流式细胞仪技术参数
一、流式细胞仪技术参数
1 工作条件：
1.1 电源要求: 220V (±10%)、50-60HZ
1.2 环境温度:16-30℃
1.3 湿度：20-80%
2 用途：免疫分析、淋巴细胞亚群分析；细胞周期分析、凋亡分析；感染分析、肿瘤细胞分析；多重细胞因子分析等。
3 技术规格和参数
3.1 激发系统：
3.1.1 激发光源：405nm紫色固态激光器、488nm蓝色固态激光器和640nm红色固态激光器，固定光路，空间立体激发。
3.1.2 激光塑形：自动的多棱镜塑形系统，光斑大小：9x65um椭圆形光斑
3.1.3 流动室规格：180x430μm
3.2 荧光收集和检测
3.2.1 光胶耦合物镜，数值孔径1.2，大面积收集发射荧光。
3.2.2 每一激发激光对应一个独立检测单元，光胶耦合物镜自动分开汇集每一激光激发的发射荧光进入相对应检测单元，避免光谱交叉。
*3.2.3 配备1个独立八角型全反射检测系统、2个独立三角型全反射检测系统
3.2.4 光学检测系统内部采用全反射检测光路系统，荧光信号到达检测器只经过一个长通滤光片，信号能量损失最小。
3.2.5 检测系统依次优先检测易衰减的长波长信号，保证弱信号灵敏度。
*3.2.6 共计12个信号检测器，包括10个光电倍增和和2个散射光探测器。
3.2.7 荧光通道组合：405nm紫色激光器对应3个检测通道，滤光片包括450/50nm、 525/50nm、 605/40 nm；488nm蓝色激光器对应4个检测通道滤光片包括530/30nm、 575/25nm、695/40nm、780/60 nm； 640nm 红色激光器对应3个检测通道，检测滤光片包括：670/30nm、712/21nm、780/60 nm。通道之间最低光谱交叉，滤光片带有智能芯片，直接插拔，自动识别。
*3.2.8 荧光检测灵敏: FITC<100MESF，PE<50MESF(提供英文原版参数)；CFDA检测结果FITC<5MESF，PE<5MESF（提供检测报告）。
*3.3 样本分析速率：>32,000个细胞/秒(提供英文原版参数)。
3.4 变异系数：全峰宽CV<3%
*3.5 采用正压上样系统，非注射泵或蠕动泵。样本残留量<0.2%。
3.6 最小样本量：≤30ul
3.7 检测颗粒大小：0.5-50μm
3.8 数字信号处理：18bit动态范围，符合IEEE 32bit浮点分辨率。3.9 脉冲处理系统:能同时分析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度,可区分多倍体细胞、粘连细胞。
3.10 可溶性蛋白分析：具备多重可溶性蛋白分析功能，包括：细胞因子、炎症因子、趋化因子等；可达单管数十重分析，包括：多重定量及动力学分析。
*3.11 液流车：独立液流车，避免振动影响仪器主机光路和液流；自动控制所有压力、鞘液、清洗液等，大体积液体储备保证长时间、稳定工作；鞘液桶20L，废液桶10L，清洗液桶5L，关机液桶5L。开关机自动清洗液路，正常状态鞘液消耗<1.10 L/h，待机状态鞘液消耗<1 mL/h。
3.12 配置淋巴细胞亚群自动分析软件，无需手动设置，实现淋巴细胞亚群分型的全自动化。
3.13 主软件：Windows系统，原版专业化流式数据收集及处理软件, 可按用户需求设置条件进行数据分析和报告。
3.14 临床自动软件：标配临床自动软件，拥有具CFDA认证的4色及6色配套试剂，可自动完成4色或6色TBNK免疫分型和绝对计数、以及HLA-B27的自动检测，无需人员干预，并确保实验结果准确无误。
3.15 计算机：工作电脑1套：原配，DVD刻录光驱，21吋液晶显示器，激光彩色打印机。
3.16 净化电源：≥3KVA净化电源（220±5V，50-60GHz）
3.17 获得国家食品药品监督管理局的CFDA认证和美国FDA认证
4配置
4.1 三激光十色流式细胞仪主机：1套。
4.2 数据获取分析软件、淋巴细胞亚群自动分析软件：1套。
4.3 数据获取与处理系统：1套。
4.4 3千瓦净化稳压电源：1套。
4.5 5L清洗液：1桶。
4.6 5L关机液：1桶。
4.7 20L鞘液：1桶。
5安装调试及技术培训
5.1 合同签定后，卖方派有经验的技术人员无偿到买方现场进行场地等指导。
5.2 设备到货后，卖方按买方通知时间派有经验的技术人员到买方单位进行设备的安装、调试和试运行，直至设备正常运行。
5.3 卖方免费负责对买方操作人员进行现场技术培训。
6 技术资料
6.1使用说明书，包括操作手册、软件手册等一套。
6.2附件、备用件的使用资料一套。
6.3 上述资料，如果有中文版本就提供中文版本，没有中文版本提供英文版本
7 质量保证
7.1 质量保证期
质量保证期为验收合格后1年。
7.2 质量保证期结束后，卖方有责任对买方的设备提供良好的维保服务，并在投标文件中说明指定维保代理人的情况。
7.3售后服务要求
7.3.1 设备安装、调试、验收合格并做完设备全部功能项测试合格后，方可进入质量保证期。质量保证期内免费维修。质量保证期后提供终身优惠维修。
7.3.2 质量保证期内的服务：在质量保证期内卖方提供4次保养服务，在国家法定工作日内开机使用合格率应达到95％以上，如果不能达到，按1:2加倍延长质量保证期内。卖方在接到买方维修电话后的24小时内到达用户现场维修或更换已损坏的零部件直至设备运转正常。
7.3.3 质量保证期内的服务：卖方在接到买方维修电话后的24小时内到达用户现场维修或更换已损坏的零部件直至设备运转正常。
7.3.4 卖方应在投标文件中声明终身售后服务承诺、售后服务的方式和能力。
7.3.5 卖方应在投标文件中声明北京地区或其他地区有技术服务及有经验的技术人员，有备件库，能够提供技术支持和培训。
8 包装和运输
卖方负责设备的包装，包装箱必须坚固，并做到防潮、密封，防水、防火、防锈和防震，同时要配齐必要的支架，便于以后的使用，并防止因运输而发生损坏，适于海、陆、空运输和整体吊装。包装材料必须符合中国进口动植物检验检疫的有关规定。
二、原位杂交仪
技术参数：
1、每次可做12张切片，可储存40个程序
2、变性温度：50℃－99℃，0－30分钟
3、杂交温度：30℃－70℃，0－99小时
4、设定温度：30℃－99℃，0－99小时
5、加热时间：37℃－95℃，2分钟
6、冷却时间：95℃－45℃，5分钟
7、程序选择：变性与杂交；杂交；调节温度
8、杂交与变性可同时进行
9、操作简便，按键设置温度和时间，程序设置可保存
10、适用于荧光原位杂交（FISH）、原位杂交（ISH）和显色原位杂交（CISH）
三、核酸提取仪
1、主要用途：
1.1从多来源样本中全自动纯化基因组DNA
1.2从多来源样本中全自动纯化病毒总核酸及细菌DNA
1.3 从多来源样本中全自动纯化总RNA（包含miRNA）
1.4从动物样本中自动化提取病原微生物核酸
1.5 从粪便样本中自动化提取病原微生物核酸
2、工件条件: 温度：10-32℃，湿度：40-70%，电压：220-240V；
3、技术指标：
3.1纯化原理：基于硅胶膜真空抽滤法，并提供仪器原厂生产的硅胶膜纯化试剂盒
*3.2 样品通量和运行时间：一次运行不少于96个样本。纯化96个样本，用时1.5小时
*3.3 封闭式工作平台，配备原厂仪器外罩，配备原厂HEPA滤膜和UV 紫外消毒装置，保护样品，避免交叉污染
3.4 移液通道数：大于等于8道，仅纯化8个样本时，无耗材浪费。3.5活性炭滤器装置净化废气，保护操作人员安全；
*3.6机内提取过程中或者不需要使用枪头，如需使用枪头，用过的吸头被弃置于工作平台外部，保证工作环境中没有废弃物的堆积，避免交叉
污染
