细菌蛋白提取试剂盒使用说明书

细菌蛋白提取试剂盒使用说明书

北京索莱宝科技有限公司

第1页,共1页细菌蛋白提取试剂盒

货号:BC3750

规格:50T /100T

有效期:至少1年。

产品说明:

本试剂盒用于大肠杆菌提取可溶性蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂,作用较为强烈,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶的研究。本品仅用于科研。

产品内容:名称

50T 100T Storage 裂解液

50ml 100ml 2-8℃蛋白酶抑制剂(100×)

0.5ml 1ml -20℃

PMSF(100×)0.5ml 1ml 操作方法:

1、细菌可溶性蛋白的提取

1)

在1ml 的冷裂解液中各加入10ul 的蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;2)

将菌体湿重称重,然后按照比例(1g:10ml)加入的新配置的裂解液,混匀,过程注意冰上操作;3)将混匀液移入超声仪中,超声;

超声条件:总时间45min,超声时间3s,间隔时间3s,过程为冰浴环境;

超声结束,4度离心,10000rpm/min 20min;

2、吸取上清至新的管中,进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。

(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)

注意事项:

1.实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境;

2.PSMF(有毒)现用现加,因为PMSF 在水溶液中会快速降解;

高纯度质粒小量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.360docs.net/doc/bc6935734.html, HighPure Plasmid Mini Kit 高纯质粒小量快速提取试剂盒 目录号:PL03 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存 50次 (PL0301) 100次 (PL0302) 200次 (PL0303) 平衡液室温5ml 10ml 20ml RNaseA(10mg/ml)-20℃150μl 250μl 500μl 溶液P1 4℃15 ml 25 ml 50 ml 溶液P2 室温15 ml 25 ml 50 ml 溶液P3 室温20 ml 35 ml 70 ml 去蛋白液PE 室温16ml 31.5 ml 63 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml 20ml 吸附柱AC 室温50个100个200个 收集管(2ml)室温50个100个200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时,将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml) 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA 残留,在溶液P1中补加RNase A即可。 2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分 钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍:

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点: 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附 量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.独有的去蛋白液配方,可以高效去除残留的核酸酶,即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机, 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒,建议 接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基,过夜培养14-16个小时,可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应适当加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按比例增加P1、P2、P3的用量,其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。 4. 质粒DNA确切分子大小,必须酶切线性化后,对比DNA分子量Marker才可以知 道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道其确切大小。 5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗 脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-

PH0311 细菌细胞总蛋白提取试剂盒操作手册

PH0311|细菌细胞总蛋白提取试剂盒 (Bacterial Cell Protein Extraction Kit) Catalog No:PH0311Size:?50T Storage:Store@4℃ ◆产品简介 1、总论:经典的细胞蛋白质分离流程由下述主要步骤组成:清洗组织或细胞;裂解细胞;离心去沉淀获得可溶性蛋白质粗提物(可依据目标蛋白质的理化特性特别的调配裂解缓冲液);通过有机溶剂或盐析等沉淀离心、层析、电泳等方法进一步纯化,得到目的产物蛋白。 2、本试剂使用温和的非离子型去污剂,适用于大肠杆菌表达的重组蛋白的蛋白提取。本产品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。所提取的蛋白保持了生物学活性,可进行IP,Western Blot,蛋白纯化等下游操作。 ◆产品存储 Store at4℃(本试剂在室温干燥条件下,可保存6个月。溶菌酶贮存液、100×蛋白酶抑制剂和50%甘油2-8℃保存) ◆试剂组成 试剂盒组成PH0311-50 细菌细胞蛋白裂解液50ml 细菌细胞漂洗液120ml 溶菌酶贮存液3ml 100×蛋白酶抑制剂0.6ml 50%甘油10ml 说明书1份 ◆使用说明 1、离心收集细菌细胞,按照每克湿菌取用5-6ml细菌细胞漂洗液的比例,于20℃~37℃将细胞悬浮起来后,4℃,12000g,1-2min离心除去细菌细胞漂洗液,漂洗2次。(离心只是收集细胞,转速、时间可自行调整。) *如果细菌细胞漂洗液不够,也可以用TE buffer(H=7.4--7.6)代替。 2、离心除去细菌细胞漂洗液后,按每克湿菌细胞,加入5ml细菌细胞蛋白裂解液,250ul溶菌酶贮存液和50ul100×蛋白酶抑制剂,混悬细菌细胞样品。

