细胞因子课件
细胞因子详解
捋捋让人迷惑的细胞因子 细胞因子是一类调节蛋白或者糖蛋白，他们的分类现在还不是完全清楚。他们通过结合细胞表面的特定受体，激发细胞内信号通路起作用。 白细胞组成了免疫和炎症系统，大多数细胞因子作用于白细胞或者由白细胞表达，他们在免疫和炎症反应中起到重要的调节作用。实际上，一些免疫抑制和抗炎作用的药物就是通过调节这些细胞因子的表达起作用的。 细胞因子由特定的细胞表达并分泌到胞外，结合细胞表面的细胞因子受体后激活细胞内信号 传导通路 细胞因子分类 细胞因子最早在20世纪70年代中期被提出，它当时被认为是一种多肽因子，可以调控细胞分化和免疫系统。干扰素（IFNs）和白介素（ILs）是主要的多肽家族，在当时细胞因子主要指这两类家族。 起初细胞因子的分类主要是根据分泌该因子的细胞类型或者细胞因子初次被发现时的生物活性。然而这些分类方法现在看来都不够准确，无法满足后期的分类需求。最近，根据细胞
因子一级，二级和三级结构的分析，可以将大多数的细胞因子分为6大家族。因此，根据分类方式的不同，某些细胞因子会有多个名称。 表1：细胞因子根据结构分类结果 细胞因子家族成员 ‘β-Trefoil’ cytokines Fibroblast growth factors Interleukin-1 Chemokines Interleukin-8 Macrophage inflammatory proteins ‘Cysteine knot’ cytokines Nerve growth factor Transforming growth factors Platelet-derived growth factor EGF family Epidermal growth factor Transforming growth factor-αHaematopoietins Interleukins 2–7, -9, -13 Granulocyte colony stimulating factor Granulocyte-macrophage colony stimulating factor Leukaemia inhibitory factor Erythropoietin Ciliaryneurotrophic factor TNF family Tumour necrosis factor-α and –β
细胞因子1
第七章细胞因子 学时：3 目的要求： 1.掌握：细胞因子的概念、细胞因子的共同特性，掌握几种主要的细胞因子（IL－2、IL－12、IFN、TNF、CSF、EPO）的分泌细胞和生物学活性。 2.熟悉：其它细胞因子的分泌细胞和生物学活性。 3.了解：细胞因子受体家族及信号转导机制，了解细胞因子在临床上的应用。 教学内容： 1.细胞因子的概念和共同特性。 2.细胞因子的种类和功能：IL－（IL－1、IL－2……IL－18）、IFN、TNF、CSF、趋化因子生长因子等。 3.细胞因子与疾病的发生，细胞因子与疾病的诊断及治疗。 [本章主要内容] 一、细胞因子概述 （一）细胞因子的概念 细胞因子（cytokine，CK）:是由细胞 （免疫细胞、非免疫细胞）合成、分泌的能调节多种细胞生理功能的低分子量蛋白质的统称。 （二）细胞因子的共同特性 1．绝大多数细胞因子均为分子量为6～60KD的多肽或糖蛋白。其结构有：单体，包括多数细胞因子；二聚体，包括IL-5、IL-10、IL-12、M-CSF、TGF-β及PDGF等；三聚体，如TNF。 2．具有高效能作用。10-12mol/L就有明显的生物学作用。细胞表面可表达高亲和性的受体，10～10，000个/细胞。 3．分泌为短时自限性。无前体状态的储存，细胞受刺激活化后合成、分泌，刺激停止后合成停止。 4．可通过自分泌、旁分泌及内分泌方式发挥作用。多数细胞因子以自分泌（autocrine）或旁分泌（paracrine）起作用；少数细胞因子（IL-1、IL-6、TNF-α等）还可通过内分泌（endocrine）方式起作用。 细胞因子产生的多源性及多向性：（1）一种细胞可分泌多种细胞因子；（2）几种不同类型的细胞可产生一种或多种相同的细胞因子。 6．发挥作用为非特异性、多效性及重叠性。多效性是指一种细胞因子作用于多种靶细胞，产生不同的生物学效应。重叠性是指不同细胞因子作用于同一靶细胞，产生相同或相似的生物学效应。 7．作用具有双重性。介导生理作用，参与正常免疫应答，清除异物；介导病理作用，参与炎症反应、自身免疫病及肿瘤的发生、发展等。 8．细胞因子的网络效应。即不同细胞因子间具有协同作用和拮抗作用。细胞因子的合成分泌相互调节，受体表达相互调控，共同组成了细胞因子网络。 9．细胞因子与激素、神经肽和神经递质共同组成细胞间信号分子系统。 二、细胞因子的种类与功能 根据功能可将细胞因子大致分为六大类：白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、趋化因子和生长因子。 白细胞介素（interleukins，ILs） ILs是能够介导白细胞之间和其他细胞之间相互作用的细胞因子。已报告有20余种。
细胞因子6项临床意义