3.7吸头可回放，重复使用
3.8仪器外罩打开时，纯化程序自动暂停，保护操作人员安全，再次关闭时继续原程序
3.9每纯化96个样本只需吸头1.5盒
3.10软件使用简易方便，用户可自行改编、优化运行程序
3.11数据可追溯性：可读取样本条形码信息，生成运行前/后报告
3.12电脑控制，可以编程，一个试剂盒针对不同应用有不同程序，可升级，可更新。
3.13原厂提供专门针对粪便中病原微生物核酸提取的试剂盒
3.14原厂提供专门针对多种动物来源病原体提取的试剂盒
#3.15 提取过程中的废液排出在工作台面以外。
4、基本配置：
4.1 主机一台
4.2 真空泵系统一套
4.3 电脑一台（要求配置高于等于8G内存，1t硬盘容量，处理器：Intel i7，独立显卡2G显存）
4.4 核酸提取试剂耗材480份
5、技术资料
详细的英文操作指南
6、技术服务和培训
卖方须到买方提供的现场免费安装、调试设备，进行操作试验，直至运行正常，为仪器操作人员提供免费的操作及维护培训
7、质量保证
测试验收合格后1年
8、需提供制造厂商或总代理商针对本项目的授权书以及售后服务承诺书（须针对本项目开具）。
四、生物安全柜质量检测仪（碘化钾法）
该测试设备适用于生物安全柜国际标准EN12469:2000及国家医药行业标准YY0569-2005中对生物安全柜的测试规程，用于Ⅰ类和Ⅱ类微生物安全柜防护参数的测试。该测试设备用来评价其防护水平和空间内的交叉污染，用来测试空间内有害物质的泄漏，以确保环境的安全。1. 气溶胶发生系统
1.1 喷嘴真空压力2000Pa；
1.2 工作流量9min达20mL；
1.3 雾化转盘转速28000RPM；
1.4 喷嘴与转盘间距0.1mm；
1.5 KI溶液为15g/L的乙醇溶液，500mL/瓶
2. 采样系统
2.1 采样器采样流量100L/min；
2.2 滤膜孔径0.3μm，直径25mm；
2.3. 干燥用滤纸；
3. 显色计数系统；
3.1 55mm培养皿；
3.2 10倍放大镜；
3.3 1.0g/L的PaCl 0.1mol/L的盐酸溶液，500mL/瓶。
3.4 模拟手臂为63mm直径金属圆桶，模拟操作安全柜的操作者手臂。
3.5 支架，定位气溶胶发生器、采样器和模拟手臂。
3.6 为保障售后服务，国内计量系统用户不少于15家提供合同复印件。
3.7 由国内总代理商提供现场技术培训。
4、需提供制造厂商或总代理商针对本项目的授权书以及售后
五、高精度激光波长计
*1.波长范围：1-5um
2.被测激光类型：连续激光或者准连续激光（重频＞10MHz）
*3.绝对精度：± 0.2 ppm ± 0.0002 nm @ 1000 nm
± 0.002 cm-1 @ 10,000 cm-1
± 60 MHz @ 300,000 GHz
*4. 重复性：± 0.06 ppm (± 0.2 pm @ 3 μm)
*5.内置校准源：内置稳频HeNe激光器，无需返回原厂校准
6.显示位数：9位
7.显示单位：nm, μm, cm-1, GHz, THz
*8.最小输入功率：550 μW @1 μm 80 μW @3 μm) 750 μW @5 μm
9.输入方式：准直光输入
10.预热时间：小于15分钟
提供针对本项目的原厂商或总代理商授权及售后服务承诺书，加盖厂商或总代理商公章彩页。
六、电子万能材料试验机
主要参数及技术指标：
1.主机
1.1机架型式：双立柱台式(带预应力的单立柱滚珠丝杠和导杠结构) 1,2载荷能力：5kN
1.3试验速度：0.01－1000mm／min
1.4返回速度：1200 mm／min
1.5位置测量精度：+/-0.02mm
*1.6位置控制分辨率：≥0.06um
1.6速度控制精度：设定速度的+/-0.2％
*1.7载荷测量精度：从测力计满程至1/200量程，精度为+/-0.5％。1.8应变测量精度：从引伸计满程至1/50量程，精度为+/-0.5％。1.9横梁行程：≥1122mm
1.10试验空间：高）1193mm，宽）420mm
2.控制测量系统：
*2.1电气控制：试验机采用先进的32位全数字化控制。控制系统采用数字信号处理器（DSP）技术。
*2.2数据采集速率：计算机同步数据采集速率应≥500Hz。（即数字信号处理器(DSP)输出给计算机的4个通道有效数据, 为每个通道≥500Hz）2.3数据显示：4个实时显示通道。（位移、载荷、应变、时间）
2.5试验控制方式：速度控制、载荷控制、应变控制和应力控制。
*2.6载荷和应变测量：
1) 采用19位模/数转换器, 分辨率为1/500000(50万分之一)
2) 测力计和引伸计的自动识别。
3) 测力计和引伸计的自动标定和自动平衡。
*2.7 试验机接口采用以太网接口，能够有效克服接口松动及USB口供电电压不足引起的通讯故障，保障试验过程中试验机的可靠性。
*3.试验软件：
3.1系统应采用最新版次的WINDOWS7中文界面, 可选用简体中文、英文等8种操作语言，在试验中可任意选择, 软件的试验方法应符合ASTM、ISO、GB等标准。并能进行材料的拉伸、压缩、弯曲、剥离等性能试验。
3.2软件具有试验数据存储、检索和再分析等功能。
3.3试验报告可选择 PDF格式。在屏幕上试验结果的数据和图形可直接粘贴到MS word 和 MS Excel文档上. 原始试验数据可直接存入MS Excel
3.4软件具有拉伸、弯曲、压缩、模量、极值、平均值、标准偏差计算等功能。
*3.5软件应有各种试验方法的html格式中英文解释, 以便用户了解各种试验方法的定义和计算公式。
4.附件
4.1 1KN传感器一套
150％的过载保护。温度补赏0到50度。
*4.2 1kN气动拉伸夹具一套
双面平推气动夹具，配置脚踏开关进行夹持控制。
配置25mm×25mm平面夹面一套，采用磁力吸附方式装配夹面，更换方便。
4.3 空压机一套
技术参数:流量:20L/分,压力:0.6-0.8兆帕,电压:220V
4.4 电脑
CPU I7/8G RAM/1t硬盘/ DVD+/-RW /独立显卡2g显存/23宽屏显示器/W7中文专业系统（32位）
*5.制造商资质
5.1制造商需有校准资质，不需要借助第三方即能够独立出具国际认可的计量校准证书，如符合ISO17025或能够符合CNAS认证要求。提供相
关证书文件，以证明制造商能够在试验机使用年限内，始终具有保证试验机初始精度的能力。
5.2相关配置附件均应够在制造商中英文官方网站直接查询，并有相关技术说明。
5.3 制造商应提供中华人民共和国计量器具型式批准证书，以确保所提供产品符合国家相关法律法规规定。
流式细胞仪检测技术与质量控制
流式细胞仪检测技术与质量 控制 -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
流式细胞仪检测技术与质量控制 【摘要】流式细胞术（FCM）检测HLA等位基因是最近新建立的方法，与原有的分型技术相比，技术上有很大的改进和突破。流式细胞术已广泛用于临床常规检验中，为保证检验结果的可靠性，提高准确度和室间结果的可比性，流式细胞术质量控制越来越受到重视。它在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选，同传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精密度高、准确性好等特点。 【关键词】流式细胞术；检测技术；质量控制 流式细胞仪检验技术（FCM），即流式细胞术，是以流式细胞仪作为检测手段，以免疫荧光技术作为主要标记方法的一门先进的分析技术。该方法用免疫磁珠作为载体，在同一微孔内进行反应，利用流式细胞仪检测杂交信号和区分探针的种类。本技术使用的免疫磁珠具有一定的特性，磁珠可利用颜色进行标识[1]。当免疫磁珠上两种颜色混合的比例不同时，经流式细胞仪检测后即可区分定义为不同种类的免疫磁珠，目前两种颜色的组合在流式细胞仪上最多可区分成为100种不同的免疫磁珠。
