第三章 病毒检验基本技术
第三章病毒检验基本技术
一、形态学检验
光学显微镜一般用于观察有些病毒在宿主细胞增殖后于细胞核内或细胞质内出现的包涵体。
胞质内包涵体：狂犬病毒（内基小体）、呼吸道合胞病毒（RSV）
胞核内包涵体：巨细胞病毒（CMV），单纯疱疹病毒（HSV）、水痘-带状疱疹病毒（VZV）、腺病毒。
胞质内和胞核内包涵体：麻疹病毒
电镜技术：电镜直接检查、免疫电镜
二、培养与鉴定技术（金标准）
进行病毒分离培养与鉴定的情况：
1、需对疾病进行病原学的鉴别诊断
2、发现新的病毒性疾病或再发性病毒性疾病
3、病程长且诊断困难的病人疑似病毒感染时，病毒的分离培养对诊治疾病有指导性意义
4、检测病毒减毒活疫苗效果（如及时发现回复独立的变异株等）
5、病毒性疾病的流行病学调查
6、病毒生物学特性的研究。
采集要求：早期采集，低温运送和保存（-20℃~-70℃），样本处理（高浓度抗生素—青链霉素处理过夜，或细菌滤膜过滤）
培养：
1、细胞培养：原代细胞培养、二倍体细胞培养、传代细胞培养
2、鸡胚培养（一般采用9~12日龄鸡胚）（流感病毒、疱疹病毒、痘病毒）：羊膜腔接种、绒毛尿囊膜接种、尿囊腔接种、卵黄囊接种。
3、动物接种
鉴定：
1、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标
（1）细胞病变：细胞圆润、分散、溶解；细胞融合成多核巨细胞；细胞肿胀、颗粒增多、病变细胞聚集成葡萄串状；形成包涵体。（2）红细胞吸附（流感病毒）
（3）干扰现象
（4）细胞代谢的改变
2、病毒感染性测定和病毒数量测定
（1）50%组织细胞感染量测定
（2）红细胞凝集试验
（3）空斑形成试验（最常用）
（4）中和试验
三、非培养检验技术
1、免疫学检验技术：抗原检测（意义更大、早期）、抗体检测
2、分子生物学检验技术:核酸杂交技术、聚合酶链反应技术、基因芯片技术、基因测序技术（对新基因进行测序）
病毒学检验重点
病毒得特点: 1、形体微小,能通过细菌滤器,用电子显微镜才能观察到。 2、无细胞结构,其主要成分就是核酸与蛋白质 3、每种病毒只含有一种类型得核酸(RNA或DNA) 4、因缺乏完整得酶系统与能源,故只能寄生于活细胞内,依靠宿主细胞得代谢系统合成蛋白质与核酸 5、病毒以其基因为模板,在宿主细胞内复制出新得病毒颗粒 6、为了在生物界保存其种属,病毒具备从一个宿主转移到另一个宿主得能力,并具有对敏感宿主得侵染性与复制性 7、在宿主体外,能以大分子状态存在,并可长期保持其侵染能力 8、有些病毒得核酸能整合到宿主细胞得基因组中,并能诱发潜伏感染 体外细胞培养得基本条件: 1、条件要求高,培养液组分复杂,需要添加血清才能满足生长需要 2、避免微生物污染,需要在培养液中加入抗生素。 3、体外细胞培养得基本要求主要包括细胞接种(尽量选择对数期细胞接种)、 4、培养液营养成分、 5、酸碱度(能耐受得ph范围为 6、6- 7、8,依靠缓冲系统调节)、 6、气体条件(细胞生长需要CO2 ,大规模培养需要有足够得氧气)、 7、温度(最适温度为35-37。C)、 8、水得纯度(一般要求去离子水或三蒸水)、 9、无菌条件等 实验动物得微生物控制分类: 1、普通动物,一级动物,要求不携带动物烈性传染病与人兽共患病病原 2、清洁动物,二级动物,在一级动物要求上,不携带对动物危害大、对实验干扰大得病原 体,外观健康,主要器官不得有组织病理学病变 3、无特定病原体动物,三级动物,除普通动物、清洁动物不得携带病原体外,还要求排除 潜在感染或条件致病菌得感染 4、无菌动物,四级动物,要求在体内外不得检出其它生命体 实验动物得遗传学分类 1、近交系,指经过连续20代以上全同胞或亲子交配培育得动物品系 2、封闭系,不从外界引入新得血缘,非近亲交配方式得实验动物群体 3、突变系,由于遗传基因发生突变而具有某些特殊形状得动物 4、杂交群动物,由不同品系杂交所产生得后代 5、转基因动物,插入外源基因后能正常繁殖得动物 大鼠、小鼠得采血方法 1、剪尾采血,动物麻醉后,将尾端剪去约5mm,待血液流出采集,小鼠可每次采血0、1ml, 大鼠约0、4ml 2、眼眶后静脉丛采血,拇指及食指抓住鼠两耳之间得皮肤固定,轻轻压迫颈部两侧,使眼 球充分外凸。采血管插入眼角与眼球之间,向眼底方向刺入,切开静脉丛,血流即流入取血管。 3、颈(股)动脉或颈(股)静脉采血,麻醉动物,剪去被毛,作颈静脉或劲动脉分离术后采血 4、摘眼球采血,采血时,用左手固定动物,压迫眼球,尽量使眼球凸出,右手用弯头镊子摘 除眼球,迅速采集血液 病毒得纯化方法:
医学检验《基础知识》试题(修订版)精选
基础知识 一、A1 1、检测血糖时，实验室多采用血浆或血清而不使用全血的原因是 A、方便于同时检测其他生化指标 B、血细胞的糖酵解作用会使血中葡萄糖浓度降低 C、血细胞中的葡萄糖渗出使血中葡糖糖浓度升高 D、细菌污染使血中葡萄糖浓度升高 E、细菌污染使血中葡萄糖浓度降低 【正确答案】 B 【答案解析】由于红细胞内的G-6-PD可促使葡萄糖的酵解从而使血糖浓度降低。 2、与试带法检测白细胞的原理有关的酶是 A、粒细胞酯酶 B、酸性磷酸酶 C、碱性磷酸酶 D、过氧化物酶 E、单核细胞酯酶 【正确答案】 A 3、关于免疫耐受的描述，错误的是 A、免疫耐受是机体对抗原刺激表现出的特异性"免疫不应答"现象 B、T细胞和B细胞都可发生免疫耐受 C、免疫耐受机体对任何抗原均不应答 D、免疫耐受具有特异性 E、中枢免疫耐受状态可持续终身 【正确答案】 C 4、肾移植进行组织配型.优先考虑的是 A、AB0血型 B、HLA-DR C、HLA-DP D、HLA-A E、HLA-B 【正确答案】 B 5、下列何种疾病使中性粒细胞和单核细胞的调理、吞噬和杀伤能力受损A、慢性肉芽肿 B、髓过氧化物酶 C、G-6-PD缺乏症 D、Shwachman综合征 E、类白血病 【正确答案】 A 【答案解析】慢性肉芽肿属原发性吞噬细胞功能缺陷，其中性粒细胞和单核细胞的调理、吞噬和杀伤能力受损。 