呋喃妥因代谢物(AHD)ELISA检测试剂盒说明书
呋喃妥因代谢物（AHD）ELISA检测试剂盒说明书
一、概要
用来检测呋喃妥因代谢物的最常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。酶联免疫方法结合了色谱技术，采用AHD衍生物的特异性抗体，具有很高的精确度和灵敏度，较低的操作技术要求和短暂的检测时间，检测样本量大等特点在检测中很好的表现出来。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物的AHD经衍生化后和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物AHD代谢物的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中呋喃妥因代谢物的残留量。
三、适用范围
可定性、定量检测动物组织（鸡、猪、牛、鱼、虾等）、牛奶和蜂蜜中呋喃妥因代谢物的残留量。
四、交叉反应率
呋喃妥因代谢物…………………………………………100%
呋喃唑酮代谢物…………………………………小于0.1%
呋喃它酮代谢物…………………………………小于0.1%
硝基糠腙（呋喃西林）代谢物…………………小于0.1%
呋喃唑酮………………………………………………小于1%
呋喃它酮
………………………………………………小于1%
呋喃妥因………………………………………………13%呋喃西林…………………………………………小于1%
五、使用单位需自备的设备及试剂
设备：
┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置
┅┅均质器
┅┅振荡器
┅┅涡旋仪
┅┅离心机
┅┅天平：感量0.01g
┅┅刻度移液管：10ml
┅┅洗耳球
┅┅容量瓶：100ml、1L
┅┅玻璃试管：10ml
┅┅聚苯乙烯离心管：50ml
┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、100ml～1000ml 多道 250ml
试剂：
┅┅乙酸乙酯(分析纯)
┅┅正己烷（或正庚烷）(分析纯)
┅┅三水合磷酸氢二钾(分析纯)
┅┅甲醇(分析纯)
┅┅二水合亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5·NO·2H2O）（分析纯）（供奶样用）┅┅七水合硫酸锌(ZnSO4·7 H2O) (分析纯)（供奶样用）
┅┅浓盐酸
┅┅氢氧化钠(分析纯)
┅┅去离子水
六、提供的材料与试剂
1、96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原）
2、标准液×6瓶：（1ml/瓶）
0ppb，0.1ppb，0.3ppb，0.9ppb，2.7ppb，8.1ppb
3、高浓度标准品：（1ml/瓶） 100ppb
4、酶标二抗12ml …………………… 红色帽
5、抗体工作液7ml …………………… 绿色帽
6、底物液 A 液7ml …………………… 白色帽
7、底物液 B 液7ml …………………… 红色帽
8、终止液7ml …………………… 黄色帽
9、20×浓缩洗涤液40ml……………………… 透明帽
10、2×浓缩复溶液 50ml……………………… 蓝色帽
11、2-硝基苯甲醛15.1mg…………………… 黑色帽
七、溶液的配制
配液1: 衍生化试剂
向装有2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加甲醇溶解定容至10ml（浓度为10mM）。配液2: C液（供奶样用）：
0.36M亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5
·NO·2H2O）溶液
称取12.5g 二水合亚硝基铁氰化钠加去离子水定容至100ml
D液（供奶样专用）：
1M硫酸锌（ZnSO4·7H2O）溶液
称取29.8g 硫酸锌用去离子水定容至100ml
配液3: 0.1M 磷酸氢二钾溶液
称取22.8g 三水合磷酸氢二钾加去离子水定容至1L。
配液4: 1M盐酸溶液
量取8.3ml浓盐酸加去离子水定容至100ml。
配液5: 1M氢氧化钠
称取4.0g氢氧化钠加去离子水定容至100ml。
配液6: 甲醇-水溶液
量取甲醇90 ml加去离子水10 ml混匀。
配液7: 复溶工作液
用去离子水将2×浓缩复溶液按1：1体积比进行稀释（1份2×浓缩复溶液+1份去离子水）用于提取样本的复溶，复溶工作液在4℃环境可保存一个月。
配液8: 洗涤工作液
用去离子水将20
×浓缩洗涤液按1：19体积比进行稀释（1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水）用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。
八、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果
（c）衍生化试剂可于2-8℃保存半年。
（d）未处理的样本冷冻保存。
（e）处理好的样本可在2-8℃避光保存24小时。
（一）肌肉、肝脏、水产（鱼虾等）组织前处理方法
┅┅用均质器均质样本
┅┅取1.0±0.05g的均质物至50ml聚苯乙烯离心管中；
┅┅加入5ml甲醇-水溶液（见配液6），用振荡器振荡5min，3000g以上离心10min，去除全部上清液；（本步骤可降低样本基质干扰）
┅┅加入4ml的去离子水，用涡旋仪涡动溶解，加入0.5ml 1M 盐酸溶液（见配液4）和100ml 衍生化试剂（见配液1），用振荡器充分振荡；
┅┅接（四）描述方法（标 * 处）。
注：样本应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存
（二）牛奶前处理方法
┅┅取牛奶样本，3000g以上，10℃离心10min，吸除上层脂肪；
┅┅取出5ml去除脂肪牛奶样本至10ml玻璃离心管中；
