试验一红细胞计数试验目的掌握红细胞计数原理及技术二

实验一红细胞计数

一、实验目的：

掌握红细胞计数原理及技术。

二、实验原理：

用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算示得每升血液内的红细胞数。

三、实验器材及试剂：

显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。

四、实验操作：

1、取试管1支，加稀释液3.98ml或1.99ml。

2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。

3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。

4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。

5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。

6、静止2-3分钟，待经红细胞下沉后，用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。

五、计算

N(五个中方格内RBC数)×5×10×106×200=N×1012个/升

×5：表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数

× 10：1个大方格容积、0.1ul、换算为1ul内RBC数

× 106：1ul换算为1升内红细胞数

× 200：稀释倍数

六、正常参考值

正常参考值：成年男性：4.00-5.50×1012/升

成年女性：3.50-5.00×1012/升

新生儿： 6.00-7.00×1012/升

实验二血红蛋白测定

一、实验目的：

掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。

二、实验原理：

血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋（HicN）。

HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即求得血红蛋白浓度。

三、实验操作：

1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟。

2、用分光光度计比色，波长540nm，以蒸馏水或空白转化液调零，测定吸光度。

3、用血红蛋白浓度为50g/L、100g/L、150g/L、200g/L在721型分光光度计上测定吸光度分别为0.13，0.27，0.405，0.54.

四、计算:血红蛋白（g/L）=测定管吸光度×367.7

成年女性：110-150g/L

新生儿： 170-220g/L

实验三白细胞计数

一、实验目的：

掌握白细胞计数显微镜计数法原理及技术。

二、实验原理：

用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经过换算求得每升血液内的白细胞数。

三、实验器材及试剂：

显微镜、微量吸管、计数板、盖玻片、白细胞稀释液。

四、实验操作：

1、取试管1支，加白细胞稀释液0.38ml。

2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。

3、擦去管尖外部余血、轻轻注入稀释液底部，再吸取上清液清洗3次，摇匀。

4、将计数板与盖玻片用软布擦净，将盖玻片覆盖于计数池上，再用微量吸管吸取悬液，充入计数池与盖玻片间的细缝隙中，静止2-3分钟，待白细胞下沉。

5、用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数。

五、计算

(四个大方格内WBC数/4)×10×20× 106 = WBC数/升

六、正常参考值

正常参考值：成人：（4-10）×109/升

新生儿：（15-20）×109/升

6月-2岁：（11-12）×109/升

实验四白细胞分类计数

一、实验目的：

掌握白细胞分类计数、原理及技术。

二、实验原理：

把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，经wright染色后，显微镜下观察，根据白细胞形态特点逐个分类计数。得出各种白细胞的相对比值，并注意观察其形态和质量的变化。

三、实验器材及试剂：

显微镜、染色缸和架，载玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。

四、实验操作：

1、取末梢血1滴。置于载玻片的一端，以边缘平滑的推片制成血涂片，空气干燥。

2、用蜡笔在血膜两端划线，以防染液溢出，然后将血片放于染色架上。

3、先加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定染色细胞0.5-1分钟。

4、按1：1或1：2加缓冲液与染料混匀，染色10分钟左右。

5、在血膜染10分钟后，用缓冲液或接近中性的水冲去洗液，待自然干燥或滤纸吸干后，用镜油观察。

五、计数方法：

2、选择血涂片的体尾交界处，染色良好的区域，在油镜下计数100-200个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各自白细胞所占数值（百分率）。

3、白细胞分类计数方法很多，常用的有，完全记录法、半记录法、分类计数器计数法。

4、每个病人应分类白细胞数，视白细胞总数多少而定。

5、各类细胞所占的百分率乘以白细胞总数/升，既得每升血液中各类白细胞的浓度。

实验五血小板计数

一、实验目的：

掌握血小板计数原理及技术。

二、实验原理：

尿素液能溶解红细胞及白细胞而保存完整形态的血小板，经稀释后在血细胞计数池内直接计数以求得每升容积血液内的血小板数。

三、实验操作：

1、取试管1支，加血小板稀释液0.38ml。

2、先让手指温暖充血，皮肤消毒待干后深刺使血液流出擦去刚出现的少量血。

3、用微量吸管迅速准确地吸取自然流出的第一滴血液20微升，取血时避免产生气泡或多次上下吹吸，取好后立即将血轻轻注入已盛稀释液的试管底部，吸上清液漱洗吸管三次，轻轻混匀。

4、擦净并放好计数板和盖玻片，将试管轻轻震荡1分钟，用吸管吸悬液一滴，注入计数池，避免产生气泡或溢出，放置10-15分钟，待血小板下沉。

5、先用低倍镜找到中央大方格，换高倍镜计数中央大方格内的血小板数，各中格内的血小板差异不得超过10个，如每中格内血小板数小于1个时，应将全大格数完或另滴计数板，再数一大格作对照。

