《国际技术转移中心实施方案》编制指南.pdf

《国际技术转移中心实施方案》编制指南

申报国际技术转移中心的单位除填写《国家国际科技合作基地申请书》外，需提供《国际技术转移中心实施方案》，要求结构如下：

一、指导思想与战略意义

简述该国际技术转移中心建设的战略意义和指导思想，重点阐明中心的建设实施如何围绕当地（所在高新区）科技经济发展总体战略开展，特别是对当地科技服务体系建设和创新型产业集群发展的作用

和贡献等。

二、现有基础与发展优势

1、人力资源与专业能力

国际技术转移负责人以及专职工作人员的构成情况、（技术、语言、管理、法律等方面）专业能力及相关工作经验。

2、合作渠道与支撑条件

已经建立的国际合作渠道（与境外合作伙伴签订的合作协议、合同书或备忘录可作为附件）及主要合作内容和合作模式；

支撑国际技术转移业务的相关数据库和信息服务平台/网络建设和运行情况。

3、总体成效与典型案例

国际技术转移总体成效包括技术引进和技术输出项目数量，实现的项目成果和产生的经济、社会效益以及示范和带动作用等；

通过1-2个典型案例，重点总结如何协助企业通过引进、吸收、再创新，整合技术、人才、资本等国际资源，取得具有自主知识产权

的创新成果，以及在高新区实现项目的产业化等方面的经验，对提高企业自主创新能力、形成核心竞争力以及促进产业发展等方面的作用等。

三、发展思路与建设目标

1、总体思路与目标定位

阐明该中心的总体发展思路和功能定位，包括拟进一步加强国际技术转移的重点技术领域和目标合作国别（地区），在服务功能深化与拓展、服务能力建设与提升以及国际技术转移成效等方面的发展目标。

2、近期目标与重点工作

围绕中心建设的总体思路和目标定位，提出最近1-3年的定性和定量发展目标以及为实现相关目标拟开展的重点工作。

四、运作模式与保障措施

1、本中心国际技术转移业务的运作模式，包括服务内容、业务

流程、盈利模式等。

2、当地政府（所在高新区）为中心发展所提供的政策、资金、

条件环境等方面的支持。

3、本中心在制度建设、人员投入、支撑服务等方面为国际技术

转移工作提供的保障措施。

工程预算书封面

工程预算书（市政工程）工程名称：深圳市深白路光明新区段改造工程第II标段设计变更洽商SBLGC-II-073（燃）估价建设单位：深圳市光明新区建筑工务和土地开发中心监理单位：深圳市燃气工程监理有限公司施工单位：深圳市建安（集团）股份有限公司工程造价（小写）：￥127987.38元工程造价（大写）：壹拾贰万柒仟玖佰捌拾柒元叁角捌分编制日期：2010年4月26日

编制说明一、编制依据： 1、深圳市光明新区建筑工务和土地开发中心与深圳市路桥建设集团公司签订《深圳市松白路光明新区段工程II标施工（单价）合同》，合同号为光开工【2008】015号。 2、设计变更洽商SBLGC-II-073（燃）。 3、该项目工程中类似中标清单单价的执行清单单价。项目中无清单单价的套用《建设工程工程量清单计价规范（GB505000-2003）》及深圳市清单补充规范、《深圳市市政工程综合价格（2002年）》及深圳市有关造价文件规定和深圳市建设工程计价费率标准（2004）中荐费率，下浮11.09%办理。 4、按合同文件商务标澄清会议纪要问题。二、本工程造价新增单价已下浮11.09%

仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。 For personal use only in study and research; not for commercial use. Nur für den pers?nlichen für Studien, Forschung, zu kommerziellen Zwecken verwendet werd en. Pour l 'étude et la recherche uniquement à des fins personnelles; pas à des fins commerciales. толькодля людей, которые используются для обучения, исследований и не должны использоваться в коммерческих целях. 以下无正文

建筑工程预算书编制步骤

建筑工程预算书编制步骤 -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII

建筑工程预算书编制步骤具体步骤为：（一）熟悉施工图及有关资料； 1.弄清房屋的开间、进深、跨度、层高、总高及结构形式。 2.弄清各层平面和层高是否有变化，室内外高差是多少。 3.图纸上有门窗表、混凝土构件和钢筋下料长度表时，应选择一～二种构件复核。 4.大致上弄清室内外装修的情况。 5.注意核对图中尺寸是否有错，仔细阅读详图（二）、列项、计算工程量； 1.建筑基数的计算 ⑴.计算基础不同断面的外墙中心线L中、内墙净长线L内、内墙地槽的净长线L内槽。 ⑵.计算外墙的外边线L外。 ⑶.计算外墙的中心线L中。 ⑷.计算不同墙厚的内墙净长线L内。 ⑸.计算建筑面积：单位M2。 2.计算土方和基础工程：包括：平整场地、人工挖地槽、人工挖地坑、混凝土基础或垫层、砖基础、防潮层、基础回填土、房心回填土、余土外运。 3.计算混凝土、钢筋、混凝土运输、安装工程：计算混凝土体积时，一定要注明是否嵌入墙体，是嵌入内墙还是外墙。计算项目一般包括：现浇柱、构造柱基础梁、圈梁、过梁（分清现浇和预制）、单梁、连续梁、有梁板、无梁板、平板、现浇板带、YKB（）YKB和预制过梁等预制构件的运输（）、安装（）和灌缝。钢筋项目：钢筋应与混凝土一起计算，应按不同规格和钢种，分成现浇构件钢筋、预制构件钢筋、预应力钢筋列项。 4.门、窗、木结构及其相应油漆工程：项目包括：木门窗、铝合金门窗（见前面表格）、木门窗油漆、扶手栏杆油漆。 5.脚手架工程：项目包括：综合脚手架。 6.砌筑项目包括：不同配合比的内外混水墙体、台阶、零星砖砌体。

