培养基配制记录表

乐山食品药品检验所培养基配制记录

各种培养基配方

146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20g pH 自然蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）

培养基验收作业指导书删减版

培养基质量控制作业指导书 1、目的：为加强我微生物实验室的工作管理，保证实验室的检测质量，特制定此作业指导书； 2、范围：本规范适用于实验室微生物检测中所使用培养基的质量控制。 3、职责： 3.1 检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。 3.2 科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。 4、控制措施： 4．1培养基的购置和验收 4.1.1 培养基的购置试剂管理员在接到批准的采购信息后，从合格供应商中选择厂商采购，同时要求厂商提供每批培养基的批号、使用前的pH值、储藏信息、有效期、性能评价记录（包括测试菌株、技术数据清单、质控证书及必要的安全危害数据）。 4.1.2 培养基的验收购买培养基到货后，由试剂管理员和微生物检测人员共同核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。同时应填写“培养基验收检查记录单”验收符合要求后，交由检测人员接受保管，填写培养基入库记录和建立试剂台帐。 4．2培养基的储存干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并在有效期或6个月内用完。应每月对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。即用性培养基按照产品标识要求进行储存。 4．3培养基的使用 4.3.1 配制培养基用水和玻璃器皿培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水，每周检测电阻率，每三个月检测一次重金属离子含量。制备培养基所用的玻璃器皿（如吸管、试管、烧杯等）新的

培养基制备的基本方法和注意事项

培养基制备的基本方法和注意事项 1.培养基配方的选定同一种培养基的配方在不同着作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。 2 ．培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3.培养基成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。 4.培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 5.培养塞pH 的初步调整培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低.而肠浸液pH 却会有显着的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。 pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。

培养基母液配制Word版

培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。MS培养基母液及培养基配方法参考表2。大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱（4℃）贮存。微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为 0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。一般将微量元素分别称量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。配好后，贴上标签，贮存于4℃冰箱。培养基中的铁盐母液一般单独配制。目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。称取Na2-EDTA 3.73 g，FeSO4 ·2H2O 2.78 g，分别溶解（可加热），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。转入细口瓶，贴上标签，4℃冰箱中保存。氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20℃（或4℃）冰箱中保存。植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。如配0.5 mg/l NAA母液，称25 mg NAA溶于50 ml重蒸馏水，或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸馏水中。IAA要用棕色瓶暗中贮存，以免光照分解。常用植物生长调节物质和维生素特征见表3。生长素为醇溶性物质，配制时，应用少量95%酒精或稀碱溶解，然后用重蒸馏水溶解定容；细胞分裂素应先用少量1 N NaOH或HCl溶解，然后用重蒸馏水定容。配制好的母液放置在4

培养基适用性检查记录

培养基适用性检查记录质量部

培养基名称：沙氏葡萄糖琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：一、实验菌种：白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代二、菌液制备将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天。加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。三、培养基适用性检查取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌适宜浓度），另一皿接种1ml PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀。凝固后倒置培养，20-25℃培养5天计数。被检培养基同法操作。四、结果判断五、结论本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符合规定□不符合规定。

培养基名称：胰酪大豆胨琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：一、实验菌种：金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]第代铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]第代枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]第代白色念珠菌[CMCC(F)98 001]第代黑曲霉[CMCC(F)98 003]第代二、菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml的菌悬液。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养5～7天。加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成稀释至10-5～10-7,制成50～100cfu/ml 的菌悬液。三、培养基适用性检查取11个无菌平皿，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌适宜浓度），另一皿接种1ml PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀。凝固后倒置培养，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌皿30-35℃培养3天计数；白色念珠菌、黑曲霉20-25℃培养5天计数。被检培养基同法操作。四、结果判断

实验一植物组织培养基母液配制的若干关键环节

实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求：熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法. 植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中. 为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1) 表1 MS培养基母液的配制成分规定用量 /mg.L-1 扩大倍数称取量/ mg 母液定溶体积/ml 配1LMS培养基吸取量 /ml 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 微量元数 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 20 20 20 20 20 1000 1000 38000 33000 7400 3400 8800 22300 8600 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 50 50 50 50 50 1 1

