单克隆抗体导学案
迁安一中生物组2014年高二生物导学案
探究点一 动物细胞融合
【知识回顾与拓展】 无论是植物细胞，还是动物细胞，都可以利用一定的方法诱导融合，可用模型图表示细胞融合技术的一些过程。
（1）若丙细胞表示受精卵，则①表示__________，甲乙细胞形成过程中会发生的变异类型有___________________________。 （2）若该过程表示植物原生质体的融合，则融合前对两种植物
细胞的处理是________________.在①中可以利用_________（化学试剂）进行诱导融合，融合成功的标志是__________________________,丙细胞还要进行__________________获得植株。该方法的优点是克服物种间的________________。 （3）若该过程表示两种动物细胞，则从组织获取单个细胞要用_________处理。科学家经过长期的探索，利用植物体细胞杂交的方法实现了让不同种动物的体细胞进行杂交（融合过程如图），该图应用的原理是__________________，诱导融合的方法可以采用物理法中的_________________和化学法中的____________，除此外还可以利用______________诱导融合。
（4）从右图中看，两动物细胞融合成功的标志是杂交细胞开始进行______分裂。假如两动物细胞是浆（B ）细胞和骨髓瘤（癌）细胞，则杂种细胞可能具有两种细胞的遗传特点，即可以产生______且可以在体外培养时能___________。
材料1 由于细胞的密度不同，在地面上受重力影响，细胞的融合非常困难，在太空进行此实验比在地面实验的细胞融合率要高很多。“神舟”六号飞船上进行了B
淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合、黄花烟草原生质体和“革新”一号烟草原生质体的融合两个科学实验，在电融合仪内经过160 min
后，终于获得成功。材料2 如图为哺乳动物生殖过程及相关细胞工程的示意图，其中b 为卵细胞，c 、d 为体细胞。
(1)细胞融合技术与传统的有性杂交相比，其优越性在于________ ______________。在太空进行细胞融合与在地面进行细胞融合相比，其优越性在于解决了因两种细胞密度不同而难以融合的问题 (2)动物细胞融合后的杂种细胞一定能发育成动物个体吗？______ (3)动物个体甲、乙的产生分别属于哪种生殖？___________。 (4)在“神舟”六号飞船上进行的“太空融合”，与上图中的方法__________的原理相同。
(5)人工诱导动物细胞融合与诱导植物细胞融合的方法相同的是都可用物理法和化学法，此外动物细胞融合还可用____________作为诱导剂。 探究点二 单克隆抗体的制备
1975年，英国科学家米尔斯坦(https://www.360docs.net/doc/d19004391.html,stein)和科勒
(G.K?hler)设计了一个极富创造性的实验方案，得到了
大量的单克隆抗体，阅读教材52-5页内容，据图回答下
面的问题：
（1）常规抗体获取的方法是向动物体内___________， 从动物血清中提取，但该方法获得抗体具有产量低、______和__________特点。
（2）一种抗原刺激时，每一个B 淋巴细胞只能产生一种特异性抗体，科学家为何不用一个B 淋巴细胞增殖产生单克隆抗体，而用图示方法获取？
（3）从图中看，科学家何解决（2）中问题的思路如下（填空）
①用制备产生特异性抗体的B 淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的_________，然后从小鼠
_____内获得相应的B 淋巴细胞
②获得杂交瘤细胞?????
①将鼠的____________与脾细胞中形成
的_____________融合
②用特定的选择培养基筛选出________
细胞。该细胞既能_____________又 能_______________
③_______培养和______检测
④将杂交瘤细胞在_________或注射到_________内增殖 ⑤提取单克隆抗体：从___________或小鼠的_____中提取
思考：根据所学知识，①处融合过程中会产生____种融合的细胞，在图中②处要用____________进行初次筛选，目的是获得____________.但由于机体受多种抗原的刺激，筛选出的细胞还可能不能产生所需要的抗体，故要进行第二次筛选，根据图示可知，第二次筛选用的方法是__________。 (4)已知细胞合成DNA 有D 和S 两条途径，其中D 途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA 的合成途径，但一般不分裂增殖，鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S 途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请设计一种方法(不考虑机械方法)，从
① ②
培养液中分离出杂交瘤细胞。
方法： ____________________________________________。
原理是：____________________________________________________
（5）由上述抗体的产生过程我们可将单克隆抗体的定义归纳为：由一个__________细胞大量繁殖所产生的克隆系细胞分泌的化学性质单一、特异性强的抗体，该方法获得的抗体具有特异性强、____________、_____________的特定。
（6）单抗制备过程应用的细胞工程技术有_____________、______________。
探究点3、单克隆抗体的应用
①作为诊断试剂，原理：利用单抗具有__________和_____________的特点，能准确地识别各种抗原的_______________，且能与抗原_________________，因此具有准确、_____、简易、_____的优点。
②用于治疗疾病和运载药物：主要用于_____的治疗，可以单独使用，也可以与_______________结合使用制成“生物导弹”，以借助单抗的____作用，将药物带动靶细胞所在部位，杀死癌细胞，优点是_________________________________。
【学以致用】
1.用单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”。
下列对此叙述不正确的是( )
A．“瞄准装置”是识别肿瘤的单克隆抗体 B．“弹头”具有选择性杀伤肿瘤细胞的功能
C．“弹头”由放射性同位素、化学药物等物质构成
D．“生物导弹”的制备利用了细胞工程技术
2．下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。
(1)____________技术是单克隆抗体技术的基础。
(2)根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于____________培养基。
(3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是__________________。
(4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用________________________________________________________________________。