《南京农业大学学报》-论文撰写要求

论文撰写要求 1．题名准确、精炼、清晰，充分反映论文的基本内涵与特色。中英文题名内容应一致，英文题名通常以名词短语为主要形式，整个题名只有第1个词的首字母大写，其余均小（专有名词除外）；禁止使用非公知公用的符号、缩写词、外来语、代号和商品名。 2．作者姓名及单位中英文作者姓名顺序应一致，通信作者请用“*”标识，作者英文名为汉语拼音，姓在前，名在后，姓全大写，双名只首字母大写，如，WANG Dawei。作者单位请准确写出全称，不能简写。 3．摘要中文摘要：摘要是对正文主要内容高度浓缩的简短论文，与论文具有同等的信息量，包含“研究目的、方法、结果、结论”4个要素。句首不要简单重复文章题名中的信息。目的、方法、结论要简炼，结果的内容要具体。方法部分须有试验材料和主要设计；结果部分应突出原创性工作，着重反映出文章的创新、独到之处，只叙述新信息和发现及主要数据。缩写或代号首次出现必须加以说明。摘要不宜太短，500字左右。英文摘要：所有论文都必须有500词左右的英文摘要，包含“研究目的、方法、结果、结论”4个要素，与中文摘要对应，结果部分可以详细些。研究目的用一、两句话概括，写出论文的主要研究目的；方法、结果的内容尽可能详细，即解决问题的主要方法、过程（包括试验材料、试验设计、测定方法等），研究结果部分重点描述研究中的创新内容，尽量包括论文中的主要论点和重要的论证和数据；结论应明确。中英文摘要的数据必须与正文的数据一致。摘要模板：摘要：[目的] ×××××××××××××。[方法] ×××××××××××××。 [结果] ×××××××××××××。[结论] ××××××××××× ××。 Abstract：[Objectives]×××××××××××××.[Methods]×××××××××××××.[Results]×××××××××××××.[Conclusions]××××× ××××××××. 4．关键词尽量选用主题词，如果自由选词，选词的关键在于要精选能代表文章主要内容的词或词组；每篇论文可列出3～8个关键词；中英文关键词既要意思一致又要顺序一致。 5．中图分类号从《中国图书馆分类法》（第四版）中查找，自查。 6．引言内容包括研究意义、研究背景、提出问题即本研究与已有研究的不同之处及研究目的。

工程预算编制说明

工程预算编制说明一、编制依据： 1、本工程根据甘肃省白银市靖远县刘川乡慈济新村小学教学楼、宿舍楼、学生活动中心及学前班工程施工图编制。 2、本工程执行2004版《甘肃省预算定额》、工程量清单计价规范及甘肃省白银市靖远县刘川乡慈济新村小学招标说明书等。二、取费标准： 1、本工程按三类Ⅰ取费。三、材料： 1、主材按2010年4季度指导价取市场价。四、工程造价：238.1461万元。其中：<一>图纸部分：150.3662万元; 1、教学楼：土建：92.0937万元；水暖：32.31万元；电气：。 2、宿舍楼：土建：92.0937万元；水暖：32.31万元；电气：。 3、学生活动中心：土建：92.0937万元；水暖：32.31万元；电气：。 4、学前班：土建：92.0937万元；水暖：32.31万元；电气：。 <二>暂估价部分：**万元;（未进入总价） 1、人工费（工日）：70元； 2、材料：**元。 3、其他：元。郭公渡水库除险加固工程预算编制说明文件编号：发布机构：公开日期：2009年11月06日内容概述：一、项目概况本工程为郭公渡水库除险加固工程，本次工程包括郭公渡水库坝体、坝基防渗处理；迎水面和溢流面凿除砼重浇C20砼、并加锚杆锚固；消力池加固改造；船闸拆除新建闸门；人行桥桥板拆除重建、增设栏杆；溢流堰翻板闸门更换；下游左右岸护坡处理等内容。二、编制依据 1、招标文件； 2、湖南南方水利水电勘测设计院设计的施工图； 3、湘水建管【2008】16号文件； 4、2002年《全国水利水电建筑预算定额》（含2005年补充定额）关于印发《湖南省建设工程计价办法》和工程消耗量标准水平动态调整及统一解释的通知【《湘建价计（2008）31号》】； 5、《长沙县建设造价》2009年第4期（黄花镇8.1-8.31）和《长沙建设造价》2009年第4期； 6、长县政发【2008】22号文； 7、长县政发【2007】107号文； 8、业主报送的预算资料。三、工程量清单编制说明

变形梯度凝胶电泳

变性梯度凝胶电泳变性梯度凝胶电泳（denatured gradient gel electrophoresis，DGGE），是根据DNA在不同浓度的变性剂中解链行为的不同而导致电泳迁移率发生变化，从而将片段大小相同而碱基组成不同的DNA片段分开。具体而言，就是将特定的双链DNA片段在含有从低到高的线性变性剂梯度的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，随着电泳的进行，DNA片段向高浓度变性剂方向迁移，当它到达其变性要求的最低浓度变性剂处，双链DNA形成部分解链状态，这就导致其迁移速率变慢。由于这种变性具有序列特异性，因此DGGE能将同样大小的DNA片段很理想地分开，它是一种很有用的分子标记方法。 DGGE最初是Lerman 等人于20 世纪80 年代初期发明的，起初主要用来检测DNA 片段中的点突变。Muyzer 等人在1993 年首次将其应用于微生物群落结构研究，并证实了这种技术在研究自然界微生物群落的遗传多样性和种群差异方面具有明显的优越性。此后十年间，该技术被广泛用于微生物分子生态学研究的各个领域，现已广泛应用于生物多样性调查、亲缘关系鉴定、基因突变检测等多个领域。这一技术能够提供群落中优势种类信息，并同时分析多个样品，具有可重复和操作简单等特点，适合于调查种群的时空变化。而且可通过对条带的序列分析或与特异性探针杂交分析，鉴定群落组成。DGGE通过逐渐增加的化学变性剂线性浓度梯度，可以把长度相同但只有一个碱基不同的DNA片段分离。作为一种突变检测技术，DGGE具有如下的优点：（1）突变检出率高。DGGE的突变检出率为99%以上。（2）检测片段长度可达1kb，尤其适用于100~500bp的片段。（3）非同位素性。DGGE不需同位素掺入，可避免同位素污染及对人体造成的伤害。（4）操作简便、快速。DGGE一般在24小时内即可获得结果。（5）重复性好。但是，该方法需要特殊的仪器，而且合成带GC夹的引物也比较昂贵。 DGGE的基本原理及方法： DGGE不是将分子量不同的DNA分开，而是通过聚丙烯酰胺凝胶中变性剂浓度梯度的不同，将序列不同的DNA分开。该方法的原理是根据DNA 的解链特性，不同碱基组成的DNA双螺旋发生变性所要求的变性剂浓度不同，混合双链DNA在变性剂浓度呈线性梯度增加的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，当泳动到与DNA变性所需变性剂浓度一致的凝胶位置时，相对应的DNA发生解链变性，导致电泳迁移速率降低。由于泳动受阻DNA分子在凝胶中

