琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书

琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书
琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.360docs.net/doc/cc15527811.html,

AidQuick Gel Extraction Kit

琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒

目录号:DR01

适用范围:

适用于琼脂糖凝胶DNA回收

试剂盒组成、储存、稳定性:

试剂盒组成保存

50次

(DR0101)

100次

(DR0102)

200次

(DR0103)

平衡液室温5ml 10ml 20ml 溶胶液DD 室温50 ml 50ml×2 200 ml

漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇

洗脱缓冲液EB 室温10 ml 15 ml 15 ml

吸附柱EC 室温50个100个200个

收集管(2ml)室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:

1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直

接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。

2.储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储

存均在室温下(15℃-25℃)进行。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时

盖紧盖子。

产品介绍:

在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点:

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附

量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、

连接克隆等下游反应。

3.溶胶液加酚红调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到

最佳结合效果,大大提高回收效率。

4.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变化很大也能将PH

缓冲在最佳结合范围内。

5.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。

注意事项

1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,

如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.溶胶液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。

若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

3.回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间,过长、过短片段的回收效率迅速

降低。

4.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-15μg,

100bp-5kb的DNA片段,回收率可高达85%。

5.切胶回收时,紫外灯观察对DNA片段有损坏作用,应该尽可能使用能量低的长波

紫外线,并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。

6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水

洗脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱,DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

关于平衡液的使用

1.介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影

响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成,请加热至37℃使沉淀完全消失。

2.使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中,吸取100μl的平衡液至柱

子中。13000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液,将吸附柱子重新放回收集管。

此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

操作步骤

提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

1.在长波紫外灯下,用干净刀片将所需回收的DNA条带切下,尽量切除不含DNA

的凝胶,得到凝胶体积越小越好。

2.将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心管,称重。

先称一个空1.5ml离心管重量,然后放入凝胶块后再称一次,两次重量相减,得到凝胶的重量。

3.加3倍体积溶胶液DD。

如果凝胶重为100mg,其体积可视为100μl,则加入300μl溶胶液。

如果凝胶浓度大于2%,应加入6倍体积溶胶液。

4.56℃水浴放置10分钟(或直至胶完全溶解)。每2-3分钟涡旋震荡一次帮助加速

溶解。

5.可选,一般不需要:每100mg最初的凝胶重量加入150μl的异丙醇,震荡混匀。

有时候加入异丙醇可以提高回收率,加入后不要离心。回收大于4Kb的片段时,不加入异丙醇,加入有时反而可能降低回收效率。

平衡液预处理吸附柱:

使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤,具体方法参见前文“关于平衡液的使用”

6.将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室温放置1分钟,

12,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。

如果总体积超过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC中。

过滤下的溶胶液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后,溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色,此为酚红PH指示剂碱性条件下的正常颜色变化。

7.加入600μl漂洗液WB (请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30

秒,弃掉废液。

8.加入600μl漂洗液WB,12,000rpm离心30秒,弃掉废液。

9.将吸附柱EC放回空收集管中,12,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂

洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10.取出吸附柱EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加50μl洗脱缓

冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果需要较多量DNA,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1分钟。

洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于25μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少产量。

JS型酒精回收塔验证方案样本

类别: 验证方案编号: 部门: 动力设备部页码: 共页, 第页 J S-600型酒精回收塔验证方案 版次: □新订□替代: 起草: 年月日 审核: 批准: 年月日 生效日期: 年月日 授权: 现授权下列部门拥有并执行本标准( 复印数: ) 复印序列号:

1.引言 ----------------------------------------------------------------------------------------------4 1.1概述----------------------------------------------------------------------------------------------4 1.2JS-600型酒精回收塔基本情况一览表----------------------------------------------------------4 1.3验证目的----------------------------------------------------------------------------------------4 2职责------------------------------------------------------------------------------------------------5 2.1验证委员会-------------------------------------------------------------------------------------5 2.2动力设备部-------------------------------------------------------------------------------------5 2.3质量保证部-------------------------------------------------------------------------------------5 2.4生产部-------------------------------------------------------------------------------------------6

