大鼠模型

将20只SD雄性大鼠随机分为对照组和实验组,以跑台

运动的方式,复制递增运动负荷至24m'min一`的4周60%一70%最大

摄氧量运动实验动物模型;提取右心室肌组织的全蛋白进行双向凝胶

电泳分离,运用ImageMasterZDPlatinum图像分析软件对2一DE胶进

行分析,选择差异表达上调5倍以上及下调至1/5以下的12个蛋白

质点作为备选目标蛋白质点,用串联飞行时间质谱蛋白质仪

(ULGRA王L一FLEx一TOF/TOF)进行质谱鉴定,以逆转录聚合酶链反

应(RT-PCR)对部分目标蛋白质的mRNA表达水平进行检测。

【】60%一70%最大摄氧量跑台运动对大鼠右心室肌蛋白质组差异表达的影响

目的：观察急性大强度跑台运动及低频电刺激后大鼠骨骼肌及血清/GⅢ表达的变化，探讨/GⅢ

与骨骼肌疲劳之间的关系!方法：?2 只雄性%Y 大鼠随机分为对照组#运动组和刺激组!运动组参照N)PQ’>P

方案进行一次大强度跑台运动，造成大鼠运动性疲劳；刺激组采用低频电刺激的方法诱发大鼠腓肠肌疲劳!

U);&)>. =*’& 检测大鼠骨骼肌及血清/GⅢ的表达水平!结果：（!）与对照组相比，运动组大鼠比目鱼肌/GⅢ

的表达水平明显降低（! _I9I$），但趾长伸肌及血清/GⅢ的表达水平与对照组相比差异无统计学意义（! c

I9I$）!（@）随刺激时间的延长，大鼠腓肠肌的肌张力峰&峰（LML）值逐渐降低，与刺激开始时相比，刺激!I0<.

即显著降低（! _I9I$）；而疲劳指数（D4）则随刺激时间的延长逐渐增加，刺激AI0<. 时D4 高达$@9!A’左右!（?）

与对照组相比，刺激组大鼠腓肠肌/GⅢ的表达水平显著降低（! _I9I$），而比目鱼肌及趾长伸肌/GⅢ的表达

水平虽均有下降，但差异无统计学意义（! c I9I$）

大强度跑台运动及低频电刺激对大鼠骨骼肌及血清caⅢ表达的影响

大鼠跑台运动模型建立的研究进展陕西师范大学学报

目的跑台急性运动疲劳动物模型的建立及评价"方法选取清洁级雄性g-NO,> 大鼠%4 只( 5 周

龄) 作为实验对象"采用多级递增负荷跑台运动方案( 跑台坡度为&s，负荷分为三级) 建立一次性力竭跑台运动动

物模型"尾静脉取血，分别测定大鼠在安静!运动#& +-M!运动"& +-M!力竭!恢复#& +-M!恢

复"& +-M 各时间点外

周血葡萄糖( BRX) #乳酸( RC) #尿素( AX) #丙二醛( TCE) 浓度和肌酸激酶( :i) #超氧化物歧化酶( 8WC) 活性"结

果一次性力竭运动过程中大鼠行为能力和运动能力!血液代谢产物及能量物质呈现阶段性的动态变化"外周血

RC!AX!TCE 浓度及:i 活性均较安静时显著性增高( ! e &6 &!，! e &6 &’) ; BRX 浓度!8WC 活性较安静时显著降低

( ! e &6 &!，! e &6 &’) "各指标的变化特征说明大鼠已达到运动疲劳状态"结论建立了大鼠一次性力竭跑台运动

模型，并客观动态评价了大鼠在运动疲劳产生!发展!恢复等不同阶段各指标的变化特点及规律"该模型可用于后

续运动疲劳机制的相关研究"

大鼠一次性力竭跑台运动模型的建立及动态评价中国实验动物学报

20只大鼠

随机分为正常对照组和运动疲劳模型组,运动疲劳模型组大鼠每日按照方案进行锻炼。实验结束后大鼠检测相关

指标:血清MDA含量和红细胞SOD活性,肝脏与骨骼肌MDA含量、SOD活性,骨骼肌线粒体游离钙离子含量,骨骼

肌线粒体膜电位,下丘脑神经递质。电镜观察骨骼肌线粒体细微结构。

大鼠运动性疲劳模型的建立

大鼠运动性疲劳模型建立方法的比较研究

大鼠运动应激性溃疡模型的建立

本研究对大鼠进行一次性跑台运动和12周长期跑台

运动训练,从组织形态学、生物力学、生物化学、分子生物学等不同层次和角度,

比较跟键在不同运动过程中的反应和适应性变化,探讨跑台运动对大鼠跟膜的影

响及其变化机制。本实验采用了两种运动干预方式:①一次性跑台运动组:健康雄

性SD大鼠95只,随机分为大鼠对照组(n=16),一次性跑台运动后即刻组、12

小时组、24小时组和72小时组。②长期跑台运动组:健康雄性SD大鼠40只,

随机分为对照组(n=16)和长期跑台运动组(n=24),长期跑台运动大鼠进行12

周的跑台耐力训练。测试方法与指标:①光镜和透射电镜观察大鼠跟腔内胶原(原)

纤维结构、键细胞功能状态。②功stron3365测定跟腆的生物力学性能。③ELISA

法测定跟健内PINP、PlllNP、IGF一I的含量及血清内IGF一I的含量。④实时定量

PCR方法测定跟膜前胶原Ial、前胶原Illal、IGF一I、MMP一l、TIMP一l的mRNA

表达。

跑台运动对大鼠跟腱的影响及其机制研究高血压大鼠模型的研究进展

关于运动性疲劳动物模型建立的综述

建立大鼠过度训练的模型，探讨过度训练对肠道免疫功能的影响及其机制。并在

运动训练的同时，补充谷氨酰胺或大豆多肽，探讨谷氨酰胺及大豆多肽对过度训练大鼠肠道免疫功能的干预作用及其机制。

方法：实验大鼠随机分为对照组、过度训练组、谷氨酰胺干预组、大豆多肽干预组。过度训练组大鼠进行每周6 次，共9 周的力竭性运动训练。谷氨酰胺干预组和大豆多肽干预组大鼠，在大负荷运动之前，分别以500mg/kgBW 剂量的补充大豆多肽和1.5g /kgBW 剂量补

充谷氨酰胺。9 周后，检测各组大鼠小肠组织SOD、MDA、Gln、sIgA 的含量及小肠CD4 +

、

CD8

T 细胞数量和大鼠血清T、C、Hb 的含量。

过度训练对大鼠肠道免疫功能的影响及谷氨酰胺大豆多肽的干预作用

+ 周龄清洁级,]（,@ AOC [= ]OZ>=W）雌性大鼠!* 只，体

重

##’/ #%(C 1上海西普尔/ 必凯实验动物有限公司2!大鼠购

进后适应性训练一周，随机分为三组：安静对照组（

T）& 只，运

动对照组（;）& 只，过度训练组（R）& 只!参照E=YQHAY3!4的大

鼠运动负荷标准进行跑台

1杭州段氏制作" ],-R/ #’# 动物跑

台

2训练!训练时间为+ 周，每周训练& 天，休息! 天!大鼠过度

训练模型根据叶剑飞

3#4等的方法适当修订!（见表!）

+ 周训练结束后，%& 小时后于安静状态下，腹腔注射!0的

戊巴比妥钠，按

.’:C S_C 注射麻醉处死，腹腔静脉取血，肝素

抗凝，离心

1%’’’AS:BJ，!’分钟2 取上清液（血清），保存待测；

迅速取骨骼肌腓场肌红肌部分，液氮速冻后迅速转移到超低温

1/ )*!2冰箱保存!分别测定骨骼肌中L\] 与^R-O? = 活性!