真菌蛋白提取方法

真菌蛋白提取方法 一TCA/丙酮法 1 液氮将菌体研磨为粉末; 2 向匀浆中加入10倍体积的丙酮(含13.3% (w/v) TCA和0.093% β巯基乙醇),过夜沉降; 3 4 度20,000g 离心15 min; 4 移处上清,用冰冷的含0.07% (v/v) β-巯基乙醇的丙酮清洗沉淀两次; 5 离心后,沉淀干燥至丙酮挥发完全。 二酚抽提法 1 在液氮中将 1g 菌体研磨为粉末 2 加入 6 ml 水饱和酚(buffer-saturated phenol)和 2 ml提取液(20mM Tris-Cl, pH 7.5, 0.5% Triton X-100 (v/v), 0.5M EDTA, pH 7.5, pH 8.0, 0.07% β-巯基乙醇, protease inhibitors)。 3 在4度混合30分钟。 4 12000 rmp 离心1min,使两相分开。 5 弃沉淀,吸取上层的苯酚相,加入5倍体积的冷丙酮,-20度沉降2h。 6 12000 rmp,4度,离心15分钟沉淀蛋白,弃去上清。 7 沉淀干燥至丙酮挥发完全。 三提取液抽提丙酮沉淀法 1 预先将研钵置于-20℃的冰箱内冷冻。 2 取液氮冻存的菌体,放入预冷的研钵内研磨至粉末状。 3 向匀浆中加入2倍体积的抽提液(20mM Tris-Cl, pH 7.5, 0.5% Triton X-100 (v/v), 0.5M EDTA, pH 7.5, pH 8.0, 0.07% β-巯基乙醇, protease inhibitors)。 4 混匀后4度震荡30分钟,以便蛋白溶解。 5 12000 rmp,4度,离心15分钟,吸取上清于另一EP管中。 7 向上清液中加入5倍体积的预冷丙酮(含有0.07%β-巯基乙醇),混匀, -20℃,2小时沉淀蛋白质。 8 12000 rmp,4度,离心15分钟沉淀蛋白。弃去上清,沉淀用乙醇洗三次, 自然干燥蛋白沉淀。 四甲醇氯仿水沉淀法Chloroform /Methanol/Water Precipitation 1 预先将研钵置于-20℃的冰箱内冷冻。 2 取液氮冻存的菌体,放入预冷的研钵内研磨至粉末状。 3 向匀浆中加入4ml的抽提液(20mM Tris-Cl, 0.5% Triton X-100 (v/v), 0.5M EDTA, pH 8.0, 0.07% β-巯基乙醇,protease inhibitors)。 4 12000 rmp,4度,离心10分钟,吸取上清于另一离心管中,尽量少吸上层 色素。 5 重复第4步。 6 加入16ml的预冷甲醇,涡旋,4度静置5分钟,

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆 樊克生物专业供应: 使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)含量。 试验原理: 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合 的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品:80ng/ml 1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型 标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型 洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀 释 底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型 自备材料 1.蒸馏水。 2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3.振荡器及磁力搅拌器等。 安全性

质粒提取试剂盒-说明书-翻译

精品文档 。 1欢迎下载 E.Z.N.A.? 质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文) (适用于No. D6942, D6943 & D6944) 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培 养基进行培养。37℃强力摇动(~300rpm )孵育12-16h 。使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉 淀对于获得高质量的DNA 非常重要。 4. 加入250μl 溶液II ,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。 可能需要孵育2min 。不要用力混合,以免使染色体DNA 断裂,减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min 。溶液II 不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl 溶液III ,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。为避免 形成局部沉淀,加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼.... 的吸取上清液,加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g 离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入500μl HB 缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清 洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。 注意:DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释(5倍稀释),如果DNA 清洗液稀 释液经过冷藏,则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤:重复清洗,加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ,使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作,不可 遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。将30-50μl (取决于终产物的期望浓度) 洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上,使之于室温下静置1-2min 。≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。可以进行二次洗脱,以收集残存的DNA 。 13. DNA 的产量和质量:分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA 的浓度计算如下: DNA 浓度=A 260×50×(稀释倍数)μg/ml A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者,DNA 的产量(及质量)有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式,但也可能存在串联体形式。 张小强 翻译

