微生物实验 药物敏感实验
微生物药物敏感实验
?一、实验目的
?1、熟悉和掌握圆纸片扩散法检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判断方
法。
?2、了解药敏试验在实际生产中的重要意义
二、实验原理
?将含有定量抗菌药物的纸片（药敏纸片）贴在已接种待检菌的琼脂平板表面特定部
位。药物借其分子的扩散力向周围琼脂中扩散，形成了随着离纸片距离加大，琼脂中的药物浓度逐渐减少的梯度浓度。其纸片周围一定区域琼脂内的药物浓度高于抑制待检菌所需浓度时，则该区域内细胞不能生长，形成透明抑制圈。抑菌圈的大小可以反映待检对测定药物的敏感程度，抑菌圈愈大，说明该菌对此药物越敏感三、实验器材
?1．菌种大肠埃希菌。
?2．培养基牛肉膏蛋白胨培养基。
?3．试剂无菌生理盐水，抗菌药物纸片：
包括青霉素、氨苄西林、土霉素、链霉素等。
?4．其他无菌棉拭子、镊子、毫米尺、接种环。
四、实验方法和步骤
?1．菌液制备
菌浓合适，一般为106
?2．接种
细菌悬液制备后15min内接种至倒好的牛肉膏蛋白胨培养基平板中，接种量0.1-0.2mL。涂布均匀。
?3．贴药敏纸片
?涂布后的平板在室温下干燥3~5min，用纸片分配器或无菌镊子将纸片贴于琼脂表面
并轻压，使纸片与琼脂表面完成接触。各纸片中心相距应大于24mm，纸片贴上后就不能再移动位置。
?4．培养
?将平板倒置放入37℃培养箱培养，16~18h读取结果。
五、实验结果
六、思考题
? 1.圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项？
? 2. 试述药敏试验的意义
抗菌药物敏感性试验的技术要求
抗菌药物敏感性试验的技术要求 1 范围 本标准规定了临床抗菌药物敏感性试验的技术要求，包括常规药敏试验的药物选择和报告、药敏试验方法、各种属细菌药敏试验、常见菌特殊耐药表型检测、药敏试验的质量控制、商品化药敏试验检测系统的性能验证。 本标准适用于开展临床微生物学检验的各级临床实验室。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 抗微生物药物敏感性试验Antimicrobial susceptibility testing 检测微生物（本文件特指细菌）对抗微生物药物（本文件特指抗菌药物）的体外敏感性，以指导临床合理选用药物的微生物学试验，简称药敏试验。 2.2 最低抑菌浓度Minimal inhibitory concentration；MIC 在琼脂或肉汤稀释法药物敏感性检测试验中能抑制肉眼可见的微生物生长的最低抗菌药物浓度。2.3 折点Breakpoint 能预测临床治疗效果，用以判断敏感、中介、剂量依赖型敏感、耐药、非敏感的最低抑菌浓度（MIC）或者抑菌圈直径（mm）的数值。 2.3.1 敏感Susceptible；S 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于敏感范围时，使用推荐剂量进行治疗，该药在感染部位通常达到的浓度可抑制被测菌的生长，临床治疗可能有效。 2.3.2 中介Intermediate；I 当菌株的MIC值或抑菌圈直径处于中介时，该数值接近药物在血液和组织中达到的浓度，从而治疗反应率低于敏感菌群。该分类意味着采用高于常规剂量治疗时或在药物生理浓集的部位，临床治疗可能
有效。该分类同样可作为“缓冲域”，以防止由微小、不可控的技术因素导致的重大偏差，尤其是毒性范围较窄的药物。 2.3.3 剂量依赖型敏感Susceptible-dose dependent；SDD 细菌菌株对抗菌药物的敏感性依赖于抗菌药物的剂量。当某种药物对菌株的MIC或抑菌圈直径在SDD 范围时，临床可通过提高剂量和（或）增加给药频率等修正给药方案以达到临床疗效。 2.3.4 耐药Resistant；R 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于该分类范围时，使用常规治疗方案，该药在感染部位所达到的药物浓度不能抑制细菌的生长，和（或）被测菌株获得特殊耐药机制，且治疗性研究显示该药临床疗效不确切。 2.3.5 非敏感Nonsusceptible；NS 对于那些因未现或罕现耐药，而仅具有敏感折点的抗菌药物，当该药对某分离株的MIC值高于或抑菌圈直径低于敏感折点时，此分类为非敏感。 2.4 流行病学界值Epidemiological cutoff value；ECV 将微生物群体区分为有或无获得性耐药的MIC值或抑菌圈直径，是群体敏感性的上限。根据ECV，可将菌株分为野生型和非野生型。 2.4.1 野生型 Wild-type；WT 根据ECV值，将抗菌药物（包括抗真菌药物）评估中未获得耐药机制或无敏感性下降的菌株定义为野生型。 2.4.2 非野生型Non-wild-type；NWT 根据ECV值，将抗菌药物（包括抗真菌药物）评估中获得了耐药机制或存在敏感性下降的菌株，定义为非野生型。 2.5 效价Potency 抗菌药物中具有抗菌活性的成分，通过同类标准物质测定得出。单位mg/g、IU/g或用百分比表示。
微生物实验报告
