293T细胞培养标准操作规程.doc

百利药业生物药研发部

标准操作规程

题目： 293T 细胞传代培养操作规程

编号： SOP-M-e-003-

制定者：（签名）日期：年月日批准者：（签名）日期：年月日生效日期：年月日

修改和追加记录

序号日期内容摘要签名1

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题目： 293T 细胞培养操作规程

1 目的 293T 细胞是常用于包装和扩增病毒载体的工具细胞，因此做好293T 细胞的培养，为保证相关实验的正常进行提供必要条件。

2 适用范围本部门293T细胞培养

3操作方法

2

将移液器和移液枪、 15ml 离心管、离心管架、75cm 新的细胞培养瓶放于生物安全柜中，

按照生物安全柜的标准操作规程，将生物安全柜的紫外开启半小时。

将含 10%胎牛血清和 100U/ml 双抗的 DMEM及 PBS放于 37℃水浴锅中预热。

3.2.1 将已长到 80%-90%的 293T细胞培养瓶从 37℃， 5%的 CO2培养箱中取出，先用 75% 的酒精喷洒于瓶表面，将细胞培养瓶旋转放于生物安全柜中，用无菌的移液管吸净其中

的培养基，加 5ml 的预热的 PBS洗涤一次，吸净 PBS。

3.2.2

2

将含 %tyption 用 PBS稀释两陪到五倍，向该 75cm 的细胞瓶中加入 3ml 稀释好

的%tyption ，让其充分平铺于细胞表面。盖好瓶盖，将细胞瓶放在显微镜下观察，直到

细胞变圆，加含 10%胎牛血清的 DMEM终止反应，用移液管轻轻将瓶上的细胞吹下，将细

胞液移到 15ml 无菌的离心管中， 1000rpm 离心 3 分钟。

3.2.3将离心上清吸弃掉，用手指轻轻拍打离心管底将底部细胞分散开，再加3mlDMEM 培养基将分散的细胞重悬稀释开，取一定量的细胞液进行n 倍稀释后计数，按照细胞计

数标准操作规程进行。

3.2.4 计数好之后细胞传代密度按照

4 2

进行传代培养，每个

2

的2~5×10 个细胞 /cm 75cm

培养瓶中加 10mlDMEM培养基，放

于37℃， 5%的 CO2培养箱中培养。

3.2.5 24 小时后观察细胞状态，待细胞长到80%-90%时进行下一次传代培养。