(5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞______________的特点，又具备淋巴细胞______________________的特点。
(6)淋巴细胞是由动物体__________中的__________细胞分化、发育而来的。
(7)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____________。
【课时作业】
1．与植物细胞融合相比能使动物细胞融合的特有的诱导因子是( ) A．离子B．灭活的病毒C．电刺激D．振动
2．动物细胞融合的目的中最重要的是( ) A．克服远缘杂交不亲和B．制备单克隆抗体C．培育新物种 D．生产杂交细胞
3．关于动物细胞融合的说法，不正确的是( ) A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程
B．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞C．常用的诱导动物细胞融合的因素有：聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射
D．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能
4．单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面与常规抗体相比，其特点是( ) A．单克隆抗体特异性强、纯度低、灵敏度高、产量高
B．单克隆抗体特异性强、纯度高、灵敏度低、产量高
C．单克隆抗体特异性强、纯度高、灵敏度高、产量低
D．单克隆抗体特异性强、纯度高、灵敏度高、产量高
5．科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体。
与骨髓瘤细胞融合的是( )
A．经过免疫的B淋巴细胞B．不经过免疫的T淋巴细胞
C．经过免疫的T淋巴细胞D．不经过免疫的B淋巴细胞
6．下列关于动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是( ) A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同 D．都能形成杂种细胞
7．下列关于单克隆抗体制备过程的叙述，正确的是( ) A．制备过程中不需要动物细胞培养技术
B．杂交瘤细胞具有B淋巴细胞与癌细胞的所有特点
C．经选择培养基筛选出来的杂交瘤细胞可用于单克隆抗体的生产
D．单克隆抗体最广泛的用途是用做体外诊断试剂
8．下面为制备单克隆抗体过程示意图，下列相关叙述错误的是
( )。
A．④中的筛选是为了获得能产生多种抗体的杂交瘤细胞
B．②中培养基应加入选择性抑制骨髓瘤细胞DNA分子复制的物质
C．上图中有一处明显错误
D．⑤可以无限增殖
9．单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后，要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( )。
①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞
A．①②③④ B．①③⑤ C．②④ D．②③
10．单克隆抗体制备过程中所用的骨髓瘤
细胞是一种基因缺陷型细胞，其合成
核酸的途径能被氨基嘌呤阻断。现将
从预先注射了某种抗原的小鼠脾脏中获
得的B淋巴细胞与上述骨髓瘤细胞混合，加入PEG促融后，
再加入含氨基嘌呤的培养液。若将这些混合物分装于细胞
培养板的小孔中培养(如图所示)，则小孔中的培养物不可
能出现的结果是( )。
A．细胞分裂繁殖，产生抗体，专一性抗体检验呈阴性
B．细胞分裂繁殖，产生抗体，专一性抗体检验呈阳性
C．没有活细胞，产生抗体 D．没有活细胞，不产生抗体
11
12
A．对小动物注射特定抗原以获取所需的B淋巴细胞
B．融合并筛选特定的杂交瘤细胞，原代培养发生遗传物质改变后才能进行传代培养
C．特定的单克隆抗体可制成试剂，用于检测人体是否受某种抗原的感染
D．治疗癌症的“生物导弹”原理之一是利用单克隆抗体的特异性识别癌细胞
13．下表为动植物细胞工程的有关内容比较，你认为错误的有
)。
A.0
14-15，练习册355页3、6
__________________________________。
单克隆抗体制备的基本原理
单克隆抗体制备的基本原理 一、单克隆抗体的概念 抗体（antibody）是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的，因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇，所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体，仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。因而，常规血清抗体又称多克隆抗体（polyclonal antibody），简称多抗。由于常规抗体的多克隆性质，加之不同批次的抗体制剂质量差异很大，使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。因此，制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供应的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。随着杂交瘤技术的诞生，这一目标得以实现。 1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤 细胞融合，形成B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征，既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死，又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针
对同一抗原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb），简称单抗。 与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。单抗技术的问世，不仅带来了免疫学领域里的一次**，而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用，促进了众多学科的发展。 德国科学家柯勒（Georges Ko1er）和英国科学家米尔斯坦（Cesar Milstein）两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。 二、杂交瘤技术 （一）杂交瘤技术的诞生 淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面 发展的必然结果，抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等，为杂交瘤技术提供了必要理论基础，同时，骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。1975年8月7日，Kohler和Milstein 在英国《自然》杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗体的融合细胞的持续培养”（Continuous cultures of fused cells secreting antibody of