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。表1大量元素母液（配1L20倍的母液）序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。

细胞培养基质量标准及检验方法

细胞培养基质量标准及检验方法中国医药生物技术协会二0一一年四月

编写说明一、根据中国医药生物技术协会2010年9月20日组织召开的《动物细胞培养基生产管理及质量控制学术研讨会》纪要，结合我国的实际情况制定本标准。二、本标准以《中国药典》2010版和《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T 3935-2007）行业标准为依据，结合生物制品对细胞培养基原材料的特殊要求制定，增加了牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量等检测项目。三、本标准分为细胞培养基检验项目和每个项目的检验方法两部分，为评判细胞培养基产品质量提供了依据和方法，从而规范我国细胞培养基行业健康发展。四、结果评定依据本标准和方法对细胞培养基样品进行全项检验，所有项目均符合标准要求，判定该样品为合格；若有一项不符合标准要求，则判定样品为不合格。

细胞培养基质量标准及检验方法一、细胞培养基质量标准细胞培养基质量应符合表1所示的技术要求。表1 技术要求

二、检验方法除非另有说明，检验中仅使用确认为分析纯的试剂和中华人民共和国药典2010年版中规定的纯化水。澄清度的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅸ B进行。 pH值的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤA进行。干燥减量的测定按中华人民共和国药典2010年版三部附录Ⅶ L 干燥失重测定法进行。渗透压的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤH渗透压摩尔浓度测定法进行。取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。细菌内毒素的测定按中华人民共和国药典2010年版三部附录Ⅻ E 细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。微生物限度的测定按中华人民共和国药典2010年三部附录Ⅻ G微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。细胞生长试验贴壁型细胞生长试验方法提要

培养基配制及适用性检查标准操作规程

培养基配制及适用性检查标准操作规程 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。范围：适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。依据：《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部职责： 1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。 2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。内容 1 培养基的申购根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。 2 培养基的验收培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。

验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 3 培养基的贮藏未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为7天。 4 培养基的配制培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如2011年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:000000-110101。配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如000000-110101-01）培养基配制方法使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每个成分物质含量、制造商、批号，pH值，培养基体积/分装体积，灭菌条件（灭菌方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。水、容器具要求：培养基配制均采用纯化水，特殊说明时采用去离子水和蒸馏水。培养基配制所用容器和配套器具应洁净。对热敏感的培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌，以保证培养基的无菌性。称量与分装：快速称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末）。以免吸潮。先加入适量的水，充分混合。注意避免培养基结块，然后加水至所需的量。根据说明书要求选择是否加热。分装体积不超过容器体积的2/3。配制斜面等含琼脂的培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。 pH 值的测定和调整

常用培养基概念及配方复习课程

常用培养基概念及配方

LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总

称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO4 17 mg／ L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／ L+FeC13·6H2O 0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L．一、LB培养基配制

培养基母液的配制方法

培养基母液的配制方法一、实验目的 1.了解无菌操作 2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。四、实验步骤 1、大量元素母液的配制

各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。表1 MS培养基大量元素母液制备注意： (1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4 一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。

制药企业微生物限度控制菌检查培养基适用性检查记录表式样

控制菌检查培养基适用性检查记录一、菌液制备（需要的菌种在□内划“√”）： □（1）大肠埃希菌新鲜肉汤培养物1ml ，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（2）金黄色葡萄球菌新鲜肉汤培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（3）乙型副伤寒沙门菌新鲜肉汤培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（4）铜绿假单胞菌新鲜肉汤培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释； □（5）生孢梭菌新鲜硫乙醇酸盐流体培养物1ml，9ml0.9%无菌NaCl溶液，10倍递增稀释；二、每ml菌液含菌量的计数测定。测定方法：取稀释后的菌液1ml（剩余的菌液冷藏保存）,置直径90mm的无菌平皿中，注入15-20ml已经过适用性检查确正的温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基（细菌类别计数选用该培养基）或玫瑰红钠琼脂培养基（霉菌、酵母菌类别计数选用该培养基），混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。细菌类别培养温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌类别培养温度为23℃～28℃。细菌类别培养3天，霉菌、酵母菌类别培养5天。三、检查结果：需做的检查在□内划“√”。 □ 1. 增菌培养基促生长能力检查

