DNARNA合成常见问题解答
DNA/RNA合成常见问题解答
处理和保存
1. 如何保存寡核苷酸?
2. 如何重悬寡核苷酸?
3. 如果寡核苷酸在室温中放置超过一星期，还可以使用吗?
4. 荧光染料标记的寡核苷酸，在储存和使用过程中必须特殊处理吗?
纯化和浓缩
5. 如何定量合成的寡核苷酸?
6. 如何通过紫外吸光度值来定量寡核苷酸?
7. 如一个18个碱基的寡核苷酸包括3个dG,4个dC,5个dA和6个dT, OD 值是0.7，那
么它的量是多少?
8. 如何计算寡核苷酸的分子量?
9. 如何测定寡核苷酸的质量?
10. 如何测定寡核苷酸的质量?
11. 如何测定合成的寡核苷酸的Tm值?
12. 为什么Bioneer提供的Tm值和我们的Tm值不同?
13. 用什么方法调整寡核苷酸的浓度?
14. 单位换算表
合成与订购
15. 如何合成寡核苷酸?
16. 标准寡核苷酸结构
17. Bioneer能合成的最长的寡核苷酸是多长?
18. 当我预订50nmol的寡核苷酸，产品却不足50 nmol，为什么?
19. 能合成出高百分比“G”的寡核苷酸吗?
20. 能提供寡核糖核酸(RNA)合成吗?
21. 合成的寡核苷酸在3' 或5'位有磷酸基吗?
22. 简并引物及通用引物是什么?
纯化方法
23. 怎样纯化合成的寡核苷酸?
24. 用于芯片分析的60 mer寡核苷酸如何被纯化呢?
修饰寡核苷酸
25. 修饰寡核苷酸
26. 作为反义脱氧寡核苷酸的硫磷酰化寡核苷酸
实验
27. 怎样制备双链DNA?
Q1. 如何保存寡核苷
酸？↑TOP 通常，寡核苷酸应该-20℃保存，该温度下能稳定保存一年以上。寡核苷酸在溶液中较为稳定，但易被污染的核酸酶降解，因此我们建议应干燥储存。若要以溶液形式储存，最好将其分装在几管中分别保存，反复冻融会使寡核苷酸降解。另外，酸性条件下，DNA会因为脱嘌呤作用而降解；碱性条件会使磷酸二酯键水解断裂。
Q2. 如何重悬寡核苷酸？↑TOP 为便于长期保存，我们建议使用TE缓冲液(10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA, pH8.0)，而不用无菌水来溶解寡核苷酸。重悬后，寡核苷酸应该在-20癈保存以长期使用。寡核苷酸在无菌水中很难溶解，加一定量的NaOH有助于寡核苷酸在水中溶解。
Q3. 如果寡核苷酸在室温中放置超过一星期，还可以使用吗？↑TOP
脱水的寡核苷酸是长期稳定的。即使在溶液状态寡核苷酸也相当稳定，通常情况(没有引入使寡核苷酸降解的污染物)即使在室温中放置超过一星期也能使用。
Q4. 荧光染料标记的寡核苷酸，在储存和使用过程中必须特殊处理吗？↑TOP 如果暴露在光线下，荧光染料标记的寡核苷酸比未标记的寡核苷酸更易降解，荧光强度会逐渐降低。为了保持其荧光效能，荧光染料标记的核苷酸应避光-20℃保存。由于Cy3和Cy5在pH大于9时易被降解，所以Cy3和Cy5修饰
Q5. 如何定量合成的寡核苷酸? ↑TOP
合成的寡核苷酸的量非常少，不能直接称重来定量。通常通过测量紫外吸光度值(OD值)来定量。
Q6. 如何通过紫外吸光度值来定量寡核苷酸？↑TOP
寡核苷酸的量经常用OD值来描述。1个OD值是体积1ml寡核苷酸溶液，在内径1cm的比色杯中的吸光度值，约为33 mg寡核苷酸，序列不同的寡核苷酸OD值有所不同。因为在260nm处单个碱基的吸光度值是已知的，所以序列已知的寡核苷酸的浓度就可以测定。
dT: 8.8 ml/μmol
dG: 11.7 ml/μmol
dC: 7.3 ml/μmol
dA: 15.4 ml/μmol
对于一段寡核苷酸，它的吸光度等于每个碱基的数目乘以它的吸光系数，然后将4种碱基的结果加起来就是整个寡核苷酸的吸光度。它的浓度可通过下式来计算：
O.D. =εC (内径1 cm的比色杯)
Q7. 如一个18个碱基的寡核苷酸包括3个dG,4个dC,5个dA和6个dT, OD值是0.7，那么它的量是多少？
↑TOP
首先，用下面公式计算18个碱基的寡核苷酸的吸光度是多少：
ε=11.7×3+7.3×4+15.4×5+8.8×6=194.1(m l/mmole)
然后，通过下式来计算寡核苷酸的浓度：
O.D. =εC，C = O.D./εC
C = 0.7 /194.1 = 0.0036 (μmol/ml) = 3.6 (nmol/ml)
最后，OD值为0.7的18个碱基寡核苷酸的浓度是3.6nmol。
Q8. 如何计算寡核苷酸的分子量? ↑TOP
寡核苷酸的分子量可以通过下式进行计算：
M.W. =(NA ×249.2) + (NC × 225.2) + (NG × 265.2) + (NT × 240.2) + (寡核苷酸长度-1) ×63.98 + 2.02
NA =总A数
NC = 总C数
NG = 总G数
NT = 总T数
Q9. 如何测定寡核苷酸的质量? ↑TOP
通常，合成的寡核苷酸的质量用摩尔数来描述，常用nmol。用寡核苷酸的摩尔数或寡核苷酸的分子量可以计算寡核苷酸的量：
寡核苷酸质量(ng) =分子量(M.W.)×摩尔数(nmol)
Q10. 如果不知道寡核苷酸的碱基组成，有什么办法来定量合成的寡核苷酸？↑TOP
1 OD值的单链寡核苷酸大约33 mg，双链寡核苷酸约为 50.mg。然而对于较短的寡核苷酸，上述值偏差较大。因此，最好用 Q6 中提到的适合于短寡核苷酸质量的计算方法，可以得到更精确的结果。
Q11. 如何测定合成的寡核苷酸的Tm 值?↑TOP
Tm(解链温度)是指50%双链被解开成单链时的温度。寡核苷酸浓度和盐浓度会影响Tm值的大小。
T m值有多种计算方法。我们使用近邻法(P N A S83,3746-50)来计算。用这种方法计算前，也有多种方法来估测。如果是15个碱基以下，那么有一种好的方法来估算，对于A和T，可以乘以2癈，对于C和G，可以乘以4癈然后相加，这叫做Wallace法则。
Tm= 2℃(A + T) + 4℃(G + C)
另一种方法来估计长链中GC含量
Tm = 81.5 + 0.41(%GC) - 500/L + 16.6 log[M]
(L:寡核苷酸的长度；M:1价阳离子的浓度)
但这些方法不能消除碱基堆积的影响，结果并不准确，所以近邻法被广泛的应用。但是，对于在60-70 bp或15bp以下的寡核苷酸的测定，近邻法还是有缺点。
Bioneer使用的近邻法具有新的特点。它考虑到在退火过程中不同的碱基序列的影响，并且通过热力学来测定，可以更有效的测定Tm值。比如5' -GC-3' 和5' -CG-3'的序列用热力学方法测定结果是不同的。计算方法如下：
依靠热力学方法，焓和熵通过两个碱基来确定。[salt]是指一价阳离子的浓度，[Oligo]是指反应过程中的寡核苷酸浓度。R是指气体常数(1.987 cal·K-1mol-1)。Bioneer用近邻法计算Tm值时，使用的是50 mM的盐浓度和1 nM的寡核苷酸的浓度。
Bioneer会给每一个用户提供Tm值，但这只是估计值，我们不能保证精确性，因此这个值仅供用户参考。
如果没有扩增出产物，你可以把退火温度降到Tm值以下4～5癈。如果有许多非特异性的产物，你需要改变实验条件如提高退火温度以得到正确的产物。
Q12. 为什么Bioneer提供的Tm值和我们的Tm值不同? ↑TOP
Bioneer使用的Tm值的计算方法和我们通常的计算方法是不同的。我们通常只是简单的乘以A、G、C、T的数目，但序列不同碱基的Tm值亦会不同。如Tm值取决于序列中的每一个碱基，即使碱基数相同但序列不同时，Tm值也将不同。
Q13. 用什么方法调整寡核苷酸的浓度？↑TOP
首先，在Bioneer提供的数据表或报告单中的100 pmol/靗，是用来加入TE缓冲液或无菌水，以使管中寡核苷酸的终浓度达到100 pmol/靗。例如,数据表或报告单中是189.0和209.2时，则应向两个管中分别加入相应量的无菌水,即可使每个管中的寡核苷酸浓度达到100 pmol/μl。每一个管中寡核苷酸含量通过下式可以计算如下：
189.0μl×100 pmol/μl = 18,900 pmol = 18.9 nmol,
209.2μl×100 pmol/μl = 20,920 pmol = 20.92 nmol
如果所要的终浓度是0.5μM，pmol/μl需要换μM。
100 pmol/μl = 100× 106 pmol/106μl = 100×106× 10-12 mol/L = 10-4 mol/L
= 10-4 ×106 μmol/L
