食品中还原糖的测定
第九章食品中还原糖的测定
【教学目标】：
1.掌握还原糖的概念和相关知识
2.能正确地配置和标定标准葡萄糖液、碱性酒石酸铜溶液和高锰酸钾溶液，熟练掌握滴定的操作技能。
食品中常见的碳水化合物的种类很多，可分为单糖、双糖和多糖，不同品种的食品中所含糖类物质的品种及数量上有较大的差异。
一、标准方法(GB 5009 7-85)
（一）高猛酸钾滴定法
1.原理
样品经除去蛋白质后，其中还原糖把铜盐还原为氧化亚铜，加酸性硫酸铁后，再把氧化亚铜氧化为铜盐，以高猛酸钾溶液滴定生成的亚铁盐，根据高猛酸钾溶液消耗量，计算氧化亚铜含量，再查表得还原糖量。
2.试剂
（1）碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g硫酸铜（CuSO4?5H2O）,加适量水溶解，加0.5mL,硫酸，再加水稀释至500mL，用精制石棉过滤。
（2）碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3）精制石棉：取石棉，先用3moL/L盐酸浸泡2-3d，用水洗净，再加10%氢氧化钠溶液浸泡2-3d，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时，用水洗净。以3moL/L盐酸浸泡数小时，用水洗至不呈酸性。然后加水振摇，使成微细的浆半软纤维，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用作填充古氏坩埚用。
（4）高锰酸钾标准滴定溶液[c(1/5KmnO4)=0.1000moL/L]。
（5）氢氧化钠溶液（40g/L）：称取4g氢氧化钠，加水溶解并稀释至100mL。
（6）硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200mL水溶解后，慢慢加入100mL硫酸，冷后加水稀释至1000mL。
（7）3moL/L盐酸：取30mL盐酸，加水稀释至120mL。
3.仪器
（1）25mL古氏坩埚或G4垂融坩埚。
（2）真空泵或水泵。
4.操作方法
（1）样品处理
①乳类、乳制品及含蛋白质的冷食等。称取约2.5-5.0g固体样品(吸取25.00-50.00mL液体样品)，置于250mL容量瓶中，加50mL水，摇匀后加10mL碱性酒石酸铜甲液及4mL(40g/L)氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置30min,用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
②酒精性饮料。吸取100.0mL样品，置于蒸发皿中，用(40g/L)氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积的1/4，移入250mL容量瓶中，加50mL水，混匀，加10mL碱性酒石酸铜甲液及4mL(40g/L)QING氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀，静至30min,用干燥滤纸过滤，弃去除滤液，滤液备用。
③含多量淀粉的食品。称取10.00-20.00g样品，置于2500mL容量瓶中，加200mL水，在45℃水浴中加热1h，并时时振摇。冷后加水至刻度，混匀，静置。吸取200mL上清液于另一250mL 容量瓶中，加入10mL碱性酒石酸铜甲液及4mL(40g/L)氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置30min,用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
④汽水等含有二氧化碳的饮料。吸取100.0mL样品，置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250mL容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。
（2）测定50.00mL 处理后的样品溶液于400mL 烧杯中，加入25mL 碱性酒石酸铜甲液及25mL 乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热，控制在4min 内沸腾，再准确煮沸2min ，趁热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不呈碱性为止。将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400mL 烧杯中，加25mL 硫酸铁溶液及25mL 水，用玻璃棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以高猛酸钾标准溶液[c(1/5KmnO 4)= 1.000moL/L]滴定至微红色为终点。
同时吸取50mL 水，加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲液、乙液，硫酸铁及水，按同一方法做试剂空白试验。 5.计算
X 1=(V-V 0)×c ×71.54………………………（3-12） 式中：X 1---样品在还原糖质量相当于氧化亚铜的质量，mg ；
V---样品液消耗高锰酸钾标准滴定溶液的体积，mL ； V 0---试剂空白消耗高锰酸钾标准滴定溶液的体积，mL; c---高锰酸钾标准滴定溶液的浓度,moL/L ；
71.54---1mL 高锰酸钾标准滴定溶液[c(1/5KmnO 4)=1.000moL/L]，相当于氧化亚铜的质量，mg 。
根据式（3-12）中计算所得的氧化亚铜质量，查表3-1氧化亚铜质量相当于葡萄糖、果糖、乳糖、转化糖的质量表，再计算样品中还原糖的含量。
1001000
250
1
21
2???=
V m m X ………………………（3-13）
式中：X 2---样品中还原糖含量，g/100g ； m 1---查表得还原糖质量，mg ； m 2---样品质量（或体积），g(mL)；
V 1---测定用样品处理液人体积，mL ；250---样品处理后的总体积 mL 。
6、说明
（1）还原糖能在碱性溶液中将两价铜离子还原为棕红色的氧化亚铜沉淀，而糖本身被211.7氧化为相应的羧酸。这是还原糖定量测定的基础。
（2）氧化亚铜沉淀的量与还原糖的量成正比，计算氧化亚铜沉淀方法很多，高酸钾滴定法是其中之一。当样品中的还原糖与Cu2+作用后，生成定量的氧化亚铜沉淀，收集、清洗沉淀，将其置于硫酸中，加入硫酸铁与氧化亚铜作用，硫酸铁还原成硫酸亚铁，用高锰酸钾标准溶液滴定生成的硫酸亚铁，终点为粉红色。根据消耗的高锰酸钾量可计算氧化亚铜质量，再表3-1可计算出样品中还原糖的量。
（3）样品的处理：应除去蛋白质、脂肪、乙醇、二氧化碳、纤维素、淀粉等。
（4）还原糖与碱性酒石酸铜试剂作用，必须加热至沸腾下进行，因此加热至沸时间及保持沸腾时间是需要严格控制的条件，并保持一致。
（5）煮沸后溶液应保持蓝色，使碱性酒石酸铜过量，使还原糖完全反应。
（6）在古氏坩埚中铺好精制石棉，必须密实，以免使氧化亚铜沉淀损失。