分子生物学课程教学大纲

分子生物学课程教学大纲课程名称：分子生物学（Molecular Biology）课程编号：1313072215 课程类别：专业课总学时数：68 课内实验时数：18 学分：3.5 开课单位：生命科学学院生物技术教研室适用专业：生物技术适用对象：本科（四年）一、课程的性质、类型、目的和任务分子生物学为高等学校生物技术专业学生必修的一门专业基础课，是从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科，主要研究核酸、蛋白质等生物大分子的功能、形态结构特征及其重要性和规律性的科学，是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘，由被动地适应自然界转向主动地改造和重组自然界的基础学科。通过分子生物学的教学，应使学生了解分子生物学的发展历史以及最新研究成果；熟练掌握DNA的结构与功能、RNA在蛋白质合成中的功能、蛋白质的结构与功能、遗传密码及基因表达调控的本质；了解现代分子生物学基本研究方法，并能运用分子生物学的理论知识分析、研究和解决问题，为进一步学习有关专业课程及从事基因工程领域的研究工作奠定基础。二、本课程与其它课程的联系与分工从学科角度来讲，分子生物学涵盖面非常广，与生物学、生物化学和细胞生物学、遗传学等生命科学课程有交叉，《生物化学》是先修课程。三、教学内容及教学基本要求 [1]表示“了解”；[2]表示“理解”或“熟悉”；[3]表示“掌握”；△表示自学内容；○表示略讲内容；第一章绪论第一节引言创世说与进化论[1]；细胞学说[2]；经典的生物化学和遗传学[3]；DNA的发现[2] 第二节分子生物学简史[1] 第三节分子生物学研究的主要内容分子生物学的含义[3]；DNA重组技术、基因工程技术概念[3]；分子生物学研究的主要内容[3] 第四节展望分子生物学的一些分支学科[1]；分子生物学发展的趋势[1] 重点：分子生物学的含义和研究内容

工程预算编制方案

北京公司2015年度预算编制方案为贯彻集团的管理要求，规范和加强北京公司工程预算编制工作，提高工程预算编制工作的效率和质量，经公司经营发展部认真研究和讨论，对北京公司的预算编制原则及流程做出统一要求。一、施工图预算（开工预算） 1、编制依据（1）、招标文件、施工图纸、施工合同、施工组织设计；（2）、2001年及2012年新版《北京市建设工程预算定额》、《北京市建设工程费用定额》、相关补充定额及有关部门颁发的造价文件；2012年北京市房屋修缮工程计价定额《北京市建设工程预算定额》；《北京工程造价信息》。 2、编制方法工料单价法和清单综合单价法。 3、编制流程招标文件（或施工合同）研究选用计价基础文件（定额）工程量计算清单编制（如工料单价法无此步骤）选套定额材料、设备以及专业工程询价人材机价格选用确定取费标准预算文件分析预算文件调整预算文件完成 4、价格标准（已有合同的按照合同标准计算，投标可看参照下述标准）（1）、如依据2001年北京市建设工程预算定额体系完成，以“元”为单位的人工费、其他人工费、其他材料费、其他机具费、模板摊销费、机械费以系数2调整，钢筋加工费增加150元/吨，脚手架租赁费不用调整。（2）、参考北京市《北京工程造价信息》水泥、砌块、砼、电缆、电线、保温价格下浮10%；由于钢筋价格浮动比较大，风险较大按照实际钢筋使用期价格是否浮动。（3）、整项分包的分项工程价格应依市场价为依据，例如：土方工程依据工程所在地和工程的土方特征询价，作为报价直接费标准；卷材防水定额价格严重偏高，SBS3+3普通材质市场价为80-90元/平米，如为品牌如东方雨虹高约20元/平米；新定额即2012年憎水膨胀珍珠岩砂浆保温定额价严重偏低，市场价为60-70元/平米；垂直运输严重偏高，类似项目应根据实际情况进行适当调整。

工程预算编制工作流程

建筑工程预算编制详细步骤 1 工程量计算、汇总 (1) 计算工程量的资料施工图纸及设计说明书、相关图集、设计变更资料、图纸答疑、会审记录等。经审定的施工组织设计或施工方案。工程施工合同、招标文件的商务条款。工程量计算规则。 (2) 工程量计算的顺序单位工程计算顺序。 1)按施工顺序计算法。按施工顺序计算法是按照工程施工顺序的先后次序来计算工程量。 2)按定额顺序计算法。按定额顺序计算工程量法就是按照计量规则中规定的分章或分部分项工程顺序来计算工程量。单个分项工程计算顺序。按照顺时针方向计算法。按“先横后竖、先上后下、先左后右”计算法。按图纸分项编号顺序计算法。 (3) 工程量计算的步骤根据工程内容和计量规则中规定的项目列出须计算工程量的分部分项工程。根据一定的计算顺序和计算规则列出计算式。根据施工图纸的要求确定有关数据代入计算式进行数值计算。对计算结果的计量单位进行调整，使之与计量规则中规定的相应分部分项工程的计量单位保持一致。 (4) 工程量计算的注意事项 1)口径一致。计算工程量必须熟悉计量规则中每个工程项目所包括的内容和范

围。2 )按工程量计算规则计算。 3)列出计算式。在列计算式时，必须部位清楚，详细列项标出计算式，注明计算结构构件的所处部位和轴线，并保留工程量计算书，作为复查依据。工程量计算式，应力求简单明了，醒目易懂，并要按一定的次序排列，以便于审核和校对。 4)计算准确。工程量计算的精度将直接影响着造价确定的精度，因此，数量计算要准确。一般规定工程量的精确度应按计量规则中的有关规定执行。 5)计量单位一致。必须与计量规则中规定的计量单位相一致。 2 套用预算单价，计算工程直接费 3 根据费用定额规定，计取各种其他费用和工程造价。土建工程费用计算程序序号费用名称计算式备注（一）定额项目费按预算定额计算的项目基价之和 A 人工费按预算定额计算的项目人工费之和（二）一般措施费A*费率（三）企业管理费A*费率（四）利润（五）其他（1）+（2）+（3）+（4）+（5）+（6）+（7）（1）人工费价差（2）材料费价差（3）机械费价差（4）材料购置费（5）预留金[（一）+（二）+（三）+（四）]*费率（6）总承包服务费（7）零星工作费根据实际情况确定（六）安全生产措施费[（一）+（二）+（三）+（四）]*2.04% （七）规费[（一）+（二）+（三）+（四）]*4.32% （八）税金[（一）+（二）+（三）+（四）+（五）+（六+）（七）]*3.41%