= 102μmol /L
= 100 μM
终浓度换算为100μM，如果需要的浓度是0.5μM的，加入终体积的1/200的引物量，以使引物终浓度为0.5μM。
PCR反应的终体积是50μl，所以需要加50/200 = 0.25μl的引物，以使终浓度达到0.5μM。
Q14. 单位换算表↑TOP
科学系统单位:
----------------------------
寡核苷酸单位换算的例子:
1 pmol/μl
= 1×10-12 mol/1×10-6L
= 1×10-6 mol/L
= 1μmol/L
= 1μM
Q15. 如何合成寡核苷酸?↑TOP 目前最流行的用于合成寡核苷酸的方法是通过使用“亚磷酸三脂”方法将单体连接，形成天然的3'-5'磷酸二脂键。Koster发现了β-氰乙基亚磷酰胺并作为构建单体，现在普遍的用于寡核苷酸的合成(Nucl. Acids Res. 1984, 12,4539; Tetrahedron Lett. 1983, 24,5843)。通过“亚磷酸三脂”的方法使用β-氰乙基亚磷酰胺，合成效率能够达到(98%)而合成时间比其它寡核苷酸的合成方法更短。而且，由于单体β-氰乙基亚磷酰胺在激活以前很稳定，这是对合成寡核苷酸来说所必需的，他们能储存更长的时间。当寡核苷酸共价的连接在固相载体上就可以使其不被过量溶解β-氰乙基亚磷酰胺和结合试剂的作用下，寡核苷酸被合成。在各种各样的固相载体中，可控孔度玻片已经在近年广泛使用了，这种玻片是由均匀的玻璃基质组成，上面有固定尺寸的孔。
整个寡核苷酸的合成通过一系列的反应完成，其中包括四个循环反应：脱保护，连接，氧化，加帽。
脱保护
通过第一个循环—脱保护，CPG裂解出5'保护基团DMT。酸性条件对于脱保护是必需的，通常使用3％三氯乙酸。据报道，寡核苷酸在酸性环境中易脱嘌呤，尤其是对于腺苷。因为三氯乙酸有很强的酸性，
所以用三氯乙酸脱保护时，反应时间不应该太长。比起三氯乙酸，二氯乙酸酸性较弱，能够在一些情况下避免脱嘌呤问题。脱保护后产生的DMT阳离子呈现出一种深橘色。通过测定吸光度，来监测反应效率。连接
脱保护后，CPG上的5'-羟基暴露，结合核苷β-氰乙基亚磷酰胺，三亚磷酸酯氧化变成磷酸三脂，然后按顺序连接。对于核苷β-氰乙基亚磷酰胺，为了避免合成寡核苷酸过程中负反应的发生，碱基的环外氨基被保护以免形成酰胺结构。苯甲酰基用于保护酰苷和胞苷。另一方面，异丁酰基用于鸟苷碱基保护。胸苷碱基中没有环外的胺基，所以不需要保护。β-氰乙基亚磷酰胺用于保护所有核苷的5'-羟基。
因为核苷2-氰乙基亚磷酰胺在正常条件下非常稳定，不能直接和正在合成链上游离的5'-羟基功能基团发生反应。所以，它们必须首先通过一种弱酸性激活剂激活。在各种激活剂中，四唑作为标准激活剂具有很强的激活作用。四唑已经被认为具有双重作用：它质子化2-氰乙基亚磷酰胺的二异丙氨基，产生亲核基团，形成具有活性的四唑膦中间产物。用这种被激活的核苷亚磷酰胺试剂耦联反应快(不到2分钟)，产量高。
氧化
新合成的亚磷酸盐和核苷酸之间的键合不稳定，对酸和碱均很敏感。因此，三价的亚磷酸三脂被氧化成五价的磷酸三脂。碘是温和的氧化剂，在碱性的四氢呋喃溶液中作为氧的供体。此步反应非常快，在三十秒内就可以完成。
加帽
因为结合反应在特定的时间内不能够定量，在每一步结合反应中都有一小段提前终止的序列产生。如果这些序列进一步参与反应，产物将很难从混合序列中分离出来。通过加帽，即将自由羟基乙酰化，解决了这个问题。乙酰化可由强的乙酰化试剂完成，该试剂是由等摩尔的醋酸酐和N-甲基咪唑组成，反应可在30秒内完成。氧化后，核苷酸加入，循环完成。寡核苷酸合成后，移去增长链5'-末端的DMT基团，下一个核苷酸的聚合循环开始。整个寡核苷酸合成后，借助浓氨水的处理，寡核苷酸从固相载体上分离，同时碱基和磷酸基去保护。
Q16. 标准寡核苷酸结构↑TOP
Q17. Bioneer能合成的最长的寡核苷酸是多长?↑TOP
合成量0.025 μmol: 50 mer
合成量0.05 μmol: 50 mer
合成量0.1 μmol: 100 mer
合成量0.2 μmol: 100 mer
合成量1.0 μmol: 130 mer
Q18. 当我预订50nmol的寡核苷酸，产品却不足50 nmol，为什么?↑TOP
50 nmol的寡核苷酸合成不意味着能得到50 nmol的最终产品。50 nmol是指在寡核苷酸合成开始时固相载体负荷的数量。寡核苷酸通常是反应所要求的量而不是最终产率，用户得到的核苷酸的数量自然要比要求的少。终产率受寡核苷酸长度、碱基组成和连接效率的影响。
Q19. 能合成出高百分比“G”的寡核苷酸吗? ↑TOP
众所周知，含高百分比的“G”寡核苷酸不容易被合成，特别是序列中包含一行“G”。有报道，如果有四个或更多的“G”排成一行，寡核苷酸将趋向形成鸟嘌呤四聚体(Poon and MacGregor,Biopolymers, 1998, 45, 427 -434)。通过次黄嘌呤核苷置换部分G，就能避免四聚体鸟苷的形成。
Q20. 能提供寡核糖核酸(RNA)合成吗？↑TOP
是的，我们能合成。我们能提供2'-OH或/和2-O-甲基结构的寡核糖核苷酸，也能合成由DNA和RNA组成的寡核苷酸。
Q21. 合成的寡核苷酸在3' 或5'位有磷酸基吗？↑TOP
如果没有殊要求,合成的寡核苷酸在3'或5'端均无磷酸基。如果你想要3'或5'有磷酸基的寡核苷酸，你应该在订单上标注清楚在3'或5'端进行磷酸化修饰。
Q22. 简并引物及通用引物是什么？↑TOP
R <- a 或g
Y <- c 或t
M <- a 或c
K <- g 或t
S <- g 或c
W <- a 或t
V <- a, c或g
H <- a, t或c
B <- g, t或c
D <- g, a或t
N <- a, c, g或t
Q23. 怎样纯化合成的寡核苷酸？↑TOP
为了纯化合成的寡核苷酸，Bioneer采取了几种不同的方法如，脱盐，BioRP, HPLC 及PAGE。脱盐
寡核苷酸合成后，为了纯化寡核苷酸成为天然的DNA结构，首先必须去除保护基团。通过浓氨水处理，合成的寡核苷酸从固相载体上分离，2-氰乙氧基--酸二脂键的保护基团以及碱基的保护基团基(苯甲酰
基和异丁基)被去除，从而形成了天然的DNA结构。然而，必要的去保护步骤完成后，寡核苷酸混合物还包含几种必须被去除的小分子有机化合物。所有非必须有机化合物被移除的过程通常叫做脱盐。脱盐纯化可以借助反向硅胶柱进行。尽管脱盐纯化可以移除所有的非必需有机杂质，但它不能有效移除合成中产生的微量的(每个联结步骤中不超过2%)提前终止的寡核苷酸杂链。不过，脱盐的寡核苷酸还是能够满足PCR 检测等基础生物研究的。
BioRP
如果寡核苷酸合成以“三苯甲基”的形式完成，则N末端包含5'-DMT基团，而提前终止的寡核苷酸不包含该基团。因为DMT基有强亲脂性，有5'-DMT基团的寡核苷酸与反相树脂具有亲和性，因此反相亲和树脂通常被用来进行寡核苷酸的纯化。利用反向树脂和5'-DMT寡核苷酸间存在强亲和力，但是提前终止的寡核苷酸不包含DMT基团这一原理，我们能够成功的把想要的N-甲基寡核苷酸从提前终止的寡核苷酸杂质中分离出来。
HPLC
如果合成的寡核苷酸应用于克隆，定向突变或定量的基因检测，那么对其纯度要求较高。脱盐或OPC 纯化的寡核苷酸可能达不到要求，而HPLC纯化法被广泛地用于这个目的。作为一种纯化树脂，阴离子交换树脂或反向树脂被用于寡核苷酸的纯化。阴离子交换树脂的HPLC通常显示95-98%纯化效率，对于达到35-mer寡核苷酸的纯化是充分的。反向树脂化的HPLC与阴离子交换树脂的HPLC呈现相似的纯化效率。因为HPLC的纯化效率很大程度依靠寡核苷酸的长度，用HPLC法不能有效纯化长的寡核苷酸(大于35 mer)。
PAGE
对于长的寡核苷酸的纯化(50-100 mer)，我们推荐PAGE纯化法，它使用交连的聚丙烯酰胺凝胶作为纯化基质。尽管PAGE显示出高的纯化效率(＞98%)，但它在额外的步骤方面有一些缺陷，比如在PAGE 之后需要提取和脱盐，继而将导致纯化产率的下降。
Q24.用于芯片分析的60 mer寡核苷酸如何被纯化呢?↑TOP
我们推荐PAGE纯化法用于60 mer寡核苷酸的纯化。通常，长核苷酸(大于50 mer)被推荐使用PAGE纯化法。
Q25. 修饰寡核苷酸↑TOP
5'氨基和3'氨基修饰法：
寡核苷酸末端最初的脂肪族胺基团会在合成过程中，连接上许多胺反应性的分子。氨基修饰的寡核苷酸可被用于固定所需的寡核苷酸，固定在基质上形成寡核苷酸为基础的微阵列。