四、计算

五个中方格内所得的血小板数× 109 /L

五、参考值

正常参考值： 100～300×109/L

实验六尿液的一般检查、尿液酸碱度和尿比重

一、尿量

1、尿量：

指24h内排出体外的尿液总量。

2、参考值：

成年人：1-2L/24h，即1ml/（h·kg体重）；

儿童按体重计算尿量，大约比成年人多3-4倍。

3、临床意义：

（1）多尿是指24h尿量超过2.5L。

（2）少尿或无尿：少尿指每小时尿量持续小于17ml（儿童＜0.8ml/kg）或24h尿量少于0.4L；12h无尿或24h小于100ml为无尿；无尿发展至排不出尿称尿闭。

二尿液酸碱度（尿液分析试条目测八联试纸法）

（一）、实验原理：

之间。

（二）、实验方法（目测）

1、将所有的试垫区侵入样本中，并立即将其取出。

2、让试纸的边缘沿着样本容器口轻轻撩试，以去除残

余的尿液。

3、横握试纸，与瓶签上的比色图谱比较，记录结果。

按瓶签上所定的时间记录半定量结果、2分钟后的

颜色变化无临床诊断意义。

三尿比重

（一）、实验原理：

尿液比密与所含溶质成正比，溶质越多，尿比密越高，对浮标的浮力越大，侵入尿液的比重计部分则越小，读数越大；反之，读数越小。

（二）、实验器材：比密计、比密桶

（三）、实验方法：

1、充分混匀尿液后，沿管壁缓慢倒入小量杯中

2、比重计放入杯中使悬浮于中央，勿触及杯壁或杯底

3、比重计停稳后读取尿液凹面相切的刻度，即为被测尿液的比重

（四）、注意事项：

1、尿比密计必须经过校正，应用纯水在规定温度下观察比重是否标准

2、温度校正，尿液标本温度与比密计标明温度不一致时，每高3℃应将结果增加0.001，每低3℃则减去0.001

3、尿内含Pr和Glu时的修正：每10g/L蛋白质将比密减0.003， 10g/L葡萄糖将比密减0.004

4、盐类沉淀的处理，将尿标本加温使盐类溶解，测定

实验七尿沉渣定性检查

一、实验操作：

1、取新鲜尿液10ml于试管内1500r/min5分钟。

2、待离心机停后，取出离心管，弃去上清液。留下 0.2ml，轻轻离心使尿沉渣有形成分混匀。

3、取沉淀于玻片上镜检。

二、结果判断：

用10×10倍，观察其中有形成分管型，10×40倍观察细胞成分和计数，观察10个视野管型计数20个视野。

参考值：

1、细胞成分：最低-最高值/HP

RBL 0-3/HP WBL 0-5个/HP

2、管型（透明）：平均值/LP

3、尿结晶和盐类数量以每一高倍镜视野（＋）（ 2＋）（ 3＋）报告

三、注意事项：

1、清晨空腹第一次尿应在1h内送检

2、准备干净，干燥尿杯，留取中段尿，尿液细胞及管型的计数。Addis 1h尿沉渣计数。

患者先排尿弃去准确收集3h尿液于清洁干燥器内

（标本留取5：30-8：30）

五、实验操作：

准备侧量3h尿量，充分混匀取尿液10ml，1500r/min 5分钟，用吸管吸取上层尿液9ml留取1ml，吸取混匀尿液1滴注入计数盘中，cal计数10大方格，管型20个大方格。

六、计算：

1小时细胞=10个大方格细胞总数×（1000/10）×（3h尿量/3）

1小时Cost计数=(20个大方格管型数/2) ×(1000/10)×（3h尿量/3）

式中1000为微升换算成毫升数，10为尿液浓缩倍数

七、实验注意事项：

1、尿液新鲜PH值应在6以下。

2、被检尿SG在1.026以下如<1.016的为低渗尿易破坏cell。

3、尿中有磷酸盐时应加少量冰乙酸，但勿加过多，使cell管型溶解。

实验八粪便隐血试验检查

胶体金法

一、实验原理：

本品采用鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别点样于硝酸纤维膜T区（检测线）和C区（质控线）用胶体金标记的鼠抗人血红蛋白单克隆抗体作为呈色物质，采用双抗体夹心法原理制成，如果粪便中含有Hb，它就会和试剂中的金标抗体组成抗原抗体复合物，再和检测区的Hb抗体形成紫红色的色带

二、实验试剂：

大便隐血检测试剂盒

三、实验方法：

1、取出验便杯，加入蒸馏水0.5ml放入杯中。

2、多点采集大便标本50-100mg，与验便杯中溶液混匀。

3、将试纸条带有MAX标记的一端插入制备好的大便样本中。

4. 5min内判读结果。

实验结果判断：

1.阳性：出现双条红线，就表明大便隐血阳性

2.阴性：只有C区出现单条红线，表明大便隐血阴性

3.无效：无红色线或只有T区出现单条红线时，说明检测无效，需重复检测。

实验九浆膜腔积液细胞计数

一、实验目的：

掌握浆膜腔积液细胞计数显微镜计数法原理及技术。

二、实验原理：

用冰乙酸破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的有核细胞数，经过换算求得每升积液内的有核细胞数。

