%。试剂空白则用50 mL容量瓶定容，此溶液硫酸的体积分数为10%。
3.2.
4.2 空白溶液的制备
空白溶液的制备除不加土样外，其他步骤同3.1.4.3。
3.2.
4.3 标准曲线
先加12.50 mL 试剂空白溶液于6个25 mL 容量瓶中，再分别加入0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mL 25 mg/L 的NH 4+ - N 标准溶液，用水定容，制备成0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mg/L 的标准系列溶液。
3.2.
4.4 测定
参照仪器使用说明书，选择工作参数，将连续流动分析仪的溶液吸管分别置于配置好的溶液中，待基线稳定后依次测定标准溶液、空白溶液和土壤消解液。 3.2.5 结果计算
3
1010)(???-=
k m V
c c W N (4)
式中：
W N —全氮含量，g/kg ；
c —从标准曲线上获得的样品溶液的氮浓度，mg/L ； c 0—从标准曲线上获得的空白溶液的氮浓度，mg/L ； V —消解液定容体积，100 mL ； m —风干土样质量，g ；
k 1—由风干土样换算成烘干土样的水分换算系数。 3.2.6 允许偏差 同3.1.4.6。 3.3 元素分析仪法 3.3.1 方法要点
样品在燃烧管中高温燃烧，使被测氮元素的化合物转化为NO x ，然后经自然铜的还原和杂质（如卤素）去除过程，NO x 被转化为N 2，随后氮的含量被热导检测器检测。 3.3.2 试剂和材料 3.3.2.1 标准物质试剂
苯甲酸，乙酰苯胺，2，4-二硝基苯腙及对氨基苯磺酸。 3.3.2.2 载气
氦气或氩气。 3.3.2.3 氧气 3.3.3 仪器
3.3.3.1 天平（感量0.1 mg ） 3.3.3.2 元素分析仪 3.3.4 测定步骤
参照仪器使用说明书，按样品测定程序，测定土壤样品的氮含量。
3.3.5 计算
1
k X W N
...................................... （5） 式中：
W N —全氮含量，g/kg ；
X —仪器测量信号所转换成相应的含氮量，mg/kg ； k 1—由风干土样换算成烘干土样的水分换算系数。 3.3.6 允许偏差
两次测定结果允许相对偏差小于5%。 4 水解性氮的测定 4.1 方法要点
用1.8mol/L 氢氧化钠溶液处理土壤，在扩散皿中，土壤于碱性条件下进行水解，使易水解态氮经碱解转化为铵态氮，扩散后由硼酸溶液吸收，用标准酸滴定，计算碱解氮的含量。如果森林土壤硝态氮含量较高，须加还原剂还原。而森林土壤的潜育土壤由于硝态氮含量较低，不需加还原剂使其还原，因此氢氧化钠溶液浓度可降低到1.2 mol/L 。 4.2 试剂
4.2.1 1.8 mol/L 氢氧化钠溶液
称取72.0 g 氢氧化钠（NaOH ）溶于水，定容至1 L 。 4.2.2 1.2 mol/L 氢氧化钠溶液
称取48.0 g 氢氧化钠（NaOH ）溶于水，定容至1 L 。 4.2.3 锌-硫酸亚铁还原剂
称取磨细并通过0.25 mm 筛孔的硫酸亚铁（FeSO 4·7H 2O ）50.0 g 及10.0 g 锌粉（Zn ）混匀，贮于棕色瓶中。 4.2.4 碱性胶液
称取40.0 g 阿拉伯胶和50 mL 水在烧杯中，调匀，加热到60～70℃，冷却。加入40 mL 甘油（C 3H 8O 3）和20 mL 饱和碳酸钾（K 2CO 3）水溶液，搅匀，冷却。离心除去不溶物（最好放置在盛有浓硫酸的干燥器中以除去氨）。 4.2.5 0.01 mol/L 盐酸标准溶液
量取100.0 mL 的0.1 mol/L 盐酸溶液（3.1.2.10），用水定容至1 L 。盐酸标准溶液的标定同3.1.2.11。 4.2.6 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂
同3.1.2.6。
4.2.7 硼酸-指示剂溶液
同3.1.2.7。 4.3 仪器
4.3.1 天平（感量0.01 g ） 4.3.2 天平（感量0.0001 g ） 4.3.3 恒温箱 4.4 测定步骤
（1）称取过2 mm 筛的风干土样1.00～2.00 g （精确至0.01 g ）均匀地平铺于扩散皿外室，在土壤外室内加1 g 锌—硫酸亚铁还原剂平铺土样上（若为潜育土壤不须加还原剂）。同样做试剂空白作参比。
（2）加3.0 mL 20 g/L 硼酸-指示剂溶液于扩散皿内室。
（3）在扩散皿外室边缘上方涂碱性胶液，盖好毛玻璃并旋转数次，使毛玻璃与扩散皿边完全粘和。然后慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿的一边露出一条狭缝，在此缺口加入10.0 mL1.8 mol/L 氢氧化钠溶液于扩散皿的外室，立即用毛玻璃盖严。由于碱性胶液的碱性很强，在涂胶液时，必须细心，慎防污染内室造成误差。
（4）水平地轻轻转动扩散皿，使外室溶液与土样充分混合，然后小心地用橡皮筋二根交叉成十字形圈紧，使毛玻璃固定。放在恒温箱中，于40℃保温24 h ，在此期间应间歇地水平轻轻转动3次。
（5）用0.01 mol/L 盐酸标准溶液滴定内室硼酸中吸收的氨量，颜色由蓝变紫红，即达终点。滴定时应用细玻璃棒搅动内室溶液，不宜摇动扩散皿，以免溢出，接近终点时可用玻璃棒少沾滴定管尖端的标准酸溶液，以防滴过终点。
（6）在样品测定同时进行试剂空白和标准土样的测定。 4.5 结果计算
31
01014
)(????-=
k m c V V W N (6)
式中：
W N —水解性氮含量，mg/kg ；
V —滴定样品所用盐酸标准溶液体积，mL ； V 0—滴定空白所用盐酸标准溶液体积，mL ； c —盐酸标准溶液的浓度，mol/L ； m —风干土样质量，g ；
k 1—由风干土样换算成烘干土样的水分换算系数； 14—氮原子的摩尔质量，mg/mmol 。 4.6 允许偏差
按表2规定。
表2允许偏差
测定值 （mg/kg ） 允许偏差
>200 200～50 <50
相对偏差<5%
绝对偏差10～2.5（mg/kg ） 绝对偏差<2.5（mg/kg ）
5 硝态氮的测定
5.1 酚二磺酸比色法
5.1.1 方法要点
土样用饱和硫酸钙溶液浸提后，取部分浸提液在微碱性条件下蒸发至干，残渣用酚二磺酸处理，此时硝态氮即与酚二磺酸生成硝基酚二磺酸，此反应必须在无水条件下才能迅速完成。反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色盐溶液，可在420 nm波长处比色测定。
5.1.2 试剂
5.1.2.1 酚二磺酸试剂
称取25.0 g白色苯酚（C6H5OH）在500 mL锥形瓶中，加入225.0 mL浓硫酸（H2SO4），混匀，瓶口松松地加塞，置于沸水浴中加热6 h。试剂冷却后可能析出结晶，用时需重新加热溶解，但不可加水。试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
5.1.2.2 硫酸钙
CaSO4 2H2O，粉状。
5.1.2.3 碳酸钙
CaCO3，粉状。
5.1.2.4 氢氧化钙
Ca(OH)2，粉状。
5.1.2.5 碳酸镁
MgCO3，粉状。
5.1.2.6 硫酸银
Ag2SO4，粉状。
5.1.2.7 硝态氮标准溶液
称取105℃烘干2 h的硝酸钾（KNO3，优级纯）0.7220 g溶于水，定容至1 L，此为100 mg/L硝态氮溶液[ρ(NO3--N)=100 mg/L]。将此溶液准确稀释10倍，即为硝态氮标准溶液[ρ（NO3--N）=10 mg/L]。
5.1.2.8 1:1氨水
浓氨水（NH3·H2O，26%）与水体积比为1:1，均匀混合。
5.1.2.9 活性炭
不含NO3--N，用以除去有机质的颜色。
5.1.3 仪器
5.1.3.1 天平（感量0.01 g）
5.1.3.2 天平（感量0.0001 g）
5.1.3.3 往复震荡机（震荡频率150～180 r/min ） 5.1.3.4 紫外/可见分光光度计 5.1.3.5 水浴锅 5.1.3.6 瓷蒸发皿。 5.1.4 测定步骤 5.1.4.1 土壤样品的制备
测定硝态氮和铵态氮的土壤样品，若在采样3天内分析测定，则可保存在4℃条件下，不然可在-20℃条件下储存待测。 5.1.4.2 待测液的制备
称取过2 mm 筛的新鲜土样50.00 g 于500 mL 浸提瓶中，加0.5 g 硫酸钙和250.0 mL 水，用振荡机振荡30 min ，将悬液上清液用干滤纸过滤，澄清的滤液用干燥洁净的瓶收集。如果滤液因有机质而呈现颜色，可加活性炭（5.1.2.9）除之。 5.1.4.3 空白溶液的制备
空白溶液的制备除不加土样外，其他步骤同5.1.4.2。 5.1.4.4 标准曲线