过度训练对大鼠骨骼肌XOD与ATPase活性的影响

将40只大鼠随机

分为训练对照组和过度训练组,分别进行8周的中等强度和大强度跑台训练,于第8周周末运动后处死全部

大鼠,取心室肌测定线粒体丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱苷肽过氧化物酶、磷脂酶Ａ2及Ｃａ2+浓度.结果表

明:过度训练状态下,大鼠心肌线粒体丙二醛含量、磷脂酶Ａ2活性及Ｃａ2+浓度显著升高,超氧化物歧化酶、

谷胱苷肽过氧化物酶活性显著下降.过度训练后,大鼠心肌线粒体自由基产生增加,抗氧化能力下降,引起线

粒体膜脂质过氧化水平增加,膜降解反应增强,从而导致大鼠心肌线粒体损伤和心肌组织的损伤.

过度训练对大鼠心肌线粒体ＭＤＡ,ＳＯＤ,ＧＳＨ-Ｐｘ,ＰＬＡ2及Ｃａ2+浓度的影响

为了研究过度训练状态下心肌组织损害的变化规律,采用建立一般训练和过度训练大鼠模型,应用

形态学手段和分子生化技术,对训练后两组大鼠心肌线粒体内钙含量、脂质过氧化反应产物丙二醛(MDA)、

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、超氧化物歧化酶(SOD)、心肌组织匀浆内酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,

ACP)和β葡萄糖醛酸酶(Beta-glucuronidase,Beta-GLU)、磷脂酶A2(PLA2)等指标做了定位和定量研究。结

果表明,第4周末,一般训练组和过度训练组大鼠心肌线粒体内钙含量、MDA和GSH-px、SOD、PLA2活性和

心肌ACP、β-葡萄糖醛酸酶的活性未见异常改变(P>0.05)。但是第8周末,过度训练组心肌线粒体内钙、

MDA含量和PLA2活性明显升高,GSH含量和SOD活性明显降低;第8周末,心肌ACP和β-葡萄糖醛酸酶明

显增加。结果显示过度训练后心肌线粒体的结构和功能发生了明显变化,这些变化是引起过度训练状态下

心肌损伤的主要原因。

过度训练状态下大鼠心肌线粒体病理性变化的研究

雄性SD大鼠24只,体重为395 -432g,由苏州大学实验动

物中心提供。动物购进喂养3天后,在动物跑台(杭州段氏

PT98型白鼠跑台)上进行2天的适应性运动(跑速为10m /

min,00,每天1次,时间控制在10min内)。适应性运动结束

后,将大鼠随机分成对照组(CQ组)、中等强度力竭运动组

(CME组)和大强度力竭运动组(CHE组),每组8只。次日进

行力竭运动,力竭运动开始的速度为10m/min,逐渐提高速度

并在5min内到达预定的速度(中等强度、大强度力竭运动的速

度分别为20m/min、36m/min),保持速度直至力竭,并记录力竭

运动时间。力竭标准为大鼠用毛刷驱赶无效,在跑台尾端停留

2s仍不愿跑,且失去快速翻正反射急性力竭运动后24h取材,腹腔注射4%水合氯醛麻醉,左心室灌注固定。脑取材根据包新民等[8]和王平宇等[9]的方法,以颅脑前囟为界,经大脑前连合平面向后间隔3mm取大脑3块,小脑1块。脊髓横断取颈膨大、腰膨大中间3mm长组织各1块,共6块组织,常规石蜡包埋。Leica切片机连续切片、切片厚度5μm。依据相关文献[9 -11]选择12个CNS的观察部位。力竭运动对中枢神经系统细胞凋亡的影响

急性力竭运动对中枢神经系统细胞凋亡的影响*

取30只ＳＤ大鼠随

机分为ＡＡ模型组、ＣＩＡ模型组及空白对照组,每组

10只。取10只大鼠于左后足垫皮下注射ＣＦＡ0.1

ｍＬ(含卡介苗7.5ｍｇ/ｍＬ)诱导ＡＡ模型〔1〕。另取

10只大鼠参照文献〔2〕,取牛Ⅱ型胶原蛋白10ｍｇ与

0.1Ｍ冰醋酸溶液5ｍＬ混匀,质量浓度为2ｍｇ/

ｍＬ,置4℃冰箱中过夜。将60ｍｇＢＣＧ80℃灭活,

加入含有1ｍｇ/ｍＬＢＣＧ的完全弗氏佐剂,使其ＢＣＧ

质量浓度为3.5ｍｇ/ｍＬ。冰浴下将含有ＣⅡ的冰醋

酸与完全弗氏佐剂等体积混合,用研钵磨至乳白色

粘稠液体状,使之充分乳化,胶原浓度为1ｍｇ/ｍＬ。

取0.7ｍＬ于大鼠背部脊柱两侧皮下分点注射,诱导

ＣＩＡ模型。取0.7ｍＬ生理盐水注射到10只ＳＤ大

鼠左后足垫皮内作为空白对照组

类风湿关节炎大鼠模型的构建及昆明山海棠对大鼠佐剂性关节炎的干预研究

方法Ia 大鼠随机分为肠功能紊

乱模型组和正常组，模型组采用慢性束缚h 过度疲劳h 饮食失调法造模，# 周后取血，用酶联免疫法( )QHIR) 试剂

盒在血清测[RI!HQ*%，在血浆中测RKYM!OYQ!II"结果模型组大鼠# 周后与正常组相比，外观行为发生明显变

化，体重和肝脾重量显著降低，生物标志物水平降低"结论通过慢性束缚h 过度疲劳h 饮食失调法可以建立稳

定的应激肠功能紊乱大鼠模型，[RI!HQ*%!RKYM!OYQ!II 等内源性物质可作为模型的评价指标"

应激所致肠功能紊乱大鼠模型的建立及内源性标志物的评价

有氧训练对Ｄ-ｇａｌａｃｔｏｓｅ模型大鼠生长状况影响的实验研究

将健康SD 大

鼠100 只，40 只作为正常对照，其余60 只建立糖尿病大鼠模型，建模成功35 只。正常对照和糖

尿病大鼠再按体重各自随机分为5 组：安静对照组、一次性运动组、一次性运动+KN93 组、耐力

训练组、耐力训练+KN93 组，共10 组。跑台速度20 m/min，运动时间1 h。一次性运动组大鼠1

次运动后3 h 取材。耐力训练组采用同样跑台速度和运动时间，训练 1 周，并于最后1 次训练后

12 h 取材。结果得到，糖尿病大鼠耐力训练组，骨骼肌细胞核内MEF2 和GLUT4 的结合活性及

骨骼肌GLUT4 基因表达量虽然均显著低于正常对照大鼠耐力训练组，但与糖尿病大鼠安静对照

组相比均显著升高；耐力训练+KN93 组，骨骼肌细胞核内MEF2 和GLUT4 的结合活性与安静对

照组相比差异没有显著性，但骨骼肌GLUT4 基因表达量与安静对照组相比却显著升高。结果显

示：虽然运动通过激活糖尿病大鼠骨骼肌CAMK II 而提高其骨骼肌细胞核内MEF2 和GLUT4 的

结合活性，虽然MEF2 和GLUT4 的结合活性参与调解了正常大鼠骨骼肌GLUT4 基因表达，

但并

不是影响糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4 基因表达的唯一因素。

运动提高糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4 基因表达的信号机制

66 只8 周龄雌性SD 大鼠，随机分为三组：运动性骨疲劳动物模

型组（36 只），对照组（20 只，其中10 只笼养8 周），一次性大强度运动组（10 只）；其中运动性骨疲劳动物模型组进行4 周大强度跑台运动，造模期间每周对大

鼠进行

99m

Tc-MDP 骨显影监测，并进行骨刚度（stiffness）、血清碱性磷酸酶（ALP）、

抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、雌激素（E

）指标变化的测定，当确诊达到运动

性骨疲劳标准后，完成运动性骨疲劳动物模型的建立过程。将运动性骨疲劳大鼠

随机分为两组，分别进行自由恢复和积极运动干预恢复，时间均为4 周，采用DXA

法测定胫骨BMD、BMC 含量，在Anuda 微机控制电子万能试验机上用三点弯曲

法测定胫骨生物力学指标，双抗体夹心酶标免疫分析法测定血清 E

含量，比色法

测定血清ALP、TRAP 含量，免疫组化法检测胫骨组织ER 和TGF- ?

