刘林博士等解析胚胎发育早期端粒酶活性机制

日期：2008-01-29 来源：Nature Cell Biology 作者：keeii 点击：45次

摘要：

一个由南佛罗里达大学医学院、中山大学生命科学学院等组成的国际科研小组近日在Nature Cell Biology发表文章，他们在最新研究中发现胚胎早期分裂时期，端粒长度的增加存在另一种循环机制，而非之前认为的取决于端粒酶的活性，这对于进一步研究干细胞的机理具有重要意义。

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一个由南佛罗里达大学医学院、中山大学生命科学学院等组成的国际科研小组近日在Nature Cell biology发表文章，他们在最新研究中发现胚胎早期分裂时期，端粒长度的增加存在另一种循环机制，而非之前认为的取决于端粒酶的活性，这对于进一步研究干细胞的机理具有重要意义。

文章的通讯作者是中山大学国家教育部“长江学者奖励计划”特聘教授刘林博士，以及佛罗里达州大学医学院的David L.Keefe博士，其中刘林博士早年毕业于北京农业大学(现中国农业大学)，2003年被聘为中山大学国家教育部“长江学者奖励计划”特聘教授，研究方向为干细胞转基因克隆及哺乳动物早期发育的分子机制。2007年被聘为南开大学生命科学院特聘教授，兼副院长主管研究生工作。研究方向：在发育生物学和生殖生物技术领域，尤其是在最终能造福人类健康的胚胎工程和再生医学领域，进行基础科学及生物医学应用方面的研究，如哺乳动物(包括人类)卵子、胚胎及干细胞等生殖与发育相关的机理与技术工程研究。

组织中的干细胞具有自我更新的能力，当组织衰老时，可以产生分化细胞来代替死去的细胞。休眠的干细胞(quiescent stem cells)特异性的位于一些特殊的微环境中(specific microenvironments)。当需要的时候，它们开始增殖，并从这些微环境中出来。这个过程被认为是由微环境中细胞外的线索(extracellar cues)和固有的遗传程序控制。通过对小鼠模型的研究，Flores等人发现，表皮的干细胞(epidermal stem cell)的活动由端粒调节。端粒是染色体末端的一种核蛋白(nucleoprotein)。短的端粒抑制干细胞的活动(mobilization)。而合成端粒的端粒酶的过度表达(over expression)，促进干细胞的活动。端粒对干细胞功能的影响至少可以部分说明它们在衰老和癌症中的作用。

端粒酶(telomerase)的表达对于维持干细胞自我更新能力和复制潜能具有重要意义，雄性生殖系和干细胞中端粒酶活性高，但是在成熟卵母细胞和卵裂期(cleavage stage)胚胎中，端粒酶活性降低或消失，之后胚泡(blastocyst)中又重新恢复活性。目前对于早期胚胎重排端粒长度的了解还很少。

在这篇文章中，研究人员发现卵母细胞的端粒虽然比体细胞端粒短，但是在早期分裂发育阶段端粒长度会大幅度增加，而且孤雌生殖(partheno genetic al)卵母细胞的端粒长度也会增加，因此研究人员认为卵母细胞本身具有延长端粒的能力。

更重要的是，研究人员在端粒酶缺失的小鼠的早期分裂胚胎中发现端粒竟然也会延伸，这说明端粒酶在这些细胞中并不是端粒突然增长的原因。那么是什么导致了端粒增长呢?

通过进一步实验，研究人员发现，伴随着端粒增长，能观察到端粒姐妹染色体交换(telomere sister-chromatid exchange，T-SCE)延伸，与DNA重组蛋白Rad50和TRF1的同位化(colocalization)，而在胚泡期这两者又会减少，同时伴随着端粒酶活性增加，端粒延伸减慢。

研究人员从这些现象中得出结论，在胚胎分裂阶段，端粒长度取决于一种基于重组的机制循环，端粒酶只是起到通过这种可变机制维持端粒长度的作用。端粒长度的增加并非取决于端粒酶的活性。

作者简介：

刘林，男，博士，教育部“长江学者”奖励计划特聘教授，国家杰出青年基金获得者。

电子邮件：liutelom@https://www.360docs.net/doc/de8796420.html,

1993年获北京农业大学(现中国农业大学)动物生殖学与生物技术博士学位。1994年至1996年赴英国剑桥Babraham研究所发育及信号传递系分子胚胎学实验室作访问学者及博士后研究，研究卵子孤雌激活，猪、羊胚胎生殖干细胞、核移植克隆，精子注射。1996年至1998年在美国康奈尔大学，康州大学作动物科学系博士后研究，研究分子胚胎学、卵子激活的细胞周期调控、牛和兔的体细胞核移植克隆和转基因。1998年至2004年，在美国布朗大学妇产科系生殖医学实验室，任研究员、助理教授，研究早期胚胎发育核质相互作用，老龄卵子及胚胎细胞凋亡的信号传递及分子机制、胚胎非侵入性显微操作，与年龄相关的卵子不育中线粒体和端粒的功能、核移植、成体干细胞和分化。1998年至今，美国海洋生物学实验室(MBL)兼职研究员。2003年被聘为中山大学国家教育部“长江学者奖励计划”特聘教授。研究方向为干细胞转基因克隆及哺乳动物早期发育的分子机制。2005 年兼聘于南佛罗里达大学妇产科系访问助理教授。2007 年被聘为南开大学生命科学院特聘教授, 兼副院长主管研究生工作。研究方向：在发育生物学和生殖生物技术领域，尤其是在最终能造福人类健康的胚胎工程和再生医学领域，进行基础科学及生物医学应用方面的研究，如哺乳动物(包括人类)卵子、胚胎及干细胞等生殖与发育相关的机理与技术工程研究。

科研工作先后获得国家教育部博士点基金，国家自然科学基金，英国海外发展中英技术合作基金，美国农业部，美国卫生部，康乃尔大学及康州大学博士后基金，布朗大学妇女儿童医院教师研究基金，中国卫生部部属(管)医疗机构临床学科重点、广州市科技计划项目、中国-加拿大国际合作项目等科研基金的资助。刘林教授于1996年在世界首次获得用细胞周期同步化在分裂期及用体外成熟卵子做核受体的三只胚胎克隆绵羊。首次发现小鼠端粒变短及功能异常导致卵子减数分裂异常。先后在包括Nature Biotechnology, Proc Natl Acad Sci USA, EMBO Reports, JBC, Developmental Biology等SCI收录杂志上发表学术论文近50篇。还有40余篇摘要发表在国际科学会议论文集中。先后被国际会议及国外高校邀请作报告20余次。曾获得多项奖励，包括2003年度美国生殖医学会辅助生殖技术奖。作为会员主要参加：美国科学促进学会(AAAS);纽约科学院学会(NYAS);生殖研究学会(SSR);国际胚胎移植学会(IETS);中国动物学会生殖生物学分会第五届理事会理事。

