表皮生长因子受体抑制剂耐药研究进展
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ｄｏｉ：１０．３％９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－０９０４．２００９．０１．０２８表皮生长因子受体抑制剂耐药研究进展
陈萍，李慧艳综述，侯梅△审校
（四川大学华西医院肿瘤中心，成都６１００４１）
【关键词】ＥＧＦＲ抑制剂；耐药
【中图分类号】Ｒ７３０．５［文献标识码】Ａ［文章编号】１６７４－０９０＃（２００９）ｏｉ—００８１—０３
ＥＧＦＲ（表皮生长因子受体）抑制剂现已在临床中广泛使用，不论是单用还是与化疗药物联合使用都表现出了较强的作用，延长了患者的生存时间，改善了患者的生存质量，但由于最终几乎所有的患者都会产生耐药，限制了其长期疗效。因此，对其耐药机制的研究对于阐明耐药机理、克服耐药以及研发新的抗肿瘤药物都具有非常重要的意义。ＥＧＦＲ抑制剂耐药的机制主要包括以下几个方面：酪氨酸受体高表达，下游效应蛋白活化；非依赖于ＥＧＦＲ的血管生成增加；下游区介质活化，信号途径激活以及ＥＧＦＲ激酶区域特异性继发突变。现就ＥＧＦＲ抑制
对ＥＦＧＲ抑制剂的获得性耐药与ＩＧＦ一１Ｒ受体增加有关【１Ｊ。一项研究得出结论，使用ＥＦＧＲ抑制剂时，可以诱导ＥＧＦＲ：ＩＧＦ—ｌＲ异二聚体形成，ＩＧＦ－ＩＲ及其下游的信号调节物活化，细胞凋亡减少，导致肿瘤细胞对ＥＧＦＲ耐药，而抑制ＩＧＦ—ｌＲ受体表达可以预防或延缓对ＥＧＦＲ的耐药…２。另一项研究用人转化生长因子．ａｃＤＮＡ（一种ＥＧＦＲ的配体）转染结肠癌细胞，结果显示转化生长因子．Ｏｔ的组成型表达以及它之后的ＥＧＦＲ激活，可导致下游的细胞分裂素活化蛋白激酶丢失及Ａｋｔ的激活，这又使得减少增殖、增加凋亡的异种移植物减少【３Ｊ。
剂耐药机制研究进展综述如下：
１酪氨酸受体高表达，下游效应蛋白活化
２非依赖于ＥＧＦＲ的血管生成增加
细胞内存在许多转导增殖刺激的酪氨酸激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ，ＴＫ）受体，包括ＥＧＦＲ、胰岛素样生长因子ｌ受体（ＩＧＦ一１Ｒ：ｉｎｓｕｌｉｎ—ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－Ｉｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ＶＥＧＦＲ、血小板衍生生长因子受体（ＰＤＧ－ＦＲ）以及肝细胞生长因子受体（ｃ．ＭＥＴ）。其中，ＩＧＦ—ｌＲ途径是相当重要的一条途径。
人ＩＧＦ．ＩＲ是一种跨膜的酪氨酸蛋白受体，对细胞的分裂分化和增殖具有重要的调控作用。ＩＧＦ－１Ｒ与其配体结合通过启动２条信号传递链：Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ和Ｐ１３Ｋ／ＰＫＢ／ＡＫＴ，促进有丝分裂及细胞生长。促分裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰ激酶）途径，在导致细胞增殖的信号传导方面至关重要，且常被成倍增加的致癌性因子（ｒａｓ、ｒａｆ、ｍｏｓ等）所激活。ＩＧＦ—ＩＲ诱导肿瘤生长的另～个机制是Ｐ１３激酶途径。另外，ＩＧＦ－ｌＲ受体途径还与其他生长因子相互作用，相互影响。
［收稿日期】２００８—０８—２０；［修回日期】２００８—０９—２４［作者简介】陈萍（１９８４一），女，四川遂宁人。在读硕士，研究方向为肿瘤多药耐药及其逆转。
【通讯作者】△侯梅，教授，Ｅ—ｍ蚰：ｈｏｔｍａｌｌ８＠咖．ＣＯｉｎ
人体大部分肿瘤的生长和转移都依赖于病理条件下的血管生成（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ），肿瘤血管生成有别于生理条件下严格受控的血管形成过程（Ｖａｓｃｕｌｏ－ｇｅｎｅｓｉｓ）。血管生成在肿瘤的发生、发展和转移中都起着非常重要的作用，因此可以通过抑制血管生成来达到控制肿瘤的目的。
调节血管生成的最主要的生长因子是血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦ－ＧＦ）。而ＥＧＦＲ能调控多种血管生成因子，包括ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ【４１。ＥＧＦＲ抑制剂能够通过抑制ＥＧＦＲ活化从而下调肿瘤诱导ＶＥＧＦ介导的血管生成。但肿瘤细胞具有较大的易变性，并且肿瘤细胞分泌的促血管生成因子不止一种，采用抗ＶＥＧＦ处理后，可能诱导肿瘤细胞发生突变，分泌其它血管因子替代ＶＥＧＦ诱导内皮细胞生成血管，导致肿瘤耐药性的产生。Ｖｉｌｏｒｉａ．Ｐｅｔｉｔ等在动物体内培育出耐ＥＧＦＲ抑制剂的细胞株，体外分离培养后，耐药株对ＥＧＦＲ抑制剂非常敏感，而将耐药株注人动物体内却显示出较强的耐药性，他们的研究也提示了血管生成调控的改变可能会诱导肿瘤对ＥＧＦＲ抑制剂产生耐药【５｜。
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３下游区介质活化．信号途径激活
３磷酸肌醇激酶（Ｐ１３Ｋ）家族成员属于原癌基因，其与Ａｋｔ（蛋白激酶Ｂ，ＰＫＢ）组成的Ｐ１３Ｋ－Ａｋｔ信号通路在细胞的增殖和存活中起着重要的作用。Ｐ１３Ｋ激活可导致Ａｋｔ的完全活化。激活的Ａｋｔ再通过磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白，在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的作用。
Ｐ１３Ｋ组成性活化在ＥＧＦＲ耐药的发展和维持中起到关键作用。Ｐ１３Ｋ组成性活化的原因有：基因扩增、下游效应蛋白过度表达（如Ａｋｔ蛋白）。以及ＺｒＥＮ（一种能抑制Ｐ１３Ｋ通路的磷脂酶）丢失或失活。Ｋｏｋｕｂｏ等的研究显示：ＥＧＦＲ抑制剂耐药的亚组人群的Ａｋｔ磷酸化表达增加（不被ＥＧＦＲ抑制剂抑制），ＰＴＥＮ蛋白表达减少。这些数据提示：在耐药的肿瘤细胞中，Ａｋｔ磷酸化表达可能增加，而ＰＴＥＮ的再引入或Ｐ１３Ｋ－Ａｋｔ一途径激活的药理学下调可以作为治疗耐药的一种方案【６］。Ｑｉｎ等报道Ｒａｓ和Ｓｒｃ活化可以通过激活Ａｋｔ和／或Ｅｒｋ信号途径而导致对ＥＦＧＲ抑制剂耐药【７Ｊ。
丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）系统作为调控细胞信号的主要途径之一，控制着细胞的增殖、分化、凋亡等过程，其某个环节发生问题可引起细胞生长失控，肿瘤发生。ＭＡＰＫ属于丝／苏氨酸蛋白激酶，可被多种刺激（生长因子、神经递质、激素、细胞应激、细胞因子等）活化。目前，已在哺乳动物细胞中发现了多条ＭＡＰＫ信号转导通路，而经典的细胞外信号调节蛋白激酶（ＥＲＫＩ／２）通路则是目前研究得最清楚的通路。ＭＡＰＫ活化后，磷酸化其下游底物一转录因子、蛋白激酶、酶、结构蛋白等，以此调控细胞的生长、增殖、分化、凋亡和黏附、迁移等过程，继而影响肿瘤的发生、侵袭、转移以及耐药。持续激活的ＥＲＫ通路可促进正常细胞向肿瘤表型转化，而抑制ＥＲＫ信号转导通路，在体外能使肿瘤细胞恢复到非转化的表型，体内则能抑制肿瘤的生长。肿瘤细胞保持高的Ｅｒｋ活性可以代表对ＥＧＦＲ抑制剂耐药【８Ｊ。在乳腺癌中，ＥＫ／ＭＡＰＫ途径的激活在对ＥＧＦＲ抑制剂的耐药中起重要作用【９｜。