promega 胶回收完整说明书

Promega Corporation ·2800 Woods Hollow Road ·Madison, WI 53711-5399 USA Toll Free in USA 800-356-9526·Phone 608-274-4330 ·Fax 608-277-2516 ·https://www.360docs.net/doc/cc15527811.html, Printed in USA.Part# TB308Revised 11/09Page 1 1. Description ..........................................................................................................12. Product Components and Storage Conditions ............................................33. General Considerations ....................................................................................44.Gel Slice and PCR Product Preparation .. (4) A.Preparing the Membrane Wash Solution (4) B.Dissolving the Gel Slice (5) C. Processing PCR Amplification Products (6) 5.DNA Purification (6) A.DNA Purification by Centrifugation (6) B.DNA Purification by Vacuum............................................................................76. Troubleshooting .................................................................................................97. References .........................................................................................................118.Appendix .. (11) https://www.360docs.net/doc/cc15527811.html,position of Buffers and Solutions (11) B. Related Products (12) 1.Description The Wizard ?SV Gel and PCR Clean-Up System is designed to extract and purify DNA fragments of 100bp to 10kb from standard or low-melt agarose gels in either Tris acetate (TAE) or Tris borate (TBE), or to purify PCR products directly from a PCR amplification. Up to 95% recovery is achieved depending upon the DNA fragment size (see Table 1). PCR products are commonly purified to remove excess nucleotides and primers. This membrane-based system, which can bind up to 40μg DNA, allows recovery of isolated DNA fragments or PCR products in as little as 20 minutes, depending on the number of samples processed and the protocol used. The purified DNA can be used for automated fluorescent DNA sequencing, cloning, labeling, restriction enzyme digestion or in vitro transcription/translation without further manipulation.?Clean-Up System All technical literature is available on the Internet at https://www.360docs.net/doc/cc15527811.html,/tbs Please visit the web site to verify that you are using the most current version of this Technical Bulletin. Please contact Promega Technical Services if you have questions on use of this system. E-mail techserv@https://www.360docs.net/doc/cc15527811.html,.

自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书

罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书 注意:Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴,严禁吸入和食入。 反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中,按有毒废物处理。 需要自己配置的其他物品: 除上表所列试剂外,还需准备以下溶液。下表列出每步所需物品概览:

产品概述: 特异性:TUNEL 反应优先标记凋亡产生的DNA 链断裂,从而辨别凋亡与坏死、以及由抑 制细胞生长的药物或放射线产生的primary DNA 链断裂 实验干扰:假阴性:在某些型式的凋亡细胞中DNA 链断裂可能缺失或不完全。空间位阻, 如细胞外元件可能阻止TdT 到达DNA 断裂处。两种情况均能产生假阴性。 假阳性:在坏死晚期,可能产生大量的DNA 片段 DNA 链断裂也可能在具有高增殖和代谢活动的细胞中出现。两种情况均能产生 假阳性。为确认细胞死亡的凋亡型式,应认真进行每种细胞的形态学检查 凋亡过程中产生的形态学改变尤其特征形式,因此,对于可以结果进行解释时, 细胞形态评估是一项重要的参数 样本:细胞离心涂片和细胞涂片 在chamber slides 上培养的黏附细胞 冰冻或福尔马林固定、石蜡包埋样本 分析时间:2-3小时,除外培养、固定和渗透 检测次数:一个试剂盒50T

步骤和所需材料: 1 流程图: 2 样品准备 黏附细胞、细胞涂片和细胞离心涂片 需准备的其他试剂:Washing buffer:磷酸盐缓冲液(PBS) Blocking buffer封闭溶液:甲醇稀释的3% H2O2 Fixation solution固定溶液:PBS配制的4%多聚甲醛,ph ,新鲜配制 Permeabilisation solution 渗透液:%Triton1)X-100溶于%柠檬酸钠溶液 中,新鲜配制 步骤:下表描述了细胞固定、内源性过氧化物酶封闭和细胞渗透过程。 组织部分 福尔马林-包埋组织 福尔马林包埋组织的预处理:可按4种不同的方式预处理。如用蛋白酶K,不含核酸酶,浓 度、孵育时间和温度应按组织类型优化 注意:只用罗氏应用科学的蛋白酶K,因其经检测不含核酸酶, 核酸酶可导致假阳性。 另外3中替代方法在下表中描述(step 2) 需准备的其他试剂:二甲苯和乙醇(浓度:95%,90%,80%,70%,溶于双蒸水中)

酒精回收塔URS表

乙醇回收塔 用户需求说明文件 (URS表) 森科制药 2014年6月

目录 1、文件审批 2、目的 3、围 4、法规与国家标准 法规 行业标准 国家标准 5、工艺描述及产品介绍 6、用户及系统要求 6.1 URS要求 6.1.1 URS01:设备整体要求 6.1.2 URS02:具体技术要求 6.1.3 URS03:安全及环保要求 6.1.4 URS04:文件资料要求 6.1.5 URS05:服务与维修要求 6.2供应商对项目要求的确认 7、缩略词附件 8、文件修订变更历史 9、附件