一、实验目的 1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的种类，掌握培养基制备的原则和一般方法； 2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法； 3.了解实验室和医院空气的有菌环境，加强消毒灭菌的观念；掌握医院病房空气的细菌检测方法；掌握空气的卫生细菌学监测指标及意义； 4.了解人体体表的有菌环境，加强消毒灭菌的观念； 5.掌握油镜的使用方法，掌握细菌涂片标本的制备及革兰氏染色法的原理及操作，熟悉细菌的基本形态 6.掌握几种常用的生化反应的名称、原理、方法、结果讨论及用途； 7.掌握血浆凝固酶的原理、方法、结果观察及判断； 8.掌握抗菌素敏感性试验的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法； 9.掌握玻片凝集反应试验的原理、方法、结果观察及判断。
二、实验器材 1.培养基的制备：试管架、移液管、棉塞、牛皮纸、手套、石棉网、橡皮筋、蒸馏水、天平、称量器皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、干粉培养基。 2.细菌的分离培养：接种环，酒精灯，打火机，浓汁标本1支，粪便标本1支；碘酒棉球1瓶，酒精棉球1瓶，眼科镊子2把；伊红美蓝平板2个，营养琼脂平板5个。 3.细菌的纯培养：接种环，酒精灯，打火机，中性笔，斜面4支，细菌分离培养物（上次实验平板） 4.细菌的形态学检查：接种环，酒精灯，打火机，中性笔，斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，显微镜，革兰氏染色试剂6组，染色架8个。 5.细菌的生化试验等：接种环，接种针，酒精灯，打火机，中性笔，斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，镊子2把，兔血浆，生理盐水。 6.细菌的血清学试验、结果分析：接种环，酒精灯，打火机，玻片、志贺菌诊断血清，半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。
细菌药物敏感试验实验报告
细菌药物敏感试验实验报告 药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。 错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确： 实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理
体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 具体的专业要求 1标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液： 正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。
药敏试验实验报告
药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 简介： 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参
考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 实验步骤： 实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备） 细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
实验11-抗生素的抑菌试验
实验十一抗生素的抑菌试验 一目的要求 1、掌握纸片法测定抗生素抗菌作用的基本方法 2、了解抗生素的抗菌谱 二实验原理 抗生素是某些植物与微生物生长到对数期前后所产生的次生代谢产物，其在低浓度下可其它微生物生长具抑制作用或杀死作用的物质。抗生素对敏感微生物的作用机理分为抑制细胞壁的形成、破坏细胞膜的功能、干扰蛋白质合成及阻碍核酸的合成。 由于不同微生物对不同抗生素的敏感性不一样，抗生素的作用对象就有一定的范围，这种作用范围成为抗生素的抗菌谱，作用对象广的抗生素称为广谱抗生素，作用对象少的抗生素称为窄谱抗生素。而且当某种抗生素长时间用于敏感微生物生长后，即使同一种菌的不同菌株对不同药物的敏感性也常发生改变，甚至出现耐药菌株，亦即产生抗性菌株，则抗生素将失去对抗性菌株生长的抵制，只以采用新的抗生素才可能控制抗性菌株的生长与繁殖，因而不断开发新的抗生素是保健人类身体健康的重要工作。新抗生素产生菌的分离筛选应通过拮抗菌发酵，然后以发酵产物进行抗菌活性实验，根据实验结果而获得产新抗生素的菌株。微生物代谢产物的抗菌活性常以管碟法与纸法进行检测，根据透明抑菌圈的有无与大小作为依据。 三实验器材 1、菌种枯草杆菌、大肠杆菌。 2、培养基MH（Mueller-Hintion）琼脂。 3、试剂青霉素、链霉素。 四方法步骤 1、无菌滤纸片以孔径6mm打孔器将滤纸打为圆形纸片，放入培养皿内，121℃蒸汽湿热灭菌，100℃烘干2h。 2、抗生素溶液制备将取适量青霉素、链霉素，以无菌水溶解。 3、指示菌悬浮液的制备枯草杆菌、大肠杆菌斜面菌种分别以无菌水洗下菌苔细胞，到入无菌三角瓶内，制备适宜浓度的细胞悬浮液。 4、混菌平板制备取批示菌细胞悬浮液1mL加入无菌培养皿内，再加入温度为43~45℃的PDA培养基或牛肉膏蛋白胨琼脂培养基20mL，立即振荡使细胞与培养基混合均匀，静置冷凝。 5、平板加抗生素溶液将滤纸片在抗生素溶液中充分浸泡2min以上，然后将纸片放于混菌平板上，每皿呈三角形放3点，每点贴放纸片2张。 6、培养与观察将平板放于33℃左右的温度培养，每24h测量一次透明抑菌圈直径，共测量3次。