分别吸取10 mg/L 硝态氮标准溶液0.00、1.00、2.00、5.00、10.00、15.00、20.00 mL 于蒸发皿中，加0.05 g 碳酸钙（5.1.2.3），在水浴上蒸干，到达干燥时不应继续加热。冷却，迅速加入2.0 mL 酚二磺酸试剂（5.1.2.1），将蒸发皿旋转，使试剂充分接触蒸干物。静止10 min 使充分作用后，加20.0 mL 水，用玻璃棒搅拌直到蒸干物全部溶解。冷却后缓缓加入1:1氨水（5.1.2.8），并不断搅拌，至溶液呈微碱性（溶液显黄色），且多加2.0 mL ，以保证氨水试剂过量。然后将溶液完全地转移入100 mL 容量瓶中，加水定容，获得的标准系列溶液浓度为0.00、0.10、0.20、0.50、1.00、1.50、2.00 mg/L 。在分光光度计上用1 cm 比色皿在波长420 nm 处进行比色，以0.00 mg/L 标准溶液为参比溶液调节仪器零点，由低到高测定标准系列浓度的吸光值。 5.1.4.5 测定
吸取待测液25～50 mL （含硝态氮20～150 mg/L ）于蒸发皿中，加0.05 g 碳酸钙（5.1.2.3），在水浴上蒸干，到达干燥时不应继续加热。冷却，迅速加入2.0 mL 酚二磺酸试剂（5.1.2.1），将蒸发皿旋转，使试剂充分接触蒸干物。静止10 min 使充分作用后，加20 mL 水，用玻璃棒搅拌直到蒸干物全部溶解。冷却后缓缓加入1:1氨水（5.1.2.8），并不断搅拌，至溶液呈微碱性（溶液显黄色），且多加2.0 mL ，以保证氨水试剂过量。然后将溶液完全地转移入100 mL 容量瓶中，加水定容。在分光光度计上用1 cm 比色皿在波长420 nm 处进行比色。 5.1.5 结果计算
2
0)(k m t V c c W s
N ???-=
(7)
t s =
)
()
(mL mL 吸取待测液体积待测液体积 (8)
k 2=
)
()
g (g 鲜土重烘干土重 (9)
W N —硝态氮（NO 3--N ）含量，mg/kg ；
c —从工作曲线上获得的待测液的硝态氮浓度，mg/L ； c 0—从工作曲线上获得的空白溶液的硝态氮浓度，mg/L ； V —显色液体积，100mL ； t s —分取倍数；
m —鲜土土样质量，g ；
k 2—由鲜土土样换算成烘干土样的水分换算系数。 5.1.6 允许偏差
两次测定结果允许相对偏差小于8%。 5.2 连续流动分析仪法 5.2.1 方法要点
土壤样品用2 mol/L KCl 溶液浸提，在碱性的硫酸肼条件下，将NO 3--N 用Cu 作催化剂还原成NO 2--N ，然后与磺胺生成重氮盐，再与N-（1-萘基）-乙二胺偶联生成粉红色的化合物，在550 nm 波长下检测。 5.2.2 试剂
5.2.2.1 2 mol/L KCl 溶液
称取氯化钾（KCl ）149.0 g 溶于水中，定容至1 L 。 5.2.2.2 Brij-35
30%溶液（Bran+Luebbe No. T21-0110-06）。 5.2.2.3 硫酸铜溶液
称取1.0 g 硫酸铜（CuSO 4·5H 2O ）溶于约600 mL 水中，定容到1 L 。 5.2.2.4 硫酸锌溶液
称取10.0 g 硫酸锌（ZnSO 4·7H 2O ）溶于约600 mL 水中，定容到1 L 。 5.2.2.5 显色剂
称取10.0 g 磺胺（C 6H 8O 2N 2S ）溶于约600 mL 水中，加入0.5 g N-（1-萘基）乙二胺二盐酸盐（NEDD ，C 12H 14N 2·2HCl·CH 3OH ），并混合均匀，再加入100 mL 磷酸（H 3PO 4，ρ=1.69 g/mL ），定容至1 L ，储存于棕色瓶中。 5.2.2.6 NaOH 溶液
称取NaOH 40.0 g 溶于约600 mL 水中，加入1.0 mL Brij-35（5.2.2.2），定容至1 L 。
5.2.2.7 磷酸溶液
吸取3.0 mL 磷酸（ρ=1.69 g/mL ）加入约600 mL 水中，溶入4.0 g 十水二磷酸钠（Na 4P 2O 7·10H 2O ）并混合均匀，加入1.0 mL Brij-35（5.2.2.2），定容至1 L 。 5.2.2.8 硫酸肼
将14.0 mL 硫酸铜溶液（5.2.2.3）、10.0 mL 硫酸锌溶液（5.2.2.4）、6.0 g 硫酸肼（H 4N 2·H 2SO 4）加入约600 mL 水中，溶解后定容至1 L 。 5.2.2.9 硝态氮标准溶液
称取105℃烘干2 h 的硝酸钾（KNO 3）0.7220 g 溶于2 mol/L KCl 溶液，并用2 mol/L KCl 溶液定容至1 L ，此为硝态氮标准溶液[ρ（NO 3--N ）=100 mg/L]。 5.2.3 仪器
5.2.3.1 天平（感量0.01 g ） 5.2.3.2 天平（感量0.0001 g ）
5.2.3.3 往复震荡机（震荡频率150～180 r/min ） 5.2.3.4 流动分析仪 5.2.4 测定步骤 5.2.4.1 待测液的制备
称取过2 mm 筛的新鲜土样20.00 g 于200 mL 浸提瓶中，加入100.0 mL 氯化钾溶液（5.2.2.1），加塞，放在振荡机上振荡1 h ，用干滤纸过滤，如不能在24 h 内分析，需置于冰箱中存放。 5.2.4.2 空白溶液的制备
空白溶液的制备除不加土样外，其他步骤同5.2.4.1。 5.2.4.3 测定
分别吸取100 mg/L 硝态氮标准溶液（5.2.2.9）0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、5.00 mL 于100 mL 容量瓶中，用KCl 溶液定容，即为含0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、5.00 mg/L 的NO 3--N 标准系列溶液。
参照仪器使用说明书，选择工作参数，将连续流动分析仪的溶液吸管分别置于配置好的溶液中，待基线稳定后依次测定各标准溶液、空白溶液和待测液铵态氮的浓度。 5.2.5 结果计算
2
0)(k m V
c c W N ??-=
(10)
式中：
W N —硝态氮（NO 3-N ）含量，mg/kg ；
c —从标准曲线上获得的待测液的硝态氮浓度，mg/L ； c 0—从标准曲线上获得的空白溶液的硝态氮浓度，mg/L ； V —待测液体积，100mL ；
m—鲜土土样质量，g；
k2—由鲜土土样换算成烘干土样的水分换算系数（烘干土重/鲜土重）。
5.2.6 允许偏差
两次测定结果允许相对偏差小于8%。
6 铵态氮的测定
6.1 靛酚蓝比色法
6.1.1 方法要点
用2 mol/L KCl浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝。在含氮0.05～0.5 mol/L的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。
6.1.2 试剂
6.1.2.1 2 mol/L氯化钾溶液
称取氯化钾（KCl）149.0 g溶于水中，定容至1 L。
6.1.2.2 苯酚溶液
称取10.0 g苯酚（C6H5OH）和100 mg硝普钠（Na2[Fe(CN)5NO]·2H2O）用水溶解后，稀释至1 L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。亚硝基铁氰化钠有剧毒，此试剂的使用和废液的处理应慎重。
6.1.2.3 次氯酸钠碱性溶液
称取10.0 g氢氧化钠（NaOH）、7.06g磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）、31.8 g磷酸钠（Na3PO4·12H2O）溶于水中，再加入10 mL次氯酸钠溶液（NaClO，称取5.25 g次氯酸钠溶于100 mL水中获得的溶液），稀释至1 L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
6.1.2.4 掩蔽剂
称取40.0 g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）溶于100 mL水，再称取10.0 g EDTA二钠盐（C10H14O8N2Na2）溶于100 mL水中，然后将两种溶液等体积混合。每100 mL混合液中加入0.5 mL 10 mol/L氢氧化钠。
6.1.2.5 铵态氮标准溶液
称取105℃烘干2 h的硫酸铵[(NH4)2SO4，优级纯]0.4717 g溶于水中，定容至1 L，制备成含铵态氮的贮存溶液[ρ(NH4+-N)=100 mg/L]；使用前将其加水稀释40倍，即为铵态氮标准溶液[ρ(NH4+-N)=2.5 mg/L]。
6.1.3 仪器
6.1.3.1 天平（感量0.01 g）
6.1.3.2 天平（感量0.0001 g）
6.1.3.3 往复震荡机（震荡频率150～180 r/min ） 6.1.3.4 紫外/可见分光光度计 6.1.4 测定步骤 6.1.4.1 待测液的制备
称取过2 mm 筛的新鲜土样20.00 g 于200 mL 浸提瓶中，加入100 mL 氯化钾溶液（6.1.2.1），加塞，放在振荡机上振荡1 h ，用干滤纸过滤，如不能在24 h 内分析，需置于冰箱中存放（如果土壤NH 4+-N 含量低，可将液土比改为2.5:1）。 6.1.4.2 空白溶液的制备