选修三专题二2.2.2《动物细胞融合与单克隆抗体》导学案
专题二细胞工程——.动物细胞工程 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 课前预习学案 一、预习目标 预习动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程，了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说其应用实例。 “二、预习内容 ㈠、动物细胞融合 1、概念：_______或_______动物细胞结合形一个细胞的过程，也称细胞杂交。 2、结果：形成___________。 3、过程：两个或多个细胞 ?????→?PEG 灭活的病毒或___________________________________。 4、意义：克服了___________的不亲和性，成为研究___________、___________、肿瘤和 _______________培育的重要手段。 ㈡、单克隆抗体 1、抗体 ⑴产生细胞：_________________。 ⑵成分：__________。 ⑶特点：从__________中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。 2、单克隆抗体的制备 (1)过程 ⑵杂交瘤细胞的特点：____________________、____________________。 ⑶单克隆抗体的优点：____________、____________、____________。 ㈢、单克隆抗体的应用 1、作为诊断试剂，具有__________、__________、__________、__________的优点。 2、用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗_______、可制成___________。 三、提出疑惑 同学们，通过你的自主学习，你还有哪些疑惑，请把它填在下面的表格中 疑惑点 疑惑内容 课内探究学案 一、学习目标 1、 掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。 2、 简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。
2021高考生物二轮复习微专题3癌细胞学案.docx
微专题3 癌细胞 网络化体系构建 多角度热点突破 角度一癌细胞与细胞的结构和功能的联系 【典题1】(2018全国Ⅱ理综,6)在致癌因子的作用下,正常动物细胞可转变为癌细胞。有关癌细胞特点的叙述错误的是( ) A.细胞中可能发生单一基因突变,细胞间黏着性增加 B.细胞中可能发生多个基因突变,细胞的形态发生变化 C.细胞中的染色体可能受到损伤,细胞的增殖失去控制 D.细胞中遗传物质可能受到损伤,细胞表面的糖蛋白减少 角度二癌细胞与细胞代谢的联系 【典题2】(2020山东,2)癌细胞即使在氧气供应充足的条件下也主要依赖无氧呼吸产生ATP,这种现象称为“瓦堡效应”。下列说法错误的是( ) A.“瓦堡效应”导致癌细胞需要大量吸收葡萄糖 B.癌细胞中丙酮酸转化为乳酸的过程会生成少量ATP C.癌细胞呼吸作用过程中丙酮酸主要在细胞质基质中被利用 D.消耗等量的葡萄糖,癌细胞呼吸作用产生的NADH比正常细胞少 角度三癌细胞与细胞周期、细胞分化和凋亡的联系 【典题3】某种物质可插入DNA分子两条链的碱基对之间,使DNA双链不能解开。若在细胞正常生长的培养液中加入适量的该物质,下列相关叙述错误的是( ) A.随后细胞中的DNA复制发生障碍 B.随后细胞中的RNA转录发生障碍
C.该物质可将细胞周期阻断在分裂中期 D.可推测该物质对癌细胞的增殖有抑制作用 角度四癌细胞与免疫的联系 【典题4】近年来,有关肿瘤细胞特定分子的靶向治疗研究进展迅速。研究发现,蛋白X是细胞膜上的一种受体,由原癌基因X编码。在一些肿瘤细胞中,原癌基因X过量表达会持续激活细胞内的信号传导,启动细胞DNA的复制,导致细胞异常增殖。利用动物细胞融合技术制备的单克隆抗体,可用于诊断和治疗原癌基因X过量表达的肿瘤。请回答下列问题。 (1)同一个体各种体细胞来源于受精卵的分裂与分化。正常情况下,体细胞核遗传信息相同的原因是 。(2)通过检测原癌基因X的和可判断其是否转录和翻译。检测成人多种正常组织后,发现原癌基因X只在乳腺、呼吸道等上皮细胞中有微弱表达,这说明 。 (3)根据以上信息,可推测原癌基因的主要功能是 。(4)制备该单克隆抗体时,免疫动物的抗原可以是。B淋巴细胞识别抗原并与之结合,之后在适当的信号作用下增殖分化为和。 (5)用该单克隆抗体处理原癌基因X过量表达的某肿瘤细胞株,发现其增殖能力明显下降。这是因为 。角度五癌细胞与变异的联系 【典题5】下列有关细胞癌变的叙述,正确的是( ) A.基因突变导致的各种细胞癌变均可遗传 B.石棉和黄曲霉毒素是不同类型的致癌因子 C.人体的免疫系统对癌变细胞具有清除作用 D.癌变细胞内酶活性降低导致细胞代谢减缓
人用单克隆抗体质量控制技术指导原则
人用单克隆抗体质量控制技术指导原则 本要点适用于供治疗的体内诊断用的利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体，适用于在人体内应用的利用重复DNA技术制备的基因工程抗体一、杂交瘤技术制备的单克隆抗体 （一）杂交瘤细胞 1．亲本细胞 （1）骨髓瘤细胞 SP2/0或其他适宜的骨髓瘤细胞系。应为不合成或不分泌免疫球蛋白链型，具有符合骨髓瘤细胞的染色体特征，并有明确的来源历史及符合要求的保存条件。 （2）免疫亲代细胞 经抗原免疫的鼠脾B淋巴细胞或外周血B淋巴细胞。 应有明确的免疫原来源、性质及动物种系，免疫原详细的制备过程。适宜的免疫方案及免疫淋巴细胞制备的方法。 2．细胞融合与克隆化 采用适宜的方法进行融合、筛选及克隆化。 3．杂交瘤细胞检定 （1）抗体分泌稳定性 连续克隆化后抗体阳性率达100%，经体外连续传代3个月以上和反复冻存、复苏，细胞系能保持稳定分泌特异性抗体。 （2）细胞核学特征
检查细胞分裂中期染色体，应符合杂交瘤细胞特征。 4．鼠源病毒检查 按附录要求检测鼠源病毒。 5．支原体检查 按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。 6．无菌试验 按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。 （二）单克隆抗体的检定 1．免疫球蛋白类及亚类 用免疫双扩散法或其他适宜的方法测定。 2．亲和力 用可靠、准确的方法测定单克隆抗体（以下简称为单抗）的亲和常数或相对亲和力。一般情况下，对于免疫原为可溶性的单抗，测其亲和常数，对于免疫原为颗粒性抗原的单抗，测其相对亲和力。 3．特异性 测定单抗对靶抗原的特异性；对多株单抗识别的抗原决定簇进行相关性分析。 4．交叉反应 按附录要求。 免疫组织化学法测定单抗与人体组织交叉反应，用冰冻及石蜡包埋的各种正常脏器组织测定。来源于肿瘤相关抗原的单抗应进行与各种肿瘤
单克隆抗体的制备及应用