┅┅分别加入250ml C液和250ml D液（见配液2）；
┅┅用振荡器充分振荡混合，3000g以上，4~12 oC（39-54℉）离心10min。如果没有恒温离心机，则先将样本降温至大约8 oC（46℉），然后离心；
┅┅取牛奶的离心上清液1.1 ml（相当于1 ml奶样），分别加入4ml的去离子水用振荡器振荡溶解，0.5ml 1M 盐酸（见配液4）和100ml 衍生化试剂（见配液1），充分振荡2min；┅┅接（四）描述方法（标 * 处）。
（三）蜂蜜前处理方法
┅┅称取1.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯离心管中；
┅┅加入4ml的去离子水，用振荡器振荡至蜂蜜全部溶解；
┅┅0.5ml 1M 盐酸溶液（见配液4）和100ml 衍生化试剂（见配液1），用振荡器充分振荡；┅┅接（四）描述方法（标 * 处）。
（四）接上面的方法
*┅┅在37 oC过夜孵育（大约16h）；
┅┅分别加入5ml 0.1M磷酸氢二钾溶液（见配液6）、0.4ml 1M氢氧化钠溶液（见配液5）和5ml的乙酸乙酯，用振荡器剧烈振荡30s；
┅┅3000g以上，室温（20-25 oC/68-77℉）离心10min；
┅┅取2.5ml乙酸乙酯相至10ml干燥的玻璃试管中，于50～60℃氮气流下吹干；
┅┅用1ml的正己烷（或正庚烷）用涡旋仪涡动30s，再加入1ml复溶工作液（见配液7），用涡旋仪涡动1min充分混匀；
┅┅3000g以上，室温（20-25 oC/68-77℉）离心10min；
┅┅除去上层有机相，取下层水相50μl用于分析。
九、检测步骤
测定前应须知：
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20-25℃）。
2、使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA 测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。
操作步骤：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本：加入标准品/样本50ml 到对应的微孔中，然后加入抗体工作液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液（见配液8）250ml/孔，充分洗涤4－5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、加酶标二抗：加入酶标二抗100ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37
℃避光环境中反应30min，取出重复洗板步骤6。
8、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应15min（见注意事项8）。
9、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。
十、结果判定
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与呋喃妥因代谢物的含量成负相关。
1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。例如样本1的吸光度值为0.236，样本2的吸光度值为0.666，标准品吸光度值分别是： 0ppb为1.949；0.1ppb 为1.434； 0.3ppb为.939； 0.9ppb为0.487； 2.7ppb为0.157； 8.1ppb为0.060。则样本1的浓度范围是0.9ppb-2.7ppb再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中呋喃妥因代谢物残留的浓度范围；样本2的浓度范围是0.3ppb-0.9ppb再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中呋喃妥因代谢物残留的浓度范围。
2、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝ B ×100%
B0
B
—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以呋喃妥因代谢物标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中呋喃妥因代谢物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）样本稀释倍数
鱼虾和肌肉肝脏样品稀释倍数：2
奶样样品稀释倍数：2
蜂蜜样品稀释倍数：2
十一、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度：0.1ppb
样本最低检测限：
组织、蜂蜜，牛奶样品检测下限………………………0.2ppb
虾\鱼等水产组织因存在一定的干扰，检测下限在0.3ppb
准确度：
水产、肌肉、肝脏组织…………………………… 75±15%
蜂蜜样本………………………………………… 90±15%
奶样
……………………………………………… 90±10%
精密度：
试剂盒的变异系数均小于10%
十二、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需要将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色10-15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min（或更长），但不得超过30min。反之，则减短反应时间。
9、该试剂盒最佳反应温度为37℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
十三、贮藏条件及保存期
贮藏条件：保存试剂盒于2~8
℃。
保存期：该产品有效期为12个月。 .
