植物组织培养知识点归纳

1第1章植物组织培养:指植物器官、组织、细胞、原生质体等的培养。体内使用人工培养基使它们生长成完整的植物

2，外植体:在植物组织培养中，

为无菌细胞、组织、器官等。从活植物中提取并接种在培养基上的称为外植体。

3，愈伤组织:指在人工培养基上无序地从外植体中生长出来的大量薄壁细胞。4.

1的应用。

1农业应用。幼苗的快速繁殖。无病毒培养3。

(1)倍性育种，缩短育种年限，具有明显的杂种优势；(2)克服远缘杂交(胚胎培养)的不亲和性和不育性；(3)种质保存(4)变异

2的创造，在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。用于基因工程创造植物新种质用于植物生长发育的理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学、细胞和分子生物学等。

3。使用组织培养材料作为植物生物反应器

第2章

1，全能性:任何具有完整细胞核的植物细胞都具有形成完整植物

所必需的所有遗传信息以及发育成完整植物的能力。

2，细胞分化:指导致细胞形成不同结构和功能变化或潜在发育模式

的过程

3，去分化:指在体外生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构，恢复分生组织状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程4，再分化:指去分化细胞恢复其分化能力并形成具有

特定结构和功能的细胞、组织、器官甚至植物的过程

5，植物组织培养中经常遇到的问题及解决方法

1，污染与预防:

1，真菌污染后，如果孢子已经形成，必须在高压灭菌后丢弃然而，在细菌污染的情况下，只要及时发现，材料仍然可以使用，并且材料上部不易受细菌影响的部分被切割和转移。2.用抗生素等抗菌剂处理会影响植物材料的正常生长第二，

的褐变和防止(1)选择合适的外植体

(2)适宜的培养条件(3)用抗氧化剂连续转移

(4)，玻璃化和防止

(1)提高培养基中的溶质水平和降低培养基中的水势；(2)减少培养基中氮化合物的量；(3)增加光照；

(4)增加容器通气量和施用CO2肥料对降低试管苗玻璃化有明显效果。(5)降低培养温度和进行变温培养有助于减少试管苗玻璃化现象；

(6)降低培养基中细胞分裂素的含量，加入适量的脱落酸4.其他问题及解决办法(1)培养初期:

1，培养用水浸泡，变色，坏死，茎段干燥

改进措施:更换其他杀菌剂或降低浓度，缩短消毒时间；尝试其他部

分，并在开始生长时获取材料。

2，长期培养几乎没有反应

的改进措施:改变基本培养基或调整培养基的组成，特别是调整盐离子的浓度，增加生长素的量，尝试2，4-D，并调整培养温度3.愈伤组织生长过快且疏松，后期被

淹没。改进措施包括减少激素用量，适当降低培养温度，调整无机盐(尤其是铵盐)含量，适当增加琼脂用量以增加培养基硬度。

4、愈伤组织过紧、光滑或突出、过厚、生长缓慢

改进措施:减少细胞分裂素的用量，调整细胞分裂素与生长素的比例，降低糖浓度5.侧芽不发芽，皮层过度膨胀，皮孔长出愈伤组织。改进措施:减少激素用量，采用老枝

(二)继代培养阶段

1，分化苗数量少，速度慢，分枝少，单株苗高

。改进措施包括增加细胞分裂素、降低温度、改善光照、将单芽继代培养改为丛芽(丛芽)

继代培养

2，苗木过度分化，生长缓慢，畸形，节间极短，苗木丛生，微型化改进措施:减少或停用细胞分裂素一段时间，调节温度

3，分化率低，畸形，长时间培养后幼苗愈伤组织形成的改善措施:减少生长素用量，适当降低温度4.叶厚变脆的改善措施

:减少激素用量，避免叶片与培养基接触5.不定芽偶尔在再生苗的叶缘和叶表面分化为

。改进措施:适当减少细胞分裂素或分阶段使用这种再生方法6.丛生苗太细太弱，不能生根或移栽

改良措施:减少细胞分裂素，避免赤霉素，延长光照时间，增强光照，及时转移

，降低接种密度

7、嫩绿苗、偏失绿

改良措施:根据营养元素的缺乏调整培养基，调整酸碱度，调节温度和光照8.对长势弱、黄叶、黄叶和死苗夹在丛式苗中的苗的改良措施:适时切换，降低密度，调整激素配比和营养元素浓度，改善瓶内

体状况，控制温度(3)在生根阶段

1，如果根长时间不生根，在基部切口没有合适的愈伤组织

改良措施:选择合适的生长素或增加生长素的量，适当降低无机盐的浓度2.愈伤组织长得太快太大，根茎膨胀或变形，几个根平行连接或愈合。

改进措施:改变生长素类型或联合使用几种生长素，降低浓度，添加VB2或PG等。减少骨痂等。

6，操作技术1，洗涤技术

1，玻璃器皿洗涤新购置的玻璃旧玻璃2，塑料制品洗涤1%稀盐酸浸泡12小时清水干燥洗衣粉新塑料器皿打开并使用塑料

2%氢氧化钠浸泡

| 12小时蒸馏水

清水

12小时%-5%盐酸30分钟

6 金属制品

热洗衣粉

洗涤干燥

2灭菌工艺1灭菌

(1)介质灭菌:高温高压湿热灭菌

(2)玻璃器皿灭菌:蒸汽高压灭菌干热灭菌(3)塑料器皿的灭菌:大多采用高压蒸汽灭菌；

(4)金属器具灭菌:燃烧灭菌；浸泡在95%酒精中，在酒精火焰上燃烧，冷却后使用。

(5)接种室灭菌

接种室→紫外线灯照射→空气消毒灭菌

洁净工作台→紫外线灯照射，70%-75%酒精擦洗→接种培养物(6)外植体灭菌

用水冲洗10-XXXX年获得纯系，而小孢子培养只需一年

2，有利于筛选隐性突变体，提高选择效率；3.这有利于隐性基因控制性状的选择。4 .快速获得自交系的超雄性植株

第五章

1，单细胞培养方法1，护理培养方法2，微室培养方法3，平板培

养方法

2，细胞悬浮培养的意义:

3，细胞培养的应用

1，植物次生代谢产物的产生2，突变体选择3，多变体的诱导4，原生质体培养的意义

2，原生质体容易吸收外来遗传物质，可作为理想的受体系统。5.原生质体培养方法和融合方法原生质体培养方法:

1，液体浅层培养2，固体双层培养3，固体平板培养4，琼脂糖珠培养5，双层滤纸平板培养融合方法:

(1)无机盐诱导融合

(2)高酸碱度-高钙离子融合(3)聚乙二醇融合(4)电融合技术

6，单倍体植物:细胞中只有配子染色体的植物7.细胞培养:指从体内取出组织，分离细胞，或使用细胞系在体外模拟人体的生理环境，使其在无菌、适宜的温度和一定的营养条件下存活和生长，并保持其结构和功能特征。8.冷冻保存:一种将细胞等储存在液氮中并能在解冻后存活的技术。