（7）高锰酸钾法测定食品中的还原糖测定结果准确性较好，但操作繁琐费时，并在抽滤过程在应注意防止氧化亚铜沉淀暴露于空气中而氧化，将沉淀终保持在液面下，严格掌握反应条件。
（二）直接滴定法
1.原理
样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液，以次甲基蓝作指示剂。根据磁品液消耗体积，计算还原糖量（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液）。
2.试剂
（1）碱性酒石酸铜甲液：称取15.00g硫酸铜（CuSO4?5HO2）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。
（2）碱性酒石酸铜乙液：称取50.00g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g
亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL ，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
（3）乙酸锌溶液：称取21.9g 乙酸锌，加3mL 冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL 。 （4）亚铁氰化钾溶液（106g/L ）。 （5）盐酸。
（6）葡萄糖标准溶液：精密称取1.000g 经过98-100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL 盐酸，并以水稀释至1000mL 。此溶液每毫升相当于1.0mg 葡萄糖。 （7）果糖标准溶液：按（6）配制。
（8）转化糖标准溶液：准确称取1.0526g 纯蔗糖，用100mL 水溶解，置于具塞三角瓶中，加5mL 盐酸（1+1）在68-70℃水浴中加热15min ，放置室温定容至1000mL ，每毫升标准溶液相当于1.0mg 转化糖。 3.仪器
（1）酸式滴定管；
（2）可调式电炉（带石棉板）。 4.操作方法 （1）样品处理
①乳类、乳制品及含蛋白质的冷食类：称取约2.50-5.00g 固体样品（德阳取25.00-50.00mL 液体磁品），置于250mL 容量瓶中，加50mL 水，慢慢加入5mL 乙酸锌溶液及5mL 亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀，静置30min ，用干燥小滤纸，弃去初滤液，渡液备用。
②酒精性饮料：吸取100.00mL 样品，置于蒸发皿中，用氢氧化钠（40m/L ）溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积的1/4后，移入250mL 容量瓶中，加水至刻度。
③含多量淀粉的食品：称取10.00-20.00mL 样品置于250mL 容量瓶中，加200mL 水，在45℃水浴中加热1h ，并时时振摇。冷却后加水至刻度，混匀，静置、沉淀，滤液备用。 ④汽水等今吸二氧化碳的饮料：吸取100.0mL 样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250mL 容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，各用。 （2）标定碱性酒石酸铜溶液：吸取5.00mL 碱性酒石酸铜甲液及5.00mL 乙液，置于150mL 锥形瓶中，加水10mL ，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL 葡萄糖标准溶液，控制在2min 内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖或其他还原糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL(甲，乙液各5mL)碱性酒石酸铜溶液葡萄糖的质量或其他还原糖的质量（mg ）.
X 3=V 3×m 3……………… （3-14）
式中：X 3---10mL(甲、乙液各5mL)碱性洒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，mg; V 3---平均消耗还原糖标准溶液的体积，mL ；
m 3---1mL 还原糖标准溶液相当于还原糖的质量，1mg 。 （3）样品液预测：吸取5.00mL 碱性酒石酸铜甲液及5.00mL 乙液，置于150mL 锥形瓶中，加水10mL ，加入玻璃珠2料，控制在2min 内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液产，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积（样品中还原糖浓度根据预测加以调节，以0.1g/100g 为宜，即控制样液消耗体积在10mL 左右，否则误差大）。
（4）样品溶液的测定：吸取5.00mL 碱性酒石酸铜甲液及5.00mL 乙液置于150mL 锥形瓶中，加水10mL ，加入玻璃珠2粒，从滴定管加比预测体积少1mL 的样品溶液，控制在2min 内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。同法平行操作三次，待平均消耗体积。 5.计算
1001000
250
54
44??=
?V m m X ……………………（3-15）
式中：X 4---样品中还原糖的含量（以某种还原糖计），g(mL);
m4---10mL碱性酒石酸铜溶液（甲、乙液各5ML）还原糖（以葡萄糖计）的质量，mg;
m5---样品质量（或体积），g(mL);
V4---测定时平均消耗样品溶液体积，mL;
250---样品液总体积，mL。
6.说明
（1）本法为直接滴定法，经过标定的定量的碱性酒石酸铜试剂，可与定量的还原糖作用，根据样品溶液消耗体积，可计算样品中还原糖含量。
（2）亚甲基蓝本身也是一种氧化剂，其氧化型为蓝色，还原型为无色，当它的氧化能力比碱性酒石酸铜更弱，还原糖将溶液中碱性酒石酸铜耗尽时，稍微过量一点点的还原糖会将亚甲基蓝还原，变为无色状态，指示滴定终点，其反应是可逆的，当空气中的氧与无色亚甲基蓝结合时，又变为蓝色。滴定时要保持沸腾状态，使上升蒸汽阻止空气侵入溶液中。（3）加入少量亚铁氰化钾，可使生成的红色氧化亚铜沉淀络合，形成可溶性络合物，消除观察红色沉淀对滴定终点的干扰，使终点变色更明显。
（5）本法对滴定操作条件要求很严。对碱性酒石酸铜溶液的标定，样品液必须预测，样品液测定的操作条件与预测条件均应保持一致。对每一次滴定所使用的锥形瓶规格、加热电炉功率、滴定速度、预加入大致体积、终点的确定方法等都尽量一致，以减少误差，并将滴定所需体积的绝大部分先加入碱性酒石酸铜试剂中共沸，使其充分反应，仅留1mL左右进行滴定，并判断终点。