人血管内皮细胞生长因子(VEGF)定量检测试剂盒(ELISA)
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【试剂盒名称】 人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL 2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL 4 标准品稀释液6mL10 说明书1份 5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂6mL12 密封袋1个 备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、
elisa试剂盒
elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。
大鼠皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒说明书
大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。ELISA法 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成180 ng/ml，90 ng/ml，45 ng/ml，22.5 ng/ml，11.25 ng/ml， 5.63 ng/ml，2.82 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制90 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml。 4. 检测稀释液A：1×10ml。 5. 检测稀释液B：1×10ml。 6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算 好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶 液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 11. 覆膜：5张 12. 使用说明书：1份 自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸
人白细胞介素6(IL-6)定量检测试剂盒(ELISA)
仅供科研使用，不得用于临床检验。 人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA）说明书 【产品名称】 通用名称：人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA） 英文名称：Human Interleukin-6（IL-6）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人白细胞介素6（IL-6）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人白细胞介素6（IL-6）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。 【主要组成成分】 主要成分
校准品浓度依次为：320、160、80、40、20、0 pg/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 8、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择） 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
人(Human)瘦素(LEP)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）瘦素（LEP）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被瘦素（LEP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素（LEP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。
ELISA操作步骤
Envirology ELISA试剂盒说明书 试剂盒内容物： ●Cry1Ab/Cry1Ac 抗体包被固相板 ●Cry1Ab/Cry1Ac 阳性对照组 ●Cry1Ab/Cry1Ac 酶结合物 ●底物 未提供的物品： ●TPBS清洗缓冲液（PBS/0.05% Tween-20 wash buffer），常温保存，最多一年，然后丢弃。 ●萃取缓冲液（PBS0.55% Tween-20）。可以将0.5 ml Tween-20加入到100 ml 上一步的TPBS 缓冲液内制得。不使用时放在冰箱内冷藏，ELISA分析时升至室温使用。 ●HCL(1 Mol/L) 终止液。将83 ml盐酸溶液（37%）到917ml蒸馏水或去离子水中制的。 配置过程在通风橱内操作。室温下保存可使用2年。 ●一次性吸管，可调节排气移液枪，记号笔，parafilm膜等。 实验步骤： ●此步在15min内完成。加50ul 到板孔内，随即在相应板孔内进行如下操作，加50ul 萃取缓冲液作为空白对照，加50ul Cry1Ab阳性对照，加50ul样品萃取物到板孔内。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。注意勿使内容物溅出！ ●盖上盖子勿使水分蒸发，并在室温下孵化1~2小时。如果有孔板摇床，可在200 rpm速 度下摇动孔板。注意：根据组织萃取方法，用户应该决定一个合适的孵化时间，以使得到最佳结果。 ●孵化结束后，小心移去盖子并将孔内液体甩到废水池内，要剧烈甩弃，尽量甩尽孔内液 体。用TPBS清洗缓冲液清洗板孔（300ul/孔），然后甩尽缓冲液，3次重复。 ●每孔加100ul底物。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。盖上盖子室温下孵化15~30分钟。 ●加100ul HCL(1 M)终止液，并且混匀。此步能使孔内物质变黄。注意：在加入终止液 后30分钟内读板。 读板： ●调节读板仪波长到450nm。如果读板仪有双波长功能，可依据文献选600、630或者 650nm作为备选波长。 ●设置读板仪空白项到空白对照孔。