1 材料与方法 1.1 标本收集 收集近3年本院治疗的30例患者，对30例患者行流式细胞仪检测，30例受检者中，男性患者16例，女性患者14例，最大年龄60岁，最小年龄17岁，患者平均年龄39岁。 2 检测方法 2.1 采用特定的免疫磁珠作为载体，将已知序列特异性探针（SSO）固定在免疫磁珠上，每一种特异性探针固定在已知颜色比例的免疫磁珠上。由于免疫磁珠上颜色比例的不同，在流式细胞仪红色激光束下可进行区分，根据事先设计的标记情况，通过流式细胞仪检测后可确认特定颜色比例免疫磁珠上携带的特异性探针的种类，从而达到将探针区分的目的。 2.2利用标记的特异性引物对目的DNA进行扩增，将PCR扩增产物与免疫磁珠上的序列特异性探针（SSO）在同一孔内进行特异性杂交，再加入荧光显色剂，然后利用流式细胞仪绿色激光束检测杂交信号，红色激光束区分探针的种类，利用软件分析杂交结果得出样本HLA基因型别。 3 方法学评价该方法与PCR-SSO有相似的地方，但是技术上有重大的突破。本方法灵敏度非常高，在
流式细胞仪的应用
流式细胞仪的应用
流式细胞仪的应用 姓名：学号：2002015002 单位：研究生二队专业：病理学与病理生理学对于一个毕业以后就从来没有进过实验室使用过各种尖端仪器的研究生来说，仪器分析这个课程对我来说显而易见是重要而又陌 生的，就像一个小孩到了游乐园一样，每一种仪器都很吸引我，好奇 心也驱使我特别想尽快操作一下这些仪器，唯一的遗憾是本课程课时 太少，不能把中心实验室的所有仪器都了解一遍。12月4号学习了 流式细胞仪的原理与基本应用方法，虽然没有操作过，但是我想对我 在本次课上的所学的内容做一下总结并谈谈对流式细胞仪的粗浅认 识，由于没有实际基础，不对的地方请老师多多谅解并纠正。 流式细胞仪（Flow cytometry）是对细胞进行分选和快速测的仪器。它可以将分散在液体中的各个细胞的物理性质，生物化 学特征等参数进行快速测量并根据所得参数范围对目的细胞进行分 选并存贮。这些参数可以包括每一个细胞的体积、细胞凋亡及所包含 的可标记的蛋白质或者核酸的快速定量等。与传统的细胞测量方法 （免疫荧光和免疫印迹）相比，其优缺点可总结如下表： 流式细胞仪免疫荧光免疫印迹 优点1、明确阳性细胞比 例 2、同时检测多种蛋 白表达 3、蛋白定量容易 4、速度快，灵敏度 高 5、阳性细胞的 相对数量 6、明确组织和细 胞内定为 1、检测整体 表达情况 2、蛋白定量 较容易 缺点不能在组织和细胞 内定位1、蛋白定量困难 2、仅检测局部表 达情况 1、不能组织或细 胞内定位 2、不能确定阳性 细胞比例
由上表可以看出，与传统的细胞检测方法相比，流式细胞仪具有无可比拟的技术优势和应用前景，甚至可以说流失细胞术完全能够推动医学科研的发展，是一个伟大的发明。 流式细胞仪的原理：将待测的细胞样品制作成单个细胞的混悬液，根据实验目的对需要检测和分选的细胞进行特异性荧光染色并放入样品管，在清洁气体的压力下进入流动室。流动室内含有鞘液，鞘液可以约束样品使之处在喷嘴中心以提高测量精度，并防止样品靠近喷孔壁以导致堵塞。在这种作用下细胞排成单列一个一个地在鞘液包裹下被喷嘴喷出形成液体流柱。流柱流经高度聚焦的激光束时被特异染色的细胞被激发而产生特异性荧光，荧光被检测系统检测并转变成电信号进入计算机分析系统而得到细胞的物理、生物特性。流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的：由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当作废液抽吸掉。 通过原理我们也可以很容易的得到流式细胞仪的基本结构和功能： 1、液流系统。流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。 2、激光系统。经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。激光器又以氩离子激光器为普遍。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。
流式细胞仪的原理和用途
流式细胞仪(FloｗCytometｒｙ) 1 流式细胞仪得概念及其发展历史 1。1 流式细胞仪得基本概念流式细胞仪（flｏw cｙtｏnleｔｒy,FＣM)就是对高速直线流动得细胞或生物微粒进行快速定量测定与分析得仪器，主要包括样品得液流技术、细胞得计数与分选技术,计算机对数据得采集与分析技术等。流式细胞仪以流式细胞术为理论基础，就是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学与计算机等学科知识综合运用得结晶。流式细胞术就是一种自动分析与分选细胞或亚细胞得技术。其特点就是:测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量,即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性得多参数测量,且在统计学上有效。 １。2 流式细胞仪得发展简史最早得流式细胞仪雏形诞生于19３４年，Moｌｄavan提出使悬浮得单个血红细胞流过玻璃毛细管,在亮视野下用显微镜进行计数,并用光电记录装置测量得设想。1953年Crosｌand-Tayｌor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。其后又经过Ｃｏulteｒ、Parｋer ＆ Hoｒst、Kａmentsky、Ｇohde、Fulｗyｌeｒ、Herｚｅｎberｇ等人得不断改进,设计了光电检测设备与细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪得物理连接及多参数数据得记录与分析、开创了细胞得免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上得应用。近２0年来,随着流式细胞仪及其检测技术得日臻完善,人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面得工作,以扩大FＣＭ得应用领域与使用效果。 宋平根得《流式细胞术得原理与应用》就是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述得最为详尽与透彻得中文著作.这本书非常详细地介绍了流式细胞术得历史、结构、原理、技术指标等,例举了其在医学与生物工程中得应用,非常适合从事此方面专业研究得人。由于这本书就是13年前出版得，所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术。此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识得人士来说,这本书太复杂太深奥。谢小梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中得应用。杨蕊概括了流式细胞仪得工作原理,简单提及了流式细胞仪得应用。本文在分析这三篇论著或文章得优缺点后，用比较通俗得语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术必须了解得一些原理,并对目前市场上得主流型号进行了客观得性能概括。 2 流式细胞仪得工作原理与技术指标 2。1 流式细胞仪工作原理除电源外，流式细胞仪主要由四部分组成：流动室与液流系统:激光源与光学系统;光电管与检测系统;计算机与分析系统,其中流动室就是仪器得核心部件。这四大部件共同完成了信号得产生、转换与传输得任务. 流动室与液流系统