6、属于Ⅲ型超敏反应的疾病是 A、过敏性支气管哮喘 B、新生儿溶血症 C、接触性皮炎 D、过敏性休克 E、系统性红斑狼疮 【正确答案】 E 7、用密度梯度离心法分离的外周血单个核细胞，不含有 A、单核细胞 B、T细胞 C、B细胞 D、NK细胞 E、多形核粒细胞 【正确答案】 E 8、补体系统活化替代途径激活物主要是 A、结合抗原后的IgG类抗体 B、结合抗原后的IgM类抗体 C、细菌细胞壁的脂多糖、酵母多糖 D、RNA E、双链DNA 【正确答案】 C 9、免疫组化染色前.应对标本进行固定.固定最主要的目的是 A、保存组织细胞的抗原性 B、防止细胞脱落 C、防止细胞自溶 D、终止胞内酶的活性 E、使细胞内蛋白质凝固 【正确答案】 A
病毒学检验
《病毒学检验》课程教学大纲 一、课程基本信息 课程名称：病毒学检验（Experimental Virology） 课程编码： 课程类别: 必修课(专业课) 适用专业: 卫生检验学本科 开课学期: 第七学期 课程学时: 63学时（理论学时27，实验学时36） 课程学分：3.5 先修课程：医学寄生虫学及检验、细菌学检验、临床医学概要等 课程简介：病毒学检验是卫生检验重要的专业课程之一，是卫生检验课程体系的重要组成部分，也是卫生检验专业学生必修的考试课程。本课程通过课堂讲授、实验实习、网络自学等方式进行教学。注重培养学生综合性思维能力，重视学生自主学习、自觉学习，分析和解决实际问题能力，以及创新思维和能力的培养。 选用教材：李洪源、王志玉主编：《病毒学检验》，人民卫生出版社，第一版，2006年7月。 参考书: 1. 张朝武主编：《现代卫生检验》，第一版，人民卫生出版社，2005。 2. 李影林主编：《中华医学检验全书》，人民卫生出版社，1996。 3. 王秀茹主编：《预防医学微生物学及检验技术》，人民卫生出版社，2002。 4. 贾文祥主编：《医学微生物学》，四川大学出版社，2005年1月。 5. 李凡、刘星晶主编：《医学微生物学》，人民卫生出版社，第七版，2008年1月。 二、课程教育目标 通过学习，使学生知悉病毒学检验的基本技术和分子生物学技术，知悉 常见重要致病病毒。要求学生掌握病毒的分离培养方法、血清学实验及分子 生物学技术在病毒学检验中的应用；掌握常见重要致病病毒的生物学性状、 检验方法和预防医学意义。为学生能独立开展各种病毒学检验打下良好基 础。
三、理论教学内容与基本要求 绪论 （一）学时：0.5 （二）要求 【掌握】病毒的特性；病毒学检验的内容及其应用范围；病毒学检验的一般原则。 【熟悉】病毒学检验的质量控制；病毒学实验室的生物安全管理。 【了解】病毒学和病毒学检验的发展史。 第一篇病毒学检验技术 第一章细胞培养技术 （一）学时：1.5 （二）要求 【掌握】体外培养细胞的生物学特性；体外细胞培养的条件；组织培养的种类；细胞系和细胞株的概念；细胞培养方法；细胞培养中平衡盐、消化液和血清的作用；细胞检查方法；细胞的冻存。 【熟悉】用于病毒培养的细胞选择、细胞培养操作过程和细胞培养污染与监测。 【了解】细胞培养技术在病毒学研究中的发展；细胞系的鉴定。 第二章鸡胚接种技术 （一）学时：1.5 （二）要求 【掌握】鸡胚的结构；鸡胚的孵育与检查；接种途径与方法及其用途；病毒的检测；鸡胚接种技术的应用。 【熟悉】实验材料、器械与准备。 【了解】鸡胚的解剖与生理。 第三章动物实验技术 （一）学时：1.5 （二）要求 【掌握】实验动物的分类；普通动物、清洁动物、无特定病原体动物、无菌动物、悉生动物；近交系动物、封闭群动物、突变系动物、杂交群动物及其特点；常用实验动物种类及其品系；
常规临床检验技术基础知识
常规临床检验技术基础知识 分析：分：使整体事物变成几部分或使联在一起的事物离开；析：分开，散开，挑出。 血液分析的目的就是将不同成分分开。 血液是人体的重要组成部分，它维持着人体各部分的生理功能。是维持生命的基本成分之一，没有了血液，人的生命就不会存在。 血液的组成： 血液是由血浆和血细胞（就是所说的血球）两大部分组成的流体组织，在心血管系统内循环流动。（将血液用抗凝剂抗凝处理后，放在离心机内离心或静置一段时间后，血浆和血细胞就明显分出）。血细胞沉淀在底部，悬浮在红色血细胞上面的黄色液体为血浆。 全血、血浆、血清的区别： ◇全血：血液经抗凝处理后的全部血液为全血。 ◇血浆：离心除去血细胞后所得到的淡黄色液体为血浆。 ◇血清：血液不经抗凝处理，让它自行凝固，则在抽血后的一段时间内，血液会自动在一系列凝血因子的作用下发生凝集，血液首先凝固成一个整体，再经过一段时间或用离心机离心，血液中凝固的部分会与一些清澈淡黄色的液体分离开，这些液体称为血清。 血清与血浆从表面上看似乎没有什么不同，但其内在的主要区别是血清中不含纤维蛋白原，是未经抗凝处理过的血液凝固后得到的。 血液标本的三种主要处理方式： ①血清测定：主要用于血液生化、免疫等方面的测定。 ②全血测定：多用于在血细胞、血常规、血沉等方面的测定。 ③血浆测定：多用于凝血等方面的测定。 血浆的主要成分是水、低分子物质（电解质、小分子有机化合物、营养物质、代谢产物、激素等）、蛋白质、和O2、CO2等。 血细胞包括红细胞、白细胞、血小板三部分。 化学成分的测量技术：电解质的测量由ISE电解质分析仪完成。其余的微量元素由微量元素分析仪测量。 其余的低分子物质包括部分蛋白质由生化分析仪测量（生化分析仪通过浊度测量也可以测定电解质、部分蛋白质，但这些方法已被淘汰或正在被淘汰）。 蛋白质测量有多种技术完成：电泳、酶免疫测量技术等。 PO2（氧分压）及PCO2（二氧化碳分压）等由血气测量仪测量。 血气分析仪是测定患者血液中氧的分压、二氧化碳分压、血液酸碱度及其