分子生物学实验教学大纲

分子生物学实验教学大纲一、说明 1、课程类别专业课 2、教学目的通过实验教学使学生了解、验证、巩固和加深所学理论知识，掌握分子生物学研究的基本实验技能，如：质粒（植物/动物）DNA的分离及纯化、植物总RNA的提取，琼脂糖凝胶电泳等技术。培养科学、严谨、实事求是的学风，提高动手能力、分析问题解决问题的能力以及创新性思维。 3、教学内容本门课教学主要以某一基因为主线，从基因的分离、纯化、克隆、及鉴定等方面入手，帮助学生掌握分子生物学基本的实验方法和技能，在此基础上对分子生物学方法的应用和意义有一个整体的把握，在可能的情况下同时提供多种实验材料让学生自行设计和准备实验，培养其独立科研能力。 4、教学方式以实验操作为主，配合原理教授、实践性教学、多媒体教学和学生实验报告、撰写论文、自学等方法进行学习。 5、考核内容及方式实验操作 30％，实验结果 30％，实验报告 30％，考勤 10％。参照以下几个方面评定成绩。（一）认真预习实验并书写实验预习报告；（二）实验态度认真，操作规范，遵守实验室管理规定；（三）按规定步骤进行实验，实验结果准确；（四）认真撰写实验报告。 6、本课程授课时间（学期），总学时数。本课程在三年级开设，总计36学时，学时分配见下表: 教学时数分配表

二、教学内容 1、教学目标（课程）通过本课程的教学使学生了解和掌握现代分子生物学研究的基本原理、方法、技术和技能，包括DNA 提取、PCR 扩增等。通过学生的独立实验设计和实践，训练学生分析问题和解决问题的能力及实际动手能力，同时培养学生的创新思维以及对生命科学探索的兴趣和爱好。 2、教学内容（分章节描述）实验一质粒DNA的提取 1．主要内容碱裂解法提取载体质粒。 2．教学要求学习和掌握碱裂解法提取质粒的方法和技术。实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA 1．主要内容（1）电泳基本知识介绍（2）琼脂糖凝胶的制备（3）质粒的定量。 2．教学要求掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。实验三植物总RNA的提取及检测 1．主要内容（1）RNA的提取（2）核酸的琼脂糖凝胶电泳（3）紫外分光光度法测定核酸的含量和纯度。 2．教学要求掌握植物组织中提取RNA的基本原理和实验技术方法。实验四动物总DNA的提取 1．主要内容（1）总DNA的提取（2）核酸的琼脂糖凝胶电泳（3）紫外分光光度法测定核酸的含量和纯度。 2．教学要求掌握动物组织中提取总DNA的基本原理和实验技术方法。实验五 PCR基因扩增 1．主要内容（1）PCR基本原理（2）PCR溶液体系的制备（3）PCR仪使用 2．教学要求掌握聚合酶链式反应的基本原理和实验技术方法。（二）重点和难点

工程预算编制说明.doc

工程预算编制说明 1、本工程根据九四定额,以杭州石桥永丰经济合作社社区新驰厂房拼接工程施工招标文件及最初图纸为依据计算工程量,套浙江省预算定额九四版,材料差价按杭州造价信息第八期,安装相应采用浙江省造价信息,不计任何费用,税率等. 2、地面工程为30厚细石砼,表面装饰未进入报价内,发生时另计费用. 3、本预算书是按招标文件及最初图纸计算的，其中招标文件中明确说明不报价的项目需另行商议。 4、工程报价单中各项均以人民币报价。编制单位：杭州华中装饰工程有限公司编制日期：2005年8月26日美文欣赏 1、走过春的田野，趟过夏的激流，来到秋天就是安静祥和的世界。秋天，虽没有玫瑰的芳香，却有秋菊的淡雅，没有繁花似锦，却有硕果累累。秋天，没有

夏日的激情，却有浪漫的温情，没有春的奔放，却有收获的喜悦。清风落叶舞秋韵，枝头硕果醉秋容。秋天是甘美的酒，秋天是壮丽的诗，秋天是动人的歌。 2、人的一生就是一个储蓄的过程，在奋斗的时候储存了希望；在耕耘的时候储存了一粒种子；在旅行的时候储存了风景；在微笑的时候储存了快乐。聪明的人善于储蓄，在漫长而短暂的人生旅途中，学会储蓄每一个闪光的瞬间，然后用它们酿成一杯美好的回忆，在四季的变幻与交替之间，散发浓香，珍藏一生！ 3、春天来了，我要把心灵放回萦绕柔肠的远方。让心灵长出北归大雁的翅膀，乘着吹动彩云的熏风，捧着湿润江南的霡霂，唱着荡漾晨舟的渔歌，沾着充盈夜窗的芬芳，回到久别的家乡。我翻开解冻的泥土，挖出埋藏在这里的梦，让她沐浴灿烂的阳光，期待她慢慢长出枝蔓，结下向往已久的真爱的果实。 4、好好享受生活吧，每个人都是幸福的。人生山一程，水一程，轻握一份懂得，将牵挂折叠，将幸福尽收，带着明媚，温暖前行，只要心是温润的，再遥远的路也会走的安然，回眸处，愿阳光时时明媚，愿生活处处晴好。 5、漂然月色，时光随风远逝，悄然又到雨季，花，依旧美；心，依旧静。月的柔情，夜懂；心的清澈，雨懂；你的深情，我懂。人生没有绝美，曾经习惯漂浮的你我，曾几何时，向往一种平实的安定，风雨共度，淡然在心，凡尘远路，彼此守护着心的旅程。沧桑不是自然，而是经历；幸福不是状态，而是感受。 6、疏疏篱落，酒意消，惆怅多。阑珊灯火，映照旧阁。红粉朱唇，腔板欲与谁歌？画脸粉色，凝眸着世间因果；未央歌舞，轮回着缘起缘落。舞袖舒广青衣薄，何似院落寂寞。风起，谁人轻叩我柴扉小门，执我之手，听我戏说？ 7、经年，未染流殇漠漠清殇。流年为祭。琴瑟曲中倦红妆，霓裳舞中残娇靥。冗长红尘中，一曲浅吟轻诵描绘半世薄凉寂寞，清殇如水。寂寞琉璃，荒城繁心。流逝的痕迹深深印骨。如烟流年中，一抹曼妙娇羞舞尽半世清冷傲然，花祭唯美。邂逅的情劫，淡淡刻心。那些碎时光，用来祭奠流年，可好？ 8、缘分不是擦肩而过，而是彼此拥抱。你踮起脚尖，彼此的心就会贴得更近。生活总不完美，总有辛酸的泪，总有失足的悔，总有幽深的怨，总有抱憾的恨。生活亦很完美，总让我们泪中带笑，悔中顿悟，怨中藏喜，恨中生爱。 9、海浪在沙滩上一层一层地漫涌上来，又一层一层地徐徐退去。我与你一起在海水中尽情的戏嬉，海浪翻滚，碧海蓝天，一同感受海的胸怀，一同去领略海的温情。这无边的海，就如同我们俩无尽的爱，重重的将我们包裹。 10、寂寞的严冬里，到处是单调的枯黄色。四处一片萧瑟，连往日明净的小河也失去了光彩，黯然无神地躲在冰面下恹恹欲睡。有母女俩，在散发着丝丝暖意的阳光下，母亲在为女儿梳头。她温和的把头发理顺。又轻柔的一缕缕编织着麻花辫。她脸上写满笑意，似乎满心的慈爱永远装不下，溢到嘴边。流到眼角，纺