常见细菌药物敏感性试验报告规范
常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识 微生物学检验为感染性疾病的诊断、治疗和控制提供了必不可少的证据。因此微生物学检验报告是临床和实验室等多方共同关注的焦点。国内临床微生物学检验发展较为薄弱，报告存在着种种不足。同时，临床与实验室的沟通存在一定不足，密切协作非常必要。基于实际存在的问题，为规范国内临床微生物学检验药物敏感性试验报告，加强临床与实验室合作，发挥检验医师作用，特制订本共识，以期指导相关报告的规范化，减少错误，增加专业信息，提高服务质量，为临床医学诊、治、控提供坚实的科学依据。本共识限于常见细菌的药物敏感性报告。 一、药物敏感性试验的意义和基本原则 (一)意义 药物敏感性试验可以检测细菌对于抗细菌药物的敏感性，为临床用药、新药研究、监测耐药变迁、发现耐药机制等提供客观证据[1]。对于经验治疗，依据一方面来自医生自身的经验，一方面是实验室长期不断提供的数据积累。临床需要考虑不同感染的病原谱和常见病原对不同药物的敏感性；对于靶向治疗，特定分离株的具体药敏试验结果可以用于判断经验治疗选药合理性、经验治疗效果分析、调整治疗选药依据等。 (二)基本原则 1．药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药[2]。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献[3,4]。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2．药敏试验测试的前提条件[5]： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3．测试结果应准确： 实验室应遵照C L S I文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 二、具体的专业要求 (一)标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。
AYL-S7-352 药物敏感性试验标准操作规程
编写者：沈继录审核者：批准人： 生效日期：2012.1.1 文件发放范围：微生物组 文件年度审核 审核者：审核者：审核者：审核者： 日期：日期：日期：日期： 1. 目的 规范药物敏感性试验标准操作程序，确保药敏结果准确。 2．原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后会不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 3．试剂 M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、标准比浊管或比浊仪。 4．质控 4.1 常用细菌药敏质控标准菌株参见CLSI规定。 4.2 质控菌株每日随临床标本一起进行药敏试验，测定质控菌株的抑菌环。质控菌株的抑菌环在允许范围之内，说明结果可信。 4.3 质控的频率由于纸片法药敏试验是很稳定的，在不失控的时候，可以每周作1～2次质控菌株的测定。如果发现有失控的情况，就必须每日作1次，寻找失控的原因并予以纠正。如果连续30日失控<3次的，可以恢复每周1次。 5．操作步骤 5.1 挑取4～5个纯培养菌落，接种于3～5mlM-H肉汤(0．5麦氏单位)中，经35℃培养6～8 h。 5.2 用无菌生理盐水或M-H肉汤校正菌液浊度，使其与标准比浊管的浓度相同。 5.3 用无菌棉拭蘸取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个M-H平板表面，再重复两次，每次旋转平板60°，使整个平板涂布均匀，最后用
微生物实验报告2012054015杨小静
脓汁和粪便标本中病原菌的分离培养与检测 专业：中西医临床医学七年制学号：2012054015 姓名：杨小静 实验目的：本次脓汁粪便标本中病原微生物的检测实验，旨在通过培养基制备，病原菌的分离与培养，以及细菌鉴别实验如革兰氏染色法，血浆凝固酶试验，药敏试验，半固体接种法实验，从而对医学微生物学主要的研究方法和手段有一定程度的了解，初步掌握微生物试验的基本技能和原理，也有助于无菌观念的树立。 1.实验器材： 接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、生物显微镜、电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子 2.实验方法与步骤：①培养基的制备②细菌的分离培养③细菌的纯培养④细菌的形态学检查⑤细菌的生化试验等⑥细菌的血清学试验、结果 第一次实验 2.1培养基的制备、消毒和灭菌 如下图表格内容要求所示制备培养基。 