细胞周期的运行主要依赖于细胞周期依赖性激酶，该酶只有与细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）结合才有活性，促进细胞周期中Ｇ１－＋Ｓ和％－＋Ｍ的转变。细胞周期蛋白在细胞周期中起着重要的调控作用，在Ｇｌ期起作用的主要是ｃｙｃｌｉｎＤ。ｅｙｃｌｉｎＤ可分为３个亚型，分别称为ｃｙｃｌｉｎＤｌ、Ｉ）２、Ｄ３，其中人类最重要的是ｃｙｃｌｉｎＤｌｏ
ｃｙｃｌｉｎＤｌ在Ｇ，期调控中有重要作用。首先，若ｃｙｃｌｉｎＤｌ的表达或功能受到抑制会阻碍细胞进入ｓ期，表明它对终止Ｇ１期是必要的。其次，ｅｙｃｌｉｎＤｌ的表达水平控制成纤维细胞和上皮细胞通过Ｇｌ期的速度，过度表达可使Ｇｌ期缩短，细胞变小，并丧失了对外源性增殖分裂信号的依赖。有一项研究得出结论，Ｃｏｒｔａｃｔｉｎ（肌动蛋白的关键调节物）单独或是与细胞周期蛋白Ｄｌ上调一起的过表达，都可以增加对ＥＧＦＲ抑制剂的耐药【ｌｏ】。另外，相对于野生型ＥＧＦＲ，在ＥＧＦＲ突变肺癌细胞中，除了Ｔ７９０Ｍ突变外，细胞周期蛋白Ｄ１的表达也要高一些，这也说明，细胞周期蛋白Ｄｌ与ＥＧＦＲ诱导的肿瘤发生的出现有关【１１Ｊ。
４ＥＧＦＲ激酶区域特异性继发突变
相当多对ＥＧＦＲ抑制剂耐药的患者都发现了ＥＧＦＲ突变，包括ＥＧＦＲ突变体ＩＩＩ，Ｌ８５８Ｒ突变（原在第８５８位处的亮氨酸变为精氨酸，ＣＴＧ叶ＣＧＧ；Ｌ８５８Ｒ），Ｋ?１＂／１８突变和，１７９０Ｍ突变（酪氨酸激酶活化域７９０位苏氨酸变为蛋氨酸（甲硫氨酸））。
一项纳入３３例研究对象的临床试验发现，ＥＧＦＲｖＩＩＩ（ＥＧＦＲ突变体ⅡＩ）在头颈鳞癌中表达，与增加肿瘤生长及对靶向野生型ＥＧＦＲ耐药有关，通过抑制ＥＣＦＲｖＩＩＩ可以提高ＥＧＦＲ靶向治疗肿瘤的效果，该受体胞外区第２到７外显子之间存在一个框架缺失，突变的受体无法与配体结合从而导致ＥＣ，－ＦＲ胞内组成性活化【１２Ｊ。
Ｋｏｓａｋａ等测定了１４例获得性ＥＧＦＲ抑制剂耐药的肺腺癌患者ＥＧＦＲ基因的１８到２１外显子序列，结果发现７例有继发性Ｔ７９０Ｍ突变，这也是继发性突变中最常见的一种Ｌ”ｊ。Ｋｏｂａｙａｓｈｉ报道了一例７９岁的进展期ＮＳＣＬＣ病人，先是对ＥＣＦＲ抑制剂敏感，２年后复发，ＤＮＡ测序提示ＥＧＦＲ７９０位点的Ｔ７９０Ｍ突变【１４］。而Ｕｒａｍｏｔｏ报道复发肿瘤活检标本的ＥＧＦＲ基因的ＤＮＡ序列测定则显示了治疗之前没有检测到的Ｔ７９０Ｍ突变【１５Ｊ。因此更加证实了Ｔ７９０Ｍ突变可以导致肿瘤对ＥＧＦＲ抑制剂耐药，也提示可以通过检测Ｔ７９０Ｍ阳性等位基因来预测ＥＧＦＲ抑制剂治疗ＮＳＣＬＣ的临床过程。同时有报道认为ＥＧＦＲ７６６位苏氨酸被甲硫氨酸所替代也可减少对ＥＣＦＲ抑制剂的敏感性。
此外，Ｋ?ｒａｇ突变也预示着对ＥＧＦＲ抑制剂反应不敏感。美国一项研究比较了ＥＧＦＲ突变、ＥＧＦＲ
拷贝数增加、以及Ｋ．ｍ突变对ＥＣＦＩｔ抑制剂反应的影响，结果显示后者与疾病进展和更短的进展中位时间有关，Ｋ．ｒａ￥突变可以作为用ＥＧＦ＇Ｉｔ抑制剂治疗ＮＳＣＬＣ时预测其敏感性的指标之一【１６Ｊ。ＨＥＲｌ（ＥＧＦＲ）基因突变还可激活其下游区域的转导途径如ＮＥＫｌ／ＮＥＫ２等，这也是影响ＥＦＧＲ抑制剂效果的关键因素。
某些肿瘤细胞在ＥＧＦＩｔ抑制剂作用下仍能保持ＡＫＴ和ＥＲＫ信号转导，这可能预示着一种潜在的机制，这种机制使肿瘤细胞能不受药物的抗增殖作用的影响。另外，一些实验认为，在ＲＰＣ－９细胞中，只有一个１５．ｂｐ缺失的ＥＣＦＲ（ＰＣ－９）转染能逆转对ＥＧＦＲ抑制剂的耐药【１７Ｊ；Ｐ１３Ｋ抑制剂ＰＸ－８６６，在增加对ＥＧＦＩｔ抑制剂的敏感性方面可能有临床作用Ｌ１８Ｊ。还在临床试验中的Ｅ（；ＦＲ抑制剂ＥＫＢ－５６９和ＣＩ．１０３３，能有效地抑制导致吉非替尼和厄洛替尼耐药的ＥＧＦＲ继发突变（１，８５８Ｒ／Ｔ７９０１●Ｉ），提示它们可以考虑用来治疗对第一代靶向治疗耐药的肿瘤【１９】，这也提示我们可以对新发现的耐药突变体通过筛选现有的临床复合物来作为新一代药物开发的起点。此外，一个以细胞为基础的，体外的随机诱变试验最后得出结论，ＥＣＦＲ抑制剂和周期素依赖性蛋白激酶４抑制剂都可以显著抑制耐药突变的细胞生长【２０］，这也为克服或预防耐药的发展提供了一种策略。当然这些逆转靶向治疗的药物用于临床还需要更多的理论支持和临床研究证实。
５结语与展望
肿瘤的分子靶向治疗是近年随着基础研究进展而发展起来的一种全新的治疗领域，相对于传统化疗具有更大的优势，已经成为晚期ＮＳＣＬＣ的一种有效的治疗措施，但长期使用后的耐药现象成为限制其应用的主要障碍。迄今为止，尚无一种理论能够完满地解释ＥＧＦＲ抑制剂耐药性的成因，有关ＥＣＴ－ＦＲ耐药性的研究今后仍将是肿瘤研究领域的一个热点。在以后的研究中进一步明确其具体的耐药机制，开发下一代酪氨酸激酶抑制剂，联合应用多种药物克服耐药将是研究的重点。
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表２两组患者麻醉效果比较
ｆ２０．５４
３讨论
表３两组患者停药睁眼时间，定向力恢复时间．丙泊酚总用量比较
组别停药睁眼时间（ｍｉｎ）定向力恢复时间（ｍｉｎ）丙泊酚总用量（ｍｇ）ＰＦ组（ｎ＝５０）７．４４．０５０８．２４．０７７７０．２０．４７３
ＰＳ组（ｎ＝５０）７．０４．０８１｝７．８８．１０８宰７０．６０１４９０幸Ｐ值０．００４０．０５８０．８６０
幸：与ＰＦ组比较，Ｐ＜０．０５
结肠镜检查是一种侵人性有创性检查，无痛结肠镜检查能消除患者的恐惧感使其愿意接受检查，有助于结肠疾病的诊断。
静脉麻醉药丙泊酚具有良好镇静、记忆缺失的作用，但其镇痛作用弱，临床常复合芬太尼以增强镇痛效果，减少丙泊酚用量，从而减少其对呼吸循环的影响。舒芬太尼是新一代阿片类麻醉镇痛药，其镇痛作用强，约为芬太尼的５倍一１０倍，起效时间短、安全范围广，对呼吸循环系统的影响显著低于芬太尼【１，２Ｉ，而且舒芬太尼分布容积小，消除半衰期短和清除率高，其作用持续时间和苏醒时间均短于芬太尼，反复用药很少有蓄积作用【３，４Ｉ，非常适用于门诊手术或检查【５Ｊ５。本文按ｌ：１０等效价剂量用舒芬太尼替代芬太尼复合丙泊酚进行结肠镜检查，发现舒芬太尼与芬太尼麻醉效果相似，但舒芬太尼停药睁眼时间比芬太尼短，其苏醒更快，更优越，很适用于无痛结肠镜检查。
本文发现舒芬太尼与芬太尼对循环系统的影响相似。两组患者用药后心率、收缩压、舒张压虽有不同程度的降低，但在用药后７分钟均显著上升，说明药物对患者循环系统的影响渐趋减弱。心率减慢可能与机械刺激兴奋迷走神经有关。血压降低一方面可能与患者术前禁食和肠道准备导致其血容量不足有关，另一方面可能与麻醉药物丙泊酚使患者周围血管阻力降低从而导致其有效循环血容量减少有关。因此建议无痛结肠镜检查在用药前先给患者适当补充液体对维持患者循环稳定更有益。
舒芬太尼、芬太尼、丙泊酚均存在呼吸抑制问题，其程度与年龄、剂量和注药速度有关，我们采用舒芬太尼Ｏ．１嵋／ｋｇ或芬太尼ｌ斗ｇ／ｋｇ与丙泊酚静脉复合用药，严格控制注药速度，及时给氧，在整个观察过程中并未发生低氧血症。
舒芬太尼复合丙泊酚用于无痛结肠镜检查，麻醉效果优且不良反应少，舒适性好。利于结肠镜的检查。
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（上接第８３页）
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鲫ｔｉＩＩｉｂｉｎ－１１０１１ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇＣＪＪＩｃｅｒｃｅｌｌｌｉ∞［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅ－ｓｅａｒｃｈ，２００７。６７（１６）：７８０７?７８１４．