单克隆抗体的制备及应用 单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇。单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)：一种免疫学技术，将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。 1 单克隆抗体的优点与局限性： 单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。 总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。 单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。 (2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。 2 单克隆抗体的制备： 单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。 单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与免疫、细胞融合、选择杂交瘤细胞及抗体检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。 抗原准备 抗原，是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。抗原的基本特性有两种，一是诱导免疫应答的能力，也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应，也就是抗原性。很多物质都可以成为抗原，抗原的具体分类可以参见抗原，在进行单克隆抗体制备过程中，很多物质都可以成为抗原，在常规的科研实验中，科研者经常选用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug 重组蛋白、偶联多肽、偶联小分子等作为抗原产生特异性的单克隆抗体。 动物的选择与免疫
4第四章 单克隆抗体与基因工程抗体制备技术
第四章单克隆抗体与基因工程抗体制备技术 本章考点 1.概念 2.杂交瘤技术基本原理 3.杂交瘤抗体的制备技术 4.基因工程抗体 由杂交瘤细胞产生的针对抗原分子上某一单个抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。其理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、且来源容易。 传统的方法是将抗原注入动物，由动物体内B细胞产生的抗体。由于多数天然的抗原分子具有多种抗原决定簇，每一种决定簇可激活具有相应抗原受体的B细胞产生针对某一抗原决定簇的抗体。因此，将抗原注入机体后，刺激多个B细胞克隆所产生的抗体是针对多种抗原决定簇的混合抗体，故称为多克隆抗体（PoAb）。 第一节杂交瘤技术基本原理 单克隆是指利用在细胞融合基础上的B细胞杂交瘤技术。 杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才能具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。 一、B细胞杂交瘤技术 1.细胞的选择和融合：杂交瘤技术的目的是制备对抗原特异性的单克隆抗体，所以融合一方必须是经过抗原免疫的B细胞，通常选用被免疫动物的脾细胞，脾淋巴细胞的主要特征是抗体分泌功能。融合细胞另一方则要求在培养条件下的永生性，只有肿瘤细胞才是具备这一条件，所以选择同一体系的骨髓瘤细胞，因多发性骨髓瘤是B细胞系恶性肿瘤，其特点是稳定易培养、自身不分泌免疫球蛋白及细胞因子、融合率高、是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶（HGPRT）的缺陷株，是理想的脾细胞融合对象。 2.选择培养基的应用：细胞融合的选择培养基中有三种关键成分：次黄嘌呤（H）、氨甲蝶呤（A）、胸腺嘧啶核苷（T），所以取三者的字头称为HAT培养基。次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷是细胞DNA合成的途径；氨甲蝶呤（A）是叶酸的拮抗剂，可阻断瘤细胞利用正常途径合成DNA，而融合作用的瘤细胞是经毒性培养基选取出的缺乏HGPRT细胞株，不能在该培养基上生长，只有融合细胞具有亲代双方遗传性能，才能在HAT 培养基上长期存活与繁殖。 3.有限稀释与抗原特异性的选择：细胞融合是一个随机的过程，需在融合细胞抗体筛选的基础上进行特异性筛选。将融合细胞进行充分稀释，进行克隆化处理，再将阳性细胞进行再次克隆化，应用特异性抗原包被的ELISA找出针对目标抗原的抗体阳性细胞株进行增殖，再进行冰冻，体外培养或动物腹腔接种。
动物细胞融合与单克隆抗体教学设计
动物细胞融合与单克隆抗体教学设计 【教学目标】 知识目标： 1、掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。 2、简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。 3、了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说其应用实例。 能力目标： 让学生尝试设计单克隆抗体的制备过程，指导学生掌握获取知识和探索生物科学 的基本方法，使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力。 情感目标： 通过向学生介绍动物细胞融合与单克隆抗体技术的发展动态及一些新的研究成果，使学生明确人们对生命奥秘的揭示愈加广泛和深入，知识不断更新并向前发展，认识到学无止境，形成终生学习的意识。 【教材分析】 《动物细胞融合与单克隆抗体》是《动物细胞工程》的重点内容。它以学过的植 物体细胞杂交、免疫等知识为基础。它能使学生全面认识植物体细胞杂交与动物 细胞融合的异同、动物细胞融合的意义以及单克隆抗体的产生。 【重点难点】 教学重点：单克隆抗体的制备和应用。 教学难点：单克隆抗体的制备和应用。 【教学方法】 自主学习、小组合作、过程探究、教师精讲 【教学实施】 教学内容教师活动学生活动设计意图 一、实例引入新课——细胞融合 二、复习提问师：1970年，有两位科学家做了一个人— —鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜上的 蛋白质分子是运动的。那么，如何实现人 ——鼠细胞的融合，以及动物细胞融合后 还有什么用途呢？这就是今天我们这节 课要学习的内容。板书本节课标题——动 物细胞融合与单克隆抗体 【复习提问】[让学生回顾有关植物体细胞 杂交技术的基本知识]教师设问：植物体细 胞杂交技术的过程是怎样的？ 生：先用酶去除两种植物细胞的细胞 壁，使之成为原生质体，再用物理或化学 的方法，诱导两种原生质体融合成杂种细 胞，最后用植物组织培养的方法把其培育 成新的植物体。 师：动植物细胞在结构上有何区别？ 学生，思考并 回答 激发学生学习的兴 趣 复习旧知以引入新 课，为学习新知识 奠定基础 提出问题激发学 生兴趣
【人教版】高二生物选修三教学案：2.2.2-动物细胞融合与单克隆抗体(含答案)