9，种质保存:指在自然或人工创造的适宜环境条件下，保存植物种质以保持其活力和

遗传的技术。

10，植物离体繁殖:指利用植物组织培养技术体外培养外植体，在短

时间内获得大量遗传一致的再生植株的方法

11，原生质体:指细胞壁被去除、裸露且有活力的原生质体。

12，原生质体融合:指不同类型的原生质体在人工控制下融合成一个整体而不经过有性阶段形成杂种细胞并进一步发育成杂种植物的技术

第6章

1，植物离体繁殖和传统营养繁殖的优缺点

？繁殖效率高，生长速度快；？培养条件可控。？占用空间小；

？管理方便，有利于自动化控制。？便于种质交流和保存。

2，快速繁殖器官再生型

？短枝型？丛生芽形成？不定芽形成？胚胎发生型？原球茎形成型3，快速繁殖程序和影响因素程序:

a)无菌(或初级)培养物的建立b)繁殖体的繁殖c)芽的生根

d)影响小植株移植和驯化的因素:

？解释？中等？训练条件？亚文化？移植

4，商业化生产中应注意的问题1污染0

污染源:培养基、器皿和器具污染；外植体没有完全灭菌。操作原因；出于环境原因的污染控制:完全灭菌；正确操作；保持手术区域清洁和无菌。2遗传稳定性○

影响遗传稳定性的因素:基因型；亚文化的数量；器官发生模式

减少遗传变异的措施:选择合适的基因型；减少亚文化的数量；采用

适当的器官发生方法；降低生长调节剂的浓度3玻璃化:○

原因:琼脂和蔗糖浓度低；培养温度偏高。高浓度细胞分裂素；乙烯的影响；弱光；培养基含量高等因素

预防措施:提高介质硬度；降低培养基的水势；增加蔗糖含量；增加培养瓶中的气体交换，降低湿度；增加照明、降低温度等4褐变:

培养料中的酚类物质被氧化形成影响

的因素:植物种类和品种(如木本植物比草本植物更褐)；外植体的年龄和取样时间；外植体的损伤程度；光和温度因素；中等成分

第7章

1，无病毒机制和无病毒方法1，热处理无病毒方法:

原理:①热处理能钝化病毒活性，减缓或阻止病毒增殖并丧失感染能力；

②同时加速植物细胞的分裂，使植物细胞能够在与病毒繁殖的竞争中获胜。

2，体外培养和无病毒微体嫁接方法:

原理:用极小(小于0.2毫米)的茎尖作为接穗与砧木连接(无菌种子培养，无

苗，砧木无毒)，然后将嫁接砧木嫁接到新的培养基上培养

3，显微茎尖培养病毒消除方法:

原理:①病毒在植物中分布不均。病毒离顶端分生组织越近，病毒浓度就越低

2病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争，在快速合成的植物细胞中，通常由n-

合成的蛋白质占优势

4，珠心组织培养脱毒方法:

原理:病毒通过维管组织传播，但珠心组织与维管组织没有直接联系，因此可以获得无病毒的

植物该方法已用于去除病毒

5，如柑桔牛皮癣、静脉突出症、柑桔裂皮病和快速腐烂病。愈伤组织培养脱毒方法:

原则:在同一感染组织中，存在未感染病毒的细胞群落，这些无毒细胞通过定植产生无病毒组织

2，普通无病毒植物的检测方法

a)直接观察b)血清鉴定c)电子显微镜鉴定d)生物鉴定e)分子检测第8章

1，种质资源冷冻保存的原则和一般程序

|细胞冷冻和冷冻的保护性脱水原则:

2溶液玻璃化理论0

程序:1。植物材料的选择(培养)

2，材料的预处理

3，冷却冷冻和超低温保存

4，解冻:快速解冻，缓慢解冻5，再培养

6，超低温保存后细胞或组织生存力的检测

2，限制生长和保存种质资源的方式1)高渗保存

2)生长抑制剂保存3)其他抑制生长的保存方法

低压保存方法:降低培养物周围的气压以达到抑制生长的目的，分为低气压和低氧压

，保存原则相似

饥饿法:从培养基中减去1~2种营养元素，使植物缺乏相关营养并保持最低生长量。干燥保存法:降低培养料的含水量

矿物油覆盖法:将培养料与空气隔离。慢速生长

弱光培养:适当降低光照强度，缩短光照时间，然后减慢试管苗的生长

PPT试题集

1，植物细胞全能性:任何具有完整细胞核的植物细胞都具有形成完整植物所必需的所有遗传信息和发育成完整植物的能力

2，细胞分化:指使细胞形成不同结构和功能变化或潜在发育模式的过程

3，去分化:指在体外生长的细胞、组织或器官逐渐失去其原始结构和功能，并恢复其分生组织状态，形成无组织结构的细胞簇或愈伤组织的过程

4，再分化:指去分化细胞恢复其分化能力并形成具有特定结构和功能的细胞、组织、器官甚至植物的过程 5.体外再生植物的方法有哪些？

根、茎或芽器官的出现可以重建植株。最好是先诱导分化芽，然后

生根。(芽前有根，根前有愈伤组织)

离体培养再生植株的主要途径是:器官发生；胚胎发生(类似于合子胚的过程，体细胞胚在形态学和生化水平上类似于合子胚)

6和愈伤组织是如何在器官发生(外植体细胞直接形成器官原)、器官发生(外植体先形成愈伤组织，然后产生器官原)中生长的？

在大多数情况下在细胞去分化过程中形成愈伤组织愈伤组织细胞通常是异质的，没有明显的极性。形成过程可分为诱导期、分裂期和分化期。诱导期(启动期):细胞准备好分裂的时期。细胞大小几乎不变，内部发生生理生化变化，蛋白质和核酸快速合成。

分裂期:外层细胞分裂，中间细胞通常不分裂，形成小核细胞分裂快，结构松散，缺乏结构，浅而透明在原始培养基上，细胞必须及时分化和转移，这样才能不受限制地进行细胞分裂，保持未分化状态。

分化期:细胞在形态和生理功能上的分化，出现不同形态和功能的细胞生长:诱导期过后，外植体外层的细胞分裂，并在组织受损表面形成一层愈伤组织。细胞数量迅速增加，表面细胞的平均重量减少，体积减少。降低温度会减慢细胞生长速度，增加平均体积。纹理类型:脆而密高浓度的生长素能使愈伤组织变脆。高浓度的细胞分裂素可以使它变得紧凑。生理生化变化:次级生物量合成能力的变化，激素需求的变化等。7.植物体细胞胚胎发生的途径是什么？

直接途径:是指在子叶、花序、珠心等外植体的某些部位，由胚性细胞直接诱导和分化体细胞胚

的间接途径:外植体去分化形成愈伤组织，然后愈伤组织的一些细胞

被“确定”为胚细胞，然后体细胞胚被分化。大多数体细胞胚是通过这一途径形成的通常有两个阶段:(1)胚胎发生丛。胚胎发生丛由小细胞组成，细胞内有小液泡和致密的细胞质

(2)胚状体的发育将EC转入培养基中，还原或去除生长素，还原

原氮，培养

8，影响植物离体形态发生的因素有哪些？第一，植物种类和基因型1，植物种类有不同程度的难度；被子植物比裸子植物容易。2.同一物种的不同基因型之间有很大差异。第二，培养物的生理状态为256±1991，发育年龄:一般年轻状态比年老状态具有更高的组织形态发生能力；2.培养器官或组织的类型:细胞分裂旺盛的器官更好；3，培养时间和细胞倍性:旺盛生长期的愈伤组织一般用于诱导器官形成(3)培养基

1和营养成分

普遍认为培养基中的铵态氮和钾离子有利于胚状体的形成，增加无机磷含量可以促进器官发生茎尖培养和芽诱导培养基主要是MS及其改良培养基和B5培养基。茎尖培养的初始培养基和芽增殖的培养基通常是不同的。碳水化合物的类型和浓度在胚状体发育中起重要作用。由于缺糖或含糖量低，不能形成胚状体。2.植物激素和生长调节剂(起主导作用，通过影响内源激素的平衡发挥作用)(1)生长素:促进外植体的生长和生根，与细胞分裂素一起诱导不定芽分化和侧芽萌发生长2，4-D诱导体细胞胚胎发生