5'磷酸化和3'磷酸化：
5'磷酸化的寡核苷酸通常用于定点突变和接头插入。
5'巯基修饰法：
5'末端巯基修饰的寡核苷酸可以进一步衍生出巯基反应分子。寡核苷酸的巯基能连接多种荧光基团并用于DNA测序和杂交。
5'生物素和内部生物素修饰法：
生物素化的寡核苷酸具有多种用途，包括比色法测定DNA和借助抗生物素蛋白链菌素包被的磁珠进行固相捕获，用于限制性内切酶图谱、基因组步移和差异显示。
5'荧光素，3'荧光素和内部荧光素修饰法：
荧光染料标记的寡核苷酸已经被广泛用于DNA自动测序，定量PCR和原位杂交反应。在各种各样的荧光染料中,荧光素(激发/放射最大波长为494/520 nm)是一种使用最广泛的荧光基团，用于标记和探测生物分子。此外，它的吸收率相对较高，产生的荧光量子数量多，与氩离子激光器在488 nm的激发光谱相近，使它成为共聚焦激光扫描显微镜法中常用的荧光基团，并用于流式细胞计数。然而，荧光素有几个缺陷，包括相对较高光漂白率，pH敏感性(pKa～6.4)，pH低于7时，荧光显著下降。尽管有这些缺陷，荧光素仍因它的优点被广泛的用做荧光染料。
5' TAMRA及3' TAMRA修饰法：
Rhodamines与具有光漂白易感性和pH依赖性的荧光素相比见光更稳定。
Rhodamines光谱在pH 4-10之间不受影响，在许多生物学应用方面，这是优于荧光素的一个重要的优势。玫瑰红中最普遍的基团是TAMRA，它是一种用于寡核苷酸标记和DNA自动测序的重要的荧光物质。TAMRA结合物的荧光量子产量通常只有荧光素结合物的四分之一。但是，由于TAMRA很容易被水银灯形成的546 nm光谱激发，被荧光显微镜观察，而且本质上它比荧光素更不易感光。TAMRA结合物比相应的荧光素结合物更明亮。TAMRA也可被543 nm的绿色的He-Ne激光有效的激发，它很大程度上被用于分析仪器。TAMRA结合物不能很好的被
568 nm用于很多共聚焦激光扫描(电子)显微镜Ar-Kr混合气体激光激发。
5' Cy3 及5' Cy5修饰法：
Cy3 和Cy5的最大吸收/激发波长是550/570 nm和649/670 nm。
间隔物(spacer)修饰法：包括了多种在寡核苷酸与后续连接标记之间的间隔序列的亚磷酰胺的合并，在标记物与寡核苷酸探针进行原位杂交反应时，这种方法可能是很重要的。
肌苷修饰法：
脱氧肌苷以这种稳定性顺序I:C > I:A > I:T=I:G.形成稳定的碱基配对。包含肌苷的寡核苷酸借助PCR或探针杂交可用于检测或分析不同的或相似的DNA序列。
硫磷酰修饰法：
经硫磷酰基化的寡核苷酸对核酸内切酶和核酸外切酶的降解有很好的抵抗作用，这种特性能增加反义寡核苷酸链在细胞内的效果。我们可以依据用户的需要，在寡核苷酸部分序列中用硫磷酰基置换核苷酸内部的磷酸基(在磷酸基中用一个硫原子代替一个氧原子)。
双重修饰法(5'荧光素3' Dabsyl & 5'荧光素钠3' TAMRA 修饰)：
双重标记的寡核苷酸可在实时PCR中用来检测DNA的扩增。他们或者在反应中裂开(如Taq Man探针)或者在互补目的DNA存在的情况下经历一种构型变化(如分子信标)。许多探针利用寡核苷酸形成反向环构型的特征进行设计。实际上，通过除去供体荧光基团的淬灭作用，探针可指示反应的发生。
PCR检测的5' 核酸酶测定法(Taq Man探针)：
5'核酸酶测定法被用来实时监测反应。这种测定法利用耐热性DNA聚合酶的5'核酸外切酶的活性来检测正在进行的反应。耐热性DNA聚合酶能够从链状DNA的5'端水解核苷酸，旧链在合成一条新链时被置换。裂解主要发生在置换的单链部分和DNA配对的双链部分的连接处。这导致单核苷酸和寡核苷酸从置换的DNA链的5'末端被释放。DNA聚合酶的这种特性被用来监测反应。在5'端核酸酶检测法中FRET DNA双重探针是短的寡核苷酸，与扩增DNA靶序列和修饰的3'端互补，以至于他们不能在3'端延长。他们在3'和5'末端用荧光基团标记。报告荧光染料被放置在5'末端，粹灭剂被放置在探针的3'末端。在完整的探针中，染料的荧光性被消除，在PCR反应中探针与靶序列杂交，借助耐热性DNA聚合酶的5'核酸酶的活性，淬灭剂与报告基因分离，从而恢复报告基因的荧光性。两个探针被使用，一个用于正常序列，另一个用于3 bp缺失的互补序列。每个探针在5'末端有不同的报告荧光，并且一个相同的粹灭剂染料连接在从5'末端数的第七个核苷酸上。靶DNA的鉴定由荧光发射光谱决定。
分子信标：
严格的说，荧光淬灭在使用DABCYL分子指示标中不是FRET相关的，因为它不能满足重叠光谱的标准。然而，以FRET为基础的淬灭也能被使用。分子信标被作为杂交探针后不久被应用于PCR，利用它们能够同互补DNA杂交的原理，它们能够被用来监测一个正在进行中的反应和在实时PCR中区别等位基因。反应完成后，反应物加入固定有分子信标的微量滴定孔中，借助读取产生的荧光检测产物。或者还可用封闭试管和实时程序来检测。在这种情况下，分子信标被直接加入到PCR混合物并且与扩增反应中新合
成的DNA杂交。与Taq Man探针相比，分子信标优势在于能够进行多重PCR检测，因为，在理论上，他们能同时测定更多的产品。
Q26. 作为反义脱氧寡核苷酸的硫磷酰化寡核苷酸↑TOP
随着我们对分子生物学的理解不断加深，我们慢慢获得对分子水平疾病的认识。合理的药物设计变得更加可行。特别是在蛋白质水平上分子间的反应能够被完美的设计，通过生物合理的途径来提高结合性，分子间的相互作用成功的被应用和被最佳化。合成的脱氧寡核苷酸(ODNs)已经被Zamecnik和Stephenson提出作为一种新的潜在的治疗方法，这种方法以一种合理的方式与信使RNA疾病关联蛋白相互作用，并且特异的抑制它的合成。
这种被称为反义策略的方法的优势在于，通过众所周知的Watson-Crick碱基配对法则，即单链核酸与互补的寡核苷酸链相互作用形成双螺旋结构。每个蛋白分子均遵循分子生物学的基本机制合成：一个基因(双链DNA)携带一种特定蛋白质的遗传信息，被转录成作为信息携带者的单链mRNA，再以此作为模板在核糖体指导蛋白质的合成(翻译)。因此，反义策略不被限制于特定类型的疾病而能够被广泛地应用。天然的寡核苷酸(DNA和RNA)不能够达到作为反义药物候选物的标准，不同的化学修饰将克服现存的障碍，它将被细胞吸收，抵抗核酸酶的降解和提高与mRNA的亲和力。首先，脱氧寡核苷酸(ODNs)必须能够穿越细胞膜到达细胞质或细胞核。一旦进入细胞内部，ODNs就必须抵抗核酸酶的降解。最后，为了抑制致病基因的表达，ODNs必须能够特异性结合并对靶mRNA有高度的亲和力。早期在组织培养中观察到的ODNs的活性后曾认为，这些理论上的障碍不值得担心。然而，最近文章的数据分析显示这些理论上的障碍确实存在。
最近的研究焦点在于用化学方法改善ODNs的特性，主要集中在核苷酸酶抵抗力和mRNA亲和力的提高方面。mRNA亲和力对于反义策略非常重要，它常常用解链温度(Tm)所反映。双倍体核酸中，由于碱基堆积产生的P-P相互作用, 在260 nm紫外吸收被淬灭。加热可将其退火解链成单链，导致其在260 nm处的紫外的吸收增加。因此，假定一个二状态模型，会得到一个S形曲线，并能计算其热力学参数。这个吸收-温度曲线的中点被定义为Tm，它反映的当处于配对状态的寡核苷酸链与处于单链状态的寡核苷酸链达到平衡时的温度。寡核苷酸的顺序和长度，适用下述的法则：Tm增加3到5癈粗略的等于缔合常数增加十倍。
寡核苷酸的修饰主要发生在磷酸二脂的骨架。核酸酶使寡核苷酸链快速降解的主要原因是磷酸二脂骨架结构的水解，部分结构替代已成为增强稳定性的主要策略。此外，骨架修饰能影响寡核苷酸链的其他性质，如RNA亲和力或细胞的吸收行为。
第一代的骨架修饰在硫磷酰中保留了磷原子。这个衍生性显示对核酸酶具有不断增长的抵抗力。因此，相应的寡核苷酸用于进行体外或体内试验，但不幸的是，它们都显示对靶RNA的低亲和力。然而，硫磷酰被看作寡核苷酸第一代类似物，并显示出抵抗不同靶分子的生物学活性。这种有力的行为主要归因于生物的或化学的稳定性，良好的药物代谢动力学特性包括细胞的摄取以及对于这类化合物RNase H提高了裂解mRNA的能力。
硫磷酰主要是通过两种不同的方式合成的：一种是在二氧化碳中溶解硫元素，或者借助更新的办法，即使用Beaucage试剂( H-1,2-Benzodithiol-1-one1,1二氧化物)硫化亚磷酸三脂。后一种方法避免了硫元素在多数有机溶剂中不溶解以及二氧化碳毒性的问题。Beaucage试剂也