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 目标导航 1.掌握动物细胞融合的原理和方法。2.结合图2－24，归纳单克隆抗体的制备过程及应用。 一、动物细胞融合(阅读P 52－53) 1．概念：两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。 2．原理：细胞膜的流动性。 3．诱导融合的方法：(1)物理、化学方法：与植物体细胞杂交相同，如聚乙二醇、电激等。 (2)生物方法：灭活的病毒。 4．过程：不同遗传信息的两个或多个细胞――→灭活的病毒 PEG 、电激等 杂交细胞。 5．结果：形成杂交细胞。 6．意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。如：利用动物细胞融合技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。 二、单克隆抗体(阅读P 52－54) 1．传统抗体的获得 (1)方法：①向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体；②从动物血清中分离所需抗体。 (2)缺陷：产量低、纯度低、特异性差。 2．单克隆抗体的制备 (1)制备原理 ①浆细胞特点：一种B 淋巴细胞产生一种单一抗体，B 淋巴细胞在体外不能(能/不能)无限增殖。 ②骨髓瘤细胞特点：能无限增殖。 ③杂交瘤细胞特点：B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞，既能无限增殖，又能产生特异性抗体。 (2)制备过程 制备特异性 ①向小鼠注射特定抗原蛋白 ②从小鼠脾脏中获取相应B 淋巴细胞 B 淋巴细胞
? 获得杂交①将鼠的骨髓瘤细胞与脾中形成的B淋巴细胞融合 ②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能迅速大量繁殖又 能产生专一的抗体) 瘤细胞 ? 克隆化培养和抗体检测 ? 将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔中增殖 ? 提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取 (3)单克隆抗体优点：特异性强、灵敏度高、并可大量制备。 (4)单克隆抗体的应用 ①作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。 ②用于治疗疾病和运载药物。 判断正误： (1)动物细胞融合也称细胞杂交，使远缘杂交成为现实。() (2)动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。() (3)动物细胞融合的主要用途是制备克隆动物。() (4)杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成的，具有既能无限增殖又能产生特定抗体的能力。() (5)单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高，并能大量制备。() (6)单克隆抗体可以用于治疗疾病。() (7)动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体能体现细胞的全能性。() (8)动物细胞核融合发生在杂种细胞的有丝分裂过程中。() 答案(1)×(2)√(3)×(4)√(5)√(6)√(7)×(8)√ 一、动物细胞融合 1．对细胞膜融合过程的理解
单克隆抗体制备方法(全)
单克隆抗体制备方法 1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤。 主要仪器设备： 超净工作台、CO2恒温培养箱、超低温冰箱（-70℃）、倒置显微镜、精密天平或电子天平、液氮罐、离心机（水平转子，4000r/min）、37℃水浴箱、纯水装置、滤器、真空泵等。其需要的主要器械包括：100ml、50ml、25ml细胞培养瓶，10ml、1ml刻度吸管，试管，滴管（弯头、直头），平皿，烧杯，500ml、250ml、100ml盐水瓶，青霉素小瓶，10ml、5ml、1ml注射器等，96孔、24孔细胞培养板，融合管（50ml圆底带盖玻璃或塑料离心管），眼科剪刀，眼科镊，血细胞计数板，可调微量加样器（~50ul，~200ul，~1000ul），弯头针头，200目筛网，小鼠固定装置等。此外，一般的单克隆抗体制备方法大同小异。 方法 动物的选择与免疫 1. 动物的选择 BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。 2. 免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。 （1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。 初次免疫抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～1ml,0.2ml/点） ↓3周后 第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过0.5ml） ↓3周后 第三次免疫剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价） ↓2～3周 加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv（静脉内注射） ↓3天后取脾融合 目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。
单克隆抗体的制备流程
单克隆抗体的制备流程 （一）动物的选择与免疫 1．动物的选择纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。 2．免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb 至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。 （1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐 剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。 初次免疫抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～1ml,0.2ml/点） ↓3周后 第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过0.5ml） ↓3周后 第三次免疫剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价） ↓2～3周 加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv（静脉内注射） ↓3天后 取脾融合 目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：① 将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗 原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞 因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。 （2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为1～2×107个细胞。 初次免疫1×107/0.5ml ip ↓2～3周后 第二次免疫1×107/0.5ml ip ↓3周后 加强免疫（融合前三天）1×107/0.5ml ip或iv ↓ 取脾融合 （二）细胞融合