乙醇回收塔用户需求说明文件1、文件审批 起草 审核 批准 2、目的

本用户需求文件旨在从项目和系统的角度阐述用户的需求,总括了用户对乙醇回收塔的质量要求(GMP),描述了用户对乙醇回收塔的工作过程及功能的期望,低浓度的乙醇溶液用泵打入塔釜,塔釜夹套通入蒸汽,控制塔顶及塔釜温度压力等参数,按照一定的回流比进行乙醇蒸馏得到高浓度的乙醇溶液。主要包括相关法规符合度和用户的具体需求,这份文件是构建起项目和系统的文件体系的基础,同时也是系统设计和验证的可接受标准的依据。设备生产商应在规定的时间完成并达到本用户需求的设计目标和可接受的质量标准。在本URS 中用户仅提出基本的技术要求和设备的基本要求,并未涵盖和限制卖方设备具有更高的设计与制造标准和更加完善的功能、更完善的配置和性能、更优异的部件和更高水平的控制系统。投标方应在满足本URS的前提下提供卖方能够达到的更高标准和功能的高质量设备及其相关服务。卖方的设备应满足中国有关设计、制造、安全、环保等规程、规和强制性标准要求。如遇与卖方所执行的标准发生矛盾时,应按较高标准执行(强制性标准除外)。 3、围 本用户需求书所列技术要求适用于新项目提取车间乙醇回收塔生产线设备的采购。新的乙醇回收塔在设计、制造技术及性能上达到国先进水平,符合中国新版GMP要求。 4、法规与国家标准 法规 新建的乙醇回收塔生产线用于提取车间低浓度乙醇的精馏回收。因此必须符合要求,主要包括: ——中国GMP(2010年修订)及其附录 ——2011年版《GMP实施指南》 ——中国药品生产验证指南(2003版) ——GEP良好工程管理规 ——《中国药典》2010年版 行业标准 ——GBZ 1-2010 工业企业设计卫生标准

DNA胶回收中常见问题和解答

1、如何计算提取率 1) 回收前样品中,往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等,所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率; 2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳,使用凝胶成像系统拍照后,用配套的软件进行电泳条带灰度对比; 3) 注意,电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成很大影响,请仔细操作,以减小误差。 2、如何简易测算提取率 取胶回收后的DNA溶液体积的1/5—1/10,与等体积的回收前的DNA溶液的5-10倍稀释液一起电泳,肉眼观察回收后的条带相对于回收前条带的亮度,粗略测算回收率(如亮度只有一半时,其回收率可粗略为50%)。 3、如何看待提取得率 影响回收率的因素很多,如DNA片段大小、点样量、凝胶种类、电泳缓冲液的缓冲能力、切胶操作、紫外灯照射强度和时间、溶胶是否彻底等等,所以不能单凭1-2次的实验来判断其质量好坏,最好是多做几次实验或用几种不同品牌的产品做平行对照实验,结果相对真实。 4、回收率为什么与点样量和片段大小有关 DNA片断越大,和固相基质的结合力越强,就越难洗脱,回收率就低;DNA的量越少,相对损失越大,回收率越低。 5、用胶回收试剂盒从凝胶中回收DNA得率低是什么原因 1)胶块溶解不完全,可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数以及增加溶胶液的比例;

2)胶块体积太大,应使用枪头捣碎,还不能充分溶解则先将其切为小块,分多次回收; 3)紫外灯下切胶时间过长,导致DNA部分降解,应尽量把切胶时间控制在30s以内; 4)洗涤液使用后未及时盖严瓶盖,乙醇挥发,影响回收效率; 5) TAE或TBE电泳缓冲液不新鲜,失去了缓冲能力,导致PH值升高,降低DNA和膜的吸附力,应及时更换电泳缓冲液,最好使用新鲜配制的电泳缓冲液,效果更好; 6)回收前的样品量太少,加大点样量; 7)洗脱前,预先65℃预热洗脱液、延长室温静置时间、增加洗脱次数可以有效提高回收率30%以上。 6、加入溶胶液温浴后,液体仍很粘稠或后续步骤有堵柱子现象 1)胶块溶解不充分,可再补加一些溶胶液或延长水浴时间并增加上下颠倒次数帮助溶胶; 2)胶块体积过大,应尽量切除多余部分,并将其切为小碎块,分几次回收; 3)水浴温度是否达到规定温度65℃,用温度计检测。 7、琼脂糖凝胶块不溶 1)琼脂糖质量不好; 2)含目的片断的凝胶在空气中放置过久,使胶块失水干躁,建议切胶后立即进行回收或将胶块保存于4 ℃或-20℃; 3)制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。