生产高纯度的硫磷酰。硫磷酰合成产生两种同分异构体（R和S），即对于一个长度为n的寡核苷酸，在每一个合成位点产生2n-1个二倍体非对映异构体。最初，曾有关于这个同分异构体的混合可能会产生
不可预知的结果的担心。然而，幸运的是，用任何标准S-寡核苷酸制备同分异构混合体不会出现影响生物学活性的寡核苷酸。
Q27. 怎样制备双链DNA?↑TOP 把单链寡核苷酸制备成双链DNA寡核苷酸，退火是最简单的方法，但要求要非常小心的移去不想要的单链材料。
--在STE缓冲液(10 mM Tris-HCl pH8.0, 50 nM NaCl, 1 mM EDTA)中溶解高浓度(1-10 OD260 units/100 靗)的寡核苷酸
--混合两种相同的浓度单链寡核苷酸。
--加热到94癈然后缓慢冷却至室温。为了避免形成复杂的发夹结构，寡核苷酸需要更加缓慢的冷却。
--双链DNA终产品是稳定的,建议贮存于4癈或冷冻环境。
电网营业厅无纸化解决方案
电网营业厅无纸化解决方案 2017年3月 1背景 随着信息化社会的到来，电子政务和电子商务得到了快速发展，并形成了大量电子文件。在开放的网络信息空间，电子文件是通过计算机网络、服务器或通信线路等进行传输的。电子文件在传送过程中是否已遭窃读、篡改、增删或系冒名传送，传送后是否会出现有人否认收到文件等情况？由此引出了网络办公或网上交易中电子文件的安全性问题。出于确认使用人的身份，确保电子文件的安全保密及完整无缺，保障已进行的各项工作或交易不被推翻的需要，电子签名便应运而生了。 电子签名，是指数据电文中以电子形式所含、所附用于识别签名人身份并表明签名人认可其中内容的数据。它是基于数字证书的电子认证技术，通过智通卡、密码或生物测试等多种手段来解决身份认定、信息来源认定、信息完整性和安全性确认等诸多问题，以保证网上办公、电子支付、网上交易、电子合同、网上知识产权等的安全问题的。目前，大规模应用的电子签名技术有两类：一类是数字签章技术，需通过第三方认证机构来确认；另一类是电子化印章技术，通过印章图像电子化、加密等方式实现文件正文与印章的一体化传输。电子签名并非是书面签名的简单数字图像化，它其实是一种电子代码，利用
它收件人便能在网上轻松验证发件人的身份和签名以及文件在传输过程中有无被改变等情况。 目前电子签名主要是用于银行的信息交易。而在电力信息化工作流平台中，在流程确认环节也需要签名，本方案试图通过把电子签名信息技术融入到电力行业的信息化中，并在电力行业得到具体的应用。2现状分析 2.1电子化签名在其他公用事业的应用 2.1.1医疗行业 近几年医院的信息化建设后来居上，已基本实现数字化建设。各医院建成使用的系统包括EMR、HIS、LIS、PACS、OA、CIS、绩效分析系统、体检系统、病案扫描系统、医保系统等。医院信息化网络管理已由以经济管理为中心向医疗管理、以病人为中心过渡，逐渐建立以病人信息为中心的集医、教、研、管功能于一体的完整医院信息系统。电子签章的应用，在一定程度上可以促进医院管理模式的变革。就诊医生在其日常工作平台上，如门诊、住院医生站，电子病历系统，医技系统中，实现完整的一套病历记录，安排医嘱，开具处方，申请检验检查，给出报告单等各项工作后，自动、安全、准确地加盖当时负责医生的电子签章，优化了工作流程，节约人力，节省时间，提高了工作效率，方便了医生诊疗，有利于提高诊疗效率，减轻医生的作业强度。另一方面，各业务系统中加入电子签章后，一些原来需要纸
无纸化真考试题库第37套
无纸化真考试题库第37套 1.算法的时间复杂度是指 A) 设计该算法所需的工作量 B) 执行该算法所需要的时间 C) 执行该算法时所需要的基本运算次数 D) 算法中指令的条数 参考答案：C 算法的时间复杂度是指执行算法所需要的计算工作量。它与算法程序执行的具体时间并不一致，因为算法执行的具体时间受到所使用的计算机、程序设计语言以及算法实现过程中许多细节的影响。算法的计算工作量是用算法所执行的基本运算次数来度量的。故选C选项2.设循环队列存储空间为Q（1:50）,初始状态为front=rear=50。经过一系列入队和退队操作后， front=rear=25，则该循环队列中元素个数为 A) 26 B) 25 C) 24 D) 0或50 参考答案：D 循环队列是队列的一种顺序存储结构，用队尾指针rear指向队列中的队尾元素，用排头指针front指向排头元素的前一个位置。循环队列长度为50，由初始状态为front=rear=50可知此时循环队列为空。入队运算时，首先队尾指针rear进1（即rear+1），然后在队尾指针rear 指向的位置插入新元素。特别的，当队尾指针rear=50+1时，置rear=1。退队运算时，排头指针front进1（即front+1），然后删除front指针指向的位置上的元素，当排头指针front=50+1时，置front=1。 若经过运算，front=rear可知队列空或者队列满，则队列中有0或者50个元素。故选D选项 3.某棵树的度为4，且度为4、3、2、1的结点数分别为1、2、3、4，则该树中的叶子结点数为 A) 11 B) 9 C) 10 D) 8 参考答案：A 由题目可以知道，若四种度的结点分开成子树，共包含结点(4+1)+2×(3+1)+3×(2+1)+4×(1+1)=30个，当组合成一棵树时，任选一个度不为0的结点作为根结点，则新的树结点个数为30-2-3-4=21个，则该树中叶子结点个数为21-1-2-3-4=11。 故选择A选项。 4.设某二叉树的前序序列与中序序列均为ABCDEFGH，则该二叉树的后序序列为 A) HGFEDCBA B) EFGHABCD C) DCBAHGFE D) ABCDEFGH 参考答案：A 二叉树遍历可以分为3种：前序遍历（访问根结点在访问左子树和访问右子树之前）、中序遍历（访问根结点在访问左子树和访问右子树两者之间）、后序遍历（访问根结点在访问左子树和访问右子树之后）。
结构设计常见问题解答
结构设计常见问题解答
1.梁裂缝控制与粱端弯矩调幅矛盾的解答 2.次梁对整体刚度贡献与点铰接问题 3.位移比与周期比对扭转控制有什么区别 4.质疑：周期折减系数 5.为什么不用pkpm自动梁配筋，而是要对SATWE信息手动配筋 6.大小偏心柱与单双偏压问题 1、板厚一般怎么取，与跨度有什么关系？ 2、布置梁的时候，一般梁与梁之间的间距多少经济？(包括次梁的) 3、住宅楼的梁高一般怎么取？ 4、框架结构柱距多少较为经济？ 5、纯框架结构适合的高度和层数？ 6、框架柱的混凝土等级一般怎么取？ 7、框架结构的变形特性？ 8、混凝土中，温度收缩怎么处理？ 9、剪力墙高宽比多少为宜？ 10、剪力墙混凝土等级一般取多少？ 11、合理的剪力墙数量？ 12、框架结构合理的重量范围？ 13、怎么估算柱子截面？ 14、轴压比超了怎么调？ 15、位移比不满足怎么调？
16、周期比不满足怎么调？ 17、位移角不满足怎么调？ 18、PKPM建模中怎么降板？ 19、PKPM中板厚为零和房间开洞的区别？ 20、PKPM中虚梁怎么建？ 21、什么情况下点铰？ 22、超筋了怎么处理？ 23、基础设计时，什么情况下要输入详细的地质资料？ 24、基础底标高怎么考虑？ 25、活荷载折减在PKPM中折减怎么实现？ 1. 梁裂缝控制与粱端弯矩调幅矛盾的解答 a支座弯矩调幅与截面裂缝宽度验算是一对矛盾，对支座调幅处理的目的是为适当减小支座弯矩，而对支座截面进行裂缝宽度计算往往又需要加大截面的配筋，从而又加大了支座截面的弯矩。支座不调幅时支座弯矩大，截面配筋大，裂缝宽度不能满足规范要求，及多配
广东会计从业资格无纸化考试试题文件
2010年广东会计从业资格无纸化考试《财经法规与会计职业道德》模拟试题一 一、单选题（25小题，每小题1分） 1、票据的金额和收款人名称能够由出票人授权补记的票据是（）。 A、银行汇票 B、本票 C、支票 D、商业汇票 正确答案：C 2、会计资料的真实性是指（）。 A、会计资料所反映的内容应当同单位实际发生的经济业务的内容相一致 B、构成会计资料的各项要素必须齐全，必须如实、全面地记录和反映经济业务发生情况 C、会计资料所反映的结果，应当同单位实际发生的经济业务