分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌。检验标准：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。结论： □ 2. 固体培养基促生长能力检查检验标准：被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。结论： □ 3. 培养基抑制能力检查分别接种试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度和时间下培养，试验菌。检验标准：试验菌应不得生长。结论： □ 4. 培养基指示能力检查分别接种少量试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度和时间下培养。被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等。检验标准：被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。结论：结论：检验人：复核人：

培养基的配制及使用记录

培养基的配制及使用记录序号操作指导操作参数记录数据签名 1 检查天平是否在校验有效期内；检查天平是否正常、完好；使用前对天平进行调零。天平编号是否在校验有效期内是否正常、完好是否调零口是/ 口否口是/ 口否口是/ 口否操作者 ______ 2 按右表配方比例，在天平上分别称取培养基于洁净的烧杯中，并记录称重与批号，将纯化水加入上述烧杯中并搅拌均匀，再定容至规定体积。名称比例称重批号操作者 ______ 复核者 ______ 3 平板培养基的配制：将上述定容好的培养基，分装于500ml规格的三角瓶中或者小试管中，塞上硅胶塞，用牛皮纸包扎紧。配制量ml 操作者 ______ 复核者 ______ 4 将包扎好的培养基，温度 121～125℃湿热灭菌15--20 分钟。待压力和温度下降后取出，适当冷却。灭菌锅编号设定温度灭菌时间 ℃ 操作者 _______ 5 进无菌室时，按要求更换上无菌服，更衣穿戴完毕。着装是否符合规范口是/ 口否操作者 ______ 6 将上述已灭菌的培养基经传递窗转移至无菌室。在净化操作台上，无菌操作下倒平板（15--20ml/90mm皿）。倒平皿数试管斜面副个操作者 ______ 7 空白培养实验将已经冷却的培养基放入培养箱中空白培养48小时。检测是否无菌。培养箱编号培养箱温度培养时间是否无菌 ℃ 口是/ 口否操作者 ______

8 废弃培养基及培养物在锅内加热煮沸灭活，收集于废液桶中定期处理。煮沸、灭活口是/ 口否操作者 _______ 复核者 _______ 附：培养基使用记录使用日期使用去处使用数量(副) 使用者

各种培养基的制作方法

配方一萨氏（Sabouraud's）培养基蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 1.营养肉汤培养基牛肉膏 0.3克蛋白胨 1.0克 NaCl 0.5克水 100毫升 pH 7.0～7.2 在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。 2.营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。 3.肉汁蛋白胨液体培养基牛肉 500克蛋白胨 10克 NaCl 5克 pH 7.1～7.2 取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。 4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基）可溶性淀粉 2克 K2HPO4 0.05克 MgSO4·7H2O 0.05克 KNO3 0.1克 NaCl 0.05克

FeSO4 0.001克琼脂 2克水 100毫升 pH 7.2～7.4 在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。 5.马铃薯蔗糖培养基马铃薯 200克蔗糖 10克琼脂 20克水 1000毫升自然pH 称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 6.麦芽汁培养基将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 7.察氏培养基 NaNO3 2克 K2HPO4 1克 KCl 0.5克 MgSO4 0.5克 FeSO4 0.01克蔗糖 30克琼脂 15～20克水 1000毫升自然pH