6 项细胞因子检测试剂盒 检测靶标 促炎因子： IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α、 抑炎因子：IL-4、IL-10、 本项目涵盖由Th1、TH2、Th17、单核/巨噬细胞、树突细胞等多种细胞分泌的细胞因子，可更全面的反映疾病状态下机体免疫系统的改变。 重症疾病 细胞因子水平是早期预警全身炎症反应综合证（SIRS）的灵敏指标，SIRS 发生时IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α等细胞因子大幅升高，是反映SIRS 的关键细胞因子。对于临床重症患者，如脓毒症、不明原因发热、急性胰腺炎、重症肺炎、围手术期等患者，若发生SIRS 不能及时治疗，则易引发ARDS 和MODS，死亡率高达40-60%，因此，越完善的因子种类更有利于反映患者的细胞因子风暴，进而警醒临床医生及时干预。 IL-4 是机体Th2 细胞特异性分泌的细胞因子，IFN-γ是机体Th1 细胞特异性分泌的细胞因子，临床中多用IFN-γ/IL-4 来反映机体Th1/Th2 漂移水平，Th1/Th2 漂移是评估肿瘤疾病病情的重要指标； 自身免疫性疾病 IL-17 几乎参与所有自身免疫疾病的炎症反应，是自身免疫性疾病炎症损伤 评估的主要指标 感染/炎症相关疾病 IL-6、IFN-γ、TNF-α是感染患者主要升高的促炎因子，IL-4、IL-10 是机体最主要的抗炎因子，检测促炎/抗炎因子变化情况可评估感染病情进展及预后疗效。 细胞因子谱鉴别脓毒症和噬血细胞综合征（HLH） 脓毒症：IL-6 显著升高，IL-10 升高较明显 噬血细胞综合征：IFN-γ和 IL-10 显著升高
革兰氏阴阳性菌细胞因子谱 G-BIRCP：我们将 IL-6、 IL-10 同时高度增高＞10 倍（ X＋S），定义为革兰氏阴性菌感染相关细胞因子谱（ G-BIRCP）G+BIRCP：将 IL-6 为轻度增高＞2 倍甚至>10 倍（ X＋S），但 IL-10 正常或增高值＜10 倍（ X+S）者，定义为革兰氏阳性菌感染相关细 胞因子谱（ G＋BIRCP） 噬血细胞综合征（HLH）细胞因子谱 IFN-γ＞100pg/mL, ，IL-10＞60pg/mL ,且 IFN-γ水平高于 IL-10 水平。该标准对于 HLH 诊断的敏感度和特异性分别达到 88.0%和 98.7%，且阳性预测值和阴性预测值达到了 93.6%和97.5%。 细胞因子在不同类型疾病中的结果解读 1、常见细菌感染/病毒感染相关细胞因子 2、常见自身免疫性疾病相关细胞因子
不同麻醉方式对细胞因子IL
不同麻醉方式对细胞因子IL 【关键词】麻醉；IL ［摘要］目的：评价不同麻醉方法对IL1β和IL6的影响。方法：比较硬膜外麻醉下与全麻下患者IL1β和IL6的变化。结果：硬膜外组与全麻组术中IL6均明显升高，持续至术后第1日晨。硬膜外组患者IL6水平在术中及术后各时点均较全麻组高，但组间比较差异无显著性。两组患者IL1β围术期各时间点均未检测到。结论：手术创伤可引起外周血炎性细胞因子IL6的表达增强，不同麻醉方法对其影响较小。 ［关键词］麻醉；IL1β；IL6 1 材料与方法 1．1 受试对象及分组20例ASAIII级择期行人工股骨头置换术患者，男性12例，女性8例，年龄49岁～66岁，体重53 kg～86 kg。术前均无内分泌及恶性疾病，也未接受过免疫抑制治疗。随机分为硬膜外阻滞组和全麻组，每组10例。患者入室后均开放静脉，术中监测心率、血压、心电图和血氧饱和度，两组患者术中均未输血。 1．2 标本采集并检测方法分别于麻醉诱导前10 min(T1)，切皮后30 min(T2)，切皮后1 h(T3)，术毕(T4)，术后第1日晨(T5)及术后第3日晨(T6)于非输液侧肘静脉穿刺抽取外周血2 ml(EDTA抗凝)。经2 000 rpm离心10 min后取上清液，置-20 ℃冰箱冷冻备检，采用ELISA法检测患者血浆IL1β及IL6水平。使用上海森雄科技公司提供的进口分装试剂盒，严格按说明书进行操作。
1.3 检测步骤建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔加入样品稀释液100 μl，第一孔加标准品100 μl，移至第二孔，如此反复对倍稀释至第七孔，最后第七孔吸出100 μl弃去，使体积均为100 μl，第八孔为空白对照。将所采集血浆各100 μl加入待测品孔，待反应板充分混匀后置37 ℃ 120 min，用洗涤液将反应板充分洗涤4次～6次，印干后每孔加第一抗体工作液50 μl，充分混匀后置37 ℃60min。再次洗板4次～6次，印干后每孔加酶标抗体工作液100 μl，充分混匀后置37 ℃ 60 min。洗板同前，每孔加入底物工作液100 μl，置37 ℃暗处反应8 min后每孔加入1滴终止液混匀。在492 nm 处测吸光(OD)值，以所测得OD值在标准曲线上求IL1β、IL6的浓度。 1.4 统计学处理各组数据以均数±标准差( ±s)表示，组间比较采用t检验，组内比较采用单因素方差分析和q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 两组患者性别、年龄、体重、术中入量、失血量、手术时间等无明显差异,麻醉手术期间两组患者各时间点血压、心率等血液动力学指标差异无显著性。围术期细胞因子IL1β和IL6的变化：两组患者IL6在手术开始后均有升高，硬膜外组患者IL6在手术切皮后1 h 即明显升高(P＜0.05)，至术毕达到高峰(P＜0.01)，一直持续至术后的第1日晨(P＜0.05)，第3日晨恢复至术前水平。全麻组则在术毕时达到与术前比差异有显著意义(P＜0.01), 持续至术后第1日晨(P＜0.05)，第3日晨恢复至术前水平。硬膜外组患者IL6水平在术中及术
细胞内细胞因子的检测