空白溶液的制备除不加土样外，其他步骤同6.1.4.1。 6.1.4.3 标准曲线
分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL 铵态氮标准液（6.1.2.5）于50mL 容量瓶中，各加10 mL 氯化钾溶液（6.1.2.1），标准系列溶液浓度为0.00、0.10、0.20、0.40、0.50 mg/L ，然后加入苯酚溶液（6.1.2.2）5.0 mL 和次氯酸钠碱性溶液（6.1.2.3）5 mL ，摇匀。在20℃左右的室温下放置1 h 后，加掩蔽剂（6.1.2.4）1.0 mL 以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1 cm 比色皿在625 nm 波长处（或红色滤光片）进行比色，以0.00 mg/L 标准溶液为参比溶液调节仪器零点，由低到高测定标准系列待测液的吸收值。 6.1.4.4 测定
吸取土壤浸出液2～10 mL （含NH 4+-N 2～25 μg ）放入50 mL 容量瓶中，用氯化钾溶液（6.1.2.1）补充至10 mL ，然后加入苯酚溶液（6.1.2.2）5.0 mL 和次氯酸钠碱性溶液（6.1.2.3）5.0 mL ，摇匀。在20℃左右的室温下放置1 h 后，加掩蔽剂（6.1.2.4）1.0 mL 以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1 cm 比色皿在625 nm 波长处（或红色滤光片）进行比色，测定待测液空白溶液和待测液的吸光值。
6.1.5 结果计算
2
0)(k m t V c c W s
N ???-=
(11)
式中：
W N —铵态氮（NH 4-N ）含量，mg/kg ；
c —由标准曲线上获得的待测液的铵态氮的浓度，mg/L ； c 0—由标准曲线上获得的空白溶液的铵态氮的浓度，mg/L ； V —显色液的体积，mL ；
t s —分取倍数；
m —鲜土土样质量，g ；
k 2—将鲜土土样换算成烘干土样的水分换算系数。 6.1.6 允许偏差 同5.1.6。
6.2 连续流动分析仪法
6.2.1 方法要点
土壤用氯化钾溶液浸提。以硝普钠作为催化剂，铵态氮与水杨酸钠和二氯异氰酸钠盐反应生成蓝色化合物，在660 nm波长处测定其吸光值。
6.2.2 试剂
6.2.2.1 2 mol/L KCl溶液
称取氯化钾（KCl，分析纯）149.0 g溶于水中，定容至1 L。
6.2.2.2 Brij-35
30%溶液（Bran+Luebbe No. T21-0110-06）。
6.2.2.3 缓冲溶液
称取40.0 g柠檬酸钠（Na3C6H5O7）溶于约600 mL水中，定容到1 L。混匀后加1.0 mL30%的Brij-35（6.2.2.2）。
6.2.2.4 水杨酸钠
称取40.0 g水杨酸钠溶于600 mL水，加入1.0 g硝普钠（Na2Fe（CN）5NO·2H2O）定容至1 L。
6.2.2.5 二氯异氰酸钠盐
称取20.0 g氢氧化钠（NaOH）和3.0 g二氯异氰酸钠（C3Cl2N3NaO3·2H2O）溶于约600 mL水中，混匀后定容至1 L。如果没有二氯异氰酸钠，可用12.0 mL次氯酸钠（NaClO）代替。
6.2.2.6 铵态氮标准溶液
称取105℃烘干2 h的硫酸铵[(NH4)2SO4，优级纯]0.4717 g溶于2 mol/L KCl溶液，并用2 mol/L KCl 溶液定容至1 L，制备成含铵态氮贮存溶液[ρ(NH4+-N)=100 mg/L]；使用前用2 mol/L KCl溶液稀释2倍，即为铵态氮标准溶液[ρ(NH4+-N)=50 mg/L]。
6.2.3 仪器
6.2.3.1 天平（感量0.01 g）
6.2.3.2 天平（感量0.0001 g）
6.2.3.3 往复震荡机（震荡频率150～180 r/min）
6.2.3.4 流动分析仪
6.2.4 测定步骤
6.2.4.1 待测液的制备
同5.2.4.1。
6.2.4.2 空白溶液的制备
空白溶液的制备除不加土样外，其他步骤同5.2.4.1。
6.2.4.3 标准曲线
吸取铵态氮标准溶液（6.2.2.6）0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、5.00 mL 于50 mL 容量瓶中，用2 mol/L KCl 溶液（6.2.2.1）定容至刻度。获得的标准系列溶液浓度为0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、5.00 mg/L ，通过流动分析仪进行测定。 6.2.4.4 测定
参照仪器使用说明书，选择工作参数，将连续流动分析仪的溶液吸管分别置于配置好的溶液中，待基线稳定后依次测定各标准溶液、空白溶液和待测液铵态氮的浓度。 6.2.5 结果计算
2
0)(k m V
c c W N ??-=
(12)
式中：
W N —铵态氮（NH 4+-N ）含量，mg/kg ；
c —从标准曲线上获得的待测液的硝态氮浓度，mg/L ； c 0—从标准曲线上获得的空白溶液的硝态氮浓度，mg/L ； V —待测液体积，100 mL ； m —鲜土土样质量，g ；
k 2—由鲜土土样换算成烘干土样的水分换算系数。 6.2.6 允许偏差 同5.1.6。
土壤水解性氮测定4
土壤水解性氮的测定 (碱解扩散法) 1 方法原理 在扩散皿中，土壤于碱性条件下水解，使易水解态氮转化为NH 3，扩散后为H 3B03所吸收。H 3B03吸收液中的NH 3再用标准酸滴定，由此计算碱解氮的含量。 2 仪器设备 恒温培养箱；扩散皿；滴定管；移液器等 3 试剂配制 3.1 1mol ·L -1 Na0H 溶液：40.0克Na0H （三级）溶于水，冷却后，定容至1升。 3.2 2%H 3B03指示剂： 20g 纯 H 3B03加水700毫升稍稍加热溶解之，冷却后，转移至1000毫升容量瓶中，加入200ml95%乙醇和20毫升混合指示剂（0.066克溴甲酚绿和0.033克甲基红于玛瑙研钵中，加入少 量95%乙醇，研磨至指示剂全部溶解后，用95%乙醇定容至100毫升），然后用0.05 mol ·L -1 NaOH 或 0.05 mol ·L -1 HCL 调节溶液至紫红色（葡萄酒色，PH 值为4.5），最后加水至1000毫升，摇匀，贮于 塑料瓶中备用。 3.3 0.005 mol ·L -1 H 2S04标准溶液：先配制0.1 mol ·L -1 H 2S04溶液（每升水中注入2.67ml 浓硫酸）， 取上述0.1 mol ·L -1 H 2S04 50ml 定容到1000ml （稀释20倍）。 3.4 碱性胶液：阿拉伯胶40.0g 和水50ml 在烧杯中热温至70～80℃，搅拌促进溶解，约1小时后放冷。加入20ml 甘油和20ml 饱和碳酸钾水溶液，搅拌、放冷。离心除去泡沫和不溶物，上清液贮于具塞玻璃瓶中备用。 3.操作步骤 称取风干土(过1mm 筛)2.00克，均匀铺在扩散皿外室，水平的轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。 在扩散皿的内室中加入2%的H 3B03指示剂 2m1，然后在皿的外室边缘上涂上碱性胶液，盖上毛玻璃，旋转至完全粘合。再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条小缝，从毛玻璃狭缝处迅速加入10m1 1 mol ·L -1 的Na0H 溶液，立即盖严，用橡皮筋圈紧。随后放入40士1℃恒温箱中，碱解扩散24士0.5小时后取出（可以观察到内室应为蓝色），内室吸收液中的NH 3用0.005M 或0.0025M H 2S04滴定，终点由蓝绿色转变至红紫色，记下所用去的标准酸量（毫升）。同时进行空白试验。并做土壤含水量。 4.结果计算： 水解氮（mg ·kg -1 ）=m N V V 3 0100.14)(???- 式中： N ——H 2SO 4标准溶液的浓度； V ——样品测定时用去H 2SO 4标准溶液的体积（ml ）； V 0——空白试验时用去H 2SO 4标准溶液的体积（ml ）； 14.0——N 的当量（mg ）； 103——改换为mg ·kg -1的因数。 m ——烘干样品质量（g ） 两次平行测定结果允许误差为5 mg ·kg -1。 注意： 1. 由于碱性胶液的碱性很强，在涂胶液和洗涤扩散皿时，必须特别细心，以防污染内室，造成错误。 2. 滴定时要用小玻璃棒小心搅动吸收液，切不可摇动扩散皿。 3. 本方法不包括硝态氮。
土壤速效氮磷钾、有机质测定方法