初级临床医学检验技士基础知识24
[ 模拟] 初级临床医学检验技士基础知识24 以下每一道考题下面有 A、B、C、D、E 五个备选答案。请从中选择一个最佳答案。 第 1 题： 以下属于酸性染料的是 A.硫堇 B.苏木素 C.天青 D.亚甲蓝 E.伊红 参考答案： E 伊红属于酸性染料，其余为碱性。 第 2 题：接种针宜采用以下哪种方法进行消毒灭菌 A.漂白粉 B.烧灼 C.酒精擦拭 D.紫外线照射 E.干烤法 参考答案： B 接种针宜采用烧灼消毒灭菌第 3 题：冷凝集试验正常参考值是( ) A.<1:20 B.<1:40 C.<1:80 D.<1:160 E.<1:320 参考答案： B 第 4 题：基础胃液量
A.正常10～100ml B.>100ml C.<10ml D.1.2 ～1.5L E.约为50ml 参考答案： A 基础胃液量，正常10～100ml 第 5 题：下列哪项不属于红细胞过度破坏引起的贫血 A.红细胞膜缺陷 B.红细胞酶缺陷 C.造血物质缺乏 D.珠蛋白肽链改变及分子结构变异 E.新生儿溶血病 参考答案： C 造血物质缺乏属于红细胞生成不足引起的贫血第 6 题： 玻璃器皿干热消毒要求 A.160～170℃2 小时 B.160～170℃1 小时 C.1000c2 小时 D.1500c2 小时 E.1400c2 小时参考答案： A 第7 题： 以下哪种细菌在医务人员带菌率高达70%，多具耐药性 A.淋球菌 B.葡萄球菌 C.链球菌 D.肺炎球菌 E.脑膜炎球菌 葡萄球菌属的细菌是一群革兰阳性球菌，常堆聚成葡萄串状而得名。广泛分布于自然界、人和动物体表及与外界相通的腔道中。目前有32 参考答案：B
2020智慧树知到《病毒学检验》章节测试题【完整答案】
2020智慧树知到《病毒学检验》章节测试 题【完整答案】 2020智慧树知到《病毒学检验》章节测试答案 绪论 1、用于测量病毒大小的单位是： A.μm B.nm C.pm D.fm E.am 答案: nm 第一章 1、PCR反应的引物需要2条。 A:对 B:错 答案: 对 2、甲型肝炎病毒归属于嗜肝DNA病毒科 A:对 B:错 答案: 错 3、病毒只含有一种核酸，DNA或RNA A:对
B:错 答案: 对 4、乙肝大三阳时，以下哪些项应为阳性 A:HBsAg B:HBeAg C:HBcAg D:抗HBc E:抗HBs 答案: HBsAg,HBeAg,抗HBc 第二章 1、可传播HIV的途径有 A:分娩 B:共用牙刷、剃须刀等 C:输血、血浆及血液制品 D:手术器械 E:皮肤接触 答案: 分娩,共用牙刷、剃须刀等,输血、血浆及血液制品,手术器械 2、狂犬病防治措施有 A:捕杀病犬加强家犬管理 B:人被咬伤后应及时处理伤口 C:动物咬伤后应及时接种狂犬病疫苗
D:及时足量注射丙种球蛋白 E:对可疑患者或严重咬伤者在作用疫苗前注射抗狂犬病病毒血清 答案: 捕杀病犬加强家犬管理,人被咬伤后应及时处理伤口,动物咬伤后应及时接种狂犬病疫苗,对可疑患者或严重咬伤者在作用疫苗前注射抗狂犬病病毒血清 第三章 1、DNA的Tm值大小与下列哪个因素有关 A:温度的升高 B:酸碱度的改变 C:DNA的均一性 D:化学试剂 E:缓冲液 答案:B 2、下列哪项决定了PCR特异性与产量( ) A:变性温度 B:退火温度 C:延伸温度 D:循环次数 E:二价阳离子 答案:B 3、基因分型的传统方法是( )
病毒学检验
病毒的特点是：1、形体微小，能通过细菌滤器，用电子显微镜才能观察到。2、无细胞结构，其主要成分是核酸和蛋白质3、每种病毒只含有一种类型的核酸（RNA或DNA）4、因缺乏完整的酶系统和能源，故只能寄生于活细胞内，依靠宿主细胞的代谢系统合成蛋白质和核酸5、病毒以其基因为模板，在宿主细胞内复制出新的病毒颗粒6、为了在生物界保存其种属，病毒具备从一个宿主转移到另一个宿主的能力，并具有对敏感宿主的侵染性和复制性7、在宿主体外，能以大分子状态存在，并可长期保持其侵染能力8、有些病毒的核酸能整合到宿主细胞的基因组中，并能诱发潜伏感染 细胞培养技术：是对由组织分散成的单个细胞或某一型细胞群进行的体外培养方法，即模拟体内的生理环境条件，提供细胞适宜的营养条件和温度，在无菌操作的基础上，使离体组织细胞生长增殖并进行传代的技术 二、单层细胞培养： 用于培养病毒的细胞有原代细胞、传代细胞（二倍体细胞株和传代细胞系） 三、鸡胚的接种途径：1、羊膜腔接种2、绒毛尿囊膜接种3、尿囊腔接种4、卵黄囊接种 四、 间接计数在病毒检验过程中较为常用，是判定病毒感染性的定量方法，常用的有：空斑形成单位法，50%终点法，血凝试验和干扰测定 空斑形成单位（PFUs）试验：是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感染单位的浓度 凡事能在细胞培养物中产生CPE的病毒都可用空斑技术来测定其滴度。 50%终点法：是将病毒悬浮液经一系列稀释后，接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞，将每个稀释度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做曲线，找出造成50%动物、鸡胚死亡或病变的终点稀释度。 LD50：为造成50%动物或鸡胚死亡的病毒含量 ID50：即是指可造成50%动物或鸡胚感染的剂量 CCID50：造成50%细胞培养产生病变效应的剂量 五、病毒纯化的一般原则：1、释放病毒至细胞外2、去除细胞碎块3、病毒悬液浓缩 六、病毒的保存：1、用低温（-60~25℃）、超低温（-70以下）冰箱或液氮罐（-196~150）保存 2、冷冻干燥保存 七、血清学实验的方法很多，最常用的是中和试验、补体结合试验、红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验 中和试验：是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存的病毒感染力的一种方法。 中和抗体：凡是能与病毒结合，并使其失去感染力的抗体称为中和抗体 中和试验必须在敏感的动物体内（包括鸡胚）和细胞培养中进行