(2)细胞分裂素:促进分化和芽形成，抑制根发育和衰老(3)赤霉

素:GA3促进茎伸长，打破休眠，促进芽的诱导和形成(4)乙烯: (5)脱落酸:它对体细胞胚胎发生和成熟很重要，能促进胚性愈伤组织的形成和体细胞胚胎发生

3，培养基性质

(1)愈伤组织诱导:在固体培养基上(胡萝卜、芦笋)(2)细胞和胚状体诱导:在液体培养基上

(3)胚状体或早期胚状体培养的诱导:渗透压要求高4，培养条件

1，在光培养条件下，光影响细胞状态，而不是光合作用连续光照有利于培养细胞中血管组织的形成。日间光照有利于极性的建立和形态发生光强通常需要1000-5000lx植物之间有差异。光照周期为10~16h/天不同的波长有不同的光质效应，蓝光有利于芽的分化，红光有利于根的产生。

2，温度:最大培养温度为25±2℃。花药培养在低温或高温下进行。

3.气体:氧气、二氧化碳、乙烯和其他气体的浓度和通风状况

9，常见的灭菌方法有哪些？

1物理方法:物理灭菌、干热、湿热、辐射处理、物理灭菌、过滤、离心、沉淀等。○

2化学方法:消毒剂和抗生素灭菌○

10，接种材料如何消毒？

首先，将材料切割成合适的尺寸，即灭菌容器适于释放人员。将水龙头放在自来水下清洗几分钟到几个小时。可以加入洗衣粉进行洗涤秒，在70%-75%的酒精中浸泡10-30秒。

第三步，用0.1%氯化汞作为消毒剂处理5-10分钟重金属汞离子可以消毒高汞。第四，用无菌水冲洗4-6次，每次不少于3分钟，以尽可能去除残留毒物11、组织培养中如何避免污染？

1，清洁并彻底消毒组织培养所用的仪器2，不要使用过期的母液作为培养基3，对培养基

4进行湿热灭菌处理，在接种室配备空气过滤器或安装紫外线灯5，并定期消毒培养室

12，

在离体茎尖培养后会发生什么样的培养反应如何获得无菌培养材料？

1，获得无菌外植体，建立原代培养

3，形态发生和植株再生

4，观察和记录培养产物，清洗外植体，用灭菌剂灭菌外植体，用无菌水洗涤外植体3-5次

14。为什么未成熟胚胎的培养基和培养条件比成熟胚胎更严格？

可以在相对简单的培养基上萌发和生长以形成幼苗，只要提供合适的生长条件和打破休眠，因为成熟胚的生长不依赖于胚乳的贮藏营养。未成熟胚胎对营养物质的需求比成熟胚胎更复杂，以保证体外未成熟胚胎能够沿着胚胎发生途径发育。

15，比较胚胎培养、胚珠培养和子房培养的异同(1)胚珠培养在人工控制的条件下，胚珠体外培养使其生长发育形成幼苗的技术由于未成熟胚的分离困难，胚珠的分离相对容易，胚珠培养经常用于未成熟胚

的培养。有两种类型:受精胚珠培养和未受精胚珠培养，以防止杂种胚的早期败育并获得杂种植株。受精前的胚珠培养可作为体外受精的基础；未受精的胚珠可以被培养以获得单倍体植株用于单倍体育种。

(2)与胚培养相比，可分为成熟胚培养和未成熟胚培养，其中成熟胚是子叶期后的胚，可以在简单的培养基上萌发和生长对营养条件的要求并不严格。培养发育早期的胚胎对栽培技术和条件的要求相对较高。其作用是克服远缘杂交的不亲和性，打破种子休眠，缩短育种周期，提高种子发芽率。(3)子房培养包括授粉子房培养和未授粉子房培养，授粉子房培养形成成熟果实，未授粉子房培养形成小无籽果实。它的功能是获得杂交植物；未受精精子室内培养为体外受精提供了技术基础。单倍体植株可以从未受精的子房培养中获得，并用于单倍体育种。16.胚胎培养在育种中有什么应用？

1，克服了远缘杂交的不亲和性；例如，“胚胎拯救”技术被用来获得远缘杂种2.打破种子休眠，缩短育种周期

3，提高种子发芽率；特别是对于植物种子的一些长期营养繁殖17.体外授粉的主要意义是什么？

能克服远缘杂交中的不亲和性，特别是子房离体授粉和胚珠离体授粉，并能消除柱头和花柱引起的受精前障碍。18.花药培养

的意义缩短了育种周期，为新品种的选育开辟了新的途径19.花药培养方法

平板培养；液体培养；双层文化；护理培训；微室文化；条件培养基培养XXXX年:单倍体加倍形成纯合二倍体；

2。提高选择效率:加倍后的纯合二倍体具有相同的等位基因，没有明显的隐性基因相互覆盖；(3)获得纯雄性植物等特殊育种材料；4.选育自交系

21，什么是细胞培养方法？它的特点是什么？

方法:护理文化；微室文化；平板培养(1)护理培养法是指用一块生长活跃的愈伤组织来护理单个细胞并使其生长和增殖的方法。

特点:①简单易操作

②效果好，容易成功

③不能在显微镜下直接观察细胞生长过程

(2)微室培养:细胞在少量培养基中培养

特征:培养过程中可连续进行显微镜观察，并可记录细胞生长、分裂和形成

团簇的全过程。

(3)平板培养法是一种将单细胞悬液和融化的琼脂培养基均匀混合并铺展在培养基质薄层上的培养方法

特点:定点观测；分离单细胞系比浅层液体培养容易。培养细胞的气体交换不是

常

22，如何测量培养细胞的活力？

1、TTC法

2、荧光素二乙酸法(FDA法)

3、伊凡蓝染色法

23、FDA活力测定的原理是什么？

？食品和药物管理局本身没有极性，不能发出荧光，可以自由进出细胞膜？在活细胞中，FDA被酯酶切割，释放极性荧光素？荧光素不能自由穿过质膜并在活细胞中积累？荧光素不能在死细胞中积累。？在紫外线照射下，活细胞中的荧光素发出绿色荧光

24。如何获得同步培养的细胞？

①体积选择法:通过细胞体积分级直接分选同一周期的细胞，然后在同一培养体系中传代培养相同状态的细胞。

②饥饿法:在培养系统中，如果细胞生长的基本成分丢失，细胞分裂将因饥饿而受阻，从而停留在一定的分裂期。

③抑制方法:用一些DNA合成抑制剂处理细胞，使细胞停留在DNA 合成的前期。抑制解除后，可以获得处于相同细胞周期-G1时相的同步细胞④低温方法:低温处理也能提高培养系统中细胞的同步化程度。25.影响细胞培养的因素？

1，培养基组成:

N6，MS，B5适合单子叶细胞培养，

MS，B5，LS，SL适合双子叶细胞培养条件培养基适合单细胞和低密度细胞培养需要更高浓度的硝态氮、铵态氮和无机磷。

2，细胞密度:培养基的组成和初始细胞密度对单细胞培养的成败有影响

初始密度:细胞培养的最低有效密度，即能使细胞分裂和增殖的最低接种量，低于此量细胞不能分裂，甚至很快解体死亡。

3，植物生长调节剂:细胞悬浮培养通常表现出自然聚集现象。添加2，

4-D、少量水解酶或酵母提取物可增加细胞分散。4、加入酸碱度和CO2浓度为

的乙二胺四乙酸，使铁和其他金属离子能长期有效。在悬浮培养中，酸碱度变化很大。硝酸盐氮和铵氮之间的调节可用作稳定酸碱度的方法二氧化碳对细胞培养影响不大，但在低密度细胞培养中，二氧化碳可能在诱导细胞分裂中起重要作用。26.细胞悬浮培养

用于在液体培养基中悬浮离体植物细胞的无菌培养物27、分批培养是指将细胞分散在一定体积的培养基中进行培养，当培养物增殖到一定量时，转移传代培养，建立单细胞培养这是细胞生长和细胞分裂的生理生化研究中常用的培养方法。28.连续培养

是一种使用特殊培养容器进行大规模细胞培养的方法。在培养过程中，不断提取悬浮培养物，并注入等量的新鲜培养基，使培养物不断补充营养，保持恒定体积的培养物

27，解释了原生质体分离中机械分离和酶分离的特点

机械分离:排除酶对原生质体结构和代谢活性的影响这种方法很乏味；原生质体产量低；血浆壁的高度分离损害细胞

酶分离法:条件温和，原生质体完整性好，活性高，产量高28、原生质体纯化方法？决定原生质体活力的方法有哪些？

的纯化方法:(1)过滤离心法:采用40-100 μm筛网过滤收集细胞，采用低速离心收集沉淀，重复3-4次获得原生质体

(2)漂浮法:原生质体比重小，漂浮在一定的渗透溶液(如25%蔗糖溶液)中，用吸管收集

(3)界面法测定

活力:(1)形态鉴定:形态完整、细胞质饱满、颜色鲜亮的原生质体是活的

(2)染色识别:用0.1%酚藏红或伊文思蓝染色活细胞未染色，

个死细胞染色

29，原生质体培养方法及特点简介

固体平板培养法；浅层液体培养；固液双层培养法；琼脂糖珠培养；双层滤纸平板培养

30，原生质体融合的方法有哪些？

融合方法

(1)无机盐诱导的融合

是由无机盐如NaNO3、KNO3、Ca2(NO3)2、氯化钠、氯化钙、葡萄糖硫酸钠、葡萄糖硫酸钾等诱导的最早的融合方法已经被应用，但是由于异核体形成率低和对细胞的毒性，目前还没有被广泛应用。(2)高ph-高钙离子融合

0.05 mol/l氯化钙2.2ho，pH9.5-10.5，能改变质膜和融合体的表面特性

由于其异核体形成率低和对细胞的毒性而未被广泛使用。

(3)聚乙二醇融合

融合原理:在短时间内，细胞质膜粘附形成细胞质桥进行融合

32，试描述植物快速繁殖的全过程及其影响因素

工艺:无菌(或第一代)培养的建立→繁殖体的增殖→芽的生根→小植

株的移植和驯化。影响因素:外植体、培养基、培养条件、继代培养、移栽

34，植物快速繁殖的器官发生类型有哪些？

1短枝型0

2丛生芽型0

3不定芽型0

4胚状体型0

5原球茎型0

36，植物的离体繁殖和商品化生产应注意哪些问题？

1污染○

污染源:媒介、用具和用具污染；外植体没有完全灭菌。操作原因；出于环境原因的污染控制:完全灭菌；正确操作；保持手术区域清洁和无菌。2遗传稳定性○

影响遗传稳定性的因素:基因型；亚文化的数量；器官发生模式

减少遗传变异的措施:选择合适的基因型；减少亚文化的数量；采用适当的器官发生方法；降低生长调节剂的浓度3玻璃化:○

原因:琼脂和蔗糖浓度低；培养温度偏高。高浓度细胞分裂素；乙烯的影响；弱光；培养基含量高等因素

预防措施:提高介质硬度；降低培养基的水势；增加蔗糖含量；增加培养瓶中的气体交换，降低湿度；增加照明、降低温度等4褐变:

培养料中的酚类物质被氧化形成影响

的因素:植物种类和品种(如木本植物比草本植物更褐)；外植体的年

植物组织培养的基本步骤

植物组织培养的基本步骤成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。培养基的主要成分【水分】【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂【凝固剂】琼脂【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银培养基和组织培养用具的灭菌方式【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口

【培养瓶表面】70%乙醇擦拭【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒植物外植体的灭菌方式【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】

植物组织培养试题与答案(集合版)

植物组织培养练习题 1.植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞，进行离体培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件；植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体等。 4.脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的全部操作过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。二填空植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。

植物组织培养在花卉生产上的应用

…………号… 座………………线………… 号… 学………………………封级班…………………………别… 系…密………………名… 姓………植物组织培养在花卉生产上的应用摘要：植物栽培技术虽然发展比较晚，但是在经过20世纪后的几十年，经过众多科学家的努力与奋斗，这项技术越来越完善，越来越成熟。尤其近40年以来，植物组培技术已渗透到植物生理学、病理学、遗传学、药学、育种以及生物化学等各个研究领域，为快速繁育优良品种，培育无毒苗木，进行突变筛选培育，药用植物工厂化生产，种质保存和基因库建立等方面开辟了新途径，成为生物学科中的重要研究技术和手段之一。现如今，植物组织培养技术具有保持花卉优良性状、培育脱毒苗木、保存种质资源等优质，根据这些优势，植物栽培技术也被广泛应用于花卉的种苗繁殖与生产之中。关键字：植物组织培养；快繁；花卉 1花卉产业介绍在我国随着人民生活水平和文化素养提高，花卉消费这一时尚已逐步进入家庭，这是一个巨大的消费市场。全国各地兴起许多花卉交易市场，对这种发展趋势又起着推波助澜的作用。组培苗具有无杂菌、优质、均匀、分蘖性强、繁殖率高、批量生产、周年供应、便于运输等优点。 2花卉领域中组织栽培优势

2.1脱毒及快繁植物生长在自然环境下，十分容易受到病毒的感染。植物感染病毒后，虽然未必死忙，但却会引起产量下降，品质变劣，观赏价值下降。采用无性繁殖的植物，在繁殖过程中病毒可通过营养体进行传递，逐代积累，使病毒病的危害更为严重。为保持植物体原有的优良晶质和经济价值，达到无病源菌化，其前提就是使无病无菌植物体再生。最有效的方法就是使用植物组织培养法之一的茎尖生长点培养法。这种培养技术最先应用于花卉。宿根性茬卉有康乃馨、菊、大丁草、丝石竹、补血草;球根性花卉有百合、小苍兰、唐葛蒲、茸尾、柱顶红;还有花木类的蔷薇、杜鹃花等都已广泛应用。作为无病无菌植物体再生的手段，主要有两方面: (1)培养茎尖生长点，获得一顶一芽一株植物体; (2)由茎尖长成愈伤组织再分化形成大量植物体。由于后者有出现植物体变异的可能性，不应考虑克隆。茎尖生长点就是芽顶端直径为 0.6一 0.1毫米的半球形组织。在这部分，病源体(病毒、病菌)含有的浓度比其他任何部位都低。无病毒植物体和无病无菌植物休再生的优点在于可以避免因病害造成的生产量和品质的损失.，提高经济效益，具体表现在: (1)花卉色泽鲜艳; (2)每一花茎的着花数增加; (3)植株生长的速度和能力增加; (4)栽培管理的劳动量减少;伍)单位面积产量增加等等。这些优点在受到病害的植物体是不存在的，因此很有价值。 2.2大量快速繁殖