土壤水解性氮的测定(碱解扩散法) 土壤水解性氮，包括矿质态氮和有机态氮中比较易于分解的部分。其测定结果与作物氮素吸收有较好的相关性。测定土壤中水解性氮的变化动态，能及时了解土壤肥力，指导施肥。 测定原理 在密封的扩散皿中，用1.8mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液水解土壤样品，在恒温条件下使有效氮碱解转化为氨气状态，并不断地扩散逸出，由硼酸(H3BO3)吸收，再用标准盐酸滴定，计算出土壤水解性氮的含量。旱地土壤硝态氮含量较高，需加硫酸亚铁使之还原成铵态氮。由于硫酸亚铁本身会中和部分氢氧化钠，故需提高碱的浓度(1.8mol/L，使碱保持1.2mol/L的浓度)。水稻土壤中硝态氮含量极微，可以省去加硫酸亚铁，直接用1.2mol/L氢氧化钠水解。 操作步骤 1.称取通过18号筛(孔径1mm)风干样品2g(精确到0.001g)和1g硫酸亚铁粉剂，均匀铺在扩散皿外室内，水平地轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。(水稻土样品则不必加硫酸亚铁。) 2.用吸管吸取2%硼酸溶液2ml，加入扩散皿内室，并滴加1滴定氮混合指示剂，然后在皿的外室边缘涂上特制胶水，盖上毛玻璃，并旋转数次，以便毛玻璃与皿边完全粘合，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条狭缝，迅速用移液管加入10ml1.8mol/L氢氧化钠于皿的外室(水稻土样品则加入10ml1.2mol/L氢氧化钠)，立即用毛玻璃盖严。 3.水平轻轻旋转扩散皿，使碱溶液与土壤充分混合均匀，用橡皮筋固定，贴上标签，随后放入40℃恒温箱中。24小时后取出，再以0.01mol/LHCl标准溶液用微量滴定管滴定内室所吸收的氮量，溶液由蓝色滴至微红色为终点，记下盐酸用量毫升数V。同时要做空白试验，滴定所用盐酸量为V0。 结果计算 水解性氮(mg/100g土)= N×(V-V0)×14／样品重×100 式中： N—标准盐酸的摩尔浓度； V—滴定样品时所用去的盐酸的毫升数； V0—空白试验所消耗的标准盐酸的毫升数；
土壤各种氮的测定
土壤铵态氮的测定 2 mol·L-1KCl浸提—蒸馏法 1方法原理用2mol·L-1KCl浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。取一份浸出液在半微量定氮蒸馏器中加MgO（MgO是弱碱，有防止浸出液中酰铵有机氮水解的可能）蒸馏。蒸出的氨以H3BO3吸收，用标准酸溶液滴定，计算土壤中的NH4+—N含量。 2主要仪器振荡器、半微量定氮蒸馏器、半微量滴定管（5mL）。 3试剂 （1）20g·L -1硼酸—指示剂。20gH3BO3（化学纯）溶于1L水中，每升H3BO3 溶液中加入甲基红—溴甲酚绿混合指示剂5mL并用稀酸或稀 碱调节至微紫红色，此时该溶液的pH为4.8。指示剂用前与硼酸混 合，此试剂宜现配，不宜放。 （2）0.005 mol·L-11/2H2SO4标准液。量取H2SO4（化学纯）2.83mL，加蒸馏水稀释至5000mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为 0.0200 mol·L-1 (1/2H2SO4)标准溶液，再将此标准液准确地稀释4倍， 即得0.005mol·L-11/2H2SO4标准液（注1）。 （3）2 mol·L-1KCl溶液称KCl（化学纯）14901g溶解于1L水中。 （4）120g·L–1MgO悬浊液 MgO12g经500～600℃灼烧2h，冷却，放入100mL水中摇匀。 4操作步骤
取新鲜土样10.0g（注2），放入100mL三角瓶中，加入2mol·L-1KCl 溶液50.0mL。用橡皮塞塞紧，振荡30min，立即过滤于50mL三角瓶中（如果土壤NH4+—N含量低，可将液土比改为2.5:1）。 吸取滤液25.0mL（含NH4+—N25μg以上）放入半微量定氮蒸馏器中，用少量水冲洗，先把盛有20g·L–1硼酸溶液5mL的三角瓶放在冷凝管下，然后再加120g·L–1 MgO悬浊液10mL于蒸馏室蒸馏，待蒸出液达30～40mL 时（约10min）停止蒸馏，用少量水冲洗冷凝管，取下三角瓶，用 0.005mol·L-11/2H2SO4标准液滴至紫红色为终点，同时做空白试验。 5结果计算 土壤中铵态氮NH4+—（N）含量（mg·kg-1） = 式中：c——0.005mol·L-11/2H2SO4标准溶液浓度； V——样品滴定硫酸标准溶液体积(mL)； V0——空白滴定硫酸标准溶液体积(mL)； 14.0——氮的原子摩尔质量（g·mol-1）； ts——分取倍数；
实验7土壤硝态氮的紫外分光光度法.doc
实验土壤硝态氮的紫外分光光度法 根层土壤中硝态氮的含量与植物生长发育有着密切的关系，其测定结果可 为合理施肥，肥料规划和估产提供依据。 一 .目的要求 了解紫外 / 可见分光光度计的基本结构，掌握用波长选择消除干扰组分的 测定技术，用校正因数法测定土壤硝态氮的含量。 二 .方法原理 用氯化钠溶液提取土壤硝态氮，于紫外分光光度计上分别测量其210 和 275 纳米的吸光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机 质为主的杂质的吸收。 因为 275 纳米处硝酸根已无吸收，而有机质在 275 纳米处的吸收值是 210 纳 米处的 f 倍，故可将 A275 校正为有机质在 210 纳米处的干扰吸收，从 A210 中减去，即得硝酸根在 210 纳米处得真实吸收值，再利用标准曲线法求得土壤中硝态氮 得含量。 三 .器皿与试剂 1.紫外、可见分光光度计和xx 比色皿。 2.50 毫升容量瓶 10 个， 100 和 250 毫升锥形瓶各 4 个，漏斗 4 个，普通试 管 4 支， 50 毫升胖肚吸管 1 支， 5、10 毫升和 2 毫升刻度吸管各一只，滴管 2 支。 3.氯化钠溶液 1mol/L: 称取氯化钠 58.44 克溶于 400 毫升水中，转入 1 升容量瓶中，稀释至刻度。 4.硝态氮标准溶液100μ g/ml: 称取于 105℃烘制 2 小时得硝酸钾 0.3609 克溶于水，转移至 500 毫升容量瓶中，用水定容。临用时再稀释至 20μg/ml。
5.硫酸溶液， 10％（ V/V） 四 .测定步骤 1.待测液制备 称取 10.00 克风干土样于 250 毫升锥形瓶中，加入50 毫升 1 mol/L 的氯化钠溶液，加塞振荡30 分钟，过滤于干净干燥的100 毫升锥形瓶中，初液弃去。同时做试剂空白。 2.标准曲线绘制与测定 吸取 20μg/ml硝态氮标准溶液0. 00、0. 50、1. 00、2. 00、3. 00、4.00 毫升分别置入 50 毫升容量瓶中，用水定容至刻度后，再加入 2 毫升 10％硫酸溶液，摇匀。浓度分别为 0. 00、 0. 20、0. 40、0. 80、1.20 和 1.60 μ g/ml。以零浓度标液作参比，于 210 米处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归方程。 去土壤浸体液和试剂空白液各 10 毫升入试管中，加入 0.8 毫升 10％硫酸，摇匀。以试剂空白作参比，分别于 210 纳米和 275 纳米处测定吸光度，不要每
土壤可溶性有机氮,硝态氮,铵态氮和微生物量氮测定
土壤可溶性有机氮、硝态氮、铵态氮、微生物量氮最方便最简单的测定方法 1.母液制样：称取新鲜土壤（30.0g）于放置烧杯中，加约等于田间持水量60%水在25℃下培养7~15d。取15.0g土于烧杯，置于真空干燥器中，同时内放一装有用100ml精制氯仿的小烧杯，密封真空干燥器，密封好的真空干燥器连到真空泵上，抽真空至氯仿沸腾5分钟，静置5分钟，再抽滤5分钟，同样操作三次。干燥器放入25℃培养箱中24小时后，抽真空15-30分钟以除尽土壤吸附的氯仿。按照土：0.5M K2SO4=1:4(烘干土算，一般就是湿土：0.5M K2SO4=1：2)，加入0.5M K2SO4溶液（未熏蒸为空白直接称取15.0g土，加同样比例0.5M K2SO4溶液）震荡30分钟，过滤。其中熏蒸后的土壤过滤液为A母液，未熏蒸的土壤过滤液为B母液。母液要是不及时测定，需立即在-15℃以下保存 2.测定 可溶性有机氮=可溶性全氮-（铵态氮+硝态氮） 要是有流动分析仪器还有TOC的话可以利用A母液测得碳氮减去B母液的碳氮含量根据公式计算得出微生物碳氮，可以用B母液测的铵态氮、硝态氮和可溶性全氮，是很方便的。 以下的是用传统的方法测定以上指标，经过852个土壤样品试验结果还是很好的。
土壤可溶性全氮测定 氧化剂:将6g NaOH 和30g K2S2O8溶于蒸馏水中并定容至1 L(K2S2O8 比较难溶，在低于60℃得瑟水浴中溶解，高于60℃配置的溶液至其氧化性失效，NaOH制成溶液，致其温度达到常温后与K2S2O8 溶液混合定容至1L) 测定：移取A母液10ml至消化试管，加入10ml氧化剂，水浴中加热，温度升高到120℃后保持90min，使用紫外分光光度计测定A220和A275，空白需加入1ml氧化剂并同时作水浴处理。（Tips：农化上母液与氧化剂各取25ml，此处取其比例为1:1。） 标准曲线：0.7218g硝酸钾溶于水中，转入1000ml容量瓶中定容摇匀，制得浓度为100mg/L的氮标准贮存液。稀释10倍即为10mg/L 的氮标准溶液。吸取氮标准溶液（梯度为0ml，1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml；对应浓度分别为0 mg/L，0.02 mg/L，0.04 mg/L，0.06 mg/L，0.08 mg/L，0.10 mg/L，0.12mg/L）于50ml容量瓶中，各加入1ml 氧化剂并定容，得氮的标准系列，与样品同样消煮测定A220和A275。以A（A= A220-A275）为纵标，氮浓度为横标绘制标准曲线。 硝态氮测定1 注：硝态氮测定1仅适合于农田土壤，腐殖质含量比较低的土壤，森林土壤和腐殖质含量比较高的土壤不适用，因为森林土壤和腐殖质高的土壤有腐植酸的颜色，干扰比色可采用硝态氮测定2进行测定
