OlympusFV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册

Olympus FV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册

一、开关机步骤

1、开机步骤

1）打开计算机

2）打开汞灯电源开关

3）打开显微镜开关

4）打开载物台控制器开关

5）打开显微镜触屏面板开关

6）打开扫描头开关（先开开关键，然后将钥匙顺时针拧

到on位置）

7）打开激光器

①405nm，633nm：打开开关键即可

②559nm：先开开关键，绿色指示灯闪烁（约两分钟），

停止闪烁后将钥匙顺时针拧到on位置（红灯闪烁，停止

闪烁后即开启完成）

③多线氩离子（458nm，488nm，514nm）：先开开关键，

然后将钥匙顺时针拧到on位置

8）双击电脑桌面上打开 FV10-ASW 4.0应用软件。

2、关机步骤

1）关闭FV10-ASW 4.0应用软件

2）关闭激光器（注意: 多线氩离子458nm，488nm，514nm

需先关钥匙，等风机散热20分钟后再关闭开关键）

3）关闭扫描头（先将钥匙拧到off位置，再关开关键）

4）关闭显微镜触屏面板

5）关闭载物台控制器

6）关显微镜开关

7）关汞灯，先关前面off按钮，倒计时30s，再关后方

开关键

8）关计算机

二、显微镜观察

1、用触屏面板选择物镜；

2、点击触屏面板EPI，选择需要的荧光滤片，如下图：

紫外激发/蓝色光

蓝色激发/绿色荧光

绿色激发/红色荧光）

打开，显微镜目镜下观察样品，推动载物台控制手柄可水平方向移动样品，转动调焦旋钮可调节焦距；

三、获图

XY多通道扫描

1、镜下调好之后，点击软件中的按钮，关闭汞灯快门。

2、首先进行软件设置：

在Acquisition Setting里将扫描速度设置为

8us/Pixel，像素数一般设置为1024*1024。

在Image Acquisition Control里点击Dye List按

钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料（注：再次

双击已选项目可取消），然后点击Apply按钮。

3、将Image Acquisition Control面板中Filter Mode里

Kalman 打钩选中，设置线平均Line 2次，这样可以降低

图像的噪声。（见下图）

4、对于多通道扫描，将Image Acquisition Control里

Sequential打钩，并选择面序列( Frame)方式,并将下方的激光通道按波长从大到小排序。

5、点击Focus x2按钮开始扫描，在选中的Channel里可先调

节探测器的灵敏度（HV），一般控制在800V以内，然后调节Laser功率的百分比以调节激发光强度，过程中可微调焦距以获得更清晰的图像，如果图像的背景值略高，可调节Offset的数值去背景（控制在10%以内），点击Stop 按钮停止扫描。

6、每个通道都调好之后，勾选上全部通道，点击XY按钮获得

一幅图像。

7、在拍完生成的2D-View Image文件里，点击左边工具栏

图标添加标尺。

XYZ多层扫描

1、获取多层图像需要将Image Acquisition Control里

Depth点上。

2、在预览时调节调焦旋钮，图像显示到达上限和下限时分

别在Microscope面板里点Set Start & End 设置多

层扫描的范围。设置好之后输入Step Size大小（点

击Op.按钮可以使用推荐的数值）并在Step Size前

打钩。

3、点击XYZ按钮获得图像。扫描结束点击XYZ下方Series

Done按钮成图。点击图像上方图标并

选择图标进行3D图像的最大

化叠加，鼠标右击此图，选择Save Display可直接保

存此图。

XYT扫描

时间序列扫描可根据Acquisition Setting里每个Frame的时间

Frame

设置Timescan的参数，两次拍摄的时间间隔Interval要大于所有拍摄通道Frame时间之和，拍摄的总次数Num可以根据拍摄时长计算。设置好扫描时间间隔和扫描的次数

后，点击进行拍摄。拍摄结束点Series Done按钮成图。

四、图像的保存和导出

1、保存原始文件：点击主菜单File 下save as 存到选中的

文件夹下（“Oib”类型是FV10-ASW软件专用图像格式）

2、导出TIFF文件：点击主菜单File 下Export弹出的面板

里Merge Channel 打钩，Channel Selection里选中所要

导出的通道，点Save保存。