细胞内细胞因子的检测 细胞因子是可溶性蛋白，在淋巴细胞应答中有重要的免疫调节作用。研究显示，细胞因子可以具有多重功能，作用于多个细胞亚群并可在不同亚群细胞表达。早期细胞因子表达与T细胞功能相关性研究是基于特定克隆细胞的激活。尽管研究应用T淋巴细胞克隆证明了不同细胞因子的合成，如Th1(IL-2，IFN-γ)与Th2(IL-4，IL-5，IL-10)，但这些研究很难推广，因为T细胞克隆与体内T细胞功能相关性还不清楚。 活化的T细胞可分泌多种细胞因子至细胞外，而流式细胞仪仅能检测细胞内的抗原，所以应阻断细胞因子分泌至细胞外，方法为破坏高尔基体，因细胞因子（即各种蛋白）在合成后需经高尔基体的加工和转运，才能到达细胞膜，然后通过高尔基体膜与细胞膜的融合作用将细胞因子分泌至细胞外。因此破坏高尔基体即可切断细胞因子的转运途径，干扰其分泌。近来，Jung与Picker采用了Brefeldin(BFA)与monensin等药物预孵检测胞内细胞因子的表达的方法。这一方法阻断了胞内高尔基体介导的转运使得细胞因子聚集，蓄积，增强细胞因子信号可被流式细胞仪检测。 胞内细胞因子染色与传统的检测可溶性蛋白的方法如ELISA相比，具有显著优越性。该法从单个细胞水平检测内多个细胞因子的同时，还可标记各种细胞表面分化抗原以及活化分子、趋化因子受体和黏附分子等，从而区分表达特定细胞因子的细胞亚群及其表型特征。使用特定刺激剂研究细胞因子应答是细胞因子研究中的重大进展。早在1986年，Mosmann等应用Th细胞克隆技术和细胞因子产生的不同，发现小鼠CD4细胞是一个不均一的亚群，可分为Th1和Th2两个功能不同的独立亚群。后来在人类的CD4细胞群中也发现了Th1和Th2细胞亚群。Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α等，介导与细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，参与细胞免疫及迟发型超敏反应，在抗胞内病原菌感染中发挥重要作用；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10，其主要功能是刺激B细胞增殖并产生抗体，与体液免疫有关。应用该方法，在细胞水平该方法证明了人与鼠的淋巴细胞都存在1型与2型分化，且这些分化在特定细胞因子增强时可被
细胞因子的流式检测
细胞内细胞因子的流式细胞仪检测 一、简介 随着研究的进展，仅仅对细胞进行定量和活性的检测已不能满足需要。在单细胞水平研究细胞因子的表达能力对研究细胞因子在疾病中的作用越来越显的重要无比。目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括：ELIspot、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析（limiting dilution analysis，LDA）和单细胞PCR，应用原位杂交技术和免疫组化方法观察细胞因子蛋白表达及mRNA表达可以识别Th1和Th2细胞，此方法可获得较强的细胞内信号，但此方法工作量大、主观性强，难以进行大样本检测，且人肉眼识别能力有很大的局限性，而ELISPOT及单细胞PCR技术，技术性强、劳动强度大，难以进行广泛推广。随着多标记及胞内细胞因子标记流式细胞技术的出现，使对细胞内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。下面主要对胞内细胞因子流式细胞技术作以介绍。 TH1与TH2(IL－4，IL－5，IL－10)，但这些研究很难外推，因为T细胞克隆与体内T细胞功能相关性还未被揭示。早期细胞因子表达与细胞功能相关性研究是基于特定克隆细胞的激活。尽管研究应用T淋巴细胞克隆证明了不同细胞因子的合成，如TH1(IL－2，IFN－ ) 近来，Jung与Picker采用了monensin、PMA等药物预孵，用Brefeldin(BFA)、Monensin阻断了胞内高尔基体介导的转运的方法使得细胞因子聚集，蓄积，增强细胞因子信号可被流式细胞仪检测。因为自然状态下，T淋巴细胞产生少量的细胞因子，通常要对T淋巴细胞体外活化进行研究。在体外刺激过程中，T淋巴细胞产生的细胞因子已释放出来，胞内细胞因子信号较弱，难以进行检测。这一方法可检测单个细胞内多个细胞因子，并可区分表达特定细胞因子的细胞亚群。在细胞水平该方法证明了人与鼠的淋巴细胞都存在1型与2型分化，且这些分化在特定细胞因子增强时可被逆转。且这些研究清楚地证明，只有激活的细胞亚群可以表达细胞因子，静止的正常淋巴细胞(T、B、NK)不能分泌细胞因子。 胞内流式分析法是用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌，同时采用特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞的最小荧光背景。具有其它方法难以比拟的优点： ?快速：流式定量检测细胞内细胞因子可在一天内完成，实验流程需6-8小时，实际操作时间为1-2小时，快速简便； ?简便：无需组织培养，可以全血分析，无需分离PBMCs； ?灵敏度高：高度灵敏的荧光标记与检测系统； ?高效：可以在同一个细胞内同时检测两种或更多种细胞因子，也可根据细胞免疫表型区分分泌细胞因子的细胞的亚型，进行多参数相关分析； ?安全：减少样本处理与生物源性污染
乳腺癌相关细胞因子