表一 组号培养基称量 (g) 水量 (ml) 煮沸 (次) 分装 (ml) 备注（40人份） 1 营养琼脂11.4 300 4瓶，500ml瓶，平板 2～4 营养琼脂 2.9 75 3 5 15支×3，中试管，斜面5～7 营养肉汤 1.1 50 1 3 15支×3，小试管，液体8～10 半固体 1.9 50 3 3 15支×3，小试管，高层 第二次实验 2.1手指和空气的细菌学检查 实验步骤：1空气的细菌学检查：每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点），将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边，平板暴露于空气中15分钟，然后平板倒扣盖上，作标记。37℃温箱培养24小时，观察结果。（※CFU/m3 ＝50000N÷AT≈86N(直径7cm平板）。N：平板上的菌落数。A：平板面积(平方厘米)。T：采样时间(分钟)。 CFU /m3 ＝50,000N÷AT ≈8333 2手指皮肤的细菌学检查： 上:甲、丙→常规洗手甲和乙、丙和丁共用1个平板
纸片法抗菌药物敏感实验操作标准
纸片法抗菌药物敏感实验操作标准 4.３标准比浊管 用硫酸钡比浊管(０、5麦氏比浊标准),标定接种菌液浓度。比浊管制备方 法如下:(１)0、048mｏl/L BaＣｌ 2,(１、175% w／v BaＣｌ 2 ·2H 2 O)0、５ml, 加到99、5ml的０、18 mol/Ｌ(0.3６N)H 2SＯ 4 (1％v/ｖ)溶液中,制成比浊管;(2) 用光径为1cｍ的分光光度计测定光吸收来标定比浊管。0、5麦氏标准比浊管在６25nｍ波长的吸收光度应为0、0８-0、1;(3)选管径与制备菌液试管相同的螺口试管,每管分装4-6ml;(4)将试管帽拧紧,放室温暗处保存;(5)用前,将比浊管在旋转振荡器上混匀。如出现大颗粒,应更换;(6)每个月更换比浊管或复检比浊管的浊度。 ５操作步骤 5、1 制备接种菌液 5、1、１增菌法步骤如下:(1)选琼脂平板上形态相同的菌落至少4-5个,用接种环挑其顶部,移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中;(２)置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度(一般需2－6小时),浓度约1－２×10８CFU/ml;(３)用生理盐水或肉汤校正菌液浓度,与比浊管相同。可用光电比浊。目测比浊须在适当光照下以黑色线条为反衬。 5、１、2 直接菌悬液法步骤如下:(1)做常规药敏试验,可直接用过夜培养的菌落(必须用无选择性培养基平板,如普通琼脂培养基)在盐水或肉汤中制备接种菌液。菌液浓度调至0、5麦氏管;(2)此法适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌与链球菌及葡萄球菌的甲氧苯青霉素或苯唑青霉素的耐药试验;(３)当用此法做复方磺胺药的试验时,从平板上直接挑菌落时会携带相当量的拮抗剂,造成敏感菌株的抑菌环内出现轻微的生长菌膜。 ５.2 接种平板步骤如下:(1)校正的菌液须在15分钟内使用。用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次,去掉过多的菌液;(2)用试子涂布整个琼脂平板表面,反复涂布几次,每次将平皿旋转60度,保证涂布均匀。(3)将平皿盖打开3-5分钟,使培养基表面的水份吸收掉。然后贴药敏纸片;(4)注意:避免用过浓的菌液,禁用未经稀释菌或其她不标准菌液接种平板。 5、３贴纸片 (1)接种平板后,贴上药敏纸片。用镊子或针尖压一下纸片使其与培养基表面贴牢。纸片要贴得均匀,纸片与纸片中心距离不得小于24mm。原则上,直径150ｍm得平板贴１2张纸片,直径100mm平板贴5张纸片。纸片贴后不应再移动,因为有些药物会立即扩散;(2)贴上纸片15分钟内,须把平板倒放在35℃恒温箱中。因为抑菌环解释标准就是在普通环境中标定的,所以除嗜血杆菌与淋病 奈瑟氏菌外,平板不可放在高CO ２的环境中。ＣO 2 与某些因素作用可使抑菌环增 大。 5、4 读取结果 (１)经16-18小时培养后,观察结果。菌液浓度适合且涂得好,抑菌环规则,细菌呈融合生长。如果出现单个菌落,说明接种量小,需重做试验,测量抑菌环直径须包含纸片直径:手持平皿从背面目测检查每块平板,借反射光(黑色无放光背景),用卡尺、普通尺或特制的模板量取抑菌环直径,单位为毫米。培养基中如果加了血液,须打开平皿盖,借反射光,从正面量抑菌环。如果就是葡萄球菌或肠球菌,须培养２4小时后,经投射光检查苯唑青霉素与万古霉素的抑菌
临床微生物检验报告单的解读
首先，准确鉴定病原菌、报告药敏试验结果，给临床选择用药提供科学的参考依据，是我们微生物实验室不可推卸的责任，但在药物的选择和实际应用过程中多了解一些微生物及药理方面的知识，可能会对临床治疗起到事半功倍的效果。特别是在痰及咽拭子的培养鉴定中，由于多种条件致病菌的存在，是否引起感染、是否需要抗菌治疗，都需要临床医生综合分析后判断，以下几点是临床工作中可能会遇到的问题： 1、有些临床常用药物药敏试验中没有 例：头孢哌酮/舒巴坦为广谱抗菌药物，主要用于治疗革兰氏阴性杆菌，如大肠埃希菌等。CLSI 规定其对肠杆菌科细菌的判定折点为≤15 耐药，≥21 敏感，所以我们将其加入到肠杆菌科细菌药敏谱中，但由于头孢哌酮/舒巴坦对葡萄球菌等革兰氏阳性球菌CLSI 没有判定折点，所以无法判定其对于葡萄球菌敏感或是耐药，也不应该加入葡萄球菌药敏试验中。 