一、流式细胞仪技术参数
一、流式细胞仪技术参数 1 工作条件： 1.1 电源要求: 220V (±10%)、50-60HZ 1.2 环境温度:16-30℃ 1.3 湿度：20-80% 2 用途：免疫分析、淋巴细胞亚群分析；细胞周期分析、凋亡分析；感染分析、肿瘤细胞分析；多重细胞因子分析等。 3 技术规格和参数 3.1 激发系统： 3.1.1 激发光源：405nm紫色固态激光器、488nm蓝色固态激光器和640nm红色固态激光器，固定光路，空间立体激发。 3.1.2 激光塑形：自动的多棱镜塑形系统，光斑大小：9x65um椭圆形光斑 3.1.3 流动室规格：180x430μm 3.2 荧光收集和检测 3.2.1 光胶耦合物镜，数值孔径1.2，大面积收集发射荧光。 3.2.2 每一激发激光对应一个独立检测单元，光胶耦合物镜自动分开汇集每一激光激发的发射荧光进入相对应检测单元，避免光谱交叉。 *3.2.3 配备1个独立八角型全反射检测系统、2个独立三角型全反射检测系统 3.2.4 光学检测系统内部采用全反射检测光路系统，荧光信号到达检测器只经过一个长通滤光片，信号能量损失最小。 3.2.5 检测系统依次优先检测易衰减的长波长信号，保证弱信号灵敏度。 *3.2.6 共计12个信号检测器，包括10个光电倍增和和2个散射光探测器。 3.2.7 荧光通道组合：405nm紫色激光器对应3个检测通道，滤光片包
括450/50nm、 525/50nm、 605/40 nm；488nm蓝色激光器对应4个检测通道滤光片包括530/30nm、 575/25nm、695/40nm、780/60 nm； 640nm 红色激光器对应3个检测通道，检测滤光片包括：670/30nm、712/21nm、780/60 nm。通道之间最低光谱交叉，滤光片带有智能芯片，直接插拔，自动识别。 *3.2.8 荧光检测灵敏: FITC<100MESF，PE<50MESF(提供英文原版参数)；CFDA检测结果FITC<5MESF，PE<5MESF（提供检测报告）。 *3.3 样本分析速率：>32,000个细胞/秒(提供英文原版参数)。 3.4 变异系数：全峰宽CV<3% *3.5 采用正压上样系统，非注射泵或蠕动泵。样本残留量<0.2%。 3.6 最小样本量：≤30ul 3.7 检测颗粒大小：0.5-50μm 3.8 数字信号处理：18bit动态范围，符合IEEE 32bit浮点分辨率。3.9 脉冲处理系统:能同时分析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度,可区分多倍体细胞、粘连细胞。 3.10 可溶性蛋白分析：具备多重可溶性蛋白分析功能，包括：细胞因子、炎症因子、趋化因子等；可达单管数十重分析，包括：多重定量及动力学分析。 *3.11 液流车：独立液流车，避免振动影响仪器主机光路和液流；自动控制所有压力、鞘液、清洗液等，大体积液体储备保证长时间、稳定工作；鞘液桶20L，废液桶10L，清洗液桶5L，关机液桶5L。开关机自动清洗液路，正常状态鞘液消耗<1.10 L/h，待机状态鞘液消耗<1 mL/h。 3.12 配置淋巴细胞亚群自动分析软件，无需手动设置，实现淋巴细胞亚群分型的全自动化。 3.13 主软件：Windows系统，原版专业化流式数据收集及处理软件, 可按用户需求设置条件进行数据分析和报告。 3.14 临床自动软件：标配临床自动软件，拥有具CFDA认证的4色及6
流式细胞仪的应用
流式细胞仪的应用 姓名：学号：2002015002 单位：研究生二队专业：病理学与病理生理学对于一个毕业以后就从来没有进过实验室使用过各种尖端仪器 的研究生来说，仪器分析这个课程对我来说显而易见是重要而又陌 生的，就像一个小孩到了游乐园一样，每一种仪器都很吸引我，好 奇心也驱使我特别想尽快操作一下这些仪器，唯一的遗憾是本课程 课时太少，不能把中心实验室的所有仪器都了解一遍。12月4号学 习了流式细胞仪的原理与基本应用方法，虽然没有操作过，但是我 想对我在本次课上的所学的内容做一下总结并谈谈对流式细胞仪的 粗浅认识，由于没有实际基础，不对的地方请老师多多谅解并纠正。 流式细胞仪（Flow cytometry）是对细胞进行分选和快速测的仪器。它可以将分散在液体中的各个细胞的物理性质，生物化学特征等参 数进行快速测量并根据所得参数范围对目的细胞进行分选并存贮。 这些参数可以包括每一个细胞的体积、细胞凋亡及所包含的可标记 的蛋白质或者核酸的快速定量等。与传统的细胞测量方法（免疫荧 光和免疫印迹）相比，其优缺点可总结如下表：
由上表可以看出，与传统的细胞检测方法相比，流式细胞仪具 有无可比拟的技术优势和应用前景，甚至可以说流失细胞术完全能 够推动医学科研的发展，是一个伟大的发明。 流式细胞仪的原理：将待测的细胞样品制作成单个细胞的混悬液，根据实验目的对需要检测和分选的细胞进行特异性荧光染色并 放入样品管，在清洁气体的压力下进入流动室。流动室内含有鞘液，鞘液可以约束样品使之处在喷嘴中心以提高测量精度，并防止样品 靠近喷孔壁以导致堵塞。在这种作用下细胞排成单列一个一个地在 鞘液包裹下被喷嘴喷出形成液体流柱。流柱流经高度聚焦的激光束 时被特异染色的细胞被激发而产生特异性荧光，荧光被检测系统检 测并转变成电信号进入计算机分析系统而得到细胞的物理、生物特性。流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的：由喷嘴射出 的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路 判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液 滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当 作废液抽吸掉。 通过原理我们也可以很容易的得到流式细胞仪的基本结构和功能： 1、液流系统。流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光 学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是 液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用 下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周 后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装 有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。
流式细胞仪的原理及应用
山西大学研究生学位课程论文（2013 ---- 2014 学年第一学期） 学院（中心、所）：生物技术研究所 专业名称：微生物学 课程名称： 论文题目：流式细胞仪的原理及其应用 授课教师（职称）：崔晓东 研究生姓名：常姣 年级：研一 学号：201323001003 成绩： 评阅日期： 山西大学研究生学院 年月日