酵母蛋白快速提取试剂盒使用说明

酵?母蛋?白质快速微量提取试剂盒 Yeast Protein Miniprep Kit 常温运输、4℃保存(溶液B成分二需-20℃保存),有效一年。 自备酵母培养基 产品及特点 本产品用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法,适合于各种形态的 各种酵母材料。本产品的其主要特点是: 1.破壁效率高,能达到80-90%。 2.可以处理各种酵母样品。 3.操作简单,得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分 析。 规格及成分成份 50次包装 溶液A 100 mL 溶液B成分一 50 mL 溶液B成分二 1.5 g 玻璃珠,400μL 5 g 使用方法准备工作:将溶液B成分二(干粉)全部加到50mL溶液B成分一中,充分摇晃使之全部溶解,成为溶液B,然后分装成小分(体积根据每次实验的样 品数决定)并放-20℃长期保存。

1、 将酵母细胞接种到5mL YPD 培养基中,30℃摇晃(250rpm/分钟)过 夜培养使其OD600达到0.5~2.0。 2、 把酵母细胞培养物转到装有2mL 预冷溶液A 的10-15 mL 离心管中, 混匀。 3、 4℃ 5000g 离心5分钟沉淀酵母细胞,吸出上清液。 4、 用30μL 溶液B 悬浮酵母细胞,并快速转移到1.5mL 塑料离心管中。 5、 100℃下保温3分钟,使蛋白酶失活,样品存放于-20℃。 6、 加入0.1g 的玻璃珠。 7、 在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。 8、 加入70 μl 溶液B,稍加振荡,置100℃保温1分钟。 9、 取5-20μl 抽提液上样直接进行SDS-PAGE 凝胶电泳。 关联推荐 4X 蛋白上样缓冲液 BCA 蛋白检测试剂盒 蛋白marker ECL 发光检测液

TPPA试剂盒说明书

T P P A试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

梅毒TPPA试书剂盒说明书 1、试验原理: 梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应。其原理如下:将梅毒 (Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体(TP)抗体进行反应发生凝集,产生粒子凝集反应(TP)抗体,并且可用来测定抗体效价。 2、样本收集和贮存: 血清或血浆1ml,标本应无溶血,无脂血,无微生物污染。不满足上述要求的标本拒收,标本的采集应使用清洁,无菌的一次性的干燥管。 标本用量最少50ul,七天内检测的标本应在2-8℃保存,贮存在-20℃可保存4W,同时避免反复冻融血清。 3、安全防范: 3.1此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原,丙型肝炎抗体,HIV抗体均为阴性;但仍认为它们具有潜在的感染性。 3.2移液过程禁止用口。 3.3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟,饮食。 3.4使用试剂盒和标本时,必须戴一次性手套,穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3.5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 3.6试剂的溶解液,血清稀释液和阳性对照血清含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积. 4、试剂: 4.1 储存与稳定性: 试剂应在2-10℃保存。 冻干试剂必须在复溶后的当天使用,如果保存在2-10℃最多可使用7天。 4.2 试剂盒组成:(由富士瑞士欧公司出产) (1)溶解液(液体) 8mL×1瓶 用于调制致敏粒子和未致敏粒子。 (2)血清稀释液 29mL×1瓶 用于样品的稀释。 (3)致敏粒子(冷冻干燥)

大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号:DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围: 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,如果不 能完全溶解,也不影响使用效果,直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍: 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点: 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定,产量高(典型的产量10ml全血可提取出150-500μg),OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9,长度可达50kb-150kb,可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2,500 x g,并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70%乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA(不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异也可能非常大)。 4.本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 (20μl-10ml),请联系我们索取其它处理量的操作手册。