胶回收方法全攻略

胶回收方法全攻略 说到电泳凝胶的片断回收,想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。确实,一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里,从琼脂糖凝胶中回收DNA,仅仅是一种简单不过的常规实验操作。虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的,每个实验室也有自己的独门秘诀,可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用途,不同价钱的快速凝胶回收试剂盒,一下子将胶回收的时间缩短到10多分钟,操作也大大简化,胶回收就变成“小菜一碟”了。然而,从bbs逛上一圈下来,发现实际上还是有不少人为胶回收这种看似简单的操作而 烦恼。到底是什么导致了实验新手,甚至是老手在这个已经发展近40年的常规性实验中卡壳?由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验——比如 酶切连接、转化筛选、测序或者PCR 扩增、标记乃至显微注射等等,为大家搜罗各种产品和方法的优缺点,注意事项,做一个胶回收全攻略篇。 一、胶回收的关键参数 胶回收的质量直接影响后继实验的成功与否。要想做好胶回收,无论是自己亲力亲为还是借助目前五花八门的胶回收试剂,最基本的评定标准无外乎这么几个:质量( 回收产物的纯度和浓度),回收效率,操作方便(速度),柱子的载量等等。 回收产物质量:回收产物的质量主要指纯度。常规电泳过程中,普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖,会连同DNA一起从凝胶中抽提出来,会强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。从凝胶中回收DNA片断,产物的纯度自然是我们考虑的第一要务。对于大片断DNA回收,质量还包括了产物的完整与否,如果机械剪切力使得回收产物大小不一致,后果决不是你希望碰见的。而对于较小片断回收,质量其实还包括了回收产物的浓度。因为产物浓度太小,对后继实验同样也有影响,比如连接、标记实验等等就很不爽,往往不得不再浓缩一次,增加了操作的复杂性。此外,极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。 回收率:回收得率,是我们考虑的另一个重要参数。由于上电泳的样品量通常都很少,电泳的过程本身也会导致样品的分散和损失,因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断,提高产物得率,对于后继实验来说是非常重要的。回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关,比如DNA片断越大,和固相基质的结合力越强,就越难洗脱,回收率就低;又比如说,DNA的量越少,相对损失越大,回收率越低。因此,根据情况选择不同的方法是很重要的。值得注意的是,由于样品的大小和多少对回收率都有显著的影响,所以回收率并非是一成不变的。 其他:操作方面,相信大家都会比较喜欢操作简单,快速,应用起来方便的方法或者产品。比如溶胶的缓冲液中添加指示剂,可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计;离心过柱就比离心沉淀要简单方便。载量,就是每次回收最多能回收的产物的量。这个自然是越大越好了,因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质,过量的产物吸附不了就是被浪费掉的。难免有时你需要回收比较大量的产物,大载量就很有优势——同一个片断你要用2个柱子,多郁闷啊。

Annexin V-FITC PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 一、试剂盒说明 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS )只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS )由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素FITC 标记,以标记了的Annexin V 作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI )是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。 二、试剂盒组份 组份 (20 assays) (50 assays) (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC 100 μL 250μL 500 μL Propidium Iodide 100 μL 250μL 500 μL Binding Buffer 10.0 mL 25 mL 50 mL 注:1、Annexin V-FITC 组份建议按需分装小份冻存于-20 ℃,避免反复冻融; 2、Propidium Iodide 和Binding Buffer 组份不用时可放置于4℃保存,Propidium Iodide 需要避光。 3、Store at -20℃ for 12 months 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube 、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS 、不含EDTA 的胰酶消化液 四、使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-FITC ,Propidium Iodide (PI )避光保存及使用。对于Annexin V-FITC 这个组份,建议您在收到产品之后,分装为小份避光保存于-20℃,即用即取。 3. Propidium Iodide (PI )有毒,操作时要戴手套。 4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,不推荐用于检测组织样本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而 用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每 次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。 五、 操作方法 1. 悬浮细胞离心(2000rpm 离心5min )收集;贴壁细胞用不含EDTA 的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不 易过长,否则容易引起假阳性); -20℃避光 4℃避光 4℃