动物细胞融合与单克隆抗体 教学设计
2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体教学设计 河北省滦州市第一中学 教材分析 “动物细胞融合与单克隆抗体”为新人教版选修3模块中的专题三动物细胞工程的内容，其中的单克隆抗体技术是动物细胞工程的新技术，与当前人类社会的生活、生产密切相关，是本节课的重点内容；但又因为其实验操作技术复杂，目前普通中学的实验设备和药品配备等都不能满足学生实验需求，故又是难点内容。本节内容还是历年来高考的高频考点。 学情分析 本节课包括动物细胞融合和单克隆抗体两个知识点。高二学生有较强的自主学习、归纳知识的能力，可在课前利用教辅资料和学案进行预习，完成植物体细胞杂交技术和动物细胞融合的比较表格，思考单克隆抗体制备过程的相关问题。学生在前面的学习中已经了解了植物体细胞杂交技术，为动物细胞融合的学习做了知识铺垫。单克隆抗体的制备是本节的重点与难点，学生已在必修一第6章知道了癌细胞的特点、必修三第2章学习了免疫的相关知识，这些知识的储备有助于单克隆抗体的理解。制备过程中多次实验操作的原因及结果是学生较难理解的内容，教师应多加以引导提示，并通过一定程度上的模拟，让学生明了地理解相关知识。单克隆抗体的应用是学生比较感兴趣的内容，且难度较低，可课前让学生小组搜集整理相关资料，在课上分享给全班同学。 核心素养 1.科学思维 建立模型——动物细胞融合的方法和单克隆抗体制备的基本操作流程过程； 2.科学探究 解决问题——运用所学生物学基础知识和相关资料，探究单克隆抗体制备过程中的疑难问题；尝试通过小组合作的方式，提高学生合作学习、探究式学习的能力。 3.社会责任 关注动物细胞融合与单克隆抗体的发展和应用前景。
教学重点 动物细胞融合、单克隆抗体的制备和应用。 教学难点 单克隆抗体的制备过程。 教学手段 通过比较归纳表格培养学生自主学习、知识迁移的能力。 通过模拟单克隆抗体制备过程中的筛选工作这一小组模拟活动，培养学生的小组合作精神和探究学习的能力，采用了体验式学习的方法。 通过探究小组代表讲解单克隆抗体的应用锻炼学生搜集整理信息的能力、语言表达能力等。 课时安排 1课时
2021学年高中生物专题二细胞工程第一节第一课时植物细胞工程的基本技术学案人教版选修3.doc
专题二细胞工程 〔趣味导学〕 1996年7月5日，英国苏格兰罗斯林研究所胚胎学家维尔穆特博士和他领导的基因小组在绵羊无性繁殖技术领域取得重大突破，一只无性繁殖的绵羊已经在他的试验基地出生。这只被命名为“多利”的小羊羔是其“基因母羊”的完全复制品，科学家给利用这种无性繁衍技术生产的羊起名为“克隆羊”。 生物技术诞生后，人们产生了许多奇思妙想，通过细胞工程技术，有的已经变为现实，有的正在努力变成现实。
〔专题概述〕 本专题内容包括两部分，即“植物细胞工程”和“动物细胞工程”，主要讲述了植物细胞工程基本原理和技术、实际应用及动物细胞的培养、动物体细胞核移植技术、克隆动物、细胞融合和单克隆抗体等内容。本专题内容在现代生物科技专题中占有重要地位，也是高考热点之一，应着重掌握。 细胞工程是生物工程的重要内容。现在的高考更加侧重于考查学生能力，因此将有关的学科知识置于细胞工程科研成果的背景材料中考查学生分析综合问题的能力，仍是今后新高考的热点，会涉及：①动物细胞的培养；②单克隆抗体的制备；③利用基因工程技术育种等热点，尤其是单克隆抗体的制备近几年高考考查次数较多。 〔学法指导〕 本专题在学习时应注重： 1．知识的前后联系，加强对基本概念和原理的理解和记忆； 2．变换形式，将课本图解转化为流程图来加深理解和记忆，培养图文转换的能力； 3．通过列表格做比较，我们不仅可以把握生命现象的本质还可以找出基本规律。如比较不同育种方式的原理和优缺点，可以有效地培育生物新品种等； 4．注重与实践相结合，将相关的原理与生产实践和现代科技发展的成果结合起来，强化对知识的理解和应用，尤其是注意不同原理和技术在解决同一问题时的综合运用，增强探究能力，发展发散思维能力； 5．通过实际操作加强对植物组织培养概念的理解，培养实验操作和探究能力； 6．注重收集阅读相关资料，通过讨论开拓视野、培养创新精神。 〔专题重点〕 植物组织培养的原理和过程；植物体细胞杂交的原理；植物细胞工程应用的实例；动物细胞培养的过程及条件；用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程；单克隆抗体的制备和应用。 〔专题难点〕 植物组织培养的实验；用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程；单克隆抗体的制备过程。
fda人用单克隆抗体制品生产及检定考虑要点
人用单克隆抗体制品生产及检定考虑要点 前言 生物制品评价和研究中心（CBER）正在修订1987年的“人用单克隆抗体的生产和检定考虑要点（PTC）”。该最新修订本的目的是向开发单克隆抗体制品的发起人和研究人员提供帮助，包括研究性新药（IND）和产品许可证申请时应提交的资料。 此文件取代了1987年的文件，并反映了在多次国内、国际会议上讨论过的值得重视的经验，这些会议包括： 1．FDA疫苗和相关生物制品咨委会于1990年8月召开的“生物制品潜在逆转录病毒污染”讨论会。 2．由国际生物标准化学会（IABS）发起并于1990年11月在伦敦召开的“生物制品安全性的病毒学方面会议”。 3．由FDA、IABS、NIH、国家疫苗规划办公室、HHS和WHO发起，于1991年3月在Bethesda召开的“传代细胞系当前所面临的问题”的国际性会议。 4．由FDA和NIH联合发起，于1992年1月在Bethesda召开的”单克隆抗体的临床前安全性试验工作会议”。 单克隆抗体和其他生物制品一样都有可供参考的法规（21 CFR部分200～299和600～680）。与CBER制定的其他考虑要点一样，单克隆抗体考虑要点亦不试图包容所有问题。当特殊制品产生特殊的未包括在“考虑要点”中的问题时，则应根据具体情况进行评估。本文及相应的法规本对生产和生产设施进行讨论，发起人应与治疗药物研究和评审办公室及生产企业许可证发放和产品监督办公室磋商。 某些单克隆抗体可由CDER负责主要审查工作，或由CDRH与CBER联合复审，各中心的管辖权依据1991年10月CBER和CDER及CBER和CDRH的内部协议执行。本考虑要点适合于按此协议联合复审的单克隆抗体。 主档案 在研究性新药申请初始阶段不需要全部完成本文中讨论的所有资料，而应在临床开发阶段，由适当的中心以对话方式指导下，使资料不断完善。在某些情况下，在同一设施内以相同的方法制备及检定的单克隆抗体时，资料应归于单一主档案
单克隆抗体的制备、纯化及鉴定