论植物组织培养学习心得

论植物组织培养学习心得摘要：经过大三一个学期，我有幸选修了一门有关丁植物组织培养的课程，作为一个人文院法学学生，我对丁理科，尤其是农学方面了解甚浅。我怀着无比激动和忐忑的心情上了这门课，毕竟对我来说这就像是开启了一个新世界的大门，所有一些知识都对我来说是新鲜的。经过一个学期的学习，我也掌握了一些植物组织培养方面的知识，虽然说并不是太多，但是我觉得这都对我以后的发展和开阔视野都提供了很大的帮助。关键词：植物培养；植物组织与法学的关系；对自己的帮助一、植物组织培养的学习内容 1、组织培养植物组织培养，主要的原因有两个，第一个是为了基因转化做基础，还有一点是为了开发药用植物。植物组织培养概念乂叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。它的作用大致分为三点：①组织培养是研究植物生长和分化规律的重要手段组织培养是在人工控制条件下培养外植体再生器官或植株的技术，可以在不受植株体其它部分干拢下研究被培养部分生长和分化的规律，并可以利用各种培养条件影响它们的发育进程。②组织培养是开展生物工程的基本技术各种基因转移和基因重组技术是组织培养基础上建应的。③组织培养可快速繁殖植物种苗目前组织培养在无性系的快速繁殖、无病蠹种苗培育、新品种的选育、人工种子和种

质保存、药用植物和次生物质的工业化生产等方面的应用已十分广泛。 2,马铃薯的脱蠹脱蠹种薯是指马铃薯种薯经过一系列技术措施活除薯块体内的病蠹后, 获得的无病蠹或极少有病蠹侵染的种薯，它具有早熟、产量高、品质好等优点。马铃薯的产量和质量与种薯密切相关。种薯不行，产量和质量就会大打折扣，病蠹一旦侵入马铃薯植株和块茎，就会引起马铃薯严重退化，并产生各种病症，导致马铃薯产量大幅下降。因此，要经过一系列物理、化学、生物等技术活除薯块体内病蠹的种薯。这项技术我国早在6年前就在马铃薯主产区推行，通过这项技术可以实现大田平■均增产30吩50% 那么到底是怎么脱蠹的呢？首先，应该做的是取材与消蠹。将欲脱蠹的品种块茎催芽，芽长4?5cm时，剪芽并剥去外叶，自来水下冲洗40min, 丁无菌室内用漂白粉溶液消蠹后，无菌水冲洗2?3次。其次第二个就是应该剥离和接种：在无菌室内，丁40倍的解剖镜下,剥取带1个叶原基的茎尖，接种丁M*尖培养基的试管中。试管中的M弘尖培养基包括大量元素、微量元素、有机成分和生长素、细胞分裂素、蔗糖和琼脂,pH值为5.8,经高压灭菌后使用，每试管接种1个茎尖。再次是有一个合适的培养条件，接种的茎尖培养丁25C、1500?3000lx光照条件下培养室内，3个月则长成3?4片叶的小植株。在无菌条件下，进行切段扩繁1 次，取部分苗进行病蠹检测。最后是病蠹检测，病蠹检测是茎尖脱蠹不可缺少的步骤，常用鉴别寄主即指示植物或血活学方法进行检测。经多次检测，及时淘汰血活学阳性反应或在指示植物上有症状的茎尖苗，无任何反应的茎尖苗即脱蠹苗用作繁殖。 3,植物组织培养应用在哪几个方面？第一点是植物组织培养是转基因技术不可或缺的技术。在我们现代科技，转基因技术是现代科技必不可缺的一项技术，它应用丁现代生活的各个领域。尤其在植物组织培养方面很需要转基因技术。第二点，染色体不同倍性的多倍体植物产生。第三点是杂交离体培养可以克服受精前的障碍，比如说对丁幼胚的培养，体细胞的融合。第四点是对植物进行的脱蠹。对植物进行一系列的活除措施来使植物能大幅度的提高产量和植物的等级，让植物长得更加健康。例如马铃薯，草莓，苹果，橘子都可以进行脱蠹。第五点是节约地面积，并不受季节的限制。在我们学习过植物组织培养之后，我们通过技术的学习，可以对植物的种植面积进行更好的分配，而且也可以种植一些耐寒植物等都可

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植物组织培养考试复习题植物组织培养绪论P1 第一章植物组织培养的基本原理P3 第二章植物组织培养的基本原理P6 第三章植物器官和组织培养P口第四章胚胎培养及离体授粉P16 第五章花药和花粉培养P20 第六章植物细胞培养P24 第八章原生质体培养P27 第九章植物离体繁殖P30 第十章无病毒苗木培育P33 植物组织培养基本操作P35 1 绪论植物组织培养的概念植物组织培养是在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、由于培养的植物材料已脱离母体，乂称为植物离体培养(Plant culture in vitro)o 广义：对植物的器官、组织、细胞及原生质体进行离体培养技术植物组织培养

狭义：对植物的组织(分生组织、表皮组织、薄壁组织等)及培养产生的愈伤组织进行离体培养。 1.无菌：使培养器皿、器械、培养基和培养材料等处于无真菌、细菌、病毒等微生物的状态，以保证培养材料在培养器1111中正常生长和发育。 2.人工控制的环境条件：对光照、温度、湿度、气体等条件进行人工控制，以满足植物培养材料在离体条件下的正常生长和发育。 3.外植体：由活体（in vivo）植物体上提取下來的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。（植物组织培养中，使用的各种器官、组织和细胞统称为外植体。） 4.愈伤组织：外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。（在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。）植物组织培养的特点植物组织培养的主要特点是采用微生物学的实验手段来操作植物离体的器官、组织和细胞。具体特点表现在： 1）组织培养的整个过程都是在无菌条件下进行的，外植体、培养基、接种环境都须经过无菌处理。 2）组织培养在多数情况下是利用成分完全确定的人工培养基进行的, 除少数特殊情况（进行营养缺陷型突变细胞的筛选）夕卜，素、微量元素、有机物和植物激素，培养基的PH和渗透压也是人为设定的。因此，在组织下也能再生完整植株。14）组织培养物通过连续继代培养可以不断增殖，

植物组织培养的应用及发展前景修订稿

植物组织培养的应用及发展前景集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]

植物组织培养技术应用及进展摘要：本文综述了植物组织培养理论的发展，重点论述其再脱毒、快繁、育种与有机化合物工业生产以及种质资源的保存等方面的应用，并对应用的前景作简单的展望。关键词:植物组织培养；应用；进展中图分类号： 1.理论起源 19世纪30年代，德国家施莱登和德国动物学家创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。1902年，德国植物学家哈伯兰特在的理论是植物组织培养的理论基础。1958年，一个振奋人心的消息从传向世界各地，美国植物学家斯等人，用韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。植物组织培养的简单过程如下：剪接植物器官或组织——经过（也叫去分化）形成愈伤组织——再经过形成组织或器官——经过培养发育成一颗完整的植株。植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，用纤维素酶与果胶酶处理用以去掉细胞壁，使之露出原生质体，然后放在适当的人工上进行培养，这些器官或组织就会进行，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做。在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科 2.植物组织培养发展简史植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。它是在人工配制的培养基上，于无菌状态下培养植物器官、组织、细胞、原生质体等材料的方法。植物细胞的全能性是植物组织培养的理论基础。20世纪初，曾有人提出能否将植物的薄壁细胞培养成完整植株研究者从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织，并在液体培养基中培养，使其分化出了愈伤组织，从愈伤组织又得到胚状体，胚状体转移到固体培养基上继续培养后，获得了完整的胡萝卜试管植株。经过栽培，此植株能够正常生长并开花结果，其种子繁衍出来的后代与正常植株的种子所繁衍出的后代别无二致。根据此实验可以得出以下结论：即不经过有性生殖过程也能将植物的薄壁细胞培养出与母体一样的完整植株。由于植物的每个有核细胞都携带着母体的全部基因，故在一定条件下，它们均能发育成完整植株，这就是所谓的植物细胞全能性。