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法 一、目的 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 二、原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1. 实验材料 小麦面粉；精密pH 试纸。 2. 主要仪器 （1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11
（2）大离心管：50mL×2 （3）烧杯：100mL×1 （4）三角瓶：100mL×1 （5）容量瓶：100mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1 （7）恒温水浴锅 （8）沸水浴 （9）离心机 （10）扭力天平 （11）分光光度计 3. 试剂 （1）1mg/mL 葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。 （3）碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100mL蒸馏水中。 （4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250mL70%乙醇中。 （5）6M HCl 和6M NaOH各100mL。 四、操作步骤 1. 制作葡萄糖标准曲线 取7支20mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
还原糖检测注意事项
还原糖检测注意事项 1.费林试剂甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。 2.滴定必须是在沸腾条件下进行，其原因一是加快还原糖与Cu2＋的反应速度；二是亚甲基蓝的变色反应是可逆的，还原型的亚甲基蓝遇空气中的氧时会再被氧化为氧化型。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中的氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免亚甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加消耗量。 3.滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。 4.本方法测定的是一类具有还原性质的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等，只是结果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示，所以不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知样品中只含有某一种糖，如乳制品中的乳糖，则可以认为还原糖=某糖。 5.分别用葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖标准品配制标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液，所消耗标准溶液的体积有所不同。证明即便同是还原糖，在物化性质上仍有所差别，所以还原糖的结果只是反映样品整体情况，并不完全等于各还原糖含量之和。如果已知样品只含有某种还原糖，则应以该还原糖做标准品，结果为该还原糖的含量。如果样品中还原糖的成分未知，或为多种还原糖的混合物，则以某种还原糖做标准品，结果以该还原糖计，但不代表该糖的真实含量。 6.乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。如果钙离子过多时，易与葡萄糖、果糖生成络合物，使滴定速度缓慢；从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。）A、裵林试剂的最终标定及样品的最终滴定在1 min内完成. 7.配制葡萄糖标准溶液应非常准确.一定控制好滴定速度.每班测定一次C标，将浓度值填写在记录表格中。滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色（如亮红\亮黄色） 8、碱性酒石酸铜甲液中的硫酸铜的铜离子为此化学反应定量的标物，次甲基兰为氧化还原指示剂（氧化型为蓝色、还原型为无色） 9、此实验为什么要在碱性条件下进行，主要是在酸性条件下，还原糖会形成酯（不具有氧化性或氧化性不强的含氧酸如乙酸）、有机酸（如被硝酸氧化），样液中的二糖及多糖与淀粉会水解成还原糖，结果可想而知。 10、碱性酒石酸铜乙液中的酒石酸钾钠的作用：既然实验得在碱性条件下进行，那么硫酸铜遇碱生成氢氧化铜沉淀后，不能使实验正常进行，必需使其（铜离子）在可溶状态下才行，酒石酸钾钠与铜离子络合就达到了目的。 11、影响实验结果的主要因素为： a)反应液碱度：碱度越高，反应速度越快，样液消耗也越多，故样品测定时样液的滴定体积要与标准相近，原理在此，这样误差要小。 b)锥形瓶规格：不同体积的锥形瓶会致使加热的面积及样液的厚度有变化，同时瓶壁的厚度不同影响传热速率，故有时甚至是同一规格但不同批的锥形瓶也会引起误差。 c)加热功率：加热的目的一是加快反应速度，二是防止次甲基兰与滴定过程中形成的氧化亚铜被氧气氧化，使结果偏高。加热功率不同，样液沸腾时间不同，时间短样液消耗多，同时反应液蒸发速度不同，即时碱度的变化也就不同，故实验的平行性也就受影响。 d)滴定速度：滴定速度越快，样液消耗也越多，结果会偏低。 12、滴定终点有时不显无色而显暗红色，是由于样液中亚铁氰化钾量不够，不能有效络合氧化亚铜成无色的原故。故可在反应液中适量添加亚铁氰化钾，标准与样液添加量一样。13.滴定点是在静止加热沸腾中的颜色瞬间变化，如果人为摇晃会造成额外氧化反应的叠加，造成滴定量加大，结果漂高。用同一型号的滴定锥形瓶作空白，即可避免加热不均造成的热
总糖和还原糖的测定——斐林氏法
总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。 一、目的 学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。 二、原理 还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。 酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。 此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O 亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐 斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。 在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。 三、器材及试剂： 1．器材： ①山芋粉②广范试纸pH1～12。 ③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）