真菌学实验报告

真菌学实验报告 一.实验目的: 1.1了解真菌形态的基本特征。 1.2掌握丝状真菌制片方法。 1.3掌握内生真菌的分离方法 1.4掌握真菌的鉴定方法。 二.前言: 真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林,从海洋、高空到赤道、两极,到处都有真菌。真菌虽然不在空气中生长繁殖,但它的孢子却成群的漂浮在天空,只要稍微注意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中。 当今世界,生物技术已迈入世界经济的支柱产业,真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。真菌是原始的真核生物,具有广泛的多样性,真菌生长我繁殖迅速,在很短的时间内就可以得到比动物和植物多得多的后代,能够直接、快速地进行遗传性状分离的

分析。因此,真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具,真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展,为生物技术产业提供了一个广阔的天地。 植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性,植物物种的年代越久远,其生物内生真菌的多样性越丰富:抗病原性能越强的植物,其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大;其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程,本实验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制实验发现茎,根,花,种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力,并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用。研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。 三.材料与方法: 3.1.1材料: 在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。 3.1.2.药品与试剂: 葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O,马铃薯、琼脂。孟加拉红,青霉素,链霉素,甲基蓝,蛋白胨,酵母膏,蔗糖,磷酸盐,葡萄糖,琼脂条,无菌水等。消毒剂:75%的乙醇,0.1%升汞(HgCl2),次氯酸钠溶液(含活性氯10%),30%双氧水。双

小鼠cfos试剂盒使用方法

小鼠c-fos试剂盒使用方法 检测范围:96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的: 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中c-fos含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠c-fos水平。用纯化的小鼠c-fos抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入c-fos,再与HRP标记的c-fos抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的c-fos呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠c-fos 浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶 2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(960pg/ml)0.5ml×1瓶 3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份 5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张 6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 480pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 240pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 120pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 60pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 30pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。

高纯度质粒小提试剂盒使用说明书

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit (目录号:HS0103) 产品包装 试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml) 150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml) 50个 (注意:使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀,2 ~ 8℃保存) 保存条件 本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。 产品简介 本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱硅胶膜(Spin Columns PA )吸附。通过去蛋白液(Buffer PD )和漂洗液(Buffer PW )的清洗可去除蛋白及其他杂质,在低盐、高pH 条件下洗脱,最后得到高纯度的质粒DNA 。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.

使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA,可在30 min之内完成提取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 产品特点 1. 快速:步骤少,操作简便,节约时间。 2. 简便:离心吸附柱不需要预平衡,漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇,即开即用。 3. 纯度高:所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 操作步骤 1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液,室温12,000 rpm离心1 min,尽量将上清去除干净。 (注意:根据菌液的浓度决定取液量,浓度高时取1 ml菌液离心即可,浓度低时可多收集一次) 2. 加入250 ul Buffer P1,用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。 (注意:是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀;菌体沉淀是否悬浮充分,如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解,导致提取的质粒浓度及纯度降低) 3. 加入250 ul Buffer P2,温和颠倒混匀6 ~ 8次,直到溶液变得清亮粘稠。 (注意:不可剧烈震荡,以免造成基因组DNA片段的污染,所用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏,如未完全变得清亮,可能是菌体太多,可增加Buffer P2的用量,在后续的操作中Buffer P3的用量也要相应增加) 4. 加入350 ul Buffer P3,立即温和颠倒混匀6 ~ 8次,可见白色沉淀物产生,室温静置2 min,然后12,000 rpm离心3 ~ 5 min。 (注意:Buffer P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀,如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清) 5. 小心将上清液转移到离心吸附柱Spin Columns PA中,静置2 min,让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min,弃收集管中的废液。 6. 向吸附柱中加入500 ul去蛋白液,12,000 rpm离心1 min,弃收集管中废液。 (注意:如果宿主菌是endA-,如DH5α若TOP10,此步骤可省略。如果宿主菌是endA+,如TG1、BL21、HB101、JM101等,此步骤不可省略,因这些宿主菌含有大量的核酸酶,易降解质粒。如果提取低拷贝质粒