(KJ201705)水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测胶体金免疫层析法
附件5 水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201705） 1范围 本方法规定了水产品中硝基呋喃类代谢物快速检测方法。 本方法适用鱼肉、虾肉、蟹肉等水产品中呋喃唑酮代谢物（AOZ）、呋喃它酮代谢物（AMOZ）、呋喃西林代谢物（SEM）、呋喃妥因代谢物（AHD）的快速测定。 2原理 样品中硝基呋喃类代谢物经衍生处理后，其衍生物与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡/试纸条中检测线（T线）上硝基呋喃类代谢物-BSA偶联物的免疫反应，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中硝基呋喃类代谢物进行定性判定。 3试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。 3.1试剂 3.1.1盐酸。 3.1.2三水合磷酸氢二钾。 3.1.3氢氧化钠。 3.1.4甲醇。 3.1.5乙醇。 3.1.6乙腈。 3.1.7邻硝基苯甲醛。 3.1.8三羟甲基氨基甲烷。 3.1.9乙酸乙酯。 3.1.10正己烷。 3.1.11邻硝基苯甲醛溶液（10mmol/L）:准确称取0.150g邻硝基苯甲醛，用甲醇（3.1.4）溶解并定容至100mL。 3.1.12磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：准确称取22.822g三水合磷酸氢二钾（3.1.2），用水溶解并定容至1000mL。 3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：准确称39.996g氢氧化钠（3.1.3），用水溶解并稀释至1000mL。 3.1.14盐酸溶液（1mol/L）：取10mL盐酸（3.1.1）加入到110mL水中。
3.1.15三羟甲基氨基甲烷溶液（10mmol/L）：准确称取1.211g三羟甲基氨基甲烷（3.1.8），溶于80mL水中，加入盐酸（约42mL）调pH至8.0后用水定容至1L。 3.2参考物质 3.2.1硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥99%。 表1硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量 注：或等同可溯源物质。 3.3标准溶液的配制 3.3.1标准储备液：分别准确称取适量参考物质（精确至0.0001g），用乙腈溶解，配制成100mg/L 的标准储备液。-20℃冷冻避光保存，有效期12个月。 3.3.2混合中间标准溶液：准确移取标准储备液（3.3.1）各1mL于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为1mg/L的混合中间标准溶液。4℃冷藏避光保存，有效期3个月。 3.3.3混合标准工作溶液：准确移取0.1mL混合中间标准溶液（3.3.2）于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合标准工作溶液。4℃冷藏避光保存，有效期1个月。 3.4材料 3.4.1AOZ试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。 3.4.2AMOZ试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。 3.4.3SEM试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。 3.4.4AHD试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。 3.4.5固相萃取柱（强阴离子交换型）：规格1mL，填装量为60mg。 4仪器和设备 4.1电子天平：感量分别为0.1g和0.0001g。 4.2均质器。
人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA检测试剂盒说明书
人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）含量。 试验原理： CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
新版动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法作业指导书
作业指导书 O P E R A T I N G I N S T R U C T I O N S 动物源性食品中硝基呋喃类 药物代谢物残留量检测方法 高效液相色谱/串联质谱法 编号：XZJY081-00-2019 版本：第一版第0次修改 编制：审核：批准： 实施日期：