智慧树知到《病毒学检验》章节测试答案
智慧树知到《病毒学检验》章节测试答案绪论 1、用于测量病毒大小的单位是： A．μm B．nm C．pm D．fm E．am 答案: nm 第一章 1、PCR反应的引物需要2条。 A:对 B:错 答案: 对 2、甲型肝炎病毒归属于嗜肝DNA病毒科 A:对 B:错 答案: 错 3、病毒只含有一种核酸，DNA或RNA A:对 B:错 答案: 对
4、乙肝大三阳时，以下哪些项应为阳性 A:HBsAg B:HBeAg C:HBcAg D:抗HBc E:抗HBs 答案: HBsAg,HBeAg,抗HBc 第二章 1、可传播HIV的途径有 A:分娩 B:共用牙刷、剃须刀等 C:输血、血浆及血液制品 D:手术器械 E:皮肤接触 答案: 分娩,共用牙刷、剃须刀等,输血、血浆及血液制品,手术器械 2、狂犬病防治措施有 A:捕杀病犬加强家犬管理 B:人被咬伤后应及时处理伤口 C:动物咬伤后应及时接种狂犬病疫苗 D:及时足量注射丙种球蛋白 E:对可疑患者或严重咬伤者在作用疫苗前注射抗狂犬病病毒血清 答案: 捕杀病犬加强家犬管理,人被咬伤后应及时处理伤口,动物咬伤后应及时接种狂犬病疫苗,对可疑患者或严重咬伤者在作用疫苗前注射抗狂犬病病毒血清
第三章 1、DNA的Tm值大小与下列哪个因素有关A:温度的升高 B:酸碱度的改变 C:DNA的均一性 D:化学试剂 E:缓冲液 答案:B 2、下列哪项决定了PCR特异性与产量（）A:变性温度 B:退火温度 C:延伸温度 D:循环次数 E:二价阳离子 答案:B 3、基因分型的传统方法是（） A:反向杂交 B:质谱 C:基因芯片技术 D:焦磷酸测序技术 E:超深度焦磷酸测序 答案:A
临床检验基础知识点
血液样本采集和血涂片制备 1血液由红细胞，白细胞，血小板和血浆组成。 2离体后的血液自然凝固，分离出来的淡黄色透明液体称为血清 3血清与血浆的区别是血清缺少某些凝血因子 4血清适用于临床化学和临床免疫学检查 5正常人血量约为（70土10ml）/kg体重，成人4~5L，占体重的6%~8%，其中血浆占55%，血细胞占45% 6血液的红色来自红细胞内血红蛋白，动脉血氧合血红蛋白含量较高，呈鲜红色，静脉血还原血红蛋白含量高，呈暗红色 7严重一氧化碳中毒或氰化物中毒者血液呈樱红色 8正常人血液ph值的波动范围是7.35~7.45 9正常男性的血液比密为1.055~1.063，女性为1.051~1.060，相对黏度为4~5，血浆比密为1.025~1.030，血细胞比密为1.090。血液比密与红细胞含量，红细胞内血红蛋白含量有关。血浆比密和血浆内蛋白浓度有关 10血液具有红细胞的悬浮稳定性，粘滞性，凝固性这三种特性 11正常人的血浆黏度约为生理盐水黏度的1.6倍 12血液黏度与血细胞比容，血浆黏度有关 13血液生理功能包括：运输功能，协调功能，维护集体内环境稳定和防御功能14静脉血通常使用的采血部位是肘部静脉，手背静脉，内踝静脉，股静脉 15在静脉采血时为了避免血小板激活，常使用塑料注射器和硅化处理后的试管或者塑料管 16世界卫生组织（who）推荐采集左手无名指指端内侧血液，婴幼儿可采集拇趾或足跟内外侧缘血液，严重烧伤患者可选择皮肤完整处采血 17彩色真空定量采血用于葡萄糖，糖耐量测试，添加的抗凝剂是氟化钠 18彩色真空管定量采血用于血培养，应添加的抗凝剂是多聚茴香脑硫酸钠 19皮肤采血法的缺点是易于溶血，凝血，混入组织液，而且局部皮肤揉擦，针刺深度不一，个体皮肤厚度差异等都影响检查结果，所以，皮肤采血检查结果重复性差，准确性不好 20采血方法应在患者，采血，溶血，样本处理，实验结果分析等方面进行质量控制 21乙二胺四乙酸盐能与血液中钙离子结合成螯合物，使钙离子失去凝血作用，组织血液凝固 22 EDTA盐对血细胞形态，血小板计数影响很小，适用于血液学检查，尤其是血小板计数
临床医学检验高级职称题-病毒检验基本技术
临床医学检验高级职称题-病毒检验基本技术 1、不能用于人工增殖病毒的是（） A.鸡胚 B.传代细胞 C.原代细胞 D.人体器官 E.实验动物 2、以下破碎细胞让病毒释放出来的方法不属于物理方法的是（） A.研磨 B.冻融 C.超声波处理 D.中性去污剂裂解 E.高压冲击 3、关于病毒学检验中标本采集、处理与运送的原则是（） A.标本必须新鲜，采集后立即送检 B.用于分离和鉴定的标本应在急性期采集 C.在检验容器上要贴好标签 D.用于分离和鉴定的标本应在病程初期采集 E.以上都是
4、采集病人血液标本注意的事项是（） A.应在病人使用抗菌药物之前采集 B.同一份血液标本应同时作需氧和厌氧培养 C.厌氧培养有细菌生长，作生化反应亦应在厌氧环境中进行 D.对疑为波浪热等病人的血液标本应增菌培养到第4周 E.以上皆是 5、关于病毒学检验中标本采集、处理与运送错误的是（） A.诊断与病期不同采集的标本不同 B.要进行预处理才能用于接种 C.采集后立即送到病毒实验室 D.暂时不能检查或分离培养时，应将标本放入冻存液 E.暂时不能检查或分离培养时，应将标本存放在－20℃冰箱 6、病毒悬液的初步浓缩方法不包括（） A.红细胞吸附浓缩法 B.聚乙二醇浓缩法 C.干燥法 D.超过滤法 E.密度梯度离心法