植物组织培养复习资料.doc

1.植物组织培养按培养对象分为______ 、 _______ 、________ 、 ________ 、________ 等几种类型。 2.一个己停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成耒分化的愈伤组织的现象称为 n tv 3.不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样，次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生 _________ 来杀菌的；升汞是靠 ________ 来达到灭菌日的。 4.去除植物病毒的主耍方法是 _____ 和_______ 两种方法，当把二者结合起來脱毒效果最好 5.在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以 __________ mm、带 ________ 个叶原基为好。 6.White培养基________ 浓度低，适合生根培养。 7.一个已停止分裂的成熟细胞转变为_________ 状态，并形成_________ 的现象称为“ 脱分化”。 8.BA/NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进 ________ 的生长，这时 _________ 占主导地位；比值高促进_________ 的生长，这时 _________ 占主导地位。 9.进行植物组织培养最基本的前提条件是 _____ 。 1、植物组织培养的理论基础是植物细胞全能性。 2、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、夭平、显微镜、蒸饱水发生器等。 3、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的碳源，而且还能维持培养菇渗透压 4、培养基灭菌一般在-108 kPa的压力下,锅内温度达121 °C ,维持20-30 min o 5、在离体叶培养中，6?BA和KT利于芽的形成:24D利于愈伤纟FI织的形成 6、在离体叶组织脱分化和再分化培养屮，茎和芽的分化主要有4个途径：方?接产生不泄芽、由愈伤组织产工不定芽、胚状体形成、形成球状体或小鳞茎等途径。 7、目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径是茎尖培养脱毒。 8、花药培养前的预处理:低温冷藏是最常用的方法。 1、植物组织培养的发展分为三个阶段：萌芽阶段、奠基阶段和快速发展和丿、'、/「用阶段。 2、培养基最常用的碳源是蔗糖,使用浓度在1%?5%常用 _3_%o 3、培养基的种类按其态相不同分为固体培养基与液体培养基，其火菌方法一般采用壷热消毒灭菌方法。 4、 pll的大小会影响琼脂的凝固能力，一般当pll大于6.0时，，培养基将会 ___________ ,低于5.0时，琼脂不能很好地凝同。 5、一般情况下，生长索/细胞分裂素的比值高，有利于根的形成和愈伤组织的形成:比值低有利于芽的形成。

2010-2014植物组织培养高考题汇编(含详解)汇总

1.（2014广东卷）（16分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题： ⑴选用新生营养芽为外植体的原因是，诱导外植体形成PLBs的过程称。 ⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在，，。 ⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题： ①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基后按比例加入。②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。

【答案】（1）细胞分化程度低，容易诱导形成PLBs（2分）；细胞的脱分化（2分）（2）生长起始快（2分），快速生长时间较长（2分）；PLBs产量较高（2分）；（3）①灭菌、冷却（2分）；②75（2分）；③PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大（3分）【解析】（1）新生营养芽分裂能力强，全能性容易表达；根据题干可知，PLBs类似愈伤组织，外植体形成愈伤组织的过程是脱分化。（2）据图分析，光照下PLBs的重量高于黑暗条件下，原因可能是光照有利于细胞增殖、叶绿体的形成和进行光合作用制造有机物。（3）①由于ABA受热易分解，所以各种液体培养基灭菌后，冷却，再加入不同浓度的ABA ②根据题干可知，实验50天完成，每10天取样，需要取样5次，4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复，因此每次取样需要记录15个样品中的数据，共需要测定样品数75 ③适量的ABA可提高生物碱产量，当样品的平均值最大时，所对应的ABA浓度和时间为最适。 2.（2014江苏卷）（9分）为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：（1）外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为。（2）在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如右图所示。细胞干重在12d后下降的原因有；培养液中蔗糖的作用是、。（3）多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常采用纤维素酶和酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞（2n）经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是、。（4）为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有（填序号）。 ①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋②必须在光照条件下培养

我国植物组织培养的发展现状与前景展望

际间的交换和转移,给保存和抢救有用基因带来了希望。例如胡萝卜和烟草等植物的细胞悬浮物,在-20~-196 的低温下贮藏数月,尚能恢复生长并且再生成植株。目前,我国在多个地方建立了植物种质资源离体保存设施。1.5 在遗传、生理、生化和病理研究上的应用植物组织培养技术推动了植物遗传、生理、生化和病理学的研究,已成为植物科学研究中的常规方法。花药和花粉培养获得的单倍体和纯合二倍体植株是研究细胞遗传的极好材料,在细胞培养中很容易引起变异和染色体变化,从而可得到作物的附加系、代换系和易位系等新类型,为研究染色工程开辟了新途径。细胞培养和组织培养为研究植物生理活动提供了一种极有力的手段。通过植物组织培养可以在植物的矿质营养、有机营养、生长活性物质等方面展开研究,有益于了解植物的营养问题。在细胞的生物合成研究中,细胞组织培养也极为有用,如查明了尼古丁在烟草中的部位等。细胞培养为研究病理学提供了方便,如植物的抗病性就可以通过单细胞或原生质体培养进行鉴定,短短几天之内就可以得到鉴定结果。 2 我国植物组织培养的研究进展2.1 组培技术研究进展快速从20世纪50年代我国植物组织培养创始人之一罗士韦教授在中国科学院上海植物生理研究所开展了组织培养的研究以来,植物组织培养技术已有丰硕的研究成果。在近10多年来其发展更为迅速,全国各地许多农业科研院所和高校都开展了植物组织培养研究工作,对农作物、观赏植物、园艺作物、经济林木等上千种植物进行组织培养研究并取得了成功,同时在实践中总结出很多有益的经验,如郑文静等较好地总结了植物组织培养中的常见问题和具体解决方法;吴毅明等在植物组织培养的环境微生态的研究中,用通透性好的化学纤维、纸卷、蛭石、沙子等代替琼脂作培养基,可有效地改善根际环境,促进小植物生根;刘思九采用的暴露培养法,即在敞口培养器中用特制的粉沫状灭菌材料覆盖培养基和外殖体,使其不受污染,通过特制装置补水,让组培苗暴露在室内空气中生长,其长势优良,不炼苗即可移栽。肖玉兰等研究的无糖箱式培养法(培养基不放糖,在培养瓶内用特殊装置注入CO 2,然后加强光照3~5倍,小植物能进行光合作用自给养分),使植株生长量成倍增长,有效地降低了生产成本。2.2 组织培养设施不断改进,规模不断扩大随着植物茎尖培养脱病毒技术以及离体快繁技术日趋成熟,20世纪90年代以来全国各地相继建立了一批工厂化试管苗繁育基地,在马铃薯、草莓、香蕉、甘蔗、桉树、杨树以及一些花卉上已有商业化的试管苗生产体系,产生了良好的经济效益和社会效益,形成了兰花工业、香蕉工业。如从1986~1992年春,我国香蕉主产区的香蕉组培苗栽培总面积达18万h m 2 ,2000年全国香蕉组培苗商品量达1亿株左右,占全国商品组培苗总量的2/3。马铃薯作为重要的经济作物,其脱毒苗增产可达60%,脱毒种苗的生产也越来越被知名企业看好,如百事可乐公司投资在中国农业科学院建立的脱毒种薯组培生产车间。据不完全统计,目前我国约有2000多家组培室,在上千种植物中建立了组培再生技术,年产组培苗几亿株。同时随着组织培养规模不断扩大,国内比较大的一些组培公司如新会组培育苗厂、海南热带植物组织培养研究中心、海南万恒种苗公司、杨凌农业高新技术开发区新建的组培中心等设施不断改进。目前新会组培中心的生产线已达半自动化,万恒种苗公司也从国外引进了高新技术和设备。这些组培厂年产种苗数千万株,极大地满足了市场的需求。 2.3 积极寻求开展同国内外组培技术的交流合作对外开放以来,我国各农业科研院所、高等院校和组培中心(公司)在组织培养技术领域积极开展对外的技术交流与合作,借鉴和学习荷兰、美国、加拿大、英国等组培产业发达国家的成功经验,从而使国内组培产业得到了较大的发展。例如,中荷农业部合作组建了上海园艺培训示范中心,定期开设组培专业技术和管理知识等培训课程;组织专家访问美国加洲的植物实验室公司总部,参观学习其现代化生产技术、先进管理水平和崭新的经营理念;安排有关专业人员出国学习农业高新技术;引进品种资源和组培生产管理技术等,这些措施有效推动了我国组培技术的发展。 3 我国植物组织培养中存在的主要问题 3.1 组培技术尚不完全成熟,组培投入成本较高、效益较低目前,我国的组织培养技术相对于国外来说,还只是边摸索边应用的阶段,一些组培关键的技术问 22 江苏农业科学 2008年第4期