众所周知细胞因子是由免疫原或其他因子刺激细胞所产生的具有信息传递功能的蛋白质或多肽。它既是机体免疫系统应答的效应成分，又是免疫细胞间进行信息传递的介质。大多数细胞因子对乳腺癌细胞具有抑制生长、促进凋亡的负面作用，同时具有促进生长繁殖、为侵袭转移提供条件的作用。这与细胞因子的浓度，癌细胞的恶性程度，癌细胞生长的微环境等因素有关，这些细胞因子的相互作用及其临床意义值得关注。 在部分地区，乳腺癌的发病率已居于妇女恶性肿瘤发病率首位。细胞因子（CK）是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导免疫效应细胞和相关细胞合成、分泌的，具有生物活性的一类蛋白或多肽。近年来研究表明乳腺癌与细胞因子密切相关。 1 细胞因子对肿瘤细胞的作用 1.1 细胞因子对肿瘤细胞生长的促进作用表现在以下几方面 ①介导乳腺癌细胞逃避免疫监视：研究发现肿瘤细胞招募的调节性T细胞可能在逃避免疫监视方面起着主导作用，从肿瘤中去除Treg细胞后，宿主免疫系统能有效地排斥早晚期肿瘤[1]。 ②促进血管的生成，为肿瘤生长提供营养。 ③促进肿瘤细胞的侵袭与转移。TNF和IL-1促进内皮细胞表达粘附分子，而肿瘤表达的粘附分子受体能使其实现转移。 1.2 细胞因子的抗肿瘤作用 ①对肿瘤细胞的直接杀伤，如TNF-α； ②促进宿主的抗肿瘤免疫； ③影响肿瘤血供，减少营养来源； ④刺激造血形成，解除放疗、化疗对免疫的抑制。 2 乳腺癌相关的细胞因子
2.1 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的特异性最高的刺激血管生成的因子。人VEGF基因位于6p21.3，长度大约为14kb。VEGF基因的表达与缺氧、细胞分化、雌激素和细胞因子有关。在乳腺肿瘤的生长过程中，肿瘤细胞产生蛋白水解酶分解原有的血管基底膜，血管内皮细胞在肿瘤细胞产生的VEGF诱导下，形成毛细血管芽向肿瘤方向运动，最后形成毛细血管[2]。但这些新生的毛细血管基底膜不完整，管壁通透性高，利于肿瘤的血行转移。免疫组织化学分析，结果表示VEGF在乳腺癌肿瘤样本中的表达率为39.8%，但是没有在临近的正常组织中表达。值得注意的是，VEGF阳性患者的5年生存率明显低于VEGF阴性患者。 2.2 肿瘤坏死因子 肿瘤坏死因子（TNF）有a、b两型，都具有参与免疫应答、引起恶病变的作用。但TNF-α对肿瘤的作用，存在不同的观点。有学者认为TNF-α起到直接和间接杀伤或抑制肿瘤的作用，其作用机制为TNF-α和癌细胞上的TNF-α受体结合，内移入细胞裂解其DNA。但也有一些学者认为TNF-α对肿瘤有促进作用。其促进作用可能通过以下几种途径： ①促进肿瘤细胞存活，肿瘤细胞产生的TNF通过诱导依赖于NF-κB的抗凋亡分子的表达促进肿瘤细胞存活。 ②促进肿瘤血管的新生：局部大剂量的TNF-α可以破坏肿瘤血管，但小剂量持续的TNF-α可以促进血管生成，有利于肿瘤的生长和扩散。 ③抑制T细胞和巨噬细胞的细胞毒作用而损坏免疫监视。 2.3 转移生长因子-β 转移生长因子-β（TGF-β）是一种丝裂原活化蛋白激酶，将细胞外信号传至细胞内，参与细胞的生长、分化、增殖的调节及恶性转化，与乳腺癌的发生、发展有关。TGF-β对不同时期
细胞因子
Cytokines（细胞因子） Cytokines are proteins secreted by the cells of innate and adaptive immunity that mediat many of the functions of these cells. Cytokines are produced in response to microbes and other antigens. and different cytokines stimulate diverse responses of cells involved in imminity and inflammation. In the activation phase of adaptive immune responses, cytokines stimulate the growth and differentiation of lymphocytes, and in the effector phases of innate and adaptive immunity, they activate different effector cells to eliminate microbes and other antigens.Cytokincs also activate stimulate the development of hematopoictic cells. In clinical medicine cytokines are important as therapeutic agents and as targets for specific antagonists innumerous immune and inflammatory diseases, 细胞因子是由多种细胞产生的，具有调节先天免疫与适应性免疫细胞功能作用的多肽分子。细胞因子在有微生物和其他抗原作用细胞时产生，不同的细胞因子刺激反应细胞产生不同的反应，其中涉及免疫反应和炎症反应。免疫反应的反应阶段，细胞因子刺激淋巴细胞的增长与分化；效应阶段,它们激活不同的效应细胞消除细菌和其它抗原。细胞因子也刺激祖细胞的生长。在临床医学方面，细胞因子很重要,因为可以作为治疗因子和作为特定免疫和炎性疾病的靶制剂。 The nomenclature of cytokines is often based on their cellular sources. Cytokines that are produced by mononuclear phageocytes were called monokines,and those produced by lymphocytes were called lymphokines.。