培养基母液的配置

培养基母液与培养基的配置摘要：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。关键词：培养基母液常用培养基植物激素 1.常用培养基种类，培养基母液的各种成分的量以及配置过程 1.1常用培养基： MS培养基 MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。 B5培养基与其他培养基相比，它的主要特点是含有较低的铵，而铵这一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用。当愈伤组织和悬浮培养中对B5培养基与MS培养基进行对比培养试验时，发现有些植物的愈伤组织和细胞培养物在MS培养基上生长得好，有些在B5培养基上生长得更适宜。 N6培养基为水稻的花药培养设计，成分简单，硝酸铵含量高，不含钼，用于花药（谷物）培养。 LS培养基基本与MS培养基相同，LS成分相对少了。 White培养基为培养番茄根尖培养设计，无机盐浓度低，属于低盐培养基。适用于生根培养，成熟胚胎培养，后作了改良，多用于本草植物。 1.2几种常用培养基母液的各种成分的量以及配置过程培养基母液的各种成分包括大量元素、微量元素、Fe盐、有机成分、肌醇、激素等。 1.2.1大量元素母液的配制（10X，1000ml）成分使用浓度（mg/L) 配置1000ml培养基称取量（g) MS培养基硝酸钾KNO3 1900 19 硝酸铵NH4NO3 1650 16.5 磷酸二氢钾KH2PO4 170 1.7 硫酸镁MgSO4.7H2O 370 3.7 氯化钙CaCl2.2H2O 440 4.4

常用培养基配方

常用培养基配方（微生物学与微生物检验学部分）渤海大学生物与食品科学学院 2006年3月

目录 01糖发酵管 02 ONPG培养基 03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08Hugh－Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸－苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液

42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN－1培养基 70 嗜盐性试验培养基 71 改良Y培养基 72 改良克氏双糖 73 快速硫化氢(H2S)试验琼脂 74 DNA酶甲基绿琼脂(DTA) 75 Cary－Blair氏运送培养基 76 Skirrow氏培养基 77 TTC琼脂 78 甘氨酸培养基 79 改良磷酸盐缓冲液 80 氯化镁孔雀绿肉汤 81 胰酪胨大豆肉汤 82 Baird－Parker氏培养基 83 7.5%氯化钠肉汤 84 匹克氏肉汤 85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂

11培养基试剂与试液管理规程

培养基、试剂与试液管理规程 1. 目的：规范培养基、试剂、试液的管理，确保其应用于检测不会造成结果准确性的偏离。 2. 适用范围：适用于培养基、试剂、试液的购入、接收、使用、保管的管理。 3. 职责： 3.1 中心化验室管理人员、QA人员:负责监督本规定的执行； 3.2 中心化验室QC员:按本规定严格执行。 4. 内容： 4.1 培养基 4.1.1 培养基由中心化验室指定专人保管与发放，建立《培养基接收、发放台帐》； 4.1.2 制备 4.1.2.1 制备培养基所用的玻璃器皿清洁干燥,培养基经适用性考察合格后方可用于样品检测使用; 4.1.2.2 按《培养基配制操作规程》（JMSC02-301080061）进行称量、配制、过滤、分装、灭菌。 4.1.2.3 及时填写《培养基配制记录》，内容：培养基名称、培养基生产厂家、培养基批号、配制日期、配制总量、配制批号、配制方法、配制人、复核人及日期。 4.1.2.3.1 培养基的配制批号编写方式为：以年月日六位数加当日流水号两位数表示，如：2011年11月02日配制第一个培养基的批号为：11110201 4.1.3 使用 4.1.3.1 干燥培养基使用时只需按标签上的说明称量、加水、分装、高压灭菌。不需调节PH。若为自配培养基应矫正PH，原料也应挑选，琼脂凝固力应测定，以确定配制时琼脂用量,试剂规格应为化学纯以上。 4.1.3.2 配制的培养基不应有沉淀，如有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。 4.1.3.3 培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。包装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。 4.1.3.4 培养基配制后应在2 h内灭菌，避免细菌繁殖。 4.1.3.5灭菌后的培养基作好《培养基配制标签》，注明名称、配制批号，配制日期、配制人，并在冷暗处保存备用，放置时间不能超过7天，以免水分散失染菌。已熔化的培养基应一次用完，开启后不宜再用。 4.1.3.6 琼脂培养基应用水浴或微波炉加热，勿用电炉直接熔化琼脂培养基，以免营养成份过度受热而破坏。 4.1.3.7使用培养基，必须填写《培养基使用记录》，标明：培养基名称、配制批号、配制总量、使用日期、使用量、剩余量、使用去向（使用于产品应标明产品名称、批号）。 4.1.4 保存: 4.1.4.1 未开封脱水培养基应避光保存于25℃以下阴凉干燥处，已开封的培养基应盖紧，避光储存于