蛋白表达，

RT-PCR 法测定胫骨组织ER、TGF-?

、BMP、OPG 和OPGL 基因转录水平的表达。

运动性骨疲劳大鼠骨代谢与骨调节因子的研究

法：!" 只雌性# 月龄$% 大鼠按

体重随机分为假手术组"去卵巢静止组"去卵巢运动组和雌激素组，每组&’只)除假手术组外，其它三组均切除

双侧卵巢，假手术组行相同手术操作，但不切除卵巢，只切除与卵巢等大的脂肪)去卵巢运动组进行每周( 次"每

次)(*+,"速度-!*.*+,"坡度(!的跑台训练；雌激素组每周颈部皮下注射两次-/!0雌二醇，剂量为&(!1.21 体

重)各组于去卵巢后/ 周和-) 周时分别取材，称体重和腹腔内脂肪重量，乙醇.氯仿提取肝脏总胆固醇（34）和甘

油三酯（35）)结果：（-）去卵巢后/ 周时，去卵巢静止组肝脏35 含量显著高于假手术组，34 无显著变化；去卵巢

运动组肝脏34 和35 以及雌激素组肝脏35 含量均显著低于去卵巢静止组，而雌激素组肝脏34 无显著变化)

（&）去卵巢后-) 周时，去卵巢静止组肝脏34 和35 含量均显著高于假手术组，而去卵巢运动组和雌激素组肝脏

34 和35 均极显著低于去卵巢静止组)结论：中等强度跑台运动能显著降低去卵巢大鼠肝脏脂类水平)

中等强度跑台运动对去卵巢大鼠肝脏脂类水平的影响

高血压动物模型

高血压动物模型高血压病是全身小动脉痉挛引起血管外周阻力增加的直接后果,小动脉的痉挛与遗传/精神刺激、应激、肾脏缺血、肾上腺皮质的作用及钠的作用等诸多因素有关，目前动物高血压模型的复制多以不同角度模拟高血压这些易患因素而形成。所用动物模型有自发性高血压大鼠(SHR)、神经原型、肾外包扎型和醋酸脱氧皮质酮(DOCA)盐型高血压大鼠、肾血管型高血压狗、盐敏感性和盐抵抗性高血压大鼠等。（一）、神经原型高血压模型：可用狗、大白鼠和家兔等，通过机能性方法或物理方法作用于动物神经系统而诱发条件反射性高血压和皮层性高血压模型。 1、神经精神刺激：强烈的声、逛、电刺激，条件反射冲突等可以引起动物高级神经中枢强雷兴奋及血压升高。缺点是这种血压升高不能持久，同时，动物对相同刺激有适应的倾向，因此不能建立持久的高血压模型。 2、去除压力感受器神经：用电损伤动物的孤束或用6-羟多巴胺破坏孤束核的儿茶酚胺神经元，使减压反射中枢失去调整血压的功能，可建立慢性高血压模型，但是有一部分动物可能在手术后短期内死亡。（二）自发性高血压大鼠模型 Okamoto等将血压为~的雄性Wistar大鼠与血压为17，3~的同种雌鼠交配，其子代选择血压高者作为近亲交配，三代后，多数动物血压超过24KPa，他们称之为自发性高血压大鼠（SHR）。通过不断选种，到1969年获得了近交系SHR，至1986年该系已传到第80代。 SHR的后代100%发生高血压。一般在出生后血压随年龄而逐渐升高，据第30~32代统计，生后第10周雄鼠血压平均为±，雌鼠为±，此后还会继续升高，常可超过。血压升高机制：在高血压大鼠生长的早期，其血管阻力持续增加，血压升高，心肌肥大，机体的肾素-血管紧张素系统激活，这一过程持续到生存晚期，并发展为更严重的心肌肥大和充血性心功能衰退。随着高血压的持续发展，高血压大鼠出现了与人类高血压患者相似的并发症——脑和心肌损害，以及肾硬化。优点：自发性高血压大鼠从许多方面讲，如发病机制、高血压心血管并发症、外周血管阻力变化、对盐的敏感性等都与人类高血压患者相似，是目前国际公认最接近于人类原发性高血压的动物模型。故其广泛应用于医学基础试验研究中，如SHR高血压形成的电生瑰研究，在肾素血管紧张素系统的研究，在内皮素方面的研究，在丝裂素活化蛋白激酶方面的研究，血管结构与功能方面的研究，都已取得了一定的进展；又如，在受体水平阻断肾素-血管紧张素醛固酮系统，来探讨高血压性心肌重塑的可能机制，也在用自发性高血压大鼠模型。另外，该模型特别是用于人类高血压的研究及高血压药物筛选。如坎地沙坦在高血压大鼠脑缺血的神经保护作用的研究，亦用自发性高血压模型。缺点：饲养条件高，价格较贵，遗传育种麻烦，需要一定时间，且易变种或断种，若大量使用尚存在一定困难。（三）肾外包扎型高血压模型血压升高机制：肾外异物包扎，可致肾周围炎，在肾外形成一层纤维素性鞘膜，压迫肾实质造成肾组织缺血，使肾素形成增加，血压上升。选用120～150g的大鼠。麻醉后，呈俯卧位固定，背部下方垫一高约2～3cm的沙袋，剪去手术视野的毛，用％洗必太酒精消毒皮肤，从第10胸椎到第3腰椎处沿脊椎中线切开皮肤，在左侧季肋下～2cm和距脊椎1cm处用小血管钳分开肌肉，用两指从腹下部将肾脏自创口中挤出，小心地将肾脏与周围组织剥离，将双层乳胶膜剪成“X”形，绕肾门将肾脏交叉包扎，然后在相对侧切开，取出右肾，分离后切除，分别缝合肌肉和皮肤创口。皮下注射1～2万单位青霉素G。手术所用器械必须高压消毒，只要在75％乙醇中浸泡30min，临用时用煮沸过的生理盐水冲洗一下，用毕后仍浸入乙醇中。手术后可加饮1％氯化钠溶液作为促进因素。（四）、肾性高血压模型 Gold-blatt高血压模型有双肾及单肾模型。双肾模型是指动物保留两侧肾脏，但使一肾或二肾动脉狭窄，所以又称为二肾一夹或双肾双夹型。单肾模型为切除一侧肾脏，狭窄保留肾的肾动脉，及一肾一夹型。这三种模型的动物都能发生长期稳定的高血压。 1、一肾一夹（左侧肾动脉狭窄+右肾切除）血压升高机制主要是由于钠潴留和肾素血管紧张素系统激活以及交感神经活性增强。优点：该模型由于成功率较低，血压不能持续上升，限制了其使用范围，目前较少使用。 2、两肾一夹型（左