蛋白组分抽提试剂盒说明书

Overview ?Description ?References ?Product Information ?Applications ?Biological Information ?Safety Information ?Product Usage Statements ?Storage and Shipping Information ?Supplemental Information ?Prix & Disponibilité Prix & Disponibilité Référence DisponibilitéConditionnement QtéPrix Quantité 539790-1KIT En stock Contacter le Service Clients 1 kit à la validation de la commandePlus d'informations —Ajouter aux favoris Ajouter au panier Description

Overview Fast and reproducible extraction of subcellular proteomes from mammalian cells ProteoExtract? Subcellular Proteome Extraction Kit (S-PEK) is designed for fast and reproducible extraction of subcellular proteomes from adherent and suspension-grown mammalian cells. The S-PEK takes advantage of the different solubilities of certain subce compartments in the four selected reagents. In the case of adherent cells, the procedure is performed directly in the tissue culture dish without the need for cell removal. Cells or the parts of the cells remain attached to the plate during sequential extraction of subcellular compartments, until the appropriate extraction reagent is used. Thus, the early destruction the cellular structure by enzymatic or mechanical detachment of cells from the tissue cultu plate and any mixing of different subcellular compartments is prevented. For suspension-grown cells, extraction starts with gentle sedimentation and washing of the cel The stepwise extraction delivers four distinct protein fractions from one sample: ?Cytosolic fraction (F1) ?Membrane/organelle protein fraction (F2) ?Nucleic protein fraction (F3) ?Cytoskeletal fraction (F4) Proteins are obtained in the native state making the S-PEK suitable for many downstream applications such as 1D and 2D gel electrophoresis, immunoblotting, enzyme activity assa and protein microarrays. Sample size: 3-5x106or 25-50 mg tissue. Catalogue Number 539790 Brand Family Calbiochem? Synonyms S-PEK Kit Features and benefits ?Stepwise extraction resulting in four distinct subcellular proteomes from one sample ?Highly reproducible ?No ultracentrifugation steps ?Fast—needs just 2 hours with 45 minutes hands-on time ?Produces proteins suitable for functional studies

革兰氏阳性菌蛋白提取方法

革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒 试剂盒组成: 产品组成 BB-3129-1 BB-3129-2 组份编号 规格 50T 100T 试剂A:革兰氏阳性菌蛋白提取液 25ml 50ml 31290A 试剂B:蛋白稳定剂 250ul 500ul 31290B 试剂C:蛋白酶抑制剂混合物 100ul 200ul 31290C 使用说明书 1 1 产品简介: 贝博革兰氏阳性菌总蛋白提取试剂盒可以从各种革兰氏阳性菌菌体中提取总蛋白,可用 于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,需要除盐后再 用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用贝博其他货号的试剂 盒(相关产品BB-3182)。 使用方法: 革兰氏阳性菌蛋白提取 1、裂解液的准备: 根据所需要提取的样本量,每500ul裂解液中加入2ul蛋白酶抑制剂和5ul蛋白稳定液, 充分混匀后置冰上备用。 2、在4℃ 12000g条件下将菌液离心5分钟,弃上清,尽量吸干剩余液体,收集菌体。 3、用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。 4、按每20mg-50mg湿重菌体样本加入500ul裂解液,吹打混匀,冰上放置20-30分钟。 5、300w,10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。 6、在4℃ 12000g条件下将菌液离心5分钟,将上清移入冷的干净离心管。 7、即得革兰氏阳性菌蛋白样品。 8、将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱备用或直接用于下游实验。 相关产品: 产品 产品号 产品 产品号 总蛋白提取试剂盒BB-3101 磷酸化蛋白富集试剂盒 BB-3108 核蛋白提取试剂盒 BB-3102 膜蛋白提取试剂盒 BB-3103 膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒 BB-3104 活性蛋白提取试剂盒 BB-3106 Bradford蛋白定量试剂盒 BB-3411 BCA蛋白定量试剂盒 BB-3401 ECL化学发光检测试剂盒 BB-3501 植物核蛋白提取试剂盒 BB-3154 细胞蛋白提取试剂盒 BB-3121 细菌膜蛋白提取试剂盒 BB-3151 组织蛋白提取试剂盒 BB-3122 植物总蛋白提取试剂盒 BB-3124 细菌蛋白提取试剂盒 BB-3123 植物膜蛋白提取试剂盒 BB-3152 - 1 -