2、有些新药没有列入药敏谱 首先，新药由于刚刚推广，还没有列入CLSI 的监测范畴，没有依据加以判断。其次，药敏谱中各类各代抗生素都具有一定代表性，不能面面俱到，如喹诺酮类二代抗菌药物环丙沙星在药敏试验中敏感，那么对于三代超光谱抗生素左氧氟沙星、司帕沙星等临床医生可根据需要加以选择。 3、细菌的天然耐药有些菌属或菌种对某些抗菌药物天然耐药或固有耐药，该耐药性具有种属特异性。 ⑴肠球菌：对除青霉素、氨苄西林以外的所有青霉素类、头孢菌素类抗生素天然耐药。 ⑵嗜麦芽窄食单胞菌：对亚胺培南（泰能）、美罗培南天然耐药。 ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药。 ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然耐药。 ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、复方新诺明、头孢 1 代、头孢2 代天然耐药。 更为特殊的是，铜绿假单胞菌对三代的头孢噻肟和头孢曲松即使药敏试验敏感，在实际临床治疗中也需要超大剂量才会取得疗效，但人体对超大剂量的三代头孢不具有长时间的耐药性。铜绿假单胞菌有对很多药物的诱导耐药性，在初期可能没有表现出来，一旦接触某种抗生素，沉睡的基因被激活，耐药性表现出来，这种特性在β-内酰胺类抗生素中尤为明显，可能在体外试验敏感，在实际治疗中却无效，所以采用头孢噻肟和头孢曲松进行治疗时就要冒险，这在临床上是首先要规避的。 充分了解抗菌药物体内疗效与体外药敏试验的差异和药敏试验的局限性，意在找到一定的原因和规律性，在使用广谱抗菌药物之前，应先采集标本送检，再根据药敏试验结果和临床疗效调整给药方案，使临床应用抗菌药物趋向合理，减少用药的盲目性和随意性，提高疑难危重病人的救治成功率。 合理使用抗菌药物需要综合考虑多方面因素，绝不是一份药敏试验报告所能完全概括的，其中的临床思维和临床操作都十分复杂，要想使我们的抗生素应用更加科学、合理、有效，这需要微生物实验室和临床科室的共同努力，我们也将不断学习、更新微生物检测、试验及药理方面的知识，力争为临床科室提供更有价值的参考依据。
细菌对抗菌药物敏感试验
怀化医专《微生物学检验》教案编号：10
细菌对抗菌药物敏感试验 药敏试验(antimicrobial susceptibility,AST) （一）概念：在体外检测药物抑制或杀死细菌能力的试验。 （二）检测意义： 1、疾病的治疗：指导用药。 2、耐药菌检测和流行病学调查。 3、评价新药抗菌作用。 4、某些菌种的鉴定。 第一节临床常用的抗菌药物 抗菌药物：是指具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。 一、青霉素类抗生素： 青霉素种类抗菌活性 1、天然青霉素不产青霉素酶的G+G-球菌、普雷沃菌等。 青霉素G、青霉素V 2、耐青霉素酶青霉素产青霉素酶的G+G-球菌 甲氧西林、奈夫西林、苯唑西林等 3、广谱青霉素青霉素G敏感细菌、大部分大肠埃希菌、 氨苄西林、阿莫西林奇异变形杆菌、流感嗜血杆菌等G-菌 替卡西林、羧苄西林、氨苄西林无效的G-菌，产β-内酰胺酶 美洛西林、派拉西林克雷伯菌、铜绿假单胞菌、肠杆菌、厌氧菌 二、头孢菌素类抗生素： 1、第一代头孢菌素 （头孢噻啶、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢羟氨苄等） 作用：对G+菌作用强，如金葡菌、链球菌等。 2、第二代头孢菌素 （头孢羟唑、头孢呋辛、头孢克洛、头孢尼西、头孢雷特等） 作用：产青β-内酰胺酶G-菌有作用，如肠杆菌科细菌，铜绿假单胞菌等。 3、第三代头孢菌素 注射用头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢派酮：对产青β-内酰胺酶G-菌有很大
抗菌活性。 口服用头孢克肟、头孢布坦等：对肠球菌、铜绿假单胞菌及不动杆菌无用。 4、第四代头孢菌素（头孢匹罗、头孢匹美） 作用：对肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌作用强。 三、其它β-内酰胺类抗生素： 1、单环β-内酰胺类抗生素（氨曲南、卡芦莫南） 对G-菌作用强 2、头霉素类：对G+菌、厌氧菌作用较好 氧头孢烯类抗生素：抗菌谱广，对产β-内酰胺酶G-菌作用强，对产酶的金葡菌有效3、碳青酶烯类抗生素（亚胺培南、米洛培南等） 广谱（最广），抗菌活力强 4、β-内酰胺酶抑制剂（克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦） 与β-内酰胺类抗生素联用能增强后者的抗菌活性。 四、氨基糖苷类抗生素： 链霉素、卡那霉素、妥布霉素、庆大霉素、奈替米星、阿米卡星等 作用：对需氧G-杆菌有强大抗菌活性 对沙雷菌属、气单胞菌属、产碱杆菌、不动杆菌属、分枝杆菌属也有一定抗菌活性。但对G-球菌效果差。 五、喹诺酮类抗生素： 第一代：（新恶酸等）窄谱抗生素（G-） 第二代：（环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等）对G+G-菌均有作用。 第三代：（斯帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星等）超广谱抗生素。 六、大环内酯类抗生素： 红霉素、麦迪霉素、乙酰螺旋霉素等 作用：和青霉素相似，主要是G+菌、厌氧菌。 新一代：克拉霉素、罗红霉素、地红霉素、氟红霉素、阿齐霉素等。 七、四环素、氯霉素、林可酰胺类抗生素： 八、糖肽类抗生素 九、磺胺类药物及其增效剂