流式细胞仪的原理及其应用 姓名常姣专业微生物学 摘要本文简要论述了流式细胞仪( flowcyt ometry, FCM) 的工作原理, 并对其某些科学领域研究中的应用进行阐述, 包括在生物学、免疫学、临床学中的研究应用。 关键词 FMC；生物学；免疫学；临床学 流式细胞仪( fl o w c y to me tr y, F CM) 研制、发展、革新和应用领域的扩展，都是由生物学、生物技术、计算机科学、电子工程学、流体力学、激光技术、分子生物学、有机化学和物理学等多个学科综合发展和应用而实现的。近代流式细胞仪，由于单克隆抗体技术、定量细胞化学和定量荧光细胞化学的应用，使其在生物学、临床医学等众多研究领域的应用愈来愈广泛和重要，尤其在生物学中对细胞周期的动力学分析、细胞因子、细胞凋亡、信号传导、R N A / D N A 的分析、细胞表面受体及特异性抗原的分析等领域发挥着独特作用，具有操作简单、分析精确、重复性好、费用低廉、分析速度快等优点。 1流式细胞仪的构成及工作原理 流式细胞仪主要由液流系统、光学系统、电子系统、分析系统和细胞分选系统五个部分组成。将待测细胞制成单细胞悬液, 经荧光染料染色后加入样品管, 在一定气体压力下待测样品被压入流动室。待测细胞在鞘液的包裹下单行排列, 依次通过检测区, 被荧光染料染色的细胞受到强烈的激光照射后, 产生散射光和荧光信号。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管(PMT) 接收。散射光分为前向角散射(forwardscatter, FSC) 和侧向角散射(sidescatter, SSC) 。前者主要反映被测细胞的大小, 后者主要反映被测细胞的胞质、胞膜、核膜的折射等, 以及细胞内颗粒的性状。光信号通过波长选择通透性滤片后, 经光电倍增管接收后转为电信号, 再经数/模转换器转换为可被计算机识别的数学信号, 以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来[1,2]。 流式细胞仪还可以对分析中的目的细胞进行分选, 它是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。流动室的喷嘴上安装有超高频的压电晶体, 可以产生高频振荡, 使液流断裂为均匀的液滴, 待测细胞就包含在液滴之中。将这些液滴充上正或负电荷, 当带电液滴通过电场, 便会在电场的作用下发生偏转, 然后落入相应的收集器中, 从而实现细胞分选[2]。 2流式细胞仪的应用 流式细胞术的应用，简单用一句话概括就是，凡能被荧光分子标记的细胞或微粒均能用流式细胞仪检测。其中细胞生物学领域是流式细胞术在基础研究中应用范围最广泛的领域，因为最初这个技术就是为此目的而设计的。 2.1流式细胞仪在生物学中的应用 流式细胞仪在生物学中的应用越来越广泛,如在细胞生物学、细胞遗传学、分子生物学、神经生物学、微生物学、分子免役学、植物学等等许多生物学基础学科的应用和在细胞凋亡、细胞周期调控、细胞因子及细胞分型等研究中的应用[3]。 2.1.1 对凋亡细胞的分析 细胞凋亡是生物体生长发育过程中出现的正常现象, 在生物体形态构成、正常细胞更替以及维持
自己总结：流式细胞仪的原理和用途
流式细胞仪（Flow Cytometry） 1 流式细胞仪的概念及其发展历史 1．1 流式细胞仪的基本概念流式细胞仪（flow cytonletry，FCM）是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器，主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采集和分析技术等。流式细胞仪以流式细胞术为理论基础，是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机等学科知识综合运用的结晶。流式细胞术是一种自动分析和分选细胞或亚细胞的技术。其特点是：测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量，即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性的多参数测量，且在统计学上有效。 1．2 流式细胞仪的发展简史最早的流式细胞仪雏形诞生于1934年，Moldavan提出使悬浮的单个血红细胞流过玻璃毛细管，在亮视野下用显微镜进行计数，并用光电记录装置测量的设想。1953年Crosland-Taylor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。其后又经过Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不断改进，设计了光电检测设备和细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪的物理连接及多参数数据的记录和分析、开创了细胞的免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上的应用。近20年来，随着流式细胞仪及其检测技术的日臻完善，人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面的工作，以扩大FCM的应用领域和使用效果。 宋平根的《流式细胞术的原理和应用》是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述的最为详尽和透彻的中文著作。这本书非常详细地介绍了流式细胞术的历史、结构、原理、技术指标等，例举了其在医学和生物工程中的应用，非常适合从事此方面专业研究的人。由于这本书是13年前出版的，所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术。此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识的人士来说，这本书太复杂太深奥。谢小梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中的应用。杨蕊概括了流式细胞仪的工作原理，简单提及了流式细胞仪的应用。本文在分析这三篇论著或文章的优缺点后，用比较通俗的语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术必须了解的一些原理，并对目前市场上的主流型号进行了客观的性能概括。 2 流式细胞仪的工作原理和技术指标 2．1 流式细胞仪工作原理除电源外，流式细胞仪主要由四部分组成：流动室和液流系统：激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统，其中流动室是仪器的核心部件。这四大部件共同完成了信号的产生、转换和传输的任务。 流动室和液流系统
流式细胞仪临床应用手册
目录 第一部分流式细胞术简介 (1) 第二部分流式项目检测列表 (4) 第三部分流式细胞术在各类疾病中的应用 (7) 第一章感染性疾病 (7) 第二章肿瘤、细胞治疗应用 (9) 第三章血液系统疾病 (14) 第四章器官移植检测 (15) 第五章风湿免疫性疾病 (16) 第六章呼吸系统疾病 (18) 第七章消化系统疾病 (20) 第八章泌尿系统疾病 (21) 第九章心脑血管疾病 (22) 第十章妇产科及儿科相关疾病 (24) 第十一章内分泌患者免疫功能检测 (26) 第十二章皮肤科疾病 (27)
