测定方法-游离脂肪酸
游离脂肪酸测定方法
试剂
乙醇-乙醚混合溶液：无水乙醚与95%乙醚1：1（V ）混合，每100mL 溶剂加入酚酞指示
剂
KOH 标准溶液：称取溶于1000mL 新沸冷却蒸馏水中，摇匀，按下
法标定其摩尔浓度。称取在125℃烘至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾，精
确至，置于250mL 锥形瓶中，以50mL 蒸馏水溶解，加入2-3滴酚酞指
示剂，用上述KOH 溶液滴定至粉红色，同时做空白试验，KOH 标准溶液
摩尔浓度2042
.0)(0?-=V V G M 式中：G —邻苯二甲酸氢钾质量，g
V —KOH 溶液用量，mL
V 0—空白试验KOH 溶液的用量，mL
—每mol 邻苯二甲酸氢钾的质量,g
计算结果：KOH M =0942.02042
.0)10.085.44(8608.0=?- 1%酚酞指示剂：1g 酚酞溶于100mL95%乙醇中
仪器
250mL 锥形瓶，25mL 滴定管 分析天平
游离脂肪酸（FFA ）含量的测定[1]：
精确称取样品，置于锥形瓶中，用水浴微热熔融，加入预先中和的乙醚、乙醇混合
液50mL ，使之溶解，加入1%酚酞5滴，然后用氢氧化钾标准溶液滴至呈粉红色，10s 内不
退色为终点，记录消耗氢氧化钾标准液的毫升数。游离脂肪酸质量分数 (以油酸计)为
1001000282???=
m C V FFA
式中 FFA -游离脂肪酸的质量分数
V -消耗氢氧化钾标准溶液的体积（mL ）
C -氢氧化钾标准溶液的浓度（mol/L ）
282-油酸的摩尔质量（g/mol ） m -样品质量（g ）
游离氨基酸测定方法
试剂
40%中性甲醛：40mL 甲醛溶于60mL 蒸馏水中，用1mol/L NaOH 调pH 为
%百里酚酞：百里酚酞溶于90mL 乙醇，加水至100mL
NaOH 标准溶液：称取110gNaOH ，溶于100mL 无CO 2的水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，
密闭放置至溶液清亮。用塑料管量取上层清液，用无CO 2的水稀释
至1000mL 摇匀。
称取于105-110℃烘至恒重的邻苯二甲酸氢钾，加入无CO 2水溶解，
加2滴酚酞指示液，用配好的NaOH 底至溶液呈粉红色，并保持30s ，
同时做空白实验。NaOH 标准溶液的摩尔浓度M
V V m M NaOH )(100021-?=
式中:m —邻苯二甲酸氢钾质量，g
V 1—NaOH 体积，mL
V 2—空白试验消耗NaOH 的体积，mL M —邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，mol 计算结果：NaOH M =22
.204)05.041.33(10007512.0?-?= 游离氨基酸（FAA ）含量的测定：甲醛滴定法[8]
吸取相同的2份样品溶液，置于2只三角瓶中，各加50mL 蒸馏水，50℃水浴萃取 h 。
其中1份加入中性红指示剂3滴，用标准氢氧化钠溶液L)滴定至琥珀色为终点，此时可
用pH 计测定其pH 值为。另一份加入百里酚酞指示剂3滴和中性甲醛20ml,静置1分钟后，用L 氢氧化钠溶液滴定至淡蓝色，此时用PH 计测定其pH 值为。
游离氨基酸含量计算公式：
100014.0)(%12??-?=w V V N FAA
式中 FAA%-游离氨基酸的百分 氮的毫克当量
N -标准氢氧化钠的摩尔浓度/mol/L
V 1-中性红做指示剂时消耗氢氧化钠的体积/mL
V 2-百里酚酞做指示剂时消耗氢氧化钠的体积/mL
SDS 凝胶电泳的测定
样品的处理：样品处理液（含浓缩胶缓冲液56%，甘油42%，SDS2%）与β-巯基乙醇
2-ME 20μL ，溴酚蓝20μL 混合，加蒸馏水定容至1mL ，混合均匀，将混合溶液倒入2mL 的带盖的试样管中。将试样管放入沸水中加热5min （加强SDS 与蛋白的结合），冷却到室温，于-20℃冷藏。
SDS-PAGE 电泳采用5%的浓缩胶和12%的分离胶，分别用L Tris-Hcl （）和LTris-HCl
（）进行配制，两者均含有%SDS 。电泳缓冲溶液含有LTris ，L 甘氨酸（Glycine ），%SDS 。上样量为10μL 。浓缩胶部分的电流为100V ，进入分离胶后，电流为150V 。电泳结束后，将胶片固定4h （固定液含有33%甲醇和12%三氯乙酸）。然后染色3h （染色液含有，考马斯亮蓝G-250，1mol/L 硫酸，10mol/LNaOH ，12%TCA ）。染色结束后，用水对胶片进行洗脱[94]。
测定方法
SN 测定[253]：
准确称取 g 干酪，加入25mL 的醋酸盐缓冲液，将干酪充分磨碎，再用25mL 的缓冲液充分冲洗，悬浮液在4000rpm
的离心机中离心20min ，取上清液定量地移入凯氏消化瓶，进行微量凯氏定氮，并以占干酪总氮量的百分数（%）表示。 12% TCA SN 测定[253]：
准确称取干酪，加入25mL12%的TCA溶液，将干酪充分磨碎，再用20mL的缓冲液充分冲洗，悬浮液在4000rpm的离心机中离心20min，取上清液定量地移入凯氏消化瓶，进行微量凯氏定氮，并以占干酪总氮量的百分数（%）表示。干酪的融化性[39]：
用改良的Schreiber试验法测定干酪的融化性，方法为：用特制打孔器取直径×7mm厚的干酪样品，其纤维方向垂直于干酪的直径；将样品放置于预先铺有滤纸的9cm的培养皿内，在室温下回复温度30 min,然后，将其放入预热至100℃的烘箱内，加热1小时，取出，在室温下回复30min ,测定融化干酪的直径，测四个值，精确到，计算出平均数，表示干酪的融化性。
4干酪的油脂析出性[39]：
通过传统的脂肪渗漏法经改良用于油脂析出性的测定，方法为：取直径×7mm厚的干酪样品，其纤维方向垂直于干酪的直径；将样品放置于预先铺有滤纸的9cm的培养皿内，在室温下回复温度30 min,然后，将其放入预热至100℃的烘箱内，加热1小时，取出，在室温下回复30min ,油圈形成，测定油圈的直径，测四个值，精确到，计算出平均数，表示干酪的油脂析出性。
干酪的拉丝性[44]：
将15g粉碎的干酪放入25×150mm的试管内，用水浴加热到60℃，并保温10min ，然后用T型金属棒搅动，缓慢提升，测量拉丝的长度。
干酪加热色泽试验[263]：
粉碎的干酪放入25×150mm的试管内，在沸水中水浴60min，使用色差计以L、a、b为测色模型，试管的底部被夹紧与测光头密合。每个试管有8个数据被读取，每旋转45o读取一个数据，取其平均值。
感官评定方法[264]：