各种无机培养基配方

1、毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白：基础盐培养基BSM:硫酸钙0. 93 g/ L ,硫酸钾18.2 g/ L ,七水硫酸镁14.9 g/ L ,柠檬酸三钠1.47 g/ L ,微量元素2mL/ L ,甘油40 g/ L ,硫酸铵10 g/ L ,磷酸钾缓冲液(pH 6.0) 0.1 mol/ L 。微量元素主要成分: 五水硫酸铜6.0 g/ L ,碘化钾0.08 g/ L ,一水硫酸锰3.0 g/ L ,二水钼酸钠0.2 g/ L ,硼酸0.02 g/ L ,硫酸钙0.5 g/ L ,氯化钴0.5 g/ L ,氯化锌20.0 g/ L , 七水硫酸亚铁65.0 g/ L , 硫酸5.0 mL/ L ,生物素0.2 g/ L 。试剂均为国产生化试剂纯或分析纯。发酵将50μL 种子液接种于5 mL 的YPG培养基中,30 ℃振荡培养18222 h ,转接到装有100mL 基础盐培养基的500 mL 带挡板的摇瓶中。转速180 r/ min ,温度30 ℃培养,每8 小时用浓氨水调节发酵液pH 值至610 。约48 h 时,取样检测甘油浓度,待甘油耗尽后加入甲醇开始诱导。诱导期培养温度为28 ℃,pH 值调节至710[526 ] ,每12 h 补加体积分数015 %的纯甲醇和10 mg/ L 的亚硒酸钠,对照发酵液不添加亚硒酸钠。诱导96 h 后停止发酵。 2、重组人血清白蛋白在毕赤酵母表达中的降解控制 PBM：甘油40g/L，磷酸（85%）26.7 g/L，二水硫酸钙0.6 g/L，硫酸钾9.5 g/L，七水硫酸镁7.8 g/L，氢氧化钾2.6 g/L，PTM1 2ml/L，生物素0.00004 g/L，硫胺0.00019 g/L，浓氨水调节为所需pH，试剂均为国产生化试剂纯或分析纯。 PTM1：Invitrogen公司提供的标准配方。发酵：生长期温度为30℃，pH用浓氨水调节，培养期间每4h调节一次维持原pH值，甘油耗尽后甲醇诱导，诱导过程中每12h补加体积分数0.5的纯甲醇，摇床转速180r/min，摇瓶为500ml的底部有挡板的三角瓶，装液量50mml。 3、High-Level Expression of Recombinant Human Serum Albumin from the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris with Minimal Protease Production and Activation Basal Batch Medium

培养基母液的配制

培养基母液的配制植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单,而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型,要求的营养条件十分复杂,因此在人工合成养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。一、实验目的配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。当需要连续和大量配制培养基时,如果每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，因此需要将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成适当的浓缩液。要求拿握植物组织培养培养基母液的配制方法。二、实验材料仪器冰箱、电子天平(0.0001g) 容量瓶: 1000 ml, 500ml、250 ml、100 ml、25 ml 广口储液瓶: 500 ml、250ml、50 ml、25 ml 烧杯: 1000ml、500ml 、250m、100ml 、50 ml .数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶水、记号笔药品 50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸(HC1)的配制:取浓盐酸825ml,加入蒸馏水1000ml,即为IN的HCI)、1 N Na0H(1N氢氧化钠(或氢氧化钾)的配制:称40 gNa0H (或氢氧化钾57.1g)加入蒸馏水100ml ,即为1N的Na0H( IN的K0H) 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏水三、实验步骤按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。如Ms培养基各种母液的配制步骤如下:1、大量元素母液: 包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解,然后按照顺序混合在一-起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液100 m或50