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ＣＤＪＩＣＣＩ＂ｘａｎｏｓｍｆｕ，［Ｊ】．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ。２００５，４（９）：１３４９．１３５７．【１９］ＣａｒｔｅｒＴＡ，ＷｏｄｉｃｋａＬＭ．ＳｈａｈＮＰ，ｅｔ１１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ０ｆｄｒｕｇ－ｍ－ｓｉｓｔａｎｔｍｕｔａｎｔｓｄＡＢＬ．ＫＩＴ，ａｎｄＥＧＦ∞ｃ印ｔｏｒｋｉｍｍｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｏ－∞ｅｄｉｎ伊０ｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃＭｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ０ｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ．２００５．１０２（３１）：１１０１１－１１０１６．
［加］ＹｕＺ，ＢｏｓｕｎＴＪ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＳ。ｅｌｅ１．Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏａｎｉｒｒｃｖ啪ｉ．ｂｈｅ＃ｄｅｎｍｌ乎们ｒＩＩｌｆａｃｔｏｒｎｃ叩ｔｏｒ（ＥＧＦＲ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｉｎＥＧＦＲ．
ｍｕｔａｎｔｌｕｎｇＣｍＩｃｃｒｍｖｅｅｌｓｎｏｖｅｌｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＢｅｓｃｅｍｈ．２００７．６７（２１）：１０４１７－１０４２７．
表皮生长因子的性质及其在化妆品中的应用_
表皮生长因子的性质及其在化妆品中的应用 1、表皮生长因子的一般性质及其应用情况 对热具有良好的稳定性，在蒸馏水中加热至100℃30分钟仍不会失掉其生物活性。 在EGF的作用下，体内K+和糖等低分子物大量进入细胞内，糖的分解量变大，RNA和蛋白质的合成增加，作用15小时左右，EGF开始促进DNA的合成，并由此趋向刺激细胞的分裂。……所以，间歇地为皮肤和黏膜补充EGF，可以持续促进DNA的连续合成，从而保持表皮细胞的连续增殖与分化。 各种研究表明：EGF不仅在促进和调节表皮细胞生长增殖方向起作用，而且对促进皮肤和黏膜创伤的愈合、消炎镇痛、防治溃疡方面亦有特效；并能有效地抑制粉刺和青春痘的生长，保护皮肤和黏膜免受或少受机械和化学损伤。 国内专利《具有生物活性的洁护肤、洁护发化妆品及其制造方法》（公开号：CN1063410A）是将EGF添加于化妆品中而产生的功能性生物化妆品。EGF用于护肤化妆品中，可以促进细胞增殖生长，重组皮肤表层和内层，改善皮肤结构，延缓皮肤老化，并能防止皮肤毛囊发炎，促进伤口愈合，对于损伤之皮肤提供彻底养护。 2、表皮生长因子的活性研究 以I125标记的rhEGF为探针，发现来源于内、中、外三个胚层的细胞均有EGF受体存在。人的角质细胞、胶原细胞和成纤维细胞等正常细胞均有特异的EGF受体。 对EGF活性的研究可以通过细胞培养的方法，采用人胚表皮细胞进行体外单层培养，加入EGF继续培养一段时间后加入3H-Tdr（胸腺嘧啶核苷），再培养几小时，然后去除培养液，固定细胞，再将细胞用碱溶解后，取一定量于滤纸上测定同位素渗入量，与对照组想比较，其生长速度增长2~2.5倍。 也可以利用EGF消炎镇痛的供销，测定EGF对炎症和疼痛的抑制率来定性测定它的活性；消炎主要看EGF对皮肤通透性的抑制作用。 3、表皮生长因子的毒理研究 （1）急性皮肤刺激性试验——EGF为无刺激性 （2）急性毒性试验——EGF为无急性毒性 *一般医学临床使用EGF时，推荐用量为1000~2000μg/人，约合25μg/Kg（按人体重60Kg）。小鼠给药量为临床推荐用量上限的4×105倍，且无论何种途径均未发生死亡。因此，可以认为EGF无急性毒性。 （3）急性眼刺激试验——EGF对眼无刺激 （4）皮肤变态试验——EGF不会引起皮肤过敏反应 （5）小鼠染色体畸变试验——EGF对小鼠生殖细胞染色体无明显致畸 （6）鼠伤寒沙门菌微粒体酶试验（Ames试验） ——EGF的Ames试验结果为阴性 （7）小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 ——未见EGF诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率增加 4、表皮生长因子的护肤研究
表皮生长因子受体及其临床应用_叶榕
?综述? 表皮生长因子受体及其临床应用 叶榕 【关键词】表皮生长因子受体；肿瘤；临床应用 【中图分类号】R730.5【文献标识码】A【文章编号】1004-5511（2008）03-0164-03 自Cohen在1962年发现表皮生长因子受体(epi-dermal growth factor receptor,EGFR)以来[1]，经过近半个世纪的研究，研究者对EGFR的结构和功能有了比较全面的了解。特别是近年来，开发了针对EGFR 的靶向抑制剂，并且在肿瘤内科治疗中取得较好的疗效，使其成为研究热点之一。 1EGFR的分子生物学特性 1.1EGFR的结构与分布EGFR是具有配体介导的酪氨酸激酶活性的多功能跨膜糖蛋白，是定位于人第7号染色体短臂的原癌基因C-erbB-1的表达产物，分子量为170ku。EGFR分子分为三个区域：由619个氨基酸残基构成的伸向膜外识别并结合配体的氨基端区域，位于细胞膜中间含25个疏水氨基酸的跨膜区，以及膜内含542个氨基酸残基、具有酪氨酸激酶活性并能结合NTP的羧基端区域[2]。 除造血系统外，EGFR几乎存在于人体的所有组织中。在大鼠颌下腺主要定位在颗粒曲管上皮细胞内。在前列腺主要分布于腺体腔缘侧的细胞膜上，可见阳性的棕色颗粒，分布具有一定极性。在胃肠道组织如胃壁细胞、十二指肠粘膜上皮细胞和小肠上皮细胞上均有EGFR；在肠粘膜主要分布在刷状缘及基底膜，前者引起物质转运，后者导致细胞生长发育[3]。 1.2EGFR的活化与信号转导机制表皮生长因子（EGF）与靶细胞膜上EGFR结合后发挥生物学效应。两者的结合具有高亲和力，具有时间与温度的依赖性、饱和性和可逆性。研究显示，EGFR与核内染色体相连，可通过直接诱导特殊核蛋白的磷酸化而发挥其生理功能。EGF首先与EGFR的胞外部位结合，导致受体分子发生二聚化，促使EGFR羧基末端的三个酪氨酸残基（Tyr）自身磷酸化位点发生磷酸化，使受体酪氨酸激酶活化，从而磷酸化受体本身及下游的信号分子；磷酸化的受体通过其磷酸化酪氨酸残基可与蛋白质的SH2结构域相互作用，结合胞内信号转导分子。已知EGFR的活化可以使细胞内三磷酸肌醇和二酰基甘油增多，结果引起细胞内游离钙离子增多，激活磷酸蛋白激酶C和磷酸蛋白激酶A，从而介导各种信号转导途径，使细胞增殖和功能发生改变。诱导EGFR自身磷酸化的位点是在其羧基端1068、148、1173和氨基端一个位点的4个Tyr 残基；在体实验主要在1173Tyr残基，其他3个Tyr 残基磷酸化程度较离体少[4]。 1.3EGFR阻断剂①马鞭草醇提液（EV）可能抑制EGFR的表达；②EGF和EGFR之间存在着反向调节；③EGFR配体拮抗的单克隆抗体或EGFR选择性酪氨酸激酶抑制物可对EGFR产生阻断作用[5]。 