三、实验器材及试剂：

显微镜、微量吸管、计数板、盖玻片、冰乙酸。

1、取试管1支，加冰乙酸1-2滴，转动试管，使内壁粘附少许冰乙酸后弃去，滴加混匀浆膜腔积液3-4滴，混匀，放置5-10分钟，破坏红细胞。

2、将计数板与盖玻片用软布擦净，将盖玻片覆盖于计数池上，再用微量吸管吸取积液，充入计数池与盖玻片间的细缝隙中，静止2-3分钟，待细胞下沉。

5、用低倍镜计数2个计数池四角及中央的10个大方格内的细胞数。

五、计算

10个大方格内细胞数× 106 = 细胞数/升

六、临床意义

漏出液 : 细胞数<100 × 106 ，以淋巴细胞或间皮细胞为主

渗出液：细胞数>500 × 106 ，以淋巴细胞或中性粒细胞为主

实验十异常脱落细胞形态

间皮细胞性肿瘤（恶性）：

?为癌性（上皮性）间皮瘤和变异体。

?癌性间皮瘤：肿瘤细胞通常大量，细胞多单个散在，并可见球形聚集。

聚集细胞呈三维结构，常有扇贝样边界，类似桑椹。桑椹中央细胞互相堆积，形成很复杂外观。积液中出现三维桑椹样乳头状聚集的细胞，如果无原发性肿瘤，应考虑诊断为癌性间皮瘤。

腺癌：常见为肺腺癌、乳腺癌、浆液性卵巢癌、子宫内膜腺癌、食道腺癌、肾癌和甲状腺癌等。

其细胞学特点是：

1、呈腺体样或管状结构。

2、形成多层、球形或卵圆形聚集，提示乳头状增生。

3、单个癌细胞呈柱状，与其他肿瘤类型有明显区别。

4、印戒样癌细胞，核异常，偏位，胞质内含巨大黏液空泡。但是仅见胞质空泡不是诊断腺癌的依据，须有明显的核异常。

5、分化差的腺癌细胞鉴别诊断很难。

实验十一阴道分泌物图片检查

一、理学检查

正常阴道分泌物为白色稀糊状、无气味、量多少不等，其性状与生殖器充血情况及雌激素水平高低有关。

①临近排卵期，白带清澈透明，稀薄似蛋清，量多。

②排卵期2-3d后，混浊粘稠，量减少。

③行经前，量又增加。

④妊娠期，量较多

⑤绝经期后，阴道分泌物减少，因雌激素减少、生殖器官腺体减少所致。

1、大量无色透明黏性白带 4、血性白带

2、脓性白带 5、黄色水样白带

3、豆腐渣样白带 6、灰白色奶油样白带

清洁度杆菌球菌白细胞或脓细胞（个/HPF）上皮细胞

I 多— 0-5 满视野

Ⅲ少多 15-30 少量

Ⅳ—大量＞30 —

二、显微镜检查

1、阴道清洁度

【质量保证】

检验前：载玻片必须干净，生理盐水要新鲜。标本新鲜，防止污染。

检验中：涂片应均匀平铺，不能聚集成滴状；先用低倍镜观察全片，选择薄厚适宜的区域，再用高倍镜检查；观察标准和报告方式一致，避免漏检。

检验后：对可疑或与临床诊断不符的标本应进行复查。

【参考值】

I—Ⅱ度无致病菌和特殊细胞

Ⅲ级提示炎症，如阴道炎、宫颈炎

Ⅳ级多见于严重阴道炎，如滴虫性阴道炎、淋菌性阴道炎等。

实验十二脑脊液蛋白和浆膜腔液蛋白测定

脑脊液蛋白测定

一、实验原理：脑脊液中蛋白质遇苯酚即结合成不溶性蛋白盐而出现白色浑浊或沉淀。

二、实验试剂：饱和苯酚溶液：苯酚10ml加蒸馏水100ml置37℃数小时，底层有苯酚析出，上层即为饱和溶液，避光保存。

三、实验操作：取饱和苯酚2ml放于小试管内，滴入CSF1-2滴，在黑色背景下立即观察。

四、结果判定

阴性清晰透明，不显雾状

极弱阳性（±）微呈白雾状，在黑色背景下方能见到

弱阳性（+）灰白色云雾状

（++）灰白色浑浊

（+++）灰白浓絮状沉淀

（++++）白色凝块

实验十三浆膜腔液蛋白测定

一、实验原理：

渗出液可含有多量浆膜蛋白（又称酸性糖Pr）其等电点在PH3-5之间，在酸性条件下可产生白色雾状沉淀。

二、实验操作：

将100ml蒸馏水置于量筒中，加冰乙酸2-3滴混匀。再加待测标本一滴于量筒中，在黑背景下立即观察，如见浓厚的白色雾状沉淀加速下降，而且无较长的沉淀物为Rivalta（+）如产生白色混浊不明显下沉缓慢，并较快消失为Rivalta（-）。

三、实验结果判断

清晰不显雾雾状（-）

逐渐显雾状（±）

加酸后显雾状（+）

呈白薄云状（++）