感受态细胞转化操作步骤12.8

感受态细胞转化（一）实验准备： 1.Amp母液：称取氨苄青霉素100mg溶于1ml dd H2O中。0.22μm滤器过滤除菌，用EP管分装后储存于-20℃冰箱. 2.X-Gal溶液（2%，m/v）称取20mg X-Gal溶于1ml二甲基甲酰胺（DMF）中。用玻璃试管或聚丙烯管分装后储存于-20℃冰箱,装有X-Gal溶液的试管须用铝箔包裹以防因光照而被破坏.（无须过滤） 3.IPTG（20%,m/v,0.8mol/L）称取IPTG2g溶于8ml dd H2O中。用蒸馏水定容至10mL。0.22μm 滤器过滤除菌，用EP管分装成1mL一小份后储存于-20℃冰箱. （二）操作步骤“ 质粒pBS SK(-)的转化 1.取感受态细胞置于冰浴中，待感受态细胞融化后，分别在100μl 感受态细胞悬液中加入下列DNA质粒或水，轻轻摇匀后冰上放置30分钟。感受态细胞+pBS SK(-)质粒2μl (含量不超过50ng,体积不超过10μl) 感受态细胞+无菌水2μl （阴性对照） 2. 热击：42℃水浴中热击90秒（注：精确计算时间，过长将对细胞造成伤害）,热击后立即置于冰上冷2-5分钟（禁止摇动）。

3. 复苏：向每管中加入400μl LB液体培养基(注：不含Amp),混匀后37℃轻摇培养1~1.5小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Ampr )。涂布平板筛选转化质粒方法一（《分子克隆实验指南》标准方法） 1.将溶化的顶层琼脂分装于17*100mm试管，将试管置于45℃的加热块槽内备用。（90mm培养板用3mL顶层琼脂；150mm培养板用7mL顶层琼脂）2．从加热块取出一支试管，快速加入活菌含量不多于3000（90培养基）或10000（150培养基）的细菌悬液0.1mL。盖紧试管盖颠倒数次。以使细菌在琼脂中混匀。 3.按下表加入： 4. 快速将溶化的顶层琼脂倾入含有适当抗生素的凝固琼脂板的中部，旋转培养板使琼脂散匀。 .注：含Amp的LB固体培养基倒板 (1)配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉 (2)抗生素的加入：高压灭菌后，应使培养基降温至50℃，方可加入Amp，按每100ml培养基加10mg/ml Amp溶液1ml，使其终浓度为

工程预算编制报告(范本)

渝银咨(2014)第号工程量清单、预算价编制报告（初稿） ——重庆市涪陵区委党校改扩建项目涪陵区城市建设投资集团有限公司：本公司接受贵单位委托，对贵单位“重庆市涪陵区委党校改扩建项目”的清单、预算价进行编制，现将编制情况报告如下：一、编制目的：合理确定工程预算造价，为委托方限价招标提供合理的工程限价标准。二、编制范围及工程概况：工程概况：本工程为重庆涪陵党校改扩建工程，由学员宿舍、图书馆、多功能综合楼、车库等组成。学员宿舍为地下3层，地上7层的的公共建筑；图书馆为6层的公共建筑，多功能综合楼为地下2层，地上3层的公共建筑，地下车库为Ⅳ类车库，作为停车库、设备用房用途。原教学楼改造包括钢结构和外立面装饰。工程范围：原教学楼立面整治、综合管网、场平、多功能综合楼、学员宿舍楼、图书馆及车库等，招标文件、施工图所示范围内的全部内容。原教学楼外立面改造工程主要包括：轻钢结构屋架，屋面为彩钢瓦，立面GRC造型柱，立面GRC窗套线，GRC线条，空调板加塑钢百叶，外墙砖剔打、重贴外墙砖，外窗更换为塑料框中空玻璃5+9A+5、内墙天棚刷

乳胶漆等。三、委托单位责任与咨询单位责任：提供预算编制的相关资料，并保证其预算资料的真实性、合法性、完整性，是委托单位的责任；按行业规范要求出具工程预算编制报告，并保证报告的真实性、合法性是本公司的责任。四、编制依据： 1、《工程造价咨询合同》。 2、《重庆市涪陵区委党校改扩建项目工程招标文件》。 3、《建设工程工程量清单计价规范》（GB50500-2008）、《重庆市建设工程工程量清单计价规则》（CQQDGZ0-2009）、2008年《重庆市建设工程费用定额》、2008年《重庆市市政工程计价定额》、2008年《重庆市建筑工程计价定额》、2008年《重庆市装饰工程计价定额》、2008年《重庆市房屋修缮工程计价定额》、2008年《重庆市安装工程计价定额》、以及相关配套文件。 4、重庆同乘工程咨询设计有限责任公司设计的“重庆市涪陵区委党校改扩建项目施工图”，重庆大恒建筑设计有限公司设计的“区委党校教学楼外立面装饰改造工程钢结构设计图”和“区委党校教学楼外立面装饰改造工程设计图”。 5、本工程人工及材料价格参照涪陵区建设工程造价管理站2011年10月份公布的价格信息进行调差，没有的按同期《重庆建设工程造价信息》并接合市场价调差。五、工程类别：按照2008年《重庆市建设工程费用定额》之建筑安装工程类别划分标准划分。六、计算说明： Ⅰ.土建部分