2EGFR与肿瘤生成的关系 研究显示，在非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌及头颈部恶性肿瘤中都有EGFR的过度表达[6]。EGFR的高表达可以促进肿瘤细胞的增殖、血管生成、粘附、侵袭和转移，抑制肿瘤细胞的凋亡[7]。 2.1EGFR与肺癌的关系肺癌是目前世界上最常见的实体瘤和最普通的癌症死亡原因[8],80%肺癌的组织类型是非小细胞肺癌（NSCLC），在NSCLC患者中有80%~90%的人表达EGFR，过表达为45%~70%。研究发现，肺癌细胞以自分泌方式分泌转化生长因子a及内皮生长因子，两者与EGFR以配体方式相结合，并且EGFR的表达与肺癌患者预后、不良的肿瘤分化及肺癌细胞远处转移密切相关[9]。 2.2EGFR与乳腺癌的关系EGFR对乳腺癌的诊断和预后价值已得到肯定。Jiang等[10]应用雌激素、他莫西芬、表皮生长因子对乳腺癌MCF-7细胞进行体内、体外实验分析，认为EGFR的表达和患者 作者单位：350101福建福州，福建卫生职业技术学院医学基础部
表皮生长因子在皮肤创伤中的临床应用
表皮生长因子在皮肤创伤中的临床应用 黎宁陈彦伟综述吴曙粤审校 表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)在1962年由美国的Cohen 博士发现并命名，Cohen博士等为此获得1986年度诺贝尔生理学和医学奖。上世纪90年代中期，通过基因重组技术获得的大量高纯度且活性和结构与天然EGF 高度一致的重组人EGF(rhEGF)，在临床上广泛应用于各种创伤的治疗，尤其是皮肤创伤的治疗，获得良好的疗效。现将近10年来有关文献综述如下。 1 EGF的基础研究 EGF是一类广泛存在于人和动物体内的，可促进或抑制多类细胞生长的多肽” J。体内多种细胞膜上均存在EGF受体，受体与EGF结合后形成受体一EGF 复合物，通过自磷酸化等一系列生化反应诱导或直接调控细胞增殖的一系列重要基因，启动创面修复的过程，对上皮细胞有强烈的促生长作用。 皮肤组织的基本细胞成员一表皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等是EGF 的靶细胞，提示表皮组织、真皮和皮肤血管的微循环系统都要受到EGF的调控。由于多类表皮细胞群的生长对EGF的局部刺激能作出灵敏的应答反应，且为这些表皮的高速更新所必需，因此认为EGF参与并促进了这一生理过程。 在体表创伤的愈合过程中，传统药物促进创伤愈合能力极为有限，创伤自我修复能力依据于内源性EGF的释放及参与；但由于机体体液中EGF含量较低，满足不了细胞增殖和肉芽组织发育的需要，通过给予外源性EGF，创面可做出细胞增殖和肉芽组织发育加速的应答反应，最终表现为创面愈合速度的加快。]。付小兵等新近研究发现，EGF激活干细胞促进表皮细胞增殖不仅发生在基底层，还可在表皮的多层面上发生，从而能迅速增加表皮细胞数量及表皮层厚度，增强其屏障功能，认为EGF促进损伤皮肤再生的主要机制可能与它能诱导皮肤干细胞快速定向分化有关。体表创伤的愈合过程包括上皮重建、成纤维细胞增殖、新血管形成及胞间基质的合成和塑型等，Brow等【2_3 的实验研究结果提示，外用EGF可与角质细胞和皮肤成纤维细胞上的EGF受体结合促进其分化，还可以通过增加其它的内源性生长因子如转化生长因子、血小板衍生生长因子的含量或活性而发挥作用，显著加速创面的修复，缩短愈合时间。邢帮荣等发现，与另一种促进创伤愈合的生长因子——碱性成纤维细胞生长因子(bEGF)相比，EGF的促再上皮化作用明显，因而对创伤修复的中后期即再上皮化过程有特殊的促进作用。 外源性EGF用于创伤修复是否安全?是否引起组织过度增生?大量的动物试验及临床观察均表明，rhEGF在分子结构、生物学活性及生理功能上与天然EGF 高度一致，故对机体无致敏、致畸、致突变及致癌作用，在应用中无不良反应。王世岭等-9 通过对345例临床病例各类创面应用重组EGF治疗的观察，未见局部组织过度增生现象。Falanga等用外源性EGF在44例静脉性溃疡病人上所做
表皮生长因子受体
表皮生长因子受体（EGFR）文章来源：易瑞沙更新时间：2010-05-12 字体：[ 大] [ 小] [ 打印] 表皮生长因子受体概述 表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR)是原癌基因C-erbB-1 (HER-1)的表达产物，EGFR 家族包括EGFR、C-erbB-2(HER-2)、C-erbB-3、C-erbB-4四个成员，均定位于细胞膜上。erbB-1广泛分布于除血管组织外的上皮细胞膜上；erbB-2在正常人体腔上皮、腺上皮及胚胎中均有普遍的微弱表达；erbB-3在除造血系统外的多数部位有表达；erbB-4在除肾小球及周围神经外的所有成年组织均可检测到其表达。 EGFR（epithelial growth factor receptor，表皮生长因子受体）本身具有酷氨酶激酶活性，一旦与表皮生长因子（EGF）组合可启动细胞核内的有关基因，从而促进细胞分裂增殖。胃癌、乳腺癌、膀胱癌和头颈部鳞癌的EGFR表达增高。 EGFR可分为胞外区、跨膜区和胞内区3部分，其特点如下：胞外区由氨基端的621个氨基酸构成，是配体结合区，对EGFR具有高度亲和力，对热量很稳定。跨膜区由23个氨基酸残基构成螺旋状结构的疏水区，将受体固定于胞膜上。胞内区的542个氨基酸构成3个亚区： 1.近膜亚区（约50个氨基酸）主要作为PKC和erk/MAPK(extracellular signal-regulated kinase/mitogen activated protein kinase)作用的负反馈区域； 2.随后的约250个氨基酸构成酪氨酸激酶亚区，包含SH1和src同源物1的结合位点； 3.羧基端尾部的229个氨基酸构成羧基端亚区。 迄今发现，EGFR共有6种配体：表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、转化生长因子A(TGFA)、amphireguin、betacelluin(BTC)、heparin-binding EGF (HBEGF)和epiregulin(EPR)。EGFR与其配体的结合具有高亲和性、可饱和性和特异性。 表皮生长因子受体（EGFR）的功能 研究表明在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达。EGFR与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。其可能机制有：EGFR的高表达引起下游信号传导的增强；突变型EGFR受体或配体表达的增加导致EGFR的持续活化；自分泌环的作用增强；受体下调机制的破坏;异常信号传导通路的激活等。EGFR的过表达在恶性肿瘤的演进中起重要作用，胶质细胞、肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等组织中都有EGFR的过表达。对胶质细胞瘤的研究发现EGFR的高表达主要与其基因扩增有关。但有时EGFR表达水平的调节异常也存在于翻译及翻译后。 EGFR在肿瘤中的高表达还可能与活化后降解减少有关，一些研究指出c-Src可通过抑制受体泛素化和内吞作用而上调EGFR水平。许多肿瘤中有突变型EGFR存在，现已发现许多种EGFR突变型。突变型EGFR的作用可能包括：具有配体非依赖型受体的细胞持续活化；由于EGFR的某些结构域缺失而导致受体下调机制的破坏；异常信号传导通路的激活；细胞凋亡的抑制等。突变体的产生是由于EGFR基因的缺失、突变和重排。EGFR的配体对细胞内信号传导有很大影响。EGFR的配体通过自分泌形式激活EGFR促进细胞增殖，