7、在病人死后，用于分离病毒的尸体标本的采集时限是（） A.6小时内 B.8小时内 C.12小时内 D.24小时内 E.3天内 8、临床上常用下列细胞分离腮腺炎病毒（） A.BSC－1 B.Vero C.MDCK D.KB E.Hela 9、适合于登革病毒的分离和培养的细胞是（） A.C6／36 B.鸡胚 C.Vero D.Hela E.Hep－2 10、关于真菌，下列说法不正确的是（）
病毒学检验重点
病毒的特点： 1、形体微小，能通过细菌滤器，用电子显微镜才能观察到。 2、无细胞结构，其主要成分是核酸和蛋白质 3、每种病毒只含有一种类型的核酸（RNA或DNA） 4、因缺乏完整的酶系统和能源，故只能寄生于活细胞内，依靠宿主细胞的代谢系统合成蛋白质和核酸 5、病毒以其基因为模板，在宿主细胞内复制出新的病毒颗粒 6、为了在生物界保存其种属，病毒具备从一个宿主转移到另一个宿主的能力，并具有对敏感宿主的侵染性和复制性 7、在宿主体外，能以大分子状态存在，并可长期保持其侵染能力 8、有些病毒的核酸能整合到宿主细胞的基因组中，并能诱发潜伏感染 体外细胞培养的基本条件： 1、条件要求高，培养液组分复杂，需要添加血清才能满足生长需要 2、避免微生物污染，需要在培养液中加入抗生素。 3、体外细胞培养的基本要求主要包括细胞接种（尽量选择对数期细胞接种）、 4、培养液营养成分、 5、酸碱度（能耐受的ph范围为6.6-7.8，依靠缓冲系统调节）、 6、气体条件（细胞生长需要CO2 ，大规模培养需要有足够的氧气）、 7、温度（最适温度为35-37。C）、 8、水的纯度（一般要求去离子水或三蒸水）、 9、无菌条件等 实验动物的微生物控制分类： 1、普通动物，一级动物，要求不携带动物烈性传染病和人兽共患病病原 2、清洁动物，二级动物，在一级动物要求上，不携带对动物危害大、对实验干扰大的 病原体，外观健康，主要器官不得有组织病理学病变 3、无特定病原体动物，三级动物，除普通动物、清洁动物不得携带病原体外，还要求 排除潜在感染或条件致病菌的感染 4、无菌动物，四级动物，要求在体内外不得检出其它生命体 实验动物的遗传学分类 1、近交系，指经过连续20代以上全同胞或亲子交配培育的动物品系 2、封闭系，不从外界引入新的血缘，非近亲交配方式的实验动物群体 3、突变系，由于遗传基因发生突变而具有某些特殊形状的动物 4、杂交群动物，由不同品系杂交所产生的后代 5、转基因动物，插入外源基因后能正常繁殖的动物 大鼠、小鼠的采血方法 1、剪尾采血，动物麻醉后，将尾端剪去约5mm，待血液流出采集，小鼠可每次采血 0.1ml，大鼠约0.4ml 2、眼眶后静脉丛采血，拇指及食指抓住鼠两耳之间的皮肤固定，轻轻压迫颈部两侧， 使眼球充分外凸。采血管插入眼角与眼球之间，向眼底方向刺入，切开静脉丛，血流即流入取血管。
临床细菌学检验的质量控制流程
临床细菌学检验的质量控制流程 1、质量的概念和质量保证 影响检验结果质量的因素很多,实验过程中,仪器、试剂和操作等均会引起试验结果的误差,衡量检验结果的质量常用准确度和精确度,或特异性和灵敏度。具体采用哪一种指标应根据实验的性质决定,目前临床细菌学检验的工作内容大致有3类,衡量起质量的技术指标不完全相同。 第一类是检出细菌的实验,包括标本直接涂片检查和细菌分离培养。现代的细菌感染,混合菌较常见,一份标本中,会有2种以上细菌存在。无论标本直接涂片还是分离培养,检验结果必须如实反映感染病灶中细菌的真实情况。这类实验的质量,应该用细菌检出率或细菌分离率来衡量。 第二类是鉴定细菌的实验。通过一系列生理生化及形态学、血清学的手段来鉴定病原菌。对分离到的病原菌都做出准确的鉴定,是反映细菌事工作质量的一个重要方面。 第三类是药敏实验。有稀释法和纸片法,前者是半定量的实验,可以用准确度和精密度来衡量,后者以敏感或耐药的形式报告,
属于定性的实验,但实验过程中测量抑菌环是定量的指标。也应以准确度和精确度衡量。 所以实验室人员必须清楚认识到以上这一点,在实验室的设计和管理方面就应该主动设置误差检测系统,实验中一旦出现误差及时发出警报,查明原因及时纠正。 2、室内质量控制 2.1在职人员 2.1.1须受过细菌学检验的专门基础教育以及相关的生物交全防护知识,并以细菌检验为专业,及时终结并积累工作经验。 2.1.2作人员必须具有严谨的工作态度,技术操作须完全遵守操作规程,并直接参与质量控制工作。 2.1.3工作人员应不断加强自身的业务学习,及时了解本领域的新进展,将所掌握的新知识应用到实际工作中。 2.1.4实验室管理人员应注意利用一切机会培养技术人员,积极参加国际、国内学术会议、专业培训班,获取新信息。因为细菌学检验,投资人员培训远比投资与仪器设备更重要。 2.2操作手册及参考书
临床医学检验临床微生物-病毒检验基本技术(精选试题)
临床医学检验临床微生物-病毒检验基本技术 1、不能用于人工增殖病毒的是（） A.鸡胚 B.传代细胞 C.原代细胞 D.人体器官 E.实验动物 2、以下破碎细胞让病毒释放出来的方法不属于物理方法的是（） A.研磨 B.冻融 C.超声波处理 D.中性去污剂裂解 E.高压冲击 3、关于病毒学检验中标本采集、处理与运送的原则是（） A.标本必须新鲜，采集后立即送检 B.用于分离和鉴定的标本应在急性期采集 C.在检验容器上要贴好标签 D.用于分离和鉴定的标本应在病程初期采集 E.以上都是
4、采集病人血液标本注意的事项是（） A.应在病人使用抗菌药物之前采集 B.同一份血液标本应同时作需氧和厌氧培养 C.厌氧培养有细菌生长，作生化反应亦应在厌氧环境中进行 D.对疑为波浪热等病人的血液标本应增菌培养到第4周 E.以上皆是 5、关于病毒学检验中标本采集、处理与运送错误的是（） A.诊断与病期不同采集的标本不同 B.要进行预处理才能用于接种 C.采集后立即送到病毒实验室 D.暂时不能检查或分离培养时，应将标本放入冻存液 E.暂时不能检查或分离培养时，应将标本存放在－20℃冰箱 6、病毒悬液的初步浓缩方法不包括（） A.红细胞吸附浓缩法 B.聚乙二醇浓缩法 C.干燥法 D.超过滤法 E.密度梯度离心法