大鼠肺成纤维细胞的原代培养和鉴定

气管镜肺活检（TBLB）和局部肺泡灌洗，肺活检报告示慢性肉芽肿性病变伴凝固性坏死，灌洗液和痰均找到抗酸杆菌，最终诊断为两肺肺结核。经过HRZE四联抗结核治疗，辅以激素控制结核中毒症状，患者病情迅速好转出院。成人继发性肺结核影像常常呈现为多形态表现（即同时出现渗出、增殖、纤维和干酪性病变，还可伴有钙化），容易形成空洞。而本例患者起病较急，影像表现为两肺弥漫性肺间质病变、左肺大片实变、两肺斑片状阴影等多种病变，显然与典型继发性肺结核的表现有许多不同。与一般的成人继发性肺结核相比，有免疫损害及老年肺结核患者表现常常不典型。有资料认为成人继发性肺结核的不常见的X线表现有：①下肺结核；②粟粒性肺结核伴两肺间质性病变；③类似肺癌的纤维干酪块；④胸片正常。回顾本例的诊治过程，我们的体会是：目前肺结核的临床表现多种多样，为了尽可能的减少肺结核的漏诊和误诊，提高对类似下呼吸道感染表现的肺结核的认识，了解和熟悉肺结核少见的X线表现，注意结核的高危因素和高危人群及胸部影像学的追踪观察，重视痰找抗酸杆菌、纤维支气管镜、组织活检病理等检查是十分必要的。成年大鼠肺成纤维细胞的原代培养和鉴定徐卫华沈华浩浙江大学医学院附属二院呼吸科，浙江大学呼吸疾病研究所（310009）体外培养肺成纤维细胞是研究肺部疾病如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺纤维化等的重要手段和工具。目前对于成年大鼠肺成纤维细胞的原代培养，国内尚未见报道。我们利用组织块培养法对成年SD大鼠肺成纤维细胞进行了原代培养，并用免疫细胞化学的方法进行了鉴定。一、材料和方法 1．试剂和器材 0.25%胰蛋白酶（杭州吉诺公司），DMEM细胞培养液（杭州吉诺公司），胎牛血清（杭州四季清公司），兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体及鼠抗人肌动蛋白单克隆抗体（北京中山生物技术有限公司），免疫组化染色SP试剂盒（北京中山生物技术有限公司），小鼠抗波形蛋白单克隆抗体及免疫组化染色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。 2．细胞培养 250g清洁级雄性SD大鼠一只，断头处死后浸入75%酒精5分钟。大鼠移入超净台，开胸取肺，去除肺组织表面胸膜。剪切距离肺周边1mm内的肺组织，并将其放入玻璃培养皿。用手术剪将周边肺组织反复剪切成1mm×1mm大小的组织块，用PBS反复吹打冲洗直至PBS液变为澄清。用眼科镊小心钳取肺组织块，放入 3.5cm细胞培养皿，组织块之间距离约为1cm。将细胞培养皿放入℃2的细胞培养箱内培养4小时后取出培养皿，沿培养皿壁向培养皿内小心加入含10%胎牛375%CO ?281?

红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、

红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、目的观察红芪对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、透明质酸（HA）及层黏连蛋白（LN）表达的影响，探讨其作用机制，并筛选红芪最佳有效部位。方法将144只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组，以及红芪多糖、黄酮、皂苷的高、中、低剂量组。采用气管滴注博莱霉素法建立肺纤维化模型，从造模后第2日起，各药物组分别给予相应剂量药物，每日1次，共28 d。Masson染色观察肺组织胶原纤维的变化，放射免疫法检测各组大鼠肺组织匀浆中HA、LN含量。结果与模型组比较，红芪黄酮各剂量组、红芪多糖低剂量组肺泡炎明显减轻。红芪黄酮低剂量组、红芪多糖中剂量组、红芪皂苷低剂量组肺组织胶原面积明显减小。与模型组比较，红芪多糖高剂量组、红芪黄酮各剂量组、红芪皂苷高剂量组HA含量明显下降。红芪多糖高剂量组，红芪黄酮中、低剂量组，红芪皂苷中、低剂量组LN含量明显下降。结论红芪多糖、黄酮、皂苷在适宜剂量下均能减轻肺泡炎症，抑制胶原纤维增生、沉积，降低肺组织中HA、LN含量，其中红芪黄酮效果较佳。 Abstract：Objective To observe the effects of Radix Hedysari on collagen area，hyaluronic acid （HA）and laminin （LN）of lung tissues in rat with pulmonary interstitial fibrosis；To investigate the mechanism and screen the best active ingredients in Radix Hedysari. Methods Totally 144 SPF Wistar rats were randomly divided into control group，model group，metacortandracin group，and Radix Hedysari polysaccharide，flavone and saponin groups were set as high-，medium-，and low-dose groups. Pulmonary interstitial fibrosis models were set up by dropping bleomycin into air tube of rats. All groups were taken corresponding medicine with appropriate dose daily on day 2 after models were established for 28 days. Collagen fibrils in lung tissue were observed by Masson dying and contents of HA and LN in lung tissue of rats in each group were detected by radioimmunoassay. Results Compared with the model group，pulmonary alveoli in Radix Hedysari flavone high-，medium-，and low-dose groups and Radix Hedysari polysaccharide low-dose group were relieved obviously；collagenous fiber area in Radix Hedysari flavone low-dose group，Radix Hedysari polysaccharide medium-dose group，and Radix Hedysari saponin low-dose group decreased obviously. Compared with the model group，the content of HA in Radix Hedysari polysaccharide high-dose group，Radix Hedysari flavone high-，medium-，and low-dose groups，and Radix Hedysari saponin high-dose group decreased obviously；the content of LN in Radix Hedysari polysaccharide high-dose group，Radix Hedysari flavonemedium- and low-dose groups，and Radix Hedysari saponin medium- and low-dose groups decreased obviously. Conclusion Polysaccharide，flavone and saponin of Radix Hedysari have the abilities to alleviate inflammation of pulmonary alveoli，inhibit proliferation and deposition of collagen fibrils，and reduce the contents of HA and LA in lung tissue. Among these active ingredients，flavone has the best effect. Key words：pulmonary fibrosis；active ingredients in Radix Hedysari；