植物组织培养教学设计说明

课题1 菊花的组织培养 ★课题目标（一）知识与技能 1、熟悉植物组织培养的基本过程 2、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化 3、通过联系农业生产实际，培养学生活学活用，理论联系实际的能力[来源:学|科|网] （二）过程与方法归纳MS培养基的配制方法，并设计表格比较微生物培养基与MS培养基的配方的异同。（三）情感、态度与价值观通过阅读植物组织培养技术的发展史，课下查阅植物组织培养技术在生产实践中应用的资料，关注学生科学态度的教育，拓展学生视野，感受科学技术在生产实践中的重要价值。★课题重点植物组织培养过程中使用的无菌技术 ★课题难点植物组织培养过程中使用的无菌技术 ★教学方法启发式教学 ★教学工具多媒体课件 ★教学过程（一）引入新课上节课我们探讨学习了如何从土壤中分离出尿素分解菌和纤维素分解微生物及其计数方法。这节课我们来学习研究植物的组织培养技术。

（二）进行新课 1．基础知识知识回顾：联系“植物细胞工程”，回答下列问题： 1．1具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。 1．2植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。活动1：阅读“植物组织培养的基本过程”，讨论并完成以下问题： 1．3细胞分化：个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。〖思考1〗细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。 1．4愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。〖思考2〗填表比较根尖分生组织和愈伤组织的异同： 1．5植物组织培养的过程可简单表示为：活动2：阅读“影响植物组织培养的条件”，讨论并完成以下问题： 1．6材料：植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开化植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。

植物组织培养试题

农业生物技术第二章植物组织培养试卷班级___________ 姓名___________ 得分______________ 一、单项选择题（60） 1．植物组织培养是（） A．离体的植物器官或细胞培育成愈伤组织B．愈伤组织培育成植株 C．离体的植物器官、组织或细胞培养成完整植物体 D．愈伤组织形成高度液泡化组织 2．由于培养物脱离母株在试管内培养,故将植物组织培养又叫（） C．器官培养 D．离体培养 A.初代培养 B.继代培养 3．细胞形态和功能发生永久性变化过程称为（） A.分生 B.分化 C．脱分化 D．再分化 4．对外植体进行的第一次培养称为（） A.初次培养 B.器官培养 C．初代培养 D．继代培养 5．在人工培养基上通过诱导外植体而形成的一团无序的薄壁细胞团叫（） A.分生组织 B.保护组织 C．同化组织 D．愈伤组织 6．大量生产实践证明,通过（）可以有效地去除植物体内的病毒,获得无毒种苗. A.茎段培养技术 B.茎尖脱毒技术 C．组织快繁技术 D．转基因技术 7．植物体因受伤或生理上分离而失掉组织或器官后,恢复或复制失去的部分,形成新的完整植株的能力,称为（） A.植物细胞全能性 B.植物的极性现象 C．植物的再生功能 D．细胞的分化 8．下列关于细胞全能性叙述正确的是（） A.每个生物体内的所有细胞具有相同的功能 B.生物体内任何一个细胞可完成该生物体全部功能 C．生物体每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能 D．生物体每个细胞都经过产生、分裂、生长、衰老、死亡的全过程 9．构成胚的所有细胞几乎都保持着未分化的状态和旺盛的分裂能力，称为（） A.脱分化细胞 B.成熟细胞 C．胚性细胞 D．再分化细胞 10．愈伤组织表面和内部形成很多胚状体，称为（） B.胚泡C．体细胞胚D．合子胚 A.胚囊 11．植物再生功能的产生是由于植物受伤组织产生了（） A.细胞分裂素 B.赤霉素 C．创伤激素 D．生长素 12．草莓茎尖在4℃黑暗条件下，可以保持生活力达（）年之久 A.4 B.5 C．6 D．8 13．脱毒培养指的是（） A.种苗消毒后的培养 B.种苗及土壤消毒后的培养 D．无毒茎尖的培养技术 C．外植体消毒后的培养

植物组织培养发展简史

植物组织培养发展简史植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。它是在人工配制的培养基上，于无菌状态下培养植物器官、组织、细胞、原生质体等材料的方法。植物细胞的全能性是植物组织培养的理论基础。20世纪初，曾有人提出能否将植物的薄壁细胞培养成完整植株？研究者从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织，并在液体培养基中培养，使其分化出了愈伤组织，从愈伤组织又得到胚状体，胚状体转移到固体培养基上继续培养后，获得了完整的胡萝卜试管植株。经过栽培，此植株能够正常生长并开花结果，其种子繁衍出来的后代与正常植株的种子所繁衍出的后代别无二致。根据此实验可以得出以下结论：即不经过有性生殖过程也能将植物的薄壁细胞培养出与母体一样的完整植株。由于植物的每个有核细胞都携带着母体的全部基因，故在一定条件下，它们均能发育成完整植株，这就是所谓的植物细胞全能性。科学家在植物激素对器官建成，及改进培养基配方等方面所取得的成果，极大地推动了组织培养技术的发展，使这项技术可以实际应用于快速繁殖、品种改良等方面。20世纪50年代初期，法国科学家利用组织培养技术成功地脱除了染病大丽花植株所携带的病毒，从而为脱毒苗的生产提供了一种可行的途径。现在凭借组织培养技术来脱除植物的病毒已经在生产中广泛应用。20世纪50年代中期，由