微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程
微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程1．目的 规范药物敏感性试验标准操作规程，确保药敏结果准确。 2．原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后会不断的向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 3．试剂 M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、标准比浊管或比浊仪。 4．质控 4.1 常用细菌药敏质控标准菌株参见CLSI规定。 4.2 质控菌株每日随临床标本一起进行药敏试验，测定质 控菌株的抑菌环。质控菌株的抑菌环在允许范围之内，说明结果可信。 4.3 质控的频率由于纸片法药敏试验是很稳定的，在不 失控的时候，可以每周作1～2次质控菌株的测定。如果发现有失控的情况，就必须每日做1次，寻找失控的原因
并予以纠正。如果连续30日失控<3次的，可以恢复每周1次。 5.操作步骤 5.1 挑取4～5个纯培养菌落，接种于3～5ml M-H肉汤（0.5麦氏单位）中，经35℃培养6～8h。 5.2 用无菌生理盐水或M-H肉汤校正菌液浊度，使其与标准比浊管的浓度相同。 5.3 用无菌棉拭蘸取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个M-H平板表面，再重复两次，每次旋转平板60°，使整个平板涂布均匀，最后用棉拭涂布平板四周缘一圈。 5.4 涂布菌液的平板于室温中干燥3～5分钟后，用纸片分配器或无菌镊子取药敏纸片，贴于平板表面，并用镊尖轻压一下纸片，使其贴平。每张纸片的间距不小于24mm，纸片的中心距平板的边缘不小于15mm，直径90mm的平板宜贴6张药敏纸片。 5.5 将贴好纸片的平板置35℃孵育18～24小时后，用卡尺量取抑菌圈直径。个别菌孵育温度，时间及条件应按照CLSI规定。 6.结果判断 7.根据CLSI M100最新标准将所测抑菌圈的大小，报告为敏感（S）、中介/中敏（I）或耐药（R）。
微生物检验报告的解读
微生物检验报告的解读 首先，准确鉴定病原菌、报告药敏试验结果，给临床选择用药提供科学的参考依据，是我们微生物实验室不可推卸的责任，但在药物的选择和实际应用过程中多了解一些微生物及药理方面的知识，可能会对临床治疗起到事半功倍的效果。特别是在痰及咽拭子的培养鉴定中，由于多种条件致病菌的存在，是否引起感染、是否需要抗菌治疗，都需要临床医生综合分析后判断，以下几点是临床工作中可能会遇到的问题： 1、有些临床常用药物药敏试验中没有 例：头孢哌酮/舒巴坦为广谱抗菌药物，主要用于治疗革兰氏 阴性杆菌，如大肠埃希菌等。CLSI规定其对肠杆菌科细菌的判定折点为≤15耐药，≥21敏感，所以我们将其加入到肠杆菌科细菌药敏谱中，但由于头孢哌酮/舒巴坦对葡萄球菌等革兰氏阳性球菌CLSI没有判定折点，所以无法判定其对于葡萄球菌敏感或是耐药，也不应该加入葡萄球菌药敏试验中。 2、有些新药没有列入药敏谱 首先，新药由于刚刚推广，还没有列入CLSI的监测范畴，没有依据加以判断。其次，药敏谱中各类各代抗生素都具有一定代表性，不能面面俱到，如喹诺酮类二代抗菌药物环丙沙星在药敏试验中敏感，那么对于三代超光谱抗生素左氧氟沙星、司帕沙星等临床医生可根据需要加以选择。 3、细菌的天然耐药 有些菌属或菌种对某些抗菌药物天然耐药或固有耐药，该耐药性具有种属特异性。 ⑴肠球菌：对除青霉素、氨苄西林以外的所有青霉素类、头孢 菌素类抗生素天然耐药。 ⑵嗜麦芽窄食单胞菌：对亚胺培南（泰能）、美罗培南天然耐药。 ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药。 ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然耐药。 ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、复 方新诺明、头孢1代、头孢2代天然耐药。 更为特殊的是，铜绿假单胞菌对三代的头孢噻肟和头孢曲松即使药敏试验敏感，在实际临床治疗中也需要超大剂量才会取得疗效，但人体对超大剂量的三代头孢不具有长时间的耐药性。铜绿假单胞菌有对很多药物的诱导耐药性，在初期可能没有表现出来，一旦接触某种抗生素，沉睡的基因被激活，耐药性表现出来，这种特性在β-内酰胺类抗生素中尤为明显，可能在体外试验敏感，在实际治疗中却无效，所以采用头孢噻肟和头孢曲松进行治疗时就要冒险，这在临床上是首先要规避的。 充分了解抗菌药物体内疗效与体外药敏试验的差异和药敏试验的局限性，意在找到一定的原因和规律性，在使用广谱抗菌药物之前，应先采集标本送检，再根据药敏试验结果和临床疗效调整给药方案，使临床应用抗菌药物趋向合理，减少用药的盲目性和随意性，提高疑难危重病人的救治成功率。 合理使用抗菌药物需要综合考虑多方面因素，绝不是一份药敏试验报告所能完全概括的，其中的临床思维和临床操作都十分复杂，要想使我们的抗生素应用更加科学、合理、有效，这需要微生物实验室和临床科室的共同努力，我们也将不断学习、更新微生物检测、试验及药理方面的知识，力争为临床科室提供更有价值的参考依据。