观察Zc3h12d在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况

观察Zc3h12d在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况小肠缺血再灌注损伤( small intestinal ischemia-reperfusion injury，IIＲI) 是一种临床常见的病理现象，常危及生命。肠系膜上动脉( superior mesentericartery，SMA) 阻塞或失血性休克等许多损伤因素都能导致小肠缺血再灌注损伤的发生。小肠缺血再灌注可导致严重的局部创伤并引起多器官功能障碍，常可累及到肺组织，而且有研究显示继发的急性肺损伤( acute lung injury，ALI) 或/和急性呼吸窘迫综合征( acute respiratory distress syndrome，AＲDS) 是造成小肠缺血再灌注损伤病人死亡的主要原因。因此，为找到新的防治措施，降低小肠缺血再灌注损伤患者的死亡率，进行小肠缺血再灌注肺损伤分子机制的研究是非常关键和必要的。具有CCCH 锌指结构域的蛋白12D( zinc fingerCCCH type containing 12d，Zc3h12d) ，也称为TFL 或P34，是近期发现的包含单个锌指结构域蛋白家族中的一员，拥有相对分子质量( Mr) 58 000 和36 000 两种剪接体，在炎症因子或脂多糖( lipopolysaccharide，LPS) 刺激单核细胞时其表达量会发生变化，从而对细胞的生理和病理过程产生影响。然而Zc3h12d 在动物肺损伤中的表达尚未见报道。本实验通过建立大鼠II Ｒ肺损伤模型，初步观察Zc3h12d 在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况并探讨其可能的作用及意义，为进一步了解IIＲ肺损伤发生、发展的分子机制奠定基础。 1 材料和方法1．1 材料纯化LPS、兔抗大鼠β-actin 抗体、辣根过氧化酶标记的兔抗山羊IgG、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG 购自Sigma 公司; 山羊抗大鼠Zc3h12d 抗体购自Santa Cruz 公司; 大鼠TNF-α、IL-1β ELISA 试剂盒购自北京鼎国生物技术公司; 两步法免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司; TＲIzol 试剂盒、逆转录试剂盒及实时定量PCＲ( realtime quantitative PCＲ，qＲT-PCＲ) 试剂盒购自大连TaKaＲa 公司; SDS 细胞裂解液、ECL 显色液购自西安晶彩生物技术公司; BCA 蛋白定量试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司。电热恒温干燥箱为北京科伟永兴仪器有限公司产品，荧光显微镜为徕卡公司产品，紫外分光光度计为Beckman 公司产品，实时定量PCＲ仪、Western blot 蛋白电泳仪为Bio-Ｒad公司产品。1．2 方法1．2．1 实验动物分组与模型制备健康雄性SPF 级SD 大鼠40 只，体质量200 ～230 g，由第四军医大学动物实验中心提供。大鼠随机分为对照组( contro1) 、缺血再灌注30 min 组( IＲ30 min) 、缺血再灌注60 min 组( IＲ60 min) 和缺血再灌注120 min 组( IＲ120 min) ，每组10 只，均适应性饲养7 d 后用于实验。实验前禁食12 h，自由饮水。10 g/L 戊巴比妥纳40 mg / kg腹腔注射麻醉，经大鼠口气管插管并连接呼吸机。麻醉后常规备皮消毒，行正中开腹手术，切口3 ～4 cm 入腹，探查大鼠腹腔内情况; 探查后将全部消化道及网膜向右掀起，找到腹主动脉分支肠系膜上动脉( superior mesenteric artery，SMA) 并钝性分离; 对照组大鼠缝合切口，3 个缺血再灌注组以无创伤动脉夹夹闭SMA 起始部，缺血60 min 后恢复再灌注，分别再灌注30 min、60 min 和120 min; 过量戊巴比妥纳腹腔注射，麻醉处死。1．2．2 肺组织湿质量/ 干质量( W / D) 比值测定取大鼠右肺上叶称取质量为湿重，而后放入70℃恒温干燥箱中烘烤12 h 称质量为干质量，以湿质量/干质量得出肺湿干质量( W/D) 比值。1．2．3 ELISA 检测血清及肺组织上清液中IL-1β 及TNF-α 水平心脏取血制备血清，取左肺叶一部分制备组织匀浆液，采用ELISA 检测血清及肺组织上清IL-1β 及TNF-α 的水平。心脏取血约3 mL，37℃水浴加热30 min 后，4℃ 2 000 g 离心20 min，收集上清即血清，取肺组织约300 mg，用0．01 mmol / LPBS( pH7．4) 1．5 mL 充分匀浆后，4℃ 12 000 g 离心20 min，收集上清，两者均采用双抗体夹心ELISA 进行检测。1．2．4 肺组织病理学检查取右肺中下叶置于100 mL / L 的中性甲醛中固定24 h、梯度酒精脱水、石蜡包埋，保存于4℃ 。使用时切片( 厚度 3 μm) 、HE 染色、中性树胶封片，光镜下观察肺组织病理形态学改变。

高血压动物模型资料

肺脾气虚动物模型造模方法

一、肺脾气虚动物模型的复制方法：模型的建立方法：模型组采用<实用中医证侯动物模型学》之"烟熏法肺气虚证动物模型"复制法，并复合木瓜蛋白酶雾化吸人法复制SD大鼠"肺气虚证"模型。番泻叶冷服泻下法复制"脾气虚证"模型。具体方法如下：将以上3组大鼠分别置于特制的lm3烟室中。用刨花、锯末、烟叶各30-50g，另加硫磺5-10g，点燃烟熏，每日2次，每次30分钟，注意适当通风，以防大鼠窒息。造模期6o天。并于造模开始后第3o、32、34、36天给以上各组大鼠木瓜蛋白酶雾化吸人，具体方法如下：在大鼠清醒状态下，每次将5只大鼠放入一40×40×40cm的与超声波雾化器相连的透明雾化箱中，通过雾化管向箱中喷入用0．9％Nacl液稀释为3g的木瓜蛋白酶，每次雾化量2ml。造模第20天开始，以浓度为lg／ml冰冷的番泻叶浸液，按lml／100g体重的剂量给大鼠灌胃，每日1次，持续3o天。正常对照组，分室常规喂养，不做任何处理。参考文献：李亚光，曹柏龙，贾东岩.慢性阻塞性肺疾病"肺脾气虚证"复合证型动物模型的研究.内蒙古中医药,2005年第5期：18-19. 二、肺气虚动物模型的复制方法： 1. 造模方法：气管内注入脂多糖(LPS)并烟熏方法复制肺气肿/COPD肺气虚证大鼠模型。(此法最常用) 具体方法：于模型复制的第1和14天用10％水合氯醛腹腔麻醉后，行气管内注入LPS200ug ／200ul，庆大霉素局部抗炎，缝合皮肤并消毒。术后第2～13、15～28天，置于1 m×1 m ×1 m的烟室中，香烟(焦油量为12 mg，烟气烟碱量为1．1 mg)烟熏，每日30 min；自由进食、饮水。对照组：将每只大鼠于第1、14天气管内注入0．9％氯化钠注射液200 u1；于第2～13、15-28天，置于无烟熏同样环境中饲养，余法同模型组。参考文献：王哲，王春田，任艳玲.肺气虚模型大鼠血ET、IL一1β及TNF-α含量的变化.中国老年学杂志,2008,12月第28卷:2414-2416. 刘向国，方志斌，蔡圣荣，肺气肿肺气虚证模型大鼠肺组织中基质金属蛋白酶表达的变化. 中国中医药科技,2006,13( 5):289-291. 刘茜，刘向国,武松. 肺气肿肺气虚证模型大鼠胸腺指数、脾脏指数变化的实验研究. 甘肃中医学院学报, 2006,23(1):20-22. 李泽庚,彭波,杰根.肺气虚证模型大鼠的建立. 北京中医,2005,24(1):53-55. 2．方法：用烟熏并复合木瓜蛋白酶雾化吸入法复制COPD"肺气虚证"大鼠模型。具体方法：动物造模采用《实用中医证候动物模型学》之"烟熏法肺气虚证动物模型"复制法，并复合木瓜蛋白酶雾化吸人法，复制SD大鼠"肺气虚证"COPD模型。每5只大鼠置于自制透明塑料箱中，用刨花、锯末、烟叶各30～50g，另加硫磺5～10g，点燃烟熏，每日2次，每次30min，注意适当通风，以防大鼠窒息。并于造模开始后第30、32、34、36天将超声波雾化器与透明塑料箱相连，通过雾化管向箱中大鼠喷人浓度为0．3％的木瓜蛋白酶，每5只大鼠2mL。造模期60天。正常对照组置于正常无烟环境中饲养。参考文献：张葵,刘良丽, 欧江琴.COPD肺气虚证模型大鼠血清TNF-αIL-8的表达和意义，