土壤水解氮测定方法
土壤水解性氮的测定（碱解一扩散法） 方法及步骤 1. 称取过2 mm 筛孔的风干土样1.00g （精确到0.01g ），均匀地平铺于扩散皿外室，轻轻水平旋转扩散皿，在扩散皿的外室内加1g 锌硫酸亚铁还原剂平铺于土样上（若沼泽土、潜育土壤不需加还原剂）。同时做两个试剂空白试验。 2. 加3ml 2％硼酸指示剂于扩散皿内室。 3. 在扩散皿外室边缘上方涂碱性胶液，盖好毛玻璃（毛面在下）与皿边完全粘合。 4. 慢慢转开毛玻璃，使扩散皿的一边露出一条狭缝或一小孔，从缺口用注射器迅速加入10ml 1.8mol/L 氢氧化钠溶液，立即盖严。 5. 水平地轻轻转动扩散皿，使溶液与土样充分混合，然后小心地用橡皮套二根交叉成十字形圈紧，使毛玻璃固定。放入40℃恒温箱中保温24h ，在此期间应间歇地水平轻轻转动3次。 6. 用0.01mol/L 盐酸标准溶液滴定内室硼酸中吸收的氨量，边滴定边用细玻棒搅动内室溶液，颜色由蓝变红，即达终点。 计算方法 水解性氮（mg ／kg ）=100014)(0???-烘干土质量 C V V 水解性氮（μg/g ）= 水解性氮（mg ／kg ） 式中：V ——滴定待测液用去的盐酸标准溶液体积（ml ）； V 0——滴定试剂空白，试验用去盐酸标准液体积（ml ）； C ——盐酸标准液浓度（mol ／L ）； 14——氮原子的摩尔质量（mg ／m mol ）； 1000——换算为mg ／kg 换算系数。 药品配制 1. 1.8 mol/L 氢氧化钠溶液：称取7 2.0 g 氢氧化钠（NaOH ，分析纯），溶解于蒸馏水中稀释至1L 。 2. 锌一硫酸亚铁还原剂：称50.0g 磨细并通过0.25 mm 筛孔的硫酸亚铁（FeSO 4·7 H 2O 化学纯）及10.0g 锌粉（化学纯）混匀，贮于棕色瓶中。 3. 碱性胶液：称40 g 阿拉伯胶粉和50 ml 蒸馏水在烧怀中混合调匀，加热60—80℃，搅拌促溶，冷却。加入20ml 甘油和20ml 饱和碳酸钾水溶液，搅匀、冷却。离心除去泡沫和不溶物，将清液贮于玻璃瓶中备用。 4. 0.01mol/L 盐酸标准溶液：可将 0.02 mol/L 盐酸标准溶液稀释1倍，然后，用0.002mol ／L 2 1Na 2B 4O 7标准溶液标定。 5. 2%（m ／V ）硼酸溶液：称取硼酸（H 3BO 3，分析纯）20g ，用热蒸馏水（约60℃）溶解，冷却后稀释至1L 。使用前每100 ml 硼酸溶液中加入2ml 定氮混合指示剂，以稀氢氧化钠或稀盐酸调节溶液至紫红色（葡萄酒色），此时，溶液的pH 为4.5。即为硼酸一指示剂混合液。 6. 甲基红一溴甲酚绿定氮混合指示剂：称取0.066 g （或0.1g ）甲基红和0.099g （或0.5g ）溴甲酚绿于玛瑙研钵中研细，溶于100ml 95％乙醇中。其变色范围pH4.4（红）一5.4（蓝）。 7. 0.02 mol/L 盐酸标准溶液：取浓盐酸（比重 1.19）1.67 ml ，用蒸馏水稀释至1L ，
土壤铵态氮的测定
土壤铵态氮的测定 A 纳氏试剂比色法 1方法提要 土壤样品中的NH4+用氯化钾溶液提取，在碱性条件下与纳氏试剂络合生成黄色络合物，进行比色测定。 2适用范围 本方法适用于各类土壤铵态氮含量的测定。 3主要仪器设备 3.1 分光光度计； 3.2 往复式或旋转式振荡机，满足180r/min±20r/min的振荡频率或达到相同效果； 3.3 塑料瓶，200mL。 4试剂 4.1氯化钾提取液［c(KCl)=2mol·L-1］：称取149.1g氯化钾溶于水，稀释至1L； 4.2酒石酸钠溶液［ρ(Na2C4H4O4·2H2O)=250g·L-1］：称取25g酒石酸钠（Na2C4H4O4·2H2O）溶于水，稀释至100mL； 4.3 纳氏试剂：称取10.0g碘化钾溶于5mL水中，另称取3.5g二氯化汞溶于20mL水中（加热溶解），将二氯化汞溶液慢慢地倒入碘化钾溶液中，边加边搅拌，直至出现微红色的少量沉淀为止。然后加70mL 300g·L-1氢氧化钾溶液，并搅拌均匀，再滴加二氯化汞溶液至出现红色沉淀为止。搅匀，静置过夜，倾出清液贮于棕色瓶中，放置暗处保存； 4.4 阿拉伯胶溶液［10g·L-1］：称取1g阿拉伯胶溶于100mL沸水中，加入2滴氯仿作为防腐剂（混浊时使其澄清后，倾出上部清液），备用； 4.5 铵态氮标准贮备溶液［ρ(N)=500μg·mL-1］：称取1.910g氯化铵（优级纯，经90℃干燥2h）,溶于水中，加入氯仿1mL,定容至1L； 4.6 铵态氮标准溶液［ρ(N)=10μg·mL-1］：测定当天吸取铵态氮标准贮备溶液10.00mL，加水定容至500mL。 5分析步骤： 称取10.0g土壤样品放入200mL塑料瓶中，加入50.0mL 2mol·L-1氯化钾提取液，盖紧瓶盖，摇匀，在振荡机上于20℃～25℃振荡30min（振荡频率：180r/min±20r/min），立
土壤硝态氮及铵态氮的取样测定
土壤硝态氮和铵态氮的取样测定 1．田间取样与保存 根据小区面积，随机选2～3个样点，采样地点应避开边行以及头尾。在行间取样，以30cm为一层，取样深度可以是0-90cm或0-210cm或更深，分层取样，等层混合。新鲜土样须田间将土壤样品立即放入冰盒，没有冰盒者应将土样放置阴凉处，避免阳光直接照射，并尽快带回室内处理。 2．土样的处理 在田间采样后，立即将土样放置在冰盒中，低温保存。返回实验室后，如果样品数量较多，则放置于冰箱中4℃保存。也可以直接进行土样处理：土壤过3-5cm筛，测定土壤的水分含量，同时作浸提。 3．土样的浸提 称取混匀好的新鲜土壤样品24.00g，放入振荡瓶，加100 ml 1mol/L 优级纯KCl浸提液，充分混匀后放入振荡机振荡1个小时，用定性滤纸过滤（注意：国内好多滤纸含有铵态氮，需选择那些无铵滤纸）到小烧杯或胶卷盒中，留滤液约20ml备用，每批样做3个空白。若样品不能及时测定，应放入贮藏瓶中冷冻保存。 同时称取20-30 g鲜土放入铝盒中105℃下烘干测定土壤水分。剩余土样自然风干后保存。 4．土壤硝态氮、铵态氮测定 测定前先解冻贮藏瓶盒中的滤液，并保持滤液均匀（注意：解冻后的样品有时有KCl 析出，必须等KCl溶解后，液体完全均匀后再测定），上流动分析测定溶液中的铵态氮和硝态氮含量（专门的试验人员负责）。所用标准溶液必须是用1mol/L KCl浸提液配制。 有时样品浓度超出了机器的测定范围，需对样品进行稀释（注意：应以最低稀释倍数把样品测定出来，且不可放大稀释倍数，这样会引起很大误差）。 流动分析测定的是溶液中的铵态氮和硝态氮浓度，单位是mg/L，必须根据土壤样品含水量和土壤干重换算成mg N/kg。如果要换算成kg N/ha，可以通过下列公式：土壤硝态氮或铵态氮（kg N/ha）=土壤硝态氮或铵态氮（mg N/kg）* 采样层次（30cm 或20cm）* 土壤容重/ 10
铵态氮和硝态氮测定方法!!! - 副本
铵态氮测量方法（2mol?L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法） 1）方法原理 2mol?L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05～0.5mol?L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。 2）试剂 （1）2mol?L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。 （2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 （3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4?7H2O，化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4?12H2O，化学纯）31.8g和52.5g?L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 （4）掩蔽剂将400g?L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O，化学纯）与100g?L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100mL 混合液中加入10 mol?L-1氢氧化钠0.5mL。