With the development of anticytokine antibodies and molecular probes, it became clear that the same protein may be synthesized by lymphocytes,，monocytes,and a variety of tissue cells,,including endothelial cells and some epithelial cells. Therefore, the generic term cytokines is the preferred name for this class of mediators 细胞因子是根据其来源细胞而命名的。由单核细胞产生的细胞因子称为单核因子；由淋巴细胞产生的因子称为淋巴因子。随着抗细胞因子抗体和分子探针的发展,显然,同种蛋白质可能是由淋巴细胞、单核细胞以及各种组织细胞,包括内皮细胞和某些上皮细胞合成。因此,通用术语细胞因子是这类介质的首选名字。General properties of cytokines（细胞因子的一般特性） Cytokincs are polypcpeptides produced in response to microbes and other antigens that mediate and regulate immune and inflammatory reactions. Although cytokinesarc structurally diverse. they share several properties. 细胞因子是微生物和其他抗原的刺激诱导细胞产生和调节免疫和炎症反应的可溶性蛋白。虽然细胞因子的结构不同。但是他们具有某些共性。 Cytokine secretion is a brief, self-limited event. Cytokines arc not usually stored as preformed molecules. and their synthesis is initiated by new gene transcription as a result of cellular activation. Such transcriptional activation is transient, and the messenger RNA encoding most cytokincs are unstable, so cytokine synthesis is also transient. The production of some cytokincs may additionally be controlled by RNA processing and by post transcriptional mechanisms, such as protcolytic release of an active product from an inactive precursor. Once synthesized, cytokines arc rapidly secreted, resulting in a burst of release as needed
关于细胞因子,你应知道的那些事儿
关于细胞因子，您应知道的那些事儿随着基因工程、蛋白质工程、细胞工程等生物高新技术的交叉应用，细胞因子的研究取得了突飞猛进的发展。到目前为止，细胞因子已发展成为一个涉及到多种学科、既具有深奥的理论探索意义（如细胞因子信号传导的分子机制），又具有极大的实际应用价值（如细胞因子免疫治疗和基因治疗）的热门研究领域。最近通过对我们公司17,000+细胞因子产品（涉及400+个分子的1000+重组蛋白）整理，更是认识到细胞因子在当前科学研究、疾病治疗和新药研发方面的重要性，因此对细胞因子基础知识的了解更是必不可少的。 1. 什么是细胞因子？ 细胞因子(Cytokine, CK)是细胞间相互作用的一种化学物质，由免疫细胞和非免疫细胞合成分泌的一类有多种生物活性的小分子多肽或糖蛋白。细胞因子最早是从淋巴细胞和单核细胞中发现的，因此曾被称为淋巴因子或单核因子，随后研究发现机体中的多种细胞都具有分泌这些蛋白的功能。细菌、病毒等微生物与物理或化学因素对机体的损伤都可以激发细胞因子的产生，而细胞因子又能杀灭细菌和抑制病毒，达到保护机体的目的。 2. 细胞因子有哪些特征呢？ （1）低分子量：绝大多数为6～60KD的多肽或糖蛋白。其结构有：单体，包括多数细胞因子；二聚体，包括IL-5、IL-10、IL-12、M-CSF、TGF-β及PDGF等；三聚体，如TNF。 （2）具有高效能作用。10-12mol/L就有明显的生物学作用。细胞表面可表达高亲和性的受体（10～10,000个/细胞）。 （3）天然细胞因子由抗原、丝裂原或其他刺激物活化的细胞所分泌，通过旁分泌(paracrine)、自分泌(autocrine)或内分泌(endocrine)方式在局部发挥短暂作用。 （3）分泌为短时自限性。无前体状态的储存，细胞受刺激活化后合成、分泌，刺激停止后合成停止。 （4）多源性或多向性，即一种细胞因子可由多种细胞产生，同一种细胞可产生多种细胞因子。 （5）需通过与靶细胞表面相应受体结合后发挥其生物学效应。 （6）具有非特异性、重叠性、拮抗性、协同性和网络性。 3. 细胞因子都有哪些基本的生物学活性呢？ 细胞因子通过结合细胞表面的相应受体发挥生物学作用。细胞因子具有非常广泛的生物学活性：
