菊花黄酮实验报告

（正交试验）菊花黄酮提取与测定【实验报告】

操作者姓名：张伊班级生物技术102 专业生物技术及应用

前言

1、实训的背景、目的和意义：

菊花具有疏风清热、消肿解毒的功效, 常用于上呼吸道感染、扁桃体炎、高血压和冠心病等治疗。文献报道[1] 野菊花中含有木犀草素、槲皮素、木犀草素、葡萄糖苷、槲皮素苷类等黄酮类化合物, 而药典中仅规定了绿原酸的含量, 并没有总黄酮含量的评价指标。为了更好地检验菊花中黄酮的含量，比较哪种方法更好,本次试验应用超声波提取菊花黄酮，分光光度法检测菊花总黄酮含量的方法, 从而使学生掌握菊花黄酮的提取与测定工艺。

2、实训要解决的问题：

1）在何种情况下提取黄酮效率高？

2）影响提取效率的有哪些因素？

3）比较提取时间、提取次数不同所带来的影响。

3、实训操作关键技能

吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml

摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量。（加入药品时的次序不能搞错）

材料及方法

1、实训材料及配制、预处理技术

材料：杭白菊干花、芦丁对照品

试剂：75%乙醇、蒸馏水

仪器：电热恒温鼓风干燥箱、提取装置、温度计、超声波发生（带加热功能）、真空泵、紫外分光光度计、低速离心机等。

样品溶液的制备：称取10g菊花，剪碎，加入75%热乙醇80ml, 超声波提取10min（我们组的）2次,过滤。转移至容量瓶中备用。 对照品溶液的制备：精密称取在120摄氏度减压干燥至恒重的芦丁( 对照品) 1.00mg , 置于100ml 容量瓶中, 加乙醇溶解刻度, 作为对照品贮备液。

标准曲线绘制:精密吸取对照品贮备液0.50ml、1.00ml、2.00m l、

3.00ml、

4.00ml、

5.00ml分别置于10ml容量瓶中, 吸取样品量

（根据样品的吸光度调整）1.0ml，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min；以

试剂作空白,于510nm处分别测其吸收度。以对照品浓度C( mg/ ml) 为横坐标, 吸光度( A)为纵坐标, 绘制标准曲线。

2、实验技术流程路线：

杭白菊烘干→干杭白菊10克→剪碎→于圆底烧瓶→适当体积75%热乙醇→超声波发生器→按时提取（每提取10min，中间停顿1min）→过滤提取液→滤渣（按试验设计）→再过滤→合并滤液抽滤→收集滤液、量体积→量取提取滤液5mL →离心（离心5000r／min，6min ）→取上清液1.00mL→测定吸光度值

结果与分析

1、实验结果

=m

M

黄酮的含量稀释倍数

m为标准曲线中的含量

M为菊花总质量

标准曲线：y＝0.0401x＋0.0731 R2＝0.925

2、实验结果加以分析：

1、由于紫外分光光度计出故障，测得数据不准确，无法算出黄酮含量。

3、讨论及建议：

我们还可以分组做一下其他入溶剂提取菊花黄酮，进行比较。

致谢

感谢：与我一起完成这次试验的同组伙伴，阙斐老师的指导和解疑

参考文献

1 、沈一行, 权丽辉, 关玲, 等. 北野菊黄酮类成分研究[J]. 药学学报,1997, 32( 6) : 451.

2 、张传部. 桑叶及其保健饮料中总黄酮含量测定的研究[J]. 食品科技, 2000, 53( 2) : 52-53.

3、王浩江, 孙体健, 曹晓峰. 月季花中总黄酮含量测定[J]. 山西医科大学学报, 2007, 38( 4) : 318-319.

4、中华人民共和国卫生部.WS3-B-3827-98 卫生部药品标准中药成方制剂第二十册[S]. 北京: 中华人民和国卫生部药典委员会,1998: 221.

5、郑杭生, 李计萍, 韩炜, 等. 紫外可见分光光度法测定总黄酮含

量的方法学考察要点[J]. 中成药, 2008, 30( 9) : 1364-1365 附录