RNA干扰载体的构建的实验流程图

RNA干扰载体的构建的实验流程 RNA干扰载体主要用来研究基因表达调控，RNA干扰技术已已被广泛用于基因结构功能研究和传染性疾病及基因治疗领域，进行RNA干扰实验首先是构建RNA干扰载体，本文以pRI系列载体为例论述了干扰载体的构建的实验流程。产品技术背景 pRI系列载体是基于III类rna聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA 经过RISC剪切后形成有2个U突出末端的成熟siRNA。由于H1启动子对转录产物长度的严格限制，基本上杜绝了非特异性干扰片段的产生，将载体转染细胞后对其它基因的影响降到最低。 pRI系列载体已经成功用于多种哺乳动物细胞进行基因的RNA干扰。本系列中含有新霉素抗性基因的载体用于稳定表达siRNA，可以在更长时间对基因表达抑制后的细胞功能和生理现象进行观察和分析。插入寡核苷酸设计

pRI系列载体的使用需要将人工设计的寡核苷酸片段插入pRI系列载体中特定的酶切位点之间，寡核苷酸片段中包含了针对目标基因的mRNA设计的长度为19nt的干扰片段。合成时需要化学合成正向和反向两条寡核苷酸。正、反向寡核苷酸退火后与载体连接，插入载体XhoI，BglII位点之间，位于载体上H1启动子下游正确的位置上。连接后的载体转入哺乳动物细胞在H1启动子作用下转录产生shRNA。 1. 选择干扰序列在RNA干扰实验中，RNA干扰序列的选择会显著影响RNA干扰效果。我们建议您按照以下几点指导原则选择RNA干扰序列：推荐长度为19 nt，采用21 nt序列也可以取得良好效果。 RNA干扰序列中不包含大于3 nt的连续相同碱基。 RNA干扰序列的GC含量为低到中等水平(推荐GC含量在35%到50%之间)。不要将RNA干扰序列设计在已知的RNA-蛋白质结合位置附近。确保RNA干扰序列与其它基因没有较高的同源性。方向：在编码mRNA的正义链上选择RNA干扰序列。

编制工程单位预算书

工程预算什么是工程预算?什么是工程概算?它们有什么区别和联系? 工程造价基础知识2005-11-28 06:35 PM工程造价基础知识 1.基本建设工程预算都有哪几种？按照国家规定；基本建设工程预算是随同建设程序分阶段进行的。由于各阶段的预算制基础和工作深度不同，基本建设工程预算可以人为两类，即：一是概算；二是预算。概算有可行性研究投资估算和初步设计概算两种，预算又有施工图设计预算和施工预算之分，基本建设工程预算是上述估算、概算和预算的总称。 2.什么叫工程项目？工程项目综合概、预算书都包括哪些内容？如果编制？工程项目又称单项工程，是指具有独立存在意义的一个完整工程，它由许多单位工程组成的综合体。工程项目综合概、预算书是确定工程项目（如生产车间、独立公用事业或独立建筑物）全部建设费用文件。整个建设工程有多少工程项目，就应编到多少工程项目的综合概、预算书。工程项目综合概、预算书包括的内容有建筑、安装工程费、设备购置费及其他费用。上述各项费用是根据各单位工程概、预算书及其他工程和费用概算书汇编而成。如果一个建设项目只有一个单项工程，则汇编时，与这个单项工程有关的其他工程和费用，即可有直接汇入工程项目综合概、预算书。 3.什么是建设项目？建设项目总概预算书的作用是什么？如何编制？建设项目：一般指具有设计任务书和总体设计，经济上实行独立核算，行政上具有独立组织形式的基本建设单位，如：在工业建设中，一般以一个工厂为一个建设项目，在民用建设中，一般以一个学校，一个医院等为一个建设项目，一个建设项目中可以有几个单位工程。建设项目总概、预算书是设计文件的重要组成部分，它是确定一个建设项目（工厂或学校等）从筹建到竣工验收过程的全部建设费用的文件。建设项目总概、预算书是由各生产车间独立公用事业及独立建筑物的综合概、预算书，以及其它工程费用概、预算书汇编组成的。 4.基本建设工程造价由哪几部分费用组成？基本建设工程全部造价，由建筑工程费、设备购置费、安装工程、其他工程费用四个部分组成。 5.什么叫建筑、安装工程费？建筑及设备安装工程费，是建设项目中用于主要生产，辅助生产，生活福利建筑和类设备安装工程施工所需要的全部费用。它是建设项目总造价的重要组成部分。 6.什么叫建筑、安装工程概算定额？建筑、安装工程概算定额是国家或其授权机关规定完成一定计量单位的建筑中设备安装扩大结构或扩大分项工程所需要的人工、材料和施工机械台班耗量，以货币形式表示的标准。建筑安装工程概算指标是在建筑或设备安装工程概算定额的基础上，以主体项目为主，合并相关部分进行综合，扩大而成，因此，也叫扩大定额。 7.建筑、安装工程概算定额在工程建设中，都有哪些作用？（1）建筑、安装工程概算定额是设计单位进行设计方案技术经济比较的依据，也是编制初步设计概算和修正概算的依据；（2）建筑、安装工程概算定额，也可作为建设、施工单位编制主要材料计划的依据。 8.什么叫可行性研究？研究的目的是什么？可行性研究是随着科学技术进步和经济管理科学发而逐步兴起，并日趋完善的综合性科学，所谓可行就是办任何事都有成功与不成功两种可能性，能成功者谓可和，不能成功者就不可行。可行性研究就是在行动以前，对要办的事进行调查其可行与不可行，即：可行则行，不可行则止。基本建设可行性研究，是基本建设前期工作的重要内容，也是按基本建设程序办事的重要步骤，其目