乙醇回收装置

我们都知道乙醇的作用很多,因为产量较高,所以比较普及,运用于工业制品、以及饮料制品等,那么乙醇到底是怎么回收的呢?是怎样的一个流程呢,小编这里来介绍一下乙醇的回收装置。 分为两种: 1、酒精回收塔:适用于制药、食品、轻工、化工等行业的稀酒精回收。也适用于甲醇等其他溶煤产品的蒸馏。 工作原理:酒精回收塔工作原理利用酒精沸点低于不及其它溶液沸点的原理,用稍高于酒精沸点的温度,将需回收的稀酒精溶液进行加热挥发,经塔体精镏后,析出纯酒精气体,提高酒精溶液的浓度,达到回收酒精的目的。 设备结构:酒精回收塔由塔釜、塔身、冷凝器、冷却器、缓冲罐、高位贮罐六个部分组成,适用于制药、食品、轻工、化工等行业的稀酒精回收,本设备与物料接触部分均采用不锈钢SUS304或SUS316L制造,具有良好的耐腐蚀性能,并且具有节能、环保、降低生产成本、提高这效率的优点。本装置可将30度~50度的稀酒精蒸馏到93度~95度,残液排放含醇度低,符合环保要求。

而另一种就是酒精回收浓缩器 下面小编来说说这款产品特点: 1、全不锈钢机箱结构,美观耐用;特别的盖设计,正蒸馏罐不直接外露,对操作者提供额外的保护。 2、整体拉伸成形的不锈钢蒸馏罐,与蒸馏罐一体的全密封大热金属壳体,无需导热油做热介质,避免更换导热油的费用以及气失效的隐患。 3、内置弹簧卸压装置的蒸馏罐盖子,保证蒸馏罐内压力不大于1PSI。 4、数字温度控制,LCD控制显示屏,温度设置从75°C到240°C内任何一个温度。16数字液晶显示温度。

5、加热系统:双重封闭电热元件,高速隔热层 6、不锈钢冷凝器,冷却方式位风冷 7、控制:通过传感器对各点温度和机器操作状态实行监控,本质的微处理器控制电路实现自动控制。 8、操作简便:整个过程全自动进行,24小时不停机,365天不用人管,没料时自动关机,计算机智能控制。 9、自诊断功能,指示灯显示错误信息。 10、防爆认证:严格按照防爆要求设计制造整台机器的机械结构和电气线路。 总的来说,这两款设备的精度要求还是相对较高的,所以需要在一个合适地方购买才能买到一件靠谱的机器,所以小编在这里给大家推荐一家公司——杭州钱江干燥设备有限公司,这里的产品不仅在生产时精细,并且在售后上,他们也是很让顾客满意的,所以可以放心购买。 更多详情请拨打联系电话或登录杭州钱江干燥设备有限公司官网https://www.360docs.net/doc/cc15527811.html,咨询。

琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法

琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法 琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法20世纪70年代是一个奠定现代分子生物学的时代,1973年冷泉港实验室的Joseph Sambroo k和Phillip Sharp发明了利用琼脂糖凝胶分离DNA 和EB染料观测DNA 相结合的技术。现在,琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。这里首先介绍的是琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法: 1.柱回收试剂盒:可谓目前最简单快速的回收方法,只需要将电泳凝胶中的产物条带切下,用溶解Buffer彻底溶解,上包埋有纯化填料的纯化柱,离心,再洗涤一次,离心后用洗脱缓冲液洗脱。全程不过10多分钟,得到的产物溶液可以直接用于后继实验。这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果,也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。但是这个方法不适合用于大片断的回收。 2.玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒:这个方法比前面的方法更为灵活,可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量,使得实验不受限于柱子的载量,也不会造成浪费。前面的操作步骤和上者一样,将电泳凝胶的条带切下,Buffer溶解,(区别在于这里)加入纯化填料填料吸附混合,快速离心沉淀去上清,洗涤沉淀后,干燥沉淀,最后用洗脱液纯化介质中吸附的片断释放出来,离心,取上清,