由于目前我国还没有对软质干酪统一的感官评分标准，所以我们制定了Mozzarella干酪质量的评分标准，采用15分制的评定方法，评定项目为：未融化干酪的特性：滋味与气味、组织结构、弹性、切条性；权重分别为2、1、和；融化干酪的特性:拉丝性、褐变性、熔化性、油脂析出，权重分别为2、、和，其中除滋味与气味、组织结构和切条性凭主观评判外，其余均以客观测定值为指标，选取9名经过训练的人员进行感官评定。
干酪分为天然和再制两大类。简单地说，天然干酪是从乳制成的，而再制干酪是从天然干酪制成的。这一点可以从配料表里看出。如
果某产品的配料表里第一个是乳、牛乳，则该产品是天然干酪。如果某产品的配料表里第一个是干酪、奶酪、乳酪类，则该产品是再制干酪。按照这个原则，你可以去超市的奶酪冷柜看看哪些产品是天然干酪，哪些是再制干酪。
天然干酪是一种“活的食品”，含有活性菌群和活性酶，在冷藏条件下也在生长代谢，从而使干酪的感官特性不断变化。因此，天然干酪需要冷藏，而且即使在冷藏条件下保质期也有一定期限。把干酪出口到热带气候的国家因而成为一件非常困难的事，贸易的发展需要一种容易保存和运输的干酪。再制干酪就这样应运而生了。
再制干酪的最大优点是经过热处理，因而延长了保质期，而且在保质期内对贮藏条件的要求不象天然干酪那么严格。除此之外，再制干酪可以利用天然干酪的边脚料生产，减少了工厂的损失。更重要的是，再制奶酪中可以添加各种风味料，产品口味丰富，状态和包装形式方便食用，因而在日本、韩国、中国等没有干酪消费传统的国家首先被接受。
脂肪酸值的测定
脂肪酸值的测定 一﹑实验原理 脂肪酸溶于有机溶剂，通常利用无水乙醇来萃取样品中的脂肪酸，然后用标准氢氧化钾溶液滴定。从而求得脂肪酸值。 二、仪器和试剂 1．试剂 0.01mol/L KOH或（NaOH）乙醇 -（95%）溶液；先配置约0.5 mol/L KOH，标定，然后用移液管移取10ml,用95%乙醇稀释至500ml. 无水乙醇 95%乙醇 1g/100ml酚酞乙醇溶液：1.0g酚酞溶于100ml95%乙醇溶液中。 2．仪器 具口磨口塞锥形瓶 150ml 、25ml比色管、10ml移液管、50ml移液管、微量袖滴定管、表面皿、感量0.01g天平、漏斗、电动振荡器 三、操作步骤 １．试样制备从平均样品中分取样品约80g，粉碎，95%粉碎试样通过0.45mm孔径筛。 ２．浸出，取试样10g±0.01g于150ml具塞锥形瓶中，加入50ml无水乙醇，加塞，振荡几秒后，打开塞子放气，再盖紧瓶塞置电动振荡器振荡10min，将锥形瓶倾斜静置数分钟，让试样粉粒沉降在一角。 ３．过滤：小心地倾析尽可能多的上清液于铺在玻璃漏斗上的多折滤纸中，用表面皿盖在漏斗上，以减少蒸发，弃去最初几滴滤液后，用25ml比色管准确收集滤液25ml。 ４．滴定：将25ml滤液移入锥形瓶中，用50ml无二氧化碳蒸镏水分三次洗涤比色管，将洗涤液一并倒入锥形瓶中，加几滴酚酞批示剂，立即用0.01mol/LKOH-乙醇溶液滴定至呈现微红色，0.5min内不消失为止，记下所耗氢氧化钾乙醇溶液毫升数（V O）。 四、结果计算 脂肪酸值按公式计算 50 100 X（脂肪酸值）=（V1- V0）c×56.1×× 25 m(100－M) 式中：X----每100g干样所耗氢氧化钾的毫克数，mg V1----滴定试样用去的氢氧化钾乙醇溶液体积，ml V0----滴定25ml酚酞乙醇溶液用去氢氧化钾乙醇溶液的体积，ml 50----浸泡试样用无水乙醇的体积，ml 25----用于滴定的滤液体积，ml c-----氢氧化钾（或氢氧化钠）-乙醇溶液的浓度，mol/L m-----试样质量，g 56.1---1ml浓度为1mol/L的碱液相当KOH的质量，mg M-----试样水分百分率，%（测定小麦粉、玉米粉脂肪酸值时按湿基计算，不必减去水分） 100----换算为100g试样质量 双试验结果允许差为每100g干样所耗氢氧化钾不超过2mg，求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后一位。 五、注意事项 １．粉碎后的样品要尽快测定，否则脂肪酸值会很快增加。 ２．浸出液色过深，滴定终点不好观察时，改用四折滤纸，在滤纸锥头内放入约0.5g 粉未活性碳，慢慢注入浸出液，边脱色边过滤。或改用0.1%麝香草酚酞乙醇溶液指示剂，
MM FS CNG 油料中油的游离脂肪酸含量测定法
MMFSCNG0107 油料 游离脂肪酸 滴定法 MM_FS_CNG_0107 油料中油的游离脂肪酸含量测定法 1.适用范围 本方法适合于油料中油的游离脂肪酸含量测，不适用于月桂酸含量较高的油料。 2.原理概要 试样在索氏抽提器中用石油醚作溶剂浸出，所得到的油用碱标准溶液滴定存在游离脂肪酸。 3.主要仪器和试剂 3.1.主要试剂 30～60℃石油醚、乙醚、95％乙醇、氢氧化钾或氢氧化钠。 乙醚、95％乙醇等体积混合液(用前调至中性)。 0.1mol/L 氢氧化钾(或氢氧化钠)95％乙醇标准溶液：需在5d 前配制，使用前过滤用苯二甲酸氢钾准确标定。 1％酚酞指示剂：1g/100mL 95％乙醇酚酞指示剂溶液。 石英砂、脱脂棉、沸石。 3.2.仪器 分析天平（感量0.0001g）、粉碎机、研钵、电热干燥箱(103±2℃)。 索氏抽提器带250mL 接收瓶。 干燥器。 10mL 碱式滴定管，最小分度值0.05mL。 滤纸筒：与索氏抽提器适宜规格。 4.过程简述 4.1.样品的制备 分析样品的制备：用四分法从2kg 原始样品中分取出所需样品量，保存于具塞试样瓶中备用。 试验样品的干燥：按(MM_FS_CNG_O106)油料水分及挥发物含量测定法测定水分含量。如样品水分大于10％，则需将样品干燥至10％以下。 试样的制备：含油量在20％以下的样品用粉碎机粉碎后称取10g 装入滤纸筒内。含油在20％以上的样品称取10g 后按下述方法处理：较大籽粒样品切碎，小籽粒直接用研钵加少量石英砂研后装入滤纸筒中。处理好的试样要立即进行浸出。 4.2.油的浸出： 上述装好样品的滤纸筒口用脱脂棉封好后放入索氏抽提器内，用石油醚在水温约75℃的水浴上抽提4h。回收溶剂。取下已知质量的接收瓶擦干水迹后在103℃干燥箱内干燥至恒重。两次称量结果相差不得超过5mg。 4.3.测定： 用100mL 乙醚、95％乙醇等体积混合液洗涤接收瓶。将浸出油全部转移到200mL 锥形瓶中，加入酚酞指示剂2～3滴，用0.1mol/L 碱液，滴定至溶液呈粉红色(持续1min)记下所用体积V 。 5.结果计算 5.1.游离脂肪酸含量按下式计算： 100) －(0001282＝)(01×××m m C V ％游离脂肪酸含量
脂肪酸含量的测定
