桶装水中铜绿假单胞菌检测和解决办法

桶装水中铜绿假单胞菌检测和解决办法

摘要：铜绿假单胞菌经过水源水消毒，管道消毒和臭氧消毒后，其活力会大大降低，处于非可培养状态，导致传统方法培养不出和检测结果的假阴性。本文通过对检测方法的分析，提出一种可以彻底杀灭铜绿假单胞菌的方法。

关键字：桶装水；铜绿假单胞菌；检测；解决

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。

近年来，随着全球范围内桶装饮用水消费量的不断上升，国内外有关铜绿假单胞菌污染桶装水的报道逐渐增多，引起了诸多学者和消费者的普遍关注。目前桶装饮用水铜绿假单胞菌检测技术方面，除传统的生化培养外，PCR 和环介导等温扩增技术（LAMP）等分子方法逐步建立起来，应用于水样快速检测中。本文在分析检测方式的基础上提出彻底解决的办法。

一．铜绿假单胞菌的传统检测方法

参考《饮用天然矿泉水检验方法》 GB/T8538-2008/54 铜绿假单胞菌-滤膜法和ISO16266：2006（E）水质-铜绿假单胞菌的检测和计数－滤膜法进行检验。具体步骤：将250 mL水样用孔径为0.45 μm的滤膜过滤，并将滤膜移至 CN 琼脂选择性培养基上，36 ±1 ℃℃恒温培养 48 h。铜绿假单胞菌在 CN 琼脂出现的菌落形态有 3 种：有脓青素产生的蓝/绿色、无荧光的菌落，直接判为检出；产生有荧光素的黄色菌落，进一步做产氨(乙酰胺肉汤)试验确认，产氨试验阳性的判为检出；产生红脓素的红褐色、无荧光的菌落，要继续做氧化酶试验、产氨试验、荧光(金氏 B 斜面)试验，若氧化酶阳性、产氨试验阳性结果判为铜绿假单胞菌检出。

二．铜绿假单胞菌 PCR 检测方法

将 250 mL 水样用孔径为 0.45 μm 的滤膜过滤，将滤膜转移至 100 mL LB 肉汤（内

含 0.02 g 溴化十六烷基三甲胺和 1.5 mg 萘啶酮酸），选择增菌 18 h 后，吸取 1 mL 增菌液，煮沸法提取 DNA。根据外膜蛋白基因 oprL 进行 PCR 扩增，引物序列为如下，F：5’-ATG GAA ATG CTG AAA TTC GGC-3’；5’-CTT CTT CAG CTC GAC GCG ACG-3’，扩增片段大小504bp。以铜绿假单胞菌ATCC27853为阳性对照。

三，问题讨论

在饮用水安全问题不断出现的情况下，桶装水以其天然卫生、不含杂质及添加物得到了众多消费者的喜爱，家庭和集体场所饮用桶装水己相当普遍。但是近年来桶装水中铜绿假单胞菌污染问题逐步显现出来，成为公共卫生的重大隐患。WHO 的 HACCP 评估中明确指出铜绿假单胞菌是婴儿瓶装饮用水的危害指示菌。国际水质卫生管理方面，美国、加拿大、巴西、日本、欧洲各国及世界卫生组织/粮农组织(WHO/FAO)等，均限定瓶装饮用水(包括天然矿泉水水源)铜绿假单胞菌MPN<3／L或每250 mL中不得检出。我国新修订的《GB 8537-2008 饮用天然矿泉水》标准中也明确规定每 250 mL 水样中铜绿假单胞菌不得检出，并且要求对每批成品出厂前进行铜绿假单胞菌检测。

四．出现铜绿假单胞菌超标怎么办

诺福作为全球首款真正意义上的高效无残留消毒产品，致力于将“生态杀菌，环保消毒”的理念在全球进行推广，是欧盟很多国家饮用水企业的首选。中国已经销售进10年，为各类饮用水企业提供了专业的消毒方案。