原文摘要：

Telomere lengthening early in development

Stem cells and cancer cells maintain telomere length mostly through telomerase1, 2, 3. Telomerase activity is high in male germ line and stem cells, but is low or absent in mature oocytes and cleavage stage embryos, and then high again in blastocysts3. How early embryos reset telomere length remains poorly understood. Here, we show that oocytes actually have shorter telomeres than somatic cells, but their telomeres lengthen remarkably during early cleavage development. Moreover, parthenogenetically activated oocytes also lengthen their telomeres, thus the capacity to elongate telomeres must reside within oocytes themselves. Notably, telomeres also elongate in the early cleavage embryos of telomerase-null mice, demonstrating that telomerase is unlikely to be responsible for the abrupt lengthening of telomeres in these cells. Coincident with telomere lengthening, extensive telomere sister-chromatid exchange (T-SCE) and colocalization of the DNA recombination proteins Rad50 and TRF1 were observed in early cleavage embryos. Both T-SCE and DNA recombination proteins decrease in blastocyst stage embryos, whereas telomerase activity increases and telomeres elongate only slowly. We suggest that telomeres lengthen during the early cleavage cycles following fertilization through a recombination-based mechanism, and that from the blastocyst stage onwards, telomerase only maintains the telomere length established by this alternative mechanism

小鼠早期胚胎发育和胚胎移植

小鼠早期胚胎发育和胚胎移植 https://www.360docs.net/doc/de8796420.html,/4544.htm、小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移植技术在畜牧业已开始应用于生产。一些发达国家已有经营奶牛和肉牛胚胎移植的企业公司，向国外销售胚胎。在我国，这一技术的研究起步较晚，1974年在绵羊上获得成功，1978年在奶牛上获得成功，80年代后期90年代初，奶牛、安哥拉山羊和绵羊的胚胎移植开始在生产上应用。胚胎移植术也是显微操作中最基本的实验技术，是从事其它显微操作如嵌合体动物、胚胎干细胞、转基因动物和细胞核移植等实验必不可少的步骤。下面以小鼠为例，介绍哺乳动物的早期胚胎发育及胚胎移植的操作过程。实验技术一、人工催情和超数排卵 1. 小鼠的性别鉴定：成年小鼠的性别较易鉴别。雌鼠可见有明显的阴道开口和明显的五对乳头，雄鼠可见明显的阴囊，仔鼠或幼鼠则主要以它们的外生殖器与肛门的距离来区别，距离近的为雌鼠，距离远的为雄鼠。 2. 人工催情：成年小鼠在非妊娠和非哺乳期间，任何时间都可发情，性周期为4-5天。超数排卵一般选用体重在20-30g的雌鼠，注射孕马血清（PMSG）促使超排。每头雌鼠注射PMSG 5-10IU，注射时间可在第一天下午4时左右，注射部位为腹腔。在第三天的下午4时左右腹腔再注射绒毛膜促性腺激素（hCG）5IU，并和雄鼠合笼饲养让其自然交配。第四天上午8时左右检查雌鼠，如有阴道栓形成者，即可供采卵。阴道栓是雌鼠交配后精液与阴道分泌物及阴道上皮等凝结而成的，位于阴道口附近，一般在交配后数分钟即可出现（图16.3）。最初阴栓湿润而软，随后逐渐变硬转为黄色，最后阴栓缩入阴道液化而消失，此过程需10余小时，有的在24-48小时后仍可见。在合笼后每天上午8-9 时，下午5-6时检查阴栓，出现阴栓即可认为是妊娠的第一天，即胚龄的第一天。二、受精卵及囊胚的获得 1. 受精卵的获得：将检查有阴栓的小鼠用脊椎脱臼法处死，70%酒精消毒腹部。在腹部中央横剪一小口（0.5cm 宽），将两边皮肤肌肉沿切口部剪开，暴露腹部器官；用剪刀和镊子除去卵巢、输卵管和子宫周围的脂肪组织，把输卵管取出（图16.4，16.5），置于盛有培养液的表面皿中。在解剖镜下找到输卵管膨胀的壶腹部，用镊子撕开一小口，卵子即自然流出（图16.6）。如受精卵已迁移到输卵管的狭窄部，则可用冲洗法收集受精卵。方法是：在解剖镜下找到输卵管喇叭口，可以用小玻璃探针帮助，将吸有冲卵液的注射器针头对准喇叭口，右手用小镊子轻轻将喇叭口套在针头上，套进约1mm即可，并用镊子把管

goosecoid在斑马鱼早期发育中的作用.doc

goosecoid在斑马鱼早期发育中的作用 Wnt/β catenin信号通路在早期胚胎发育中起到非常重要作用,它调控胚胎背腹图式发生。goosecoid(gsc)基因是经典Wnt信号通路的下游靶基因之一,同时对Wnt信号起负反馈抑制作用。之前报道中,gsc在小鼠和人中突变之后都会产生骨骼发育不全等症状,而目前关于gsc在斑马鱼中的具体生理功能还不是很清楚。之前研究表明,用吗啡基-吗啉基技术(Morpholino,MO)敲低斑马鱼gsc,无明显缺陷。MO由于其作用时间短的限制,不能很好的研究基因在后期发育中的功能。而近年来的出现的基因编辑技术如TALENs,有着靶向高,操作方便的优点,成为可以用于基因功能的研究的新工具。为了研究gsc在斑马鱼中的具体功能,我们利用TALENs技术,构建了斑马鱼gsc突变体模型,用于研究gsc在斑马鱼中的早期发育中的作用。得到的结果如下:(1)利用TLANEs技术敲除斑马鱼gsc,筛选得到移码缺失7bp的突变体。(2)gsc杂合突变体自交结果显示,突变体早期无明显背腹缺陷,但发育至受精后第五天(5 dpf)时,鱼鳔发育缺陷。测序表明鱼鳔缺失个体为纯合突变体,经统计其占全部胚胎的21%。表明gsc 突变与鱼鳔缺陷是相关的。(3)对gsc突变体进行石蜡切片及苏木精伊红(HE)染色,结果显示,突变体鱼鳔结构存在。 (4)gsc突变体中,鱼鳔标记基因hb9原位杂交结果显示,鱼鳔发生未受到影响。表明突变体鱼鳔结构正常,但未充气。(5)充气由口、咽、鳔管等多个器官协调完成,而gsc后期特异表达在咽部。 gsc突变体咽部软骨阿尔新蓝染色,及石蜡切片,苏木精伊红染色,结果均表