AMAMFSAc23033 谷类脂肪酸度滴定法 AM-AM-FS-Ac-23033 脂肪酸度——谷类 1.仪器和试剂 1.1 仪器 (a)谷物研磨机—适用于磨碎小样品。 (b)脂肪提取设备—Soxhlet或其它适合的型号(耐用的纸套筒或铝质RA-360套筒适合提取用)。 1.2 试剂 (a)甲苯-乙醇-酚酞溶液—0.02%。向IL甲苯中加1L乙醇和0.4g酚酞。 (b)乙醇-酚酞溶液—0.04%。向1L乙醇中加0.4g酚酞。 (c)氢氧化钾标准溶液0.0178N。无碳酸盐的。1ml=1mgKOH。 2.试验过程 2.1.方法Ⅰ 用人工四分法或利用机械采样装置取得大约50g谷物(玉米200g)的代表性样品，尽量磨碎以便使不少于90%的样品能通过40号筛 (某些较粗颗粒不会明显地影响结果)。如果样品太湿不易磨碎，在约10O℃干燥到足以除去多余的水分。 在提取器中，用石油醚提取10±0.1g磨碎的样品大约16h。样品磨碎后尽快着手提取，切勿将磨碎的样品放置过夜。在蒸气浴上将溶剂从提取物中全部蒸发掉。在提取烧瓶中用5Oml甲苯-乙醇-酚酞溶液溶解残渣并用标准KOH溶液滴定到明显的粉色，或将黄色溶液滴定到桔红色。如果滴定中有乳状物形成，加入第二份5Oml甲苯-乙醇-酚酞来消除。终点颜 色应显示与向5Oml和滴定开始时原始溶液颜色相同的适当浓度的K 2Cr 2 O 7 溶液中加 2.5ml0.0l%KmnO 4。溶液得到的溶液颜色相同。(把0.5%的K 2 Cr 2 O 7 溶液滴到5OmlH 2 O中直到颜 色相当，然后加25ml0.0l%KMnO 4 溶液)。 用5Oml甲苯-乙醇-酚酞溶液进行空白滴定，从样品滴定值中减去空白值。如果加入了另一份5Oml甲苯-乙醇-酚酞溶液，则进行双份空白滴定。将脂肪酸度以中和从1OOg谷物(干成份)中分离出的脂肪酸所需要KOH的mg数报告。脂肪酸度=l0×(滴定值-空白值)。 2.2.方法Ⅱ 测定玉米的快速法 (可在1h内得到结果) 按2.1制备样品，称20±0.01g放入玻璃塞烧瓶或一般瓶中，准确加入5Oml苯，塞好瓶，摇几秒钟使苯蒸气饱和瓶内的空气，临时松塞降压后再塞好。在机械振荡器内振荡烧瓶3Omin，或用手定期振荡45min。将瓶子倾斜不少于3min使粗粉沉积在一个角上。小心地尽可能多地把液体倾泻入l5cm插在8cm玻璃漏斗中的折叠滤纸，用表面皿盖上漏斗减少蒸发。在25m1容量瓶中准确收集25ml滤液。将此滤液转入950ml平底烧瓶中，再用乙醇-酚酞溶液将容量瓶充至25ml刻度并转到含苯提取物的烧瓶中。 按C制备所用的色标，用标准KOH溶液滴定提取物。对白玉米滴定到明显粉色，对黄玉米滴到桔红色。如果滴定过程中有乳状液形成，加入苯和乙醇-酚酞溶液各95ml来消除。测定25ml苯和25m1乙醇-酚酞混合溶液空白滴定值。如果再次加了苯和乙醇，则重复空白滴定。将脂肪酸度报告为中和从1OOg玉米(干料)中的游离脂肪酸所需KOH的mg数。 脂肪酸度=10×(滴定值-空白值)。以干样计算。
挥发性脂肪酸VFA测定
VFA的测定 一、滴定法测VFA： 1、原理 将废水酸化后，从中蒸馏出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用氢氧化钠滴定馏出液。废水中的氨态氮先在碱性条件下蒸馏出。 2、仪器：50ml碱式滴定管、锥形瓶、带磨口的具支蒸馏烧瓶（500ml）、与烧瓶配套的蛇形冷凝管、橡胶导管、电炉 试剂： (1)10%氢氧化钠：10g氢氧化钠溶于水,稀至100ml。 (2)10%磷酸溶液：取70ml浓磷酸稀释至1L。 (3)酚酞指示剂：称取0.5g酚酞溶于50ml 95%的乙醇中,用水稀释至100ml。 (4)氢氧化钠标准溶液(0.1000mol/L)：称取60g氢氧化钠溶于50ml水中，转入聚乙烯瓶中静置24h，吸取上层清夜约7.5ml置于1000ml容量瓶中,稀释至标线。称取在105-110℃干燥过的基准试剂(邻)苯二甲酸氢钾约0.5g（称准至0.0001g）,置于250ml锥形瓶中，加无二氧化碳水100ml使之溶解，加入4滴酚酞指示剂，用待标定的氢氧化钠标液滴定至浅红色为终点，同时，用无二氧化碳水做空白滴定。 计算： -苯二甲酸氢钾的质量(g); —滴定空白时消耗氢氧化钠标液的量(ml) —滴定苯二甲酸氢钾时消耗氢氧化钠的量(ml); 204.23—苯二甲酸氢钾的摩尔质量(g/L) 3、测定步骤： (1)于蒸馏烧瓶中加入100ml待测水样，几粒玻璃珠，加入几滴酚酞指示剂，然后加入10%氢氧化钠溶液使使水样呈碱性（溶液出现红色），并使氢氧化钠略过量。 (2)打开冷凝水，开始蒸馏，蒸馏至瓶中液体为50～60ml，(如果测定氨氮，则可用50ml硼酸吸收馏出液。如果不，可倒掉。) (3)加入约40～50ml蒸馏水，加入10ml10%磷酸酸化，在接受瓶中加入10ml蒸馏水，将冷凝管插入液面下，蒸馏至瓶中液体为15～20ml。待冷却后，加入50ml 蒸馏水继续蒸馏，至瓶中剩余液体10～20ml止。 (4)向馏出液中加入10滴酚酞指示剂，用氢氧化钠标液滴定至氮淡粉红色不消失止，记录用量。 计算： —消耗氢氧化钠的体积，ml；
游离脂肪酸测定试剂盒(ACS-ACOD法)产品技术要求haifeng
游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD法） 适用范围：本产品适用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸（NEFA）含量。 1.1 产品规格 1.2主要组成成分
注：校准品、质控品具有批间、赋值特异性，具体值详见靶值单。 2.1外观 2.1.1试剂盒标签标识清晰，外包装完整无破损； 2.1.2 试剂1：无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.1.3 试剂2：无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.1.4 校准品：无色或浅黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.1.5 质控品：无色或浅黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。2.2 净含量 净含量不低于标示值。 2.3 空白吸光度 在主波长546nm、副波长700nm、37℃条件下，试剂空白吸光度A≤0.2。 2.4 线性范围 （0.05,3.00）mmol/L范围内，相关系数r≥0.990；