表皮生长因子在皮肤科临床应用的安全性研究进展
表皮生长因子在皮肤科临床应用的安全性研究进展 在上皮细胞增殖分化当中，表皮生长因子和受体通路起着关键性的作用，一般来讲，在皮肤科临床应用当中，将表皮生长因子当做外用制剂，红斑等不良反应发生率比较低，而且均能耐受。本文针对表皮生长因子在皮肤科临床应用的安全性研究进展进行了论述，希望有一定的参考价值。 标签：表皮生长因子;皮肤科;安全性 在很早的时期，相关专家在进行神经生长因子的研究过程中，在某些小动物的身上找到了表皮生长因子，通过实践发现，在上皮细胞增殖、分化等方面表皮生长因子起着关键性的作用。在现代医学临床当中，表皮生长因子被广泛的运用到其中，尤其是糖尿病足溃疡、烧伤等疾病当中，表皮生长因子可以让创面达到愈合的目的，并且使得瘢痕组织形成进一步的降低。 美国FDA曾经表示，某医药公司研究了一种治疗糖尿病的药物，名称为促糖尿病溃疡愈合凝胶药Regranex，这种药物中的某些成分可能造成致癌风险的发生。Regranex当中包含某种物质，如，贝卡普勒明，这种成分是血小板生长因子亚型，在治疗创面方面有着非常显著的效果。此次深入的分析和研究了保险计划数据库中的成人糖尿病。结果显示，患者癌症死亡率有所上升。所以，表皮生长因子在创伤愈合临床应用当中被人们所质疑。但是，肿瘤和慢性创伤之间人们认为存在相应的关联性，如，溃疡。溃疡被定义为是一种皮肤恶性病变，属于慢性伤口或者是陈旧性瘢痕，对于其的机制尚不清楚。有关专家通过研究得出，肿瘤微环境存在慢性创伤的特性，创伤愈合时，Hedgehog、Notch等发挥效应的通路，对于肿瘤干细胞而言，促进其的进一步生长，另外，炎症反应过程中不同的炎症因子也能够很大程度的促进肿瘤干细胞的生长。所以，此次研究中，主要对表皮生长因子在皮肤科临床应用的安全性进行了分析。 1 EGF及EGFR表达水平和肿瘤生长及转移的可能机制 在很早的时期，专家们对表皮生长因子进行了研究，并且提出了该方面能够诱导肿瘤进一步的生长，然而，该提出的内容在临床上不具有意义，这是由于人体内因为多方面的内源性机制，可以对正常细胞起到保护作用，从而使得非程序的有丝分裂情况不会出现。但是，EGF及EGFR和肿瘤之间有着一定的关联性[1-2]。 其实，表皮生长因子受体，我们也可以将其叫做酪氨酸激酶受体，通过对其进行配体，或者让其能够突变磷酸化，从而使其处于激活状态下，然后通过各种下游信号通路，将其进行核内传递，在上皮细胞增值等方面，表皮生长因子具有十分重要的作用。对于肿瘤来讲，预后不良的信号有EGFR过度表达，或者是过度活化，对于肿瘤的发生及发展具有促进作用。相关专家研究过程中发现，在很多种肿瘤发生发展当中，EGFR起着关键性的作用，如，肺癌等。可以说，表皮生长因子受体抑制剂在我国现代肿瘤医学临床治疗运用方面逐渐的成熟。
第六章 表皮生长因子受体抑制常见不良反应及其处理
第六章表皮生长因子受体抑制剂常见不良反应及其处理 表皮生长因子及其受体信号通路在非小细胞肺癌（NSCLC）发生发展中发挥了重要作用，它调控肿瘤细胞增殖、生存和凋亡、血管生成、肿瘤转移等多个生物学过程，是NSCLC治疗的重要靶点之一。针对表皮生长因子受体（EGFR）的靶向药物包括小分子抑制剂（如吉非替尼和厄洛替尼）和单克隆抗体（如西妥昔单抗等）。小分子药物已作为晚期NSCLC的二、三线治疗方案广泛用于临床，EGFR单抗联合化疗一线治疗晚期NSCLC同样也取得了较好的疗效。 EGFR抑制剂（EGFR TKIs）无论是小分子药物还是单克隆抗体，均具有良好的安全性和耐受性，常见不良反应有皮肤毒性和腹泻，罕见不良反应有间质性肺炎、肝功能异常、口腔炎、脱发、口腔干燥等，无威胁患者生命的血液学毒性。与化疗毒副反应的处理措施不同，应用此类药物出现不良反应并非停药的指征，反而是肿瘤对靶向药物敏感的临床信号。许多研究发现皮疹与EGFR TKIs治疗的疗效相关，中重度皮疹患者总体生存明显优于轻度或无皮疹的患者。因此，正确处理EGFR TKIs 引起的不良反应具有十分重要的临床意义。 第一节皮肤毒性 皮肤毒性是最常报道的不良反应，发生率在2/3左右，常见反应包括痤疮样皮疹、甲沟炎及甲裂、毛发改变、皮肤干燥、超敏反应、粘膜炎等（表1）。EGFR TKIs的皮肤毒性/皮疹不属于过敏反应，而是皮肤EGFR受到抑制的结果。正常上皮和滤泡角细胞存在EGFR表达，EGFR在上皮细胞增殖分化等方面发挥重要作用，它可以剌激表皮细胞生长，抑制其分化，保护细胞抵抗紫外线相关损伤，抑制炎症并加速创面愈合。有证据提示EGFR表达或活性改变可伴有上皮异常增生和分化；皮肤毒性的机制还包括上皮角化过度和滤泡阻塞或炎症性反应。 表1 EGFR TKIs相关性皮肤毒性反应 EGFR TKIs引起的皮疹通常为痤疮样皮疹，呈丘疹脓疱样改变。皮疹的发生率随研究和药物而异，在BR.21研究中，皮疹发生率为79%，多为轻中度，3级和4级皮疹发生率分别为8%和1%。单抗皮疹发生率相对较高，在FLEX研究中，接受西妥昔单抗治疗的患者痤疮样重度皮疹的发生率
EGF表皮生长因子
表皮生长因子(EGF) 系于公元1962年由意大利女科学家Mantalcini教授和美国博士Cohen在实验中发现的，并因而获得1986年诺贝尔生 理奬与医学奬，是在小老鼠的颔下腺发现了一种可以促使新生小鼠眼睑早开，牙齿早萌的活性成分，而将这活性成分加入培养皮肤表皮细胞的基质后，发现可以促进皮肤表皮细胞的生长，因此将此活性成分命名为EGF(Epidermal Growth Factor)中文为"表皮细胞生长因子，并证实这种活性蛋白具有免疫和自我调节的能力，并能加速表皮组织的新陈代谢，更新已老死及受损的细胞，原来人体器官和发肤的自我修补功能是由一组称为细胞因子(cytokines)的活性蛋白互相协调而成，而EGF是其中的一种因子。主要作用是促进皮肤细胞的增殖、分化，加速新陈代谢，提高新细胞在皮肤中所占的比例，从而使皮肤变得年轻，微量的EGF可赋予衰老细胞全新的生命力，促使各种受损皮肤修复和再生，它还能刺激细胞外一些大分子（如透明质酸、糖蛋白等）的合成与分泌，滋润皮肤，是决定肌肤活力和健康的源泉。EGF又被称为"美丽因子"，人体EGF的含量决定着皮肤年轻的程度。 表皮细胞生长因子(EGF)是由53个氨基酸组成的小分子多 肽，分子量约6000道顿，分子内有三对二硫键结构，因此对酸、热等物理化学因素均很稳定。生长因子是一种蛋白质，主要作用是与细胞表面的接受器结合后，刺激细胞产生一连串的细胞增殖与分化，正常细胞要增殖非有生长因子的刺激不可，皮肤的细胞需要生长因子的刺激来加速更新与再生。EGF是一个相当特殊的3D结构，主要的动作是刺激纤维母细胞上的接受器，结合后，开始制造合成各类纤维和细胞间基质，它的重点在激化细胞的新生、活化纤维母细胞，也就
免疫抑制剂的研究进展