斑马鱼的胚胎发育与影响因素

鲁东大学生命科学学院学院20 10 －20 11 学年第二学期学院______________ 专业_____________ 年级________ 班________ 学号 _____________姓名______________ 密封线学生须将文字写在此线以下《发育生物学》课程论文课程号：2522080

.关键词：斑马鱼；发育；葡萄糖；溶液浓度；温度；TCDD 一、斑马鱼简介斑马鱼(zebra fish)，又名蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼。斑马鱼是一种常见的热带鱼。斑马鱼体型纤细，成体长3-4cm，对水质要求不高。孵出后约3个月达到性成熟，成熟鱼每隔几天可产卵一次。卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明。发育温度要求在25-31℃之间。斑马鱼由于个体小，养殖花费少，能大规模繁育，且具许多优点，吸引了众多研究者的注意。经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库里有相关斑马鱼的资料可供查询和下载，方便了研究。斑马鱼的细胞标记技术、组织移植技术、突变技术、单倍体育种技术、转基因技术、基因活性抑制技术等已经成熟，且有数以千计的斑马鱼胚胎突变体，是研究胚胎发育分子机制的优良资源，有的还可做为人类疾病模型。斑马鱼已经成为最受重视的脊椎动物发育生物学模式之一，在其它学科上的利用也显示很大的潜力. 二、斑马鱼的发育过程 1〕卵子的发生斑马鱼卵子发生过程中乱母细胞的发育是不同步的。在卵子发生早期，核内许多小核仁开始富集，其数目在接下来的时期中可以达到1500个，他们分布在和的外围和靠近内部核膜。斑马鱼卵子发生过程一般分为5个时期，即StageⅠ-Ⅴ;有时也将StageⅡ和Ⅲ作为一个时期将卵子发生分为4个时期。各个时期的基本特征是： StageⅠ是原始滤泡生长阶段，乱母细胞没有卵黄，是一个有细胞质包围着升值滤泡的圆形球体。其染色体去浓缩并出现灯刷装状表型，此时DNA高度延伸，形成一个具有典型形态学上的包含RNA和蛋白质的恻环。染色体的这一构型被认为有利于母源性基因的转录激活，其出现与斑马鱼卵母细胞中RNA合成的高速率是一致的。在这时期，卵母细胞和滤泡细胞的微小突起（microvilli）开始伸展并延伸到彼此的区域。一旦形成，这些连接包含粘附连接、细胞桥粒和间隙连接，它们可能与滤泡细胞和卵母细胞间的交流和卵母细胞附近小分子的吸收有关。同时，卵黄膜组分开始在滤泡细胞和卵母细胞之间富集；其他结构，如线粒体、高尔基体和内质网等富集，反映了产生大量产物的需要。 StageⅡ卵母细胞的特点是富集了大量蛋白质和油脂，对于卵子激

小鼠早期胚胎发育的研究 )

小鼠早期胚胎发育的研究（实验方案）基础生物学课程设计所在学院生物科学与工程学院专业班级生物科学学生姓名学生学号指导教师 XXXX年XX月XX日小鼠早期胚胎发育的研究一、引言胚胎发育一词通常是指从受精卵起到胚胎出离卵膜的一段过程。而无脊椎动物胚胎学家则常把其概念扩展到胎后发育直到性成熟，甚至整个生活史。动物胚胎的发育过程虽然动物的种类繁多，但是胚胎的发育依然拥有相似的过程，能够分成受精、卵裂、桑葚胚、囊胚、原肠胚与器官形成等阶段。此外脊椎动物的胚胎发育过程中，各种动物共同拥有的特征会首先出现(如皮肤)，之后才逐渐发展出特化的构造(如鱼鳞)，而且较复杂的物种与较原始的物种之间一开始相当类似，之后才随着发育的时间而慢慢增加变异。受精:卵子和精子融合为一个合子的过程。它是有性生殖的基本特征，普遍存在于动植物界，卵裂:精子与卵子结合之后会形成受精卵，由于卵黄的分布具有不对称的特性，因此受精卵可以分为动物极(会发展成外胚层)和植物极(会发展成中胚层与内胚层)。在卵裂时期，卵子会先分裂成两个细胞，之后细胞通常会逐次倍增，但是

对哺乳类而言，有时候会有不同时分裂并造成只有奇数个细胞的现象。在这个阶段，胚胎的总体积大致不变。不同的物种具有不同的卵裂方式，可以分为完全卵裂(holoblastic cleavege)和不完全卵裂(meroblastic cleavage)，分别又可以细分成许多不同方式。如无脊椎动物的辐射卵裂与螺旋卵裂、哺乳动物的旋转式分裂等。原肠胚:当细胞分裂成为囊胚之后，会经过一段称为原肠形成的型态发生过程，之后形成原肠胚。原肠形成过程有许多不同方式，能够大致分成5种:内陷式(Invagination)、衰退式(Involution)、进入式(Ingression)、脱层式(Delamination)、包覆式(Epiboly)，动物的胚胎利用这5种方式形成了外胚层、中胚层与内胚层的组合，而这三种胚层在之后会形成各种细胞。例如由内胚层发展而来，具有具有多潜能性的的间叶细胞，可以分化成纤维母细胞、软骨母细胞、硬骨母细胞、脂肪细胞、平滑肌细胞、横纹肌母细胞、造血母细胞等等。器官形成:外胚层、中胚层与内胚层形成各种组织和器官的过程，称为器官形成，也称做器官发生。以青蛙的胚胎为例，在器官形成的早期，外胚层会在突起之后向内凹陷，形成神经脊与神经管;中胚层则会形成中胚叶节(somite)与脊椎，中胚叶节包围的空间称为体腔。小鼠应用于生命科学研究中已有上百年的历史，成为研究人类遗传疾病的最佳动物模型。它是最小的哺乳动物之一，体形小，易于饲养管理;繁殖和发育速度都特别快;性情温顺，胆小怕惊;对外来刺激极为敏感;便于提供同胎和不同品系动物;成雌鼠在动情周期不同级段，阴道粘膜可发生典型变化，根据阴道涂片的细胞学改变，可以推断卵巢功能的周期性变化，且市场价格较低，。虽然小鼠和人类在体型大小和形态上相差很大，但在生物进化上非常接近。所以以小鼠作为研究人类遗传疾病的材料最为合适。