（5）2.5μg?mL –1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100μg?mL –1的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5μg?mL –1的标准溶液备用。 3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。 4）分析步骤 （1）浸提称取相当于10.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。取出静置，待土壤—氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。如果不能在24h内进行，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。 （2）比色吸取土壤浸出液5mL(含NH4+—N2μg～25μg)放入50mL容量瓶中，用氯化钾溶液补充至10mL，然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL，摇匀。在20℃左右的室温下放置1h后（注1），加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1cm比色槽在625nm波长处（或红色滤光片）进行比色，读取吸光度。 （3）工作曲线分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL NH4+—N标准液于50mL容量瓶中，各加10mL氯化钠溶液，
土壤中氮含量的测定分析(精)
土壤中氮含量的测定分析 核心提示：摘要：概述了土壤中氮元素的存在形式、土壤全氮、无机氮(包括铵态氮、硝态氮)水解氮、酰胺态氮的测定方法。关键词：土壤；全氮；测定方法土壤是作物氮素营养的主要来源，土壤中的氮素包括无机态氮和有机态... 摘要：概述了土壤中氮元素的存在形式、土壤全氮、无机氮(包括铵态氮、硝态氮)水解氮、酰胺态氮的测定方法。 关键词：土壤；全氮；测定方法 土壤是作物氮素营养的主要来源，土壤中的氮素包括无机态氮和有机态氮两大类，其中95%以上为有机态氮，主要包括腐殖质、蛋白质、氨基酸等。小分子的氨基酸可直接被植物吸收，有机态氮必须经过矿化作用转化为铵，才能被作物吸收，属于缓效氮。 土壤全氮中无机态氮含量不到 5%，主要是铵和硝酸盐，亚硝酸盐、氨、氮气和氮氧化物等很少。大部分铵态氮和硝态氮容易被作物直接吸收利用，属于速效氮。无机态氮包括存在于土壤溶液中的硝酸根和吸附在土壤颗粒上的铵离子，作物都能直接吸收。土壤对硝酸根的吸附很弱，所以硝酸根非常容易随水流失。在还原条件下，硝酸根在微生物的作用下可以还原为气态氮而逸出土壤，即反硝化脱氮。部分铵离子可以被粘土矿物固定而难以被作物吸收，而在碱性土壤中非常容易以氨的形式挥发掉。土壤腐殖质的合成过程中，也会利用大量无机氮素，由于腐殖质分解很慢，这些氮素的有效性很低。 土壤中的氮素主要来自施肥、生物固氮、雨水和灌溉水，后二者对土壤氮贡献很小，施肥是耕作土壤氮素的主要来源，而自然土壤的氮素主要来自生物固氮。 土壤含氮量受植被、温度、耕作、施肥等影响，一般耕地表层含氮量为0.05%～0.30%，少数肥沃的耕地、草原、林地的表层土壤含氮量在 0.50%～0.60%以上。我国土壤的含氮量，从东向西、从北向南逐渐减少。进入土壤中的各种形态的氮素，无论是化学肥料，还是有机肥料，都可以在物理、化学和生物因素的作用下进行相互转化。 1 土壤全氮的测定 1.1 开氏法 近百年来，许多科学工作者对全氮的测定方法不断改进，提出了许多新方法，主要有重铬酸钾-硫酸消化法、高氯酸-硫酸消化法、硒粉-硫酸铜-硫酸消化法。但开氏法目前仍作为一个统一的标准方法，此法容易掌握，测定结果稳定，准确率较高。 开氏法测氮的原理为：在盐类和催化剂的参与下，用浓硫酸消煮，使有机氮分解为铵态氮。碱化后蒸馏出来的氨用硼酸吸收，以酸标准溶液滴定，求出土壤全氮含量（不包括硝态氮）。含有硝态和亚硝态氮的全氮测定，在样品消
土壤水解性氮的测定
土壤水解性氮的测定 碱解扩散法 1 方法提要 旱地土壤由于土壤硝态氮含量较高，须加还原剂还原，再用1.8mol ·L -1氢氧化钠溶液处理土样，在扩散皿中，土样于碱性条件下水解，使易水解氮经碱解转化为氨态氮，由硼酸溶液吸收，以标准酸滴定，计算碱解氮的含量。对于水稻土和经常淹水的土壤，由于硝态氮含量甚微，不需加还原剂，因此氢氧化钠溶液浓度采用1.2mol ·L -1。 2 适用范围 本方法适用于各类土壤中碱解氮的测定。 3 主要仪器设备 3.1恒温培养箱（控温在60℃以内）； 3.2扩散皿（需添加扩散皿扫描图）； 3.3半微量滴定管：10mL 。 4 试剂 4.1氢氧化钠溶液[c (NaOH) =1.8mol ·L -1]：称取72.0g 氢氧化钠，溶解于水，稀释至1L ； 4.2氢氧化钠溶液[c (NaOH) =1.2mol ·L -1]：称取48.0g 氢氧化钠，溶解于水，稀释至1L ； 4.3 锌-硫酸亚铁还原剂：称取50.0g 磨细并通过0.25mm 孔径筛的硫酸亚铁（FeSO 4?7H 2O ）及10.0g 锌粉混匀，贮于棕色瓶中； 4.4 碱性胶液：称取40g 阿拉伯胶放入装有50mL 水的烧杯中，加热至70℃～80℃，搅拌促溶，约1h 后放冷。加入20mL 甘油和20mL 饱和碳酸钾水溶液，搅匀，放冷。离心除去泡沫和不溶物，将清液贮于玻璃瓶中备用； 4.5 硫酸标准溶液[c(2 1H 2SO 4) =0.01mol ·L -1]或盐酸标准溶液[c(HCl) =0.01mol ·L -1]：配制及标定见本书附录； 4.6定氮混合指示剂：称取0.5g 溴甲酚绿和0.1g 甲基红于玛瑙研钵中，加入少量95%乙醇，研磨至指示剂全部溶解后，加95%乙醇至100mL ； 4.7硼酸溶液[ρ(H 3B03) =20g ·L -1]：称取硼酸20.00g 溶于水中，稀释至1L 。每升20g ·L -1硼酸溶液中加20mL 混合指示剂，并用稀碱或稀酸调至红紫色（pH 约4.5）。此溶液放置时
土壤硝态氮和铵态氮的测定方法
一、原理： 过滤后的样品经过一个开放的镀铜镉还原器通道后，硝酸根被还原成亚硝酸根，亚硝酸根通过磺胺处理后，与N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐偶联，形成深红色的偶氮染料，然后在550nm或者520nm比色分析。 二、样品处理 土壤鲜样采取四分法处理，根据实验用量进行过筛（比目大小视样品含水量而定）。过筛后的土样，取出5g土样放入离心管，加入25ml 氯化钾提取液（2moL/L），震荡2小时后进行离心（8000 g ，15min），静置后过滤，取上清液测定。若不能及时测定，放入4℃冰箱保存。 三、试剂配制： 试剂用水：蒸馏水或去离子水。 （1）显色试剂：（棕色玻璃瓶，避光保存） 150ml水，加入25ml浓磷酸▲，冷却至室温后，加入10g磺胺，再加入0.5g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶解。用水定容至250ml。加入浓缩探针清洗液（表面活性剂）。 （2）氯化铵-EDTA缓冲液（ammonium chloride-EDTA）：把85g氯化铵和0.1g 乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA-Na2）溶解 于水，定容至1L。用浓氨水▲调节PH至。 （3）硝化组件缓冲液：{用来清洗OTCR(镀铜镉还原器通道)}取100ml的氯化铵-EDTA缓冲液，稀释至1L。调节PH至。（4）2%硫酸铜： 10g 五水硫酸铜（）溶于水，定容至500ml。 （5）5mol/L盐酸： 小心慢慢加入浓盐酸▲于水中，冷却后定容至100ml。 （6）硝酸盐存储溶液(1g/L)：（溶液6个月内有效） 7.218g硝酸钾溶于水，定容至1L，加入1ml氯仿▲（防腐剂）。（7）比色管清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存,两个月内有效）取50ml比色管清洗液，加水定容至1L。 （8）进样针清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存，两个月内有效。） 取进样针清洗液，加水定容至1L。 四、测定方法： 土壤硝态氮测定采用SmartChem全自动间断化学分析仪。
铵态氮硝态氮测量方法