细胞内细胞因子染色
细胞内细胞因子染色 胞内细胞因子(INF-gamma)染色方法是在单细胞水平分析淋巴细胞的功能。通过结合表面染色和细胞内细胞因子染色，细胞内细胞因子（干扰素-γ）染色法是用来分析在单细胞水平淋巴细胞的功能。通过结合表面染色和细胞内细胞因子染色，此法可以获得在一定数量群体中，能够释放细胞因子细胞的百分比，而这些是无法用酶联免疫斑点法检测方法所获得的。 材料和试剂 I. 抗体 1. PE 鼠单抗IFN-γ (BD Bioscience 554412) 2. PE鼠IgG1 κ同型对照(BD Bioscience 554685) 注意: 以上抗体经作者验证可以被其他抗体代替 II. 其他材料： 1. BD Cytofix/Cytoperm TM Fixation/Permeabilization液体试剂盒，BD GolgiStop TM (BD Bioscience 554715) 2. 1X Phosphate Buffered Saline 磷酸缓冲液(PBS) 3. FACS staining Buffer: 1X PBS, 2% FBS. 4. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) (Sigma 79346) 5. Ionomycin (Sigma I9657) 仪器 1. BECKMAN 离心机和转头(BECKMAN) 步骤 1. 刺激细胞： 1) 为刺激细胞使IFN-gamma从T细胞中释放，加入PMA (5ng/ml)和Ionomycin (500ng/ml)用37℃6h来培养和孵育细胞 2) 每6ml培养细胞加入4 μl BD GolgiStop TM，充分混匀。（推荐BD GolgiStop TM在细胞液中的时间不超过12h） 2. 收集细胞:
细胞因子检测
细胞因子检测 细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质,在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动,?在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用。某些刺激因子也可导致一些细胞因子超量表达,或表达减少,从而参与疾病的发病及病理过程。 1、免疫学检测法其基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。?如免疫斑点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹法等均已用于细胞因子的检测。 2.、生物学测定法其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株(即靶细胞)?的促增殖作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位,如对IL-1、IL-2等细胞因子活性的检测。亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素的生物活性测定。 3、分子生物学测定法目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。通过检测细胞内细胞因子的基因组成或mRNA量,推算出细胞因子的合成量。
一、IL-1的检测(生物活性测定) 产生IL-1的细胞种类很多,其中最主要的为单核-巨噬细胞。IL-1可分为IL-1α(?也称酸性IL-1,pI=5.0)和IL-1β(中性IL-1,pI=7.0)。两者的分子量和生物活性相似,?只能用抗体检测方法才能区别,常用的生物学测定法对两者都适用。IL-1?的生物学活性广泛,其检测方法亦较多,包括有小鼠胸腺细胞增殖法、D10G 4.1细胞增殖法及L929细胞增殖法等。IL-1反应细胞增殖可以通过活性染料染色,显微镜直接计数,3H-TdR或125I-UdR的DNA掺入量或以活性细胞代谢率为指标来表示。本试验介绍L929细胞增殖MTT比色法。 （一）IL-1的诱生 体外试验可用LPS等有丝分裂原诱导单核-巨噬细胞产生IL-1,或用 P388D1(鼠),THP-1(人)细胞株制备IL-1。本试验以小鼠巨噬细胞制备IL-1。 1、取6～10周龄BALB/c或C57BL/6小鼠,雌雄均可,拉颈处死后用酒精消毒。 2、用带9号针头的5ml注射器腹腔注入5ml冷的含5％小牛血清的Hanks液(5?％?NBS-HBSS),轻揉腹部吸出腹腔液体(内含腹腔细胞),反复抽吸几次。 3、1500r/min离心8min,洗细胞2次。
细胞因子类药物的市场分析
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 细胞因子类药物的市场分析 细胞因子类药物的市场分析生物制药产业是二十一世纪发展前景最诱人的产业之一，尽管我国在生物制药领域起步不晚，但不可否认，我国生物制药产业与美国等发达国家相比，差距越来越大。 纵观全球生物制药产业，经历了两次跨越式发展阶段，第一发展阶段从 1982 年重组胰岛素问世至 1997 年 G-CSF 成为第一个年销售额超过 10 亿美元的生物技术药物，这个阶段主要是 EPO、G-CSF、INF- 等细胞因子类产品，这些产品在 1994 ~ 1997 年生物制药产业第一发展阶段的后期已从快速增长期进入平稳发展期，全球生物制药产业都面临发展后劲不足的局面，年销售额一直徘徊在 100 亿美元左右。 1997 年后，随着 Rituxan、Remicade、Herceptin 和 Enbrel 等治疗性抗体相继批准上市，生物制药产业进入了第二个快速发展阶段，增长速度已连续 10 年保持在 15% ~ 33%，成为发展最快的高技术产业之一。 2007 年基因工程药物的销售额已达到 840 亿美元，2008 年尽管有全球金融危机影响，生物制药市场仍将突破 900 亿美元。 我国较好地抓住了生物制药起步发展的机会，EPO、G-CSF、INF-，IL-2 等产品在 1990 年代中期都获准上市，稍微落后于美国，几乎与欧洲同步。 但是，我国却没有抓住以治疗性抗体为代表的生物制药第二个黄 1 / 8