（0.05,1.00]mmol/L范围内，绝对偏差不超过±0.10mmol/L； （1.00,3.00)mmol/L范围内，相对偏差不超过±10.0%。 2.5分析灵敏度 在产品说明书规定参数设定条件下，测定浓度1.0mmol/L的样本，吸光度变化△A≥0.05。 2.6 精密度 2.6.1批内重复性 CV≤10.0%。 2.6.2 批间差 相对极差R≤10.0%。 2.7 准确度 与已上市产品比对：（0.05,3.00）mmol/L范围内，相关系数r≥0.990；（0.05,1.00]mmol/L范围内，绝对偏差不超过±0.10mmol/L； （1.00,3.00)mmol/L范围内，相对偏差不超过±10.0%。 2.8 校准品 2.8.1 均一性CV≤5.0% 2.8.2 开瓶稳定性：开瓶后3天，相对偏差不超过±10.0%。 2.9 质控品 2.9.1赋值有效性：测定值在质控靶值范围内。 2.9.2 均一性：CV≤5.0%。 2.9.3 开瓶稳定性：开瓶后3天，测定值在质控靶值范围内。 2.10 稳定性
粮食中脂肪酸值含量的测定
GB 5510—85 本标准适用于商品粮食中脂肪酸值含量的测定。 1 仪器和用具 1.1 带塞锥形瓶：150 ml； 1.2 量筒； 1.3 移液管； 1.4 微量滴定管； 1.5 表面皿； 1.6 天平：感量0.01 g； 1.7 电动振荡器； 1.8 漏斗等。 2 试剂 2.1 0.01 N氢氧化钾（或氢氧化钠）乙醇（95％）溶液：先配制约0.5 N氢氧化钾水溶液，再取20 mL，用95％乙醇稀释至500 ml； 2.2 苯、95％乙醇； 2.3 0.04％酚酞乙醇溶液（0.2 g酚酞溶于500 ml 95％乙醇溶液中）。 3 操作方法 3.1 试样制备：从平均样品中分取样品约80 g，粉碎使90％以上试样通过40目筛。粉碎后试样加在20℃以上室温放置，脂肪酸值会很快增加，因此，必须及时进行测定。 3.2 浸出：称取试样20±0.01 g（脂肪酸值高于60 mgKOH/100 g时称试样10 g）于200 ml或250 ml锥形瓶中，加入50 ml苯，加塞摇动几秒钟后，打开塞子放气，再盖紧瓶塞置振荡器振荡30 min（或用手振荡 45 min），取出，将瓶倾斜静置数分钟，使滤液澄清。 3.3 过滤：用快速滤纸过滤，弃去最初几滴滤液后用25 ml比色管或量筒收集滤液25 ml立即准确调节至刻度。
3.4 滴定：将25 ml滤液移入锥形瓶中，再用原比色管或量筒取25 ml酚酞乙醇溶液加入锥形瓶中， 立即用氢氧化钾乙醇溶液滴定至呈现微红色半分钟内不消失为止。记下所耗用氢氧化钾乙醇溶液毫 升数（V1）。 3.5 空白试验：取25 ml酚酞乙醇溶液同3.4用氢氧化钾乙醇溶液滴定，记下耗用氢氧化钾乙醇溶液毫升数（V0）。 4 结果计算 脂肪酸值以中和100 g粮食试样中游离脂肪酸所需氢氧化钾毫克数表示。 脂肪酸值按下列公式计算： 式中： V 1── 滴定试样用去的氢氧化钾乙醇溶液体积，ml； V ──滴定25 ml酚酞乙醇溶液用去氢氧化钾乙醇溶液的体积，ml；50──浸泡试样用苯的体积，ml； 25──用于滴定的滤液体积，ml； N──氢氧化钾（或氢氧化钠）乙醇溶液的当量浓度； 56.1──氢氧化钾毫克当量； W──试样重量，g； M──试样水分百分率，％（测定面粉脂肪酸值时按湿基计算，不必减去水分）； 100──换算为100 g试样重量。 双试验结果允许差，脂肪酸值在51以上的不超过5 mg KOH/100 g；在50以下的，不超过3 mg KOH/ 100 g。求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后第一位。 注：浸出液色过深，滴定终点不好观察时，改用四折滤纸，在滤纸锥头内放入约0.5 g粉末活性碳，慢慢注入浸出液，边脱色边过滤。或改用0.1％麝香草酚酞乙醇溶液指示剂，滴定终点为绿色或蓝绿色。
气相色谱法测定大豆油中脂肪酸成份
油脂中脂肪酸含量测定 ―――气相色谱法测定大豆油中脂肪酸成分一、目的与要求 油脂是食品加工中重要的原料和辅料，也是食品的重要组分和营养成分。必需脂肪酸是维持人体生理活动的必要条件，人体所必需的脂肪酸一般取自食品用油，即食用油脂。气相色谱法测定油脂脂肪酸组分是现在最常用的方法，也是一些相关标准（如：GB/T17377）规定应用的检测方法。 甲酯化是分析动植物油脂脂肪酸成分的常用的前处理方法，也是常用的标准方法（GB/T 17376-1998）。 本实验要求了解气相色谱法测食用油脂肪酸组成的原理，掌握样品的前处理方法，学习食用油脂中脂肪酸组分的色谱分析技术。 二、原理 本实验甲酯化方法采用国标--GB/T 17376-1998，甘油酯皂化后，释出的脂肪酸在三氟化硼存在下进行酯化，萃取得到脂肪酸甲酯用于气象色谱分析。 样品中的脂肪酸（甘油酯）经过适当的前处理（甲酯化）后，进样，样品在汽化室被汽化，在一定的温度下，汽化的样品随载气通过色谱柱，由于样品中组分与固定相间相互用的强弱不同而被逐一分离，分离后的组分，到达检测器（detceter）时经检测口的相应处理（如FID的火焰离子化），产生可检测的信号。根据色谱峰的保留时间定性，归一法确定不同脂肪酸的百分含量。 三、仪器与试剂 （一）仪器--------------北京普瑞分析仪器有限公司 1．气相色谱仪：GC---7800主机，配氢火焰离子化检测器（FID）。 2．恒温水浴锅 3．移液管 4．胶头滴管 5．小圆底烧瓶 6．冷凝管 7. 样品瓶
（二）试剂：.石油醚、乙醚、氢氧化钾、甲醇均为AR级。 四、实验步骤 （一）样品预处理 酯化测定： 取0.2g油样于10ml容量瓶中，家5.0ml 4:3石油醚—乙醚，使其溶解，在加4.0ml 0.5mol/L氢氧化钾—甲醇溶液，振摇1分钟，放置8min后加水1.0ml，静止20min使之分层，取上层液注入色谱仪，保留时间定性，面积归一化法定量。 测定： （1）气相色谱条件 ①色谱柱：石英弹性毛细管柱，0.32mm（内径）×30m，内膜厚度0.5um。 ②程序升温：150℃保持3min，5℃/min升温至220℃，保持10min；进样口温度250℃；检测器温度300℃。 ③气体流速：氮气：40mL/min，氢气：40mL/min，空气：450mL/min，分流比30﹕1。 ④柱前压：25kpa （2）色谱分析 自动进样，吸取0.4-1μL试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高。利用标准图谱确定每个色谱峰的性质（定性），利用软件自带的自动积分方法计算各脂肪酸组分的百分含量。 五、鉴别 1.测定常见植物油主要脂肪酸的构成比并查阅有关资料，经统计学处理，不同的植物油主要脂肪酸的组成大部分有相同之处，但是主要脂肪酸的含量是不相同的。根据脂肪酸组成与含量，即可鉴别油品种类。 2.气相色谱法测定脂肪酸，通常用硫酸—甲醇法，和AOAC-IUPAC 标准法，我们采用了氢氧化钾-甲醇法，经试验3种方法测定结果差异无显著性。
挥发性脂肪酸的测定——5种方法