抑郁症大鼠模型的建立与评价

抑郁症大鼠模型的建立与评价发表时间：2012-04-13T09:52:27.670Z 来源：《中外健康文摘》2012年第6期供稿作者：康志龙肖志成周新富[导读] 抑郁症是一种常见的影响人们日常生活和健康的精神疾病。康志龙肖志成周新富（昆明医学院分子临床医学研究院云南昆明 650500）【中图分类号】R749【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）6-0048-02 【摘要】抑郁症是一种常见的影响人们日常生活和健康的精神疾病，主要表现有持续情绪低落，兴趣减低，悲观，思维迟缓，缺乏主动性，饮食、睡眠质量差，全身多处不适感，更有甚者可出现自杀念头和行为，重症抑郁有近15%的自杀率[1,2,3]。世界卫生组织研究表明，抑郁症已经成为中国疾病负担的第二大疾病，到2020年，抑郁症可能成为仅次于心血管疾病的全球第二大疾患[4]。动物模型能帮助人们更好的认识抑郁症，对抑郁症的治疗起到了非常良好的促进作用。本文对常用的一些抑郁症造模方法及其评价做一阐述。【关键词】抑郁症抑郁模型脑源性神经营养因子 BDNF 抑郁症是一类严重危害人们身心健康的精神障碍疾病。它的发病率很高，几乎每7个成年人中就有1个抑郁症患者，目前全球有3.4亿精神抑郁症患者，相当于精神分裂患者的7至8倍，并且这一数字仍在上升，抑郁症也成为医学工作者研究的热点。 1 动物模型的建立动物抑郁模型对于抑郁症的治疗和抗抑郁药的开发有重要的作用，主要的抑郁模型有以下几种： 1.1药物诱发抑郁模型利血平拮抗,5-羟色氨酸诱导的甩头行为,小鼠育亨宾诱导的致死试验,大鼠色胺惊厥增强实验。这些药物诱导模型可以用于早期评价抗抑郁药物作用或用来初筛未知化合物的药理作用特性[5]。 1.2应激模型 1.2.1 绝望模型即大、小鼠强迫性游泳(forced swimm ing test)模型，该模型是将大鼠(或小鼠) 放入盛水的环形玻璃缸内强迫游泳。动物最初在水中拼命游动、挣扎、试图逃脱,随之感到逃脱是不可能的,便不再挣扎和游动,仅将头部露出水面,肢体漂浮,维持一种不动状态,将此状态称为“行为绝望”。此种模型已广泛用于抗抑郁剂的筛选和评价，国内昆明种小鼠和Wistar大鼠可以作为这种模型的首选动物[6]。 1.2.2 获得性无助 Seligman 等在1975年模拟抑郁症建立了获得性无助动物模型。经动物放在笼子中，给予动物连续的电击刺激，使其不能逃避，经多次实验后，即使将动物置于可逃避性的环境,如穿梭逃避，它也表现为完全不能或极缓慢的逃避行为,称之为“获得性无助”,该模型可作为内源性抑郁症代表性的动物模型[7]。 1.2.3 慢性轻度不可预见性的应激 (chronic unpre dictable mild stress，CUMS) 动物模型目前认为慢性、长期的日常压力是引发抑郁症的主要原因，近年来，通过改变周围环境使动物行为异常而建立的抑郁症模型，为抑郁症的研究拓宽了思路[8]。因此，这种模型目前应用广泛，它是Willner等[9],对Katz[10]等的模型的改良,相对于Katz的研究，它使应激因子的强度明显降低，并且以快感缺乏的测量作为模型是否成功的关键，该动物模型与人类抑郁症的发生机制更为接近。CUMS抑郁模型的制作包括以下几种不同的应激因子[11]：①黑白颠倒12h/12h;②禁食，禁水24h; ③垫料潮湿;④行为束缚;⑤强迫游泳;⑥电击足底;⑦高温环境;⑧噪音干扰;⑨陌生气味。将几种不同的应激刺激在实验全程中应用,顺序随机,连续两天不能出现同一刺激，在造模过程中每个应激刺激最多出现三次，使动物不能预料刺激的发生。 1.3其他：如：切除双侧嗅束，分离模型，自身脑刺激。 1.3.1 嗅球切除模型引起的行为学改变与抑郁症相似，表现为被动逃避能力下降、学习记忆能力下降，应激反应增强，进食行为改变等，切除嗅球引起的大脑内结构与神经递质的变化与抑郁症的病理生理改变相似［12，1,3］。 1.3.2 分离模型[14] 将幼年大鼠在断乳之前与母鼠分开,隔离喂养10-12个月以后，由于分离而致动物烦躁,睡眠减少,随之出现自发活动下降,群居障碍,食欲下降,愁容,萎缩一团。 1.3.3 自身脑刺激研究表明，抑郁与中枢奖赏系统之间有着非常密切的关系，而当后者功能低下时,可表现为抑郁、自卑感强及自信心不足。根据这一设想,将电极埋入鼠脑的奖赏区,训练其踏杆自我刺激,以踏杆频数和阈电流强度为指标,观察药物的影响。此种模型的可信性还有待更广泛的实验证明[15]。 2 动物抑郁模型有效性的评价 2.1旷场实验（open-field test） 2.1.1 方法：将动物置入80cm×80cm×40cm周壁、箱底为黑色的箱内，且其底面由25块相等的16cm×16cm正方形组成，以白线划分。将动物放入正中央格后开始测定，每次测定5分钟，测试过程采用摄像机记录,每只大鼠只进行一次行为测定，测定完毕，粪便清理干净后，用75%酒精擦拭干净箱底，再进行下一只测定，采用单盲法，每周测定1次，每组动物大于7只有统计学意义。 2.1.2 结果我们主要从以下几个方面来评价模型组的抑郁程度，研究发现相对于对照组，模型组中会出现以下变化： 2.1.2.1 水平运动减少，这个指标反映动物的活动度降低。直运动减少，它反映了动物对新鲜环境的好奇程度降低。以穿越底面积块数为水平活动得分，直立次数为垂直活动得分[16]。 2.1.2.2 体重和摄食量下降，说明抑郁大鼠的食物奖赏和欣快感缺乏。 2.1.2.3 运动时间减少及不动时间增加。 31%蔗糖水偏好实验(1% sucrose preference test）