一、编制目的 为规范动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量的检验方法，编制本指导书。 二、适用范围 本指导书适用于动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量的测定。 三、编制依据 GB/T 21311-2007《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量的检验方法高效液相色谱/串联质谱法》 四、实验原理 样品经盐酸水解，邻硝基苯甲醛过夜衍生，调pH值7.4后，用乙酸乙酯提取，正乙烷净化。分析物采用高效液相色谱/串联质谱定性检测，采用稳定同位素内标法进行定量测定。 五、试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇：高效液相色谱级。 5.1.2 乙腈：高效液相色谱级。 5.1.3 乙酸乙酯：高效液相色谱纯。 5.1.4 正乙烷：高效液相色谱级。 5.1.5 浓盐酸。 5.1.6 氢氧化钠。 5.1.7 甲酸：高效液相色谱级。 1
2 5.1.8 邻硝基苯甲醛 5.1.9 三水磷酸钾 5.1.10 乙酸铵 5.2 试剂配制 5.2.1 0.2 mol/L 盐酸溶液：准确量取17ml 浓酸盐（5.1.5），用水定容至1L 。 5.2.2 2.0 mol/L 氢氧化钠溶液：准确称取80g 氢氧化钠（5.1.6），用甲醇溶解并定容至1L 。 5.2.3 0.1 mol/L 邻硝基苯甲醛溶液：准确称取1.5g 邻硝基苯甲醛（5.1.8),用甲醇溶解并定容至100ml 。 5.2.4 0.3 mol/L 磷酸钾溶液：准确称取79.893g 三水磷酸钾（5.1.9），用水溶解并定容至1L 。 5.2.5 乙腈饱和的正乙烷：量取正乙烷80ml 于100ml 分液漏斗中，加入适量乙腈后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腈层既得。 5.2.6 0.1%甲酸水溶液（含0.0005mol/L 乙酸铵）：准确称取1ml 甲酸和称取0.0386g 乙酸铵于1L 容量瓶中，用水定容至1L 。 5.2.7 标准物质：3-氨基-2-恶唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮、1- 氨基-乙内酰脲、氨基脲，纯度≥99%。 5.2.8 内标物质：3-氨基-2-恶唑酮的内标物，D 4-AOZ;5-吗啉甲基-3-氨基 -2-恶唑烷基酮的内标物，D 5-AMOZ;-氨基-乙内酰脲的内标物,13C-AHD;氨基 脲的内标物，13C 15N-SEM ，纯度≥99%。 5.2.9 标准储备液：分别准确称取适量标准品（精确至0.0001g ），用乙腈 溶解，配置成浓度为100ml/L 的标准储备液，-18℃冷冻避光保存，有效期
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格：96T/48T。 供应商：上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备： 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势： 全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。
人B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA检测试剂盒,ELISA试剂盒说明书
人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）ELISA检测试剂 盒,ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 上海乔羽生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本B细胞淋巴瘤因子2 （Bcl-2）含量。 试验原理： Bcl-2试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Bcl-2浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行 检测。先将Bcl-2和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合 物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Bcl-2的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗Bcl-2抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
硝基呋喃
硝基呋喃检测试剂盒 硝基呋喃类（Nitrofurans）药物是一种广谱抗生素，因价格较低且效果好，而广泛用于畜禽及水产养殖业，以治疗由大肠杆菌或沙门氏菌所引起的肠炎、疖疮、赤鳍病、溃疡病等。但由于硝基呋喃类药物及其代谢物对人体有致癌、致畸胎副作用,1995年起欧盟禁止硝基呋喃类药物在畜禽及水产动物食品中使用，并严格执行对水产中硝基呋喃的残留检测，2002年美国亦随之制定相应法规。硝基呋喃类原型药在生物体内代谢迅速，无法检测。但其代谢产物因和蛋白质结合而相当稳定，故利用代谢物的检测可反应硝基呋喃类药物的残留状况。硝基呋喃类（Nitrofurans）药物常见有以下四种：呋喃唑酮（Furazolidone）呋喃咜酮(Furaltadone) 硝基呋喃托英(Nitrofurantoin) 硝基糠腙(Nitrofurazone)，代谢产物分别为AOZ、AMOZ、AHD、SEM。