就是回收的产物。这个方法适合各种不同大小的片断,特别是大片断的回收,但是操作就较前者复杂一些,涉及到多次离心沉淀和取上清,有可能会误吸了微量的沉淀;另外干燥的程度也有点技巧,干过了不好洗脱,没干透又影响结果。后来的改进版本有将混合了纯化介质后的凝胶溶解液加入到一种离心过滤柱上,这种柱子不带纯化填料,只有一层过滤膜,离心过滤后,填料在柱子里,溶液被甩掉,这样就避免了上述的问题。 3.低熔点琼脂糖:传统手工操作方法之一,低熔点琼脂糖制备凝胶,电泳后切割目的条带,在TE溶液中65度保温融化,用传统的酚氯仿抽提,乙醇沉淀。这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂,由于乙醇沉淀需时较长,现在用的人已经不多了。想当年经费紧张的时候,低熔点琼脂糖贵,不舍得这么浪费的,比较取巧省钱的法子就是常规琼脂糖电泳后,在目的条带前方挖槽,灌入低熔点琼脂糖,凝胶后再电泳一小会儿,等条带进入低熔点琼脂糖区域再将那块家伙切出来,就可以非常非常节约了。除了直接酚抽低熔点琼脂糖凝胶,还有人用琼脂糖酶来消化琼脂糖凝胶,条件也相当温和,只是那酶价格并不便宜(光那酶的成本就至少5-6块,还不算其他的麻烦事),多数的酶只适合用低熔点琼脂糖,问题是我不用酶也可以直接酚抽,费时间还特长,所以,并不觉得特别好用。后来据说T家的琼脂糖酶可以用于常规琼脂糖,前提是你有办法在65度把那胶化了。但那需要极好的耐心。

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书 货号:T2190 规格:20次 保存:-20oC保存,荧光标记液需避光保存。 产品简介: 细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP),从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织,只要经过一步染色反应,洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开,另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。极少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标。产品内容: 1.TdT酶100μl 2.荧光标记液900μl 3.TdT酶稀释液(选用)500μl

胶回收

除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点: (1)防止抽提过程中污染DNA酶 与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末 端时也会导致严重的连接困难. (2)紫外照射选择长波段 回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射. (3)实验操作要轻柔 特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离 心管等操作均应缓慢,轻柔. 综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础. 3 实验步骤 一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例) (1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率) (2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN) (3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀. (4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒. (5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟. (6)重复步骤5一次. (7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm 离心2分钟. (8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放 置2分钟. (9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA 片段. 胶回收 一. 提高胶回收量的办法: 1) 增加电泳时的上样量。 2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)(BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本) 使用说明书 一、TUNEL制品说明 凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况,其原理是生物素(biotin)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘-OH末端,并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH 形成,很少能够被染色。 本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。 本试剂盒特点 ●操作简便:使用Ready-to-Use型试剂,并配有Proteinase K 和DAB。 ●高灵敏度:可以单一检出初期的凋亡细胞。 ●高特异性:能特异性染色凋亡细胞。 ●快速操作:整体操作约需3小时。 ●用途广泛:可应用于组织切片、细胞样本等。 ●方便观察:使用光学显微镜观察实验结果。 ●高正确性:有阳性对照片的制备方法,可以确认试剂盒的有效性

使用注意事项 1.使用前请认真阅读本说明书,提前准备好相关试剂。 2.因本试剂盒中组分均为微量,使用前请离心集液。 3.为避免试验误差、降低试剂的损耗,建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。 4. TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制,再分别滴加于各样本片上,避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。 5. 为防止样本脱落,请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 6. 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜,以改善细胞的渗透性。 7. 使用PBS清洗细胞样本时,不要直接加在细胞样本上,以防止细胞样本的脱落。 8. 进行PBS清洗时,以5分钟清洗3次为标准。 9. DAB为固体粉末,使用前加入PBS配制成20×DAB(10 mg/ml)后,按说明书显色使用。 二、TUNEL试剂盒组分 试剂盒以外自备仪器和试剂

快装酒精回收塔岗位操作规程(标准版)

The prerequisite for vigorously developing our productivity is that we must be responsible for the safety of our company and our own lives. (安全管理) 单位:___________________ 姓名:___________________ 日期:___________________ 快装酒精回收塔岗位操作规程 (标准版)

快装酒精回收塔岗位操作规程(标准版)导语:建立和健全我们的现代企业制度,是指引我们生产劳动的方向。而大力发展我们生产力的前提,是我们必须对我们企业和我们自己的生命安全负责。可用于实体印刷或电子存档(使用前请详细阅读条款)。 1.操作步骤。 1.1准备过程。 1.1.1检查全部水、汽、电路防止接错及泄漏。 1.1.2检查各处的紧固螺丝是否松动,各路阀门开闭是否灵活。 1.1.3检查附件仪表是否灵敏完好。 1.1.4检查工房、设备的清洁状况。 1.1.5检查清场合格证,核对有效期,取下标示牌,挂生产标示牌于指定位置,按生产指令填写工作状态。 1.2操作过程: 1.2.1将稀乙醇用泵打入过滤器,余热器进入蒸馏釜中,加到视镜位的1/3为宜。 1.2.2开启蒸汽阀进行加热,同时开大上水阀,使上水玻璃转子流量计工作,其水压仪表指针达到0.2Mpa以上,蒸汽压力控制在0.3—0.5Mpa,由加热压力仪表指示。