抑郁模型大鼠海马内环境的研究

抑郁模型大鼠海马内环境的研究发表时间：2011-07-13T16:28:59.267Z 来源：《中外健康文摘》2011年第16期供稿作者：郑晓霓1 单德红2 [导读] 海马神经元所处的细胞外液属于机体内环境，其成分和理化特性相对稳定是神经元发挥功能的前提。郑晓霓1 单德红2 （1辽宁省沈阳市沈和区第二中医院110015；2辽宁省沈阳市中医药大学基础医学院110032）【中图分类号】R74【文献标识码】A【文章编号】1672-5085 (2011)16-0144-02 【摘要】目的研究海马内环境稳态在抑郁症中的作用。方法20只雌性Wistar大鼠分为对照组、模型组。ELISA法检测血清皮质醇、雌二醇，光镜和电镜观察海马CA3区形态学变化，免疫组化法检测海马脑源性神经生长因子和血管内皮生长因子表达。结果与对照组比较，模型组皮质醇水平显著升高，雌二醇水平明显下降，海马CA3区神经元损伤严重，脑源性神经生长因子和血管内皮生长因子表达明显降低。结论抑郁状态下，海马内环境稳态被破坏。【关键词】抑郁症海马内环境稳态脑源性神经生长因子血管内皮生长因子【Abstract】 Objective: To study the action of hippocampal internal enviroment in deprssion. Methods: 20 femal wistar rats were divided into the control, model group. Serum cortisol and estradiol were measured with ELISA. Hippocampal CA3 morphology were observed by light and electron miroscope. BDNF and VEGF expressions were detected by immunohistochemistry. Results: compared with those in the control, in the model group, the serum cortisol level increased obviously, serum estradiol level decreased significantly, and the CA3 neurons had severious structure damage, and the expressions of BDNF and VEGF decreased markedly. Conclusion: The homeostasis of hippocampal internal enviroment is disrupted in depression. 【Key words】 depression hippocampal internal enviroment homeostasis brain-derived neurotrophtic factor vascular endothelial growth factor 海马内环境指海马神经元的细胞外液，其理化性质和各种成分应保持相对稳定的状态，即稳态。海马内环境的理化特性包括温度、渗透压、酸碱度等，成分有各种离子、激素、递质、细胞因子等。海马内环境稳太破坏均会损伤海马功能和结构，进而影响行为、情绪和内脏功能。现代医学认为海马损伤在抑郁症发病中起重要作用[1-2]，但抑郁状态下，海马内环境出现何种变化目前尚没有系统研究，这就是本课题的研究目标，而本文主要对海马内环境中相关成分进行初步观察。 1 材料和方法 1.1实验动物的选取和分组健康Wistar雌性大鼠，清洁级，体重226±20g,中国医科大学动物实验中心提供，合格证号：医大动物合格证SCXK(辽)2008-0005。适应性饲养1周后，选择行为学得分相近的20只大鼠，随机分为对照组、抑郁症模型组（模型组），每组10只。室温20℃～25℃，湿度40%～50%。 1.2抑郁症模型的建立模型组大鼠建立慢性不可预见性应激模型，即在21d内随机施加电击足底（36V交流电，5min）、冰水游泳（4℃,5min）、摇晃（1min）、夹尾（1min）、禁水（24h）、禁食(24h)等刺激，每种刺激4次。 1.3血清雌二醇和皮质醇检测在实验的d22，2组大鼠均腹腔注射20%氨基甲酸乙酯（0.4mL/100g）麻醉后，腹主动脉取血，离心后取血清，低温冻存。采用ELISA方法检测皮质醇和雌二醇(Estradiol，E2)，此项工作由沈阳军区总医院内分泌实验室完成。 1.4海马组织学观察首先是HE染色：取完成1.3后2只大鼠，立即断头取双侧海马，置于10%甲醛中固定，石蜡切片，HE染色，观察海马CA3区神经元的形态学变化。其次电镜观察：取完成1.3后的2只大鼠，升主动脉插管，150ml生理盐水快速冲去血液，快速灌入4℃ 2.5%戊二醛固定液，取双侧海马，修块，再于戊二醛中固定2h，PBS反复清洗后，再经1%锇酸固定2h，双蒸水冲洗，梯度乙醇脱水，临界点干燥，离子溅射真空渡膜，扫描电镜下观察超微结构。 1.5脑源性神经生长因子和血管内皮生长因子表达取完成1.3的6只大鼠开胸，升主动脉插管，生理盐水快速冲去血液，取双侧海马，4%多聚甲醛固定4～6h，30%蔗糖溶液沉底。做海马石蜡冠状切片，片厚25μm，隔4片取1片，采用免疫组化SABC法检测脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophtic factor，BDNF)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor ,VEGF)表达，相关抗体和试剂盒均购于武汉博±德试剂公司，阴性对照选用PBS。利用BI-2000医学图像分析系统，测定海马CA3区BDNF和VEGF表达的平均灰度值。 1.6数据处理数据以x-±s表示，采用SPSS13.0中ANOVA检验进行统计学处理。 2 实验结果实验过程中没有实验动物死亡及脱失现象。 2.1海马形态学变化光镜下，对照组CA3区有大量致密锥体细胞，排列整齐，细胞完整，边缘清晰；模型组细胞层次减少、稀疏、排列紊乱，大量细胞坏死。电镜下，对照组细胞器丰富，轮廓清晰，细胞核呈圆形，核膜清晰光滑完整，核染色质分布均匀；模型组细胞器减少，线粒体空泡化，细胞核变小，不规则，且核膜增厚，核周电子密度降低。 2.2海马内环境相关成分变化与对照组比较，模型组皮质醇显著升高，E2明显下降。BDNF和VEGF免疫阳性反应产物呈棕黄色，前者分布神经元胞浆内，后者主要分布于血管内皮细胞内。对照组BDNF和VEGF表达较多，模型组较少，二者灰度值均升高。具体数据见表1。表1 各组海马内环境相关成分的变化注：与对照组比较：a P<0.05, b P<0.01

若干实验性高血压大鼠模型的介绍_程轶群

2006年5月第16卷　第5期中国比较医学杂志 CHINESE J OURNAL OF COMPAR ATIVE MEDICINE May ,2006Vol .16　No .5 综述与专论若干实验性高血压大鼠模型的介绍程轶群,李晓辉 (第三军医大学基础医学部,重庆　400038) 【摘要】　高血压是我国最常见的心血管疾病,而实验性高血压大鼠模型在高血压研究中扮演着重要的角色.本文对目前若干实验性高血压大鼠模型建立的方法以及它们的主要特点和应用进行了综述。【关键词】　高血压;大鼠;模型,动物【中图分类号】R544.1 【文献标识码】A 【文章编号】1671-7856(2006)05-0305-04 Introduction of Some Models of Hypertension in Experimental Rats C HE NG Yi -Qun ,LI Xiao -Hui (The Basic Depart ment of The Third Military Medical University ,Chongq ing 400038,China ) 【Abstract 】　Hypertension is the most familiar cardiovascular disease in our country ,and the rat hypertens ion model play an important role in these studies .This text summarized the methods and characterics of some rat hypertension models . 【Key words 】　Hypertension ;Rat ;Model ,ani mal [基金项目]重庆市自然科学基金重点项目及攻关项目(No .20027537、No .20048256) [作者简介]程轶群(1979-),女,在读药理学硕士生,研究方向:心血管药理。E -mail :chengyiqun269998@sina .com [通讯作者]李晓辉,教授,博导。E -mail :xhl @mail .tmmu .com .cn 高血压是我国最常见的心血管疾病,其发生率在成年人中高达20%,不仅发病因素复杂众多,并且常有许多并发症,如脑卒中、心肌梗死、心力衰竭、冠心病、糖尿病等。为了更好的研究高血压的发病机制,阐明各种药物的作用机理,并且开发出更多有效的药物,研究人员不断地努力尝试建立和应用各种高血压的动物模型,其中以大鼠模型最多,本文综述了目前若干实验性高血压大鼠模型建立的进展,以及它们的主要特点和应用。1　自发性高血压大鼠模型国际上常用的原发性高血压的大鼠模型有:自发性高血压大鼠(SHR ,京都)、卒中易感型自发性高血压大鼠(SHR SP ,京都)、新西兰遗传性高血压大鼠(GH ,达尼丁)、以色列高血压大鼠(SBH ,耶路撒冷)、米兰高血压大鼠(MHS ,米兰)、里昂高血压大鼠(L H ,里昂)等。其中SHR 是最广泛应用的模型动物之一 [1] 。SHR 是1963年东京Okamoto 用 Wistar 大鼠培育而成的,其被毛呈白色。此鼠高血压发生率高,在16周龄时高血压已形成,收缩压>21.28kPa ,无明显原发性肾脏或肾上腺损伤,心血管疾病发生率高。SHR 与人类原发性高血压形成机制有相似之处,血压的升高均与外周血管阻力的增加有关,且对抗高血压药物有反应,因此,它是人类原发性高血压的研究及高血压药物筛选的较为理想的动物模型 [2] 。 2　转基因高血压大鼠模型高血压病发病率高且病因复杂。临床研究发现其具有明显的家族倾向性,因而可能与遗传因素有关。从基因水平研究高血压病的发病机制是揭示这一疾病病因的根本途径。现已发现若干基因与发病有关,如肾素基因、血管紧张素转换酶基因、血管紧张素原基因、心房利钠因子基因等。目前,应用高血压相关基因制作转基因小鼠的报道已不胜枚举,而制作转基因大鼠的报道却屈指可数。大鼠是实验高血压学中广泛应用的经典动物,制作转基因大鼠有着更重要的理论和实际意义,但同时也有着较高的技术要求。