于细胞分裂素的发现，使组织培养状态下外植体芽的形态建成成为可人为调控的因素，从而使在组织培养状况下进行植株再生成为现实。进入60年代以后，组织培养技术在基础理论、实际操作方面不断取得进展，相继在植物体细胞杂交、单倍体育种、种质资源保存、快速育苗、人工种子制造、次生代谢物生产等方面有了可喜的成果。时至今日，组织培养技术已经成为基础坚实、易于掌握、应用面广的一种技术手段。

植物组织培养复习重点

组培复习材料一、名词解释 1、培养基：是离体植物（外植体）赖以生长、分化的基础，是根据植物的需求，人工配制的含有各种营养成分的营养液。 2、液体培养：把细胞或生物体的一部分，置于液体培养基中使其发育，并不断振荡，使之均匀地在悬浊液中进行培养的一种方法。 3、种子培养：是成熟种子和发育不全的未成熟种子的无菌培养。 4、叶培养：从母体植株上将叶组织（包括叶原基在内）切下，放在无菌的人工条件下使其生长发育形成植株的技术。 5、热处理脱毒：在一定范围内，用高温处理可部分或完全钝化植物组织中的某些病毒而不伤害或很少伤害植物本身的脱毒方法。 6、花药培养：是把花粉发育到一定阶段的花药接种到培养基上，来改变花粉的发育程序，使其分裂形成细胞团，进而分化成杯状体，然后再生植株，或形成愈伤组织，由愈伤组织再分化成植株。 7、连续培养：是利用特别的培养容器进行大规模细胞培养的一种培养方式。（培养过程中，不断注入新鲜培养基，排掉等体积用过的培养基，或者抽取悬浮培养物，使培养物的营养物质得到不断补充，从而保持其恒定体积的培养。—— 8、分批培养：指把细胞分散在一定容积的培养基中进行培养，建立单细胞培养物的培养方式。（细胞生长在固定体积的培养基中，当主要营养物质耗尽时，细胞的分裂和生长即停止。）二、简答题 1、MS培养基特点。答：MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，具有高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐用量大，还有一定数量的铵盐，其养分的数量和比例合适，不需要添加更多的有机附加物，就能满足植物组织对矿质营养的要求，加速愈伤组织和培养物的生长，当培养物就不转移时仍可维持其生存。目前应用最广泛。 2、植物组培生产特点。答：①和传统的生产方式相比，具有不占耕地、生产不受季节限制而且能够整年连续进行、不受灾害性天气和病虫害影响的特点； ②具有人为可控性，可采用更适合于植物生长的“培养基”代替土壤提供养分和生长调节物质；

植物组织培养习题及答案

0．填空 1.根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、(器官培养、细胞格养、原生质体培养(悬浮培养 2.植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段，快速发展和快速发展和应用阶段 3，1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年, White出版了《植物组织培养手册》培养等类型从而使植物组织培养为一门新兴学科。一．填空、 1，组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、调机、_天平、显微镜、_蒸馏水，发生器，酸度计养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分)、_③植物生长调节物质、_④碳水化合物、⑤其它物质 3、培养基最常用的碳源是_蔗糖,使用浓度在1%-5%常用3% 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织棱以生长的碳源而且还能维持培养基渗透压 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物般用量6-10g/L之间 6.驯化的目的:在于于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使试健壮,提高苗的移裁成活 7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向,其比值高:有利于根的形成和愈伤组织的形成:低:有利于芽的形成 8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下,锅内温度达_121℃C,维持_20-30min、 9.选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。 10、诱导胚状体比诱导芽的优点:(1)数量多、(2)速度快、_(3)结构完整 11、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌 12、培养基中加入活性炭的目的:利用其吸附能力,减少一些有害物质的影响大 13、筛选培养基的方法:单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法 14、植物培养技术:灭菌、接种种、培养、驯化四个环节 15、试管苗的驯化注意:基质、温、光、水、肥、气的综合管理二．填空 1.绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段 2.愈伤伤组织形成大致经历诱导期、分裂期一和分化期三个时期 3、愈用植物生长调节物质时要注意:种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值4.愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式 5.组织培养细胞再分化包括四个水平:细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化(器宣发生)和植株水平的分化三．填空: 1.植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过,最小只有几十微米的茎尖进行培养,目的是获得无病毒植株:后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养,目的是离体快繁 3.不定芽产生的途径一是从外植体上直接产生二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生 4.离体叶培养是指包括叶原基、叶栖、叶鞘、叶片、子吐等叶组织的无菌培养 5.在离体叶培养中,6-BA和KT利于芽的形成;24D利于愈伤组织的形成四．填空 1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养 2、离体胚的培养分为二种类型:。成熟胚培养和_幼胚培养六

植物组织培养及应用研究概况

学号：20095071124 学院生命科学学院专业生物科学年级2009级姓名张阿欠论文（设计）题目植物组织培养及其应用研究概况指导教师张伟职称讲师成绩 2012 年 6 月 9 日

目录摘要 (2) 关键字 (2) Abstract (2) Keywords (2) 前言 (3) 1.植物组织培养的基本概念、原理和试验步骤 (4) 1．1植物组织培养的基本概念 (4) 1．2植物组织培养的基本原理 (4) 1．3植物组织培养的试验步骤 (4) 1．3．1选择和配制培养基 (4) 1．3．2灭茵 (4) 1．3．3接种 (5) l. 3．4培养 (5) 2. 植物组织培养的应用 (5) 2．1植物快速繁殖和无病毒种苗生产 (5) 2．2植物花药培养和单倍体育种 (5) 2．3植物胚胎培养 (6) 2．4植物愈伤组织或细胞悬浮培养 (6) 2．5细胞融合与原生质体培养 (6) 2．6植物细胞突变体筛选 (6) 2．7植物体细胞胚胎和人工种子 (7) 2．8 植物组织细胞培养物的超低温保存与种质库建立 (7) 2．9 植物组织培养与转基因技术的应用 (7)

3 .发展前景展望 (7) 参考文献： (8) 植物组织培养及其应用研究概况学生姓名：张阿欠学号：20095071124 信阳师范学院生物科学专业指导教师：张伟职称：讲师摘要：主要讲了植物组织培养的基本概念，原理和实验步骤，在此基础上，讲了植物组织培养在植物快速繁殖和无病毒种苗生产、植物花药培养和单倍体育种、植物胚胎培养、植物愈伤组织或细胞悬浮培养、细胞融合与原生质体培养等方面的应用，最后展望了植物组织培养的发展方向。关键字：植物组织培养；概念；原理；实验步骤；应用；发展前景 Abstrac t：About the basic concepts, principles and experimental procedures of plant tissue culture, on this basis, said plant tissue culture in plant rapid propagation and virus-free seed production, plant anther culture and haploid breeding, plant embryo culture, plantscallus or cell suspension culture, cell fusion and protoplast culture in the application, Finally, the future direction of development of plant tissue culture. Keywords:Plant Tissue Culture; concept; principle; experimental steps; applications; development prospects 前言在世界各国科学家的不断努力下，近几十年来，植物组织培养技术迅速发展。利用组织培养，不仅可以大量生产优良无性系，获得人类需要的多种代谢物质，还可获得单倍体、三倍体、多倍体及非整倍体。通过细胞融合可以打破种属间的界限，克服远缘杂交不亲合性，在植物新品种的培育和种性的改良中发挥了巨大作用。组织培养的植物细胞是在细胞水平上分析研究的理想材料，从植物快繁、花药培养发展到细胞器培养、原生质融合以及DNA重组技术等，植物组织培养技术广泛应用于植物科学的各个领域及农业、林业、工业、医药等多种行业，已经成为当代生物科学中最有生命力的一门学科。