1.2.3蒸馏釜内乙醇和水的混合蒸汽上升,经蒸馏塔和分流器时,进行全回流操作,成品浓度指针在78℃时。 1.2.4调节上水玻璃转子流量计的流量,关闭稀酒精进入蒸馏釜内的阀门,开启稀酒精玻璃转子流量计的阀门调节流量。 1.2.5适当开启干蒸汽阀门,根据干蒸汽仪表指示调节压力。蒸馏釜的釜内压力一般在0.02Mpa以下。釜内温度稀液温度高至101—102℃时。 1.2.6打开蒸馏溢流阀排放废液,从而形成了连续进料,连续蒸馏,连续排废液。 1.3结束过程。 1.3.1乙醇度蒸发在96°左右时,关闭蒸汽阀后,再把合格乙醇打入卧式贮罐内。 1.1.2打入饮用水将回收塔清洗干净。 1.3.3按清场SOP进行清场。 1.3.4及时做好各项生产记录,并在设备上挂好设备状态标志。 2.操作标准: 项目 标准

凝胶回收

AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒 本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中回收多至8μg DNA(70bp-10Kb),回收率为60-85%。琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中熔化,其中的保护剂能防止线状DNA 在高温下降解,然后在DE-B 溶液的作用下使DNA 选择性结合到膜上。纯化的DNA 纯度高,并保持片断完整性和高生物活性,可直接用于连接、体外转录、PCR 扩增、测序、微注射等分子生物学实验。 一、试剂盒组成、贮存、稳定性 2ml离心管1.5ml离心管说明书 Buffer DE-A:凝胶熔化剂,含DNA 保护剂,防止DNA 在高温下降解。室温密闭贮存。 Buffer DE-B:结合液(促使大于70bp 的DNA 片段选择性结合到DNA 制备膜上)。室温密闭贮存。 Buffer W1:洗涤液,室温密闭贮存。 Buffer W2 concentrate:去盐液,使用前,按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇(用100%乙醇或95%乙醇),混合均匀,室温密闭贮存。 Eluent:洗脱液,室温密闭贮存。 二、注意事项 1. Buffer DE-A(含有β-巯基乙醇)、Buffer DE-B 和Buffer W1 含刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套和眼镜,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。 2. 在步骤1 中,将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间(线型DNA 长时间暴露在高温条件下易于水解),从而提高回收率。勿将含DNA 的凝胶长时间地暴露在紫外灯下,减少紫外线对DNA造成的损伤。 3. 在步骤2 中凝胶必须完全熔化,否则将严重影响DNA 回收率。 4. 将Eluent 或去离子水加热至65°C,有利于提高洗脱效率。 5. DNA 分子呈酸性,建议在2.5 mM Tris-HCl,pH 7.0-8.5 洗脱液中保存。 三、实验准备 1. 第一次使用前,Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。 2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。 3. 准备75°C水浴。 4. 使用前,检查Buffer DE-B是否出现沉淀,若出现沉淀,应于70°C温浴加热熔化并冷却至室温后再使用。 四、操作步骤 1. 在紫外灯下切下含有目的DNA 的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量(提前记录1.5 ml 离心管重量),该重量作为一个凝胶体积(如100 mg=100 μl 体积)。 2. 加入3 个凝胶体积的Buffer DE-A,混合均匀后于75°C 加热(低熔点琼脂糖凝胶于40°C 加热),间断混合(每2-3 min),直至凝胶块完全熔化(约6-8 min)。 * Buffer DE-A 为红色溶液。在熔化凝胶的过程中,可以帮助观察凝胶是否完全熔化。 3. 加0.5 个Buffer DE-A 体积的Buffer DE-B,混合均匀。当分离的DNA 片段小于400bp 时,需再加入1 个凝胶体积的异丙醇。