第一部分流式细胞术简介 1 流式细胞术定义 流式细胞仪是集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器，为生物医学与临床检验学发展提供了最强有力的工具。 流式细胞分析技术(flow cytometry，FCM)又称流式细胞术，是20世纪70 年代发展起来的一种快速、准确、客观的检测技术，它能够同时检测快速直线流动状态中的单个细胞或微球的多项物理及生物学特性--在极短的时间内高速分析上万个甚至是几十万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，对其加以定性定量分析，还可以对特定群体加以分选。目前，流式细胞术已经广泛用于临床应用与基础研究，在免疫学、遗传学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等医学与生命科学所有领域内发挥着重要的作用。 2 流式细胞仪工作原理 制备成单细胞悬液的标本或单个微粒在上样前进行荧光染色。流式细胞仪检测到上样管后，产生一定的气体压力将待测样本压入流动池。同时鞘液（不含细胞或微粒的缓冲液）在仪器产生的高压作用下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与样本流形成一定的角度，形成一个圆形的鞘液流，包围着细胞或微粒高速流动，使待测细胞在鞘液的包裹下单行排列，逐个地通过流式细胞仪的激光聚焦区（流动池），从而被检测到，并发出散射光及荧光等多种光学信号。光学信号通过光电信号转换器及电子信号处理系统采集及分析后，最后以图形的形式将数据结果显示在电脑屏幕上。 3 流式细胞仪的主要结构 光学系统，液流系统，信号处理及放大系统，计算机系统。
流式细胞仪分析技术及应用题库1-2-10
流式细胞仪分析技术及应用题库1-2-10
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]关于液流系统的鞘液，下述哪项是不正确的（）. A.鞘液是辅助样本作正常检测的基质液 B.鞘液是用来与样本作对比的 C.鞘液是包裹在样本流周围 D.使样本保持处于喷嘴中心位置，保证检测精确性 E.防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞 鞘液是辅助样本作正常检测的基质液，其主要作用是包裹在样本流周围，使样本保持处于喷嘴中心位置，保证检测精确，同时又防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]分选速度与细胞悬液中分选细胞的下述哪项直接相关（）. A.细胞含量 B.细胞性质 C.细胞大小 D.有否胞膜 E.单核或多核 分选速度与细胞悬液中分选细胞的细胞含量直接相关。一般分析速度为5000～10000；分选速度掌握在1000以下。
问题： [单选,A4型题,A3A4型题]流式细胞术是一种对单细胞或其他生物粒子膜表面以及内部的化学成分，进行定量分析和分选的检测技术，它可以高速分析上万个细胞，并能从一个细胞中测得多个参数，是目前最先进的细胞定量分析技术。流式细胞仪的主要组成不包括（）. A.A.液流系统 B.光路系统 C.抗原抗体系统 D.信号测量 E.细胞分选 (天津11选5 https://www.360docs.net/doc/cc5689487.html,)
问题： [单选,A4型题,A3A4型题]流式细胞术是一种对单细胞或其他生物粒子膜表面以及内部的化学成分，进行定量分析和分选的检测技术，它可以高速分析上万个细胞，并能从一个细胞中测得多个参数，是目前最先进的细胞定量分析技术。流式细胞仪的技术特点不包括（）. A.A.采用鞘流原理 B.以激光作激发光源 C.使用散射光检测 D.检测荧光信号 E.采用电阻抗及化学染色原理
(2020年编辑)流式细胞仪数据分析
流式细胞仪数据分析 5.1 数据采集及显示 光信号转换成电压脉冲后，再通过模数转换器转换成为计算机能够储存处理的数字信号。流式细胞仪的数据以FSC标准格式存储，该标准由“分析细胞学协会”制定。 根据FSC标准，数据存储格式应包括三个文件：样本获取文件，数据设置文件和数据分析结果。4参数（FSC，SSC，FITC和PE）的单细胞分析会生成8位数据。当单个样品累计 收集到10000个细胞时，FCS数据文件为80kB。 数据采集存储完毕后，细胞亚群可以几种不同格式显示。单参数如FSC或FITC（FL1）可使用直方图，横轴表示荧光通道。纵轴表示在该通道内收集到的细胞数量（如图5-1）。 处在同一通道的每一细胞均符合该通道的信号值，而且具有相同的信号密度。通道右侧信号的荧光强度明显高于左侧，越靠右侧荧光亮度越强。图5-1 流式数据分析图双参数可在二维散点图中同时显示，X轴显示通道1（FL1），Y轴显示通道2（FL2）。3维图通过X，Y，Z三个轴分别显示每个通道的细胞量（如图5-1）。 习题：数据采集及显示 1 在直方图中横轴和纵轴分别表示。 2 二维点图用于显示参数。 3 在CellQuest软件中3维图中Z轴代表。
5.2 设门 通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细胞，可根据FSC或细胞大小，在FSC，SSC的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧光特性。图5-2 全血样本中淋巴细胞亚群的数据分析图 习题：设门 1 设门的方法通常用于分析样本内的指定细胞。（对错） 5.3 细胞亚群的数据分析 数据分析包括从点图中的list-mode文件中显示数据,然后统计点图中的细胞分布情况。如前所述，分别有几种形式的点图用于显示数据，而且可通过设门的方法区分指定的细胞亚群。如图5-3所示，在淋巴细胞亚群周围设门，以单独分析或分选该亚群细胞。
流式细胞仪操作流程
查看文章 流式细胞仪-细胞凋亡检测Ⅰ 2008-11-01 10:20 一PI单染色法 基本原理 其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面： 1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。 2. 光散射特性：凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。也可用于活细胞的分类。 试剂与仪器 l PBS溶液（配制方法见附录）； l PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。 l 70%乙醇 l 400目筛网 l 流式细胞仪 实验步骤 1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去
流式细胞仪工作原理与应用范围
流式细胞仪工作原理与应用范围 2008-11-01 10:30 流式细胞仪就是进行流式细胞分析的仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论于一体，是一种非常先进的检测仪器，被誉为试验室的“CT”。 流式细胞术（Flow CytoMeter，FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。 工作原理 将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。 这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。 检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。 细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。 应用范围 可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定，以及免疫学研究，并已开