诺福牌杀菌消毒剂可以为客户提供专业的消毒方案，不仅完全控制铜绿假单胞菌的超标问题，也可以节省生产成本。诺福系列消毒产品基于食品级过氧化氢和活性胶质银离子，有着普通消毒剂无与伦比的优势：

1.能够快速杀灭铜绿假单胞菌，同时抑制铜绿假单胞菌的生长，具备欧盟，中国疾控，军事医学科学院消毒中心等全球最权威的检测机构出具的杀菌检测报告。

2.诺福因为加入了活性胶质银离子，其有别于普通的过氧化氢，仅用很少量的诺福消毒剂就能解决大量普通过氧化氢才能解决的问题，其消毒效力高于普通过氧化氢100倍不止，活性胶质银离子作为稳定剂大大提高了过氧化氢的稳定性，从而降低用量。

3.诺福系列消毒产品是真正无残留，无气味的消毒剂，使用时不会受温度和PH值影响。且不会有二次化学反应造成的污染问题，比如余氯残留。

4.诺福的专业，不仅在于其本身产品好，更为关键的是，诺福针对桶装水加工企业，会提出专业的铜绿假单胞菌控制方案，这是我们有效控制铜绿假单胞菌的核心！

结语：桶装水出现铜绿假单胞菌超标的问题，近年来在各企业越来越严重，找到快捷的检测和解决办法是核心，来自欧盟的诺福，不仅能够消毒，杀灭铜绿假单胞菌，更能都量身制定各企业专属方案，为企业首选。

出师表

两汉：诸葛亮

先帝创业未半而中道崩殂，今天下三分，益州疲弊，此诚危急存亡之秋也。然侍卫之臣不懈于内，忠志之士忘身于外者，盖追先帝之殊遇，欲报之于陛下也。诚宜开张圣听，以光先帝遗德，恢弘志士之气，不宜妄自菲薄，引喻失义，以塞忠谏之路也。

宫中府中，俱为一体；陟罚臧否，不宜异同。若有作奸犯科及为忠善者，宜付有司论其刑赏，以昭陛下平明之理；不宜偏私，使内外异法也。

侍中、侍郎郭攸之、费祎、董允等，此皆良实，志虑忠纯，是以先帝简拔以遗陛下：愚以为宫中之事，事无大小，悉以咨之，然后施行，必能裨补阙漏，有所广益。

将军向宠，性行淑均，晓畅军事，试用于昔日，先帝称之曰“能”，是以众议举宠为督：愚以为营中之事，悉以咨之，必能使行阵和睦，优劣得所。

亲贤臣，远小人，此先汉所以兴隆也；亲小人，远贤臣，此后汉所以倾颓也。先帝在时，每与臣论此事，未尝不叹息痛恨于桓、灵也。侍中、尚书、长史、参军，此悉贞良死节之臣，愿陛下亲之、信之，则汉室之隆，可计日而待也。

臣本布衣，躬耕于南阳，苟全性命于乱世，不求闻达于诸侯。先帝不以臣卑鄙，猥自枉屈，三顾臣于草庐之中，咨臣以当世之事，由是感激，遂许先帝以驱驰。后值倾覆，受任于败军之际，奉命于危难之间，尔来二十有一年矣。

先帝知臣谨慎，故临崩寄臣以大事也。受命以来，夙夜忧叹，恐托付不效，以伤先帝之明；故五月渡泸，深入不毛。今南方已定，兵甲已足，当奖率三军，北定中原，庶竭驽钝，攘除奸凶，兴复汉室，还于旧都。此臣所以报先帝而忠陛下之职分也。至于斟酌损益，进尽忠言，则攸之、祎、允之任也。

愿陛下托臣以讨贼兴复之效，不效，则治臣之罪，以告先帝之灵。若无兴德之言，则责攸之、祎、允等之慢，以彰其咎；陛下亦宜自谋，以咨诹善道，察纳雅言，深追先帝遗诏。臣不胜受恩感激。

今当远离，临表涕零，不知所言。