的结果相一致 D、会计资料所反映的内容和结果，应当同单位实际发生的经济业务的内容及其结果相一致 正确答案：D 3、会计人员接着教育的对象是（）。 A、在职会计人员 B、单位负责人 C、取得会计从业资格证书的人员 D、会计 正确答案：C 4、会计核算应当以实际发生的经济业务为依据，体现会计核算的（）要求。 A、相关性，慎重性 B、真实性，客观性 C、可比性，及时性 D、实事求是 正确答案：B 5、下列各项中，不符合票据和结算凭证填写要求的是( )。 A、票据的出票日期使用阿拉伯数字填写 B、中文大写金额数字书写中使用繁体字 C、阿拉伯小写金额数字前面，均应填写人民币符号
D、将出票日期2月12日写成零贰月壹拾贰日 正确答案：A 6、单位发生的下列活动不属于会计核算的内容（） A、款项和有价证券的收付 B、资本、基金的增减 C、财务成果的计算和处理 D、会计人员的任用 正确答案：D 7、下列关于个人银行结算账户使用功能的表述中，不正确的是（）。 A、具有活期储蓄功能 B、具有一般转账结算功能 C、使用支票、信用卡等信用支付工具的功能 D、个人储蓄账户也能够办理转账结算 正确答案：D 8、下列对票据权利的讲法中，不符合规定的是（）。 A、票据权利包括付款请求权和追索权 B、付款请求权和追索权是有一定顺序的，有不可选择性 C、追索权是票据权利的第一顺序权利，只有在追索权遭到拒
无纸化办公系统解决方案
武装部打印室集中打印解决方案 武装部打印室集中打印解决 方案 2014年5月
第一部分前言 1.1概述 本方案是根据渭南建设局实际要求来进行阐述的，包括了FORP基础平台、个人办公平台、公共信息平台、行政办公、公文收发、文档管理等多个方面的功能需求，总体构成渭南建设局无纸化OA办公系统。 1.2范围及文档组织形式 本方案是对渭南建设局实际要求的技术响应，共分六部分：第一部分前言；第二部分为解决方案综述；第三部分针对渭南建设局机关办公自动化系统提出系统解决方案和流程的详细描述；第四部分对系统运行环境进行介绍；第五部分对售后服务及技术支持体系进行介绍；第六部分对本建议做总结。 第二部分综述 FORP柔性运营资源管理平台（英文名Flexible Operation Resource Platform），是面向管理层的集成管理软件平台，以目标管理为核心，以人为本，以业务流程为驱动，以知识和关系管理为重点的新一代管理软件。FORP通过一个基础平台、三大引擎和若干管理应用套件，构建了一个线上生存必须的运行支撑环境。
图1.1FORP管理平台结构示意图 2.1FORP协同管理平台特点 ?以流程为基础，驱动业务协同。做为FORP三大引擎之一的流程引擎，支持公文 流转、报销、借款、请假、出差、用车、采购、考核、培训、物资领用等各种流程的审批、管理，规范企业中各项工作执行，驱动团队协同工作，提升总体工作效率。 ?基于PDCA循环的计划任务管理，真正的协同工作平台。围绕企业目标，进行工 作目标任务的分解、分配、指导、检查、催办、汇报、验收、总结及模板化，充分体现PDCA循环思想，强化执行，真正协同。 ?广泛应用门户技术，使用操作更方便、直观。应用门户技术，为每一位用户提供 个性化的“工作平台”，图表等多种方式展示，让使用操作更方便、直观。 ?平台化设计、自定义报表与业务表单工具，扩展更加灵活。符合SOA设计原则、 多层体系结构、灵活的流程与表单工具，节省信息化建设总体成本。 2.2技术特性 该解决方案基于西点成熟的柔性运营资源管理平台FORP产品，采用成熟的开发语言(MS .Net )和架构(B/S)进行，保证XX机关无纸化OA办公系统的稳定和安全，其系统技术特性如下：
全国计算机等级考试无纸化真考题库试卷二级C--(4)资料
全国计算机等级考试无纸化真考题库试卷(4) 二级C++ (考试时间l20分钟，满分100分) 一、选择题(每小题1分，共40分) (1)下列数据结构中，属于非线性结构的是( )。 A)循环队列 B)带链队列 C)二叉树 D)带链栈 (2)下列数据结构中，能够按照“先进后出”原则存取数据的是( )。 A)循环队列 B)栈 C)队列 D)二叉树 (3)对于循环队列，下列叙述中正确的是( )。 A)队头指针是固定不变的 B)队头指针一定大于队尾指针 C)队头指针一定小于队尾指针 D)队头指针可以大于队尾指针，也可以小于队尾指针 (4)算法的空间复杂度是指( )。一 A)算法在执行过程中所需要的计算机存储空间 B)算法所处理的数据量 C)算法程序中的语句或指令条数 D)算法在执行过程中所需要的临时工作单元数 (5)软件设计中划分模块的一个准则是( )。 A)低内聚低耦合 B)高内聚低耦合 C)低内聚高耦合 D)高内聚高耦合 (6)下列选项中不属于结构化程序设计原则的是( )。 A)可封装 B)自顶向下 C)模块化 D)逐步求精 (7)软件详细设计产生的图如下： 该图是( )。
A)N—S图 B)PAD图 C)程序流程图 D)E—R图 (8)数据库管理系统是( )。 A)操作系统的一部分 B)在操作系统支持下的系统软件 C)一种编译系统 D)一种操作系统 (9)在E—R图中，用来表示实体联系的图形是( )。 A)椭圆形 B)矩形 C)菱形 D)三角形 (10)有三个关系R，S和T如下： 其中关系T由关系R和s通过某种操作得到，该操作为( )。 A)选择 B)投影 C)交 D)并 (11)下列符号中可以用做C++标识符的是( )。 A)_radius B)f00～bar C)else D)3room (12)下列各组类型声明符中，含义相同的一组是( )。 A)unsigned long int和long B)signed short int和short C)unsigned short和short D)short int和int (13)必须用一对大括号括起来的程序段是( )。 A)switCh语句中的Case标号语句 B)if语句的分支 C)循环语句的循环体 D)函数的函数体 (14)语句int*P=＆k；定义了指针P，与这个语句等效的语句序列是( )。 A)int* p；P=&k； B)int * P；P=k； C)int * p；* P=＆k； D)int * p；* P=k；
结构设计常见问题问答
结构设计常见问题问答 1、住宅工程中顶层为坡屋顶，屋顶是否需设水平楼板?顶层为坡屋顶时层高有无限制?总高度应如何计算? 住宅工程中的坡屋顶，如不利用时檐口标高处不一定设水平楼板。关于顶层为坡屋顶时层高的计算问题新规范未做具体规定，结构设计时由设计人员根据实际情况而定，取质点的计算高度仍不超过4m.檐口标高处不设水平楼板时，按抗震规范，总高度可以算至檐口(此处檐口指结构外墙体和屋面结构板交界处的屋面结构板顶)。檐口标高附近有水平楼板，且坡屋顶不是轻型装饰屋顶时，上面三角形部分为阁楼，此阁楼在结构计算上应做为一层考虑，高度可取至山尖墙的一半处，即对带阁楼的坡屋面应算至山尖墙的二分之一高度处。 2、砖墙基础埋深较大，构造柱是否应伸至基础底部?较大洞口两侧要设构造柱加强，一般多大的洞口算较大洞口? 新规范，但应伸入室外地面下500mm，或锚入浅于500mm的基础圈梁内，两条满足其中的一条即可。但需注意此处的基础圈梁是指位于基础内的，不是一般位于相对标高±0.0m 的墙体圈梁。构造柱的钢筋伸入基础圈梁内应满足锚固长度的要求。 X&Qs$对于底层框架砖房的砖房部分，一般允许将砖房部分的构造柱锚固于底部的框架柱或钢筋混凝土抗震墙内(上层与下层的侧移刚度比应满足要求)。：新规范表，内纵墙和横墙的较大洞口，指2000mm 以上的洞口;外纵墙的较大洞口，则由设计人员根据开间和门窗洞尺寸的具体情况确定。 3、填充墙的构造柱与多层砌体房屋的构造柱有何不同? 填充墙设构造柱，属于非结构构件的连接，与多层砌体房屋设置的钢筋混凝土构造柱有一定差异，应结合具体情况分析确定。如挑梁端部设置填充墙构造柱，挑梁在计算时应考虑构造柱传递来的荷载。 4、抗震新规范 新规范，主要指不要在墙体厚度内开洞，烟道等应设在墙外，成为附墙烟道等，以免墙体应力集中。 5、底层框架结构的计算高度如何取?若取到基础顶，抗震墙厚度取1/20层高，是否过大? 计算高度的取值应根据实际情况而定，主要是看地坪的嵌固情况而定，若嵌固得好，如作刚性地坪或有连续的地基梁，可以从嵌固处取，否则从基础顶;抗震墙厚取1/20层高，这里的层高与计算高度的概念不同，是指从一层地坪到一层楼板顶的高度。 6、多层砌体房屋和底部框架、内框架房屋室内外高差大于0.6m时，房屋总高度允许比表，但不应多于1m，那么此时是否仍可将小数点后第一位数四舍五入吗? 多层砌体房屋和底部框架、内框架房屋，若室内外高差大于0.6m时，房屋总高度允许比新规范，但不应多于1m.因已将总高度值适当增加，故此时不应再将小数点后第一位数四舍五入，即增加值不大于1m.