实验六抗菌药物的体外药效试验
实验六、抗菌药物的体外药效试验 （药敏试验） 各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验 （Kirby-BaueerDiceDiffusion）；最低抑菌浓度试验（MinimumInhibitoryConcentration,MIC）和最低杀菌浓度试验（MinimumBactericidalConcentration,MBC）。 ［目的要求］ 1、熟悉体外抗菌试验操作技术。 2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。 ［实验原理］ 常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。 1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。革兰氏阴性球菌如淋球菌等。革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。
微生物实验报告
《脓汁和粪便标本中病原菌的检测》 实验目的：本次脓汁粪便标本中病原微生物的检测实验，旨在通过培养基制备，病原菌的分离与培养，以及细菌鉴别实验如革兰氏染色法，血浆凝固酶试验，药敏试验，半固体接种法实验，从而对医学微生物学主要的研究方法和手段有一定程度的了解，初步掌握微生物试验的基本技能和原理，也有助于无菌观念的树立。 1.实验器材： 接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、生物显微镜、电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子 2.实验方法与步骤： 2.1培养基的制备、消毒和灭菌 培养基制备的一般程序： ①调配→溶化→矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。 ②干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→灭菌→检定→保存。 ③如下图表格内容要求所示制备培养基。 表一 组号培养基称量 (g) 水量 (ml) 煮沸 (次) 分装 (ml) 备注（40人份） 1 营养琼脂11.4 300 4瓶，500ml瓶，平板 2～4 营养琼脂 2.9 75 3 5 15支，中试管，斜面 5～7 营养肉汤 1.1 50 1 3 15支，小试管，液体 8～10 半固体 1.5 50 3 3 15支，小试管，高层2．2细菌的分离与培养 2.2.1采用平板划线分离法，取脓汁标本在普通平板表面划线，取粪便标本在伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37℃培养18～24h ，从而分离出单个菌落。 2.2.2观察形成菌落的大小、形状、边缘、表面、颜色。 2.2.3细菌的纯培养：取脓汁标本在普通平板上的黄色、白色单菌落，粪便标本在伊红美蓝平板上的紫黑色、淡粉红色单菌落接种在四个斜面培养基，标记，在37℃培养18h。 2.3细菌个体形态特征的观察 2.3.1革兰染色法观察细菌形态。涂片→干燥→固定→染色。涂片：取一玻片在玻片的左右两侧上加生理盐水3～4ul，2滴，分别取黄色和紫黑菌菌苔少许（1mm小菌落的半量）与左右两侧盐水混匀，涂成1cm2。干燥：在空气中放置至干燥。固定：在酒精灯上来回横穿2到3次对其进行固定。染色：结晶
细菌药敏试验实验报告解读
细菌药敏试验实验报告解读 “医院有的药物不做药敏实验，医院没有的药物做什么药敏实验？”在临床上经常能听到临床医生们抱怨。“药敏报告显示敏感的药物，而临床治疗无效？”有时也让大夫们感到不解。这些问题使得临床医师不知道如何选择抗菌药物，那么如何正确解读药敏报告，合理选择抗菌药物报告呢。 我们先来了解几个概念： 最低抑菌浓度（MIC）：测量抗菌药物的抗菌活性大小的一个指标，指在体外培养细菌18至24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度。 最小杀菌浓度（MBC）：抗菌药物能能使受试菌最初的活菌总数减少99.9%以上所需要的最低抗菌药物浓度。 折点：是最低抑菌浓度或者抑菌圈直径，用于区分离株为敏感、剂量依赖性敏感、中介、非敏感还是耐药 敏感（S）：通过折点来定义，指当对感染部位采用推荐剂量时，具有MIC值等于或低于敏感折点（或抑菌圈等于或高于敏感折点）的菌株通常可被抗菌药物所达到的浓度水平所抑制，产生可能的临床疗效。 中介（I）：通过折点来定义，包括这些MlC或者抑菌圈直径在中介范围内的菌株，其抗菌药物MIC接近于血液和组织中通常可达到的水平，而抗菌药物治疗的疗效可能低于敏感株。耐药（R）：通过折点来定义，指按常规用药方案，在药物通常可达到的浓度水平时，菌株不能被抑制，表明MIC值或抑菌圈直径可能在一个产生了某种特殊的耐药机制(如β-内酰胺酶）的范围内，而且治疗研究显示该药的临床疗效不可靠。 多重耐药（MDR）：是指有多重耐药性的病原菌。其定义为一种微生物对三类（比如氨基糖苷类、大环内酯类、β－内酰胺类、喹诺酮类等）或三类以上抗菌药物同时耐药，而不是同一类的三种。 泛耐药(XDR)：广泛耐药细菌指细菌对常用抗菌药物几乎全部耐药，革兰氏阴性杆菌仅对黏菌素和替加环素敏感，革兰氏阳性球菌仅对糖肽类和利奈唑胺敏感。 全耐药（PDR）：泛耐药细菌指对所有分类的抗菌药物全部耐药，革兰氏阴性杆菌对包括黏菌素和替加环素在内的全部抗菌药物耐药，革兰氏阳性球菌对包括糖肽类和利奈唑胺在内的全部抗菌药物耐药。 药敏试验目的 使用体外试验的方法检测细菌的耐药性，预测抗菌药物临床治疗效果并为临床医生针对某一特定感染问题选用药物提供依据。 判断标准