直接滴定法测食品中还原糖实验报告
1.目的 掌握直接滴定法测还原糖的原理、操作、条件及注意事项。 2.原理 样品经前处理提取还原糖，在加热条件下，直接滴定一定量的碱性酒石酸铜标准溶液，以次甲基蓝作指示剂，根据样液消耗体积，计算样品中还原糖量。3.试剂 3.1碱性酒石酸铜标准溶液（还原糖因数f/mg·10mL-1） 3.1.1甲液:称取23.10g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中 并稀释至100mL 3.1.2乙液: 称取115.33g酒石酸钾钠及33.30氢氧化钠，溶于水中，用水稀 释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶中瓶中 3.2乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至 100mL. 加水溶解并稀释至100mL 3.3亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释 至100mL 3.4盐酸 3.5葡糖糖标准溶液：精密称取7.0000g经过98~100℃干燥至恒量的纯葡 萄糖加水溶解，并以水稀释至1000mL.此溶液每毫升相当于7mg葡糖 糖 4.仪器 碱式滴定管、电炉 5.样品 硬糖（m样=5.8002g） 6.操作 6.1样品处理 称取样品5.8002g置于小烧杯中，加40mL水，40℃微热溶解，冷却后加40mL水，调节PH至中性，加水定容至100mL，过滤后收集滤液即为样品溶液。 6.2标定碱性酒石酸铜溶液 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置150mL三角锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，置于电炉上加热至沸（要求控制在2min内沸腾），然而趁热以每秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖的总体积。同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲液乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质
DNS法测定总糖和还原糖
实验九总糖和还原糖的测定（二） ──3,5－二硝基水杨酸法 一、目的要求： 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。 二、实验原理: 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 黄色桔红色 三、试剂和器材 1、试剂 （1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。 （2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 （4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。 （5）0.1% 酚酞指示剂。 （6）6 mol/L HCl溶液 2、材料 小麦淀粉或玉米淀粉。 3、器材 分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。 四、操作方法 1、葡萄糖标准曲线制作
取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。 管号 试剂 0 1 2 3 4 5 6 7 8 葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温， 再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。 λ=540nm处测定吸 光度 以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。 2、样品中还原糖的提取 准确称取0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml 蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 3、样品总糖的水解及提取 准确称取0.5g小麦(淀)粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml 于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。 4、样品中含糖量的测定 试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml)0 1.0 1.0 蒸馏水(ml) 2.0 1.0 1.0 水杨酸(ml) 1.50 1.50 1.50 将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。 λ=540nm处测定吸光度 样品溶液中还原糖和总糖
还原糖和总糖的测定
生物化学综合实验报告 题目：3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖 姓名: 学号： 同组成员： 分院(系)： 专业班级： 指导教师： 完成日期：年 月日
1.实验目的 用比色法测定山芋中还原糖和总糖含量 2.实验原理 先用已知浓度的葡萄糖标准溶液与DNS反应测其分光度，制得标准曲线，在测山芋中糖与DNS反应后的分光度A从而得其总糖和还原糖含量。 3.实验仪器和试剂 试剂：1g/L葡萄糖标准液、3,5-二硝基水杨酸、6mol/L HCl，6mol/L NaOH 仪器：25,100ml容量瓶、1,5ml吸量管、50ml移液管、100ml 量筒、试管、滴管、离心管、玻璃棒、洗耳球、100ml容量瓶、比色皿离心机、分光光度计、恒温水箱 4.实验步骤 一、取六只比色管向其中加入葡萄糖标液0、0.2、0.4、0.6、 0.8、1.0毫升在加入蒸馏水2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0毫升，最后向其中各加入DNS试剂1.5毫升混合均匀后100摄恒温水浴5min，冷却后加入蒸馏水至25ml刻度线，用1号样调零，测其分光度，制得标准曲线。 二、还原糖提取:取3g山芋粉，加入30ml水，搅匀后在50摄水中保温20min，离心，取滤液，用100ml容量瓶定容得还原糖待测液。
总糖提取：取0.2克山芋粉，加入试管中吸取5ml HCL溶液，8ml蒸馏水搅匀，100摄下恒温水浴30min，冷却，NaOH调节PH至中性，离心，滤液用100ml容量瓶定容，得总糖待测液。 测定时取5支比色管分别加入还原糖0、1.0、1.0、0、0毫升，总糖0、0、0、0.5、0.5毫升，蒸馏水2.0、1.0、1.0、1.5、1.5毫升，DNS试剂1.5毫升100摄恒温水浴5min后冷却，稀释至25毫升用一号管调节分光度为0，测总糖和还原糖的分光度。 5数据处理