质粒提取试剂盒 说明书 翻译

E.Z.N.A.?质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文) (适用于No. D6942, D6943 & D6944) 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml的LB培养基进行培养。37℃强力摇动(~300rpm)孵育12-16h。使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml细菌室温10,000 x g离心1min。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。 4. 加入250μl溶液II,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。可能需要孵育2min。不要用力混合,以免使染色体DNA断裂,减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min。溶液II不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl溶液III,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。为避免形成局部沉淀,加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g离心10分钟。白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼 ....的吸取上清液,加入装配在2ml收集管中的小量纯化柱I中。确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液,重新使用2ml收集管;加入500μl HB缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g离心1分钟,使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液,重新使用2ml收集管;加入700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液清洗柱子,室温10,000 x g离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。 注意:DNA清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释(5倍稀释),如果DNA清洗液稀释液经过冷藏,则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤:重复清洗,加入另外的700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g离心2min,使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作,不可遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml微量离心管中。将30-50μl(取决于终产物的期望浓度)洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上,使之于室温下静置1-2min。≥13,000 x g离心1min洗脱DNA。可以进行二次洗脱,以收集残存的DNA。 13. DNA的产量和质量:分别在波长260nm和280nm处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA的浓度计算如下: DNA浓度=A260×50×(稀释倍数)μg/ml A260/A280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者,DNA的产量(及质量)有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA是超螺旋单体形式,但也可能存在串联体形式。 张小强翻译

全蛋白提取试剂盒

全蛋白提取试剂盒 Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit 产品编号:C510003 包装规格:50 Assays 产品简介 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白,用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer 匀浆裂解组织或细胞,作用温和,提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。获得的全蛋白可 用于Western Blot 、免疫共沉淀,酶活性分析,Pull down 和EMSA 等后续研究,但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀 的研究,因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂,可以每次从107 个培养细胞或200 mg 动物组织提取蛋白质,本试剂盒可以 使用50次。 产品特点 1. 提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性 2. 整个操作过程只需要30分钟左右 3. 即可以用于培养细胞(50x107 个),有可以用于动物组织(50x200 mg )蛋白质的提取 4. 避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解,保持蛋白质的完整性和天然活性 5. 不需要超速度离心,可以同时处理多个样品 运输和保存条件 常温运输,收到后请将磷酸酶抑制剂,蛋白酶抑制剂和PMSF 于 -20℃保存,其余2-8℃保存,保质期一年。 试剂盒组成 成分 C510003 Lysis buffer 50 mL 蛋白酶抑制剂 50 μL 磷酸酶抑制剂 250 μL PMSF 500 μL 操作步骤 A. 实体组织蛋白的提取 1. 在每1 mL 预冷的Lysis Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂,1 μL 蛋白酶抑制剂和10 μL PMSF 混匀。冰上保存数分钟待用。 2. 将100-200 mg 固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3 mm ×3 mm 左右的小块,尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织,用PBS 洗涤两次,离心取沉淀后加入0.5~1 mL 上述配制好的预冷的Lysis Buffer ,4℃玻璃匀浆器上下手动匀浆15-30次。或超声破碎细胞,每次30s , 3~4次,每次间隔1 min ,置于冰上冷却。均质匀浆或超声破碎细胞后应镜检,细胞破碎率不小于90%,同时没有明显的组织小块。 3. 取组织匀浆液转移到1.5 mL 预冷的离心管,冰上放置10 min 左右, 期间取出剧烈震荡2-3次; 4. 15000 g (13000 rpm),4℃离心10 min ,取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,进行蛋白定量和其他蛋白质相关实验。 5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。 s a n g o n b i o t e c h