第15章细胞因子及其受体
15 细胞因子及其受体 免疫受体是由一个由固有免疫系统和适应性免疫系统叠加而成的免疫系统，又是一个弥散系统，在体内往复循环的免疫细胞之间没有固定的有线”连接。这样的一个系统有效运转有赖于不同细胞之间的有序分工合作,信息交换与密切协调。细胞因子（cytokine）是免疫细胞之间以及免疫细胞与其他组织之间相互交换的语言。所谓细胞因子是指是有免疫细胞或非免疫细胞（如血管内皮细胞，表皮细胞和成纤维细胞等）经刺激而合成分泌的一类生物活性分子，他们之间的信息交换与相互调节，参与免疫应答和炎症反应过程。15-1细胞因子的主要特点（General Characteristics Of Cytokines）内分泌素也具有相对分子质量小，浓度低等特点，能够远距离调解组织器官的功能。细胞因子与与内分泌素不同，他们不由专门腺体分泌，而是来自多种不同的组织和细胞，以近距离调节为主。虽然已经发现200余种细胞因子，从人类基因组计划的测序结果来看，还有更多的细胞因子将被发现，他们具有如下一些基本特征： （1）半衰期短，不在细胞内储存而是在被活化
后开始合成并且分泌的。 （2）多效（重叠）性(pleiotropism)：多种细胞可以产生同一种细胞因子，一种细胞因 子可以对不同细胞发挥不同作用。 （3）丰裕性（redundant）：两种以上的的细胞因子具有相同的或者相似的生物学作用的 现象比较常见。 （4）协同性（synergy）：两种细胞因子同时作用于一个靶细胞的效应大于他们单独效应 之和，即为协同作用。 （5）拮抗性(antagonism):有是有两种细胞因子有相互抑制的作用，即为拮抗性。（6）网络性：细胞因子能够诱导或抑制其他细胞因子的合成，形成细胞因子功能和调节 网络。 （7）效应延迟:靶细胞对细胞因子的反应通常发生在几个小时内，需要新mRNA和蛋白质 分子的原位合成。 （8）效应范围：近距离作用为主。多数细胞因子在血液中是检测不到的，他们发挥作用 的方式以旁分泌（paracrine）和自分泌 （autocrine）为主，前者指其对临近细胞
细胞因子类药物的市场分析
生物制药产业是二十一世纪发展前景最诱人的产业之一，尽管我国在生物制药领域起步不晚，但不可否认，我国生物制药产业与美国等发达国家相比，差距越来越大。纵观全球生物制药产业，经历了两次跨越式发展阶段，第一发展阶段从 1982年重组胰岛素问世至 1997 年 G-CSF 成为第一个年销售额超过 10 亿美元的生物技术药物，这个阶段主要是 EPO、G-CSF、INF-α等细胞因子类产品，这些产品在 1994 ~ 1997 年生物制药产业第一发展阶段的后期已从快速增长期进入平稳发展期，全球生物制药产业都面临发展后劲不足的局面，年销售额一直徘徊在 100 亿美元左右。1997 年后，随着 Rituxan、Remicade、Herceptin 和 Enbrel 等治疗性抗体相继批准上市，生物制药产业进入了第二个快速发展阶段，增长速度已连续10 年保持在 15% ~33%，成为发展最快的高技术产业之一。2007 年基因工程药物的销售额已达到 840 亿美元，2008 年尽管有“全球金融危机”影响，生物制药市场仍将突破 900 亿美元。我国较好地抓住了生物制药起步发展的机会，EPO、G-CSF、INF-α，IL-2 等产品在 1990 年代中期都获准上市，稍微落后于美国，几乎与欧洲同步。但是，我国却没有抓住以治疗性抗体为代表的生物制药第二个黄金发展阶段，大部分生物制药企业陷入了严重亏损状态。我们唯有在“卡住我国生物制药行业喉咙”的动物细胞培养技术上有较大突破，在治疗性抗体药物的研发和生产上有较大发展，才可能在“钻石铺满地”的生物制药产业中把握机会，实现生物制药的又快又好的跨越式发展。 细胞因子类药物目前在我国的发展状况良好，主要以下面四个系列为主导。1．干扰素（IFN）系列：目前已批准生产的品种有IFNα1b，α2a，α2b ，γ四种。其中IFNα1b系我国首创的一种新型重组干扰素。其开发历时12年，经41个临床单位，1650病例临床证明它对慢性活动性肝炎、白血病、尖锐湿疣、带状泡症等有明显的疗效。与α2b相比作用机理、疗效相似，但毒副作用较小。IFNα2a与α2b相比仅相差一个氨基酸，即在第23位是Arg而不是Lys，其余结构相同，性质也相似。不同的是IFNα2b来自正常细胞系，而IFNα2a来源于恶性化细胞系（髓母样细胞系），故其免疫原性较强，临床应用中产生中和抗体的概率为12%，而IFNα2b仅为6％。IFNγ（免疫干扰素）主要调节免疫系统活性，仅用作治疗类风湿关节炎，故产量不大。IFNα2a六个公司生产，IFNα2b 六个公司生产。另有美国、瑞士、古巴、立陶宛等获准在中国销售IFN，所以干扰素市场已经饱和。2．白细胞介素（IL）系列：白细胞介素是一类介导白细胞间相互作用的细胞因子，目前已发现15种。