重组质粒在大肠杆菌中的表达

重组质粒在大肠杆菌中的表达 1. 仪器耗材紫外分光光度计（配石英比色杯）、振荡摇床、超净台、细菌培养皿、20ml试管、250ml 三角烧瓶、移液枪、枪头。 2. 试剂及配制（1）LB培养基（100ml）：胰化蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，NaCl 1g，定容至100ml，高压灭菌，4℃保存备用。（2）LB平板（100ml，Kan+，50μg/ml）：胰化蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，NaCl 1g，琼脂1.5 g，定容至100ml，高压灭菌，水浴调温至50-60℃，加入10mg/ml kan 500μl，旋转混匀，铺制平板（90mm直径的平皿约5个），4℃保存备用。（3）10mg/ml kanamycin：称量0.5g kan，用蒸馏水溶解、定容至50ml，0.22μm滤器过滤除菌，分装于高压灭菌的1.5 ml离心管中，每管1 ml，-20℃保存备用。（4）1M IPTG：称量11.915g IPTG，用蒸馏水溶解、定容至50ml，0.22μm滤器过滤除菌，分装于高压灭菌的1.5 ml离心管中，每管1 ml，-20℃保存备用。 3. 实验步骤（1）构建好的表达质粒转化表达菌株BL-21后，均匀涂布LB培养基平板（Kan+，50μg/ml），过夜培养（约12h）。（2）挑取2-4个生长良好的单菌落，用20ml试管分别接种于3ml LB液体培养基（Kan+，50μg/ml）中，37℃、250rpm振荡过夜培养。（3）把以上培养物接种新鲜的LB培养基（Kan+，50μg/ml），二者的体积比为1:100，并且总体积不能超过培养用三角瓶容积的1/5。（4）37℃、250rpm振荡培养至对数生长中期（OD600约0.4～0.8），此细菌密度必须在1.5到3小时内达到。（5）取出2ml培养物作为诱导前对照，在剩余培养物中加入IPTG，使终浓度为1mM（最佳用量需摸索），继续培养。（6）诱导3小时后，取样1ml留存，之后每一小时取样1ml留存，直至8h诱导结束。（7）将不同诱导时间的菌样进行SDS-PAGE，分析蛋白的诱导表达情况。

某公司内部的CRISPR-Cas9操作流程

Genloci Classic CRISPR-Cas9内部操作流程

1，CRISPR-Cas9基因编辑实验流程图如下： pGK1.1 U6 CACC G CAAA 4 5 5’ -5’ 3’ -3’ - - ～20bp

2，操作步骤实验前，请您务必做好以下验证实验： A．单细胞生长情况，确保单个细胞可以正常生长形成单克隆，即，低密度的细胞在培养皿中可以形成单克隆。 B．目的基因的表达情况分析，为防止因染色体缺失等情况导致靶基因缺失，首先需要PCR扩增靶基因，并对PCR结果进行测序，确保靶基因的完整存在；其次，您还可以用RT-PCR分析靶基因的活跃度。 1. 设计Oligo DNA序列首先，您需要在靶标DNA区域中设计一对20bp左右的oligo DNA，您可以通过以下在线工具设计： ●麻省理工学院的CRISPR Design：https://www.360docs.net/doc/ae8004420.html,/ ●德国癌症研究中心的E-Crisp：https://www.360docs.net/doc/ae8004420.html,/E-CRISP/designcrispr 下面我们选择麻省理工学院的CRISPR Design工具来做设计举例，以Fut8基因为例，一次只能输入大小为23～250bp的基因片段，最好一次只输入一个外显子，避免Guide序列跨内含子的。点击“Download as genbank”按钮，出现以下界面：“Fut8” 根据左边的score的高低选取合适的Guide序列，以Guide#1序列为例，2条单链oligo的序列如下（红色字体部分是要与Bbs I酶切后的载体相互补的部分）： Fut8-F: cacc G AATGAGCATAATCCAACGCC Fut8-R: aaac GGCGTTGGATTATGCTCATTC ※注意：oligo DNA设计序列的第一个碱基必须是G，如果你选取的Guide序列的第一个碱基不是G，可自行加一个G上去。另外，需在位点上下游各设计一条引物，用于后续PCR或测序检测阳性克隆，引物能扩增约300bp 的DNA片段，上游引物距突变位点约100bp，下游引物距突变位点约200bp。将设计后的序列送到值得信赖的公司合成，纯化级别为PAGE。 2. T4 DNA Ligase连接将合成后的2条单链oligo DNA退火形成双链DNA，再与载体连接，pGK1.1 linear vector是线性化载体，无需酶切处理，可直接用于T4 DNA Ligase连接反应，pGK1.1载体已经优化过，其转染和敲除的效率比一般CRISPR载体更高。

建筑工程预算书编制步骤

建筑工程预算书编制步骤具体步骤为：（一）熟悉施工图及有关资料； 1.弄清房屋的开间、进深、跨度、层高、总高及结构形式。 2.弄清各层平面和层高是否有变化，室内外高差是多少。 3.图纸上有门窗表、混凝土构件和钢筋下料长度表时，应选择一～二种构件复核。 4.大致上弄清室内外装修的情况。 5.注意核对图中尺寸是否有错，仔细阅读详图（二）、列项、计算工程量； 1.建筑基数的计算 ⑴.计算基础不同断面的外墙中心线L中、内墙净长线L内、内墙地槽的净长线L内槽。 ⑵.计算外墙的外边线L外。 ⑶.计算外墙的中心线L中。 ⑷.计算不同墙厚的内墙净长线L内。 ⑸.计算建筑面积：单位M2。 2.计算土方和基础工程：包括：平整场地、人工挖地槽、人工挖地坑、混凝土基础或垫层、砖基础、防潮层、基础回填土、房心回填土、余土外运。 3.计算混凝土、钢筋、混凝土运输、安装工程：计算混凝土体积时，一定要注明是否嵌入墙体，是嵌入内墙还是外墙。计算项目一般包括：现浇柱、构造柱基础梁、圈梁、过梁（分清现浇和预制）、单梁、连续梁、有梁板、无梁板、平板、现浇板带、YKB（1.015）YKB和预制过梁等预制构件的运输（1.013）、安装（1.005）和灌缝。钢筋项目：钢筋应与混凝土一起计算，应按不同规格和钢种，分成现浇构件钢筋、预制构件钢筋、预应力钢筋列项。 4.门、窗、木结构及其相应油漆工程：项目包括：木门窗、铝合金门窗（见前面表格）、木门窗油漆、扶手栏杆油漆。 5.脚手架工程：项目包括：综合脚手架。 6.砌筑项目包括：不同配合比的内外混水墙体、台阶、零星砖砌体。