早期胚胎发育

榆林市苏州中学年级高二学科生物学期二编写人：张瑞审核人：审批人：授课教师：班级：小组：姓名：日期4.23 课时编号17 体内受精和早期胚胎发育 (二) 【学习目标】．1.简述哺乳动物的受精过程。 2．简述哺乳动物的胚胎发育过程及其主要特点。【学习重点】 1.受精过程。 2.早期胚胎发育过程及主要特点【学习难点】早期胚胎发育过程及主要特点受精作用 1．场所：。 2．过程：（1）准备阶段： ①准备阶段1 精子；精子必须在发生相应生理反应后，才获得受精能力。 ②准备阶段2 卵子的准备在（）内达到期时，卵子才具备与精子受精的能力。（2）受精阶段 ①精子穿越和首先发生反应，是顶体内的释放出来，直接溶解卵丘细胞间的物质，穿越放射冠。穿过放射冠的精子立即与接触，随后将透明带溶出一条孔道，精子借自身穿越透明带。精子触及卵黄膜的瞬间，会产生阻止后来的精子进入透明带的生理反应，这个反应叫做反应，它是防止多精入卵受精的第一道屏障。 ②精子进入卵黄膜表面有大量的，能抱合精子，随后，精子外膜与卵黄膜融合，精子入卵。精子入卵后，卵黄膜会立即产生一种生理反应，拒绝其他精子再进入卵内，这种生理反应称作作用，这是防止多精入卵受精的第二道屏障。 ③ 形成 a ．雄原核的形成：精子脱离，并且原有的破裂，随后，精子形成一个比原来精子还的核，叫做雄原核。 b ．雌原核的形成：精子入卵后，卵子被激活，完成分裂，排出后，形成雌原核，雌原核一般略于雄原核。 ④配子结合胚胎发育一、探究问题 1. 发生受精的部位在哪？描述受精的各个阶段的特征？ 2,受精卵发育的部位在哪里？受精卵形成早期胚胎经历哪些阶段，每一阶段有什么特点？二、课堂检测

斑马鱼胚胎发育过程中Mef2c的表达

万方数据

复旦学报（医学版）２００６年１月，３３（１）脏的发生与发育过程中的作用提供依据。材料和方法斑马鱼胚胎固定收集不同发育时期的ＡＢ野生型斑马鱼（购自俄勒冈大学，斑马鱼养殖系统从美国ＡｑｕａｔｉｃＨａｂｉｔａｔｓ公司引进）胚胎：６ｈｐｆ（ｈｏｕｒｓｐｏｓｔ—ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，受精后６ｈ）、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１７、２０、２４、３６、４８ｈｐｆ，用４％多聚甲醛溶液固定过夜（至少固定１２ｈ），保存于甲醇溶液中，置一２０℃备用。引物设计与合成首先根据Ｇｅｎｂａｎｋ数据库查得斑马鱼Ｍｅｆ２ｃｃＤＮＡ序列（Ｇｅｎｂａｎｋ：３０５７５），以包含密码子１３１９～２３８５位的基因序列为ＲＮＡ探针序列，探针序列总长１０６６ｂｐ。ＲＮＡ探针的引物序列（由上海赛百盛生物有限公司合成）为：Ｆｏｒ—ｗａｒｄ：５＇－ＣＴＣＡＡＡＴＡＣＧＧＡＡＡＡＧＣＴＡＣ一３７Ｒｅｖｅｒｓｅ：５＇－ＣＧＣＣＣＧＴＧＧＧＡＣＴＧＡＴＧＡＧＡＧ一３７。ＰＣＲ扩增以斑马鱼基因组总ＤＮＡ为模板，用以上两条引物特异扩增ＲＮＡ探针序列。扩增条件为：９５℃预变性２ｍｉｎ，９５℃变性４５Ｓ，５７℃复性４５Ｓ，７２℃延伸２ｍｉｎ，重复３０个循环，最后７２℃延伸７ｍｉｎ。１％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。合成反义ＲＮＡ探针将纯化的扩增产物连接到ｐＧＥＭ—Ｔ载体（Ｐｒｏｍｅｇａ）中，然后转化到ＤＨ５ａ感受态菌株（博大泰克）中进行克隆。根据Ｈａｒｌａｎｄ的方法［４３抽提转染后的连接载体质粒（测序验证质粒中插入序列是否正确），ＮｏｔＩ内切酶（ＮＥＢ）酶切完全，以其为模板转录合成反义ＲＮＡ探针。整体原位杂交取不同发育时期的胚胎，用１×ＰＢＳＴ溶液洗去多余的甲醇溶液，将胚胎置于６５℃水浴进行预杂交３ｈ，然后加入所合成的反义ＲＮＡ探针６５℃水浴杂交过夜。多余的探针用０．２×ＳＳＣ溶液洗去，加入ａｎｔｉ—Ｄｉｇ—ＡＰ（Ｒｏｃｈｅ）与反义ＲＮＡ探针结合过夜。未结合的抗体用１ＸＰＢＳＴ溶液洗去，再加入ＢＣＩＰ／ＮＢＴ／ＮＴＭＴ溶液显色３０ｍｉｎ，迅速用１ＸＰＢＳＴ溶液洗去多余的显色液，在显微镜下观察并记录结果。结果探针合成效果琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，本实验中设计的引物能够特异性地扩增目标基因片段。图１Ａ为特异扩增的ＲＮＡ探针序列电泳检测结果，扩增的ＲＮＡ探针序列大小约１０６６ｂｐ。图１Ｂ为酶切后电泳迁移率的改变，２、３泳道是未被酶切的质粒序列，４、５泳道是酶切后的质粒序列。酶切后质粒电泳速率要比未酶切质粒的速率要快。同时，我们将该序列测序后进一步验证（由上海赛百盛生物有限公司测序），连接至ｐＧＥＭ—Ｔ载体中的ＲＮＡ探针的序列是正确的。图ｌ凝胶分析ＰＣＲ结果（Ａ）和质粒酶切结果（Ｂ）Ｆｉｇ１ＧｅｌａｎａｌｙｓｉｓＰＣＲ（Ａ）ａｎｄｐｌａｓｍｉｄ（Ｂ）Ａ：１：ｍａｒｋｅｒ；２－５；ＲＮＡｐｒｏｂｅ．Ｂ：１：ｍａｒｋｅｒ；２－３：Ｍｅｆ２ｃＲＮＡ—ｐＧＥＭＴ；４－５：Ｍｅｆ２ｃＲＮＡ－ｐＧＥＭＴｃｕｔｂｙＮｏｔ－１斑马鱼整体原位杂交在斑马鱼胚胎发育早期，Ｍｅｆ２ｃ在胚体中没有自身的转录产物，仅少许从母体自带的Ｍｅｆ２ｃｍＲＮＡ存在，胚体染色呈现为弥散均染状态（图２：ａ，ｂ见封二）。当胚胎逐步发育到１３ｈｐｆ，Ｍｅｆ２ｃ在体节中开始表达，此时约已形成８个体节，表现为在背侧出现两条条带状的深染部位；同时，在心脏中的表达也开始出现，在靠近头侧部出现有深染的片状区域，代表早期的生心区的细胞中有Ｍｅｆ２ｃ表达（图２：ｃｌ，ｃ２见封二）。当胚胎发育至１５ｈｐｆ时，体节以及心脏中Ｍｅｆ２ｃ的表达更加明显，Ｍｅｆ２ｃ在体节的表达表现为各个体节之间能清晰区分，并表现为典型的Ｖ型结构；同时，心脏中的表达表现为生心区细胞开始集中，逐步靠近体轴开始形成心管结构，体现出染色更为集中，由片状染色转变成为线状（图２：ｄｌ，ｄ２见封二）。随着胚胎进一步发育，体节逐步完善，心管逐步形成，Ｍｅｆ２ｃ仍然保持较高的转录水平，体节中表现为随着体节的增多，Ｖ型染色的体节也随之增多；在心脏的表达呈现出明显的线管状结构（图２：ｅ，ｆ见封－－）。斑马鱼的胚胎发育随着时间的进展而逐步完　万方数据