真菌胞内蛋白质提取方法的建立

[文章编号] 1671-587Ⅹ(2012)03-0590- 05[收稿日期] 2011-08- 15[基金项目] 国家自然科学基金资助课题(30910103903,30770120 )[作者简介] 王 爽(1976-) ,女,吉林省长春市人,主治医师,医学博士,主要从事真菌分子学鉴定及耐药机制的研究。 [通信作者] 王 丽(Tel:0431-85619486,E-mail:wli99@jlu.edu.cn)真菌胞内蛋白质提取方法的建立 王 爽1, 2,姜兰香1,张 宇2,3,贺 丹2,田 庄2,高 嵩2,横山耕治4,王 丽2(1.吉林大学第二医院皮肤科,吉林长春130041;2. 吉林大学白求恩医学院病原生物学系,吉林长春130021;3.吉林大学第二医院检验科,吉林长春130041;4.日本千叶大学真菌研究中心,日本千叶260- 8673)[摘 要] 目的:研究不同的提取方法对白假丝酵母和茄病镰刀菌胞内蛋白质浓度、种类及数量的影响,为建立一种稳定可靠的真菌胞内蛋白质提取方法提供依据。方法:分别以白假丝酵母菌和茄病镰刀菌为研究对象, 培养时间为36、48和72h,超声波工作时间为20s、3min、5min,10min,超声波功率为332.5和475.0W, 通过蛋白质浓度检测和SDS-P AGE蛋白质电泳分析,比较不同条件下提取的蛋白质浓度、种类及数量,观察不同因素对蛋白质提取效果的影响。结果:2株真菌均在培养36h时提取胞内蛋白质的浓度最大,白假丝酵母在功率332.5W、超声3min时得到胞内蛋白质的数量和种类最多,茄病镰刀菌在功率332.5W、超声10min时得到蛋白质的数量和种类最多。结论:使用超声波法与玻璃珠研磨法结合提取胞内蛋白质,从菌株的培养时间、超声波工作时间和功率3方面建立了真菌胞内蛋白质的最佳提取方法。 [关键词] 白假丝酵母;茄病镰刀菌;超声波;培养时间 [中图分类号] R379.2 [文献标志码] A Establishment of intracellular p rotein extractionmethods from fung usWANG Shuang1,2,JING Lan-xiang1,ZHANG Yu2, 3,HE Dan2,TIAN Zhuang2, GAO Song2,KOJI Yokoyama4,WANG Li 2(1.Department of Dermatology,Second Hospital,Jilin University,Chang chun 130041,China;2.Department of Pathogen Biology,Norman Bethune College of Medicine,Jilin University,Chang chun130021,China;3.Department of Laboratory,Second Hospital,Jilin University,Chang chun130041,China;4.Medical Mycology  Research Center,Chiber University,Chiba 260-8673,Japan)Abstract:Objective To study  the effect of different cultivate time,ultrasonic time and ultrasonic power on theconcentration,type and quantity  of the intracellular protein from Candida albicans and Fusarium solina and toprovide the theoretical basis for establishing  a reliable and stable extraction method for intracellular protein fromfung us.Methods Candida albicans and Fusarium solina were cultured.The different parameters included theculture time(36,48,and 72h),ultrasonic time(20s,3min,5min,and 10min)and ultrasonic p ower(332.5Wand 475.0W).The concentrations,species and quantities of protein under different factors were detected by  theprotein concentration detection and SDS-PAGE electrophoresis analy sis.Results Both strains got the most quantityof protein when cultivated for 36h.The most quantity  and species of Candida albicans were obtained when theultrasonic power was 332.5Wand ultrasonic time was 3min,but as to Fusarium solina,the corresponding parameters were 332.5Wand 10min,respectively.Conclusion The intracellular protein is extracted by compositely using  ultrasonic method and glass bead transformation method.The optimal extraction method of095第38卷 第3期2012年5月吉 林 大 学 学 报 (医 学 版)Journal of Jilin University(Medicine Edition)Vol.38No.3 May  2012

相关文档
最新文档