免疫抑制剂的研究进展 【摘要】综述了免疫抑制剂的分类及其在药学和临床方面的研究进展。 【关键词】免疫抑制剂;研究进展 免疫抑制剂是近20余年来在肿瘤化疗、器官移植、免疫病理学和临床免疫学等多学科研究基础上发展起来的新的药剂类别,在治疗剂量下可产生明显免疫抑制效应的一类药物。这类药物可作用于免疫反应过程的不同环节,抑制免疫细胞的发育分化,抑制抗原的加工、提呈,抑制淋巴细胞对抗原的识别,抑制活化T细胞或B细胞增殖和抑制淋巴细胞效应等。本文拟就免疫抑制剂的分类及其在药学和临床方面的研究进展作一综述。 1 常用免疫抑制剂分类 1.1 合成药物:该类化合物多来源于抗肿瘤物,此类药物对免疫的多个环节均有抑制作用,但其不良反应严重,为减少不良反应,临床上多与其他免疫抑制剂合用,如目前临床上多在三联疗法中应用A Z P ( A Z P + C S A +泼尼松) 。 1.1.1 糖皮质激素: 此类药物有泼尼松、氢化泼尼松和地塞米松等,对免疫反应的多个环节均有抑制作用,包括防止和抑制中介的免疫反应,减少淋巴细胞、单核细胞的数目,降低免疫球蛋白与细胞表面受体结合的能力,并抑制白介素的合成与释放,从而阻止淋巴细胞向淋巴母细胞转化。此类药物的免疫抑制作用与其用药剂量密切相关。常规剂量下,其免疫学作用主要表现在减少淋巴细胞产生细胞因子,影响细胞的激活。但在大剂量使用进行冲击治疗时,还可通过直接作用造成淋巴细胞溶解和凋亡,以达到快速有效的抑制免疫反应的目的。[1] 长期应用糖皮质激素可产生严重不良反应,诱发和加重感染,或导致肾上腺皮质功能紊乱等,但由于其疗效明显。若使用得当,仍不失为治疗自身免疫病的首选药物。常用于系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肾病综合症、慢性活动性肝炎、溃疡性结肠炎等的治疗。 1.1.2 烷化剂: 环磷酰胺最早应用于临床, 它通过杀伤免疫细胞,影响免疫过程中的各阶段,作为一种免疫抑制剂用于肾病综合征、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等。较明显的副作用使其应用受到了限制。对免疫反应的影响因不同剂量及投药时问而
表皮生长因子研究进展
表皮生长因子对动物胃肠道发育影响 的研究进展 摘要：1962年，Cohen等首次发现了表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)，它是一种广泛存在于人或其它动物体内的由53个氨基酸组成小分子多肽。EGF通过与细胞膜上的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor ，EGFR)结合，共同调控细胞分化、分裂和增殖等重要的生物学过程。 关键词：EGF；EGFR；胃肠道 1 EGF的发现 1962年，美国纳什维尔市范德比特大学医学院Steanley-Cohen等首次在小鼠颌下腺中发现了一种小分子蛋白，将其注入新生鼠，可使之眼脸早开、牙齿早萌、体重减轻和毛发生长延迟，将其加入培养液中培养表皮细胞时，发现其可直接促进表皮细胞的生长与分化，因此将其命名为表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF) [1]。1975年Gregor从人尿中提取出人表皮生长因子（hEGF），由于其可抑制胃酸分泌，又称抑胃素[2]。迄今为止，发现了许多与EGF同源的蛋白，包括EGF家族成员与EGF结构相似的蛋白，后者能结合EGF受体、表现出相似的生物学功能。EGF 家族包括TGF-α、HB-EGF（heparin-binding EGF-like growth factor）、AR(amphiregulin)、NRG(neuroregulin)、EPR(epiregulin)、HRG(heregulin)、BTC(Betacellulin)。现在还发现，在许多蛋白质分子中存在着类似EGF的结构域，即大小在50个氨基酸残基左右，内部具有完全保守的3对二硫键[3]。这类分子从低等动物到哺乳动物均有发现。凝血系统中的凝血因子Ⅵ、Ⅸ、Ⅹ和ⅩⅡ中都含有3个典型的类EGF结构域[4,5]。 2 EGF的化学结构及分布 人EGF是由53个氨基酸组成的多肽，链内含有3对二硫键，定位于4号染色体长臂。EGF 序列位于前体蛋白肽链的C末端附近，分子量为6045Da，等电点PI4.6，具有热稳定性。EGF 含159个碱基对和6个半胱酸残基，从而在6~20、14~3l和33~42之间分别形成三个环，这些环状结构使EGF对蛋白酶具有较高的稳定性，活性中心位于48~53个氨基酸残基之间。研究表明，该二硫键对EGF生物活性的发挥起重要作用[6]。
免疫抑制剂的研究进展
高铁血红蛋白浓度，一般推荐一氧化氮吸入浓度为20?10－6 80?10－6mmol/L。试验报道［20］患儿吸入一氧化氮浓度40?10－6 80?10－6mmol/L30min和吸入一氧化氮6?10－6 20?10－6mmol/L1 53d，均未发现有临床意义的高铁血红蛋白血症。 一氧化氮本身是一种自由基，大剂量吸入对肺有一定损伤。吸入高浓度一氧化氮则可产生不良反应。这主要因为一氧化氮可与氧结合形成二氧化氮，后者有很强的毒性作用。 一氧化氮吸入治疗，具有快速的早期反应性、高选择性和非创伤性、不良反应相对较少等优点，已被广泛应用于原发性和继发性肺动脉高压症、肺血管痉挛性低氧血症、BPD等治疗。但现在面临一系列问题，如一氧化氮的来源及毒性效应。一氧化氮的许多物理、化学及生物学特性还有待进一步观察，其生物合成、释放、转运、作用、灭活及清除机制还有许多问题需要深入探讨。雾化吸入一氧化氮供体（如硝普钠和硝酸甘油）是一种很成功的尝试。一氧化氮研究得出的许多结论还仅是初步的，因为各自的研究方法、条件、标准的不同，有的结论出入较大，甚至相互矛盾。 参考文献 ［1］唐英，王泉云．一氧化氮（NO）吸入治疗的临床研究新进展［J］．中国麻醉与镇痛，2001，2（3）：151-156． ［2］Lowson SM．Inhaled alternatives to notric oxide［J］．Anesthesiolo-gy，2002，96（6）：1504-1513． ［3］洪小杨，王斌，付雪梅，等．一氧化氮吸入治疗新生儿持续肺动脉高压［J］．中国小儿急救医学杂志，2006，3（13）：266-267．［4］吴湘兰，王章星，王萍，等．雾化吸入硝酸甘油治疗新生儿持续肺动脉高压［J］．广东医学，2010，12（3）：1602-1603． ［5］Gong FQ，Shiraishi H，Mariko Y．The effect of inhaled ion nebuliz-ed nitroglycerin in dogs with experimental pulmonary hypertension induced by U46619［J］．Chinese Med J，2000，113（7）：475-476．［6］Jiang BH，Maruyama J，Yokochi A，et al．Correlation of inhaled ni-tric-oxide induced reduction of pulmonary artery pressure and vas- cular changes［J］．Eur Respir J，2002，20（1）：52-81． ［7］王少华，黄斌，万永明，等．雾化吸入NO供体对新生猪急性呼吸衰竭综合征炎症反应的干预作用［J］．中国小儿急救医学杂 志，2011，18（1）：53-55． ［8］曾建军，陈冬梅，王瑞泉，等．吸入一氧化氮与高频振荡通气治疗新生儿呼吸衰竭合并肺动脉高压的疗效观察［J］．中国小儿 急救医学，2010，6（17）：537-539． ［9］夏红萍，黄国英，孙波，等．雾化吸入一氧化氮供体治疗新生猪急性低氧性肺动脉高压［J］．中华急诊医学杂志，2006，15（2）： 117-120． ［10］诸冰雪，贾兵，陈张根，等．吸入一氧化氮治疗先天性心脏病术后肺动脉高压［J］．临床儿科杂志，2005，3（23）：146-151．