斑马鱼性腺促熟及早期发育模式

斑马鱼性腺促熟和早期发育模式 XXX,YYY,ZZZ 一、目的与要求： 1、掌握斑马鱼性腺促熟和产卵调控技术。 2、加深硬骨鱼早期形态发育模式的理解。二、实验内容：（一）斑马鱼性腺促熟和产卵调控。 1、斑马鱼特性：斑马鱼一般4月龄性成熟，5月龄鱼繁殖较好；繁殖周期短，一般7天左右。雌雄分辨：雌性（偏银灰色，体形丰满，腹部膨大、松软，仰腹可见有明显的卵巢轮廓，手摸富有弹性）；雄性（偏柠檬色，腹部扁平，身材显得修长）。【如图一、图二】图一：雄鱼图二：雌鱼精、卵体外受精，体外发育，且速度快。发育速度与温度密切相关：在25℃的培养条件下，从受精卵到孵化约需36h；在28℃的培养条件下，从受精卵到孵化约需24h，即胚胎发育成熟。 2、斑马鱼繁殖准备：将亲鱼雌、雄分开饲喂2～3天（要在饲养箱中加一玻璃隔板，将雌、雄分开，但同时相互之间又要能够看到），繁殖时将雌、雄按1：1或2∶1比例放入产卵池中进行产卵受精。在此过程中一般采用10h光照，14h黑暗的光周期。斑马鱼一般在混合的次日凌晨产卵，为防止亲鱼吞噬鱼卵，可用网孔2～3mm的网将亲鱼限制在产卵池的上半部活动，以防止亲鱼吞吃鱼卵。每条雌鱼可产卵300～1000粒。（二）斑马鱼早期发育观察：斑马鱼早期胚胎发育主要有以下七个时期（附有相应的时间）：（1）合子期Zygote Period(0-0.75h) （2）卵裂期Cleavage Period(0.75-2.2h) （3）囊胚期Blastula Period(2.25-5.25h) （4）原肠胚期Gastrula Period(5.3-10h) （5）体节期Segmentation Period(10-24h) （6）咽期Pharyngula Period(24-48h) （7）孵化期Hatching Period(48-72h)

小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究

江丙农业学报2010，22(12)：144～146 A c t a A g r i c uhu r ae J i an gxi 小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究林峰，陈玉霞+，孙克宁，杨婷，田晓军 (河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002) 摘要：为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响，分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。结果表明：子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P<0．01)，而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P< O．05)，两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P>0．05)，说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著，且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。小鼠早期胚胎发育观察结果表明：超排处理后，在公母鼠合笼后76～79．5h采胚，胚胎大多处于桑椹胚期，而在公母鼠合笼后88～91．5h采胚，胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期；采用TC M l99+15％胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。关键词：小鼠；超数排卵；早期胚胎；体外培养；冲胚方法中图分类号：Q132．8文献标识码：A文章编号：1001—8581(2010)12—0144—03 St udy on E f f ect of Super ovul a t i on and i n vi t r o C ul t ur e of Ear l y Em br yo i n M ous e LI N Fe n g，C H E N Y u—xi a‘，SU N K e—ni ng，Y A N G Ti ng．T I A N X i ao—j u“ (C ol l ege of A n i m a l H us ba ndr y a nd V et er i nar y M e di ci ne，H enan A矛c ul t ur al U ni ver si t y．Z he ngzhou450002，C hi na) A bs t r act：I n t hi s paper．t he e ffe c t of dif f erent m e t h ods of c o l l ec t i n g e m br yos on t he s uper ovul at i on of m i c e w a s s t udi ed，and t he e m br yos i n t he suoer ovul at ed m i Ce w er e coll ected by usi ng t he ut erus—m i nc i ng m e t ho d a nd ut er us—col l ect i ng m e t hod re s pec t i ve l y．ne r es ult s show e d t ha t t he aver age num ber of eggs and em bryos obt ai ned by t he ut er us—co l l ect i ng m e t ho d w er e,ext r em el y s ignif i ca ntl y hi gher(P<0．01)t han t hos e obt ai ned by t he ut e r us—m i nci ng m e t hod，an d t he aver age nu m ber of us abl e em bryos obt ai ned by t he u t e r r us—coll ect i ng m e t he d w强si gni f i cant l y hi gher(P<0．05)t han t ha t di d by t he ut erus—m i nc i ng m et hod．ne aver age num be r of an-fe r t i l i zed eggs obt ai ned by t hes e t w o m e t h ods w a s no t s ignif i cant ly di f f er e nt(P>O．05)．So t he s uper ovu l at i on e ffe c t of m i c e W a S s i g-nif i e ant lv i nnue nee d by t he m e t ho d of coll ect ing em bryos．T he obs er vat i on r es ult s of ear l y e m br yos de vel opm ent i ndi cat ed t hat m ost of t he em bryos coll ected76—79．5hour s aft er com bi ni ng cages w e r e at m or ul a s t age．w hi l e m os t of t}l e em bryos coll ected88～91．5 hour s a ft e r com bi ni ng cages w e r e a t com pa ct e d m or u l a s t a ge and bla s t o e yst s t ag e．I t W a S f eas i ble t ha t t he em bryos of m i c e w er e cul t i—vat ed i n vi t ro by usi n g t he m i xed s o l ut i o n of T C M l99and15％F C S． K e y w or ds：M ouse；Sup er ov ul at i on；E ar l y em br yo；I n vi t ro cul t ur e；M e t hod of coll ect ing em bryos 雌性哺乳动物一生所产的卵子总数早在其胚胎发育形成卵巢的过程中已被确定，成熟卵子在成年后的发情周期中分别排出，但是单纯依靠动物的自然排卵，一方面所得到的卵母细胞数或胚胎数较少，另一方面又消耗大量的时间和浪费较多的动物．因此为了获取大最的胚胎，多采用超数排卵的方法，即利用外源性促性腺激素诱发多个卵泡同时发育并排出具有正常受精能力的卵子¨。1。该技术大幅度地开发利用了卵巢上的卵母细胞资源，为胚胎工程和转基因动物等相关领域的研究提供了大量的研究素材。小鼠具有个体小、生长快、繁殖力强等特点，是畜牧兽医科学研究领域应用最为广泛的实验动物，研究小鼠超数排卵对动物胚胎工程等研究具有重要意义。近年来，随着遗传工程小鼠的大量开发，人们对小鼠卵母细胞和胚胎的需求量日趋增多，因而完善的超数排卵技术是遗传工程小鼠研究获得成功的重要前提条件。到目前为止，能够获得大量胚胎来源的技术仍为超数排卵。超数排卵反应是一个极其复杂的生理过程。研究资料表明，小鼠超排效果受激素的种类、剂鼍以及动物的生理状态等多种因素影响，这些因素错综复杂，使超数排卵效果很不稳定H—o。为了进一步研究冲胚方法对超数排卵的影响及小鼠冲胚的有效方法，本试验在控制以上因素一致的条件下，采用两种不同的冲胚方法来进行对比，以期为今后的小鼠超数排卵研究提供一定的参考依据，为胚胎生物技术研究提供借鉴。 l材料与方法 1．1试验地点和时间本试验于2009年l O月16日至2010年5月27日在河南农业大学牧医工程学院胚胎生物技术研究室进行。 1．2试验动物 1．2．1试验动物的条件试验用昆明小白鼠购于河南省实验动物中心。雌性小鼠(未经产)为17周龄、体重30 收稿日期：2010一基金项目：河南省重点科技攻关计划项目(82102130005)；河南省蕈大科技攻关计划项目(0422011200)。作者简介：林峰(1972一)。男．山东栖霞人．副教授，博士，主要从事动物胚胎生物技术研究。通讯作者：陈玉霞。