最新切胶回收的步骤

精品好文档,推荐学习交流 切胶回收的步骤 1.琼脂糖凝胶电泳目的基因,紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖,用纸巾吸尽凝胶表面的液体,尽量减少不含目的基因的凝胶量,称重(1mg=1ul) 2.尽量切碎凝胶 3.向离心管中加入3倍体积的NAL溶液,55(视具体胶定)度加热,使凝胶完全融化, 4.按每20ul硅胶树脂结合(树脂使用前要充分混匀)约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂,充分混合,室温放置20min, 5.10000rpm离心1分钟,去上清(上清液暂保存,如回收率不过可重复4) 6.加入800ul清洗液(清洗液加入56ml100%的无水乙醇),振荡混匀后,室温静置10min,10000rpm离心1分钟,去上清 7.重复步骤6,尽量去除上清,完全风干至不残留乙醇味道; 8.加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀,55度水浴20min 9.10000rpm离心1分钟,吸上清为DNA回收液, 重复8,9初一语文讲义 辨析和修改病句的基本方法 辨析并修改病句是语文实际运用能力的具体表现之一,也是中考中长“考”不衰的常青树。本专题主要就是帮助学生了解句子的致病原因,掌握辨析和修改病句的基本方法,提高“诊断和施治”的能力。 “病句的辨析及修改”是近年来各地中考的重点,也是难点。这类题的主要考查方法有客观题和主观题两种。病句的辨析一般以客观选择题出现。这是一种比较传统的考察题型,它面广量大,仅供学习与交流,如有侵权请联系网站删除谢谢1

精品好文档,推荐学习交流 以思维见长,是近年中考中常见的题型,也是学生最易失分的题目,这就要求同学们复习过程中要重视这一类题的复习和训练。 主观题多指修改性的题目,多用于对句子或文段的修改。不仅要求学生们了解这是病句,是什么样的病句,而且要求知道如何修改,难度更大。目前学生对病句尚处于感性认识的阶段,而且这种认识是分散和不完全的,往往还不能自觉地综合应用,这一专题的复习指导是非常必要的。 一、何为“病句” 如果一个句子文不从,字不顺,不合乎语法规范,那它就有语病。通俗地说就是,凡是读起来不通顺,感觉别扭、含混不清的句子都是病句。 二、如何辨析病句 (1)感读——凭语感,凡是读起来别扭,听起来含混的,就可能有语病。 如:她有一个女儿,同许多年轻的妈妈一样,愿意把孩子打扮的漂亮一些。 10. 仅供学习与交流,如有侵权请联系网站删除谢谢2

凝胶回收试剂盒

DNA Gel Extraction Spin Protocol The DNA Gel Extraction Kit employs optimized reagents in combination with a convenient Miniprep column to purify DNA fragments from either TAE or TBE agarose gels (regular and low-melt), and impurities including proteins, other organic compounds, salts, et al. are discarded in the process. DNA fragments in a size range of 70 bp to 10 kb can be efficiently recovered. Depending upon the length of the DNA fragments, the recovery rate is approximately 60-85%. DNA fragments purified by this method are full-length with high biological activity. These fragments are suitable for all routine molecular biology applications, such as ligation, PCR, sequencing, etc. 1.Excise the agarose gel slice containing the DNA fragment of interest with a clean, sharp scalpel under ultraviolet illumination. Transfer the gel slice to an EP tube and weigh. In this application, the weight of gel is regarded as equivalent to the volume. For example, 100 mg of gel is equivalent to a 100 μl volume. 2.Add a 3× sample volume of Gel solubilization buffer (溶胶液). Heat at 50-55°C for 10 min until the gel is completely dissolved, Intermittent vortexing will accelerate gel solubilization. Note: If the solution becomes red (yellow for normal), add 10-30ul NaAc (3M, pH5.2) to adjust the color to yellow. 3.Transfer the solubilized agarose into a Miniprep column. Centrifuge at 12,000xg for 1 minute. Discard the filtrate. 4.Add 700 μl washing buffer. Centrifuge at 12,000xg for 1 min. Discard the filtrate. Note: Make sure that 100% ethanol has been added into washing buffer concentrate. Make a notation on the bottle label for future reference. 5.Add 500 μl washing buffer. Centrifuge at 12,000xg for 1 min. Discard the filtrate. 6.Place the Miniprep column back into the 2 ml microfuge tube. Centrifuge at 12,000xg for 2 minute. 7.Transfer the Miniprep column into a clean 1.5 ml microfuge tube, evaporate the ethanol for several minutes at room temperature. 8.To elute the DNA, add 30 μl of Eluent(洗脱缓存液) to the center of the membrane. Let it stand for 3 minute at room temperature. Centrifuge at 12,000xg for 2 minute. Note: Pre-warming the Eluent at 65°C will generally improve elution efficiency. Note: Deionized water can also be used to elute the DNA fragments. 9. Store the DNA at -20°C。

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