2018度法宣在线无纸化考试宪法精彩试题精彩试题库和问题详解解析汇报
2018法宣考试宪法题库 5、（单选题）根据《宪法》的规定，居民委员会、村民委员会同基层政权的相互关系由（）规定。 A.民政部门 B.法律 C.行政法规 D.部门规章 正确答案：B 3、（单选题）县级以上的地方各级人民代表大会选出或者罢免人民检察院检察长，须（）。 A.报上级人民检察院检察长提请该级人民代表大会常务委员会批准 B.报上级人民检察院检察长批准 C.报上级人民代表大会常务委员会通知该级人民检察院备案 D.报上级人民检察院检察委员会备案 正确答案：A 19、（单选题）中华人民国（）在法律面前一律平等。 A.公民 B.群众 C.国民 D.人民 正确答案：A a2、（单选题）下列不属于社会经济权利的一项是（）。
A.休息权 B.劳动权 C.通信自由和通信秘密受保护权 D.物质保障权 正确答案：C a9、（单选题）国家监察委员会副主任是由（）任免。 A.国务院 B.全国人民代表大会 C.全国人民代表大会常务委员会 D.国家监察委员会主任 正确答案：C 1、（单选题）根据现行宪法规定，没有附加剥夺政治权利的犯罪分子正在服刑期间（）。 A.经有关机关批准可以行使选举权 B.停止行使选举权 C.没有选举权 D.准予行使选举权 正确答案：D 2、（单选题）根据现行宪法规定，关于公民权利和自由，下列哪一选项是正确的？（） A.休息权的主体是全体公民 B.《宪法》明确规定，国家尊重和保障人权 C.公民在年老、疾病或遭受不法侵害的情况下，有从国家和社会获得物质帮助的权利
D.劳动、受教育和依法服兵役既是公民的基本权利又是公民的基本义务 正确答案：B 3、（单选题）关于文化教育权利是公民在教育和文化领域享有的权利和自由的说法，下列哪一选项是错误的？（） A.宪法规定的文化教育权利是公民的基本权利 B.受教育既是公民的权利，又是公民的义务 C.我国公民有进行科学研究、文学艺术创作和其他文化活动的自由 D.我国宪法没有明确规定公民受教育权利 正确答案：D 4、（单选题）下列各项权利和自由中，（）是我国宪法没有规定的。 A.迁徙自由 B.言论自由 C.公民的人格尊严 D.宗教信仰自由 正确答案：A 5、（单选题）公民应履行的最根本的法律义务是（）。 A.劳动的义务 B.依法纳税 C.受教育的义务 D.遵守宪法和法律 正确答案：D
2013年会计从业资格无纸化考试题库
2013上半年会计无纸化考试题库《会计基础》题目如下： ——百练会计教育集团提供 一、单选： 1、（ C ），是指公平交易中，熟悉情况的交易双方自愿进行资产交换或者债务清偿的金额 A、可变现净值 B、现值 C、公允价值 D、重置成本 2、财产清查的目的是为了使得（ C ） A、账账相符 B、账证相符 C、账实相符 D、账表相符 3、从银行提取现金，登记库存现金日记账的依据是（ D ） A、库存现金收款凭证 B、银行存款收款凭证 C、库存现金付款凭证 D、银行存款付款凭证 4、“未达账项”是指企业与银行双方，由于凭证传递和入账时间不一致，而发生的（ A ） A、一方已入账，另一方未入账的款项 B、双方登账出现的款项 C、一方重复入账的款项 D、双方均未入账的款项 5、某企业期末“应收账款”账户的借方余额207 000元，其所属明细账户的借方余额合计为280 000元，所属明细账户贷方余额合计为73 000元，“坏账准备”账户贷方余额1 000元，其中针对应收账款的坏账准备为680元。则该企业资产负债表中“应收账款”项目的期末数应是（ B ） A、280 000元 B、279 320元 C、207 000元 D、206 320元 6、记账以后，发现记账凭证应借应贷的账户名称和借贷方向正确，但所填写的金额小于应记金额，应采用的更正方法是（B ）。 A、红字更正法 B、补充登记法 C、划线更正法 D、余额调节表 7、结账时，应当划通栏双红线的是（A ）。 A、12月末结出全年累计发生额后 B、各月末结出本年累计发生额后 C、结出本季累计发生额后 D、结出当月发生额后 8、记账凭证账务处理程序的优点是（ A ）。 A、详细反映经济业务的发生情况 B、可以做到试算平衡 C、便于了解账户之间的对应关系 D、登记总账的工作量大 9、企业银行对账单的保管期限为（B ）。 A、 3年 B、 5年 C、 10年 D、15年 10、原始凭证和记账凭证的保管期限为（C ）。 A、 5年 B、 10年 C、15年 D、25年 11、月末资产余额200万元，负债余额100万元，则所有者权益是（A ） A、 100万元 B、 300万元 C、200万元 D、250万元 12、（A ）是对会计对象进行的基本分类，是会计核算对象的具体化。 A、会计要素 B、会计科目 C、会计账户 D、会计对象 13、净利润是在利润总额的基础上扣除（C ）后的净额 A、管理费用 B、销售费用 C、所得税费用 D、财务费用 14、企业以银行存款偿还债务，表现为（ D ）。 A、一项资产增加，另一项资产减少 B、一项负债增加，另一项负债减少 C、一项资产减少，一项负债增加 D、一项资产减少，一项负债减少 15、有关会计科目与账户间的关系，下列表述中不正确的是( C )。 A、两者口径一致，性质相同 B、没有会计科目，账户就缺少了设置的依据
建筑结构设计常见问题
建筑结构设计中常见问题及应对策略分析摘要：随着我国建筑行业发展规模不断扩大、发展速度不断加快的同时，建筑功能、建筑结构相关问题日益突出，在建设过程中或多或少的会出现这样、那样的问题，给建筑的安全性埋下大量的隐患。因此，在新时代发展，如何不断优化房屋建筑结构设计，有效的提高房屋建筑的安全性、完善房屋建筑的功能性，成为广大人们群众普遍关注和重点研究的话题之一。 引言 近年来，我国经济快速发展，人民生活水平不断提高，人们对建筑的要求越来越高，因此，建筑业的发展速度不断加快。人们所居住的房屋逐渐由单层、小层向高层复杂化变化，房屋的建筑结构设计也由简单的砖混结构变的多种多样。建筑结构设计的好坏直接影响到人们居住的质量高低。因此，对房屋建筑进行结构设计的同时，必须及时找出设计中的常见问题并及时找好方法解决，以此来保障房屋建筑产品的安全。 一、建筑结构设计概述 由于建筑物功能不同，建筑物分类方法也多种多样。根据建筑物使用功能，可分为民用建筑、工业建筑两种；根据建筑物的结构材料，可分为砌体结构、钢结构、混凝土结构、木结构、混合结构；根据建筑物层数，可分为超高层、高层、多层、单层建筑；根据建筑物的结构形式，可分为筒体结构、剪力墙结构、框架结构、排架结构等。建筑结构是建筑物功能的基础环节，建筑结构设计是建筑设计的重要部
分，其具体过程为：方案设计、结构分析、构件设计、绘制施工图。为了保证建筑结构的安全性和可靠性，在结构设计时应注意以下内容：一是计算方面：应考虑各种结构构件的承载极限，并进行验算；二是由于建筑结构会受到多种作用力，在结构设计时应综合考虑各种作用力；三是抗震方面：我国抗震设防的烈度为 6～9 度，在建筑结构设计时应根据所在地区的房屋高度、结构类型、烈度等情况确定抗震等级。 二、房屋建筑结构设计过程中常见问题 1、结构布置不合理 建筑房屋的设计结构越规则，结构的布置才能越合理，这是建筑房屋结构设计的中心环节。一方面要注意建筑的平、立面外形尺寸大小和抗侧力物体布置的局面，满足承载力分布等各种因素的综合要求。另一方面，由于很多因素都可以造成结构的不规则，特别是针对于复杂的建筑结构，利用若干已经简单化的定量指标来划分不规则的程度并明确限定范围是几乎不可能的。 由于对规范标明的相应的设计规定不了解和对结构抗震理念的缺乏，有些房屋结构的设计人员在结构设计时不注重相关规则，导致建筑过程中出现了规则性不好、抗震性差的房屋。这主要表现在以下几点：（1）设计后的建筑平面凹凸不平，规则性差。（2）导致楼层错层。高层建筑中错层问题较严重时，会阻断楼层的楼板连续性，对建筑结构抗震十分不利。（3）在高层建筑结构中采用了两种或以上的复杂结构。例如错层结构、带转换层结构和多塔楼结构等，都属于复杂
无纸化办税签章使用常见问题汇总
无纸化办税电子签章使用常用信息及常见问题汇总（最后更新时间2017-8-22）
目录 1常用信息汇总 (3) 1.1纳税人电子印章注册及审核 (3) 1.2税务人员电子签章注册及审核 (3) 2常见问题汇 (3) 2.1首先确认电脑基本环境 (3) 2.2客户端安装失败 (3) 2.3纳税人注册，下载协议报错 (3) 2.4客户端无法读取印章数据或印章信息 (3) 2.5金税盘部分用户，安装驱动后，无法读取金税盘证书信息 (3) 2.6登录/申报时，点击登录/签章按钮，页面没有反应。 (3) 2.7提示设备证书与系统登录纳税人不符，无法执行签章。 (3) 2.8申报页面，无签章按钮，只有确认申报按钮 (3) 2.9签章时提示“证书未注册”，签章注册提示“证书号有变更”。 (3) 2.10纳税人三证合一问题 (3) 2.11关于证书注册，未知状态的错误 (3) 2.12网上办税平台内电子签章注册,注册时点击完成注册没有反应 (3) 2.13电子签章客户端读取签章提示无法连接服务器或证书没有注册 (3) 2.14企业在税局修改了企业名称，但是在电子印章里还是旧的企业名称 3 2.15签章时提示“文件不存在或者已经损坏！” (3)