1食品中还原糖的测定
1、食品中还原糖的测定（碱性铜盐法[直接滴定法、高锰酸钾滴定法]、铁氰化钾法、碘量法、比色及酶法） 掌握直接滴定法 1）原理：试样经处理除去蛋白质后在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液，由于酒石酸铜具有氧化性，加热条件下可以将还原糖氧化成醛酸，而本身还原成氧化亚铜沉淀，使溶液呈蓝色，由于所用指示剂为氧化还原指示剂，当还原糖将二价铜全部还原后，过量的还原糖则可以把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变成无色，即为滴定终点。 2）样品预处理（看实验册！！） 3）步骤：①样品预处理：取样→提取液（50ml水）→250ml锥形瓶→乙酸锌溶液、亚铁氰化钾溶液各5ml→定容、摇匀，静置30min→过滤（弃去初滤液）→滤液备用；②碱性酒石酸铜溶液的标定：碱性酒石酸铜甲乙液各5ml，水10ml于150ml锥形瓶（玻珠3粒）→从滴定管放入9ml葡萄糖标准溶液→加热（2min内沸腾）→准确沸腾30min→用葡萄糖标准溶液以1滴/秒的速度进行滴定→蓝色刚好褪去时记录葡萄糖标准溶液的消耗量（ml）；③样品溶液预测：碱性酒石酸铜甲乙液各5ml，水10ml于150ml锥形瓶（玻珠3粒）→加热（2min 内沸腾）→以先快后慢的速度从滴定管中滴加试样溶液，保持溶液沸腾状态，待颜色变浅，以1滴/2秒的速度滴定，直至溶液蓝色刚好消失为终点，记录样液消耗量（应与标定碱性酒石酸铜溶液时说消耗的葡萄糖标准溶液体积接近，若太高则要适当稀释才进行正式滴定，过低则可以直接加10ml的样液而不加10ml水，在用还原糖标准溶液滴定至终点，记录消耗的体积与标定时消耗的还原糖标准溶液的体积之差，那么一会正式滴定则加这差值）④试样溶液测定：碱性酒石酸铜甲乙液各5ml，水10ml于150ml锥形瓶（玻珠3粒）→从滴定管滴加比预测体积少1ml的试样溶液至锥形瓶→加热（2min内沸腾）→趁沸继续以1滴/2秒的速度滴定→直至溶液蓝色刚好消失为终点，记录样液消耗量（平行三次） 4）主要试剂及作用 ①乙酸锌-亚铁亚铁氰化钾溶液：作为澄清剂，主要是利用乙酸锌和亚铁亚铁氰化钾反应生成的氰亚铁酸锌沉淀带走或吸附干扰物质（主要是蛋白质），这种澄清剂除蛋白质能力强，但脱色能力弱，适合于色泽较浅、蛋白质含量较高的样液澄清，如乳制品、豆制品。 ②酒石酸铜溶液：作为反应物之一参与反应，在颜色变化中其作用。 ③次甲基蓝：氧化还原指示剂，颜色指示作用。 5）计算方法X=[m1/(m2*V*1000)/250]*100，m1——10ml酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量，等于标定酒石酸铜溶液的葡萄糖标准溶液的质量浓度（mg/ml）*标定时消耗的葡萄糖标准溶液的体积（ml）；m2——样品质量（mg）；V——测定时平均消耗样品溶液的体积（ml）；250——样品液总体积（ml） 6）注意事项 ①碱性酒石酸铜甲乙液应分别储存，需要用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。 ②为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入了少量的亚铁氰化钾，使之与氧化亚铜生成可溶性的络合物，而不在析出红色沉淀，消除沉淀对观察滴定终点的干扰，使终点更为明显。 ③本法是以测定过程中的Cu2+量为计算依据，故样品处理时不能用硫酸铜-氢氧化钠溶液为澄清剂，以免引入Cu2+而影响测定结果。 ④滴定必须在沸腾条件下进行，是因为a、可以加快还原糖与Cu2+的反应速度；b、次甲基
实验一 还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定 （3,5-二硝基水杨酸比色法） 一．目的 1.掌握还原糖定量测定的基本原理； 2.学习比色定糖法的基本操作； 3.熟悉分光光度计的使用方法。 二．原理 在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。 三．仪器.试剂和材料 1.仪器： （1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂； （1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH 3.材料：食用面粉 四．操作步骤 将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定 （1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。 （2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml 定容过的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。 六、结果处理 （1）由管○1、○2吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg
食品中还原糖的测定(修改版)
食品中还原糖的测定--直接滴定法 一、实验目的与要求 1．学习直接滴定法测定还原糖的原理，并掌握其测定的方法。 2. 掌握蜂蜜中还原糖的测定的操作技能。 3. 学会控制反应条件，掌握提高还原糖测定精密度的方法。 二、原理 将等量的碱性酒石酸铜甲液、乙液混合时，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀立即与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。此络合物与还原糖共热时，二价铜即被还原糖还原为一价的氧化亚铜沉淀，氧化亚铜与亚铁氰化钾反应，生成可溶性化合物，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原成无色，溶液呈浅黄色而指示滴定终点。根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，以及测定样品液所消耗的体积，计算还原糖含量。 三、试剂、仪器与样品 试剂：除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 1．碱性酒石酸铜甲液：称取7.5 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.025 g次甲基蓝，溶于水中并稀释至500ml。 2．碱性酒石酸铜乙液：称取25 g酒石酸钾钠与37.5 g氢氧化钠，溶于水中，再加入2g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。 3.盐酸溶液（1+1）：量取50mL盐酸加水稀释至100mL. 4.氢氧化钠溶液（40g/L）：称取4g氢氧化钠，加水溶解并稀释至100mL。5．转化糖标准溶液：准确称取1.0526g蔗糖，用100ml水溶解，置具塞三角瓶中，加5ml盐酸（1+1），在68℃-70℃水浴中加热15min,放置至室温，转移到1000ml容量瓶中并定容至1000ml,每毫升标准相当于1.0毫克转化糖。 6．澄清剂：中性醋酸铅：粗称醋酸铅20g，加新煮沸放冷的蒸馏水溶解，再滴加醋酸使溶液澄清，再加水至200ml。往醋酸铅溶液里加入两滴酚酞指示剂，再用氢氧化钠溶液调至微红。注意：醋酸铅试液有毒，禁止用手！ 7．指示剂：次甲基蓝