［11］Omar HA，Gong F，Sun MY．Nebulized nitroglycerin in children with pulmonary hypertension in congenital heart disease［J］．West View Med J，1999，95（2）：74-75． ［12］张宁，徐永健，张珍祥，等．核因子кB对支气管哮喘大鼠淋巴细胞增殖和凋亡的调节作用及雷公藤甲素对其影响［J］．中国 中西医结合杂志，2004，13（3）：435-438． ［13］张骏，夏毓华．先天性膈疝动物模型制作及其肺部一氧化氮的改变［J］．临床儿科杂志，2001，19（4）：243-245． ［14］沈毅弘，高惠荣．一氧化氮的临床应用进展［J］．浙江医学情报，1996，18（1）：14-16． ［15］李鲁明．一氧化氮及合成酶在缺氧缺血性脑病中的探讨［J］．医药论坛杂志，2003，24（15）：22-23． ［16］刘翠青，马莉．一氧化氮吸入治疗新生儿胎粪吸入综合征的随机对照研究［J］．中华儿科杂志，2008，46（4）：243-245． ［17］夏耀方，刘翠青．一氧化氮吸入治疗对胎粪吸入综合征患儿氧合功能及气道炎症反应的影响［J］．中国小儿急救医学，2008， 15（3）：234-237． ［18］Schreiber MD，Gin-Mestan K，Marks JD，et al．Inhaled nitric oxide in premature infants with the respiratory distress syndrome［J］．J N Engl J Med，2003，349（22）：2099-2107． ［19］Barrington KJ，Finer NN．Ihaled nitric oxide for resp iratory failure in p reterm infants［J］．Cochrane Database Syst Rev，2007，18 （3）：CD000509． ［20］Geggel RL．Inhalation nitric oxide：A selective pulmonary hyperten-sion of the newborn［J］．J Pediatr，1993，123（1）：103-108． 收稿日期：2011-12-26修回日期：2012-03-14编辑：楼立理 免疫抑制剂的研究进展 徐凯，朱其明※（综述），冯建鹏（审校） （扬子江药业集团江苏海慈生物药业有限公司，江苏泰州225321） 中图分类号：R979．5文献标识码：A文章编号：1006-2084（2012）14-2177-04 摘要：近年来，随着免疫学的不断发展，新型免疫抑制剂的不断问世推动了器官移植的蓬勃发展，一些高效低毒的新型免疫抑制剂得到了开发和应用。研究开发作用于新靶点的新型免疫抑制剂仍是今后努力的方向。为了全面地了解免疫抑制剂的研究进展，现对细胞因子抑制剂、DNA合成抑制剂、单克隆抗体类免疫抑制剂等的作用机制及临床应用进行综述。 关键词：免疫抑制剂；器官移植；作用机制；临床应用 Research Progress of the Immunosuppressive Drugs XU Kai，ZHU Qi-ming，FENG Jian-peng．（Yangtze River Pharmaceutical Group Jiangsu Haici Biological Pharmaceutical Co．，Ltd，Taizhou225321，China）Abstract：With the development of immunology in recent years，many new immunosuppressive drugs have been discovered，which has promoted the prosperity of organ transplant，and some new efficient immuno-suppressive drugs with low toxicity have been developed and applied．The goal of research of new immunosup-pressive drugs still focuses on researching for new targets．Here is to make a review of the action mechanisms and clinical applications of some immunosuppressive drugs，such as cytokine inhibitors，DNA synthesis inhib-itors and monoclonal antibody，etc．to get a good understanding of the research progress of the immunosup-pressive drugs． Key words：Immunosuppressive drugs；Organ transplantation；Action mechanism；Clinical application 免疫抑制剂是一类可抑制机体异常免疫反应的药物，其在临床上主要用于防止器官移植时的排斥反应及自身免疫性疾病的治疗。免疫抑制剂自20世纪70年代后发展起来的，到目前为止取得了很大进展。免疫抑制剂可通过影响机体免疫应答反应和免疫病理反应而抑制机体的免疫功能。不同的免
表皮生长因子类药物近期研究概况及展望
表皮生长因子类药物近期研究概况及展望 1 表皮生长因子作用及特点 表皮生长因子系列主要包括表皮生长因子（EGF）、胰岛素生长因子（IGF-1）、碱性纤维原细胞生长因子（bFGF）、酸性纤维原细胞生长因子（aFGF）。其有滋润皮肤，消除皱纹，修复创伤，预防色斑等作用，另外对于人体骨骼系统、血液、呼吸、分泌、生殖、免疫和神经系统均都有很好的调节作用。 但表皮生长因子作为蛋白质多肽类药物，存在分子量大，难以透过皮肤角质层，稳定性差，半衰期短，对温度、PH等外界环境敏感等缺点。 2 表皮生长因子类国内外研究概况 2.1国内市售生长因子类产品概况 目前，国内市售的生长因子及其衍生物剂型均为外用制剂，包括溶液剂、冻干粉、凝胶剂、滴眼液等。具体如下注射用鼠神经生长因子、冻干鼠表皮生长因子、重组人表皮生长因子衍生物滴眼液、重组人表皮生长因子凝胶、重组人表皮生长因子滴眼液、重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶、外用重组人碱性成纤维细胞生长因子、外用重组人表皮生长因子衍生物、外用重组人表皮生长因子、外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子、重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶、重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用溶液、重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液、外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子(融合蛋白)、外用冻干重组人酸性成纤维细胞生长因子等。 2.2表皮生长因子传统剂型研制及应用概况 由上海大江集团股份有限公司制药公司于2002年研制了外用冻干重组人表皮生长因子，并申报国家一类新药。2003年由上海信谊药业有限公司研制出了重组人表皮生长因子喷雾剂的制备方法。2009年由河北东方康星生物制药有限公司研制了外用冻干鼠皮生长因子。2009年由第四军医大学研制出了一种多肽、蛋白类药物口腔黏膜吸收剂型的组方及制备方法。有关生长因子溶液剂、乳膏剂、凝胶剂临床应用及其与其他药物连用治疗皮肤创伤等报道较多，暂不详述。中国人民解放军军事医学科学院陆兵选取重组人表皮生长因子为模型药物，研究了其稳定性，并将其分别制备成亲水性凝胶剂及W/O型乳膏剂，工艺简单，质量可靠，使用方便。此外重组人表皮生长因子滴眼液也有见报道。