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤之欧阳家百创编
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤 欧阳家百（2021.03.07） 取对数生长期的A549细胞，按1×106 cells/mL以1mL接种于100mm培养皿内 ↓ 24h后，进行所需的处理（比如加药,照射） ↓ 特定时间后终止培养，进行下一步的实验 ↓ 收集原培养液，洗后的PBS和消化后的细胞，将三者混匀放入 15ml离心管中 ↓ 1000rpm离心5min（短时低速离心） ↓ 弃上清，用1.5ml预冷PBS，1000rpm离心5min后去除PBS和细 胞悬液内的细胞碎片 ↓ 加入1.5ml预冷PBS,在涡旋状态下加入3.5ml无水乙醇，混匀后，于4℃固定30min,或-20℃长期保存。 ↓ 1000r/min,离心5min ↓ 将乙醇吸除，加PBS清洗混匀 ↓ 1000r/min,5min再离心一遍，将残留在细胞上的乙醇除去 ↓
吸除离心管内PBS，加入200ul PBS和2ul的RNA酶 （0.25mg/ml）(37℃下孵育30min) ↓ 加入0.5ml的50ug/ml的PI溶液室温下避光染色30min ↓ 将离心管内的细胞过滤(300um尼龙网膜)至含有PBS的EP管中（PI具有很强的粘附性，容易使细胞聚团），标记EP管 ↓ 提前一天网上预约 ↓ 开机（先开仪器后开软件） ↓ 流式细胞仪的结构一般分为5部分：①流动室及液流驱动系统； ②激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测、存贮、显示、分析系统；⑤细胞分选系统。 ↓ 检测前先涡旋使细胞混匀悬浮呈单个细胞，然后插入流式细胞仪上 ↓ 流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱 ↓ 液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光（488nm 激发光源） ↓ 荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析（荧光染料和细胞
流式细胞仪分析技术及应用
第二十二章流式细胞仪分析技术及应用 本章要点 1.流式细胞仪的分析及分选原理 2.数据的显示与分析 3.流式细胞仪免疫分析的技术要求 4.流式细胞术在免疫学检查中的应用 概述：流式细胞术（FCM）是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确地对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。流式细胞仪的发展综合了激光技术、计算机技术、显微荧光光度测定技术、流体喷射技术、分子生物学和免疫学等多门学科的知识。流式细胞仪：是集光电子物理，光电测量，计算机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。 第一节流式细胞仪的分析及分选原理 流式细胞计的基本结构流式细胞计主要由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。 一、工作原理 （一）基本组成结构 1.流动室和液流系统：流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度<10m／s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。
2.激光源和光学系统：经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。常用的光源有弧光灯和激光；激光器又以氩离子激光器为普遍，也有配合氪离子激光器或染料激光器。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。氩离子激光器的发射光谱中，绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强，约占总光强的80%；氪离子激光器光谱多集中在可见光部分，以647nm较强。免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上，可使用染料激光器。将有机染料做为激光器泵浦的一种成份，可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine 6G 水溶液的染料激光器，则可得到550～650nm连续可调的激光，尤在590nm处转换效率最高，约可占到一半。为使细胞得到均匀照射，并提高分辨率，照射到细胞上的激光光斑直径应和细胞直径相近。因此需将激光光束经透镜会聚。色散棱镜用来选择激光的波长，调整反射镜的角度使调谐到所需要的波长λ，为了进一步使检测的发射荧光更强，并提高荧光讯号的信噪比，在光路中还使用了多种滤片。带阻或带通滤片是有选择性地使某一滤长区段的光线滤除或通过。例如使用525nm带通滤片只允许FITC（异硫氰荧光素）发射的525nm绿光通过。长波通过二向色性反射镜只允许某一波长以上的光线通过而将此波长以下的另一特定波长的光线反射。在免疫分析中常要同时探测两种以上的波长的荧光信号，就采用二向色性反射镜，或二向色性分光器，来有效地将各种荧光分开。
如何看流式细胞术结果中的图
如何看流式细胞术结果中的图 FCM数据的存贮的方式是FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排队(List Mode)方式。易于加工处理分析，但缺乏直观性，数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种；由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。 Q1：坐标轴的意义？ 1、单参数直方图 每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布，以直方图的方式来显示。在图中，横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，其单位是道数（channel），可以是线形（line）或者对数（log）。纵坐标一般是相对细胞/粒子数（count）！
2、二维图 在二维图的中，横坐标/纵坐标都表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，可以是线形（line）或者对数（log）。双参数图可以将样品细胞群分开，从而方便对感兴趣的细胞进行分析。
Q2：“Gate”和“Regin”？ ?设门是流式细胞分析中一种重要的技术，只有通过最佳的设门方式，才能准确地获取和分析数据，从而得到临床诊断和科研中有价值的信息。 ?On-line gating(threshold gating)监测/获取数据 ?Off-line gating：分析实验数据散射光设门/荧光设 门散射光/荧光联合设门多重逻辑门(组合门) 多重逻辑门G3=R1 and R2 (G3=R1×R2) 其它： G=R1 or R2 G=R1 not R2