7、在病人死后，用于分离病毒的尸体标本的采集时限是（） A.6小时内 B.8小时内 C.12小时内 D.24小时内 E.3天内 8、临床上常用下列细胞分离腮腺炎病毒（） A.BSC－1 B.Vero C.MDCK D.KB E.Hela 9、适合于登革病毒的分离和培养的细胞是（） A.C6／36 B.鸡胚 C.Vero D.Hela E.Hep－2 10、关于真菌，下列说法不正确的是（）
HIV病毒学检测及质量保证指南
HIV病毒学检测及质量保证指南编写人员：潘品良蒋岩李敬云钟平尚红李太生 审核咨询专家及技术人员：邵一鸣康来仪朱效科王佑春汪宁朱红郭志宏季阳刘海林肖瑶邱茂锋马春涛 编写单位：中国疾病预防操纵中心性病艾滋病预防操纵中心参编单位：中国人民解放军军事医学科学院 上海市疾病预防操纵中心 中国医科大学 北京协和医院 技术顾咨询：Mike Ussery, Hao Zhang 美国国立卫生研究院过敏及传染病研究所 James W. Bremer 美国Rush 大学医学中心VQA实验室 Trever Peter 克林顿基金中国艾滋病防治项目实验室专家 Donald J. Brambilla 美国华盛顿大学新英格兰研究所 Francis F. Mandy 加拿大公共卫生局疾病预防操纵中心国家免疫学实验室
前言 随着HIV-1病毒载量检测在艾滋病临床辅助诊断和抗病毒治疗监测以 及艾滋病科研工作中的广泛应用，我国开展该项检测工作的实验室日益增多。自1997年艾滋病实验室首次引进HIV-1病毒载量检测技术，截至200 7年底，全国差不多配备了近120台HIV-1病毒载量检测仪，覆盖了疾控、医院、检疫、军队等系统。目前，尽管许多实验室差不多将病毒载量检测纳入艾滋病有关辅助诊断和治疗监测工作，但大多数实验室开展工作的时刻较短，体会不足，因此，急需加大该领域的培训和质量操纵工作，以保证检测结果的准确性和可靠性。 为了加大质控和保证检测质量，并得到国际上的认可，艾滋病参比实验室2004年开始参加美国NIH组织的HIV-1病毒载量检测能力验证工作。在通过考核和积存体会的基础上，2005年启动了国内HIV-1病毒载量检测能力验证工作。在主动组织实验室能力验证的同时，艾滋病参比实验室也对实验室技术人员进行培训，主动开展室内质控。这些工作对提升HIV-1病毒载量的检测技术，保证质量起到了重要作用。为了进一步规范艾滋病实验室HIV-1病毒载量检测，建立标准化质量操纵程序，准确开展各项检测及质量操纵工作，特制定本指南。 本指南是按照各种HIV-1病毒载量检测方法的技术要求，结合现行的国内外有关技术规范而制定。本指南针对HIV-1病毒载量检测的实验室设置、样品治理、检测技术、质量操纵、生物安全等方面提出指导。 本指南自2006年初正式开始编写，性病艾滋病预防操纵中心多次组织了有国内外专家参加的指南编写专项技术咨询会，与会专家对指南提出了专门多建设性意见和建议，美国NIH病毒载量检测质量保证实验室专家多次对指南进行认确实批阅和具体指导。指南编写过程中，也认真听取了实验室一线检测人员的具体需求和建议，并补充了大量的实验数据，包括HI V-1病毒载量检测值的稳固性、冻融阻碍实验与不同检测方法之间比较的实
临床医学检验基础知识名词解释
临床医学检验基础知识名词解释 1.中毒颗粒 在严重感染时中性粒细胞内出现的染成紫黑色的粗大颗粒。 2.亚铁血红素 血红蛋白色素部分，由铁原子及原卟啉区组成。 3.点彩红细胞 红细胞中残存的嗜碱性物质，是RNA变性沉淀的结果。 4.中性粒细胞核左移 外周血中性杆状核粒细胞增多（出现晚、中、早幼粒细胞以致原粒细胞）。 5.血型 是人体血液的一种遗传性状，是指红细胞抗原的差异。 6.ABO血型抗体 一般分为二类；“天然”抗体和免疫抗体，都是通过免疫产生的。 7.病理性蛋白尿 蛋白尿持续超过0.15g/d，常为病理性，是肾脏疾病的可靠指标。 8.肾小管蛋白尿 系肾小球滤过膜正常，但原尿中正常滤过的蛋白质不能被肾小管充分回吸收所致。9.本周氏蛋白 是免疫球蛋白的轻链单体或二聚体，属于不完全抗体球蛋白。常出现干骨髓瘤患者尿中，有诊断意义。 10.网织红细胞 是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞。
11.瑞氏染液 是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。 12.异型淋巴细胞 在某些病毒性感染或过敏原刺激下使淋巴细胞增生，并出现一定的形态变化称为异型淋巴细胞。 13.退行性变白细胞 白细胞出现胞体肿大、结构模糊、边缘不清、核固缩、肿胀或溶解等变化。 14.核右移 外周血中性粒细胞五叶核以上者超过3％称为核右移。 15.红斑狼疮细胞 SLE患者血液（体液中）存在LE因子，在体外可使受累白细胞核DNA解聚，形成游离均匀体，被具有吞噬能力的白细胞所吞噬而形成。 16.内源性凝血系统 指凝血始动反应因子Ⅻ的激活[Ⅸa-PF3-Ⅷ-Ca]复合物的形成以及激活因子Ⅹ。 17.外源性凝血系统 指Ⅶ因子激活及因子Ⅲ以组织损伤后所释放出的组织凝血活酶起动外源性凝血途径为特点。 18.血凝的固相激活 指Ⅻ因子接触到一种带电荷的表面，即被激活为Ⅻa的过程（简意：即Ⅻa激活过程）。 19.血凝的液相激活 指激肽释放酶原转变为激肽释放酶后迅速激活Ⅻa这一反馈作用又称酶激活。 20.Rh血型 红细胞上含有与恒河猴红细胞相同的抗原为Rh血型。
病毒学检验教学大纲