实验五食品中还原糖的测定
实验八食品(炼乳)中还原糖含量的测定
一、实验目的 1、了解食品中还原糖的含量； 2、学习直接滴定法测定还原糖的原理，并掌握其定糖方法。 3、通过对实验结果的分析，了解影响测定准确性的因素。 二、原理， 食品中的还原糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖、麦芽糖等，还原糖之所以具有还原性，是由于其分子中含有游离醛基(-CHO)或酮基(>C=O)。 测定还原糖的经典化学方法都是以其能被多种试剂氧化为基础的。在这些方法中，以各种根据碱性酒石酸铜溶液氧化作用改进方法的应用最广。本实验就是采用使用碱性酒石酸铜作为氧化剂的直接滴定法。 碱性酒石酸铜溶液A、B二液等体积混合时生成的天蓝色Cu(OH)2沉淀后，立即与酒石酸钾钠起反应生成深蓝色的酒石酸钾钠铜络合物。此络合物与还原糖共热时，二价铜即被还原糖还原为一价的红色氧化亚铜沉淀，氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾反应，生成可溶性化合物，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原成无色，溶液呈淡黄色而指示滴定终点，根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，以及测定样品液所消耗的体积，计算还原糖含量。反应式如下： CuSO4＋2NaOH→Cu(OH)2↓＋Na2SO4 COOK COOK ││ CHOH CHO │＋Cu(OH)2→│Cu＋2H2O CHOH CHO ││ COONa COONa COOK COOK │CHO COOH │ CHO ││CHOH │Cu＋(CHOH)4 →(CHOH)4 ＋│＋Cu2O↓ CHO ││CHOH │CH2OH CH2OH │ COONa COONa 三、仪器与试剂 1、仪器 (1)容量瓶100 ml、250 ml (2)三角瓶250 ml (3)碱式滴定管50 ml或25 ml (4)烧杯100m1 (5)吸管5 ml、50 ml (6)分析天平 (7)电炉1KW可调 (8)恒温水浴锅 2、试剂 (1) 碱性酒石酸铜溶液A液：称取15.00 g硫酸铜(CuSO4·5H2O)(AR)及0.05g次甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释至1000 ml。
淀粉、总糖、还原糖的测定方法
淀粉、总糖、还原糖的测定方法 淀粉的测定方法---蒽酮法 一( 原理 用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。二( 仪器设备 三角瓶50ml 容量瓶100ml 移液管10ml、1ml 漏斗圆底烧瓶1000ml 离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计 三( 试剂 盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮 四、试剂的配制和标准曲线的绘制 1. 葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。 2. 标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液 (100μg/ml)0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线 3. 80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至 500ml 4. 1当量的盐酸配制 43毫升浓盐酸加水定容至500ml 5. 10%氢氧化钠配制 10g氢氧化钠溶于100ml水中 6. 蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱2424
保存2,3周。 五实验步骤 1. 分离出水溶性糖 0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇 80?水浴浸 提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入 8ml80%乙醇。重复三次 2. 水解 残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。 3. 测定 取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色 六结果的计算与表述 C=AN*0.9/W C—样品淀粉含量(μg/g) W—样品重量(g) A—标准曲线查得的糖量(μg) N—样品提取液占样品反应液的倍数 蒽酮比色法测总糖: 实验步骤: 1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80?水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。 2、总糖的测定:取提取液1毫升于试管中(空白中用1毫升蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5毫升，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色。
实验一,3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法 一、实验目的 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 小麦面粉；广范pH试纸。 2．主要仪器 （1）大试管：2×20cm×14 （2）烧杯：100mL×3 （3）三角瓶：100mL×1 （4）容量瓶：100mL×3 （5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4 （6）吸耳球、玻璃棒 （7）恒温水浴锅 （8）漏斗、滤纸 （9）白瓷缸、电炉 （10）精度天平