呋喃唑酮为硝基呋喃类药物中最具代表性的一种。目前普遍利用LC-UV、LC-MS、LC-MS/MS进行检测，与之相比，酶联免疫检测法具有经济、方便等优点。本公司研制的呋喃唑酮代谢物AOZ酶联免疫检测试剂盒，经衍生萃取完毕后，只需50分钟即可完成检测，对鱼肉、虾肉检测灵敏度可达0.1ppb 反应原理本产品主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的。在整个反应当中,样品中AOZ含量越多，反应呈色就越淡。反之，样品中AOZ含量越少，则呈色越深。试剂盒组成1、微量测试孔：每条8孔，每板12条2、AOZ标准溶液：0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb，1.5ml/瓶3、10倍浓缩缓冲液：一瓶，50ml/瓶4、10倍浓缩萃取/清洗液：一瓶，50ml/瓶5、衍生试剂：一瓶，12 ml/瓶6、浓缩酶标记物：一瓶，100μl/瓶7、底物溶液：一瓶，12 ml/瓶8、反应终止液：一瓶，13 ml/瓶使用说明A、注意事项1、使用前先将AOZ标准溶液6瓶，浓缩萃取稀释/清洗液，浓缩缓冲液，衍生试剂，浓缩酶标记物，底物溶液及微量测试孔条置于室温下，回温30分钟。2、原倍缓冲液配制用蒸馏水将10倍浓缩缓冲液以1：9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水)，即可作为样品萃取步骤中调节PH值用，原倍缓冲液一旦配制完成，请确实放置4℃储存。（10倍浓缩缓冲液请确实回温后使用，并请检查溶液底部之结晶是否完全溶解）3、原倍萃取/洗涤液配制用蒸馏水将10倍浓缩萃取稀释液/清洗液分别以1：9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水)，即可作为样品萃取稀释液与微孔板清洗液。（10倍浓缩萃取/洗涤液请确实回温后使用，并请检查溶液底部之结晶是否完全溶解）4、衍生试剂配制于DMSO中，4oC保存会有结冰现象，若提供微温（30oC）的水浴将有助于加速溶解。此外，为避免DMSO挥发造成操作者不适，请于通风柜内添加此试剂。5、酶标记物配制，取25μl浓缩酶标记物加入7.5ml稀释好的原倍萃取/洗涤液，混匀。（足够半板使用）6、回温后，取出所需微量测试孔条，将剩余板条立即放回铝箔袋中用胶带封好，置于4oC保存。B、样品制备待测物为鱼、虾肉等，依以下方法进行处理a.将1克样品剪碎后放入50 ml离心管中。b. 加入4mlH2O, 0.5ml 1M HCL, 100μl衍生试剂，震荡混合约1分钟，置37℃烘箱，静置过夜（16小时）。c.加入5ml原倍缓冲液，0.4ml 1M NaOH, 5ml乙酸乙酯，震荡混合约1分钟。d.离心10分钟(3000rpm)，取2ml上清液(乙酸乙酯)至10ml玻璃管中，于50oC下氮气吹干。e.于此玻璃管中加入正己烷1 ml，先将残余物完全溶解后(若未能完全溶解，可能会导致回收率降低)，再加入0.8 ml原倍萃取/清洗液，震荡约1分钟。f.将玻璃试管置80－100℃热水浴约3分钟，将有效减少水相与有机相之间乳化现象。g.离心10分钟(3000 rpm)，用吸管吸去上层液(正己烷) 弃掉。再吸取下层液(水层)备用。h.计算结果时务必将稀释倍数（2×）换算回去。C、操作步骤1、于适当微孔中分别加入50mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。2、在另外的微孔中加入50mL 已完成前处理的样品溶液。3、再于每一微孔中另再加入100mL已稀释的酶标记物。4、轻敲盘子四周，使其充分混合后于室温下避光静置温育30分钟。5、将微孔中的反应液甩掉，再将洗液加满每一微孔后甩掉，重复洗3次。6、最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后，轻敲盘子四周，使其充分混合。8、于室
ELISA试剂盒
1、elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2 优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。 3 回收率 elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL 被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。 4 发展 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 5 使用方法 （1）血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 （2）血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 （3）细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 （4）组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)-ELISA试剂盒说明书