病毒学检验教学大纲 《病毒学检验》教学大纲 课程编码:10272045 课程名称:病毒学检验 英文名称:virology test 开课学期:8 学时/学分:40/2.5 (其中实验学时:20) 课程类型:专业课 开课专业:卫生检验专业方向 选用教材:《病毒学检验》华西医科大学公共卫生学院自编主要参考书: 1、殷震，刘景华主编:《动物病毒学》，科学出版社，1997年版 2、熊菊贞等著:《诊断病毒学》，科学出版社，1987年版 3、黄祯祥主编:《医学病毒学基础及实验技术》，科学出版社，1990年版 4、纳塔莉 J.施密特;理查德 W.埃蒙斯主编，顾方舟等译:《病毒、立克次体及衣原体疾病诊断技术》，北京医科大学中国协和医科大学联合出版社(第六版)，1993年版 5、张卓然主编:《培养细胞学与细胞培养技术》，上海科学出版社，2004年版 6、杜平等主编: 《分子病毒学原理与实验技术》，第二军医大学出版社，2002年版 7、杨占秋主编:《诊断与实验病毒学》，郑州大学出版社，2002年版 8、周先志，赵敏主编:《艾滋病诊疗新技术》，人民军医出版社，2005年版执笔人:甄清 一、课程性质、目的与任务
《病毒学检验》是微生物学检验的一个分支，是卫生检验专业必修课程。通过对病毒学检验技术的理论和实验教学，使学生掌握病毒学检验技术的基本原理、方法和操作技能，并能综合运用这些知识和技能解决病毒性疾病的诊断、预防和监测问题。 二、教学基本要求 1. 系统掌握病毒学检验技术的基本原理、方法。 2. 了解对人群健康危害较大的各种病毒的检测方法。 3. 注重培养学生综合性思维能力，结合当前发生的一些病毒性疾病流行案例进行理论和实践教学，培养学生综合分析问题和解决问题的能力。在完成本门课程学习后，使学生能够主动发现问题并能够积极探索解决问题的方案。 三、各章节内容及学时分配 第一篇病毒学检验总论(12学时) 教学目的与要求 通过该篇内容学习，使同学们认识到病毒学检验在疾病的诊断、预防与控制方面的重要地位，掌握病毒学检验的基本技术、原理和方法，了解病毒学检验方法的研究进展。 第一章病毒学检验概述(1学时) 教学目的与要求 通过本章学习了解病毒学检验的用途和内容，掌握病毒实验室常用的消毒处理方法和基本要求。 教学内容 一、病毒学检验概要 (一)病毒学在医学领域中的重要地位 (二)病毒学检验概况
分子生物学检验技术
1、分子生物学检验技术：是以核酸或蛋白质为分析材料，通过分析基因的结构、表达的变化和由此而导致的基因功能的改变，为疾病的研究和诊断提供更准确、更科学的信息和依据的一门学科。 2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中的应用。（1）感染性微生物的检测。如：用PCR技术进行甲型肝炎病毒的检测、乙型肝炎病毒的检测和解脲脲原体的检测等。（2）基因突变的检测。如：用PCR一限制性片段长度多态性（RFLP)技术检测地中海贫血基因突变。 （3）法医学检测。如：用PCR微卫星检测技术进行亲子关系的鉴定和个体识别。 （4）基因异常表达的检测。如：用cDNA表达的芯片技术进行基因异常表达的检测。 （5）基因定位。如：用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达的定位。 3、基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。 4、基因：是基因组中一个功能单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。 5、原核生物：是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称，是最简单的细胞生物体。
6、操纵子结构：是原核生物基因组的功能单位。 7、质粒：是指细菌细胞染色体外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子。 8、转座因子：又称为转座元件，是一类在细菌染色体、质粒和噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列。 9、原核生物基因组的结构特征： （1）原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成，基因组中只有一个复制起点，具有类核结构。 （2）具有操纵子结构，模板mRNA为多顺反子mRNA。编码区远远大于真核生物基因组，但又远远小于病毒基因组。在基因组中存在多功能的识别区域，如复制起始区、转录启动区和终止区等，这些区域常常含有反向重复序列。 （3）结构基因通常为单拷贝基因，编码顺序一般不重叠。（4）具有编码同工酶的基因。 （5)含有可移动的DNA序列。 10、病毒基因组的结构特点： （1）与细菌和真核生物基因组相比，病毒基因组结构简单，基因数少，所含信息量也少。 （2）病毒基因组的核酸类型较多，有双链DNA、单链DNA、双链RNA和单链RNA；有环状分子，也有线性分子。但无论是哪种核酸类型，一种病毒颗粒中核酸成分只能为一种，或
人腺病毒分子生物学常用检测技术