5 VFA的滴定法分析 （1）原理 本法原理是将废水以磷酸酸化后，从中蒸发出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用NaOH溶液滴定馏出液。废水中的氨态氮可能对测定形成干扰，因此应当首先在碱性条件下蒸发出氨态氮，如果要同时测定氨态氮，以硼酸溶液吸收后滴定之。因此此法可用于氨态氮和VFA的联合测定。 （2）药品 ①10%NaOH溶液 ②NaOH标准溶液，0.1000mol/l ③10%磷酸溶液，取70ml密度1.7mg/cm3的磷酸用水稀释至1L。 ④酚酞指示剂，1%的乙酸溶液。 （3）测定步骤 于蒸馏瓶中放入50—200ml待测废水，其VFA含量不超过30mmol。如水样体积不足100ml，可以蒸馏水稀释至100ml。放入几滴酚酞指示剂。 加入10%NaOH溶液，使溶解呈碱性，并使NaOH略过量。 开始蒸馏，至蒸馏瓶中剩余的液体为50—60ml为止。 用蒸馏水将蒸馏瓶剩余液体稀释至原来的体积，用10ml10%的磷酸酸化，在接受瓶中放入10ml蒸馏水并使接受瓶与蒸馏瓶上的冷凝管连接，导入管应浸入接受瓶的液面以下。蒸馏至瓶中液体为15—20ml为止。待蒸馏瓶冷却后，加入50ml蒸馏水再次蒸馏，至剩余10—20ml液体为止。 为了除去二氧化碳、硫化氢、二氧化硫等干扰物，可向馏出液中通入高纯氮气10—15min，然后加入10滴酚酞，用NaOH标准溶液滴定至淡粉色不消失为止。 （4）计算 挥发性脂肪酸含量计算如下： VFA=V (NaOH)*C*1000/Vs (mmol/L) 式中：V(NaOH)-----滴定消耗的NaOH标准溶液的体积，ml; c ------ 滴定消耗的NaOH标准溶液的准确浓度，mol/L; 挥发性脂肪酸(VFA)的测定
NEFA游离脂肪酸测定试剂盒(ACS-ACOD法)产品说明书
游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD 法）说明书 【产品名称】通用名称：游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD 法） 英文名称：Nonestesterified fatty acid Assay Kit (Enzymic Method)（NEFA ） 【包装规格】R1：2?60ml 、R2：2?20ml ；R1：2?45ml 、R2：2?15ml ；R1：1?45ml 、R2：1?15ml ； 校准品（选配）：1?2ml （1个水平）。 【预期用途】用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸的含量。 临床上主要用于高血脂症、冠心病和动脉粥样硬化的辅助诊断。 【检验原理】游离脂肪酸和辅酶A 在乙酰辅酶A 合成酶（ACS ）的作用下反应生成乙酰辅酶A 。乙酰辅酶A 在乙酰辅酶A 氧化酶（ACOD ）的作用下生成H 2O 2，随后通过Trinder ’s 底物在过氧化物酶（POD ）的作用下生成有色物质。 【主要组成成分】由试剂R1、R2和校准品组成。试剂R1：乙酰辅酶A 合成酶（ACS ）0.8KU/L 、MgCl 2(氯化镁)5mmol/L 、吐温-20 0.1%；试剂R2：乙酰辅酶A 氧化酶(ACOD)20KU/L 、过氧化物酶（ POD ）30KU/L 、吐温-20 0.1%；校准品：含十六（烷）酸水溶液。校准品可以溯源至北京华宇亿康校准品，注：校准品浓度见每批瓶标示。不同批号试剂盒中各组分不可以互换。 【储存条件及有效期】试剂和校准品在2℃～8℃避光条件下保存可以稳定365天。试剂和校准品开瓶后2℃～8℃可稳定15天。备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。 【适用仪器】日立7180、奥林巴斯AU680、贝克曼LX-20/DXC800、迈瑞BS-380、朕江T900全自动生化分析仪。 【样本要求】 1、空腹静脉采血，样本为新鲜的血清样本。 2、样本采集后立即离心分离，并在当日检测，如当日不能检测，冷藏2℃～8℃下可稳定48h ；避免反复冻融。 【检验方法】 （1）双试剂无需配制，直接使用。 （2）试验条件：样本（S ）：5 μl 试剂1(R1) ：225 μl 试剂2（R2）：75 μl 温度：37 ℃ 测定类型：终点法 主波长：546 nm 副波长：700 nm 反应方向：向上 方法：先将样本与R1混合，37 ℃5分钟后加入R2试剂，然后测定加入R2后5分钟的反 应吸光度。 测定空白吸光度（A 1） 测定反应吸光度（A 2） 0 5 10 （反应时间：10min ） 37℃ （3）校准程序：使用配套校准品进行校准，每次更换试剂批次时都应进行校准。校准后，各实验 室要用质控品验证。如果质控结果不在可接受范围值内，则需要进行重新校准。 （4）质量控制程序：选用Randox2、3（HN1530、HE1532）进行质量控制。各实验室建立各自的 质控频率和可接受范围值。当测定结果超出可接受范围时，有必要采取相应措施。 （5）结果的计算 （A 2 - A 1）样本 NEFA （mmol/L ）= ———————— × 校准品浓度(mmol/L) （A 2 - A 1）校准品 【参考区间】（0.129～0.769） mmol/L （建议各实验室建立自己的参考区间）。依照《医学研
食品中脂肪酸的测定
食品中脂肪酸的测定 基础知识: 油脂就是食品的重要组分与营养成分。油脂中脂肪酸组分的测定最常用的方法就是气相色谱法。样品前处理采用酯交换法(甲酯化法),图谱解析采用归一化法。 气相色谱(GC) 就是一种把混合物分离成单个组分的实验技术它被用来对样品组分进行鉴定与定量测定。 一个气相色谱系统包括: ? 可控而纯净的载气源能将样品带入GC系统 ? 进样口同时还作为液体样品的气化室 ? 色谱柱实现随时间的分离 ? 检测器当组分通过时检测器电信号的输出值改变从而对组分做出响应 ? 某种数据处理装置 氢火焰离子化检测器(FID) :氢气与空气燃烧所生成的火焰产生很少的离子。在氢火焰中,含碳有机物燃烧产生CHO+离子,该离子强度与含量成正比。该检测器检出的就是有机化合物,无机气体及氧化物在该检测器无响应。 当纯净的载气(没有待分离组分)流经检测器时产生稳定的电信号就就是基线。
1——载气(氮气); 2——氢气; 3——压缩空气; 4——减压阀(若采用气体发生器就可不用减压阀); 5——气体净化器(若采用钢瓶高纯气体也可不用净化器); 6——稳压阀及压力表; 7——三通连接头; 8——分流／不分流进样口柱前压调节阀及压力表; 10——尾吹气调节阀; 11——氢气调节阀; 12——空气调节阀; 13——流量计(有些仪器不安装流量计); 14——分流／不分流进样口; 15——分流器; 16——隔垫吹扫气调节阀; 17——隔垫吹扫放空口; 18——分流流量控制阀; 19——分流气放空口; 20——毛细管柱; 21——FID检测器; 22——检测器放空出口;