目前国内外上市仅有IL－2和125IIL －2两种，国内 IL－3、IL－4、IL－6正在加紧研制。IL－2临床主要应用于抗肿瘤，如白血病、肾癌、黑色素瘤等。市场容量较小。3.集落刺激因子（CSF）系列：集落刺激因子是一组控制粒细胞、单核巨噬细胞和某些造血细胞繁殖和分化的糖蛋白，是癌症化疗、放疗和骨髓移植后的重要辅助治疗药物。 1997年全球G－CSF。GM－CSF销售额分别为8.7亿和3.l亿美元。但二者国内重复研制、生产现象相当严重，如 rhG－CSF有 7个单位，rhGM－CSF，有8个单位。同时美国先灵公司的GM－CSF，日本麒麟公司的G－CSF已经在中国注册销售，以及中外合资公司如浙江力生、上海鲲鹏投资公司等单位生产，竞争激烈，投资应慎重。4．促红细胞生成素（EPO）：EPO凭籍不可替代的促红细胞生成作用和实际上的替代输血疗效，使其不论在临床还是销售上都获得了极大的成功。EPO 1995年全球销售额16.8亿美元，1996年达21.45亿美元，预计2000年将超过30亿美元，EPO是当今最成功的生物工程药物。目前国内已有7家单位获准生产。同时上海华联制药有限公司、上海华新生物高技术公司。珠海丽珠制药厂等10多
细胞因子及分类
细胞因子的基本概念与种类 2008-11-19 13:38 【大中小】 细胞因子（CK）是由活化免疫细胞和非免疫细胞（如某些基质细胞）合成分泌的能调节细胞生理功能、参与免疫应答和介导炎症反应等多种生物学效应的小分子多肽或糖蛋白，是不同于免疫球蛋白和补体的又一类免疫分子。 根据来源最初将活化淋巴细胞产生的细胞因子称为淋巴因子（LK），将单核-吞噬细胞产生的细胞因子称为单核因子（MK）。目前根据功能，可将细胞因子粗略分为以下6类： 1.白细胞介素 白细胞介素（IL）简称白介素，最初被定义为由白细胞产生，在白细胞间发挥作用的细胞因子。虽然后来发现它们的产生细胞和作用细胞并非局限于白细胞，但这一名称仍被沿用。 目前已报道的白细胞介素有18种，摘要列表如下： 2.干扰素（IFN） 干扰素是最先发现的细胞因子，因其具有干扰病毒感染和复制的能力故称为干扰素。根据来源和理化性质，可将干扰素分为α、β和γ三种类型。IFN-α/β主要由白细胞、成纤维细胞和病毒感染的组织细胞产生，称为Ⅰ型干扰素。IFN-γ主要由活化T细胞和NK细胞产 生，称为Ⅱ型干扰素。 丙型干扰素生物学性能比较详见下表： 3.肿瘤坏死因子（TNF） 肿瘤坏死因子是一类能引起肿瘤组织出血坏死的细胞因子。1975年Garwell等将卡介苗注射给荷瘤小鼠，两周后再注射脂多糖，结果在小鼠血清中发现一种能使肿瘤发生出血坏死的物质，称为肿瘤坏死因子。肿瘤坏死因子分为TNF-αTNF-β两种，前者主要由脂多糖/卡介苗活化的单核巨噬细胞产生，亦称恶病质素；后者主要由抗原/有丝分裂原激活的T细胞产生，又称淋巴毒素。TNF-α/β为同源三聚体分子，主要生物学作用如下： （1）对肿瘤细胞和病毒感染细胞有生长抑制和细胞毒作用； （2）激活巨噬细胞、NK细胞，增强吞噬杀伤功能，间接发挥抗感染、抗肿瘤作用； （3）增强T、B细胞对抗原和有丝分裂原的增生反应，促进MHC-Ⅰ类分子表达，增强 Tc细胞杀伤活性； （4）诱导血管内皮细胞表达粘附分子和分泌IL-1、IL-6、IL-8、CSF等细胞因子促进炎 症反应发生； （5）直接作用或刺激巨噬细胞释放IL-1间接作用下丘脑体温调节中枢引起发热； （6）引起代谢紊乱，重者出现恶病质。 4.集落刺激因子（CSF）
细胞因子常识
细胞因子常识 重组细胞因子概述 一、细胞因子的概念 细胞因子(cytokine)是由机体多种细胞分泌的小分子蛋白质，通过结合细胞表面的相应受体发挥以调节免疫应答为主的生物学作用。细胞因子具有非常广泛的生物学活性，包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和细胞杀伤效应，促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达，促进炎症过程，影响细胞代谢等。 二、细胞因子的特征 1、低分子量；一般为＜60kD的多肽或糖蛋白。多以单体形式存在，少数为二聚体，三聚体。 2、天然细胞因子由抗原、丝裂原或其他刺激物活化的细胞所分泌，通过旁分泌(paracrine)、自分泌(autocrine)或内分泌(endocrine)方式在局部发挥短暂作用。 3、一种细胞因子可由多种细胞产生，同一种细胞可产生多种细胞因子。 4、需通过与靶细胞表面相应受体结合后发挥其生物学效应。 5、具有高效性、多效性、叠性、拮抗性、协同性和网络性。 三、细胞因子的分类 1、白细胞介素(interleukin，IL-s) 最初是指由白细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子。 2、干扰素（interferon,IFN) 最早发现的细胞因子，有干扰病毒感染和复制的能力。分α、β和g三种类型。 3、肿瘤坏死因子超家族(tumor necrosis factor，TNF) 1975年发现的一种能使肿瘤发生出血坏死的物质。 4、集落刺激因子(colony-stimulating factor，CSF) 指能够刺激多能造血干细胞和不同造血祖细胞增殖分化，在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。包括G-CSF（粒细胞）、M-CSF（巨噬细胞）、GM-CSF（粒细胞、巨噬细胞）、Multi-CSF（多重）（IL-3）、红细胞生成素(EPO)、干细胞生长因子(SCF)、血小板生成素(TPO)等。 5、趋化因子(chemokine)