1 常用信息汇总 1.1 纳税人电子印章注册及审核 注册：网上办税平台：https://www.360docs.net/doc/c214238827.html,:8080/ 注册备用地址：电子签章外网注册： https://www.360docs.net/doc/c214238827.html,:9000/WEB/ 审核：税务电子签章管理系统：http://76.12.97.162:8080/Manage/ 1.2 税务人员电子签章注册及审核 注册：http://76.12.97.43:8080/WEB/ 审核：http://76.12.97.43:8080/Manage/ 2 常见问题汇 2.1 首先确认电脑基本环境 客户端版本号V8.8； 是否将山东国税站点加入可信任站点及兼容性视图； WIN10及IE11情况下，如果读取不到设备或者签章缓慢，试一下管理员身份运行IE，然后登录网报平台；或更新金税盘或税控盘驱动，可联系96005656。 电脑上只插一个USB密钥设备，同时插两个usb设备可能会导致未注
2017年度无纸化学法用法考试题库及答案
1、（单选题）《民法总则》规定，依法设立的宗教活动场所，具备法人条件的，可以申请法人登记，取得（）资格。 A.特别法人 B.捐助法人 C.社会团体法人 D.事业单位法人 正确答案：B 用户选择：B 解析：展开解析↓ 2、（单选题）《民法总则》明确规定，（）是民事主体通过意思表示设立、变更、终止民事法律关系的行为。 A.民事表示行为 B.民事权利行为 C.事实行为 D.民事法律行为 正确答案：D 用户选择：D 解析：展开解析↓ 3、（单选题）根据《民法总则》的规定，向人民法院请求保护民事权利的诉讼时效期间为（）。法律另有规定的，依照其规定。 A.四年 B.一年 C.二年 D.三年 正确答案：D 用户选择：D 解析：展开解析↓ 4、（单选题）根据《民法总则》的规定，法人解散的，除合并或者分立的情形外，（）应当及时组成清算组进行清算。
A.清算义务人 B.主管单位 C.登记机关 D.利害关系人 正确答案：A 用户选择：A 解析：展开解析↓ 5、（单选题）《民法总则》规定，没有法定的或者约定的义务，为避免他人利益受损失而进行管理的人，有权（）。 A.获得其所保护的利益 B.请求加害人进行补偿 C.请求受益人偿还由此支出的必要费用 D.请求相关人给予劳动报酬 正确答案：C 用户选择：C 解析：展开解析↓ 6、（单选题）强化企业技术创新主体地位，探索运用财政补助政策激励引导企业建立研发准备金制度，有计划、持续性地增加研发投入，省属重点国有企业研发投入占主营业务收入的比重达到（）以上。 A.1.5% B.4% C.3% D.2% 正确答案：A 用户选择：A 解析：展开解析↓ 7、（单选题）《山西省国家资源型经济转型综合配套改革试点方案（2016-2020年）》规定，健全企业上市扶持培育机制，到2020年，新三板挂牌公司数量突破（）。 A.300家
关于柜面无纸化的疑问的相关解释说明
关于柜面无纸化的疑问的相关解释说明 1、电子凭证的认证： 电子凭证的认证主要依据2005年4月1日实施的《中华人民共和国电子签名法》。其中第十四条：“可靠的电子签名与手写签名或者盖章具有同等的法律效力。” 电子签名同时符合下列条件的，视为可靠的电子签名： 1)、电子签名制作数据用于电子签名时，属于电子签名人专有； 2)、签署时电子签名制作数据仅由电子签名人控制； 3)、签署后对电子签名的任何改动能够被发现； 4)、签署后对数据电文内容和形式的任何改动能够被发现。 基于上述4个条件的要求，通过第三方CA数字证书对电子凭证进行数字签名可以满足其条件，实现可靠的电子签名；依据CA数字证书的数字签名确保电子凭证的真实性、安全性、合法性、权威性。 2、电子签名： 电子签名用来识别签名人身份，并表明签名人认可其中内容，充分考虑客户签名的制作安全和使用安全。 1)我公司提供的手写屏支持个性化电子手写签名（带压感笔锋），手写支 持压感，笔迹平滑，使电子签名达到纸质签名感受和效果，采用A4纸打 印的用户签名轨迹，没有明显的锯齿。 2)电子手写签名仅能从手写输入设备采集，不得从图像文件获取。 3)电子签名以矢量方式保存，在电子受理单合并后，电子签名在不同时间、 不同环境下显示一致，保证在打印和缩放显示时清晰呈现。 4)一次签名仅限一次使用，手写签名数据不得单独保存，采集时仅在缓存 管理中存在。 5)手写签名结束的同时电子业务受理单提供内容保护功能。 关于签字效果和安全，具体如下解释： 1)签字效果：电子签名的笔迹粗细可调节，在不同粗细配置下，手写签字效 果均能够实现复杂笔画文字快速连笔书写的准确获取和显示，真实体现书写笔迹，笔画不丢失不更改。电子签名需采用弹出框的方式进行签字，具
44个结构设计常见问题解析(干货)
44个结构设计常见问题解析（干货） 1、结构类型如何选择？ 解释： （1）对于高度不超过150米的多高层项目一般都选择采用钢筋混凝土结构； （2）对于高度超过150米的高层项目则可能会采用钢结构或混凝土结构类型； （3）对于落后偏远地区的民宅或小工程则可能采用砌体结构类型. 2、结构体系如何选择？ 解释：对于钢筋混凝土结构,当房屋高度不超过120米时,一般均为三大常规结构体系——框架结构、剪力墙结构、框架—剪力墙结构. （1）对于学校、办公楼、会所、医院以及商场等需要较大空间的建筑, 当房屋高度不超过下表时,一般选择框架结构； 当房屋高度超过下表时,一般选择框架-剪力墙结构； （2）对于高层住宅、公寓、酒店等隔墙位置固定且空间较小的建筑项目一般选择剪力墙结构.当高层住宅、公寓、酒店项目底部一层或若干层因建筑功能要求（如大厅或商业）需要大空间时,一般采用部分框支剪力墙结构.
（3）对于高度大于100米的高层写字楼,一般采用框架-核心筒结构. 3、40米高的办公楼采用框架结构合理吗？ 解释：不合理.7度区框架结构经济适用高度为30米,超过30米较多时应在合适的位置（如楼梯、电梯、辅助用房）布置剪力墙,形成框架-剪力墙结构体系.这样子剪力墙承受大部分水平力,大大减小框架部分受力,从而可以减小框架柱、框架梁的截面和配筋,使得结构整体更加经 济合理. 4、框架结构合理柱网及其尺寸？ 解释： （1）柱网布置应有规律,一般为正交轴网. （2）普通建筑功能的多层框架结构除个别部位外不宜采用单跨框架,学校、医院等乙类设防建筑以及高层建 筑不应采用单跨框架. （3）仅从结构经济性考虑,低烈度区（6度、7度）且风压小（小于0.4）者宜采用用大柱网（9米左右）；高烈度区（8度及以上）者宜采用中小柱网（4~6米左右）. （4）一般情况下,柱网尺寸不超过12米；当超过12米时可考虑采用钢结构.
英语无纸化考试B级题库
职业技术学院英语分层教学无纸化考试B级试题 考生请注意：本题库中选择项顺序与机考题库中选择项顺序不一致，请勿死记硬背，否则……（你懂的！） Part I Vocabulary and Grammar Directions: There are 20 incomplete sentences in this part. For each sentence there are four choices marked A, B, C and D. Choose the ONE answer that best completes the sentence. （每题1分，共20分） 1、Staying in a hotel costs------- renting a room in a dormitory for a week. A. three times than B. three times as much as C. as much three times as D. as much three times 2、She did her shopping _____ home. A. in the way B. by the way C. on the way D. that 3、The doctor's office was so busy that there was nobody-------- to answer the phone. A. additional B. available C. able D. alive 4、 " The ground is wet now, so it------- last night." A. ought to have rained B. should have rained C. must have rained D. would have rained 5、I can' t ---- being treated rudely like this any more. A. hesitate B. tolerate C. appreciate D. estimate 6、 "------ , I would tell him everything about it."