单克隆抗体的制备、纯化及鉴定 一、实验目的： 单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑，它涵盖了细胞培养、细胞融合、免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。了解单克隆抗体制备的原理、主要步骤和方法。 二、实验原理： 骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。经在HAT培养基[含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)]中进行选择性培养，未融合的脾细胞因不能在体外长期存活而死亡；未融合的骨髓瘤细胞合成DNA的主要途径被培养基中的氨基蝶呤阻断，又因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶（HGPRT），不能利用培养基中的次黄嘌呤完成DNA的合成过程而死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，因此能在HAT培养基中存活和增殖。经过克隆选择，可筛选出能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，在体内或体外培养，即可无限制地大量制备单克隆抗体。 三、试剂与器材： 细胞培养板、解剖器械、平皿、酶标仪、加样器、细胞计数板、CO2培养箱、倒置显微镜等。 四、操作方法： 1、抗原制备； 一般而言，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。 A．可溶性抗原（蛋白质）以1mg/ml～5mg／ml的溶液加等量的弗氏完全佐剂乳化，分多点小鼠皮下注射，总量为0.3ml～0.6ml，间隔３～５周再同样注射一次，１０天后，断尾取血一滴，测抗体效价，选滴度高的小鼠做融合试验。
2.2.2_(公开课学案修改)动物细胞融合与单克隆抗体
【学习目标】 1理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义。 2、列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同。 3、理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用。 【预习案】 一、动物细胞融合 1、概念：动物细胞融合也称_________________ 就是指________________ 物细胞结合形成____________ ■勺过程。结果：_____________ 2、动物细胞融合过程： 复习植物体细胞杂交过程，自学书P52,完成下表。 二、复习免疫调节 1 抗原：能够引起机体产生___________________ ■勺物质； 抗体：能够与抗原发生特异性结合的_____________________________ o能产生抗体的细胞是 2、体液免疫过程直接刺激 抗原与抗体结合，抗原失去活性，最终被吞噬细胞清除。 三、单克隆抗体 1原理：一种B淋巴细胞只分泌一种____________ , B淋巴细胞在体外__________ 殖，而肿瘤细胞具有_________ 曾殖的特点，将单个B淋巴细胞与__________________ 4合，可以使杂种细胞具有两个亲本的遗传特性，既能__________ 曾殖，又能产生 ____________ ，即单克隆抗体。2、_______________________________________________ 单克隆抗体：
3、单克隆抗体的制备过程
（1）__________________________________________过程：B淋巴细胞+骨髓瘤细胞 - ____ 田胞、田胞、 ____________________________________田胞、 _________ 田胞、_________ 田胞一____________ 一杂交瘤细胞-克隆化培养和专—抗体检测—_________ —单克隆抗体 （2）杂交瘤细胞的特点：既能在体外大量___________ 又能产生______________ 体。 （3）单克隆抗体的优点：_____________ 、 ___________ 并能大量制备。 4、在生产上的应用：（1）作为诊断试剂，准确识别各种_____________ 质并特异性结合。 （2）用于治疗疾病和运载药物，制成“ ________________ 。 【探究案】 探究一：动物细胞的融合 1为什么灭活的病毒能作为诱导剂？不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 2融合后细胞的类型？杂种细胞遗传物质有什么特点? 探究二：单克隆抗体制备的原理和过程 1传统的抗体生产方法及缺陷是什么？ 2怎样筛选出杂交瘤细胞，有几次筛选，杂交瘤细胞有何优点？原因? 3单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确 顺序连接起来。顺序是？ 已免疫B淋巴细胞注船特定抗原培养骨飽瘤细胞杂交角细胞体外培养 骨髓瘤细胞 F 阳性细胞 E 单克隆抗体 G 抗体检验呈 H 用阳性细胞 注射小鼠 I
人教版选修3动物细胞融合与单克隆抗体学案
专题二细胞工程一一?动物细胞工程 222动物细胞融合与单克隆抗体 课前预习学案 一、预习目标 预习动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程，了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说其应 用实例。 “二、预习内容 ㈠、动物细胞融合 1、抗体 ⑴产生细胞： ____________________ 。⑵成分： ____________ ⑶特点：从 ____________ 中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。 2、单克隆抗体的制备 ⑴过程 给小鼠注射特 定的抗原蛋白 培养骨髓瘤细胞 选择培养基 ----------- ? ⑵杂交瘤细胞的特点： __________________________ 、 _______________________ 。 ⑶单克隆抗体的优点： ________________ 、 ______________ 、 _____________ 。 ㈢、单克隆抗体的应用 1、 作为诊断试剂，具有 ____________ 、 ____________ 、 ___________ 、 ____________ 的优点。 2、 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗 _____________ 、可制成 _____________ 。 三、提出疑惑 同学们，通过你的自主学习，你还有哪些疑惑，请把它填在下面的表格中 疑惑点 疑惑内容 1、 2、 3、 4、 概念 结果 过程 意义 _______ 或— 形成 __________ 两个或多个细胞 动物细胞结合形一个细胞的过程，也称细胞杂交。 °灭活的病毒或PEG ‘ 克服了 _____________ 的不亲和性，成为研究 _______ 培育的重要手段。 ㈡、单克隆抗体 O 、肿瘤和 从 ________ 中分 离B 淋巴细胞 -骨髓瘤细胞 抗体 小鼠体内培 养 体外培养
《动物细胞融合与单克隆抗体》导学案
2.2.2. 动物细胞融合与单克隆抗体 【学习目标】 1.通过观察图片、阅读文本，能够了解动物细胞融合的原理、过程和意义。 2.通过师生交流、图像分析，能够理解单克隆抗体制备的过程和应用。 【教学重点】 单克隆抗体的制备和应用。 【教学难点】 单克隆抗体的制备过程。 【导学诱思】 一、动物细胞融合 1、概念：_______或_______动物细胞结合形一个细胞的过程，也称细胞杂交。 2、结果：形成___________。 3、过程：两个或多个细胞 灭活的病毒或___________________________________。 ?PEG ?→ ? ? ? ? 4、意义：克服了___________的不亲和性，成为研究___________、___________、肿瘤和_______________培育的重要手段。 二、单克隆抗体 1、抗体 （1）产生细胞：_________________。 （2）成分：__________。 （3）特点：从__________中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。 2、单克隆抗体的制备 （1）过程