体内受精与早期胚胎发育

3.1 体内受精和早期胚胎发育通州市石港中学卞柏华一、设计思路本节是全专题的基础，理论性较强，学生会感到抽象和深奥，也不适宜探究。但本专题又是社会热点，容易调动学习兴趣。因此，我借助多媒体和网络，采用多种方法，让学生自主学习、合作学习，营造积极的学习氛围，达到知识、能力、情感的三维目标。二、教学目标 1.简述哺乳动物的精子和卵子的发生及受精过程。 2.简述哺乳动物的胚胎发育过程及其主要特点。 3.认同胚胎工程建立及发展的意义。三、教学重点和难点 1.教学重点（1）哺乳动物精子和卵子的发生。（2）哺乳动物的受精过程。（3）哺乳动物的胚胎发育。 2.教学难点（1）哺乳动物受精过程中精子的获能、顶体反应、透明带反应、卵黄膜封闭作用的概念和生理功能。（2）哺乳动物胚胎发育各阶段的主要特点。

四、教学过程（建议3课时）第一课时引言师：有一对夫妇，妻子因病切除了子宫，但他们一直想有一个亲生（携带他们遗传信息）的孩子，你能从理论上想一办法替他们完成这一愿望吗？生：借腹怀胎、试管婴儿。师：“试管婴儿”是不是在试管中长出一胎儿呢？生：不是。师：其实“试管婴儿”涉及到的是“体外受精”和“胚胎移植”两项主要技术。我们来看一下关于“试管婴儿”的一个科学片。师：从上面的短片中我们可以发现“试管婴儿”就是模拟母体内的环境，让精子和卵子在体外完成受精作用，然后再将受精卵在体外发育到一定阶段的胚胎移植到母体子宫内自然发育形成胎儿的一项技术。师：事实上，我们前两个专题“基因工程”和“细胞工程”也要用到胚胎移植技术。比如基因工程方法获得的含有目的基因的动物受精卵，细胞工程方法获得的重组细胞都要通过胚胎移植转移到母体子宫内才能发育成动物个体。师：近年来通过科学技术人员的不懈努力，这方面的成就已是硕果累累。书本59页的照片展示的就是胚胎移植处理后同时期出生的高产羊的小羔羊。本专题介绍的就是这方面的技术－胚胎工程。请大家快速阅读P59至P60页，了解胚胎工程及其发展历程。阅读后我们来一个快速抢答。师：胚胎工程进行处理和操作的对象是什么（是在什么水平上进行处理和操作的）？生：动物早期胚胎或配子。师：胚胎工程包括哪些技术？生：胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等。师：胚胎工程中哪项技术历史最长？生：胚胎移植师：胚胎移植从1890年首次成功以来，经历了日趋成熟，较为完善的阶段，至今胚胎移植已经成为许多胚胎工程不可缺少的基础环节。