铵态氮和硝态氮测定方法 铵态氮测量方法（2mol ?L -1KCl 浸提—靛酚蓝比色法） 1）方法原理 2mol ?L -1KCl 溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05～0.5mol ?L -1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。 2）试剂 （1）2mol ?L -1KCl 溶液称取149.1g KCl ，化学纯）溶于水中，稀释至1L 。 （2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH ，化学纯）10g 和硝基铁氰化钠 [Na2Fe(CN)5NO 2H 2O]100mg稀释至1L 。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 （3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g 、磷酸氢二钠（Na 2HPO 4?7H 2O ，化学纯）7.06g 、磷酸钠（Na 3PO 4?12H 2O ，化学纯）31.8g 和52.5g ?L -1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL 溶于水中，稀释至1L ，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 （4）掩蔽剂将400g ?L -1的酒石酸钾钠（KNaC 4H 4O 6?4H 2O ，化学纯）与100g ?L -1的EDTA 二钠盐溶液等体积混合。每100mL 混合液中加入10 mol?L -1氢氧化钠0.5mL 。 （5）2.5μg ?mL – 1铵态氮（NH4+—N ）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO 4，分析纯0.4717g 溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L ，制备成含铵态氮（N ）100μg ?mL – 1的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N ）2.5μg ?mL –1的标准溶液备用。 3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。 4）分析步骤 （1）浸提称取相当于10.00g 干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g ，置于150mL 三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL ，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h 。取出静置，待土壤—氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。如果不能在24h 内进行，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。 （2）比色吸取土壤浸出液5mL(含NH4+—N2μg ～25μg) 放入50mL 容量瓶中，用氯化钾溶液补充至10mL ，然后加入苯酚溶液5mL 和次氯酸钠碱性溶液5mL ，摇匀。在20℃左右的室温下放置1h 后（注1），加掩蔽剂1mL 以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1cm 比色槽在625nm 波长处（或红色滤光片）进行比色，读取吸光度。 （3）工作曲线分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL NH4+—N 标准液于50mL 容量瓶中，各加10mL 氯化钠溶液， 同（2）步骤进行比色测定。 5）结果计算 土壤中NH4+—（N ）含量（mg ?kg-1）= 式中：ρ——显色液铵态氮的质量浓度(μg ?mL –1) ；V ——显色液的体积(mL)；ts ——分取倍数； m ——样品质量（g ）。 6）注释 注1. 显色后在20℃左右放置1h ，再加入掩蔽剂. 过早加入会使显色反应很慢，蓝色偏弱；加入过晚，则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解.
土壤铵态氮等测定
方法原理: 用2mol/L KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH+4及水溶性NH+4浸提出来。土壤浸出液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05~0.5mg/L的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。 实验步骤： （1）称取10.00g新鲜土样（精确到0.01g），置于200ml三角瓶中，加入KCl 溶液100ml，在摇床里振荡30min，取出静置后，取上清液过滤； （2）吸取浸提液5ml放入50ml容量瓶中，后加入KCl溶液10ml、苯酚溶液5ml、次氯酸钠碱性溶液5ml,摇匀； （3）在25℃左右室温下放置1小时后，加入掩蔽剂1ml,然后用水定容至刻度，在625nm波长处进行比色。 工作曲线绘制： 分别取0.00 ，0.50 ，1.00 ，2.00 ，3.00 ，4.00 ，5.00ml铵态氮标准溶液于50ml容量瓶中，各加入10ml KCl溶液,然后同(2) (3)步骤进行。 试剂配制： 【2mol/L KCl溶液】: 称取149.1g KCl(分析纯)溶入水中，稀释至1L。 【苯酚溶液】：称取苯酚（分析纯）10g、NaOH（分析纯）5g和消极铁氰化钠(分析纯)0.1g稀释至1L。（此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在冰箱中4℃保存，使用时用酸调节PH酸性） 【次氯酸钠碱性溶液】：称取NaOH（分析纯）10g、磷酸氢二钠（分析纯）7.06g、磷酸钠（分析纯）31.8g和52.5g/L次氯酸钠（分析纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10mL溶于水中，稀释至1L.(贮于棕色瓶中，在冰箱中4℃保存，使用时放置至室温) 【掩蔽剂】: 将400g/L的酒石酸钾钠（分析纯）与100g/L的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100ml混合液中加入10mol/L NaOH溶液0.5ml。 【铵态氮标准溶液】：称取0.4717g于105℃烘2小时的(NH4)2SO4(分析纯)溶于水，定容至1L。（使用时将标准液稀释20倍即ρ（N）=5ug/mL）
(完整word版)土壤全氮测定方法
土壤全氮的测定—凯氏定氮法 一、目的 1、掌握土壤中全氮含量测定的方法。 2、了解测定土壤全氮的原理 二、原理 土壤中的氮大部分以有机态（蛋白质、氨基酸、腐殖质、酰胺等）存在，无 机态（NH 4+ 、NO 3 -、NO 2 -）含量极少，全氮量的多少决定于土壤腐殖质的含量。 土壤中含氮有机化合物在还原性催化剂的作用下，用浓硫酸消化分解，使其中所含的氮转化为氨，并与硫酸结合为硫酸铵。 给消化液加入过量的氢氧化钠溶液，使铵盐分解蒸馏出氨，吸收在硼酸溶液中，最后以甲基红-溴甲酚绿为指示剂，用标准盐酸滴定至粉红色为终点，根据标准盐酸的用量，求出分析样品中的含氮全量。 三、试剂： 1、混合催化剂：称取硫酸钾100g、五水硫酸铜10g、硒粉1g。均匀混合后研细。贮于瓶中。 2、比重1.84浓硫酸。 3、40%氢氧化钠：称400g氢氧化钠于烧杯中，加蒸馏水600ml，搅拌使之全部溶解。 4、2%硼酸溶液：称20g硼酸溶于1000ml水中，再加入2.5ml混合指示剂。（按体积比100:0.25加入混合指示剂） 5、混合指示剂：称取溴甲酚绿0.5g和甲基红0.1克,溶解在100ml95%的乙醇中,用稀氢氧化钠或盐酸调节使之呈淡紫色，此溶液pH应为4.5。 6、0.01的盐酸标准溶液：取比重1.19的浓盐酸0.84ml，用蒸馏水稀释至1000ml，用基准物质标定之。 四、操作步骤 1、消煮：在分析天平上准确称取通过60号筛的风干土0.5000g左右，移入干燥的凯氏瓶中，加入1.5g的还原性混合催化剂。用注射器加入4ml浓硫酸，放到通风柜内的消煮器上消煮1.5h左右。直至内容物呈清彻的淡蓝色为止。 2、蒸馏：消煮完毕后冷却。 将三角瓶置于冷凝管的承接管下，管口淹没在硼酸溶液中（三角瓶用2%的硼酸20ml作吸收剂），然后打开冷凝器中的水流，进行蒸馏。在整个蒸馏过程中注意冷凝管中水不要中断，当接受液变蓝后蒸馏5min,将冷凝管下端离开硼酸液面，再用蒸馏水冲净管外。 3、滴定：用0.01当量的盐酸标准溶液滴定至红色为止。记录所消耗的盐酸标准溶液的体积。 4、空白：除不加试样外其余步骤完全相同。 五、计算： 土壤含氮量（%）=(V-V )*N*0.014*100/W
土壤铵态氮测定-靛酚蓝比色法