（2）杂交瘤细胞的特点：____________________、____________________。（3）单克隆抗体的优点：____________、____________、____________。 三、单克隆抗体的应用 1、作为诊断试剂，具有__________、__________、__________、__________的优点。 2、用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗_______、可制成___________。【探究案】 任务一：动物细胞融合 1、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理 融合过程 诱导方法 结果 应用培育植物新品种 意义 相同点原生质体融合原理相同；原生质体融合的方法相似 2、不灭活的病毒能作为诱导剂吗？为什么可以使用灭活的病毒促进动物细胞融合？ 3、为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？
单克隆抗体的制备 教学设计
2.2.2 单克隆抗体的制备 【教材分析】 高中生物新课程标准对本节的要求是“举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用”。其中知识性目标行为动词是“举例说出”为了解水平，具体内容要求是“动物细胞融合和单克隆抗体”。教学重点是单克隆抗体的制备和应用，教学难点是单克隆抗体的制备过程。 【学情分析】 学生已经学习了“植物细胞工程”中的植物体细胞杂交技术，对杂交的方法和过程有了初步的知识基础。必修1知道了“人—鼠细胞融合实验”，理解了生物膜的流动性。必修3学了“免疫调节”，知道抗原刺激机体后，会发生免疫反应产生抗体，抗体和抗原特异性结合，同时在本章第二节已经学习了动物细胞培养技术，以及动物细胞融合技术，所以本节课的主要内容就是启发学生们回顾所学并设计单抗的制备过程，综合性比较强。 【教学目标】 1.知识与技能： 举例说出动物细胞融合与单克隆抗体制备的的原理和应用；培养创新精神和利用所给信息和所学知识解决实际问题的能力。 2.过程与方法： 结合教材“单克隆抗体制备过程示意图”，学生自主构建单克隆抗体制备的技术环节，从而领悟到单克隆抗体技术的非凡创造性，并且提高合作能力和探究能力。 3.情感、态度与价值观方面： 通过本节课学习，提高学生创新意识，勇于开拓，不墨守成规；渗透科学态度、科学方法和科学精神的养成教育；培养探索新知的兴趣和能力。 【教法设计】 《单克隆抗体制备》采用问题串的形式开展教学。通过多个逐渐递进的问题层层设疑，加之不断启发，引导学生对各难点逐一击破，深刻领悟单抗制备原理，并带领学生对该流程复述加以强化，以达到熟练掌握目的。同时精选例题，突破难关。 【教学准备】制作多媒体课件，展示单抗制备流程、图片、问题、例题及习题等。【教学过程】
单克隆抗体制备的技术原理
单克隆抗体制备的技术原理 单克隆抗体是由一个杂交瘤细胞及其后代所产生的抗体，具有单一、特异与纯化的特性。该抗体在医学临床诊断及治疗上具有极其重要的作用。因此它的问世在现代免疫学上具有划时代的意义。 大家知道，当外源性物质在人体或动物血液中出现时，机体中有一些淋巴细胞便会做出反应，产生一些特殊的免疫球蛋白，叫做抗体。而那些外源性物质则称为抗原。抗体与抗原能发生特异结合，从而清除异物，达到保护肌体的作用。抗原不同，它所诱发的抗体也不一样。如细菌或病毒表面存在着几种抗原，因此它们就会对应地诱发出几种不同的抗体。过去人们为了获得抗体，就根据上述原理，反复注射某种抗原到动物（如兔、羊、马等）体内，然后从其血清中分离出所需的抗体。长期以来，用这种经典方法得到的抗体，往往存在着两个严重的缺点：第一，这些抗体不是均质的，而是一种抗体的混合物，特异性差，效价低；第二，抗体的产生是有限量的，因为分泌抗体的成熟淋巴细胞寿命很短，一般只能存活几天，无法大量生产。 为了克服上述缺点，许多免疫学家曾进行了长期的研究与探索，这一难题终于在1975年被国外两名免疫学家考勒和米尔斯坦解决了。他们利用自己创立的杂交瘤技术，使产生抗体的淋巴细胞能在体外长期存活，并源源不断地分泌抗体。这就是有高特异性和非常均质的单克隆抗体。 单克隆抗体的技术原理并不十分复杂。它是把能产生单一抗体的淋巴细胞与有增殖能力的骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞，又称杂交瘤。由于这些杂种细胞继承了双亲细胞的遗传物质，因此它们不仅能表现出淋巴细胞分泌单一抗体的能力，而且还能表现出骨髓瘤细胞在体外大量繁殖的本领。就这样，取长补短，使杂交瘤变成了一座制造单克隆抗体的理想“工厂”。 目前制备单克隆抗体的具体方法，主要有以下三步（图2－9）。 第一步：将抗原注射到小鼠体内进行免疫，取出受免脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞融合。 第二步：用选择培养基，选出杂交瘤细胞，逐一克隆或扩增，从中挑出能产生抗体的杂交瘤细胞。 第三步：将杂交瘤细胞接种在培养瓶中扩大培养或注射到动物的体液中作为腹水癌生长，然后再分离纯化单克隆抗体。
《动物细胞融合与单克隆抗体》教学反思王小丽
《动物细胞融合与单克隆抗体》教学反思 《动物细胞融合与单克隆抗体》是《动物细胞工程》的重点内容，其中的动物细胞融合技术主要用于制备单克隆抗体。本节内容以学过的植物体细胞杂交、免疫等知识为基础，能使学生全面认识植物体细胞杂交与动物细胞融合的异同、动物细胞融合的意义以及单克隆抗体的制备与应用。那么，如何有效开展这节内容的教学，在自己设计的基础上，在完成课堂教学的基础上反过来看，我认为应该做到以下几点： 第一，情境的创设创设情境组织教学是基于建构主义的教学观。我们创设的情境最好是一个真实的客观现实，这样基于现实2的情境会让学生快速的卷入到教师的教学活动过程中来。基于常州是中国癌症高发区，癌症治疗学生有他们的生活经验。我利用癌症的治疗作为情境导入新课，基于学生的生活经验，询问学生会出现何种不良反应。学生能够提出自己的观点进行共享。然后任务驱动学生如何解决？让学生联系已经学过的知识来解决问题。学生联系到抗体。 第二，如何处理已学知识与新课学习的关系已有知识是学生学习新课的前提。学生的学习一定是建立在已有经验的基础上建构性学习。是在已有知识基础上的同化和顺应的有意义学习。如何处理两者关系和教学安排是我们教师应该设计的。我的处理是在学生想到抗体的基础上自然回忆抗体的产生细胞及细胞特点（如一种实质为浆细胞的免疫过的B淋巴细胞只产生一种抗体）、相关结构、作用和作用特点，以及传统手段生产抗体的不足。在认知冲突后猜想问题解决。学生基于植物体细胞杂交迁移的基础上猜想动物细胞融合的实现，并猜想融合后的效果。即融合细胞具有产生抗体和无限增殖的双重特点。 第三，动物细胞融合的教学由于前面有细胞融合的学习基础，可以弱化处理。可以简单的通过图片和动画组织相关内容的学习。通过动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较实现有关的学习。组织学生进行细胞融合对象、作用和意义的自我习得。 第四，关于单克隆抗体制备过程的教学我的想法很简单，基于学生看书的情况下，教师利用图片组织教学。需要注意的是要引导学生对图片信息的提取和语言的有效阐述。基于图片的再次开发性讲授，让学生明白和把握全流程相关知识。并用流程图阐述有关知识。