大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法

大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法将大鼠的肺成纤维细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的生长培养基培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。一、实验材料准备 1. 动物出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。 2. 试剂 PBS、培养液(Hyclone的低糖DMEM，含Hyclone的10%新生牛血清、100 U/ml 青链霉素、1%明胶PBS、0.25%胰酶(含EDTA，GIBCO)，碘酒和酒精绵球。 3. 器械眼科直剪2把、眼科弯剪2把、眼科直镊2把、眼科弯镊2把、玻璃平皿3套，25 cm2塑料培养瓶(Costar)。二、具体操作 1. 明胶包被培养瓶过夜(准备2-3个)，取出明胶，用2 ml培养液冲洗培养瓶一遍，置于超净台中。

2. 解剖取肺：将乳鼠在酒精中浸泡后取出，转移至超净台上的玻璃培养皿中，用碘酒消毒胸部皮肤，再用酒精棉球脱碘。左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手以眼科直剪剪开皮肤，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒，继而以另一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。用眼科镊取出肺，置于盛有PBS(含有200 U/ml青链霉素)的玻璃平皿中，冲洗去血。 3. 用眼科剪将肺分成几个肺叶，用镊子去除周边的血凝块及纤维组织，用眼科剪剪去肺门处的支气管和血管，再用含有双抗的PBS冲洗1遍。 4. 用眼科弯剪将肺组织剪碎成1 mm3大小，加入含有双抗的PBS，将肺组织块吹打开，静置15 min后，更换新的PBS。 5. 用200 ul微量加样器(最好是超净台中专用的，临用时用酒精绵球好好擦拭枪柄)取200 ul加样枪头一个，剪去尖，在酒精灯上用火焰烧弯。用枪头吸取组织块接种于培养瓶中，每瓶20-25块左右，每小块间距0.5 cm左右。组织块放置好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，向瓶内加入2 ml左右的培养液，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在温箱中，干贴壁2-4 h后，将培养瓶慢慢翻转平放，继续静置培养。注意上述操作过程中动作要轻柔，让液体慢慢覆盖组织小块，严禁动作过快致使液体产生的冲力使粘贴的组织块漂起而造成原代培养失败。48 h后换液，更换2-3 ml即可。 6. 贴块贴壁72 h后，镜下可见大量的成纤维细胞爬出，将组织块去除，继续培养2-3天，待细胞长满，即可传代。注：因为血清浓度低，内皮细胞可以爬出少量，但是很快就

大鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定

大鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定* 谢　崧　杨晓静　钱桂生　王关嵩 (第三军医大学新桥医院,　重庆　630037) 摘要　取大鼠周边肺组织进行肺微血管内皮细胞培养。将肺组织切成小块,用含有20%新生牛血清、肝素90L g/ ml、L-谷胺酰胺4mmol、青霉素100U/ml和链霉素100L g/m l的R PM I-1640培养基培养。血细胞立即从肺组织周围游出。继而是肺微血管内皮细胞。成纤维细胞及其他细胞72h才游出。培养60h后取出肺组织块,培养瓶中只有微血管内皮细胞和血细胞。后者可通过传代除去。获得的肺微血管内皮细胞具有规律的鹅卵石样形态和对异植物血凝素结合试验及八因子相关抗原免疫荧光染色均阳性。关键词　大鼠　肺循环　微循环　内皮细胞　细胞培养　肺微血管在生理和病理情况下都起着重要作用,如与成人呼吸窘迫综合征、肺动脉高压[1]等的发生有关。目前仅限于肺动脉内皮细胞的研究,而肺微血管和大血管之间据文献报道在表型和功能有着显著的不同[2]。故有培养和研究肺微血管内皮细胞的必要。虽然肺有大量的血管内皮细胞,但同时存在40多种类型的细胞尤其成纤维细胞和平滑肌等细胞的迅速生长,使内皮细胞生长受抑制。分离和培养纯的肺微血管内皮细胞较为困难。国内未见肺微血管内皮细胞培养的报道。本文采用简单的方法成功地分离和培养出大鼠肺微血管内皮细胞。 1　材料和方法 1.1　主要试剂　RPM I-1640培养基为美国Gibco 公司产品。新生牛血清由华西医科大学公共卫生学院生产。兔抗人八因子相关抗原抗血清为DAKO公司产品,华美分装。荧光标记异植物血凝素为Sigm a 公司产品。荧光标记羊抗兔1gG由卫生部上海生物制品研究所生产。抗菌素为青霉素钠盐和硫酸链霉素。L-谷氨酰胺为第二军医大学分装。胰蛋白酶和肝素钠均为上海生化试剂商店提供。大鼠肺动脉内皮细胞按本研究所建立的方法[3]培养。 1.2　取材　选重200-300g健康雄性Wistar大鼠,10%乌拉坦(10L l/mg)腹腔麻醉。颈动脉放血后,将整个大鼠泡于75%酒精中2-3s,以后用组织剪逐层剪开胸腔。切下心肺放入盛有含青霉素200U/m、链霉素200L g/ml和Hanks液的三角烧瓶内备用。 1.3　大鼠肺微血管内皮细胞培养大鼠肺微血管内皮细胞原代培养:将盛有心肺组织的无菌三角烧瓶置于超净台,抗生素Hanks液冲洗心肺组织的血迹。眼科剪剪去肺组织表面的脏层胸膜,剪取胸膜下肺组织(厚度不应大于1.5mm)。并将肺组织用锋利的手术刀切成1.5×1×1mm3大小的组织块。贴入无菌的25cm2培养瓶(1%明胶预置过夜,4℃,用前2h移入CO2培养箱,培养液冲洗)中进行培养。每瓶贴10块,置培养箱固化2h后,加入含20%新生牛血清、肝素90U/m l、L-谷氨酰胺4mm ol、青霉素100U/ml和链霉素100L g/ml的RPM I-1640培养基3m l,放入培养箱中培养。60h后将肺组织块取出。继续培养7-10d,细胞汇合成单层细胞。肺组织贴瓶后3d换液,以后每两天换液一次,每次均换1/2。大鼠肺微血管内皮细胞传代培养:　将长成单层的原代细胞用0.08%胰蛋白酶进行消化,每瓶加入1ml,置常温5m in左右。镜下观察,当细胞间连接疏松时立即倒出消化液,加入培养基3ml,用吸管吹打使细胞脱落并充分混匀,吸出0.1m l计数,得出细胞总数后,将含细胞的培养液稀释成(2.5-3.0)×105个细胞/ml的接种浓度。每25cm2培养瓶接种3ml细胞悬液,与肺微血管内皮细胞相混的血细胞就通过传代除去了。 1.4　肺微血管内皮细胞的鉴定制片:　如同细胞传代将细胞消化成细胞悬液。再以800rpm离心5min除去含血清的培养液。向沉降的细胞中加少许Hanks液,用吸管轻轻吹打漂洗后,取少许细胞悬液薄涂于玻片上。用吸水纸吸干后甲醇固定5-10min取出备用。 189 中国应用生理学杂志1997;13(2) X1996-9-20收稿　1997-2-6修回