土壤铵态氮测定（2 mol﹒L-1 KCl浸提-靛酚蓝比色法） 【方法原理】 2 mol﹒L-1 KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性燃料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05~0.5 mol﹒L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。 【试剂】 （1）2 mol﹒L-1 KCl溶液：称取149.1 g氯化钾（分析纯）溶于水中，稀释至1L。（2）苯酚溶液：称取苯酚（分析纯）10g和硝基铁氰化钠（硝普钠，有剧毒）100mg，稀释至1L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。（3）次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（分析纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4﹒7H2O）7.06g、磷酸钠（Na3PO4﹒12H2O）31.8g和52.5 g﹒L-1次氯酸钠（即含5%有效率的漂白粉溶液）10 mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 （4）掩蔽剂：将400g﹒L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.4H2O,化学纯）溶液与100 g﹒L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100mL混合液中加入10 mol﹒L-1氢氧化钠0.5mL。 （5）2.5μg.ml-1铵态氮（NH4+-N）标准溶液：称取干燥的硫酸铵[（NH4）2SO4,分析纯]0.4717g溶于水中，定容至1L。即配制成含铵态氮（N）100μg.m L-1的贮存溶液；使用前将其加入水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5μg.m L-1的标准溶液备用。 【分析步骤】 （1）浸提称取相当于2g左右的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到 0.01g，置于10mL离心管中，加入氯化钾溶液8mL，塞紧塞子，在振荡 机上振荡1h。取出5000-7000rpm离心3min，将悬液的上部清液收集于干燥洁净的容量瓶中，定容至10ml。如果不能在24h内进行，将滤液储存在冰箱中备用。 （2）比色吸取土壤浸出液2ml—10ml(NH4+-N，2μg-25μg)放入50mL比色管中，将氯化钾溶液补充至10mL，然后加入苯酚溶液1mL和氯化钠碱性溶液1mL，摇匀。在20℃左右的室温下放置1h后，加掩蔽剂0.2mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1cm比色槽625nm波长处（或红色滤光片）进行比色，读取吸光度。 （3）工作曲线分别吸取0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00mL NH4+-N标准液于50mL比色管中，各加10mL氯化钾溶液，同（2）步骤进行比色测定。 【结果计算】 土壤中NH4+-N含量（mg.kg-1）=c×V×ts/m 式中：c—显色液铵态氮的质量浓度（μg.ml-1）；V—显色液体积（mL）；ts—分取倍数； M—土样质量（g）。（0.2g左右新鲜土样烘干后对应的质量）
土壤硝态氮铵态氮的测定
（二）土壤硝态氮的测定 1、酚二磺酸比色法 1）方法原理 土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。 C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O 2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸 此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg?L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg?L-1。 2）主要仪器 分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。 3）试剂 （1）酚二磺酸试剂： 称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。使用时须注意其强烈的腐蚀性。如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。 （2）10μg?mL-1 NO3－—N标准溶液： 准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100μg?mL-1 NO3－—N 溶液，将此液准确稀释10倍，即为10μg?mL-1 NO3－—N标准溶液。 （3）CaSO4?2H2O（分析纯、粉状）、 （4）CaCO3（分析纯、粉状）、 （5）1:1 NH4OH、 （6）活性碳（不含NO3－），用以除去有机质的颜色。 （7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、Ca(OH)2（分析纯、粉状）和MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1的干扰。 4）操作步骤 （1）浸提： 称取新鲜土样（注1）50g（风干土样25g）放在500mL三角瓶中，加入CaSO4?2H2O 0.5g（注2）[凝聚剂的作用，使滤液不混浊而澄清]和250.00mL蒸馏水，盖塞后，用振荡机振荡10min。放置5 min后，将悬液的上部清液用干滤纸过滤，澄清的滤液收集地干燥洁净的三角瓶中。如果滤液因有机质而呈现颜色，可加活性碳除之（注3、4）。还有NO2-干扰和Cl干扰： （1）同时做空白。 （2）测定 吸取清液 25～50mL（含NO3－—N 20～150μg）于瓷蒸发皿中，加CaCO3约0.05g （注5）[调节pH，防止NO3－—N在酸性和中性条件下蒸干分解而损失]，在水浴上蒸干（注6），到达干燥时不应继续加热。稍冷，迅速加入酚二磺酸试剂1---2 mL，将皿旋转，使试剂接触到所有的蒸干物。静止10min使其充分作用后，加水20 mL，用玻璃棒搅拌直到蒸干物完全溶解。冷却后缓缓加入1：1 NH4OH（注7）并不断搅拌混匀，至溶液呈微碱性（溶液显黄色不再加深）再多加2mL，以保
土壤碱解氮的测定
土壤碱解氮的测定（碱解扩散法） 一、仪器与试剂 1、主要仪器 百分之一天平；滴管，恒温箱；扩散皿 2、试剂 （1）1.0mol/L NAOH溶液：称取化学纯氢氧化钠40克，用水溶解，冷却后定容至1L。（2）甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：称取甲基红0.066克，溴甲酚绿0.099克，溶解在100ml 95%酒精中，用稀氢氧化钠或盐酸调节溶液呈紫红色。此时溶液PH值应为4.5 （3）2%硼酸溶液：称取分析纯硼酸20克，溶解于1L蒸馏水中。 （4）0.01mol/L（1/2H2SO4）标准溶液：量取密度1.84g/ml浓硫酸0.28ml，注入1L蒸馏水中，用标准硼砂溶液标定之。标定方法如下：在分析天平上准确称取硼砂Na2B4O7.10H2O 1.9071g，溶于蒸馏水中，转移至1000ml容量瓶中，用水定容，摇匀，即为0.01mol/L的标准溶液。吸取该溶液3份，各25.00ml，分别放入3个100-150ml三角瓶中，以甲基红作指示剂，用上述标准硫酸溶液滴定至由黄色变为红色为终点。设硫酸溶液用量3份重复的平均值为V毫升，则c（1/2H2SO4）=0.01×25/V （5）碱性甘油：在100ml甘油中加入固体氢氧化钠1-2克，隔一定时间后搅动一次，使其达到饱和为止（使甘油变稠2-3天后即可使用）。 二、步骤 1、准确称取通过100目筛(0.15mm)的风干土壤样品2.00克，均匀铺在扩散皿外室中，水平地轻轻转动扩散皿，使样品铺平。 2、在扩散皿（使用前在稀酸中浸泡）的内室中加入2ml 2%硼酸溶液，并加一滴混合指示剂，然后在皿的外室边缘上涂上碱性甘油，盖上毛玻璃盖并旋转，使之密合。在慢慢转动毛玻璃盖使外室的一边在毛玻璃盖小缺口处露出。 3、用移液管由小缺口处向外室加入10ml 1.0mol/L NaOH溶液，立即盖严。小心地水平转动扩散皿，使溶液与土壤充分混匀，用橡皮筋扎好，放入40℃温箱中，恒温24小时后取出，再以0.01 mol/L 1/2H2SO4标准溶液滴定硼酸溶液中所吸收的氨，溶液颜色由蓝绿变为微红色为终点。 三、结果计算 碱解氮（mg/kg土）= [c×(V-V0) ×14×1000]/m c-1/2H2SO4标准溶液的浓度，mol/L； V-滴定样品时硫酸标准溶液的用量，ml； V0-空白试验时硫酸标准溶液的用量，ml； 14-氮原子的豪摩尔质量，mg； m-土样的质量，g； 1000-换算成每千克样品中氮的毫克数的系数。