Advances in Microbiology 微生物前沿, 2017, 6(2), 11-16 Published Online June 2017 in Hans. https://www.360docs.net/doc/b015568447.html,/journal/amb https://https://www.360docs.net/doc/b015568447.html,/10.12677/amb.2017.62002 The Molecular Biological Techniques for Human Adenovirus Detection Ye Li1,2, Tuo Dong1,2, Vladimir I. Zlobin3, Oleg Reva4, Zhangyi Qu1,2* 1Department of Microbiology, School of Public Health, Harbin Medical University, Harbin Heilongjiang 2Department of Natural-Foci Diseases, Institute of Environment-Associated Diseases, Sino-Russia Joint Medical Research Centre, Harbin Heilongjiang 3Research Institute for Biomedical Technologies, Irkutsk State Medical University, Irkutsk, Russia 4Department of Biochemistry, Bioinformatics and Computational Biology Unit, University of Pretoria, Pretoria, South Africa Received: May 12th, 2017; accepted: May 30th, 2017; published: Jun. 2nd, 2017 Abstract Adenovirus is one of the major viruses causing human respiratory diseases. The effective and rapid method in adenovirus detection is helpful to strengthen the surveillance of adenovirus in-fection, to investigate the epidemic trends timely, and to control the virus infection. The current molecular biological methods for adenovirus detection both used in laboratory and clinical are reviewed in this paper. The principle, characteristics and application of these techniques are commented. Keywords Adenovirus, PCR, Molecular Biological Detection 人腺病毒分子生物学常用检测技术 李烨1,2，董妥1,2，Vladimir I. Zlobin3，Oleg Reva4，曲章义1,2* 1哈尔滨医科大学，公共卫生学院，卫生微生物学教研室，黑龙江哈尔滨 2中俄医学研究中心，环境相关疾病研究所，自然疫源性疾病研究室，黑龙江哈尔滨 3俄罗斯伊尔库茨克国立医科大学，生物医学技术研究所，伊尔库茨克，俄罗斯 4南非比勒陀利亚大学，生物信息学与计算生物学部，生物化学系，比勒陀利亚，南非 收稿日期：2017年5月12日；录用日期：2017年5月30日；发布日期：2017年6月2日 *通讯作者。 文章引用: 李烨, 董妥, Vladimir I. Zlobin, Oleg Reva, 曲章义. 人腺病毒分子生物学常用检测技术[J]. 微生物前沿,2017,
病毒学检验知识点
●病毒学检验的特点 ●病毒学检验的内容和应用范围 ●新发传染病病毒检测的特点 ●选择用于病毒培养的细胞遵循的原则 ●常见细胞污染的来源，种类及防控措施
●细胞培养技术在病毒学检验中的应用 第二章 ●鸡胚接种途径，以新城疫病毒接种为例，请说明接种方法好过程 ●血凝和血凝抑制试验的原理，如何判断结果 ●动物实验遵循的原则 ●鸡胚和动物实验的主要用途 ●实验动物按微生物控制分类的目的，如何分类 第五章 ●电子显微镜技术在病毒鉴定方面的优势 快速负染技术 简单，负染技术操作简单。 准确:电镜检测的结果主要是发现病毒颗粒的存在是证明病毒存在的最直接证据，对具有明显形态特征的病毒即刻可做出准确的判断。 具有同时检测多种病原的潜力，依赖于已知的核酸序列抗原或抗体信息。 ●对病毒进行检测的常规电子显微镜技术 负染技术，超薄切片制样技术，免疫电子显微镜技术 ●负染样本制作过程病毒灭活的方法
负染色是一种反衬染色，通过重金属盐溶液染色，增加标本外围密度，在生物标本的外围形成均质的电子不透明环境，而电子能够通过主要由碳，氢氧氮等元素组成的密度较低的生物样本。形成电子透亮的白色，而时生物标本，显示出负的（较透明的）反差，成像后的效果 为在黑色背景下低密度的标本（病毒颗粒）呈现白色透亮状态，从而形成负染色成像。 优点。大大提高了标本的反差和分辨力，既能够清晰显示出病毒的超微结构。简便易行，不要求高纯度的标本制备技术技通常不需要对样本进行纯化，有杂质也不会影响对病毒形态8的辨别。染色技术本身不改变生物样本的活性剂，不因染色造成病毒形态的改变。 第六章 ●流感病毒和腺病毒的核酸检测方法的异同 ●鼻咽拭子是呼吸道病毒检测常用的标本，采集此类标本是注意事项。除鼻咽拭子之外， 呼吸道病毒感染检测还可以采集哪些标本 ●举例说明常见呼吸道感染病毒分离培养时使用的敏感细胞系 ●肠道病毒和引起肠胃炎的腹泻病毒通常包括哪些，其病毒学地位分别是什么，其基因组 特征分别是什么？ ●肠道病毒和腹泻病毒的区别是什么？ 肠道病毒EV是小RNA病毒科肠道病毒属，包括脊髓灰质炎病毒，柯萨奇病毒，埃可病毒，新型肠道病毒。可感染人或动物，在宿主消化道中复制增殖，表现为隐性感染腹泻病毒包括轮状病毒，诺如病毒，札如病毒，星状病毒，肠道腺病毒，可引起急性肠