（11）分光光度计 3．试剂（已制备） （1）1mg/mL葡萄糖标准液 准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。 （3）6mol/L HCl和6mol/L NaOH 。 四、操作步骤 1．制作葡萄糖标准曲线 取7支2×20cm大试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。 将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，用流动水冷却至室温，用蒸馏水补充至20mL （即各加入16.5mL蒸馏水），震荡混匀，在分光光度计上进行比色。调波长540nm，用0号管调零点，测出1~6号管的吸光度值。以吸光度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。 2．样品中还原糖和总糖的测定 （1）还原糖的提取 准确称取3.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。将浸出液用100mL容量瓶定容，混匀，过滤，滤液作为还原糖提取液，待测。 （2）总糖的水解和提取 准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL 6mol/L HCl，置沸水浴中加热水解30min。待三角瓶中的水解液冷却后，用6mol/L NaOH中和（大约10mL左右），用广范pH试纸测试中和到pH=7，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。将定容后的水解液过滤，取滤液1 mL，移入另一9mL水的试管中，混匀，稀释10倍作为总糖待测液。 （3）显色和比色 取7支2×20cm大试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，用7号管进行空白调零。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
还原糖的测定
(1) 提取液的制备 常用的提取剂有水和乙醇溶液，提取液的制备方法要根据样的性状而定，但应遵循以下原则：①取样量和稀释倍数的确定，要考虑所采用的分析方法的检测范围。一般提取经净化和可能的转化后，每毫升含糖量应在0.5~3.5mg之间，提取10克含糖2%的样品可在100毫升容量瓶中进行；而对于含糖较高的食品，可取5~10克样品于250毫升容量瓶中进行提取。 ②含脂肪的食品，如乳酪，巧克力，蛋黄酱及蛋白杏仁糖等，通常需经脱脂后再以水进行提取。一般以石油醚处理一次或几次，必要时可以加热。每次处理后，倾去石油醚层（如分层不好，可以进行离心分离），然后用水提取。 ③含大量淀粉和糊精的食品，如粮谷制品，某些蔬菜，调味品，用水提取会使部分淀粉，糊精溶出，影响测定，同时过滤也困难，为此，宜采用乙醇溶液提取。乙醇溶液的浓度应高到足以使淀粉和糊精沉淀，通常用70~75%的乙醇溶液。若样品含水量较高，混合后的最终浓度应控制在上述范围内。提取时可加热回流，然后冷却并离心，倾出上清液，如此提取2~3次，合并提取液，蒸发除去乙醇。用乙醇溶液作提取剂时，提取液不用除蛋白质，因为蛋白质不会溶解出来。 ④含酒精和二氧化碳的液体样品，通常蒸发至原体积1/3~1/4，以除去酒精和二氧化碳。但酸性食，在加热前应预先用氢氧化钠调节样品溶液至中性，以防止低聚糖被部分水解。 ●⑤提取固体样品时，为提高提取效果，有时需加热，加热温度一般控制在。40~50℃， 一般不超过80℃，温度过高时右溶性多糖溶出，增加下步澄清工作的负担，用乙醇做提取剂，加热时应安装回流装置。 （2）提取液的澄清 作为澄清剂必需具备以下几点要求 ：①能较完全地除去干扰物质②不吸附或沉淀被测糖分，也不改变被测糖分的理化性质③过剩的澄清剂应不干扰后面的分析操作，易于除掉。 常用三种澄清剂： 中性醋酸铅[Pb（CHCOO)2?3H2O] 乙酸锌和亚铁氰化钾溶液 硫酸铜和氢氧化钠溶液 澄清剂的用量 样液除铅 2食品中还原糖的测定 直接滴定法、 3高锰酸钾法、 4萨氏法、 5碘量法 ● 2.1 直接滴定法 ●(1) 原理 ●(2) 适用范围 ●(3) 试剂 ●(4) 测定方法 ●(5) 结果计算
可溶性还原糖和总糖的测定
检测技术规范与标准方法 编号：HXSW/QC-001 修订：第 1 版第2次修改 还原糖和总糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法起草：杨晓君日期：2013.10.27 批准：刘永垒日期：2014年1月17日 1 目的 建立统一的发酵液中还原糖和总糖的定性检测方法，确保检验方法的一致性、科学性和准确性 2 范围 适用于微生物中心实验室实验、生产发酵液中还原糖和总糖的检验 3 责任者 发酵工艺实验员负责检验 4 正文 4.1 原理 还原糖是指含有自由醛基或酮基、具有还原性的糖类。黄色的3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比，在波长为540nm处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量。 不具还原性的部分双糖或多糖经酸水解后可彻底分解为具有还原性的单糖。通过对样品中的总糖进行酸水解，测定水解后还原糖含量，可计算出样品的含量含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。 4.2 仪器和试剂 4.2.1 仪器 分光光度计、电热恒温水浴锅、试管及试管架、容量瓶、移液器、量筒。 4.2.2 试剂 4.2.2.1 1mg/ml葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。 4.2.2.2 DNS 试剂（3,5-二硝基水杨酸） 将6.3g DNS和262ml 2mol/LNaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中，7-10天后使用。
实验五食品中还原糖的测定
实验八食品(炼乳)中还原糖含量的测定 一、实验目的 1、了解食品中还原糖的含量； 2、学习直接滴定法测定还原糖的原理，并 掌握其定糖方法。 3、通过对实验结果的分析，了解影响测定 准确性的因素。 二、原理， 食品中的还原糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖、麦芽糖等，还原糖之所以具有还原性，是由于其分子中含有游离醛基(-CHO)或酮基(>C=O)。 测定还原糖的经典化学方法都是以其能被多种试剂氧化为基础的。在这些方法中，以各种根据碱性酒石酸铜溶液氧化作用改进方法的应用最广。本实验就是采用使用碱性酒石酸铜作为氧化剂的直接滴定法。 碱性酒石酸铜溶液A、B二液等体积混合时生成的天蓝色Cu(OH)2沉淀后，立即与酒石酸钾钠起反应生成深蓝色的酒石酸钾钠铜络合物。此络合物与还原糖共热时，二价铜即被还原糖还原为一价的红色氧化亚铜沉淀，氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾反应，生成可溶性化合物，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原成无色，溶液呈淡黄色而指示滴定终点，根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，以及测定样品液所消耗的体积，计算还原糖含量。