大鼠表皮生长因子(EGF)说明书
大鼠表皮生长因子(EGF)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中表皮生长因子(EGF)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠表皮生长因子(EGF)水平。用纯化的大鼠表皮生长因子(EGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF)再与HRP标记抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠表皮生长因子(EGF)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：5400ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
人表皮生长因子的纯化及浓度在线检测
人表皮生长因子的纯化及浓度在线检测 童望宇1, * ， 姚善泾2, * ， 朱自强2 （1上海市华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 上海市 200237； 2浙江省杭州市浙江大学化学工程与生物工程系，杭州 310027） 摘要 在分离纯化快速开拓系统（?KTA explorer 100）中用凝胶（Sephadex G-50 superfine ）纯化人表皮生长因子，并在优化条件下对其纯化过程中的hEGF 进行定量测定。用标准人表皮生长因子经离子交换柱、蛋白质扫描分析系统及SDS-PAGE 间相互印证，结果表明：在优化条件下，可得到在SDS-PAGE 上与标准样品hEGF 一样清晰的单条带，其产品纯度高于94%，回收率高于36%；其检测的灵敏度可达1μg/ml 。该法不仅对人表皮生长因子的在线检测行之有效，而且对其它蛋白质纯化的在线检测也具有参考价值。 关键词 人表皮生长因子，层析，检测，纯化 中图分类号 TQ0333 Q819 引言 人表皮生长因子（human epidermal growth factor ，hEGF ）是由53个氨基酸残基所组成 的多肽生长因子，分子量约为6200D [1]。人表皮生长因子具有在体内刺激皮肤组织、角膜、肺、气管上皮组织的生长繁殖及抑制胃酸分泌等多种生物学作用，因而可应用于外科伤口的愈合及溃疡病的治疗等医疗领域[2-5]。自1975年Cohen 等人[1]从尿液中首先分离纯化得到人表皮生长因子以来，有关研究的进展很快，除了继续研究从天然来源中分离纯化以外，基于基因工程菌发酵生产也已问世[6-7]，但是不管是从天然资源，还是来自基因工程菌发酵液，hEGF 的浓度总是偏低，需要经过较长时间的分离和纯化流程，才能得到相对较纯的产品。为了设计一个高效和可控的纯化过程，hEGF 的在线分析和检测就成为非常重要。 目前，hEGF 的定量检测方法主要有放射免疫分析（Radio immuno-assay, RIA ）[4]、放 射受体分析(Radio receptor assay, RRA) [8]、酶联免疫吸附分析（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA ）[9]、酶免疫分析（Enzyme immunoassay, EIA ）[10]、反相HPLC [11]和免疫荧光技术[12]等。以上各种方法均有其特点和不同的条件局限性，但均难用于过程的在线检测。 我们在使用?KTA explorer 100进行蛋白质纯化时发现，该系统通过本身带有的软件， 不仅可以与各种层析柱结合进行多种生物质的分离流程研究，而且还可以比较精确地通过出峰面积表示蛋白质量的多少。利用这种定量关系，就为定量确定生物质含量提供了基础。以此为依据，对hEGF 这个比较难于定量与分离的多肽，进行了凝胶层析中在线检测与纯化工艺的优化，达到了纯化与在线定量检测的目的。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 联系人：童望宇，姚善泾， E-mail: tongwy@https://www.360docs.net/doc/b214242810.html, , yaosj@https://www.360docs.net/doc/b214242810.html, 第一作者：童望宇，男，40岁，博士 * 国家自然科学基金资助项目(批准号：29736180) _______________________________________________________________________________https://www.360docs.net/doc/b214242810.html,
EGF表皮生长因子
EGF表皮生长因子 EGF表皮生长因子是天津迦妮生物科技开发有限公司生产的化妆品中主要所含成分，主要针对女性皮肤，有着美白、保湿、祛斑、尤其针对妊娠斑、妊娠纹以及身体受外界影响产生的伤疤效果显著，那么，什么是EGF，为什么EGF在这方面有着自己独特的优势呢？今天迦妮就和你一起系统的去了解其中的奥秘，了解一下为什么我们会钟爱EGF。 表皮生长因子是一种小肽，由53个氨基酸残基组成，是类EGF大家族的一个成员，是一种多功能的生长因子，在体内体外都对多种组织细胞有强烈的促分裂作用。EGF同应答细胞表面的特异受体结合，根据《斯。诺美-走在生物医学美容最前沿》A10文献记载，一旦结合，便促进受体二聚化并使细胞质位点磷酸化。被激活的受体至少可与5种具有不同信号序列的蛋白结合，进行信号转导，在翻译水平上对蛋白质的合成起调节作用。此外EGF 可提高细胞内DNA拓扑异构酶活性，也可促进一些与增殖有关的基因表达，如myc 、fos 等。 中文学名表皮生长因子 拉丁学名Epidermal augmentum factor 别称epidermal growth factor 简称EGF 性质一种小肽 作用多功能的生长因子 发现时间1974年 1974年从人尿中提纯出人的表皮生长因子（hEGF）,其结构由53个氨基酸组成，分子量6201道尔顿，分子内有6个半胱氨酸组成的二硫键，形成3个分子内环型结构，组成生物活性所必须的受体结合区域。EGF无糖基部位，非常稳定，耐热耐酸，广泛存在于体液和多种腺体中，主要由颌下腺、十二指肠合成，在人体的绝大多数体液中均已发现，在乳汁、尿液、精液中的含量特异性地增高，但在血清中的浓度较低。众多的实验研究表明，EGF 可刺激多种细胞的增殖，主要是表皮细胞、内皮细胞。用于角膜损伤、烧烫伤及手术等创面的修复和愈合取得了很好的疗效，Montalcini 和Cohen教授因为发现表皮生长因子并分析其结构和作用机理，1986年诺贝尔生理学及医学获奖。 2来源与机理 编辑 表皮生长因子: 一种可刺激表皮和其他多种细胞分裂的蛋白质。