Q3:流式图中的颜色与荧光颜色? 流式图中的颜色为区分不同细胞群而人为指定, 与荧光颜色无关!! Q4：流式图中的阴/阳（N/P）如何划分? 如何做M1阴性界限？实际上，这个M1的划分完全是根据阴性(同型)对照来的！如下图：左图为同型对照，即：您所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。右图即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。 Q5: 这么巧，阴性正好在101划分？？
成像流式细胞仪原理及应用
二代流式技术产品-成像流式细胞分析 邱又彬 Merck&Millipore旗下品牌Amnis于近期推出了新一代高速细胞成像系统ImageStreamX Mark II。这是第三代ImageStream成像流式细胞仪，具有无与伦比的细胞分析能力。 显微镜可提供详细的细胞图像和形态信息，是研究细胞功能的重要工具。然而，显微图像的解释却是主观、定性且费力的。流式细胞仪擅长定量的表型分析，可产生统计学上可靠的结果，不过，流式细胞仪却缺乏成像能力，因此无法了解亚细胞定位。 ImageStream系列开创性地将流式细胞检测与荧光显微成像结合于一体，既能提供细胞群的统计数据，又可以获得单个细胞的图像，从而提供了细胞形态学、细胞结构和亚细胞信号分布的完整信息。 ImageStreamX Mark II能实时捕获每个流动细胞最多12幅高分辨率图像，检测速率可达5000细胞/秒，并具有更强荧光灵敏度。ImageStreamX Mark II的这些功能可以对细胞形态、荧光探针的强度和定位进行检测，进而为科学家提供广泛的图像分析应用，包括细胞间相互作用、吞噬、凋亡和自噬、核易位、形态变化等。 ImageStreamX Mark II的特征如下： ?速度更快：Mark II对进样速度进行了提升，每秒可以分析多达5000个细胞，简单易用的补偿向导可以指导您轻松完成多色补偿运算。 ?操作更简单：全新而直观的用户界面提供了每一个细胞的图像及实时绘图相关的图形化控件。 ?样品适应性更强：Mark II可选配7个激光；样品容量20-200 μl，增加了实验的灵活性，适用于多用户实验室。 ?样品利用率更高：Mark II将样品利用率提高到了95%，更适用于稀有的细胞样品，而且未使用的样品也可回收用于进一步分析。 从2005年开始，Amnis量化成像流式分析仪被广泛应用于各个研究领域。其中超过300篇的文章发表在高水平的同行评议杂志（peer-reviewed journal）上。这些研究领域包括生物化学、药物研发、血液、免疫、微生物、海洋、肿瘤、寄生虫、干细胞、毒理、病毒等等。并且由于Amnis与众不同的实验理念和卓越性能，使得这个名单不断变长。 1.生物化学： 经典的生物化学技术主要用于分子定位和共定位检测，这非常适合使用Amnis量化成像流式分析系统，比如转录因子从细胞质到细胞核的转位、分子在亚细胞器间的运输、蛋白质在细胞内和细胞间的共定位。它可以获取复杂样品每个细胞中探针定位和共定位的统计学结果，这对于传统生物化学研
流式细胞仪数据分析
1.1电源要求:220V (±10%)、50HZ（±10%） 1.2环境温度:5-35℃ 1.3在相应湿度10-80%的环镜下工作 2. 设备用途： 细胞分析和分选功能 2.1分析功能： 2.1.1细胞周期测定，DNA含量分析，RNA测量与分析 2.1.2细胞凋亡检测， 2.1.3蛋白质总量测定， 2.1.4生物活性的测定， 2.1.5细胞內钙离子流动试验，Ca2+浓度测定，细胞内pH值测量， 2.1.6细胞內Oxidative Burst代谢产物，细胞表面电荷检测。 2.1.7抗原特异性免疫细胞的检测、分选和细胞治疗技术 2.1.8检测细胞因子，可溶性荧光蛋白等 *2.2细胞分选 流式一体化分选功能，采用捕获管技术，分选速度300个细胞/秒，分选纯度98% 3. 技术规格： 3.1主机系统 *3.1.1流式细胞仪主机系统：含15mw 488nm氩离子蓝色激光器，635nm红色激光器，4个荧光探测器和2个散射光探测器 *3.1.2光路: 双激光立体空间激发方式实现四色荧光分析：488nm激光器激发的三色荧光,635nm激光器激发第四色荧光.采用测向光路设计 *3.1.3滤光片：488nm激光的荧光通道包括530/30nm、585/42nm、670nm LP；635nm激光的荧光通道：661nmLP *3.1.4可选用荧光：FITC, PE, PerCP,PI, PE-Cy5, PerCP-Cy5.5, PE-Cy，APC, Rhodamine, Cyanine等 *3.1.5必须配流式一体化分选系统 3.1.6光电倍增管:光谱检测范围300nm-1100nm 电压150V-990V 3.1.7荧光检测灵敏度:<100MESF 3.1.8全峰宽变异系数:CV<2% 3.1.9样本获取速度:>10，000个细胞/秒 3.1.10检测颗粒大小: 0.1um(min)-50um（max） 3.1.11最少样本体积：100μl 3.1.12流动室孔径：430um X 180um 3.1.13自动抽吸系统: 换样时自动吸去管道内剩余样本，避免样本之间的相互干扰 *3.1.14脉冲处理系统:能同时分析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度,用脉冲宽度和面积区分双连体细胞（如假四倍体细胞） 3.2 数据处理系统 苹果MAC Pro 工作站 3.2.1 CPU: 双核，主频2.8G 3.2.2 内存：2G 3.2.3 硬盘：容量300G
流式细胞仪分析技术及应用题库1-0-6
流式细胞仪分析技术及应用题库1-0-6
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]多参数定量测定和分选的技术称（）. A.荧光免疫分析 B.酶联免疫分析 C.流式细胞免疫分析 D.化学发光免疫分析 E.放射免疫分析 本题考查对流式细胞术的认识。流式细胞术是综合光学、流体力学、电子计算机技术，利用荧光素产生荧光的特点，对单个细胞进行多参数定量测定和分选的技术。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]流式细胞仪的主要组成部分不包括（）. A.流动室和液流系统 B.温育和比色系统 C.激光源和光学系统 D.光电管和检测系统 E.计算机和分析系统 流式细胞仪主要由4部分组成：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。
天津11选5 https://www.360docs.net/doc/cc5689487.html, 问题： [单选,A2型题,A1A2型题]关于液流系统的鞘液，下述哪项是不正确的（）. A.鞘液是辅助样本作正常检测的基质液 B.鞘液是用来与样本作对比的 C.鞘液是包裹在样本流周围 D.使样本保持处于喷嘴中心位置，保证检测精确性 E.防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞 鞘液是辅助样本作正常检测的基质液，其主要作用是包裹在样本流周围，使样本保持处于喷嘴中心位置，保证检测精确，同时又防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]分选速度与细胞悬液中分选细胞的下述哪项直接相关（）. A.细胞含量 B.细胞性质 C.细胞大小 D.有否胞膜 E.单核或多核 分选速度与细胞悬液中分选细胞的细胞含量直接相关。一般分析速度为5000～10000；分选速度掌握在1000以下。