方法来源: GB 5009、168-2016 食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定 1、范围 本方法规定了食品中脂肪酸含量的测定方法。 本方法适用于游离脂肪酸含量不大于2%的油脂样品的脂肪酸含量测定。 2、原理 样品中的脂肪酸经过适当的前处理(甲酯化)后,进样,样品在汽化室被汽化,在一定的温度与压力下,汽化的样品随载气通过色谱柱,由于样品中组分与固定相间相互作用的强弱不同而被逐一分离,分离后的组分到达检测器(detceter)时经检测口的相应处理(如FID 的火焰离子化),产生可检测的信号。根据色谱峰的保留时间定性,归一化法确定不同脂肪酸的百分含量。 3、试剂与材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3、1石油醚:沸程30℃~60℃。 3、2甲醇(CH3OH):色谱纯。 3、3正庚烷[CH3(CH2)5CH3]:色谱纯。 3、4无水硫酸钠(Na2SO4)。 3、5异辛烷[(CH3)2CHCH2C(CH3)3]:色谱纯。 3、6硫酸氢钠(NaHSO4)。 3、7氢氧化钾(KOH)。 3、8氢氧化钾甲醇溶液(2mol/L):将13、1g氢氧化钾溶于100mL无水甲醇中,可轻微加热,加入无水硫酸钠干燥,过滤,即得澄清溶液,有效期3个月。 3、9混合脂肪酸甲酯标准溶液:取出适量脂肪酸甲酯混合标准移至到10mL容量瓶中,用正庚烷稀释定容,贮存于-10℃以下冰箱,有效期3个月。 3、10单个脂肪酸甲酯标准溶液:将单个脂肪酸甲酯分别从安瓿瓶中取出转移到10mL容量瓶中,用正庚烷冲洗安瓿瓶,再用正庚烷定容,分别得到不同脂肪酸甲酯的单标溶液,贮存于-10 ℃以下冰箱,有效期3个月。 3、11丙酮:色谱纯。 5、仪器与设备 5、1实验室用组织粉碎机或研磨机。 5、2气相色谱仪:具有氢火焰离子检测器(FID)。 5、3毛细管色谱柱:聚二氰丙基硅氧烷强极性固定相,柱长100m,内径0、25mm,膜厚0、2μm。
挥发性脂肪酸VFA测定步骤与方法
挥发性脂肪酸的测定 一、GC（Gas chromatograph）工作条件 仪器：GC-14B型气相色谱仪（日本岛津公司） 毛细柱：NUKOLTM Capillary Column ( Supelco )；Column No.34292-07B 30m×0.32mm×0.25μm film thickness 气相色谱仪参数：色谱柱采用毛细吸管柱，柱温130℃，汽化温度180℃，采用氢离子火焰检测器，检测温度180℃，载气为氮气，压力为60 KPa，氢气压力为50 KPa，氧气压力50 KPa，灵敏度（档）为101，衰减 3.0 二、样品制备 1．试剂制备 （1）配制25%w/v 的偏磷酸溶液，将25g偏磷酸溶在100mL双蒸水中 （2）巴豆酸的配制，在100ml的偏磷酸溶液中加入0.6464g的巴豆酸，定容到100mL。（可先用80 ml双蒸水，加热溶解偏磷酸，然后定容至100 ml） （3）标准样品，准确称取色谱标准级乙酸0.9100 g、丙酸0.3700 g、丁酸0.1765 g、异丁酸0.1765g、戊酸和异戊酸分别为0.1985g，分别溶于双蒸水中，再各自定容至100 mL。 2．样品制备 (1) 发酵液取（或过滤瘤胃液）VFA测定1ml样品到离心管中，再加入0.2 ml的偏磷酸巴豆酸混合溶液，－20℃冰箱保存过夜，解冻后12000rpm离心5min，取上清液保存，测定前再12000rpm离心5min(或少许通过0.22μm针式滤器，滤液直接进样用 1.0微升微量进样器瞬时注入色谱仪，进样量为0.2－1.0μL。 (2) 食糜及粪样VFA测定取1g置于离心管中，加入5－10倍的双蒸水，混合均匀。取1mL上清夜，加偏磷酸巴豆酸0.2mL/mL。其它步骤同上。 3．保留时间的确定
快速诊断试剂盒化学反应原理
快速检测试剂盒化学反应原理 1.硫氰酸钠：白色斜方晶系结晶或粉末，易溶于水、乙醇、丙酮等溶剂，水溶液呈中性， 遇铁盐生成血红色的硫氰化铁，遇亚铁盐不反应，与硫酸生成黄色的硫酸氰钠，与钴盐作用生成深蓝色的硫氰化钴，与银盐或铜盐作用生成白色的硫氰化银或黑色的硫氰化铜沉淀，在空气中易潮解。 2.液体石蜡：即矿物油，珍珠大米的检测方法：取大米于样品杯中一半体积，加入70℃以 上的热水至样品杯近满处，用洁净牙签轻轻搅动30秒以上，静置片刻使溶液温度降低到50℃以下(固体石蜡的熔点为50～65℃)，如果样品中掺有石蜡，液面上会出现细微的油珠，随着温度的降低和时间的延长液体石蜡的油珠会聚集加大，固体石蜡的油珠会结成白色片状物浮于液面上。 3.工业碱：一般指（碳酸钠）、工业烧碱（氢氧化钠）、工业重碱（碳酸氢钠）。碳酸钠也 被称为纯碱。碱性溶液遇到酚蓝试剂变成紫红色，碳酸钠与钙的可溶性盐生成沉淀，而氢氧化钠或者碳酸氢钠遇到钙的可溶性盐则不会发生沉淀。 4.甲醇：工业酒精，甲醇经氧化试剂氧化后形成甲醛，甲醛可与品红-亚硫酸作用生成蓝紫 色化合物。（氧化剂配制：高锰酸钾-磷酸溶液，混合后不容易保存，所以分开配制逐一添加。品红-亚硫酸溶液：混合后不易保存，同样是分开配制逐一添加。亚硫酸为亚硫酸钠与盐酸配制所得，可百度。） 5.甲醛：乙酰丙酮法原理是利用甲醛与乙酰丙酮及氨生成黄色化合物二乙酰基二氢卢剔啶 后，412nm下进行分光光度测定。此法最大的优点是操作简便，性能稳定，误差小，不受乙醛的干扰，有色溶液可稳定存在12hr；缺点是灵敏度较低，最低检出浓度为 0.25mg/L，仅适用于较高浓度甲醛的测定；方法缺点是反应较慢，需要约60min；SO2 对测定存在干扰(使用NaHSO3作为保护剂则可以消除)。变色酸法也称铬变酸法,甲醛在浓硫酸溶液中可与变色酸(1,8-二羟基萘-3,6-二磺酸)作用形成紫色化合物。该法的优点是操作简便、快速灵敏；缺点是在浓硫酸介质中进行，不易控制，且醛类、烯类化合物及NO2等对测定有干扰。酚试剂法原理是甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物，颜色深浅与甲醛含量成。正比副品红法原理是在甲醛存在下，亚硫酸根离子与副品红生成紫色络合物，其最大吸收峰在570nm处，检测限为50μg/L。本法的优点是简便灵敏，其它醛和酚不干扰测定；缺点是褪色快，灵敏度不高，易受温度影响，使用了有毒的汞试剂。AHMT法原理是甲醛与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，3－三氮杂茂（AHMT）在碱性条件下缩合,然后经高碘酸钾氧化成6- 基-5-三氮杂茂[4,3-b]-S-四氮杂苯紫红色化合物,比色定量。