反应式如下： CuSO4＋2Na OH→Cu(OH)2↓＋Na2SO4 COOK COOK │ │ CHOH CHO │ ＋Cu(OH)2→│ Cu＋2H2O CHOH CHO │ │ COONa COONa COOK COOK │ CHO COOH │ CHO │ │ CHOH │ Cu＋(CHOH)4 →(CHOH)4 ＋│ ＋Cu2O↓CHO │ │ CHOH │ CH2OH CH2OH │ COONa COONa 三、仪器与试剂 1、仪器 (1)容量瓶100 ml、250 ml (2)三角瓶250 ml (3)碱式滴定管50 ml或25 ml (4)烧杯100m1 (5)吸管5 ml、50 ml (6)分析天平 (7)电炉1KW可调 (8)恒温水浴锅 2、试剂 (1) 碱性酒石酸铜溶液A液：称取15.00 g 硫酸铜(CuSO4·5H2O)(AR)及0.05g次甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释至1000 ml。 (2) 碱性酒石酸铜溶液B液：称取50g酒石酸绅钠(AR)和75g NaOH (AR)，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后用蒸馏水稀释至1000 ml，贮存于具橡胶塞玻璃瓶中。 (3)乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3ml 冰醋酸，加水溶解并稀释至100ml。 (4)亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100ml。 (5)葡萄糖标准溶液：准确称取1.0000g至(96±2)℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加人5ml盐酸，并以水稀释至1000ml。此溶液葡萄糖浓度为l.0 mg/ml。 3、样品 炼乳 四、实验步骤 1、样品制备 称取炼乳样品约2.50 ~ 5.00g于100ml烧杯中，加入50ml水溶解，转移到25Oml容量瓶中，并用少量水洗涤烧杯，洗液并人容量瓶中。慢慢加入5ml乙酸锌溶液和5ml亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀。沉淀，静止30min，用干燥小滤纸做成小菊花形干过滤，弃去初始滤液25ml，其余滤液备用。 2、碱性酒石酸铜溶液的标定 于25Oml三角瓶中吸取碱性酒石酸铜A液及B液各5.0ml，加1Oml水和玻璃珠3粒，从滴定管滴加约9ml葡萄糖(或其他还原糖)标准溶液并摇匀，置于电炉上加热至沸腾 (要求控制在2min内沸腾)，然而趁热以每2s滴加1滴的速度继续滴加葡萄糖 (或其他还原糖)标准溶液，
实验五食品中还原糖得测定
实验八食品(炼乳)中还原糖含量得测定 一、实验目得 1、了解食品中还原糖得含量; 2、学习直接滴定法测定还原糖得原理,并掌握其定糖方法。 3、通过对实验结果得分析,了解影响测定准确性得因素。 二、原理, 食品中得还原糖主要指具有还原性得葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖、麦芽糖等,还原糖之所以具有还原性,就是由于其分子中含有游离醛基(-CHO)或酮基(>C=O)。 测定还原糖得经典化学方法都就是以其能被多种试剂氧化为基础得。在这些方法中,以各种根据碱性酒石酸铜溶液氧化作用改进方法得应用最广。本实验就就是采用使用碱性酒石酸铜作为氧化剂得直接滴定法。 碱性酒石酸铜溶液A、B二液等体积混合时生成得天蓝色Cu(OH)2沉淀后,立即与酒石酸钾钠起反应生成深蓝色得酒石酸钾钠铜络合物。此络合物与还原糖共热时,二价铜即被还原糖还原为一价得红色氧化亚铜沉淀,氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾反应,生成可溶性化合物,达到终点时,稍微过量得还原糖将蓝色得次甲基蓝还原成无色,溶液呈淡黄色而指示滴定终点,根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖得质量,以及测定样品液所消耗得体积,计算还原糖含量。反应式如下: CuSO4＋2NaOH→Cu(OH)2↓＋Na2SO4 COOK COOK ││ CHOH CHO │＋Cu(OH)2→│Cu＋2H2O CHOH CHO ││ COONa COONa COOK COOK │CHO COOH │ CHO ││CHOH │Cu＋(CHOH)4 →(CHOH)4 ＋│＋Cu2O↓ CHO ││CHOH │CH2OH CH2OH │ COONa COONa 三、仪器与试剂 1、仪器 (1)容量瓶100 ml、250 ml (2)三角瓶250 ml (3)碱式滴定管50 ml或25 ml (4)烧杯100m1 (5)吸管5 ml、50 ml (6)分析天平 (7)电炉1KW可调 (8)恒温水浴锅 2、试剂 (1) 碱性酒石酸铜溶液A液:称取15、00 g硫酸铜(CuSO4·5H2O)(AR)及0、05g次甲基蓝,
实验一 总糖和还原糖的测定
实验一总糖和还原糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法） 171850044钱诗晨 一、实验目的 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。 二、实验原理 单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。 还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸（DNS）则被还原为红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量和总糖的含量。 三、实验器材 1.面粉 2.试管 3.吸管 4.水浴锅 5.电炉 6.紫外可见分光光度计 7.PH试纸 8.容量瓶 9.量筒、研体、三角烧瓶、玻璃漏斗 10.电子分析天平 面粉里含多糖淀粉，遇碘变蓝 四、实验试剂 1.标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂:将6.3gDNS和262ml2mol/L NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸甲钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml贮于棕色瓶中备用。 3.6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%),用蒸馏水稀释到500ml。 4.6mol/L NaOH：称取24g NaOH溶于蒸馏水并稀释至100ml。 5.碘—碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 五、实验操作 1.葡萄糖标准溶液曲线的制作 取干净试管6支，按表7进行操作。以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线