微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程
微生物检验实验室药物敏感性试验标准操作规程 1．目的 规范药物敏感性试验标准操作规程，确保药敏结果准确。2．原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后会不断的向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。 3．试剂 M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、标准比浊管或比浊仪。 4．质控 4.1 常用细菌药敏质控标准菌株参见CLSI规定。 4.2 质控菌株每日随临床标本一起进行药敏试验，测定质控菌株的抑菌环。质控菌株的抑菌环在允许范围之内，说明结果可信。 4.3 质控的频率由于纸片法药敏试验是很稳定的，在不失控的时候，可以每周作1～2次质控菌株的测定。如果次，
寻找失控的原因1发现有失控的情况，就必须每日做 并予以纠正。如果连续30日失控<3次的，可以恢复每周1次。 5.操作步骤 5.1 挑取4～5个纯培养菌落，接种于3～5ml M-H肉汤（0.5麦氏单位）中，经35℃培养6～8h。 5.2 用无菌生理盐水或M-H肉汤校正菌液浊度，使其与标 准比浊管的浓度相同。 5.3 用无菌棉拭蘸取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个M-H平板表面，再重复两次，每次旋转平板60°，使整个平板涂布均匀，最后用棉拭涂布平板四周缘一圈。 5.4 涂布菌液的平板于室温中干燥3～5分钟后，用纸片分 配器或无菌镊子取药敏纸片，贴于平板表面，并用镊尖轻压一下纸片，使其贴平。每张纸片的间距不小于24mm，纸片 的中心距平板的边缘不小于15mm，直径90mm的平板宜贴 6张药敏纸片。 5.5 将贴好纸片的平板置35℃孵育18～24小时后，用卡尺量取抑菌圈直径。个别菌孵育温度，时间及条件应按照CLSI 规定。 6.结果判断 7.根据CLSI M100最新标准将所测抑菌圈的大小，报告为。）
抗菌药物敏感试验题库1-2-10
抗菌药物敏感试验题 库1-2-10
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列可使K-B法抑制圈直径扩大的因素是（）. A.测量时未经过纸片中心 B.接种细菌浓度为1麦氏比浊 C.孵育时间36小时 D.药敏纸片失效 E.培养基厚度为3mm 纸片扩散法若菌悬液浓度若超过0.5麦氏浊度，若药敏纸片效力下降、测量时不经过纸片中心、细菌过度生长均可使抑菌圈变小，若MH培养基厚度不够4mm，则细菌生长不良使抑菌圈增大。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]耐甲氧西林表皮葡萄球菌是（）. A.MRS B.MRSA C.MRSE D.MRCNS E.SPA 耐甲氧西林表皮葡萄球菌（methecillinresistancestaphylococcusepidermidis），缩写即MRSE。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]容易引起过敏性休克的药物是（）. A.SMZTMP B.磷霉素 C.克林霉素 D.加替沙星 E.青霉素 青霉素或其降解产物、青霉素制剂中污染物所致过敏症。青霉素衍生物（如青霉酸）与蛋白质结合，形成青霉噻唑酰基衍生物，可作为半抗原，主要引起Ⅰ型超敏反应。 (辽宁11选5 https://www.360docs.net/doc/b51707148.html,)
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]下列既是ESBLs的主要产生菌，又是泌尿系统感染主要病原菌的是（）. A.大肠埃细菌 B.肺炎克雷伯菌 C.阴沟肠杆菌 D.铜绿假单胞菌 E.伤寒沙门菌 大肠埃希菌既是ESBLs的主要产生菌，又是泌尿系统感染的主要病原菌。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]K-B法试验中，头孢他定的抑菌环直径为20mm，头孢噻肟的抑菌环直径为22mm，正确判断是（）. A.报告头孢他定和头孢噻肟都敏感 B.报告头孢他定耐药，头孢嚷肟敏感 C.可排除该菌产生ESBLs D.怀疑该菌产生ESBLs E.可确认该菌为ESBLs菌株 筛选产ESBL菌时对头孢泊肟、头孢他啶抑菌圈≤22mm或氨曲南、头孢噻肟≤27mm时高度怀凝，需进行ESBL确证实验。