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：E-EL-M0314 （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!） 声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，Col I浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。 标本收集: 1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集 血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可 检测。避免使用溶血，高血脂标本。 3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。 4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 （具体处理方法可参考：https://www.360docs.net/doc/aa6429222.html,/news2.asp?tid=477 ） 6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融， 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做 预实验，以确定稀释倍数)。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸
人表皮生长因子elisa试剂盒使用方法
人表皮生长因子elisa试剂盒使用方法 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 25pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本表皮生长因子(EGF)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人表皮生长因子(EGF)水平。用纯化的人表皮生长因子(EGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF)，再与HRP标记的表皮生长因子(EGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人表皮生长因子(EGF)浓度。 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
详解硝基呋喃类药物代谢物残留量检测
动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法LC-MS/MS（GB/T21311-2007）
目 录 C o n t e n t s 一、背景资料 二、检测方法 三、实验程序 四、数据分析 五、讨论
01 背景资料
1.1硝基呋喃类药物概述 定义 ●硝基呋喃类药物（nitrofurans）是一种广谱抗生素，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌和原虫等 病原体均有杀灭作用。 作用机理 ●主要作用于微生物酶系统，抑制乙酰辅酶A，干扰微生物糖类的代谢， 从而起抑菌作用。 广泛应用 ●因其抗菌谱广、杀菌能力强、耐药性好和价格低廉等优点，曾大量应用于由大肠杆菌或沙 门氏菌引起的家禽、家畜和水产等养殖动物的肠炎、疥疮和溃疡等疾病，也用作畜禽生长 促进剂
（2）硝基呋喃类药物——化学性质 呋喃妥因 ●分子式为 C8H6N4O5，CAS 号为 67-20-9，相对分子质量为 238.16。呋喃妥因为黄色结晶粉末，味苦，无 臭，易溶于二甲基酰胺，几乎不溶于在水或氯仿。体内代谢产物主要为 1-氨基-2-内酰胺（AHD）。 呋喃唑酮 ●分子式为 C8H7N3O5，CAS 号为 67-45-8，相对分子质量为 225.16。呋喃唑酮为黄色粉末，味微苦，无臭， 溶于二甲基酰胺或硝基甲烷，几乎不溶于水、乙醇和乙醚。体内代谢产物主要为3-氨基-2-恶唑烷酮（AOZ）呋喃西林 ●分子式为 C6H6N4O4，CAS 号为 59-87-0，相对分子质量为 198.14。呋喃西林为黄色结晶粉末，味苦，无 臭，遇光色渐变深，几乎不溶于水。体内代谢产物主要为氨基脲（SEM） 呋喃它酮 ●分子式为C 13H16N4O6，CAS 号为139-91-3，相对分子质量为324.29。呋喃它酮为黄色结晶固体，难溶 于水。体内代谢产物主要为 5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮（AMOZ）
人白细胞介素ELISA检测试剂盒
人白细胞介素ELISA 检测试剂盒 人IL-17 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-17 。本试剂盒可以检测天然和重组的IL-17 。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。 试验原理： 人IL-17 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-17 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-17 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-17 的浓度呈比例关系。 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。 2．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 3．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 4．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血 液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 （8-OHdG）含量。 试验原理： 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性