ptges3a基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达

文章编号:1000 5404(2011)04 0389 03 论著 ptges3a 基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达韩勇军,吴新荣 (510010广州,广州军区广州总医院药剂科) [摘要] 目的克隆斑马鱼前列腺素E 合酶3a(pro stag land i n E synthase 3a ,pt ges3a)基因,研究其在斑马鱼胚胎早期发育中的表达情况。方法提取斑马鱼胚胎的总RNA,制备D I G 标记的ptges3a RNA 反义探针,整胚原位杂交研究ptges3a 在斑马鱼胚胎早期发育过程的表达。结果 ptges3a 在sh i e l d 期前普遍性表达,10体节期在后脑神经龙骨处有特异性表达,18体节期在后脑有特异性表达,在26hpf 时期头部表达较多,并且在肾小管有特异性表达,36hpf ptges3a 在头部较高表达。结论 ptges3a 可能参与了脑部发育和肾小管形成。 [关键词] 斑马鱼;前列腺素E 合成酶;胚胎发育 [中图法分类号] R 321;R345;R 394.2[文献标志码] A [通信作者] 吴新荣,E m a i :l gzwxrong @y a hoo .co m Expression of ptges3a duri ng early develop m ent in zebrafi sh H an Yong j u n,W u X i n rong (D epart m ent of Phar m acy ,G uang zhou G eneral H o spita l o f G uang zhou M ilita ry Co mm and ,G uangzhou ,G uangdong P rov i nce ,510010,Ch i na) [Abstract ] Obj e cti v e To clone prostag land i n E synthase 3a (ptges3a)gene and investigate its te m pora l and spati a l expression pattern i n zebrafish duri n g earl y deve l o pm en.t Methods The to ta l RNA of different phases of zebrafish e m br yos w as ex tracted .D igox i n labe led RNA probe o f ptges3a w as prepared .W ho le e mbryo m ount in situ hybridization w as e mp loyed to investi g ate the expressi o n patter n of ptges3a during zebrafish e mbryogenesis .Results ptges3a transcri p t w as d istri b uted ub i q u itously before sh ield stage .A t 10 so m ite there w ere detectab le expression o f ptges3a gene in the hindbra i n neural kee,l and at 18 so m ite it w as expressed in the h i n dbra i n .Fro m 26to 36h after post fertilizati o n (hp f),h i g h expressi o n o f ptges3a w as found i n the brai n .ptges3a w as a lso detectab le i n the rena l tubule at 26hp.f C onclusi o n The expression patter n of ptges3a during zebrafish e m bryogenesis suggests that it m ay be critical for the developm ent of bra i n and rena l t u bule .Further i n vestigation on the functi o n of ptges3a is needed . [Key words ] zebrafish;prostaglandin E synthase 3a ;e m bryonic developm ent C orrespond i ng au t hor :W u Xi n rong ,E m ai:l gz w xrong @yahoo .co m 前列腺素(prostag land i n ,PG )E 2是一种重要的前列腺素类物质,参与机体多种生理及病理过程,前列腺素E 合成酶(prostaglandin E synthase 3,ptges3)是PGH 2转化为PGE 2过程中的重要终端限速酶。多项研究[1-3] 结果显示,ptges3在结肠癌、肺癌、头颈部肿瘤、乳腺癌和胃癌中过表达,且与肿瘤的发生、发展密切相关。缺失ptges3的小鼠可以消除炎症,类似于非甾体抗炎药(non steroida l anti i n fla mm atory drug ,NSA I D )作用的效果[4] ,动脉粥样硬化患者的巨噬细胞中ptges3 有高表达,可诱导血小板破裂[5] 。ptges3可能成为用于治疗疾病和筛选药物的潜在靶点。斑马鱼是近几十年出现的新型模式生物,它有许多优点:个体小、喂养费用便宜;早期胚胎透明,易于观察和操作;产卵多,繁殖周期短。通过序列比对和进化树分析发现斑马鱼ptges3a 与小鼠、人的ptges3具有高度同源性。整胚原位杂交技术是研究斑马鱼发育相关基因的功能和表达模式的一种重要手段。本研究通过整胚原位杂交方法分析了ptges3a mRNA 在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达情况,为深入研究这一基因的功能提供基础依据。1 材料与方法1.1 材料斑马鱼Tubingen 野生型,总RNA 提取试剂盒RNA queous 4PCR K it(Amb i on 公司),PCR 引物由上海生工生物工程有限公司合成,琼脂糖凝胶DNA 回收试剂盒、大肠杆菌DH 5 感受态细胞、普通质粒小提取试剂盒(T i angen 公司),T 4DNA 连接酶、p GM T easy 载体、D IG RNA L abe li ng M i x (R oche 公司),SP 6RNA Po l ym erase(P ro m ega 公司),限制性内切酶Ap a 、Ex T aq 聚合酶(T a K aRA 公司),A nti D i gox i g en i n A P 、染色剂:NBT 和BC I P (R oche 公司)。 1.2 方法 1.2.1 人、小鼠和斑马鱼的ptges3基因进化树分析从生物技术信息网页(http ://www .ncb.i nl m .n i h .gov /guide /)获取 389 第33卷第4期 2011年2月28日第三军医大学学报ACTA ACADEM I AE M EDIC I NAE M ILI TARIS TERTI AE V o.l 33,No .4 Feb .28 2011

体外受精和早期胚胎发育

3.2体外受精和早期胚胎发育【预习目标】 1、说出哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤 2、说出哺乳动物胚胎的早期培养方法。【自主学习】 1．基本步骤 2．卵母细胞的采集和培养方法：用______________处理，再从_______中冲取卵子。处理：可直接与______________在体外受精。方法：处理：在体外______________后，才能与获能的精子受精。 3．精子的采集和获能 (1)收集精子的方法： (2)精子体外获能的方法： 4．体外受精获能的精子和培养成熟的卵子，一般都可在___________或专用的___________中完成受精过程。二、胚胎的早期培养 1．哺乳动物胚胎的培养液成分 2．胚胎早期培养的目的 (1)精子和卵细胞在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查______________________和______________________。 (2)当胚胎发育到适宜的阶段时，进行___________或___________。 3．胚胎移植的时间 (1)牛、羊一般在___________或___________进行移植。 (2)人的体外受精胚胎，即试管胚胎，可在_________________移植。（1）实验动物（小鼠、兔、羊等）（2）大型动物（牛等）

【提出疑惑】同学们，通过你的自主学习，你还有哪些疑惑，请把它写在下面。 3.2体外受精和早期胚胎发育【学习目标】 1、用的自己的语言说出体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。 2、能自己说出哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。【合作探究】 1．说出试管动物的培育过程。【训练】据哺乳动物体外受精的过程回答以下问题： (1)体外受精的过程主要包括__________________、____________________及受精等几个步骤。 (2)精子采集的方法主要有__________________、_______________和________________。获能的方法有__________________和__________________。 (3)请用一个流程图表示体外受精过程。 3.2体外受精和早期胚胎发育【课后作业】 1．体外受精技术和克隆动物的生殖方式是() A．前者属于有性生殖，后者属于无性生殖 B．二者都属于有性生殖 C．二者都属于无性生殖 D．前者属于无性生殖，后者属于有性生殖

环境对斑马鱼胚胎发育的影响

环境对斑马鱼胚胎发育的干扰 XXX,YYY,ZZZ 一、实验目的及原理： 1、通过斑马鱼早期发育过程的观察，巩固对硬骨鱼胚胎发生的认识。 2、通过设置环境因子（锌离子）来研究其对斑马鱼胚胎发育的影响程度。 3、通过对比对照组和实验组，进一步巩固对硬骨鱼胚胎发育模式的认识。 4、锻炼独立开展科学实验、分析和解决实际问题的能力。 5、加深环境对动物受精及早期发育影响的理解。二、实验材料与方法： 1、实验材料：所需胚胎：发育良好的、健康的斑马鱼胚胎（原肠胚早期）36枚。试剂：硫酸锌（分析纯），器材：培养容器12孔板，恒温培养箱，显微镜，解剖镜，载玻片，塑料滴管，手表，移液枪100uL、1000uL，量筒100mL*2。