该方法优点是抗干扰能力强，对乙酰丙酮法、MBTH法及副品红法干扰严重的六胺对此测定方法无干扰，因此，该法是测定树脂交联过程释放甲醛的有效方法；灵敏度较高，最低检出限为0.01mg/m3，较适宜与一般情况下室内空气的检测；缺点是颜色随时间逐渐加深，要求标准溶液的显色反应和样品溶液的显色反应时间必须严格统一，在显色体系最大吸收波长550nm测定，Co2+、Cu2+干扰测定。溴酸钾－次甲基蓝法原理是在酸性介质中，甲醛可促进溴酸钾氧化次甲基蓝反应，降低体系吸光度的特点来快速测定甲醛含量。次甲基蓝在665nm处有最大吸收峰，在H2SO4介质中加入KBrO3能使其吸收峰微降，而再加入甲醛后，其吸光度会显著下降，△A降低与甲醛浓度成正比。银－Ferrozine法原理为水合氧化银能氧化甲醛并被还原为Ag，产生的Ag与Fe3+定量反应生成Fe2+，Fe2+与菲洛嗪（Ferrozine）形成有色配合物 6.溴酸钾：见附页。 7.硫酸镁：络合滴定法取供试品适量，加水溶解，以铬黑T为指示剂，用乙二胺四醋酸钠 滴定液（0.05mol/L)滴定至溶液自紫红色转变为纯蓝色。每1mL乙二胺四醋酸钠滴定液
测定方法-游离脂肪酸
2.1.4游离脂肪酸测定方法2.141 试剂 乙醇-乙醚混合溶液：无水乙醚与95沱醚1:1（V）混合，每100mL溶剂加入0.3mL酚酞指示剂 0.1M KOH标准溶液：称取5.8gKOH溶于1000mL新沸冷却蒸馏水中，摇匀，按下 法标定其摩尔浓度。称取在125 C烘至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾 0.8608g ,精确至0.0002g ,置于250mL锥形瓶中，以50mL蒸馏水溶解， 加入2-3滴酚酞指示剂，用上述KOH容液滴定至粉红色，同时做空白试 验，KOH标准溶液摩尔浓度M G— （V V。）0.2042 式中：G—邻苯二甲酸氢钾质量，g V —KOH容液用量，mL V 。一空白试验KOH溶液的用量，mL 0.2042 —每mol邻苯二甲酸氢钾的质量,g 计算结果：M KOH二0.86080.0942 （44.85 0.10） 0.2042 1獅酞指示剂：1g酚酞溶于100mL95乙醇中 2.1.4.2 仪器 250mL锥形瓶，25mL滴定管分析天平 2.2.5游离脂肪酸（FFA）含量的测定⑴: 精确称取样品5.0g，置于锥形瓶中，用水浴微热熔融，加入预先中和的乙醚、乙醇混合液50mL使之溶解，加入1%酚酞5滴，然后用氢氧化钾标准溶液滴至呈粉红色，10s 内不退色为终点，记录消耗氢氧化钾标准液的毫升数。游离脂肪酸质量分数（以油酸计）为
m 式中FFA 游离脂肪酸的质量分数 V-消耗氢氧化钾标准溶液的体积（mL C-氢氧化钾标准溶液的浓度（mol/L ） 282-油酸的摩尔质量（g/mol ） m 样品质量（g ） 2.1.5游离氨基酸测定方法 2.1.5.1 试齐I 」 40%中性甲醛：40mL 甲醛溶于60mL 蒸馏水中，用1mol/L NaOH 调pH 为8.1 0.1%百里酚酞：0.1g 百里酚酞溶于90mL 乙醇，加水至100mL 0.1M NaOH B 准溶液：称取110gNaOH 溶于100mL 无CO 的水中，摇匀，注入聚乙烯容器 中，密闭放置至溶液清亮。用塑料管量取5.1m 上层清液，用无CO 的水稀释至1000mL 摇匀。 称取0.75g 于105-110 C 烘至恒重的邻苯二甲酸氢钾，加入无 CO 水溶解，加2滴酚酞指示液，用配好的NaOH 底至溶液呈粉红色， 并保持30s ，同时做空白实验。NaOH 标准溶液的摩尔浓度 M NaOH m 1000 (V 1 V 2)M 式中:m —邻苯二甲酸氢钾 质量， g V 1 —NaOH 体积，mL V 2 —空白试验消耗NaO 啲体积， mL M —邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量， 204.22g/mol 计算结果： M NaOH =—— 0.7512 1000 — =0.11026 (33.41 0.05) 204.22 FFA V C 282 1000 100
脂肪酸的测定
2.2.1.脂肪酸的变化分析 试剂：0.3％甲醛、6 mol/l HCl-CH3OH溶液、三氯甲烷 方法：GC—MS联用分析测定，步骤如下： （1）菌体的培养与收集 Ⅰ组实验菌株用YPD液体培养基培养，在培养基中添加一定量的抗冻保护剂，接种后放入30℃、150 r／min的摇床中培养24 h。细胞振荡培养至生长对数中期，移取适量细胞悬浮液至-30℃冰箱冷冻7d，取出30℃下解冻5-10min，用0.3％甲醛灭活后，4000 r／min下离心5 min，弃去上清液，用蒸馏水洗涤，离心收集细胞，-18℃冷冻，冷冻真空干燥制得干细胞后备用。 空白样用0.3％甲醛灭活后，4000 r／min下离心5 min，弃去上清液，用蒸馏水洗涤，离心收集细胞，-18℃冷冻24h，冷冻真空干燥制得干细胞后备用。 Ⅱ组实验菌株用于面包冷冻面团的制备，添加抗冻保护剂，于-20℃冷冻30d 后取出解冻，取20g解冻后的面团，分散于180ml无菌水中，震荡30min，静置15min，离心并取上清液。用0.3％甲醛灭活后，4000 r／min下离心15 min，弃去上清液，用蒸馏水洗涤，离心收集细胞，-18℃冷冻，冷冻真空干燥制得干细胞后备用。空白样则不添加抗冻保护剂，其余处理方法一样。 （2）脂肪酸的甲基化与提取 取50 mg冻干细胞加入6 mol/l HCl-CH3OH溶液2 ml，置100℃的条件下盐酸水解甲基化3 h，溶液呈现棕褐色(或黑褐色)，取出，置室温下冷却。加入正己烷1.5ml振荡。经4000 r／min离心10min，收集上清液再加入正己烷1.5ml 抽提一次，合并两次上清液，加入蒸馏水3ml，经4000 r／min离心10 min，收 吹干，加入10μl三氯甲烷制备脂肪酸酯化液。集上清液于离心管中。用流动N 2 （3）薄层层析 用玻璃毛细管取脂肪酸酯化液点在硅胶G-TLC薄层板上，以正己烷+无水乙醚(1+1)为展层系统，待层析液至硅胶板上缘后立即取出薄层板，风干。在UV254灯下检查制备的脂肪酸纯度与相对浓度。将脂肪酸甲酯带做好标记，轻轻刮下， 吹干后加入0.5ml无水甲醇振荡溶解，然后进行GC—用二乙醚抽提两次，经N 2 MS分析。（4）GC—MS操作条件程序升温：初温130℃，保持1 min；终温280℃，维持min，升温速度7．6℃／min。检测器温度250℃；载气(He)流速30 ml／min；分流比50：1；流速(He)49．9 ml／min；进样量1μl。（2）中质谱条件用电子轰击源(Ⅱ)分析，电子能量为70eV，离子源温度230℃，接口温度280℃，质量扫描范围35—500。