7.墙柱面装饰工程：项目包括：内外墙抹灰和镶贴块料面层、墙裙抹灰和镶贴块料面层、各种装饰线和零星抹灰和墙面涂料。 8.楼地面、天棚工程：项目包括：各种不同材料的垫层、找平层、台阶、整体面层、天棚、踢脚线。 9.屋面工程项目包括：各种不同材料的找平层、保温层、二毡三油（二布三胶）防水层、SBS或APP改性沥青防水层、刚性防水层及钢筋、架空隔热层、水落管、弯头、落水口、落水斗。 10.其它工程：项目包括：墙面涂料工程量的统计。（三）、预算定额的套用、换算；套用单价时需注意如下几点： 1.分项工程量的名称、规格、计量单位必须与预算定额所列内容一致，否则重套、错套、漏套预算基价都会引起直接工程费的偏差，导致施工图预算造价偏高或偏低。 2.当施工图纸的某些设计要求与定额单价的特征不完全符合时，必须根据定额使用说明对定额基价进行调整或换算。 3.当施工图纸的某些设计要求与定额单价特征相差甚远，既不能直接套用也不能换算、调整时，必须编制补充单位估价表或补充定额。（四）定额直接费的计算及主要材料分析；根据分部分项工程量乘以相应的定额单价就可以得出每一项的定额直接费，把所有的费用合并计算就可得到总计的定额直接费。（五）材料价差调整计算；根据建筑材料的信息价和定额中的价格结合定额中材料的用量可以计算材料的差价。材料价差=∑（信息价-定额价）×材料消耗量（六）间接费、利润、税金的计算，并汇总计算工程造价；按照建筑装饰单位工程造价构成的规定费用项目、费率及计费基础，分别计算出利润、价差和税金，并汇总单位工程造价

分子克隆实验指南

做了快一年的分子克隆，犯了很多错误，经历了很多坎坷，也学到了很多东西。分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了，大家抱怨的也最多，我也陷入在个步骤上很久。经过长时间的摸索我在连接这个问题上有一些体会，在这里跟大家分享一下我的经验，以供和我一样陷入困境及刚开始做克隆的同学参考。关于连接的提问多集中在连接的体系、DNA的用量、vector和insert的比例、连接酶等。但是我认为，连接不成功，问题并不一定出在连接这步上。有很多环节影响连接的成败，如酶切的好不好、回收的质量好坏、连接时的浓度或比例、感受态等。以下我详细说明。 1，PCR引物的设计。通俗的不说，需要指出的是设计引物时一定要考虑切点的甲基化问题。做普通的克隆会涉及到甲基化形式有两种：dam甲基化和dcm甲基化。常用的大肠杆菌都有这两种甲基化酶。dam甲基化酶识别GATC位点并甲基化；dcm甲基化酶识别CCWGG 位点（W是A或T）并甲基化。如果有这两种位点那么多数情况内切酶是切不开了。容易受甲基化影响的内切酶有：Dpn1（GA/TC）天生就甲基化；Cla1（A TC/GAT）如果前面加个G或后面加个C那么恭喜你，dam甲基化；Xba1（T/CTAGA）如果前面加个GA或后面加个TC也是dam甲基化，等等有好多。这些容易甲基化的切点设计引物时一定要注意，避免引入甲基化位点。如果真是避免不了或者后来才发现问题，那么把甲基化的质粒转化到甲基化酶缺陷型大肠杆菌中再提质粒就没有甲基化，可以切了。甲基化缺陷型菌有：DM1（Invitrogen）、INV110（invitrogen）、JM110等。 2，PCR产物。两种方式：一种纯化后直接酶切连接；一种连T载体再往下切连接。我个人强烈建议第二种，连T载体。因为PCR产物直接酶切我觉得有两个缺点：①由于两头把手太短，虽说有保护碱基，但我觉得还是不如从质粒上往下切好切，而且容易切坏、切碎；②无法从电泳上看出来切没切开，因为也就切下了几个十几个bp，带形没啥变化。连T载体的优点：①进载体后，大提一次的质粒夸张点说够用一辈子的，不用总PCR往出调了，再说PCR那东西还不太稳定，一把多一把少的。②酶切会很清晰，切下来了就是有带，没切动就是没有，没连上也能知道不是没切开而是别的步骤有问题。连T载体也有些麻烦的地方，如需要的切点有时跟T载体上自带的切点冲突，这就要小心鉴别；而且连T载体最好测序看一下PCR的产物对不对、切点对不对。总体来讲连T载体是很有优势的。 3，提质粒。有时手工小提或粗提的质粒酶切效果不好，这可能是提取的不够纯或者内切酶品质不好。所以若酶切效果不佳建议用柱子精提或大提。 4，酶切。用于连接的酶切很关键。需注意如下几点： ①如果是双酶切A和B，预实验中必须做A和B各自的单酶切和A+B的双酶切,好确认这几种酶都好用，质粒上的切点都好用。如果切不开就要考虑是不是酶的问题，buffer的问题，质粒上有没有这些切点，序列是否甲基化等。 ②酶切尽量用大体系，如50ul、100ul等。大体系能稀释内切酶包装中的甘油，对反应有利。相反，连接尽量用小体系，以增加DNA末端的碰撞机会。 ③如果要回收、连接，酶切用的DNA量我的经验是不用太大。大了会切碎，形成一些不规则的末端，不利于连接。 ④酶切后的电泳，即切胶的那次电泳中，如果切成的条带很清晰，不拖泥带水，没有弥散，没有拖尾，那做回收、连接效果最好。相反，若有弥散、拖尾、不清楚、一团亮等情况就是切的不好，做后续实验成功率会降低。若真是效果很差建议改进体系重新切。 5，回收。回收可以用柱式试剂盒或手工法。柱式回收试剂盒：此类试剂盒适合各种长度DNA，对黏性末端基本没有破坏，回收效率也不错。手工醇沉法步骤如下，把切得的胶弄碎，用Tris-HCl浸泡一段时间，吸出所有的液体，用酚抽提一遍，氯仿抽提一遍，加盐和醇醇沉，