2、实验方法：（1）在本实验中，使用硫酸锌作为实验用环境因子，共设三个梯度，分别为：0，0.1mg/L，1mg/L。每个梯度设4个平行组，每个平行组3个胚胎，共需36个胚胎。（2）实验处理起始时间：原肠胚早期：实验处理终止时间：孵化期。（3）实验操作： A.挑选胚胎：由于斑马鱼卵受精及发育的不均匀性，要对斑马鱼卵进行挑选。挑选时要挑透明、无白色斑点、卵膜完整的。之后的实验中还要不断将败育卵挑出。用滴管（塑料滴管口部要剪短且一定要圆滑，并且直径要大于卵径）将选择好的卵依次吸出，然后放入12孔板中进行孵化。【注意剔除异物眼观有白色小斑点、畸形异常卵。】

B.实验体系： 12孔板培养胚胎，每孔放入3个胚胎，共使用12个孔，36个胚胎。12个孔分别标上A1~A4,B1~B4,C1~C4。A1~A4组作为对照组的三个平行组，B1~B4作为0.1mg/L组的三个平行组，C1~C4作为1mg/L组的三个平行组。 C.实验期间的培养管理： 1．孵化用水：孵化水温一般要25~28℃，在这个温度范围内，温度越低，孵化所需时间相应越长。水温25℃时，受精卵经48~72h孵出仔鱼，水温28℃时，经36h孵出仔鱼。水温太高或太低，会造成受精卵死亡。[2] 【实验中设定的培养温度为25℃，由于恒温培养箱的示数与实际温度有较大差异，而且在实验后期（80h）提高培养箱温度以加速孵化，所以本次实验实际中的温度并不恒定，暂以25℃为准。】 2.孵卵卫生：（1）定期观察，每12h换一次水，水温要相近，而且每次换水量在原水量的1/3-1/2,以尽量使胚胎缩短适应期，使发育流畅。定期将死卵挑出，以确保不影响其他卵的正常发育。 3、观察记录：（1）前3h实时观察、拍照并记录，之后每天早上(7:00-9:00)、中午(12:30-14:30)、晚上(18:00-21:00)三段时间对斑马鱼胚胎发育不同时期以及畸变进行观察、拍照并记录。（2）实验指标:实验前，根据文献查询[3]，Zn2+可能导致的畸变有：

(整理)体内受精和早期胚胎发育题

课时训练9体内受精和早期胚胎发育 1.以下有关人类卵子发生的说法正确的是()。 A.哺乳动物卵泡的形成是在初情期 B.排卵是指排出成熟的卵泡 C.排卵实质上排出的是初级卵母细胞 D.排卵实质上排出的是次级卵母细胞 2.下列能正确表示高等动物胚胎发育顺序的是()。 A.受精卵→卵裂→囊胚→原肠胚→组织器官的分化 B.卵→卵裂→原肠胚→组织器官的分化 C.受精卵→囊胚→原肠胚→幼体 D.受精卵→卵裂→桑椹胚→囊胚→原肠胚→组织器官的分化 3.下图表示蛙的受精卵发育至囊胚过程中,DNA总量、每个细胞体积、所有细胞体积之和、有机物总量的变化趋势(横坐标为发育时间)。其中正确的是()。 A.①② B.①③ C.②④ D.③④ 4.次级卵母细胞的分裂完成于()。 A.排卵前,在卵巢内 B.受精前,在输卵管内 C.排卵后,在腹腔内 D.受精过程中,在输卵管内 5.精子变形时,线粒体集中在尾的基部的意义是()。 A.释放顶体酶发生透明带反应 B.产生能量促进精子运动 C.有利于质基因进入受精卵 D.受细胞核的挤压形成 6.判断卵子是否受精的重要标志是()。 A.在卵细胞膜和透明带的间隙可以观察到两个极体 B.精子穿越放射冠和透明带 C.精子进入卵细胞膜 D.雄原核和雌原核的形成 7.下列最能表现细胞全能性的细胞是()。 A.桑椹胚期细胞 B.囊胚期细胞 C.外胚层细胞 D.滋养层细胞

8.下列有关哺乳动物精子和卵子的发生以及受精作用的叙述中,正确的是()。 A.采集到的精子和卵子相遇即可发生受精作用 B.排卵就是排出成熟卵子的过程 C.卵子形成时的分裂过程均在卵巢内完成 D.受精作用完成的标志是在卵细胞膜和透明带之间观察到两个极体 9.下列关于受精过程的叙述,错误的是()。 A.获能后的精子与卵子相遇后,释放顶体酶进入放射冠 B.透明带反应是防止多精入卵的第一道屏障 C.精子与卵细胞膜相互融合,精子入卵 D.雄原核形成的同时,卵子完成减数第二次分裂 10.下列关于高等哺乳动物受精与胚胎发育的叙述,正确的是()。 A.绝大多数精卵细胞的识别具有物种特异性 B.卵裂球细胞的体积随分裂次数增加而不断增大 C.囊胚的滋养层细胞具有发育全能性 D.原肠胚发育分化形成内外两个胚层 11.下列关于哺乳动物早期胚胎发育的说法正确的是()。 A.卵裂期细胞经过了细胞分裂,不再分化 B.原肠胚细胞属于全能细胞 C.囊胚腔先于原肠腔出现 D.桑椹胚开始进行孵化 1．下列不属于胚胎工程技术的是（）A．体外受精 B．胚胎分割、胚胎移植 C．胚胎干细胞培养 D．转基因鲤鱼的培育 2．卵子的成熟部位和受精部位正确的是（）A．卵巢卵巢 B．卵巢输卵管 C．输卵管输卵管 D．输卵管子宫 3．精子与卵子结合过程中穿越的两道屏障是（） ①顶体反应②透明带反应③卵细胞膜反应④精子穿越放射冠 A．①② B．②③ C．③④ D．②④ 4．以下说法不正确的是（）A．雄性动物从初情期开始产生精子 B．1个精原细胞可形成4个精子 C．对多数家畜来说，精子在睾丸内形成时间为两个月左右 D．动物体型大的产生的精子多且大 5．关于精子的描述，哪一项是错误的？（）A．由精子细胞变态形成 B．精子一旦形成，便具有了运动能力 C．精子头侧面观呈梨形 D．精子是处于最后发育阶段的生精细胞 6．桑椹胚是指（）A．含有一个充满液体的腔 B．总体积大于受精卵