挥发性脂肪酸(VFA)的测定
挥发性脂肪酸(VFA)的测定 一般来说，碳原子数在10以下的脂肪酸大部分具有挥发性，并且易溶于水。在它们中间，随着碳原子数的增加，挥发性逐渐下降。典型的挥发酸见下表： 低级脂肪酸的分子式及沸点 挥发性脂肪酸易被微生物利用。在有机物的厌氧分解中，挥发性脂肪酸是作为生物代谢的中间或最终产物而存在。在厌氧发酵的液化产酸阶段，这一类低级脂肪酸是这一阶段的主要产物，其中以乙酸为主。在某种条件下，乙酸可以达到该类酸总量的80%。在CH4形成过程中，甲酸和乙酸是形成甲烷的重要前体物。据研究，自然界有机物产生的CH4中大约有70%上由乙酸中的甲基原子团形成的。丙酸、丁酸可以转化成甲酸。有机酸过多往往反映出发酵池的病态。因此可以认为，在微生物厌氧发酵过程中，挥发性脂肪酸不仅是一种不可缺少的营养成分，更重要的意义在于这类有机酸已是沼气发酵研究有机物降解工艺条件优劣的重要参数，在甲烷形成的研究和生产中，它们的含量也是重要的参数。
在挥发性脂肪酸的总量测定中，是以乙酸作为基数进行计算，除了要求测定总量外，对甲酸、乙酸等各种低级脂肪酸的分别定量分析也是十分重要的。 一、滴定法测VFA： 1、原理 将废水酸化后，从中蒸馏出挥发性脂肪酸，再以酚酞为指示剂用氢氧化钠滴定馏出液。废水中的氨态氮先在碱性条件下蒸馏出。 2、仪器：50ml碱式滴定管、锥形瓶、带磨口的具支蒸馏烧瓶（500ml）、与烧瓶配套的蛇形冷凝管、橡胶导管、电炉试剂： (1)10%氢氧化钠：10g氢氧化钠溶于水,稀至100ml。 (2)10%磷酸溶液：取70ml浓磷酸稀释至1L。 (3)酚酞指示剂：称取0.5g酚酞溶于50ml 95%的乙醇中,用水稀释至100ml。 (4)氢氧化钠标准溶液(0.1000mol/L)：称取60g氢氧化钠溶于50ml水中，转入聚乙烯瓶中静置24h以上，吸取上层清夜约7.5ml 置于1000ml容量瓶中,稀释至标线，摇匀。 称取在105-110℃干燥过的基准试剂(邻)苯二甲酸氢钾约0.5g （称准至0.0001g）,置于250ml锥形瓶中，加无二氧化碳水100ml
游离脂肪酸(NEFA)测定试剂盒(ACS-ACOD酶法)产品技术要求百奥泰康
游离脂肪酸(NEFA)测定试剂盒（ACS-ACOD酶法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸的浓度。 1.1产品规格 1.2 组成成分 1.2.1 试剂组成 试剂1：磷酸盐缓冲液（pH=7.0） 50mmol/L；
辅酶A 0.5mmol/L； ATP 3 mmol/L； 乙酰辅酶A合成酶（ACS ） 0.4KU/L； ）2mmol/L； 氯化镁（MgCl 2 偶联终点比色法结合成份（Trinder结合成份）0.5g/L； 表面活性剂和稳定 剂＜1%； 试剂2：磷酸盐缓冲液（pH=7.0） 50mmol/L； 乙酰辅酶 A 氧化酶（ACOD ）30KU/L； 过氧化物酶（POD ） 45KU/L； 4-氨基安替比林（4AAP） 1.5g/L； 表面活性剂和稳定剂＜1% 1.2.2 校准品的组成 单水平的液体校准品，在50mM pH7.0的磷酸盐缓冲液中添加十六烷酸纯品，稳定剂<0.5%；定值范围：0.8-1.2mmol/L。 1.2.3质控品的组成 两个水平的液体质控品，在牛血清(20g/L)中加入十六烷酸纯品，添加的牛血清的比例为5%-10%，稳定剂<0.5%；目标浓度范围：低水平（0.30-0.60）mmol/L，高水平（0.80-1.20）mmol/L。 2.1 外观 液体双试剂：试剂1：无色或淡黄色澄清液体；试剂2：黄色澄清液体。
校准品：无色或淡黄色澄清液体。 质控品：无色或淡黄色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 空白吸光度 试剂空白吸光度应≤0.3。 2.4 分析灵敏度 浓度为0.5mmol/L时，吸光度差值的绝对值在0.01-0.2范围内。 2.5 线性 在(0,3.0]mmol/L线性范围内，线性相关系数r 应≥0.995；在(0,1.2] mol/L 时绝对偏差不超过0.18mmol/L；在（1.2,3.0]mmol/L范围内的相对偏差不超过±15%。 2.6 精密度 变异系数CV应≤6% 2.7 批间差 不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。 2.8 准确度 回收实验：回收率在90%-110%。 2.9 质控品赋值有效性 测定值在质控靶值范围内。 2.10校准品溯源性要求
脂肪酸检测方法
脂肪酸检测方法 脂肪酸（fatty acid），是指一端含有一个羧基的长的脂肪族碳氢链，是有机物，直链饱和脂肪酸的通式是C(n)H(2n+ 1)COOH，低级的脂肪酸是无色液体，有刺激性气味，高级的脂肪酸是蜡状固体，无可明显嗅到的气味。脂肪酸是最简单的一种脂，它是许多更复杂的脂的组成成分。脂肪酸在有充足氧供给的情况下，可氧化分解为CO2和H2O，释放大量能量，因此脂肪酸是机体主要能量来源之一。 科标检测参照国标及各种文献将脂肪酸衍生化成脂肪酸甲酯，使用十九酸内标，用正己烷提取后稀释后用气相色谱质谱联用仪，外标法结合内标法定量分析。科标检测出具专业脂肪酸检测报告。 检测方法： 1、样品提取 称取适量样品，加入4mL的甲醇/CH2Cl2（1:3）混合溶液，摇匀；恒温在30℃以下超声抽提10min。取出离心管，放于离心机中离心（1800rpm，10min），收集上清液，重复3次；将萃取液在柔和氮气流下吹干。 2、萃取液的皂化 加入3mL 6%KOH的甲醇溶液（配制：6gKOH/甲醇118mL左右），超声10min，放置30min，重复3次，室温放置过夜（瓶盖盖紧）进行碱水解；加入2mL正己烷，超声10min，摇匀，震荡离心，弃除上层正己烷萃取液，重复3次。在上述萃取完剩下的溶液中（水相），加入约1mL 4N的HCl使pH<2，再用2mL正己烷萃取3次。 3、脂肪酸的衍生化 将上述萃取液，转移到带盖玻璃管中，用氮气吹干后，加入约2mL BF3-MeOH，玻璃管上空间冲入氮气后盖盖密闭，于90℃下加热2h；待样品冷却后，加入5%NaCl溶液约1ml，用2ml正己烷萃取3次，并将萃取液转移到2mL进样瓶中，氮气吹干，待分析。 4、色谱条件 色谱柱：Thermo TG-5MS 30m x 0.25mm x 0.25μm 升温程序：80度起始温度，保持1分钟；10度/min升温到200度，5度/min升温到225度，2度/min升温到250度，保持5min。 MS，EI源， 分流模式：不分流