全国计算机等级考试无纸化真考题库试卷二级C++(2)
全国计算机等级考试无纸化真考题库试卷(2) 二级C++ (考试时间l20分钟，满分100分) 一、选择题(每小题1分。共40分) (1)一个栈的初始状态为空。现将元素1、2、3、4、5、A、B、C、D、E依次入栈，然后再依次出栈，则元素出栈的 顺序是（）。 A)12345ABCDE B)EDCBA54321 C)ABCDEl2345 D)5432lEDCBA (2)下列叙述中正确的是（）。 A)循环队列有队头和队尾两个指针，因此，循环队列是非线性结构 B)在循环队列中，只需要队头指针就能反映队列中元素的动态变化情况 C)在循环队列中，只需要队尾指针就能反映队列中元素的动态变化情况 D)循环队列中元素的个数是由队头指针和队尾指针共同决定 (3)在长度为n的有序线性表中进行二分查找，最坏情况下需要比较的次数是（）。 A)O(n) B)O(n2) C)O(1092n) C)0(n1092n) (4)下列叙述中正确的是（）。 A)顺序存储结构的存储一定是连续的，链式存储结构的存储空间不一定是连续的 B)顺序存储结构只针对线性结构，链式存储结构只针对非线性结构 c)顺序存储结构能存储有序表，链式存储结构不能存储有序表 D)链式存储结构比顺序存储结构节省存储空间 (5)数据流图中带有箭头的线段表示的是（）。 A)控制流 B)事件驱动 C)模块调用 D)数据流 (6)在软件开发中，需求分析阶段可以使用的工具是（）。 A)N—s图 B)DFD图 C)PAD图 D)程序流程图 (7)在面向对象方法中，不属于“对象”基本特点的是（）。 A)一致性 B)分类性 C)多态性 D)标识唯一性 (8)一间宿舍可住多个学生，则实体宿舍和学生之间的联系是（）。 A)一对一 B)一对多
2019年计算机应用基础无纸化考试试题
计算机应用基础无纸化考试试题（B卷） 一、单项选择题(共20题，每题1分) 1. 计算机的存储系统通常包括（）。 A 内存储器和外存储器 B 软盘和硬盘 C ROM和RAM D 内存和硬盘 2. 对于已感染了病毒的软盘，最彻底的清除病毒的方法是（）。 A 用酒精将软盘消毒 B 把软盘放在高压锅里煮 C 将感染病毒的程序全部删除 D 对软盘进行格式化 3. 计算机病毒主要造成（）。 A 磁盘片的损坏 B 磁盘驱动器的破坏 C CPU的破坏 D 程序和数据的破坏 4. 下列选项中，合法的IP地址是( ) A 210.4.233 B 262.38.64.4 C 101.3.305.77 D 115.123.20.245 5. 以下关于病毒的描述中，不正确的说法是（）。 A 对于病毒，最好的方法是采取"预防为主"的方针 B 杀毒软件可以抵御或清除所有病毒 C 恶意传播计算机病毒可能会是犯罪 D 计算机病毒都是人为制造的 6. 主存储器和外存储器之间的主要区别是（）。 A 主存储器容量小，速度快，价格高，而外存储器容量大，速度慢，价格低 B 主存储器容量小，速度慢，价格低，而外存储器容量大，速度快，价格高 C 主存储器容量大，速度快，价格高，而外存储器容量小，速度慢，价格低 D 仅仅因为主存储器在计算机内部，外存储器在计算机外部 7. 快捷菜单是使用鼠标（）目标调出的。 A 左键单击
B 左键双击 C 右键单击 D 右键双击 8. 下列叙述中错误的是（）。 A 内存储器一般由ROM和RAM组成 B RAM中存储的数据一旦断电就全部丢失 C CPU可以直接存取硬盘中的数据 D 存储在ROM中的数据断电后也不会丢失 9. 在微型计算机系统中，数据存取速度最快的是( )。 A 内存储器 B 硬盘存储器 C 软盘存储器 D 只读光盘存储器 10. 键盘上的Enter键是( )键。 A 输入 B 回车换行 C 换挡 D 光标控制 11. 下列设备中，既可做输入设备又可做输出设备的是（）。 A 图形扫描仪 B 磁盘驱动器 C 绘图仪 D 显示器 12. 利用Windows资源管理器中“查看/排列图标”命令，可以排列（）。 A 桌面上应用程序图标 B 任务栏上应用程序图标 C 所有文件夹中的图标 D 当前文件夹中的图标 13. 假设邮件服务器的地址是https://www.360docs.net/doc/c214238827.html,，则用户正确的电子邮箱地址的格式 是（）。 A 用户名#https://www.360docs.net/doc/c214238827.html, B 用户名@https://www.360docs.net/doc/c214238827.html, C 用户名https://www.360docs.net/doc/c214238827.html, D 用户名$https://www.360docs.net/doc/c214238827.html, 14. 以下不属于系统软件的是（）。 A DOS B Windows 7
2020年初级会计职称考试无纸化上机考常见问题解答(最新)
一、初级考试答题界面系统功能 为保证在考试中，顺利操作系统，快速答题，考生在考前一定要熟悉机考的答题界面以及各种功能，尤其是新手考生。 考生进入考场到达指定座位后，按规定在电脑上输入准考证号和身份证号后，会进入等待页面，待考试开始时，会自动进入答题界面。 在答题界面的右上方会显示本场考试的剩余时间以及“交卷”按钮，左上方为考生基本信息，包含考生照片、姓名、性别、准考证号、证件号。屏幕左侧为考试科目的试题列表，左侧下方为计算机的调出按钮，右侧为答题区域。 二、初级考试考场规则 1. 进退场时间 考生在考试开始前30分钟进入考场，考试开始30分钟后，未进行电子签到的考生将被视为缺考，考试系统不再接受该考生登录。考生在进入考场电子签到后不得随意离场，如确有特殊情况需要暂时离开考场，必须经监考人员同意并由指定的工作人员陪同，凭本人有效身份证件出入考场。 2. 交卷细则 考试开始90分钟后，考生方可允许交卷。交卷后要求立即离场，不得在考场附近逗留、交谈或喧哗。考试结束时，系统自动为所有未交卷的考生统一交卷。 3. 计算机故障处理 若考试过程中出现考试机黑屏、断网、断电、无法登录考试系统、信息有误、运行故障等异常情况，考生应及时举手示意，请监考人员帮助解决，不得自行处置。 三、初级考试必备证件及允许携带物品 (一)必备证件有哪些? 考生需凭本人准考证和有效身份证才能进入考场，所以必备的证件就是身份证和准考证。 1. 身份证丢失处理办法 报考人员如身份证丢失，一般来说，可向户籍所在地公安部门申请办理临时身份证，或持公安部门开具带照片的户籍证明参加考试，各地具体政策不一，请考生以报考地区信息为准。
大学试题含答案 马克思主义无纸化考试试题样卷
试卷编号拟题教研室（或老师）签名教研室主任签名 ……………密………………封………………线………………………… 长沙理工大学201 /201 第学期考试试卷 课程名称（含档次）马克思主义基本原理概论课程代号 010001 专业全校各专业层次（本、专）本考试方式（开、卷）闭卷 单项选择题：在每小题列出的四个选项中只有一个选项是符合题目要求的，请将 正确选项前的字母填在题后的括号内。（50小题，每小题2分，共100分） 1、哲学上划分唯物主义和唯心主义两个基本派别的依据是（） A.主张一元论还是二元论 B.主张辩证法还是形而上学 C.对哲学基本问题第一个方面的不同回答 D.对哲学基本问题第二个方面的不同回答 2、马克思的伟大发现除了剩余价值学说外，另一个是( ) A.阶级斗争理论 B.社会主义学说 C.辩证法理论 D.唯物史观 3、划分生产关系类型的基本标志是（） A.产品的分配形式 B.生产资料的所有制形式 C.人们在生产中的地位 D.生产关系与生产力的矛盾性质 4、“谋事在人，成事在天"是反映（）的历史观 A.唯物主义 B.宿命论 C.唯意志论 D.循环论 5、“沉舟侧畔千帆过，病树前头万木春”；“芳林新叶催陈叶，流水前波让后 波”。这两句诗包含的哲学道理是（） A.矛盾是事物发展的动力 B.事物是本质和现象的统一 C.事物的发展是量变和质变的统一 D.新事物代替旧事物是事物发展的 总趋势 6、世界上惟一不变的是变化。这一论断的含义是( ) A.变是世界的本质 B.世界上只有变，没有不变 C.变是绝对的，不变是相对的 D.变与不变是绝对对立的 7、马克思主义认为，人的全面发展（） ①是社会进步的重要内容②是一个逐步提高、永无止境的历史过程 ③是社会发展的目的④既是社会发展的结果，又是社会发展的原因
2020年初级会计职称考试无纸化上机考常见问题解答
2020年初级会计职称考试无纸化上机考常见问题解答 一、初级考试答题界面系统功能 为保证在考试中，顺利操作系统，快速答题，考生在考前一定要 熟悉机考的答题界面以及各种功能，尤其是新手考生。 考生进入考场到达指定座位后，按规定在电脑上输入准考证号和 身份证号后，会进入等待页面，待考试开始时，会自动进入答题界面。 在答题界面的右上方会显示本场考试的剩余时间以及“交卷”按钮，左上方为考生基本信息，包含考生照片、姓名、性别、准考证号、证件号。屏幕左侧为考试科目的试题列表，左侧下方为计算机的调出 按钮，右侧为答题区域。 二、初级考试考场规则 1. 进退场时间 考生在考试开始前30分钟进入考场，考试开始30分钟后，未实 行电子签到的考生将被视为缺考，考试系统不再接受该考生登录。考 生在进入考场电子签到后不得随意离场，如确有特殊情况需要暂时离 开考场，必须经监考人员同意并由指定的工作人员陪同，凭本人有效 身份证件出入考场。 2. 交卷细则 考试开始90分钟后，考生方可允许交卷。交卷后要求立即离场， 不得在考场附近逗留、交谈或喧哗。考试结束时，系统自动为所有未 交卷的考生统一交卷。 3. 计算机故障处理 若考试过程中出现考试机黑屏、断网、断电、无法登录考试系统、信息有误、运行故障等异常情况，考生应即时举手示意，请监考人员 协助解决，不得自行处置。
三、初级考试必备证件及允许携带物品 (一)必备证件有哪些? 考生需凭本人准考证和有效身份证才能进入考场，所以必备的证 件就是身份证和准考证。 1. 身份证丢失处理办法 报考人员如身份证丢失，一般来说，可向户籍所在地公安部门申 请办理临时身份证，或持公安部门开具带照片的户籍证明参加考试， 各地具体政策不一，请考生以报考地区信息为准。 2. 准考证错过打印或遗失处理办法 如果考生在准考证打印期间遗失，直接再打印一份即可。若已错 过打印时间忘记打印或遗失，请咨询当地考试中心，确认是否能够补 打印。 (二)其他物品存放问题 除准考证、身份证外的其他物品(手机、电子设备应设置成关机状态)存放在监考人员指定的物品存放处，违者按违纪处理。 (三)是否允许携带计算器、演算纸和笔? 在机考系统中会提供计算器功能，所以，大家不用担心计算的问题。一般来说，是不允许考生携带计算器进入考场，但各地政策不同，所以请考生以报考地区发布的具体通知为准。另外，考生不能够自带 演算用纸和演算用笔，由考场统一提供，考试结束后会有监考人员统 一收回。 四、机考常见问题 1、考试中机考系统出现故障怎么办?